Για περισσότερες πληροφορίες επικοινωνήστε με:Joanna.jia@wecistanche.com

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΤΟ ΠΡΩΤΟ ΜΕΡΟΣ

Πώς η εχινακοσίδη διεγείρει τα οιστρογόνα και αυξάνει τον αριθμό των σπερματοζωαρίων;

Το Cistanche deserticola έχει πολλά αποτελέσματα, κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

Συζήτηση

Τα εθνοφαρμακολογικά αρχεία και η προηγούμενη μελέτη μας13 το επιβεβαίωσανCistanche σωληνοειδής εκχυλίσματα αύξησαν αποτελεσματικά τα επίπεδα ορμονών φύλου και βελτίωσαν την ποιότητα του σπέρματος. Το ECH ως μία από τις κύριες ενώσεις σεCistancheσωληνοειδής19,20, μπορεί να αυξήσει τον αριθμό των σπερματοζωαρίων και να αυξήσει την έκκριση LH και T (Εικ. 1). Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι η ECH κατανεμήθηκε στον υποθάλαμο αντί για τους όρχεις υποδηλώνοντας έμμεση επίδραση της ECH στους όρχεις. Πράγματι, η ECH ανέστειλε άμεσα την υποθαλαμική δραστηριότητα AR, τη μετατόπιση AR στον πυρήνα και την έκφραση γονιδίου που σχετίζεται με τον άξονα HPG και επίσης παρείχε προστασία έναντι της αναπαραγωγικής βλάβης που προκαλείται από το BPA.

Σε μελέτες παραγωγής ανθρώπινων γοναδοτροπινών, τα επίπεδα ορμονών του φύλου ρυθμίζονται αυστηρά από τον άξονα HPG και έναν βρόχο αρνητικής ανάδρασης21. Συγκεκριμένα, η έκκριση Τ αυξάνεται σημαντικά ως απόκριση σε σταθερές και συνεχείς αυξήσεις στα επίπεδα LH στο αίμα ως απόκριση στην έλλειψη αρνητικής ανδρογόνου ανατροφοδότησης στην υπόφυση και τον υποθάλαμο. Σε αυτή τη μελέτη, η ECH αύξησε την έκκριση LH στον εγκέφαλο συν την υπόφυση και την παραγωγή τεστοστερόνης στους όρχεις και τα επίπεδα mRNA LHR και Gnrhr στον εγκέφαλο συν υπόφυση (Εικ. 1 και Σχήμα 4), υποδηλώνοντας ότι η ECH μπορεί να επηρεάσει την αρνητική ανάδραση του άξονα HPG . Δεν αποτελεί έκπληξη το γεγονός ότι η ίδια η AR παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ανάδρασης των επιπέδων T και LH22,23. Το παράδειγμα του αρσενικού άξονα HPG επικεντρώνεται στην τεστοστερόνη παρέχοντας καταστολή αρνητικής ανάδρασης στο επίπεδο τόσο του υποθαλάμου όσο και της υπόφυσης24,25. Προηγούμενες μελέτες χρησιμοποίησαν το Foxg1-Cre για να αφαιρέσουν γονίδια ενδιαφέροντος στην υπόφυση αλλά όχι στον υποθάλαμο για να καθορίσουν τη σχετική σημασία των δύο περιοχών. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η σηματοδότηση AR στην υπόφυση του αρσενικού ποντικού είναι απαραίτητη όσον αφορά την εξαρτώμενη από την τεστοστερόνη ρύθμιση της έκκρισης LH26. Για το λόγο αυτό, επιλέξαμε να επικεντρωθούμε στην υποθαλαμική AR για περαιτέρω μελέτη.

Εχινακοσίδησεκιστανάκιμπορεί να προστατεύσει το συκώτι

Ως υποδοχέας στεροειδούς πυρηνικής ορμόνης, η δραστηριότητα του AR ρυθμίζεται από το στεροειδές πρόσδεμα Τ, η δέσμευση του οποίου ξεκινά την πυρηνική μετατόπιση και τη μεταγραφική ρυθμιστική λειτουργία του AR27. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι η θεραπεία με ECH ανέστειλε τη μετατόπιση AR από το κυτταρόπλασμα σε πυρήνες στον υποθάλαμο, (Εικ.3). Επιπλέον, η μελέτη PK έδειξε ότι η ECH μπορεί να διεισδύσει σημαντικά στον υποθάλαμο παρά στους όρχεις, υποδηλώνοντας ότι περισσότερη ECH διαπερνά τον Αιμοεγκεφαλικό Φραγμό, πιθανώς μέσω ενδοκυττάρωσης, παρά στον φραγμό των όρχεων αίματος. Επιπλέον, δείξαμε με έμμεση ELISA τη συνδυαστική ικανότητα του ECH και του AR υποδηλώνοντας ότι το ECH μπορεί να συνδεθεί άμεσα με το AR. Αυτό υποστηρίχθηκε περαιτέρω από τα αποτελέσματα της δοκιμασίας σύνδεσης μορίου που έδειξαν ότι υποτιθέμενες θέσεις δέσμευσης για ECH υπάρχουν στο Met-894 και στο Val-713 στον θύλακα AR (Εικ. 5D). Αυτό υποστηρίζει τα ευρήματα άλλων ότι η AR συμμετέχει στη ρύθμιση ενός βρόχου αρνητικής τροφοδοσίας και ότι η μείωση των αλληλεπιδράσεων AR-T στον εγκέφαλο οδηγεί σε αυξημένη έκκριση LH23,28,29.

