Προπαρασκευαστική απομόνωση και καθαρισμός τεσσάρων ενώσεων από το Cistanches Deserticola YC Ma με χρωματογραφία αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Αφηρημένη:

Μετά από ένα βήμα εμπλουτισμού συστατικών σε στήλη πυριτικής πηκτής, τέσσεραφαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδεςαπομονώθηκαν επιτυχώς απόCistanches deserticolaκαι καθαρίστηκε με προπαρασκευαστική χρωματογραφία αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας (HSCCC) με σύστημα διαλυτών δύο φάσεων που αποτελείται από οξικό αιθυλεστέρα-n-βουτανόλη-αιθανόλη-νερό (40:6:6:50, v/v /v/v). Συνολικά 30,9 mg ακτεοσίδης, 13,0 mg ισοακτεοσίδης, 12,5 mg συριγγαλίδης A 3'- -L-ραμνοπυρανοσίδης και 7,2 mg 2'-ακετυλακτεοσίδης με καθαρότητα μεγαλύτερη από 95 τοις εκατό, όπως προσδιορίστηκε με HPLC-ELSD. που λαμβάνεται σε διαχωρισμό ενός σταδίου από 297 mgΕκχύλισμα Cistanche deserticola, αντίστοιχα. Οι δομές τους ταυτοποιήθηκαν με HR-MS, 1H-NMR και 13C-NMR.

Λέξεις-κλειδιά: υψηλής ταχύτητας χρωματογραφία αντίθετου ρεύματος;Cistanches deserticola YC Ma;Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες; ακτεοσίδη; ισοακτεοσίτης; syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside; 2'-ακετυλολακτεοζίτης.

Εισαγωγή

Cistanches deserticolaYC Ma, ένα είδοςΚιστανάκιαπου ανήκει στην οικογένεια Orobanchacea, είναι μια πολύ γνωστή Παραδοσιακή Κινεζική Ιατρική για τη θεραπεία της νεφρικής ανεπάρκειας, της γυναικείας υπογονιμότητας, της νοσηρής λευκόρροιας, της νευραπραξίας και της γεροντικής δυσκοιλιότητας [1]. Είναι ένα παρασιτικό φυτό που είναι ευρέως διαδεδομένο στα βορειοδυτικά της Κίνας. Μέχρι στιγμής, αρκετές ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων (PhGs), των ιριδοειδών και των λιγνάνων έχουν απομονωθεί από αυτό το είδος [2]. Ορισμένα από τα PhGs έχει αναφερθεί ότι διαθέτουν αντιοξειδωτική, ηπατοπροστατευτική και νευροπροστατευτική δράση [3-6]. Ωστόσο, η διαδικασία απομόνωσης και καθαρισμού των PhGs είναι δύσκολη και χρονοβόρα. Επιπλέον, οι κλασσικές πολλαπλές χρωματογραφικές μέθοδοι όχι μόνο χρησιμοποιούν μεγάλο αριθμό οργανικών διαλυτών αλλά δίνουν και μικρότερη ανάκτηση δείγματος. Η χρωματογραφία αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας (HSCCC), μια τεχνική χρωματογραφίας διαχωρισμού υγρού-υγρού χωρίς υποστήριξη, προσφέρει εξαιρετική ανάκτηση δείγματος σε σύγκριση με ορισμένες συμβατικές μεθόδους και έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για τον διαχωρισμό και τον καθαρισμό διαφόρων φυσικών προϊόντων [7-9] . Αν και αρκετά PhG έχουν καθαριστεί απόΚιστανάκιαγένος και άλλα από το HSCCC [10-14], κανένα χαρτί δεν έχει αναφέρει τον καθαρισμό ακτεοσίδης, ισοακτεοσίδης, συριγγαλίδης Α 3'- -L-ραμνοπυρανοσίδης και 2'-ακετυλολακτεοσίδης σε ένα διφασικό σύστημα.

