Ενεργοποίηση συμπληρώματος με τη διαμεσολάβηση{0}}ενεργοποίηση συμπληρώματος σε χοιρινό μοντέλο τραυματισμού νεφρικής ισχαιμίας/επαναιμάτωσης

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Οι Chiara Divella et al

ΑΦΗΡΗΜΕΝΗ

Οι πενταξίνες είναι μια οικογένεια εξελικτικά διατηρημένων μορίων αναγνώρισης προτύπων με καθοριστικούς ρόλους στην έμφυτη ανοσία και τη φλεγμονή, όπως η οψωνοποίηση παθογόνων κατά τη διάρκεια βακτηριακών και ιογενών λοιμώξεων. Συγκεκριμένα, η μακρά Pentraxin 3 (PTX3) έχει αποδειχθεί ότι ρυθμίζει διάφορες πτυχές της φλεγμονής των αγγείων και των ιστών κατά τη μεταμόσχευση συμπαγών οργάνων.

Η μελέτη μας διερεύνησε τον ρόλο της PTX3 ως πιθανού ρυθμιστή της ενεργοποίησης του συμπληρώματος σε ένα μοντέλο των χοίρων τραυματισμού νεφρικής ισχαιμίας/επαναιμάτωσης (I/R). Δείξαμε ότι οι πρώιμες εναποθέσεις PTX3 που προκαλούνται από τραυματισμό I/R σε επίπεδα περισωληναρίων και σπειραματικών τριχοειδών. Το ομοεστιακό μικροσκόπιο σάρωσης με λέιζερ αποκάλυψε εναποθέσεις PTX3 που συνεντοπίζονται με CD31 συν ενδοθηλιακά κύτταρα. Επιπλέον, η PTX3 συσχετίστηκε με διεισδυτικά μακροφάγα (CD163), δενδριτικά κύτταρα (SWC3a) και μυοϊνοβλάστες (FSP1). Συγκεκριμένα, επιδείξαμε σημαντική ενεργοποίηση με τη μεσολάβηση PTX{10}}της κλασικής (με τη μεσολάβηση C1q) και της λεκτίνης (με τη μεσολάβηση MBL) οδών του Συμπληρώματος. Είναι ενδιαφέρον ότι οι εναποθέσεις PTX3 συνεντοπίστηκαν με την ενεργοποίηση του συμπλέγματος τερματικού συμπληρώματος (C5b-9) στα ενδοθηλιακά κύτταρα, υποδεικνύοντας ότι η ενεργοποίηση του συμπληρώματος με τη μεσολάβηση PTX3-συνέβη κυρίως σε νεφρικό αγγειακό επίπεδο. Συμπερασματικά, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η PTX3 μπορεί να είναι ένας πιθανός θεραπευτικός στόχος για την πρόληψη τραυματισμού I/R που προκαλείται από το συμπλήρωμα.

Αλληλογραφία με:Τζουζέπε Καστελάνο

Λέξεις-κλειδιά:ισχαιμία/τραυματισμός επαναιμάτωσης, σύστημα συμπληρώματος, πεντραξίνη 3,νεφρό, κλασική διαδρομή

Το Cistanche tubulosa αποτρέπει τη νεφρική νόσο, κάντε κλικ εδώ για να λάβετε το δείγμα

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Η βλάβη ισχαιμίας-επαναιμάτωσης (I/R) αντιπροσωπεύει την κύρια αιτία της οξείας νόσουνεφρόβλάβημετά τη μεταμόσχευση και χαρακτηρίζεται από σημαντική ενεργοποίηση του συστήματος συμπληρώματος [1, 2]. Σε αυτό το σενάριο, τα ενδοθηλιακά κύτταρα (EC) διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στη δυσπροσαρμοστική επιδιόρθωση μετά το I/R, οδηγώντας σε πρώιμη ίνωση από ενδοθηλιακή σε μεσεγχυματική μετάβαση (EndMT) [3]. Κατά τη φάση της επαναιμάτωσης, το Συμπλήρωμα ενορχηστρώνει ανοσολογικές και φλεγμονώδεις διεργασίες, συμβάλλοντας σε διάφορες ανοσολογικές και φλεγμονώδεις ασθένειες [2-5]. Άλλα βασικά συστατικά του χυμικού βραχίονα του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος αντιπροσωπεύονται από πενταξίνες που πιστεύεται ότι παίζουν κεντρικό ρόλο στην αγγειακή βιολογία [6].

Οι πενταξίνες είναι μια οικογένεια πολυμερών διαλυτών πρωτεϊνών [6] που ταξινομούνται σε μικρές και μεγάλες οικογένειες με βάση τη δομή τους [7]. Αυτές οι εξελικτικά διατηρημένες πρωτεΐνες είναι τελεστές οξείας φάσης, που χρησιμεύουν ως αισθητήρες για την έναρξη της φλεγμονής και αυξάνονται γρήγορα στο πλάσμα κατά τη διάρκεια της μόλυνσης [8]. Η μακρά πεντραξίνη 3 (PTX3) είναι ένα διαλυτό μόριο αναγνώρισης προτύπων που είναι ζωτικής σημασίας για την έμφυτη ανοσολογική προστασία και μπορεί να ενεργοποιήσει το σύστημα του συμπληρώματος [9-11].

Συγκεκριμένα, η PTX3 προκάλεσε την ενεργοποίηση της κλασικής οδού και της λεκτίνης δεσμεύοντας με C1q, MBL, Ficolin-2 και είναι σε θέση να επηρεάσει την εναλλακτική οδό μέσω CFH [10-12].

Σε αντίθεση με άλλες πενταξίνες που παράγονται από το ήπαρ στην κυκλοφορία του αίματος (π.χ. CRP), η PTX3 μπορεί να απελευθερωθεί από μόνιμα κύτταρα εντός της εστίας της φλεγμονής, για παράδειγμα από μονοπύρηνα φαγοκύτταρα, δενδριτικά κύτταρα, ινοβλάστες και EC [9] που δρουν με παρακρινό τρόπο. [13]. Η PTX3 αποθηκεύεται επίσης σε έτοιμη μορφή σε ουδετερόφιλα, εντοπίζεται σε συγκεκριμένους κόκκους και εκκρίνεται ως απόκριση στην αναγνώριση μικροβιακών τμημάτων [14]. Στην EC, η έκφραση της PTX3 επάγεται εύκολα από τον TNF- και την IL-1, δίνοντας μια μετάβαση από έναν ήρεμο, αντιφλεγμονώδη φαινότυπο, σε μια προπηκτική και προφλεγμονώδη κατάσταση, ρυθμίζοντας έτσι έντονα τη μικροαγγειακή λειτουργία [7, 8 ]. Για το λόγο αυτό, τα επίπεδα PTX3 έχουν περιγραφεί ωςχρόνιοςνεφρόνόσος, η αύξηση των επιπέδων πρωτεΐνης της PTX3 έχει συσχετιστεί με τις μειώσεις του GFR και τις καρδιαγγειακές επιπλοκές, ωστόσο, λίγα είναι ακόμα γνωστά για τον ρόλο της PTX3 στις πρώιμες ρυθμίσεις ως οξεία επαγόμενη από I/Rνεφρότραυματισμό [15, 16].