Η στεροειδογένεση είναι μια αυστηρά ελεγχόμενη, ουσιαστική διαδικασία για την ανάπτυξη της σπερματογένεσης με τη συμμετοχή της στεροειδογόνου πρωτεΐνης (StAR)30 και στεροειδογόνων ενζύμων όπως CYP11A1, CYP17A1, 3 -υδροξυστεροειδούς αφυδρογονάσης (HSD3) και {{7} αφυδρογονάση (HSD17) που μετατρέπει τη χοληστερόλη σε τεστοστερόνη31. Δείξαμε ότι τα επίπεδα mRNA των γονιδίων που κωδικοποιούν αυτά τα ένζυμα αυξήθηκαν σημαντικά με τη θεραπεία με ECH ενώ η έκφραση του mRNA του StAR δεν άλλαξε. Αυτό υποδηλώνει ότι η ECH δεν είχε καμία επίδραση στη μεταφορά της χοληστερόλης στην εσωτερική μεμβράνη των μιτοχονδρίων, ενώ μπορεί να παίζει ρόλο στην προώθηση της μετατροπής της χοληστερόλης σε τεστοστερόνη. Στη συνέχεια μπορεί να εξαχθεί το συμπέρασμα ότι η θεραπεία με ECH αυξάνει σημαντικά τον αριθμό των σπερματοζωαρίων αυξάνοντας τη σύνθεση και την έκκριση τεστοστερόνης.

Για τη διερεύνηση της προστατευτικής επίδρασης της ECH στον τραυματισμό του σπέρματος, η δισφαινόλη Α (BPA), ένας τυπικός εξωγενής ενδοκρινικός διαταράκτης, χρησιμοποιήθηκε ως μοντέλο της αρσενικής αναπαραγωγικής βλάβης σε ποντίκια32. Η θεραπεία με ECH ανέκτησε αποτελεσματικά τον αριθμό των σπερματοζωαρίων, την κινητικότητα των σπερματοζωαρίων, τα επίπεδα Τ και LH μειώθηκαν από το BPA (Εικ. 6Α, Β), υποδηλώνοντας ότι η ECH μπορεί να μετριάσει τον τραυματισμό του σπέρματος.

Σε σύγκριση με τις τεχνητά συντιθέμενες χημικές ουσίες για θεραπεία ορμονικής υποκατάστασης, η ECH είναι μια φυσική μη ορμονική ένωση που επηρεάζει την αρνητική ανάδραση στον άξονα HPG αυξάνοντας έτσι την έκκριση LH, T και την ποιότητα του σπέρματος. Αυτή η μηχανιστική οδός μπορεί να προστατεύσει το ανδρικό αναπαραγωγικό σύστημα και έτσι η ECH μπορεί να θεωρηθεί ως ένας πιθανός φυσικός αναπαραγωγικός προστατευτικός παράγοντας. Ωστόσο, οι ορμονικοί κανονισμοί είναι πολύπλοκοι και συχνά οδηγούν σε συστηματικές επιδράσεις. Όπως υποδεικνύεται στην Εικ. 7, η ECH αύξησε τις εκκρίσεις T και LH και ανέστειλε την ενεργοποίηση AR, η οποία μπορεί επίσης να οδηγήσει σε συνέπειες σε άλλες οδούς υγείας ή ασθένειες, όπως η οστεοπόρωση33 και η κατάθλιψη στους άνδρες34, επομένως, οι ολοκληρωμένες επιδράσεις της ECH θα πρέπει να είναι περαιτέρω ερευνηθεί. Συνολικά, τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν ότι η ECH συνδέεται με το AR στον υποθάλαμο και αναστέλλει τη μεταφορά του AR από το κυτταρόπλασμα στον πυρήνα. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι το ECH συνδέεται με θέσεις στον θύλακα AR στα αμινοξέα Met-894 και Val{-713. Αυτό μπορεί να εξηγήσει την αύξηση των επιπέδων T και AR ως συστηματική απόκριση για την εξισορρόπηση των ορμονικών επιπέδων προάγοντας την έκκριση LH και μια επακόλουθη αύξηση στην παραγωγή Τ και τον αριθμό των σπερματοζωαρίων (Εικ. 8).