Σε αυτή την εργασία, αναφέρουμε μια απλή μέθοδο για τον διαχωρισμό και τον καθαρισμό τεσσάρων PhG από το C. deserticola. Τέλος, λήφθηκαν 30,9 mg ακτεοσίδης, 13,0 mg ισοακτεοσίδης, 12,5 mg συριγγαλίδης Α 3'- -L-ραμνοπυρανοσίδης και 7,2 mg 2'-ακετυλακτεοσίδης σε ένα βήμα. διαχωρισμός από 297 mg κλάσματος με καθαρότητες 99 τοις εκατό , 95 τοις εκατό , 99 τοις εκατό και 98 τοις εκατό, αντίστοιχα. Οι δομές τους χαρακτηρίστηκαν με βάση τα φασματικά δεδομένα 1H- και 13C-NMR και τα φάσματα HR-MS. Οι δομές των τεσσάρων PhG που προσδιορίστηκαν σε αυτήν την έρευνα φαίνονται στο Σχήμα 1.

Αποτελέσματα και συζήτηση

Ανάλυση HPLC του ακατέργαστου εκχυλίσματος

Το εμπλουτισμένο με συστατικά κλάσμα του η-βουτανοϊκού εκχυλίσματος από το C. deserticola αναλύθηκε με HPLC-UV. Η στήλη που χρησιμοποιήθηκε ήταν μια Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm) (Thermo-Fisher Scientific Instruments, πόλη, συντομογραφία πολιτείας, ΗΠΑ), η κινητή φάση ήταν μεθανόλη-νερό (30:70, v/v). Ο ρυθμός ροής ήταν 1 mL/min. Το μήκος κύματος του ανιχνευτή ορίστηκε στα 254 nm. Το χρωματογράφημα HPLC φαίνεται στο Σχήμα 2. Οι κορυφές 1 έως 4 αντιστοιχούν σε ακτεοσίδη (1), ισοακτεοσίδη (2), συριγγαλίδη Α 3'- -L-ραμνοπυρανοσίδη (3) και 2'-ακετυλακτεοσίδη (4), αντίστοιχα.

Επιλογή Διφασικού Συστήματος Διαλυτών

Ο επιτυχής διαχωρισμός από το HSCCC εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την επιλογή ενός κατάλληλου συστήματος διαλυτών δύο φάσεων, το σύστημα διαλυτών δύο φάσεων επιλέχθηκε σύμφωνα με τις τιμές συντελεστών κατανομής (K) κάθε συστατικού στόχου και το βέλτιστο εύρος του K θα πρέπει να είναι από {{ 2}}.5 έως 2.

Στο πείραμα, οι τιμές Κ για συστατικά-στόχους πολλών συστημάτων διαλυτών δύο φάσεων φαίνονται στον Πίνακα 1 (αν και λίγο υψηλότερες για την κορυφή 4, τα αποτελέσματα αποδείχθηκαν αποδεκτά). Μεταξύ αυτών, ο οξικός αιθυλεστέρας-η-βουτανόλη-αιθανόλη-νερό (40:6:6:50, v/v/v/v) έδωσε κατάλληλους συντελεστές κατανομής για τις ενώσεις-στόχους. Τελικά, το σύστημα διαλυτών που αποτελείται από οξικό αιθυλεστέρα-η-βουτανόλη-αιθανόλη-νερό (40:6:6:50, v/v/v/v) χρησιμοποιήθηκε για την απομόνωση και τον καθαρισμό τεσσάρων ενώσεων του C. deserticola, όπως φαίνεται στο Εικόνα 3. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, η ανάλυση HPLC κάθε κλάσματος HSCCC αποκάλυψε ότι τέσσερα καθαρά PhGs (ακτεοσίδη, 99 τοις εκατό, ισοακτεοσίδη, 95 τοις εκατό, συριγγαλίδη Α 3'- -L-ραμνοπυρανοσίδη 99 τοις εκατό και 2'- ακετυλολακτεοσίδιο 98 τοις εκατό) θα μπορούσε να ληφθεί από το ακατέργαστο κλάσμα.

