Αφηρημένη

Τα υδατικά αιθανολικά εκχυλίσματα κονιοποιημένων στελεχών Dendrobium loddigesii απέδωσαν τρεις νέες φαινολικές ενώσεις συμπεριλαμβανομένων τριών-7-Ο-αιθυλ-9-Ο-(4-υδροξυφαινυλ)προπιονυλ-διακυλγλυκερόλης (1), (R){{ 7}},5,4ʹ-τριυδροξυ-3,3ʹ, -τριμεθοξυδιβενζύλιο (2) και (S)-5,5',7-τριυδροξυ-3',4' -διμεθοξυφαβανόνη (3), μαζί με έντεκα γνωστά ανάλογα. Οι δομές τους προσδιορίστηκαν με εκτεταμένη φασματοσκοπική ανάλυση. Για τον εντοπισμό φυσικών αντιοξειδωτικών, λευκαντικών και αντιγηραντικών παραγόντων, αξιολογήθηκαν οι ικανότητες αυτών των φαινολικών να καθαρίζουν τη ρίζα 1,2-διφαινυλ{-2-πικρυλυδραζυλ (DPPH), τις ικανότητές τους να αναστέλλουν την παραγωγή τυροσινάσης και τις ικανότητές τους να διεγείρουν την παραγωγή κολλαγόνου με τη δοκιμασία ανθρώπινων δερματικών ινοβλαστών-ενήλικες (HDFa). Βρέθηκε ότι οι ενώσεις 1, 4-8, 13 και 14 εμφάνισαν σημαντικές δραστηριότητες σάρωσης ριζών DPPH, η ένωση 10 εμφάνισε ανασταλτική δραστηριότητα τυροσινάσης (IC{33}}.904 ug/mL) και η ένωση 9 έδειξε σημαντική παραγωγή κολλαγόνου με τιμή EC50 3,182 ug/mL. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα φαινολικά συστατικά από το D. loddigesii μπορεί να είναι υποψήφιοι αντιοξειδωτικοί παράγοντες, παράγοντες λεύκανσης του δέρματος και/ή αντιγηραντικοί παράγοντες.

Σύμφωνα με σχετικές μελέτες,κιστανάκιείναι ένα κοινόβότανοπου είναι γνωστό ως «το θαυματουργό βότανο που παρατείνει τη ζωή». Το κύριο συστατικό του είναισιστανοζίτη, που έχει διάφορα αποτελέσματα όπως π.χαντιοξειδωτικό, αντιφλεγμονώδη, καιπροαγωγή της ανοσοποιητικής λειτουργίας. Ο μηχανισμός μεταξύ cistanche καιλεύκανση δέρματοςέγκειται στην αντιοξειδωτική δράση τουγλυκοσίδες κιστάνχης. Η μελανίνη στο ανθρώπινο δέρμα παράγεται από την οξείδωση τουτυροσίνηκαταλύεται από την τυροσινάση και η αντίδραση οξείδωσης απαιτεί τη συμμετοχή οξυγόνου, έτσι οι ελεύθερες ρίζες στο σώμα γίνονται ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την παραγωγή μελανίνης. Το Cistanche περιέχει cistanoside, το οποίο είναι ένα αντιοξειδωτικό και μπορεί να μειώσει τη δημιουργία ελεύθερων ριζών στο σώμα.αναστέλλοντας την παραγωγή μελανίνης.

Κάντε κλικ στο Συμπλήρωμα Cistanche Tubulosa

Για περισσότερες πληροφορίες:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Γραφική Περίληψη