Εχινακοσίδησεκιστανάκιμπορεί να αντιοξειδωτικά

Μέθοδοι Δήλωση Δεοντολογίας.

Αυτή η μελέτη διεξήχθη σε αυστηρή συμμόρφωση με τις Οδηγίες για τα πειραματόζωα που καθορίστηκαν από το Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας (Πεκίνο, Κίνα). Όλα τα πειραματικά πρωτόκολλα εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ινστιτούτου Τεχνολογίας Anyang. Πειραματικά Ζώα. Τα ομογενή ποντίκια Kunming ηλικίας τεσσάρων εβδομάδων (22 g–25 g) ελήφθησαν από το κέντρο ζώων του τέταρτου στρατιωτικού ιατρικού πανεπιστημίου (Xi'an, Κίνα). Τα ζώα διατηρήθηκαν υπό ελεγχόμενες συνθήκες σε θερμοκρασία 22 βαθμών ± 2 βαθμών, 70 τοις εκατό ± 4 τοις εκατό υγρασίας με 12 ώρες κύκλου φωτός-σκότους και ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό. 6

Πειραματική θεραπεία.

Πείραμα 1. Τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε έξι ομάδες, επτά ποντίκια σε κάθε ομάδα (n=7). Η ECH (CAS: 82854-37-3; Chengdu Preferred Biotechnology Co., Ltd, Sichuan, China) χορηγήθηκε με χρήση ενδογαστρικού σωλήνα και η προπιονική τεστοστερόνη (TP, CAS: 57-85-2; KingYork, Tianjin, Κίνα) χορηγήθηκε χορηγείται με ενδομυϊκή ένεση μία φορά την ημέρα για 14 ημέρες σύμφωνα με τον ακόλουθο πειραματικό σχεδιασμό: Ομάδα ελέγχου: φυσιολογικό ορό (10mL/kg), ομάδα ECH(L) (5mg/kg), ομάδα ECH(M) ( 20 mg/kg), ομάδα ECH(H) (80 mg/kg), TP (15 mg/kg) και ενζαλουταμίδη (αναστολέας AR, μία φορά την ημέρα κάθε δεύτερη μέρα για 14 ημέρες· 20 mg/kg· CAS: 915087-33-1· Aladdin , Σανγκάη, Κίνα). Μετά από 2 εβδομάδες θεραπειών, τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με διαιθυλαιθέρα για τη συλλογή δειγμάτων αίματος για αναλύσεις των επιπέδων ορμονών. Τα ποντίκια στη συνέχεια ανατέμθηκαν για να διαχωριστούν ο υποθάλαμος, ο εγκέφαλος και η υπόφυση, ο όρχις και η επιδιδυμίδα της ουράς. Δείγματα ουράς επιδιδυμίδας τοποθετήθηκαν σε φυσιολογικό ορό με 5 τοις εκατό BSA για αξιολόγηση της ποιότητας του σπέρματος και ο υποθάλαμος, ο εγκέφαλος και η υπόφυση και οι όρχεις καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 βαθμούς για περαιτέρω έρευνες. Πείραμα 2. Τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε 10 ομάδες, πέντε ζώα ανά ομάδα. ECH (20 mg/kg) χορηγήθηκε από το στόμα και τα ποντίκια σε κάθε ομάδα αναισθητοποιήθηκαν με διαιθυλαιθέρα στα χρονικά σημεία 0,5 h, 1h, 1,5h, 2h, 2,5h, 3h, 4h, 6h, 9h, και 12h μετά τη χορήγηση για συλλογή δειγμάτων. Το πλάσμα συλλέχθηκε και η καρδιά εκτέθηκε. Η έγχυση φυσιολογικού ορού στις αριστερές κοιλίες διεξήχθη με μια συσκευή έγχυσης μέχρις ότου το ήπαρ και οι πνεύμονες λευκάνθηκαν. Δέκα υποθάλαμοι και όρχεις συλλέχθηκαν για να προσδιοριστούν οι συγκεντρώσεις του ECH στους ιστούς. Πείραμα 3. Τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε 4 ομάδες, επτά σε κάθε ομάδα. Η ECH και η BPA (CAS: 80-05-7· Aladdin, Σαγκάη, Κίνα) χορηγήθηκαν με χρήση ενδογαστρικού σωλήνα μία φορά την ημέρα για 6 εβδομάδες σύμφωνα με τον ακόλουθο πειραματικό σχεδιασμό: κανονική ομάδα (αραβοσιτέλαιο, 10 mL/kg, bw/ δ), ομάδα μοντέλου: ομάδα BPA (BPA 200 mg/kg, bw/d, αραβοσιτέλαιο) και πειραματική ομάδα: BPA συν ομάδα ECH (BPA 200 mg/kg, ECH 20 mg/kg). Μετά από 42 ημέρες θεραπείας, τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με διαιθυλαιθέρα και τα δείγματα αίματος συλλέχθηκαν για αναλύσεις ορμονικών επιπέδων. Οι όρχεις και η επιδιδυμίδα της ουράς διαχωρίστηκαν και συλλέχθηκαν. Η ουραία επιδιδυμίδα χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της ποιότητας του σπέρματος και ο όρχις καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς για περαιτέρω διερεύνηση.