Πειραματικός

Συσκευή

Ο εξοπλισμός HSCCC που χρησιμοποιήθηκε στην παρούσα μελέτη ήταν ένα σύστημα χρωματογραφίας αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας TBE-300Β (Shanghai Tauto Biotech Co., Shanghai, Κίνα) με τρεις προπαρασκευαστικές στήλες πολλαπλών στρώσεων διαχωρισμού πηνίου συνδεδεμένες σε σειρά (διάμετρος σωλήνα=2,6 mm, συνολικός όγκος=300 mL) και βρόχος δείγματος 20 mL. Η ακτίνα περιστροφής ή η απόσταση μεταξύ του άξονα συγκράτησης και του κεντρικούάξονας της φυγόκεντρου (ο άξονας της φυγόκεντρου (R) ήταν 5 cm και η τιμή κυμαινόταν από 0.5 στον εσωτερικό ακροδέκτη έως 0.8 στον εξωτερικό ακροδέκτη (=r/R, όπου r είναι η απόσταση από το πηνίο μέχρι τον άξονα συγκράτησης). Ένα μηχάνημα κυκλοφορίας σταθερής θερμοκρασίας HX 105 (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Πεκίνο, Κίνα) χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο της θερμοκρασίας στο πείραμα. Το σύστημα HSCCC ήταν εξοπλισμένο με μια αντλία σταθερής ροής μεσαίας πίεσης μοντέλου TBP-5002, έναν ανιχνευτή UV μοντέλου TBP-2000 που λειτουργεί στα 254 nm και έναν σταθμό εργασίας μοντέλου V4.0 (Jinda Biochemistry Instrument Company, Σανγκάη, Κίνα).

Ο εξοπλισμός υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC) που χρησιμοποιήθηκε ήταν ένα σύστημα Agilent 1200 που αποτελείται από μια δυαδική αντλία G1312A, έναν αυτόματο δειγματολήπτη G1329A, έναν ανιχνευτή μεταβλητού μήκους κύματος G1314A (VWD), έναν θερμοστάτη G1316A θερμοστατημένο διαμέρισμα στήλης37 και ένα G9ga1 σταθμός εργασίας. Για την ανίχνευση των καθαροτήτων χρησιμοποιήθηκε Alltech 3300 ELSD. Τα φασματόμετρα Agilent 6520 Q-TOF και Bruker AVANCE III 500-NMR χρησιμοποιήθηκαν για τη δομική ταυτοποίηση των ενώσεων. Τα φάσματα 1Η και 13C-NMR (στα 500 και 125 ΜΗζ, αντίστοιχα) μετρήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου (22 βαθμοί /295,1 Κ).

Αντιδραστήρια και Υλικά

Ο οξικός αιθυλεστέρας, η κ-βουτανόλη και η αιθανόλη ήταν αναλυτικές ποιότητες και η μεθανόλη ήταν ποιότητας HPLC. Όλοι οι διαλύτες αγοράστηκαν από την Tianjin Concord Technology Company (Tianjin, Κίνα). Για όλα τα διαλύματα και τις αραιώσεις χρησιμοποιήθηκε νερό Milli-Q (18,2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, ΗΠΑ). Το ρίζωμα του C. deserticola συλλέχθηκε από την επαρχία Εσωτερικής Μογγολίας, Λαϊκή Δημοκρατία της Κίνας, τον Ιούνιο του 2009. Το φυτό αναγνωρίστηκε από τον καθηγητή Lijuan Zhang και ένα δείγμα κουπονιού (αρ. 20091001) κατατέθηκε στο εργαστήριό μας.

Προετοιμασία ακατέργαστου δείγματος

Σαρκώδεις μίσχοι C. deserticola (1 Kg) που ξηράνθηκαν στον αέρα σε σκόνη ανέρρευσαν δύο φορές με υδατική αιθανόλη (8 L, 60 τοις εκατό ν/ν) για 2 ώρες κάθε φορά. Το εκχύλισμα εξατμίστηκε υπό ελαττωμένη πίεση και σε θερμοκρασία 60 βαθμών μέχρι την ολική εξάτμιση της αιθανόλης. Το υπόλειμμα εναιωρήθηκε σε νερό και εκχυλίστηκε διαδοχικά τρεις φορές με χλωροφόρμιο, οξικό αιθυλεστέρα και η-βουτανόλη, αποδίδοντας 5,16 g η-βουτανοϊκού εκχυλίσματος μετά από εξάτμιση μέχρι ξηρού υπό μειωμένη πίεση. Το η-βουτανοϊκό εκχύλισμα στη συνέχεια διαχωρίστηκε σε στήλη πυριτικής πηκτής (200–300 mesh) χρησιμοποιώντας προοδευτική έκλουση βαθμίδωσης (CHCl3–MeOH, 10:1→1:1) για να δώσει οκτώ κλάσματα. Το κλάσμα 6 (297 mg) χρησιμοποιήθηκε για περαιτέρω απομόνωση και διαχωρισμό HSCCC.