Ο ρόλος της PTX3 στις φλεγμονώδεις ασθένειες των νεφρών είναι δισθενής, από την πλευρά της η πρωτεΐνη μπορεί να ενεργοποιήσει τις κλασικές οδούς και τις οδούς λεκτίνης προάγοντας την αρχική φλεγμονή και τραυματισμό [10-12]. Από την άλλη πλευρά, ο Ν-τερματικός τομέας της PTX3 που ρυθμίζει την ενεργοποίηση του συμπληρώματος εξασθένησε τη στρατολόγηση λευκοκυττάρων και ανέστειλε τη διάμεση ίνωση σε οξεία νεφρική βλάβη που προάγει την επισκευή των ιστών [17-20].

Το συμπλήρωμα παίζει καθοριστικό ρόλο στην παθοφυσιολογία της οξείας βλάβης που προκαλείται από I/Rνεφρόβλάβη[21, 22]. Σε ένα μοντέλο χοίρου νεφρικής βλάβης I/R, δείξαμε τον κεντρικό ρόλο της ενεργοποίησης του συστήματος συμπληρώματος στην πρόκληση EndMT και πρώιμης ίνωσης, με τη συμμετοχή τόσο της κλασσικής οδού όσο και της λεκτίνης [23]. Επιπλέον, δείξαμε ότι η θεραπευτική αναστολή αυτών των οδών του συμπληρώματος από την ανασυνδυασμένη C1-INH (rhC1INH) προκάλεσε σημαντική μείωση στην εναπόθεση συμπληρώματος, με μειωμένη στρατολόγηση διεισδυτικών φλεγμονωδών κυττάρων και σωληναριδική βλάβη [23]. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν επίσης από τους Delpech PO et al [24]. Μια σημαντική τροποποίηση στο C1q, MASP και C4d σπειραματική και σωληναριακή εναπόθεση αξιολογήθηκε μετά από 30 λεπτά μετά την επαναιμάτωση, υποδεικνύοντας τον κεντρικό ρόλο της C1-INH στην εξουδετέρωση των κλασικών οδών και των οδών λεκτίνης.

Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε την πιθανή εμπλοκή της PTX3 στη μεσολάβηση της πρώιμης ενεργοποίησης του συμπληρώματος σε νεφρική βλάβη I/R, χαρακτηρίζοντας τις διαφορετικές κυτταρικές πηγές της PTX3.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Η PTX3 εκφράζεται από ενδοθηλιακά κύτταρα και ανοσοδιηθητικά κύτταρα σε ένα μοντέλο χοίρου I/R τραυματισμού

Αρχικά, διερευνήσαμε την παρουσία της PTX3 σε ένα μοντέλο χοίρων θερμής νεφρικής βλάβης που προκαλείται από I/R. Παρατηρήσαμε πολύ περιορισμένες εναποθέσεις PTX3 σε φυσιολογικό ιστό (Εικόνα 1Α). Ο τραυματισμός του I/R προκάλεσε διάχυτη εναπόθεση PTX3 ήδη σε 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση (Εικόνα 1Β, 1C) στην ενδιάμεση σωληνοειδή περιοχή (Εικόνα 1Ε), στα περισωληνάρια τριχοειδή (Εικόνα 1D, βέλος) και σε σπειραματικά επίπεδα (Εικόνα 1D). Οι εναποθέσεις PTX3 ήταν ακόμη ανιχνεύσιμες 1 ώρα μετά την επαναιμάτωση στο επίπεδο των περισωληναρίων τριχοειδών αγγείων (Εικόνα 1G). Στην προηγούμενη εργασία μας [23] δείξαμε ότι τα κύρια χαρακτηριστικά της βλάβης I/R είναι η απόπτωση των σωληναριακών επιθηλιακών κυττάρων και η στρατολόγηση διεισδυτικών φλεγμονωδών κυττάρων όπως τα μονοκύτταρα, τα δενδριτικά κύτταρα και τα λεμφοκύτταρα. Ωστόσο, με ιστολογική αξιολόγηση ρουτίνας (Συμπληρωματικό Σχήμα 1), δείξαμε ότι 30 λεπτά θερμής ισχαιμίας ακολουθούμενη από 15 λεπτά επαγόμενης από επαναιμάτωση πρώιμης διάμεσης βλάβης των σωληναρίων, που χαρακτηρίζεται από μεγαλύτερη τριχοειδική συμφόρηση και εστιακή κυτταροπλασματική κενοτοπία του βασικού νεφρικού σωληνίσκου σε σύγκριση με το επιθήλιο. κατάσταση.

Για να χαρακτηρίσουμε περαιτέρω τον κυτταρικό εντοπισμό των εναποθέσεων PTX3 και να αξιολογήσουμε την πιθανή επίδρασή του στη ρύθμιση της φλεγμονώδους απόκρισης και του τραυματισμού, πραγματοποιήσαμε ανάλυση διπλής ανοσοχρώσης και ομοεστιακής μικροσκοπίας. Η έκφραση της πρωτεΐνης PTX3 ανιχνεύθηκε στο μεγαλύτερο μέρος της EC σε επίπεδα περισωληναριακά (Εικόνα 2Α) και σπειραματικά (Εικόνα 2Β) τριχοειδών, 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση.

Είναι ευρέως γνωστό ότι ο τραυματισμός I/R χαρακτηρίζεται από αυξημένη ενεργοποίηση των εγγενών και προσαρμοστικών ανοσολογικών αποκρίσεων, συμπεριλαμβανομένης της διακίνησης φλεγμονωδών κυττάρων στο άρρωστο όργανο που επιδεινώνει περαιτέρω τον τραυματισμό μέσω των ανοσοκυττάρων και του συστήματος του συμπληρώματος [25]. Στο μοντέλο των χοίρων μας, παρατηρήσαμε επίσης, ήδη 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση, ένα πυκνό φλεγμονώδες διήθημα αποτελούμενο σε μεγάλο βαθμό από μακροφάγα και δενδριτικά κύτταρα στην ενδιάμεση περιοχή των σωληναρίων. Βρήκαμε ότι και τα δύο αυτά κύτταρα που παρουσιάζουν αντιγόνο χαρακτηρίζονταν από αυξημένη έκφραση PTX3 σε σύγκριση με το T0 καθώς παρατηρήσαμε αυξημένο αριθμό CD163 plus /PTX3 plus (Εικόνα 2E, 2F, 2K) και SWC3a συν /PTX3 plus (Σχήμα 2G, 2Η, 2L) κύτταρα σε ενδιάμεσα επίπεδα σωληναρίων στο Τ15.