1. Εισαγωγή

Το γένος Dendrobium (Orchidaceae) περιέχει περίπου 1500 είδη παγκοσμίως, από τα οποία περίπου 80 είδη φύονται στην Κίνα [1]. Οι μίσχοι πολλών φυτών αυτού του γένους είναι γνωστοί ως "Shi-Hu", που έχουν χρησιμοποιηθεί για χιλιάδες χρόνια τόσο ως παραδοσιακή κινεζική ιατρική όσο και ως λαϊκές θεραπείες για τη θεραπεία της χρόνιας ατροφικής γαστρίτιδας, της γήρανσης του δέρματος, του πυρετού, των καρδιαγγειακών παθήσεων και ένα τονωτικό για την προώθηση της παραγωγής σωματικών υγρών [2]. Προηγούμενες μελέτες σε αυτό το γένος οδήγησαν στην απομόνωση μιας σειράς πολυσακχαριτών, φαινολικών ενώσεων, αλκαλοειδών και σεσκιτερπενοειδών [1, 3-5], μερικά από τα οποία διαθέτουν διάφορες βιοδραστηριότητες όπως αντιφλεγμονώδεις [6], αντιμικροβιακές [2], αντιοξειδωτικές [7], κατά του όγκου [8], αντιαιμοπεταλιακή συσσώρευση [9], ανοσοτροποποιητική [10] και κατά της γρίπης Α [11].

Το Dendrobium loddigesii, ένα πολυετές επιφυτικό βότανο, είναι ευρέως διαδεδομένο στη νοτιοδυτική περιοχή της Κίνας, όπως οι επαρχίες Guangxi, Guizhou και Yunnan [12]. Το στέλεχος του έχει χρησιμοποιηθεί στη λαϊκή ιατρική για τη θεραπεία της γαστρίτιδας, του πυρετού και της ζάλης [13]. Συνεχίζοντας την αναζήτηση για δομικά διαφορετικά και βιολογικά ενεργά φυσικά προϊόντα από αυτό το γένος [1, 5, 14-17], πραγματοποιήθηκε εδώ μια εις βάθος έρευνα φαρμακολογικά ενεργών συστατικών από αυτό το είδος φυτού. Ως αποτέλεσμα, τρεις νέες φαινολικές ενώσεις (1–3) καθώς και έντεκα γνωστές (Εικ. 1) απομονώθηκαν από ένα 80 τοις εκατό αιθανολικό εκχύλισμα του στελέχους του D. loddigesii. Η απομόνωση, η αποσαφήνιση της δομής και η βιολογική αξιολόγηση αυτών των ενώσεων παρουσιάζονται εδώ.

2 Αποτελέσματα και συζήτηση