Επιλογή Συστημάτων Διφασικών Διαλυτών

Τα συστήματα διαλυτών δύο φάσεων επιλέχθηκαν σύμφωνα με τον συντελεστή κατανομής (Κ) των συστατικών-στόχων στο κλάσμα του C. deserticola. Οι τιμές Κ προσδιορίστηκαν με ανάλυση LC ως εξής: Κατάλληλη ποσότητα ακατέργαστης σκόνης εκχυλίσματος (κλάσμα 6) διαλύθηκε στην κατώτερη φάση του συστήματος διαλύτη και αναλύθηκε με HPLC. Οι περιοχές των κορυφών καταγράφηκαν ως Α1. Στη συνέχεια, ίσος όγκος της ανώτερης φάσης προστέθηκε στο διάλυμα και αναμίχθηκε επιμελώς για να επιτευχθεί ισορροπία κατανομής. Η κατώτερη φάση στη συνέχεια αναλύθηκε ξανά με HPLC. Οι τελευταίες περιοχές κορυφής καταγράφηκαν ως Α2. Οι τιμές K υπολογίστηκαν σύμφωνα με την ακόλουθη εξίσωση: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

Προετοιμασία Διφασικού Συστήματος Διαλυτών και Διαλύματος Δείγματος

Στην παρούσα μελέτη, το σύστημα διαλυτών δύο φάσεων που αποτελείται από οξικό αιθυλεστέρα-ν-βουτανόλη-αιθανόλη-νερό (40:6:6:50, v/v/v/v) χρησιμοποιήθηκε για τον διαχωρισμό HSCCC. Κάθε διαλύτης προστέθηκε σε διαχωριστική χοάνη και εξισορροπήθηκε πλήρως σε θερμοκρασία δωματίου. Η ανώτερη και η κατώτερη φάση διαχωρίστηκαν και απαερώθηκαν με υπερήχους για 30 λεπτά λίγο πριν από τη χρήση. Το διάλυμα του δείγματος παρασκευάστηκε με διάλυση 297 mg του κλάσματος 6 σε 15 ml της κατώτερης φάσης οξικού αιθυλεστέρα-η-βουτανόλης-αιθανόλης-νερού (40:6:6:50, ν/ν/ν/ν).

Διαδικασία διαχωρισμού HSCCC

Το HSCCC πραγματοποιήθηκε ως εξής. Η πολυστρωματική περιελιγμένη στήλη γεμίστηκε αρχικά με την ανώτερη οργανική στατική φάση. Η κατώτερη υδατική κινητή φάση στη συνέχεια αντλήθηκε στο κεφαλικό άκρο της στήλης με ρυθμό ροής 1,5 mL/min, και ταυτόχρονα, η συσκευή HSCCC λειτουργούσε με ταχύτητα περιστροφής 900 rpm. Αφού εδραιώθηκε η υδροδυναμική ισορροπία, όπως υποδεικνύεται από μια διαυγή κινητή φάση που εκλούεται στην ουρά έξοδο (περίπου δύο ώρες αργότερα), ένα διάλυμα δείγματος 15 mL που περιέχει 297 mg του ακατέργαστου εκχυλίσματος (κλάσμα 6) εγχύθηκε μέσω της βαλβίδας έγχυσης. Τα απόβλητα της στήλης παρακολουθούνταν συνεχώς κάτω από 254 nm. Τέσσερα κλάσματα κορυφής συλλέχθηκαν σύμφωνα με το χρωματογράφημα και στη συνέχεια εξατμίστηκαν υπό μειωμένη πίεση. Η θερμοκρασία της συσκευής ρυθμίστηκε στους 25 βαθμούς.

Ανάλυση HPLC και ταυτοποίηση κλασμάτων κορυφής HSCCC

Τα κλάσματα κορυφής από HSCCC αναλύθηκαν με HPLC-ELSD. Η στήλη που χρησιμοποιήθηκε ήταν μια Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm), η κινητή φάση ήταν μεθανόλη-νερό (30:70, v/v). Ο ρυθμός ροής ήταν 1 mL/min. Το ELSD λειτούργησε υπό τις ακόλουθες συνθήκες: Θερμοκρασία 45 μοίρες, αέριο 1,6 L/min. Η δομική ταυτοποίηση των τεσσάρων κλασμάτων κορυφής HSCCC πραγματοποιήθηκε με φασματοσκοπία HR-ESI-MS, 1Η και 13C-NMR.