Η έκφραση PTX3 μπορεί να συμβάλει στο EndMT σε τραυματισμό I/R

Σε προηγούμενες παρατηρήσεις, δείξαμε ότι ο τραυματισμός I/R ήταν υπεύθυνος για το EndMT [26, 27], που χαρακτηρίζεται από την απόκτηση ενός μεσεγχυματικού φαινοτύπου από την EC με την απώλεια συγκεκριμένων ενδοθηλιακών δεικτών και την αύξηση μεσεγχυματικών δεικτών, όπως οι ειδικοί για ινοβλάστες πρωτεΐνη 1 (FSP-1), νευρωνική καντερίνη (Ν-καντερίνη) και ακτίνη άλφα λείων μυών (άλφα-SMA). Έτσι, ερευνήσαμε εάν η έκφραση PTX3 από την EC θα μπορούσε να επηρεάσει αυτή τη διαδικασία. Όπως ήταν αναμενόμενο, όταν ερευνήσαμε την έκφραση άλφα-SMA, ως δείκτες ενεργοποιημένου μυοϊνοβλάστη, δεν βρήκαμε συνεντοπισμό μεταξύ άλφα-SMA και PTX3 (Εικόνα 2C, 2D). Αντίθετα, παρατηρήσαμε μια αύξηση στα σωληναρισιακά ενδιάμεσα FSP1 συν /PTX3 συν μυοϊνοβλάστες καθ' όλη τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης (Εικόνα 2K–2M).

Οι καταθέσεις PTX3 σχετίζονται με την ενεργοποίηση του συστήματος συμπληρώματος

Τέλος, διερευνήσαμε εάν οι καταθέσεις PTX3 συσχετίστηκαν με την ενεργοποίηση του συμπληρώματος. Πράγματι, όπως και με άλλα συστατικά της οικογένειας πεντραξινών, η PTX3 μπορεί να ρυθμίσει την ενεργοποίηση της κλασικής οδού συμπληρώματος [7]. Για να ορίσουμε τη σχέση μεταξύ PTX3 και ενεργοποίησης συμπληρώματος, πραγματοποιήσαμε ανοσοφθορισμό διπλής επισήμανσης για να αξιολογήσουμε την έκφραση της PTX3 και του τερματικού Σύμπλεγμα συμπληρώματος, C5b-9, χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα που στρέφεται εναντίον ενός C9-νεοεπιτόπου. Παρατηρήσαμε έναν σημαντικό συνεντοπισμό των αποθέσεων PTX3 και C5b-9 (Εικόνα 3Α, 3Β). Το τερματικό σύμπλεγμα του Συμπληρώματος εντοπίστηκε στο περισωληνάρικο επίπεδο καθώς και μέσα στα περισωληνάρια τριχοειδή αγγεία μαζί με το στρώμα των ενδοθηλιακών κυττάρων, όπως δείξαμε προηγουμένως [23, 28]. Δεδομένου ότι η PTX3 μπορεί να ενεργοποιήσει το σύστημα του συμπληρώματος μέσω των οδών κλασικής και λεκτίνης, αξιολογήσαμε την εναπόθεση C1q και MBL στο νεφρικό παρέγχυμα. Είναι ενδιαφέρον ότι οι αποθέσεις C1q (Εικόνα 3E, 3F) και MBL (Εικόνα 3C, 3D) βρέθηκαν κυρίως στο διάμεσο και τριχοειδές επίπεδο (Εικόνα 3C έως 3F), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23] και εντοπίστηκαν με εναποθέσεις PTX3.

Ο αναστολέας C1- παρεμβαίνει στη δέσμευση της PTX3 στα ενδοθηλιακά κύτταρα

Στην προηγούμενη εργασία μας [23] δείξαμε ότι η χορήγηση C1-αναστολέα οδήγησε σε σημαντική μείωση της εναπόθεσης συμπληρώματος, με μειωμένη στρατολόγηση διεισδυτικών φλεγμονωδών κυττάρων και σωληνοειδική διάμεση βλάβη. Επομένως, εξετάσαμε το επίπεδο έκφρασης PTX3 σε ζώα που έλαβαν rhC1-INH. Βρήκαμε ότι η έγχυση του αναστολέα C1- μείωσε τις εναποθέσεις PTX3 στα περισωληνάρια τριχοειδών και στο διάμεσο επίπεδο μετά από 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση (Εικόνα 4Α).

Επιπλέον, για να υποστηρίξουμε την υπόθεση ότι η μείωση των εναποθέσεων PTX3 σε ζώα που έλαβαν θεραπεία με rhC1-INH συσχετίστηκε με την αναστολή της ενδοθηλιακής βλάβης, πραγματοποιήσαμε πειράματα in vitro και αξιολογήσαμε τη σύνδεση rhC1-INH και PTX3 σε καλλιεργημένο EC υπό κανονικές συνθήκες ή παρουσία κυτταρικού στρες (Εικόνα 4Β). Η ανάλυση FACS έδειξε ότι η EC σε κανονικές συνθήκες δεν δέσμευε τόσο την rhC1-INH και την PTX3. Σύμφωνα με την προηγούμενη μελέτη μας [26], παρατηρήσαμε αυξημένη κυτταρική δέσμευση της rhC1-INH σε EC που διεγείρεται από H2O2-σε σύγκριση με βασικές συνθήκες. Επιπλέον, απουσία rhC1-INH, το PTX3 θα μπορούσε να δεσμεύσει ενεργοποιημένο EC. Είναι ενδιαφέρον ότι όταν το H2O2-ενεργοποιημένο EC επωάστηκε με PTX3 και rhC1-INH, παρατηρήσαμε ότι το C1INH ήταν σε θέση να προστατεύσει το EC κατά τον αποκλεισμό της δέσμευσης PTX3.