Η ένωση 1, που ελήφθη ως λευκό στερεό, έδωσε έναν μοριακό τύπο C21H26O7 όπως προσδιορίζεται από το ιόν (−)-HRESIMS σε m/z 389,1602 [M−H]− (υπολογισθείσα για C21H25O7, 389,16{{ 28}}6) με εννέα βαθμούς ακορεστότητας. Το φάσμα 1H NMR του 1 περιέχει επτά αρωματικά πρωτόνια σε δΗ 6,85 (1H, d, J=1,7 Hz), 6,75 (1H, d, J=8,0 Hz), 6,68 (1H , dd, J = 8.0, 1.7 Hz), 7.01 (2H, d, J = 8.5 Hz) και 6.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), υποδηλώνοντας την παρουσία ενός δακτυλίου 1,3,4-τρι-υποκατεστημένου βενζολίου και ενός δακτυλίου 1,4-διυποκατεστημένου βενζολίου. Το φάσμα 13C NMR του εμφάνισε 21 συντονισμούς άνθρακα συμπεριλαμβανομένων δύο μεθυλίων (ένα μεθοξυ), τέσσερα αλειφατικό μεθυλένιο, εννέα μεθίνες (δύο sp3, επτά sp2) και έξι τεταρτοταγείς άνθρακες (ένας καρβονύλιος, πέντε ολεφινικοί συμπεριλαμβανομένων τριών οξυγονωμένοι). Οι συσχετίσεις HMBC (Εικ. 2) των H-7/C-1 (δC 131,6), C-2 (δC 111,7), C-6 (δC 121,4), C -8 (δC 74.2) και C-10 (δC 65.3); Η-9/C-7 (δC 83.8) και C-8 (δC 74.2); Η-10/C-11 (δC 15.6); 3-OMe (δH 3,81)/C-3 (δC 149,1), μαζί με συσχετίσεις H-7/H-8/H2-9 και H{{{ 87}}/H3-11 από το φάσμα 1 H–1 H COZY (Εικ. 2) έδειξε την παρουσία 7-Ο-αιθυλογουαϊακυλογλυκερόλης [18]. Έχει αναφερθεί ότι το J7,8 ήταν περίπου 5 Hz για το ερυθροϊσομερές και 7 Hz για τα τρία ισομερή στις περιπτώσεις σύριγγων-γλυκερολών και παραγώγων διακυλγλυκερόλης. Έτσι, η ένωση 1 θεωρήθηκε ότι ήταν τα τρία ισομερή με J7,8 (6,5 Hz) [18]. Οι συσχετίσεις HMBC των H-7ʹ (δH 2,79, t, J = 7,5 Hz)/C-8ʹ (δC 37,1), C-1ʹ (δC 132,7), C-2ʹ, 6ʹ (δC 130,2) και C-9ʹ (δC 174,6), H-8ʹ (δH 2,59, t, J = 7,5 Hz)/C-7ʹ (δC 31,0), C-1ʹ και C-9ʹ, μαζί με υποδεικνύονται διασταυρούμενες κορυφές COZY του H-8ʹ/H-7ʹ την παρουσία του π-υδροξυκουμαρικού οξέος [19]. Με βάση τα στοιχεία που περιγράφηκαν παραπάνω, προτάθηκε το 1 να έχει ένα τμήμα 7-Ο-αιθυλογουαϊακυλογλυκερόλης και ένα π-υδροξυ-κουμαρικό οξύ μέσω μιας εστερικής σύνδεσης. Ο συσχετισμός HMBC από το H-9 στο C-9ʹ πρότεινε ότι η εστερική σύνδεση ήταν μεταξύ C-9 και C-9ʹ. Έτσι, η δομή του 1 προσδιορίστηκε όπως φαίνεται.