Η Δομική Ταυτοποίηση

Κλάσμα Ι: HR-ESI-MS που παρατηρήθηκε σε m/z 623.2001 (M−H)−, υπολογ. για C29H35O15, 623.1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 της ραμνόζης), 2,79 (2Η, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4.37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 γλυκόζης), 5.18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} } της ραμνόζης), 6.27 (1Η, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.59 (1Η, d, J=15.5 Hz, Ar -CH=CH-), 6,5–7,1 (6Η, αρωματικό Η).13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C{-1), 117,2 (C{{{65} }), 146.2 (C{-3), 144.7 (C-4), 116.4 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C-), 36.6 (C- ), 127,7 (Caf-1), 115,3 (Caf{-2), 146,9 (Caf{-3), 149,8 (Caf{-4), 116,6 (Caf{{{ 98}}), 123,2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 114,8 (Caf- ), 148,1 (Caf- ), 104,3 (G{-1), 76,1 (Glc{{116} }), 81.7 (Glc{-3), 70.5 (Glc{-4), 76.3 (Glc{-5), 62.4 (Glc{-6), 103.1 (Rha{131} }), 72,3 (Rha{-2), 72,1 (Rha{{-3), 73,9 (Rha{-4), 70,7 (Rha{-5), 18,5 (Rha{{{146} }). Σε σύγκριση με τα δεδομένα που δίνονται στη βιβλιογραφία [17], το κλάσμα αντιστοιχούσε σε ακτεοσίδη.

Κλάσμα II: HR-ESI-MS που παρατηρήθηκε σε m/z 623.1987 (M−H)−, υπολογ. για C29H35O15, 623.1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1.25 (3H, d, J=6.5 Hz, CH3 ραμνόζης), 2.78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 γλυκόζης), 5,17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, Η-1 ραμνόζης), 6.28 (1Η, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.56 (1Η, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 6.5–7.0 (6Η, αρωματικό Η). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C{-2), 146,2 (C{-3), 144,7 (C-4 ), 116,5 (C-5), 121,3 (C-6), 72,4 (C-), 36,7 (C-), 127,8 (Caf{-1), 115,2 (Caf{{{89 }}), 146,8 (Caf-3), 149,7 (Caf-4), 116,6 (Caf{-5), 123,2 (Caf{-6), 169,2 (Caf- ), 115,0 (Caf- ), 147,3 (Caf- ), 104,5 (G-1), 75,5 (Glc{-2), 84,2 (Glc{-3), 70,1 (Glc{{122} ), 75.7 (Glc{-5), 64.7 (Glc{-6), 102.8 (Rha{{-1), 72.4 (Rha{-2), 72.4 (Rha-3 ), 74,1 (Rha{{-4), 70,5 (Rha{-5), 17,9 (Rha{-6). Τα φασματικά δεδομένα 1H-NMR και 13C-NMR συμφωνούσαν με αυτά του ισοακτεοσιδίου όπως αναφέρεται στη βιβλιογραφία [18].

Κλάσμα III: HR-ESI-MS που παρατηρήθηκε σε m/z 6{{108}}7.2032 (M−H)−, υπολογ. για C29H35O14, 607.2032. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 της ραμνόζης), 2,84 (2Η, t, J=7,5 Hz, Ar-CH 2-), 4.37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 γλυκόζης), 5.19 (1H, d, J=1.5 Hz, H{{ 35}} ραμνόζης), 6,27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,6-7,1 (7Η, αρωματικό Η). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 130,8 (C-1), 116,2 (C{-2), 130,9 (C{-3), 156,8 (C-4 ), 130,8 (C-5), 116,2 (C-6), 72,4 (C-), 36,4 (C- ), 127,8 (Caf{-1), 114,8 (Caf{{88 }}), 149.8 (Caf-3), 146.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168.3 (Caf- ), 115,4 (Caf- ), 148,0 (Caf- ), 104,3 (G{-1), 76,3 (Glc{-2), 81,7 (Glc{-3), 70,4 (Glc{{121} ), 76.1 (Glc{-5), 62.5 (Glc{-6), 103.0 (Rha{-1), 72.3 (Rha{-2), 72.2 (Rha-3 ), 73,9 (Rha{-4), 70,7 (Rha{{-5), 18,4 (Rha{-6). Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία [18], το κλάσμα III αντιστοιχούσε στη συριγγαλίδη Α 3'- -L-ραμνοπυρανοσίδη.