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε την εναπόθεση PTX3 στην πρώιμη φάση της νεφρικής βλάβης I/R και την πιθανή συμβολή της στην ανάπτυξη EndMT. Είναι ενδιαφέρον ότι βρήκαμε ότι η ενεργοποίηση του συμπληρώματος με τη μεσολάβηση PTX3-συμβαίνει κυρίως σε αγγειακό επίπεδο, συνεντοπίζοντας με το C1q και το MBL, τα μόρια αναγνώρισης των κλασικών οδών και των οδών λεκτίνης του καταρράκτη του Συμπληρώματος.

Ο τραυματισμός του I/R πυροδοτεί μια έντονη φλεγμονώδη απόκριση που χαρακτηρίζεται από ενεργοποίηση συμπληρώματος, ρίζες ελεύθερες οξυγόνου και παραγωγή προφλεγμονώδους κυτοκίνης, με αποτέλεσμα την ενεργοποίηση του αγγειακού ενδοθηλίου και των περιφερικών λευκοκυττάρων [29, 30]. Κατά τη διάρκεια του τραυματισμού I/R, η ενεργοποίηση του συμπληρώματος οδηγεί σε εναπόθεση συστατικών του συμπληρώματος στην επιφανειακή μεμβράνη του κατεστραμμένου και δυσλειτουργικού EC, με την ταυτόχρονη παραγωγή αναφυλατοξινών και την ενίσχυση της φλεγμονώδους διαδικασίας [31]. Κατά τη διάρκεια της φλεγμονής, η PTX3 αυξάνεται γρήγορα και θα μπορούσε να ασκήσει κεντρικό ρόλο στη ρύθμιση της ενδοθηλιακής απόκρισης. Πράγματι, η PTX3 έχει υποδειχθεί ως πιθανός βιοδείκτης αγγειακής ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας σε διάφορες ασθένειες, συμπεριλαμβανομένων των χρόνιωννεφρόασθένεια, προεκλαμψία και αρκετές αγγειακές παθήσεις [7, 16, 17, 32]. Αποδείξαμε επίσης ότι η PTX3 εμπλέκεται σε άλλες αγγειακές επιπλοκές όπως η αποτυχία του αρτηριοφλεβικού συριγγίου σε ασθενείς που υποβάλλονται σε αιμοκάθαρση [33]. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδηλώνουν ότι η PTX3 θα μπορούσε να είναι μια γέφυρα μεταξύ της φλεγμονώδους απόκρισης και της ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας [34]. Σύμφωνα με αυτές τις μελέτες, παρατηρήσαμε εναποθέσεις PTX3 σε ενδοθηλιακό επίπεδο ήδη μετά από 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση (Εικόνα 2Α, 2Β). Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι στην πρώιμη φάση του τραυματισμού I/R, η PTX3 εντοπίστηκε με δείκτη μυοϊνοβλαστών, FSP-1 (Εικόνα 2I, 2J) αλλά όχι με άλφα-SMA, έναν δείκτη που εκφράζεται από ενεργοποιημένο μυοϊνοβλάστη (Εικόνα 2C, 2D). Συνολικά, αυτά τα δεδομένα θα μπορούσαν να υποδηλώσουν ότι η ενδοθηλιακή δυσλειτουργία και η διαδικασία EndMT [35], που παρατηρήθηκε σε ζώα I/R [26], εμφανίστηκαν αρχικά σε EC που εκφράζει PTX3.

Η σύνδεση μεταξύ PTX3 και φλεγμονωδών κυττάρων είναι ευρέως αναγνωρισμένη. Σε αυτό το άρθρο, εστιάσαμε συγκεκριμένα στις εγγενείς επιδράσεις της PTX3 στη διάμεση διήθηση λευκοκυττάρων που αποτελούν κύρια πηγή της PTX3 [36]. Συγκεκριμένα, βρήκαμε μακροφάγα και δενδριτικά κύτταρα, μετά από 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση, που εκφράζουν υψηλότερα επίπεδα PTX3 (Εικόνα 2Ε έως 2Η). Αυτά τα δεδομένα συμφωνούν με τον αυξανόμενο όγκο στοιχείων που υποδηλώνουν έναν σχετικό ρόλο της έμφυτης ανοσίας στη μεσολάβηση της πρώιμης βλάβης σε τραυματισμό I/R [23]. Η πρώιμη ενεργοποίηση του Συμπληρώματος στον νεφρικό ιστό μετά από τραυματισμό I/R οδηγεί στη δημιουργία αρκετών φλεγμονωδών μεσολαβητών που αυξάνουν τη στρατολόγηση των κυττάρων του ανοσοποιητικού [21, 23, 37, 38]. Πρόσφατες μελέτες έχουν αναγνωρίσει το PTX3 ως ένα από τα κύρια συστατικά του δικτύου που ενορχηστρώνει τη φλεγμονώδη απόκριση που προκαλείται από τραυματισμό I/R [39]. Σε διαφορετικά πειραματικά μοντέλα τραυματισμού I/R, το PTX3 μπορεί να ασκήσει διπλούς αντίθετους ρόλους σε συγκεκριμένους ιστούς [40, 41]. Η πρώιμη παραγωγή της PTX3 σχετίζεται με νεφρική βλάβη, καθώς προκαλεί πρώιμη έκφραση μορίων ενδοθηλιακής προσκόλλησης και χημειοκινών που επιταχύνουν την τοπική δυσπροσαρμοστική φλεγμονώδη απόκριση.

Αντίθετα, η παρατεταμένη τοπική παραγωγή της PTX3 αποτρέπει την υπερβολική φλεγμονή των οργάνων και τη δυσλειτουργία [41].