Το (R){{0}},5,4ʹ-Τριυδροξυ-3,3ʹ,-τριμεθοξυδιβενζύλιο (2) ελήφθη ως λευκό στερεό. Το φάσμα HRESIMS του 2 εμφάνισε μια κορυφή οιονεί μοριακού ιόντος σε m/z 319,1180 [M−H]− (υπολογ. για C17H19O6, 319,1187) με 8 βαθμούς ακορεστότητας. Το φάσμα 1Η NMR του 2 έδειξε τρεις μεθοξυλομάδες σε δΗ 3.75 (3Η, s), 3.70 (3Η, s) και 3.17 (3Η, s). ένα οξυγονωμένο πρωτόνιο μεθίνης σε δΗ 4.13 (1Η, t, J=6.8 Hz, Η-); δύο σήματα μεθυλενίου σε δΗ 2.73 (1Η, dd, J=13.5, 6.9 Hz) και 2.96 (1Η, dd, J=13.5, 6.9 Hz); και πέντε αρωματικά πρωτόνια, που εμφανίζονται ως 1,3,4,5-τετραυποκατεστημένος αρωματικός δακτύλιος σε δΗ 6,28 (1Η, d, J=1},8 Hz) και 6,34 (1Η, d, J{{ 60}}.8 Hz), και έναν 1,3,4-τρις υποκατεστημένο αρωματικό δακτύλιο σε δΗ 6.49 (1Η, d, J=2.0 Hz), 6.62 (1Η, d, J=8.0 Hz) και 6.52 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz). Τα φάσματα 13CNMR και DEPT του 2 έδειξαν τρία οξυμεθυλένιο, ένα μεθυλένιο, μία οξυγονωμένη μεθίνη και 12 αρωματικούς άνθρακες (πέντε οξυγονωμένους). Η σύγκριση των δεδομένων NMR του (Πίνακας 1) με αυτά της δενδροκανδίνης C [20] έδειξε μεγάλες ομοιότητες εκτός από την παρουσία μιας ακόμη μεθοξυλικής ομάδας, η οποία εντοπίστηκε στο C-3ʹ από τις συσχετίσεις HMBC από 3ʹ-OMe και H-5ʹ προς C-3ʹ (δC 148,4). Επιπλέον, οι πολλαπλές αλληλεπιδράσεις HMBC (Εικ. 2) των 3-OMe και H-2/C-3 (δC 149.5). Το -OMe/C- (δC 86.9) πρότεινε τις άλλες μεθοξυλομάδες σε C-3 και C-, αντίστοιχα. Η απόλυτη διαμόρφωση στο C- προσδιορίστηκε ως R με βάση την αρνητική οπτική περιστροφή ([훼] 26 D –12,46), παρόμοια με την άφυλλη D [훼] 20 D –20,3, MeOH) [15]. Συνεπώς, η δομή του 2 προσδιορίστηκε όπως φαίνεται.

