Προκαταρκτική διερεύνηση της επίδρασης και του μηχανισμού προώθησης των πολυσακχαριτών από το Cistanche Deserticola στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων

Μέθοδοι

Η δοκιμασία ΜΤΤ χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση του πολλαπλασιασμού των λεμφοκυττάρων του σπλήνα σε ποντικούς. Η κυκλοφωσφαμίδη (Cy) χρησιμοποιήθηκε για την αναπαραγωγή ζωικών μοντέλων ανοσοκατεσταλμένων ζώων και μετρήθηκαν οι δείκτες σπλήνας και θύμου αδένα φυσιολογικών και ανοσοκατεσταλμένων ζώων. Η δραστηριότητα της ιντερλευκίνης-2 (IL-2) μετρήθηκε με τη δοκιμασία πολλαπλασιασμού θυμοκυττάρων. Αποτελέσματα: Ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola προώθησε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των ενεργοποιημένων λεμφοκυττάρων με μιτογόνο (ConA και LPS) και των μη ενεργοποιημένων φυσιολογικών κυττάρων και προώθησε την έκκριση του IL-2 στα λεμφοκύτταρα. Η ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση έδειξε ότι ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola αύξησε σημαντικά τον δείκτη σπλήνας φυσιολογικών και ανοσοκατεσταλμένων ποντικών και επίσης είχε σημαντική ανταγωνιστική επίδραση στη μείωση του δείκτη θύμου αδένα που προκαλείται από το Cy. Συμπέρασμα: Ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola μπορεί να προάγει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των σπληνικών λεμφοκυττάρων σε ποντίκια, ο οποίος μπορεί να σχετίζεται με την προαγωγή της έκκρισης IL-2.

Κίστανσο που ζει στην έρημο

[Λέξεις-κλειδιά]Πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola; Δείκτης σπλήνας; Δείκτης θύμου; Πολλαπλασιασμός λεμφοκυττάρων; Ιντερλευκίνη-2

Οι φυτικοί πολυσακχαρίτες έχουν προσελκύσει ευρεία προσοχή λόγω των εκτεταμένων ανοσοτροποποιητικών τους επιδράσεων και της σχετικά χαμηλής τοξικότητάς τους [1]. Το Cistanche deserticola ma, γνωστό ως "Desert Ginseng", είναι το φολιδωτό, ξηρό, σαρκώδες στέλεχος του Cistanche deserticola, ενός φυτού των Orobaceae, το οποίο έχει εκτεταμένες φαρμακολογικές επιδράσεις. Το υδάτινο αφέψημα του μπορεί να αυξήσει σημαντικά το φαγοκυτταρικό ποσοστό και τον φαγοκυτταρικό δείκτη των μακροφάγων. Περαιτέρω μελέτες έχουν δείξει ότι η υλική του βάση είναι ο συνολικός πολυσακχαρίτης του Cistanche deserticola [3]. Οι Zeng Qunli et al. [4] βρήκαν ότι ένα μόνο συστατικό του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola έχει σημαντική πολλαπλασιαστική επίδραση στα θυμικά λεμφοκύτταρα ποντικού in vitro. Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων παρατηρήθηκε in vivo και in vitro.

Μοριακός τύπος Cistanche deserticola

1 Υλικό και Μέθοδοι

1.1 Φάρμακα και αντιδραστήρια

Ο πολυσακχαρίτης από το Cistanche deserticola παρέχεται από το Τμήμα Φυτών και Χημικών του Ινστιτούτου Ιατρικής και Φυτεύσεως, Ιατρικό Κολλέγιο. Εξάγεται από τη σκόνη εκχυλίσματος Cistanche και η περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες είναι 87%.

Εκχύλισμα κιστάνσε σε σκόνη

Πριν χρησιμοποιήσετε πειράματα in vivo, διαλύστε και αραιώστε με φυσιολογικό ορό στην απαιτούμενη συγκέντρωση και βράστε για αποστείρωση. Πριν από τη χρήση πειραμάτων in vitro, το μέσο καλλιέργειας RPMI-1640 διαλύθηκε και αραιώθηκε και πραγματοποιήθηκε αποστείρωση σε υψηλή πίεση. Ο λιποπολυσακχαρίτης (LPS), η κονκαναβαλίνη (ConA), η δεξαμεθαζόνη (DEX) και το MTT είναι όλα προϊόντα της Sigma Corporation. Το Cyclophosphamide, μια σινο-αμερικανική κοινοπραξία της Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., ο ορός εμβρύου βοοειδών, το μέσο καλλιέργειας RPMI1640 και η θρυψίνη είναι όλα προϊόντα Gibco. Άλλα αντιδραστήρια είναι οικιακά αναλυτικά αντιδραστήρια.