Το PTX3 είναι ένας διαμορφωτής καταρράκτη Συμπληρώματος [9, 42]. Αυτό συμφωνεί με τις πλειοτροπικές ιδιότητες της PTX3, υποδεικνύοντας τον διπλό ρόλο της PTX3 ως ρυθμιστή ή ενισχυτή της έμφυτης ανοσοαπόκρισης [39]. Αρχικά, το PTX3 ενεργοποιεί το Συμπλήρωμα δεσμεύοντας το C1q και το MBL [43]. Ωστόσο, η πρώιμη αυξημένη φλεγμονή πρέπει να περιοριστεί στην περιοχή στόχο. Επομένως, η PTX3, στρατολογώντας τον παράγοντα Η ή αναστέλλοντας την αγγειογένεση, θα μπορούσε επίσης να μειώσει τη φλεγμονώδη απόκριση και την ενεργοποίηση του συμπληρώματος προστατεύοντας το νεφρικό παρέγχυμα από φλεγμονώδη βλάβη [43]. Αν και η ενεργοποίηση του συμπληρώματος στο I/R στα τρωκτικά εντοπίζεται κυρίως στο σωληναριακό επίπεδο [44], κατά τη φάση της επαναιμάτωσης, το ενδοθήλιο είναι ο πρωταρχικός στόχος διαφορετικών προφλεγμονωδών παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων των μεσολαβητών του συμπληρώματος [2]. Προηγουμένως αποδείξαμε ότι στο μοντέλο των χοίρων για τραυματισμό I/R καθώς και σε ασθενείς με DGF, η ενεργοποίηση του συστήματος συμπληρώματος λαμβάνει χώρα στην πρώιμη φάση, στα περισωληνάρια τριχοειδή αγγεία, μέσα στο διάμεσο και στο σπειραματικό ενδοθήλιο [23]. Τα δεδομένα μας έδειξαν έναν σαφή συνεντοπισμό των εναποθέσεων C5b-9 στο PTX3 συν EC μετά από 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση (Εικόνα 3Α, 3Β). Ως εκ τούτου, το νεφρικό ενδοθήλιο φαίνεται να είναι η επικρατούσα θέση της ενεργοποίησης του συμπληρώματος με τη μεσολάβηση PTX στην πρώιμη φάση της βλάβης I/R τόσο σε προκλινικό όσο και σε κλινικό περιβάλλον.

Η αλληλεπίδραση των πενταξινών με το C1q και ο ρόλος της στην ενεργοποίηση της κλασικής οδού του συμπληρώματος περιγράφονται καλά [45-47]. Στο πλαίσιο των έμφυτων ανοσοαποκρίσεων, η PTX3 μπορεί να δεσμεύσει διαφορετικά συστατικά του Συμπληρώματος και να ρυθμίσει την ενεργοποίηση του συμπληρώματος [43, 48]. Το PTX3 ενεργοποιεί το Συμπλήρωμα με δέσμευση C1q [49]. Τα αποτελέσματά μας στο ζωικό μοντέλο έδειξαν ξεκάθαρα ότι η PTX3 μπορεί να μεσολαβεί στην ενεργοποίηση της κλασικής οδού αλληλεπιδρώντας με το C1q (Εικόνα 3Ε, 3F). Επιπλέον, η PTX3 διαμορφώνει επίσης την οδό λεκτίνης του Συμπληρώματος, όπως φαίνεται στο Σχήμα 3C, 3D. Το MBL δεσμεύει την PTX3 μέσω της περιοχής που μοιάζει με κολλαγόνο [45] και τα σύμπλοκα MBL/PTX3 προσλαμβάνουν το C1q και προκαλούν εναπόθεση C3 και C4 στις επιφάνειες των κυττάρων-στόχων.

Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν τον κεντρικό ρόλο της PTX3 στη διαμεσολάβησηνεφρόβλάβη σε τραυματισμό Ι/Κ, η οποία θα μπορούσε να έχει σημαντικές επιπτώσεις για τις θεραπείες που κατευθύνονται από το συμπλήρωμα σε νεφρική βλάβη Ε/Κ.

Στην προηγούμενη μελέτη μας [26], διερευνήσαμε τη συμμετοχή του συμπληρώματος στη μεσολάβηση της ενεργοποίησης EC χρησιμοποιώντας μια ανασυνδυασμένη μορφή C1-INH, έναν ισχυρό αναστολέα πρωτεασών των οδών του κλασικού και του συμπληρώματος λεκτίνης (C1r, C1 s, και MASP2). Στο ίδιο ζωικό μοντέλο, δείξαμε (Εικόνα 4Α) ότι η θεραπευτική αναστολή και των δύο οδών από το rhC1INH μείωσε τις εναποθέσεις PTX3 στα περισωληνάρια τριχοειδών αγγείων και στο διάμεσο επίπεδο μετά από 15 λεπτά μετά την επαναιμάτωση. Αυτά τα δεδομένα που επιβεβαιώθηκαν με in vitro αποτελέσματα στο EC (Εικόνα 4Β), μας οδήγησαν να υποθέσουμε ότι το rhC1INH μπορεί να προστατεύσει το κατεστραμμένο EC κατά τον αποκλεισμό της δέσμευσης PTX3. Στη βιβλιογραφία, υπάρχουν στοιχεία σχετικά με τη δέσμευση της C1-INH σε μόρια ενδοθηλιακής προσκόλλησης, που εκφράζονται σε ενεργοποιημένο ενδοθήλιο, που ονομάζονται σελεκτίνες, ιδιαίτερα P και E-σελεκτίνες [50, 51]. Αυτή η δέσμευση στο EC μπορεί να επηρεάσει την αλληλεπίδραση ενδοθηλίου-λευκοκυττάρου κατά τη διάρκεια της φλεγμονής και αντιπροσωπεύει έναν άλλο σημαντικό αντιφλεγμονώδη μηχανισμό [50, 51]. Επομένως, υποθέσαμε ότι η rh-C1INH μπορεί να δεσμεύσει το ενεργοποιημένο EC και να μεσολαβεί σε τοπική ρύθμιση της ενεργοποίησης του συμπληρώματος και της φλεγμονώδους διαδικασίας. Σε προηγούμενες μελέτες μας, έχουμε αποδείξει τη συμμετοχή του συμπληρώματος σε τραυματισμό I/R και άλλες νεφρικές παθήσεις που προκαλούνται από το ανοσοποιητικό [38, 52-54]. Οι μηχανισμοί ενεργοποίησης του συμπληρώματος σε αυτό το ζωικό μοντέλο θα μπορούσαν να έχουν σημαντικές επιπτώσεις στην ερμηνεία των δεδομένων που αναμένονται στο ανθρώπινο περιβάλλον. Για την επιτυχή ανάπτυξη θεραπευτικών παρεμβάσεων που στοχεύουν στην ενεργοποίηση του συμπληρώματος [36, 54], είναι σημαντικό να διαπιστωθεί η εγκυρότητα των δεδομένων χοίρου σε σχέση με αυτό που συμβαίνει σε κλινικές περιστάσεις. Δεδομένου ότι αυτή η έρευνα περιορίζεται σε μελέτες παρατήρησης, απαιτούνται περαιτέρω πειράματα για την οριοθέτηση των διασυνδεδεμένων μηχανισμών μεταξύ PTX3 και Συμπληρώματος που θα μπορούσαν να αναδείξουν νέες θεραπευτικές στρατηγικές. Από τα παραπάνω αποτελέσματα, τα δεδομένα μας υποστηρίζουν την υπόθεση ότι η PTX3 μπορεί να ρυθμίζει πολλαπλές πτυχές του τραυματισμού I/R που προκαλείται από συμπλήρωμα, αντιπροσωπεύοντας έτσι έναν πιθανό θεραπευτικό στόχο.