Η (S){{0}},7,5'-Τριυδροξυ-3',4'-διμεθοξυφαβανόνη (3) ελήφθη ως κίτρινη άμορφη σκόνη και είχε το μοριακό C17H16O7 (1{{{69} } δείκτες ανεπάρκειας υδρογόνου) σύμφωνα με το ιόν (−)-HRESIMS σε m/z 331,0819 [M – H]− (υπολογ. 331,0823). Τα μέγιστα απορρόφησης UV στα 206 και 294 nm έδειξαν την παρουσία μιας φλαβανόνης [21]. Το φάσμα 1Η NMR (Πίνακας 1) έδειξε τρία σήματα στη μη αρωματική περιοχή τοποθετημένα σε δΗ 5.29 (1Η, dd, J{=12.7, 3.1, Η-2), 3.04 (1Η, dd, J=17.1, 12.7, H-3ax) και 2.71 (1H, dd, J{=17.1, 3.1, H-3 eq), τέσσερα αρωματικά πρωτόνια δΗ 5.87 (1Η, d, J{=2.2, Η-6), 5.91 (1Η, d, J{=2.2, Η-8), 6.62 (1Η, d, J{=2.0, H-2ʹ) και 6.61 (1H, d, J{=2.0, H-6ʹ), δύο μεθοξυλομάδες δΗ 3.83 (3Η, s) και 3.77 (3Η, s). Τα φάσματα 13C NMR και DEPT (Πίνακας 1) περιέχουν συντονισμούς για 17 άνθρακες συμπεριλαμβανομένων δύο μεθοξυ, ένα μεθυλένιο, μία μεθίνη, έναν άνθρακα καρβονυλίου και 12 αρωματικούς άνθρακες. Η ολοκληρωμένη ανάλυση των δεδομένων NMR του έδειξε ότι η επίπεδη δομή του σχετίζεται στενά με αυτή της διυδροτρικίνης [22], εκτός από τους συντονισμούς OH-4' και OCH3-5' στη διυδροτρικίνη μεταφέρθηκαν στο 3. Αυτό επιβεβαιώθηκε από τη διασταύρωση HMBC κορυφές (Εικ. 2) από H-2ʹ, H-6ʹ και OCH3-4ʹ έως C-4ʹ (δC 137,7), από H-6ʹ έως C-5ʹ (δC 151,8). Η απόλυτη διαμόρφωση στο C-2 θεωρήθηκε ότι είναι στη μορφή S με βάση μια αρνητική ειδική τιμή περιστροφής (– 46,64, MeOH) στην οπτική περιστροφή του [23]. Ως εκ τούτου, η δομή της ένωσης 3 αποδόθηκε έτσι αναμφισβήτητα όπως φαίνεται.

Έντεκα γνωστές ενώσεις ταυτοποιήθηκαν ως τρόμος 4 [24], μεσκαλίνη 5 [25], 4,5,4'-τριυδροξυ- 3,3'-διμεθοξυδιβενζύλιο 6 [26], 4',5- διυδροξυ-3,3'- διμεθοξυδιβενζύλιο 7 [27], Tristin 8 [28], batatas στο III 9 [27], 3,5,3'-υδροξυδιβενζύλιο 10 [29], άφυλλο C 11 [15], οδοντόμορφο Α 12 [30], διυδροκονιφερυλ διυδρο-ρ-κουμαρικό 13 [31], τρανσφερουλικό ρ-υδροξυφαινυλεστέρα 14 [32] με φασματοσκοπική ανάλυση και σύγκριση των φασματικών τους δεδομένων με τη βιβλιογραφία.