Κλάσμα IV: HR-ESI-MS που παρατηρήθηκε σε m/z 665,21{{2{0}} (M−H)−, υπολογ. για C31H37O16, 665,2087. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1.09 (3H, d, J=6.5 Hz, CH3 ραμνόζης), 2.00 (3H, s, OAc), 2.72 (2H, t, J { {25}}.5 Hz, Ar-CH2-), 4.55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 γλυκόζης), 4.90 (1H, d, J { {37}} Hz, Η-1 ραμνόζης), 6.29 (1Η, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.62 (1Η, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 6.5–7.0 (6Η, αρωματικό Η). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131.9 (C{-1), 117.3 (C{-2), 146.1 (C-3), 144.7 (C-4 ), 116,4 (C{-5), 121,4 (C-6), 72,7 (C-), 36,4 (C-), 127,7 (Caf{-1), 115,4 (Caf{{{93 }}), 146.9 (Caf-3), 149.9 (Caf-4), 116.6 (Caf{-5), 123.2 (Caf-6), 168.1 (Caf- ), 114.7 (Caf- ), 148.2 (Caf- ), 101.8 (G-1), 75.3 (Glc-2), 80.3 (Glc-3), 70.8 (Glc{{126} ), 76,2 (Glc{-5), 62,3 (Glc{-6), 103,3 (Rha{{-1), 72,0 (Rha{{-2), 71,8 (Rha{141}} ), 73,7 (Rha{-4), 70,8 (Rha{{-5), 18,5 (Rha{-6), 171,5 (C=Ο), 20,9 (OAC). Τα φασματικά δεδομένα 1H-NMR και 13C-NMR συμφωνούσαν με εκείνα του 2'-ακετυλακτεοζίτη [17].

συμπεράσματα

Μια μέθοδος HSCCC για τον προπαρασκευαστικό διαχωρισμό και τον καθαρισμό ακτεοσίδης, ισοακτεοσίδης, συριγγαλίδης Α 3'- -L-ραμνοπυρανοσίδης και 2'-ακετυλακτεοσίδης απόCistanches deserticola YC Maκαθιερώθηκε. Η παρούσα μελέτη δείχνει ότι το HSCCC είναι μια πολύ ισχυρή τεχνική για τον προπαρασκευαστικό διαχωρισμό και τον καθαρισμό βιοδραστικών συστατικών από φυτικά υλικά. Επίσης, οι ενώσεις μπορούν να απομονωθούν σε αρκετά μεγάλη κλίμακα με υψηλές καθαρότητες και μπορούν στη συνέχεια να χρησιμοποιηθούν ως ουσίες αναφοράς για χρωματογραφία ή μελέτες βιοδραστικότητας. Η μέθοδος είναι μια εφικτή, οικονομική και αποτελεσματική τεχνική για την ταχεία προπαρασκευαστική απομόνωση περίπλοκων φυσικών προϊόντων.

Ευχαριστίες

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το Πρόγραμμα για Changjiang Scholars and Innovative Research Team in University (PCSIRT), το Project of International Cooperation Plan από το Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας της Κίνας (2008DFB30070) και το Scientific Program of Left Banner of Alasan ({{2 }}).

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Κινεζική Επιτροπή Φαρμακοποιίας. Φαρμακοποιία της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας. People's Medical Publishing House: Πεκίνο, Κίνα, 2010; Τόμος 1, σελ. 126.

2. Jiang, Υ.; Tu, PF Ανάλυση χημικών συστατικών σε είδη Cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, Τ.; Pan, Υ.; Ninomiya, Κ.; Imura, Κ.; Matsuda, Η.; Yoshikawa, Μ.; Yuan, D.; Muraoka, O. Ακυλιωμένες φαινυλαιθανοειδείς αμινογλυκοσίδες με ηπατοπροστατευτική δράση από το φυτό της ερήμου Cistanche tubulosa. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, Η.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Το Wang, ZH Echinacoside αποτρέπει τη μείωση των εξωκυτταρικών επιπέδων των νευροδιαβιβαστών μονοαμίνης σε 6-επιμύες με αλλοιώσεις υδροξυντοπαμίνης. J. Ethnopharmacol. 2007, 114, 285–289.