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Μοντέλο χοίρου νεφρικής βλάβης I/R

Το ζωικό μοντέλο νεφρικής βλάβης I/R αναπτύχθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23]. Μετά από έγκριση από την επιτροπή δεοντολογίας του Υπουργείου Υγείας, υποβλήθηκαν σε πειραματική ανοιχτή χειρουργική επέμβαση υπό γενική αναισθησία. Τα ζώα νήστευαν για 24 ώρες πριν από την εισαγωγή της αναισθησίας. Το ηλεκτροκαρδιογράφημα, ο καρδιακός ρυθμός, ο κορεσμός του οξυγόνου με αιμοσφαιρίνη, η σύνθεση αναπνευστικών αερίων, ο αναπνευστικός ρυθμός, ο όγκος της αναπνοής, η πίεση των αεραγωγών, η συστολική αρτηριακή πίεση και η κεντρική φλεβική πίεση παρακολουθούνταν συνεχώς και καταγράφονταν αυτόματα (Ohmeda Modulus CD; DatexOhmeda, Ελσίνκι, Φινλανδία) . Η αριστερή νεφρική αρτηρία και φλέβα απομονώθηκαν και ένας βρόχος αγγείου τοποθετήθηκε γύρω από τη νεφρική αρτηρία με σφιγκτήρα ορθής γωνίας. Πραγματοποιήθηκε βιοψία νεφρού πριν από την ισχαιμία (Τ0). Στη συνέχεια, η ισχαιμική φάση προκλήθηκε (30 λεπτά) με το τράβηγμα του βρόχου του αγγείου. Στη συνέχεια πραγματοποιήθηκαν πολλαπλές βιοψίες στα 15, 30 και 60 λεπτά μετά την επαναιμάτωση. τα ζώα θυσιάστηκαν 24 ώρες μετά τη χειρουργική επέμβαση. Ένα μέρος κάθε δείγματος βιοψίας καταψύχθηκε αμέσως σε βέλτιστη θερμοκρασία κοπής (Tissuetek, Pittsburgh, PA) και αποθηκεύτηκε σε υγρό άζωτο. Ένα άλλο τμήμα σταθεροποιήθηκε σε ρυθμισμένη φορμαλίνη (4 τοις εκατό) για 12 ώρες και ενσωματώθηκε σε παραφίνη χρησιμοποιώντας τυπικές διαδικασίες.

Μικροσκοπική μελέτη

Ενσωματωμένα σε παραφίνη νεφρικά δείγματα από βιοψίες νεφρών χρησιμοποιήθηκαν για συμβατική ιστολογική χρώση (H&E, periodic acid-Schiff). Οι εικόνες αποκτήθηκαν από τη συσκευή Aperio ScanScope CS2 (Aperio Technologies, Vista, CA, ΗΠΑ). Οι σωληναριακές-διάμεσες και σπειραματικές αλλοιώσεις αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ποιοτική ανάλυση από δύο παρατηρητές (CD, MR) που δεν γνώριζαν την προέλευση

Αντισώματα

Τα πρωτεύοντα αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη αναγνώρισαν τα ακόλουθα αντιγόνα: PTX3 (MNB4: άμεσο έναντι της Ν-τερματικής περιοχής PTX3, Exira Life Sciences In., Larsen, Switzerland). CD163 (μονοκύτταρα/μακροφάγα, US Biological, Swampscott, ΜΑ); SWC3a (δενδριτικά κύτταρα, [55] 74-22-15A, BD Biosciences); FSP1 (ειδική πρωτεΐνη για ινοβλάστες 1, Abcam, Cambridge, UK), ακτίνη άλφα λείων μυών (Santa Cruz Biotechnology Inc.; Santa Cruz, CA, USA); C1q (R9/2, AbDSerotec; Kidlington, Ηνωμένο Βασίλειο); MBL (3E7: απευθείας ενάντια στον τομέα αναγνώρισης υδατανθράκων MBL, Hycult biotechnology, Uden, Ολλανδία) και C9 νεοαντιγόνο (aE11, Hycult biotechnology). Η διασταυρούμενη αντιδραστικότητα επικυρώθηκε με προεπώαση των συγκεκριμένων αντισωμάτων, πριν από τη χρήση τους, με ανθρώπινα πεπτίδια που χρησιμοποιούνται για την ανάπτυξή τους. Η προεπώαση κατάργησε την ειδική χρώση στον ιστό των χοίρων.

Ανοσοφθορισμός ιστού και ομοεστιακή μικροσκοπία σάρωσης λέιζερ

Ο χαρακτηρισμός και ο εντοπισμός του σήματος ΡΤΧ3 διερευνήθηκαν σε κατεψυγμένο ιστό που περιλαμβάνεται στο μέσο OCT (Tissue-Tek). Οι αντικειμενοφόρες πλάκες επωάστηκαν με 5 τοις εκατό ορό κουνελιού για 1 ώρα στους 37 βαθμούς C. Οι αντικειμενοφόρες πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου με ειδικά αντισώματα. Μετά από τρεις πλύσεις σε PBS, οι αντικειμενοφόρες πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν με τα κατάλληλα δευτερεύοντα αντισώματα (Alexa Flour 488 και 555, Molecular Probes, Eugene, OR). Όλες οι τομές αντιχρωματίστηκαν με TO-PRO-3 (Molecular Probes). Οι αρνητικοί έλεγχοι παρασκευάστηκαν με άσχετα αντισώματα. Οι τομές αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το ομοεστιακό μικροσκόπιο σάρωσης λέιζερ Leica TCS SP2 (Leica, Wetzlar, Germany). Ο αριθμός των κυψελών που διεισδύουν μετρήθηκε σε τουλάχιστον 10 πεδία/τμήμα υψηλής ισχύος (x630) από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές τυφλούς ως προς την αρχή των διαφανειών. Οι τελικές μετρήσεις ήταν ο μέσος όρος των δύο μέτρων. Σε καμία περίπτωση, η μεταβλητότητα μεταξύ των παρατηρητών ήταν μεγαλύτερη από 20 τοις εκατό.