Οι φαινολικές ενώσεις, αποτελούν ουσιαστικό μέρος της ανθρώπινης διατροφής και είναι γνωστές ως ισχυρά αντιοξειδωτικά λόγω της ισχυρής τους δράσης στο σπάσιμο της αλυσίδας και μπορούν να συμβάλλουν άμεσα στην αντιοξειδωτική δράση [33]. Ο προσδιορισμός καθαρισμού ριζών DPPH είναι μια από τις πιο κοινές και σχετικά γρήγορες μεθόδους που χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της αντιοξειδωτικής δράσης. Οι ενώσεις που μπορούν να δώσουν ένα άτομο υδρογόνου στη ρίζα DPPH και στη συνέχεια να δημιουργήσουν την ανηγμένη μορφή της DPPH θα θεωρηθούν πιθανοί αντιοξειδωτικοί παράγοντες. Όλες οι ενώσεις αξιολογήθηκαν για τις δραστηριότητές τους καθαρισμού ριζών DPPH. Τα παρόντα αποτελέσματα (Πίνακας 2) έδειξαν ότι η πλειονότητα των φαινολικών ενώσεων (1, 4-8, 13 και 14) παρουσίασε σημαντικές δραστηριότητες με ικανότητες σάρωσης που κυμαίνονται από 89.411 έως 94.278 τοις εκατό στα 100 ug/mL.

Από την άλλη πλευρά, η τυροσινάση είναι ένα ένζυμο που περιέχει χαλκό και παίζει κρίσιμο ρόλο στον έλεγχο της οδού βιοσύνθεσης μελανίνης στα μελανοκύτταρα [34]. Ως εκ τούτου, οι αναστολείς τυροσινάσης έγιναν σημαντικά συστατικά καλλυντικών ή φαρμακευτικών προϊόντων για την υπερμελάγχρωση και την ανάπτυξη παραγόντων λεύκανσης του δέρματος. Στην παρούσα μελέτη, όλα τα προϊόντα απομόνωσης αξιολογήθηκαν για την ανασταλτική τους δράση της τυροσινάσης (Πίνακας 2). Ως θετικός έλεγχος χρησιμοποιήθηκε το Kojic acid, ένας υποτιθέμενος παράγοντας λεύκανσης του δέρματος. Το 3,5,3'-υδροξυδιβενζύλιο (10) αποκάλυψε σημαντική ανασταλτική δράση με τιμή IC50 37,904 ug/mL. Οι αφύλλες C (11) έδειξαν μέτρια αναστολή (IC50, 152,56 μg/mL). Όλες οι υπόλοιπες ενώσεις ήταν ανενεργές σε συγκεντρώσεις έως 200 μg/mL. Σε αυτή τη μελέτη, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι οι ενώσεις 10 και 11 μπορούν να είναι πιθανοί υποψήφιοι για τη θεραπεία δερματικών παθήσεων που σχετίζονται με τη βιοσύνθεση μελανίνης.

Λαμβάνοντας υπόψη ότι αυτό το είδος χρησιμοποιείται ιατρικά για τη γήρανση του δέρματος, καθώς το κολλαγόνο είναι κρίσιμο για τη δύναμη και την ελαστικότητα του δέρματος και η υποβάθμισή του οδηγεί σε ρυτίδες που συνοδεύουν τη γήρανση [35]. Ως εκ τούτου, όλες οι ενώσεις αξιολογήθηκαν επίσης σκόπιμα για τις επιδράσεις τους στην παραγωγή κολλαγόνου σε HDFa. Τα αποτελέσματα (Πίνακας 2) έδειξαν ότι η ένωση 9 διεγείρει σημαντικά τη δραστηριότητα παραγωγής κολλαγόνου HDFa (EC50 3.182 μg/mL). Οι ενώσεις 6 και 7 έδειξαν ασθενέστερες δραστηριότητες, με παραγωγή κολλαγόνου 33,062 τοις εκατό και 29,157 τοις εκατό στα 10 ug/mL, αντίστοιχα. Τα παρόντα αποτελέσματα όχι μόνο υποστήριξαν την εθνοφαρμακολογική χρήση του D. loddigesii αλλά παρείχαν επίσης ένα αξιόπιστο πρότυπο δομής για την ανάπτυξη ασθενειών που σχετίζονται με ανεπάρκεια κολλαγόνου, όπως εγκαύματα και έλκη.