5. Μουραόκα, Ο.; Ninomiya, Κ.; Morikawa, Τ.; Wakayama, Η.; Matsuda, Η.; Yoshikawa, M. Ηπατοπροστατευτικά συστατικά από τους μίσχους του Cistanche tubulosa. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49–51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro νευροπροστατευτικές δράσεις φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από διχώτωμα Callicarpa. Planta Med. 2005, 71, 778-780.

7. Li, Μ.; Liu, RM; Sun, AL; Wu, SJ; Liu, NN Διαχωρισμός και καθαρισμός της ρουτίνης και της ακασίνης από το κινεζικό φαρμακευτικό βότανο Herba Cirsii με συνδυασμό μακροπορώδους ρητίνης προσρόφησης και χρωματογραφίας αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας. J. Chromatogr. Sci. 2009, 47, 329–332.

8. Yin, Η.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH Προπαρασκευαστική απομόνωση και καθαρισμός δύο βενζοξαζινοειδών γλυκοζιδίων από Acanthus ilicifolius L. με χρωματογραφία αντίθετης ροής υψηλής ταχύτητας. J. Chromatogr. 2008, 1205, 177–181.

9. Peng, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, Χ.; Luo, HD; Ναι, HY; Yuan, Υ.; Wei, YQ Διαχωρισμός υψηλής ταχύτητας με αντίθετο ρεύμα χρωματογραφίας βαθμίδας ρυθμού ροής πέντε διτερπενοειδή από Triperygium wilfordii και κλιμάκωση. J. Chromatogr. 2008, 1200, 129–135.

10. Xie, J.; Deng, J.; Tan, F.; Su, J. Διαχωρισμός και καθαρισμός εχινακοσίδης από Penstemon barbatus (Can.) Roth με ανακύκλωση υψηλής ταχύτητας χρωματογραφίας αντίθετου ρεύματος. J. Chromatogr. B2010, 878, 2665–2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Young, JC; Zhu, Η. Απομόνωση και καθαρισμός φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων απόCistanche deserticolaμε χρωματογραφία αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας. Food Chem. 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Young, JC; Zhu, HH; Deng, ZY; Xie, MY; Fu, ZH Απομόνωση και καθαρισμός ακτεοσίτη και ισοακτεοσίδης από Plantago psyllium L. με χρωματογραφία αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας. J. Chromatogr. 2005, 1063, 161–169. Molecules 2012, 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Υ. Προπαρασκευαστική απομόνωση και καθαρισμός ακτεοσιδίου και 2'-ακετυλ ακτεοζίτη από Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck με χρωματογραφία αντίθετης ροής υψηλής ταχύτητας. J. Chromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Προπαρασκευαστική απομόνωση και καθαρισμός φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων από εκχύλισμα περιττωμάτων σκύλων λαγωνικών με χρωματογραφία αντίθετης ροής υψηλής ταχύτητας. J. Liq. Χρωματογραφ. Σχετ. Τεχνολ. 2001, 24, 2187–2195.

15. Gao, SY; Feng, Β.; Zhu, RN; Ma, JK; Wang, W. Προπαρασκευαστική απομόνωση τριών ανθρακινονών από Rumex japonicus με χρωματογραφία αντίθετου ρεύματος υψηλής ταχύτητας. Molecules 2011, 16, 1201–1210.

16. He, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH Απομόνωση και Καθαρισμός Οριδονίνης από Ολόκληρο το Φυτό του Isodon rubescens με Χρωματογραφία Αντίθετου Ρεύματος υψηλής ταχύτητας. Molecules 2011, 16, 7949-7957.

17. Kobayashi, Η.; Oguchi, Η.; Takizawa, Ν.; Miyase, Τ.; Ueno, Α.; Usmanghani, Κ.; Ahmad, Μ. Νέοι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. φά. Ι. Chem. Pharm. Ταύρος. 1987, 35, 3309–3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, Τ.; Takizawa, Ν.; Usmanghani, Κ.; Ahmad, M. Τα συστατικά του cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. φά. II. Απομόνωση και δομές ενός νέου φαινυλαιθανοειδούς γλυκοζίτη και ενός νέου νεολιγνανογλυκοσιδίου. Chem. Pharm. Ταύρος. 1990, 38, 1927–1930.