Κυτταρική καλλιέργεια και ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

Τα ενδοθηλιακά κύτταρα ανθρώπινης ομφαλικής φλέβας (HUVEC, EC) αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC-LGC Standards, Sesto San Giovanni, Ιταλία). Το EC αναπτύχθηκε στα προτεινόμενα μέσα, EndoGro (Merck Millipore, Darmstadt, Γερμανία). Το EC επιστρώθηκε σε πυκνότητα 1{{10}},000κυττάρων/cm2 και διεγέρθηκε με κατεργασία Η2Ο2 (3 τοις εκατό, 1 ώρα). Στη συνέχεια η βασική και η διεγερμένη EC πλύθηκαν δύο φορές με PBS και αφαιρέθηκαν με PBS-EDTA 2 mM και θρυψίνη 0.001x. Στη συνέχεια τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε PBS και επωάστηκαν αντίστοιχα με PTX3 (ανασυνδυασμένη ανθρώπινη PTX3, Sigma-Aldrich, Merck, Γερμανία) (1 μg/ml) ή/και με rhC1-INH (Ruconest®, Pharming) (2,5 μg /ml) για 60 λεπτά. Μετά από πλύσιμο τρεις φορές με PBS 1X, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα κυτταρομετρίας ροής (FACS) (αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικά, pH 7,2, 0,2 τοις εκατό αλβουμίνη ορού βοείου και 0,02 τοις εκατό αζίδιο του νατρίου) και επωάστηκαν με αντιδραστήριο αποκλεισμού FCR (Miltenyiotec) 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά τον αποκλεισμό, τα ECs επωάστηκαν με αντι-ανθρώπινο C1-INH κουνελιού (παρέχεται από τον καθηγητή M. Daha, Πανεπιστήμιο του Leiden, αραίωση 1//100) ή/και με αντι-PTX3 επίμυος (MNB4, Exira Life Sciences In., αραίωση 1/20) σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά και πλύθηκε με το ρυθμιστικό διάλυμα FACS. Στη συνέχεια, τα κύτταρα επωάστηκαν με IgG PE κατσίκας αντι-κουνελιού (Molecular Probes, αραίωση 1/100) ή/με IgG FITC έναντι αρουραίου (Molecular Probes, αραίωση 1/100) σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά και πλύθηκαν τρεις φορές. Τα κύτταρα αναλύθηκαν με λογισμικό FC500 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) και Kaluza. Η περιοχή θετικότητας προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα mAb ταιριασμένου με ισότυπο και, συνολικά, αποκτήθηκαν 104 συμβάντα για κάθε δείγμα. Πραγματοποιήθηκαν τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD) και συγκρίνονται χρησιμοποιώντας ανάλυση διακύμανσης ή ζευγοποιημένο Student t-test, ανάλογα με την περίπτωση. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές όταν οι τιμές p ήταν μικρότερες από 0.05. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το πακέτο λογισμικού Statview (έκδοση 5.0) (SAS Inc. Co., Cary, NC, USA). Τα γραφήματα εμφανίστηκαν χρησιμοποιώντας το GraphPad Prism Software 5.

Συντομογραφίες

I/R: ισχαιμία/επαναιμάτωση. EC: ενδοθηλιακά κύτταρα. PTX3: pentraxin 3; FSP-1: ειδική για ινοβλάστες πρωτεΐνη 1; Ν-καντερίνη: νευρωνική καντερίνη. άλφα-SMA: ακτίνη άλφα λείων μυών.

ΣΥΝΕΙΣΦΟΡΕΣ ΣΥΓΓΡΑΦΕΩΝ

Ο CD συντόνισε τη μελέτη, συμμετείχε στην ανοσοσήμανση και τη συνεστιακή μικροσκόπηση νεφρικών τομών και συνέταξε το χειρόγραφο. Οι AS και RF συμμετείχαν στο σχεδιασμό της μελέτης, συνέβαλαν στην ανάλυση δεδομένων, πραγματοποίησαν πειράματα in vitro και αναθεώρησαν κριτικά το χειρόγραφο. Το MR και το GSN πραγματοποίησαν ιστοπαθολογική ανάλυση εικόνας. Οι LL, FS, AMC πραγματοποίησαν το ζωικό μοντέλο τραυματισμού ισχαιμίας-επαναιμάτωσης και βοήθησαν στην αναθεώρηση του χειρογράφου. Οι GL, PD και MB πραγματοποίησαν όλες τις χειρουργικές επεμβάσεις στο μοντέλο χοίρου και βοήθησαν στην αναθεώρηση του χειρογράφου. Οι MRD, P.vdP., C.vK. και FS αναθεώρησαν το χειρόγραφο.

Οι PP, ER, GG, GS και LG αναθεώρησαν κριτικά το χειρόγραφο. Η GC παρείχε νέα αναλυτικά εργαλεία, σχεδίασε και επέβλεψε την έρευνα. Τα CD, AS και RF συνέβαλαν εξίσου σε αυτή τη μελέτη. Όλοι οι συγγραφείς συνέβαλαν στο άρθρο και ενέκριναν την υποβληθείσα έκδοση.

ΕΥΧΑΡΙΣΤΙΕΣ

Ευχαριστούμε την Claudia Curci από τη Μονάδα Νεφρών, Αιμοκάθαρσης και Μεταμοσχεύσεων, Τμήμα Επειγόντων Περιστατικών και Μεταμοσχεύσεων Οργάνων, την

Το Πανεπιστήμιο του Μπάρι για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια.

ΣΥΓΚΡΟΥΣΕΙΣ ΣΥΜΦΕΡΟΝΤΩΝ

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν σύγκρουση συμφερόντων.

ΧΡΗΜΑΤΟΔΟΤΗΣΗ

Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Πανεπιστήμιο του Μπάρι "Aldo Moro", το Υπουργείο Υγείας της Ιταλίας (GR 2016- 02362239 "A transcriptomics – based προσέγγιση για τον προσδιορισμό προγνωστικών παραγόντων και θεραπευτικών στόχων για την καθυστερημένη λειτουργία του μοσχεύματος σενεφρόαποδέκτες μεταμόσχευσης", Bando di Ricerca Finalizzata 2016, CD έλαβε υποτροφία για αυτό το έργο) και Fondo Sociale Europeo, Azione I.2 "Attrazione e Mobilità Internazionale dei Ricercatori"- AIM-1810057-δραστηριότητα 2 που χορηγήθηκε στην AS

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1. Bonventre JV, Yang L. Cellular pathophysiology of ischemic acuteνεφρόβλάβη. J Clin Invest. 2011; 121:4210–21.

2. Jang HR, Rabb H. Η έμφυτη ανοσοαπόκριση σε ισχαιμική οξείανεφρόβλάβη. Clin Immunol. 2009; 130:41–50.

3. Ricklin D, Hajishengallis G, Yang K, Lambris JD. Συμπλήρωμα: ένα βασικό σύστημα για την επιτήρηση του ανοσοποιητικού και την ομοιόσταση. Nat Immunol. 2010; 11:785–97.