1.2 Ζώα

Τα νεαρά ποντίκια BALB c (επίπεδο SPF) παρέχονται από την Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Πεκίνο) 2002-2003]. Τα ζώα βαθμού SPF εκτρέφονται σε ένα δωμάτιο και τρέφονται και πίνουν ελεύθερα.

1.3 Συσκευή

Ενζυμικός δείκτης Multikan Ascent, προϊόν της Thermo Electron Company, Η.Π.Α. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 θερμοκοιτίδα διοξειδίου του άνθρακα, NAPCO, Η.Π.Α. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Ανεστραμμένο μικροσκόπιο, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Μέθοδος

1.4.1 Επίδραση στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων [5]:

Προετοιμασία ρουτίνας λεμφοκυττάρων σπλήνας από ποντικούς BALB/c, χρησιμοποιώντας RPMI-1640 για ρύθμιση της συγκέντρωσης κυττάρων σε 1 × 107 mL, εμβολιασμένα σε πλάκα καλλιέργειας 96 φρεατίων, με 100 κυτταρικά εναιωρήματα που προστίθενται σε κάθε φρεάτιο μL-50. Συγκαλλιεργήθηκε με διαφορετικές συγκεντρώσεις πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola (η τελική συγκέντρωση πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola για τον πολλαπλασιασμό μη ενεργοποιημένων λεμφοκυττάρων ήταν 6,25, 12,5, 25, 50 και 100 mg/L κατά σειρά· η τελική συγκέντρωση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola deserticola πολυσακχαρίτη Τα Τ λεμφοκύτταρα ήταν 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 και 62,5 mg/L κατά σειρά και η τελική συγκέντρωση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola για τον πολλαπλασιασμό των ενεργοποιημένων με LPS λεμφοκυττάρων ήταν 1,56, 3,13, 6,5, 12,5 και 6,5 mg/L. Ως έλεγχος χρησιμοποιήθηκε το μέσο LPS, RPMI-1640. Ο συνολικός όγκος κάθε οπής είναι 200 ​​μL. Κατά την προσθήκη μιτογόνου ConA και LPS (ο έλεγχος RPMI-1640 περιέχει αντίστοιχες συγκεντρώσεις ConA ή LPS), οι τελικές συγκεντρώσεις και των δύο είναι 2,5 mg/L και 10 mg/L, αντίστοιχα. Έγιναν τρεις παράλληλες τρύπες για διάφορες επεξεργασίες. Τοποθετήστε την πλάκα καλλιέργειας σε επωαστήρα 37 βαθμών, 5% CO2 κορεσμένης υγρασίας για 68 ώρες, προσθέστε ΜΤΤ και συνεχίστε την καλλιέργεια για 4 ώρες. Μετρήστε την τιμή A540 nm με δείκτη ενζύμου χρησιμοποιώντας τη μέθοδο MTT για να ανιχνεύσετε τον πολλαπλασιασμό. Όταν συγκρίνετε κάθε ομάδα, μετατρέψτε την τιμή A540nm σε ρυθμό πολλαπλασιασμού λεμφοκυττάρων σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο:Ρυθμός πολλαπλασιασμού λεμφοκυττάρων=Δείγμα ΑΑ μάρτυρας × 100 %.