3 Πειραματικό

3.1 Γενικές Πειραματικές Διαδικασίες

3.2 Φυτικό Υλικό

Οι μίσχοι του D. loddigesii συλλέχθηκαν τον Σεπτέμβριο του 2014 από την πόλη Wenshan, επαρχία Yunnan, Λαϊκή Δημοκρατία της Κίνας και αναγνωρίστηκαν από τον καθηγητή Hong Yu (Πανεπιστήμιο Yunnan, Kunming, Λαϊκή Δημοκρατία της Κίνας). Το δείγμα κουπονιού (αρ. 20.140.829) έχει κατατεθεί στο Κρατικό Εργαστήριο Φυτοχημείας και Φυτικών Πόρων στη Δυτική Κίνα, Ινστιτούτο Βοτανικής Κουνμίνγκ, Κινεζική Ακαδημία Επιστημών.

3.3 Εξαγωγή και απομόνωση

Τα αποξηραμένα και κονιοποιημένα στελέχη (10.2 kg) του D. loddigesii εκχυλίστηκαν τρεις φορές με 80 τοις εκατό αιθανόλη σε θερμοκρασία δωματίου και συμπυκνώθηκαν υπό μειωμένη πίεση. Στη συνέχεια, το υπόλειμμα εναιωρήθηκε σε Η2Ο και κατανεμήθηκε με EtOAc για να ληφθεί το κλάσμα EtOAc (220 g), το οποίο υποβλήθηκε σε χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής εκλούστηκε με βαθμίδωση πετρελαϊκού αιθέρα/ακετόνης (15:1 έως { {110}}:1) για να δώσει 22 κλάσματα (Fr.1–22). Το Fr.11 (6 g) υποβλήθηκε σε πυριτική πηκτή CC εκλούστηκε με CHCl3/MeOH (300:1), και στη συνέχεια ακολουθήθηκε από στήλη MCI (βαθμίδωση MeOH/H2O, 60:40–95:5) και πυριτική γέλη CC (CHCl3/ MeOH, 200:1) για να δώσει 12 (4 mg). Το Fr.13 (850 mg) διαχωρίστηκε σε μια στήλη MCI (MeOH/H2O, 60:40 έως 95:5) για να δώσει πέντε κλάσματα (Fr.13.1–Fr.13.5). Το Fr.13.4 (150 mg) έδωσε τις ενώσεις 4 (3 mg) και 5 (5 mg) με παρασκευή HPLC (MeOH/H2O, 60:40). Το Fr.16 (19 g) χρωματογραφήθηκε σε στήλη πυριτικής πηκτής που εκλούστηκε με CHCl3/MeOH (100:1 έως 20:1) για να δώσει 6 υποκλάσματα (Fr.16.1–Fr.16.6). Το Fr.16,4 (2,3 g) εφαρμόστηκε στήλη MCI εκλούστηκε με MeOH/H2O (50:50–100:0) και στη συνέχεια κλασματώθηκε περαιτέρω σε στήλη Sephadex LH-20 (MeOH/H2O, 90:10) σε απόδοση 7 (716 mg) και 13 (39 mg). Χρησιμοποιώντας τις ίδιες συνθήκες του Fr.16.4, το Fr.16.6 (240 mg) έδωσε την ένωση 9 (7 mg). Το Fr.18 (10 g) διαχωρίστηκε με σιλικαζέλ CC (CHCl3/MeOH, 100:1–20:1), στη συνέχεια πέρασε μέσω MCI (βαθμίδωση MeOH/H2O, 50:50–100:0) και Sephadex LH{{ 96}} (MeOH/H2O, 90:10) στήλες για να δώσει 3 (25 mg) και 11 (4 mg). Το Fr.19 (20 g) υποβλήθηκε σε στήλη MCI που εκλούστηκε με MeOH/H2O (30:70-100:0) για να ληφθούν επτά κλάσματα (Fr.19.1-Fr.19.7). Το Fr.19,5 (2,3 g) διαχωρίστηκε με επαναλαμβανόμενη στήλη πυριτικής πηκτής (CHCl3/MeOH, 30:1) για να δώσει 8 (15 mg) και 10 (7 mg). Το Fr.19.6 (4.3 g) κλασματώθηκε σε στήλη πυριτικής πηκτής (CHCl3/MeOH, 30:1) για να δώσει 5 κλάσματα (Fr.19.6.1– Fr.19.6.5). Το Fr.19.6.1 (1.2 g) υποβλήθηκε σε στήλη πυριτικής πηκτής (CHCl3/MeOH, 30:1) και μετά από καθαρισμό με HPLC (MeOH/H2O, 45:55), παρέχοντας 1 (15 mg). Το Fr.19.6.3 (540 mg) εφαρμόστηκε σε στήλη Sephadex LH-20 που εκλούστηκε με MeOH/H2O (90:10) και στη συνέχεια καθαρίστηκε περαιτέρω με ημιπαρασκευαστική HPLC (MeOH/H2O, 45:55) για την παροχή 2 (6 mg) και 6 (5 mg). Το Fr.20 (12 g) εφαρμόστηκε σε ένα πήκτωμα MCI (MeOH/H2O, 30:70-100:0) χρωματογραφικό στάδιο και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε πυριτική πηκτή CC (CHCl3/MeOH, 30:1) για να δώσει το 14 (21 mg).τρία{{0}}Ο-Αιθυλ-9-Ο-(4-υδροξυφαινυλ) προπιονυλ-διακυλγλυκερόλη (1): λευκό στερεό. []D 26 - 3,72 (c 0,51, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 203 (4.53), 225 (4.17), 280 (3.66) nm; IR (KBr) νmax 3426, 1727, 1516, 829 cm−1; 1Η και 13C NMR (CD3OD), βλέπε Πίνακα 1; ESIMS m/z 389 [M−H]−, HRESIMS m/z 389,1602 [M−H]− (υπολογ. για C21H25O7, 389,1606).