4. Thurman JM, Holers VM. Ο κεντρικός ρόλος της εναλλακτικής οδού συμπληρώματος στην ανθρώπινη ασθένεια. J Immunol. 2006; 176:1305–10. PMID:16424154

5. Franzin R, Stasi A, Fiorentino M, Stallone G, Cantaluppi V, Gesualdo L, Castellano G. Σύστημα φλεγμονής και συμπληρώματος: Μια σύνδεση μεταξύ οξείαςΝεφρόΤραυματισμός και Χρόνια Βλάβη Μοσχεύματος. Front Immunol.

2020; 11:734.PMID:32457738

6. Deban L, Jaillon S, Garlanda C, Bottazzi B, Mantovani A. Pentraxins στην έμφυτη ανοσία: μαθήματα από PTX3. Cell Tissue Res. 2011; 343:237–49.PMID:20683616

7. Cieślik P, Hrycek A. Long pentraxin 3 (PTX3) υπό το πρίσμα της δομής, του μηχανισμού δράσης και των κλινικών επιπτώσεων. Αυτοανοσία. 2012; 45:119–28.PMID:21988562

8. Kunes Ρ, Holubcova Ζ, Kolackova Μ, Krejsek J. Pentraxin 3(PTX 3): ένας ενδογενής ρυθμιστής της φλεγμονώδους απόκρισης. Μεσολαβητές Φλεγμονή. 2012; 2012:920517.PMID:22577258

9. Garlanda C, Bottazzi B, Bastone A, Mantovani A. Οι πενταξίνες στο σταυροδρόμι μεταξύ της έμφυτης ανοσίας, της φλεγμονής, της εναπόθεσης μήτρας και της γυναικείας γονιμότητας. Annu Rev Immunol. 2005; 23:337–66.115756PMID:15771574

10. Bottazzi B, Garlanda C, Cotena A, Moalli F, Jaillon S, Deban L, Mantovani A. Η μακριά πεντραξίνη PTX3 ως πρωτότυπος υποδοχέας αναγνώρισης χυμικών προτύπων: αλληλεπίδραση με την κυτταρική έμφυτη ανοσία. Immunol Rev. 2009; 227:9–18.PMID:19120471

11. Ma YJ, Doni A, Hummelshøj T, Honoré C, Bastone A, Mantovani A, Thielens NM, Garred P. Η συνέργεια μεταξύ φικολίνης-2 και πεντραξίνης 3 ενισχύει την έμφυτη αναγνώριση του ανοσοποιητικού και την εναπόθεση συμπληρώματος. J Biol Chem. 2009; 284:28263–75.PMID:19632990

12. Netti GS, Lucarelli G, Spadaccino F, Castellano G, Gigante M, Divella C, Rocchetti MT, Rascio F, Mancini V, Stallone G, Carrieri G, Gesualdo L, Battaglia M, Ranieri E. Η PTX3 ρυθμίζει την ανοσοφλόγωση μικροπεριβάλλον και αποτελεί προγνωστικό παράγοντα για ασθενείς με διαυγές νεφρικό καρκίνωμα. Aging (Albany NY). 2020; 12:7585–602.PMID:32345771

13. Souza DG, Amaral FA, Fagundes CT, Coelho FM, Arantes RM, Sousa LP, Matzuk MM, Garlanda C, Mantovani A, Dias AA, Teixeira MM. Η μακρά πεντραξίνη PTX3 είναι κρίσιμη για τη φλεγμονή των ιστών μετά

εντερική ισχαιμία και επαναιμάτωση σε ποντίκια. Am J Pathol. 2009; 174:1309–18.PMID:19286566

14. Jaillon S, Peri G, Delneste Y, Frémaux I, Doni A, Moalli F, Garlanda C, Romani L, Gascan H, Bellocchio S, Bozza S, Cassatella MA, Jeannin P, Mantovani A. Ο υποδοχέας αναγνώρισης χυμικών προτύπων PTX3 αποθηκεύεται σε κόκκους ουδετερόφιλων και εντοπίζεται σε εξωκυτταρικές παγίδες. J Εχρ Med. 2007; 204:793–804.PMID:17389238

15. Tong M, Carrero JJ, Qureshi AR, Anderstam B, Heimbürger O, Bárány P, Axelsson J, Alvestrand A, Stenvinkel P, Lindholm B, Suliman ME. Πεντραξίνη 3 πλάσματος σε ασθενείς με χρόνιανεφρόασθένεια: συσχετίσεις με τη νεφρική λειτουργία, την πρωτεϊνική ενέργεια, τη σπατάλη, τις καρδιαγγειακές παθήσεις και τη θνησιμότητα. Clin J Am Soc Nephrol. 2007; 2:889–97.PMID:17702732

16. Witasp A, Rydén M, Carrero JJ, Qureshi AR, Nordfors L, Näslund E, Hammarqvist F, Arefin S, Kublickiene K, Stenvinkel P. Ανυψωμένα επίπεδα κυκλοφορίας και έκφραση ιστού της πεντραξίνης 3 στην ουραιμία: αντανάκλαση ενδοθηλιακών δυσλειτουργιών PLoS One. 2013; 8: e63493.PMID:23658833

17. Presta Μ, Camozzi Μ, Salvatori G, Rusnati Μ. Ρόλος του υποδοχέα αναγνώρισης διαλυτών προτύπων ΡΤΧ3 στην αγγειακή βιολογία. J Cell ΜοΙ Med. 2007; 11:723–38.PMID:17760835

18. Bottazzi B, Inforzato A, Messa M, Barbagallo M, Magrini E, Garlanda C, Mantovani A. Οι πενταξίνες PTX3 και SAP στην έμφυτη ανοσία, ρύθμιση της φλεγμονής και αναδιαμόρφωση ιστών. J Hepatol. 2016; 64:1416-27.

19. Xiao Y, Yang N, Zhang Q, Wang Y, Yang S, Liu Z. Η Pentraxin 3 αναστέλλει την οξεία διάμεση ίνωση που προκαλείται από νεφρική βλάβη μέσω της καταστολής της οδού IL-6/Stat3. Φλεγμονή. 2014; 37:1895–901.PMID:24854162

20. Inforzato A, Reading PC, Barbati E, Bottazzi B, Garlanda C, Mantovani A. Η «γλυκιά» πλευρά μιας μακράς πενταξίνης: πώς η γλυκοζυλίωση επηρεάζει τις λειτουργίες της PTX3 στην έμφυτη ανοσία και τη φλεγμονή. Front Immunol. 2013; 3:407. PMID:23316195