Επιδράσεις του Cistanche-Βελτίωση της ανοσίας

1.4.2 Επίδραση στο βάρος των οργάνων του ανοσοποιητικού σε φυσιολογικά ποντίκια [6,7]:

Νεαρά ποντίκια BALB c (αρσενικά, ηλικίας 4 εβδομάδων, με σωματικό βάρος 10-15 g) χωρίστηκαν τυχαία σε μια τυφλή ομάδα ελέγχου (φυσιολογικό ορό) και σε διαφορετικές δοσολογικές ομάδες (125 mg (kg · bw) και 250 mg (kg · bw)), με 11 αρουραίους σε κάθε ομάδα. Το φάρμακο χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκά μία φορά την ημέρα για 7 συνεχόμενες ημέρες. Τα ποντίκια θανατώθηκαν μετά από εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας. Ελήφθη ο σπλήνας και ο θύμος αδένας, ο ιστός λίπους και περιτονίας αφαιρέθηκαν και το επιφανειακό υγρό ξηράνθηκε με διηθητικό χαρτί. Μετά τη ζύγιση, ο δείκτης σπλήνας=100 × Βάρος σπλήνας (mg) Βάρος σώματος (mg). Ο δείκτης hthymus=100 × Βάρος θύμου (mg) Βάρος σώματος (mg). Υπολογίστε τον δείκτη σπλήνας και τον δείκτη θύμου αδένα για κάθε 100 mg σωματικού βάρους, αντίστοιχα.

1.4.3 Επίδραση στο βάρος του ανοσοποιητικού οργάνου σε ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς [7,8]:

Νεαροί αρουραίοι BALB c (αρσενικοί, ηλικίας 6 εβδομάδων, σωματικό βάρος 15-20 g) χωρίστηκαν τυχαία σε 12 ομάδες ανάλογα με το σωματικό βάρος. Εκτός από την ομάδα φυσιολογικού ελέγχου (ενδοπεριτοναϊκή ένεση ισοδύναμου όγκου φυσιολογικού ορού), στις άλλες ομάδες χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκή ένεση Cy 50 mg (kg · bw) και το διάλυμα του υπό δοκιμή φαρμάκου χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκά [125 και 250 Mg (kg · φυσιολογικός όγκος) και η ομάδα φυσιολογικού όγκου για την ομάδα ελέγχου]. 13 συνεχόμενες ημέρες, μία φορά την ημέρα. Οι αλλαγές στο βάρος των ζώων παρατηρήθηκαν κατά τη διάρκεια του πειράματος. 24 ώρες μετά την τελευταία χορήγηση, οι δείκτες σπλήνας και θύμου αδένα μετρήθηκαν και υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο όπως στο 1.4.2.

1.4.4 Αντίκτυπος στη δραστηριότητα IL-2:

① Επαγωγή του IL-2 [9]: Προσθέστε 50 σε κάθε φρεάτιο σε πλάκα κυττάρων 96 φρεατίων μ L Διαφορετικές συγκεντρώσεις πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola (τελικές συγκεντρώσεις με τη σειρά: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5 μL/L, προσθέστε το μάρτυρα 62,5 mg/L, 1 φρεάτιο μέσο) και 50 μ L ConA (τελική συγκέντρωση 5 mg/L), προσθέστε 1 ακόμη ανά φρεάτιο × 106 κύτταρα σπλήνας. Επωάστε σε επωαστήρα υγρασίας 37 βαθμών, 5% CO2 κορεσμένη για 24 ώρες, φυγοκεντρήστε για 20 λεπτά στα 2500 rmin και πάρτε το υπερκείμενο του κυττάρου και αποθηκεύστε το σε - 20 βαθμό για αναμονή. ② IL-2 ανίχνευση δραστηριότητας [9,10]: Η βασική μέθοδος βασίζεται στη βιβλιογραφία [9] και γίνονται κατάλληλες προσαρμογές σύμφωνα με τη βιβλιογραφία [10]. Συμβατική παρασκευή εναιωρήματος θυμοκυττάρων ποντικού BALB c, πλάκα κυτταροκαλλιέργειας 96 φρεατίων, 1 ενοφθαλμισμός ανά φρεάτιο × 106 θυμοκύτταρα, ενώ προστίθενται 50 κύτταρα ανά φρεάτιο μ L ConA (τελική συγκέντρωση 2,5 mg/L), και στη συνέχεια προσθέτουμε το παρασκευασμένο υπερκείμενο IL-2 υπερκείμενο 50 μ L (προσθέστε μαζί στο διάλυμα καλλιέργειας Llcue 5). 54 ώρες, προσθέστε MTT, συνεχίστε την επώαση για 4 ώρες, φυγοκεντρήστε για 10 έως 15 λεπτά στα 1000 rmin, απορρίψτε το υπερκείμενο και προσθέστε DMSO 100 ανά φρεάτιο μ L, ανακινήστε με μικροταλαντωτή για 8 λεπτά και μετρήστε την τιμή A540 nm με δείκτη ενζύμου.