(R)-4,5,4'-Τριυδροξυ-3,3ʹ, -τριμεθοξυδιβενζύλιο (2): λευκή άμορφη σκόνη. []D 26 -12,46 (c 1,07, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 204 (4,59), 286 (3,75) nm; IR (KBr) νmax 3418, 1607, 1517, 1455, 1434, 796 cm−1; 1Η και 13C NMR (CD3OD), βλέπε Πίνακα 1; ESIMS m/z 319 [M−H]−, HRESIMS m/z 319,1180 [M−H]− (υπολογ. για C17H19O6, 319,1187).

(2S)-5,7,3ʹ-Τριυδροξυ-6,4,5-τριμεθοξυφαβόνη (3): κίτρινη άμορφη σκόνη. [ ]D 26 - 46.64 (c 0.46, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 206 (4,70), 294 (4,17) nm; IR (KBr) νmax 3335, 2940, 1641, 1514, 1462, 1345, 1434, 1182, 1091, 998, 833 cm−1; 1Η και 13C NMR (CD3OD), βλέπε Πίνακα 1; ESIMS m/z 331 [M−H]−, HRESIMS m/z 331,0819 [M−H]− (υπολογ. για C17H15O7, 331,0823).

3.4 Δοκιμασία δραστηριότητας καθαρισμού ριζών DPPH

Ο προσδιορισμός δραστηριότητας δέσμευσης ελεύθερων ριζών πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με την προηγούμενη μέθοδο [36] με ορισμένες τροποποιήσεις. Εν συντομία, 30 μL δείγματα (1000 ug/mL, διαλυμένα σε αιθανόλη) και Trolox (1 mM) προστέθηκαν σε 270 μL διαλύματος DPPH (100 μΜ, διαλυμένο σε μεθανόλη), αντίστοιχα. Η αντίδραση συνεχίστηκε για 1 ώρα στους 37 βαθμούς σε μια μικροπλάκα 96-πηγαδιού. Η απορρόφηση στη συνέχεια διαβάστηκε στα 515 nm και το ποσοστό της συνολικής δραστηριότητας δέσμευσης ριζών υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: ποσοστό αναστολής =[(A0− A1)/A0]×100 τοις εκατό , όπου Α0 είναι η απορρόφηση του DPPH χωρίς δείγματα (αντίδραση ελέγχου) και A1 είναι η απορρόφηση της DPPH που επωάζεται με τα δείγματα. Όλες οι δοκιμές διεξήχθησαν εις τριπλούν και το Trolox χρησιμοποιήθηκε ως παράγοντας θετικού ελέγχου.

3.5 Ανασταλτικός Προσδιορισμός Τυροσινάσης Μανιταριού

Η αναστολή της δραστηριότητας της τυροσινάσης προσδιορίστηκε φασματοφωτομετρικά σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως [36] με ορισμένες τροποποιήσεις. Εν συντομία, παρασκευάστηκαν διαφορετικές συγκεντρώσεις δοκιμαστικών ενώσεων σε 10 τοις εκατό DMSO. Καθένα από το διάλυμα δείγματος (20 μΜ) αναμίχθηκε με L-Dopa (1,25 mM) και αραιώθηκε με 970 μL ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικού νατρίου 0,05 mM (PBS, pH 6,8) στους δοκιμαστικούς σωλήνες. Η αντίδραση ξεκίνησε με προσθήκη τυροσινάσης μανιταριού (25 U/mL). Το μίγμα της αντίδρασης επωάστηκε για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Η ποσότητα Dopachrome στο μίγμα προσδιορίστηκε με τη μέτρηση της απορρόφησης κάθε φρεατίου στα 490 nm. Ως θετικός μάρτυρας χρησιμοποιήθηκε το Kojic acid. Το ανασταλτικό ποσοστό της τυροσινάσης υπολογίστηκε σύμφωνα με την ακόλουθη εξίσωση: Ποσοστό αναστολής=[(A0− A1)/A0] × 100 τοις εκατό , όπου A0 είναι η απορρόφηση του Dopachrome χωρίς ενώσεις δοκιμής (αντίδραση ελέγχου) και A1 είναι η απορρόφηση του Dopachrome που επωάζεται με τις υπό εξέταση ενώσεις.

3.6 Παραγωγή κολλαγόνου με ανάλυση HDFa

Ευχαριστίες Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε οικονομικά από το Επαρχιακό Τμήμα Επιστήμης και Τεχνολογίας του Γιουνάν (Αρ. 2017ZF003-04, 2015HB093 και 2019HA001). Οι συγγραφείς είναι ευγνώμονες στο προσωπικό της αναλυτικής ομάδας του Κρατικού Εργαστηρίου Φυτοχημείας και Φυτικών Πόρων στη Δυτική Κίνα, Ινστιτούτο Βοτανικής Κουνμίνγκ, Κινεζική Ακαδημία Επιστημών, για μετρήσεις όλων των φασμάτων.

Συμμόρφωση με Δεοντολογικά Πρότυπα

Ανοιχτή πρόσβασηΑυτό το άρθρο διανέμεται σύμφωνα με τους όρους της Creative Commons Attribution 4.0 Διεθνής Άδεια, η οποία επιτρέπει την απεριόριστη χρήση, διανομή και αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​υπό την προϋπόθεση ότι αποδίδετε τα κατάλληλα εύσημα στον αρχικό δημιουργό και την πηγή , δώστε έναν σύνδεσμο προς την άδεια Creative Commons και υποδείξτε εάν έγιναν αλλαγές.

βιβλιογραφικές αναφορές

Για περισσότερες πληροφορίες: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501