1.5 Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέσος όρος και τυπική απόκλιση (x ± s). Το λογισμικό Microsoft Excel χρησιμοποιήθηκε για τη συλλογή των δεδομένων και διεξήχθη t-test. Π<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Αποτελέσματα

2.1 Επίδραση στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων

Όπως φαίνεται από τον Πίνακα 1, η προσθήκη πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στο μέσο καλλιέργειας λεμφοκυττάρων σπλήνας ποντικού που καλλιεργήθηκαν in vitro σε συγκέντρωση πάνω από 25 mg/L μπορεί να διεγείρει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων, υποδεικνύοντας ότι ο ίδιος ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola έχει μιτωτική δράση. Συγχρόνως,μπορεί να φανεί από τον Πίνακα 2 και τον Πίνακα 3 ότι το CDPS έχει σημαντική προαγωγική επίδραση στον πολλαπλασιασμό των Τ λεμφοκυττάρων που προκαλούνται από ConA ή των Β λεμφοκυττάρων που προκαλούνται από LPS.

Πίν.1 Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στον πολλαπλασιασμό των μη ενεργοποιημένων λεμφοκυττάρων (x ±s, n =3)

Όχι: σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ＊Σ<0.05.

Πίν.2 Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στον πολλαπλασιασμό των Τ λεμφοκυττάρων που προκαλείται από ConA (x ±s, n =3)

 

Σημείωση: σε σύγκριση με την ομάδα ConA, ＊Σ<0.05, ＊＊P <0.01.

Πίν.3 Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στον πολλαπλασιασμό των Β λεμφοκυττάρων που προκαλείται από το LPS (x ±s, n =3)

Σημείωση: σε σύγκριση με την ομάδα LPS, ＊Σελ<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Επίδραση στο βάρος των οργάνων του ανοσοποιητικού σε φυσιολογικά ποντίκια

Όπως φαίνεται από τον Πίνακα 4,Ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola μπορεί να αυξήσει σημαντικά τον δείκτη σπλήνας φυσιολογικών νεαρών αρουραίων BALB/cc, αλλά δεν επηρεάζει τον θύμο αδένα.

2.3 Επίδραση στο βάρος του ανοσοποιητικού οργάνου σε ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς

Από τον πίνακα 5,μπορεί να φανεί ότι οι δείκτες οργάνων σπλήνας και θύμου ποντικών στην ομάδα ανοσοκατασταλτικής Cy είναι χαμηλότεροι από εκείνους της ομάδας ελέγχου και ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola (125, 250 mg/kg) μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τους δείκτες σπλήνας και θύμου αδένα.

2.4 Επίδραση στη δραστηριότητα IL-2

Όπως φαίνεται από τον Πίνακα 6,όταν η δόση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola φτάσει τα 7,82 mg/L, μπορεί να αυξήσει σημαντικά την απελευθέρωση του IL-2 από τα κύτταρα του σπλήνα ποντικού.

Πίν.4 Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στο βάρος των οργάνων του ανοσοποιητικού συστήματος σε φυσιολογικά ποντίκια (x ±s, n =11)

Σημείωση: σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ＊＊Σελ<0.01.

Πίν.5 Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στο βάρος των οργάνων του ανοσοποιητικού σε ανοσοκατασταλμένους ποντικούς ( x ± s, n =12)

Σημείωση: σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ## P < 0,01; σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλων, ＊＊P<0.01.

Πίν.6 Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στην παραγωγή IL-2 από σπληνικά λεμφοκύτταρα σε ποντικούς( x ±s, n =3)

Σημείωση: σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ＊＊Σελ<0.01.

3. Συζήτηση

Ο πολλαπλασιασμός σπληνικών λεμφοκυττάρων που προκαλείται από ConA και LPS σε ποντίκια είναι ένα πείραμα in vitro για την ανίχνευση της λειτουργίας των Τ και Β λεμφοκυττάρων και είναι ένας σημαντικός δείκτης της ειδικής ανοσοποιητικής ικανότητας. Μελέτες έχουν δείξει ότι όταν η τελική συγκέντρωση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola είναι πάνω από 25 mg/L, μπορεί να προάγει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων, υποδεικνύοντας ότι έχει μια ορισμένη μιτωτική δράση. Παρουσία μιτογόνου (ConA ή LPS), μια μικρότερη δόση πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola μπορεί να βελτιωθεί εάν το σώμα εμφανίζει σημαντική πολλαπλασιαστική δραστηριότητα. Γνωρίζουμε ότι το ConA και το LPS προκαλούν κυρίως τον πολλαπλασιασμό των Τ λεμφοκυττάρων ή των Β λεμφοκυττάρων, αντίστοιχα. Μελέτες έχουν δείξειΟφέλη για την υγεία σε σκόνη κιστάνς: Ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola μπορεί να προάγει τόσο τον πολλαπλασιασμό των Τ λεμφοκυττάρων όσο και τον πολλαπλασιασμό των Β λεμφοκυττάρων, αλλά η πολλαπλασιαστική του δράση στα Β λεμφοκύτταρα είναι σημαντικά ισχυρότερη από αυτή στα Τ λεμφοκύτταρα.

Οφέλη για την υγεία σε σκόνη Cistanche-Improvε ασυλία

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Improve Immunity

【Ζητήστε περισσότερα】 Email: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Ο θύμος και ο σπλήνας είναι τα κύρια ανοσολογικά όργανα στα ζώα. Τα κύτταρα του ανοσοποιητικού στον σπλήνα είναι κυρίως ώριμα Β λεμφοκύτταρα, ενώ ο θύμος είναι κυρίως ανώριμα Τ λεμφοκύτταρα. Οι δείκτες του θύμου και του σπλήνα μπορούν να αντικατοπτρίζουν την ανάπτυξη των οργάνων του ανοσοποιητικού και τη λειτουργική κατάσταση των ανοσοκυττάρων. Η ενδοπεριτοναϊκή ένεση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola μπορεί να αυξήσει σημαντικά τον δείκτη σπλήνας φυσιολογικών και ανοσοκατασταλμένων ποντικών και έχει σημαντική ανταγωνιστική επίδραση στην ατροφία του θύμου που προκαλείται από το Cy σε ποντίκια.

Ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola δεν έχει σημαντική επίδραση στον θυμικό δείκτη σε φυσιολογικά ζώα, κάτι που είναι σύμφωνο με τα αποτελέσματα πειραμάτων in vitro στα οποία ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola προάγει τον πολλαπλασιασμό των Β λεμφοκυττάρων αντί των Τ λεμφοκυττάρων.

Cσυμπλήρωμα istanche κοντά μου-Βελτίωσηασυδοσία

Το IL-2 είναι μια κυτοκίνη που παράγεται από Τ λεμφοκύτταρα από τη φάση G1 του κυτταρικού κύκλου έως τη φάση S. Είναι ένας κύριος αυξητικός παράγοντας Τ κυττάρων που δρα ως αυτοκρινής αυξητικός παράγοντας. Επιπλέον, το IL-2 μπορεί να προάγει τον πολλαπλασιασμό των Β κυττάρων και τη σύνθεση αντισωμάτων [11,12]. Ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola προάγει την απελευθέρωση του IL-2 από τα λεμφοκύτταρα, η οποία προφανώς σχετίζεται με τον πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola που προάγει τον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων του σπλήνα.

Η ιατρική έρευνα δείχνει ότι το Cistanche περιέχει πολυσακχαρίτες, εχινακοσίδες και ακτεοσίδη, τα οποία μπορούν να ενεργοποιήσουν τα λεμφοκύτταρα και να βελτιώσουν το σώμα. Τα λειτουργικά συστατικά των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών της κιστάνας έχουν σημαντική επίδραση στην ανάκτηση των κυττάρων μετά από βλάβη με ακτίνες γάμμα 60 Co και μπορούν επίσης να βελτιώσουν τη λειτουργία του ανοσοποιητικού έναντι της βλάβης από ακτινοβολία. Η καθημερινή λήψη συμπληρωμάτων Cistanche deserticola μπορεί να επιτύχει το αποτέλεσμα της βελτίωσης της ανοσίας.