Προσδιορισμός του σπέρμα ποιότητα. Σπέρμα εναιώρημα παρασκευή. Τα επιδιδυμίδια της ουράς τεμαχίστηκαν σε 5 mL φυσιολογικού ορού με 5 τοις εκατό BSA και επωάστηκαν για 5 λεπτά στους 37 βαθμούς για να επιτραπεί στο περιεχόμενό τους να εξαπλωθεί στο μέσο.

Αριθμός σπερματοζωαρίων: Σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον Yokoi (2003), το αραιωμένο εναιώρημα σπέρματος (1:10, ο/ο, εναιώρημα σπέρματος/10 τοις εκατό μεθανόλη) μεταφέρθηκε σε κάθε θάλαμο μέτρησης ενός αιμοκυτταρομέτρου και αφέθηκε να παραμείνει για 5 min και στη συνέχεια μετρήθηκε κάτω από ένα μικροσκόπιο φωτός (Nikon, Instruments Inc., Ιαπωνία) σε μεγέθυνση X200.

Βιωσιμότητα σπέρματος: Συνολικά 20 μL εναιωρήματος σπέρματος αναμίχθηκαν με ίσο όγκο χρώσης ηωσίνης-νιγκροσίνης για 2 λεπτά. Τα μη χρωματισμένα σπερματοζωάρια μετρήθηκαν σε μικροσκόπιο φωτός σε μεγέθυνση 200x.

Κινητικότητα σπέρματος: Συνολικά 10 μL εναιωρήματος σπέρματος τοποθετήθηκαν σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα και καταγράφηκαν είτε ως κινητές είτε ως ακίνητες κάτω από μικροσκόπιο φωτός σε μεγέθυνση 200x.

Προσδιορισμός του ορμόνη επίπεδα. Τα επίπεδα τεστοστερόνης (Τ) και LH ποσοτικοποιήθηκαν στον ορό, τον εγκέφαλο συν την υπόφυση και τα ομογενοποιήματα των όρχεων χρησιμοποιώντας κιτ ραδιοανοσοδοκιμασίας (RIA) (Beijing Sino-UK Institute of Biological Technology, Πεκίνο, Κίνα). Εν συντομία, αντίσωμα κατά της τεστοστερόνης ή αντι-LH IgG (100 μL) και 125-συζευγμένο αντίσωμα κατά ποντικού προστέθηκαν στα δείγματα ή στο πρότυπο (100 μL) και αναμίχθηκαν σε ένα ρολό κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 4 βαθμούς . Μετά από πλύση τρεις φορές με PBS-Tween 20 (500 μL), τα μείγματα φυγοκεντρήθηκαν (3500 rpm/min) στους 4 βαθμούς για 15 λεπτά. Οι τιμές CPM των ιζημάτων εκτιμήθηκαν με όργανο ραδιοανοσοδοκιμασίας (Beijing Sino-western Technology Co. Ltd, CN202M/KZ4GC-1200, Πεκίνο, Κίνα) και οι συγκεντρώσεις Τ και LH υπολογίστηκαν σύμφωνα με τον τύπο ενός προτύπου καμπύλη. Ο συντελεστής διακύμανσης T και LH είναι 2,8 τοις εκατό και 3,2 τοις εκατό στις ομάδες δειγμάτων και 2,1 τοις εκατό και 2,8 τοις εκατό στις τυπικές ομάδες, αντίστοιχα.

Προσδιορισμός του γονίδιο εκφράσεις με πραγματικός χρόνος ποσοτικός PCR. Ολικό RNA απομονώθηκε από κατεψυγμένους ιστούς όρχεων και εγκεφαλικού συν υπόφυσης χρησιμοποιώντας κιτ RNA Simple Total RNA (Tiangen, Πεκίνο, Κίνα). Πραγματοποιήθηκε ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (q RT-PCR) για την ενίσχυση του cDNA χρησιμοποιώντας 2 χ SYBR Green I PCR Master Mix (Vazyme, Nanjing, Κίνα). Η διαδικασία PCR αποτελούνταν από 95 μοίρες για 30 δευτερόλεπτα ακολουθούμενο από 35 κύκλους 95 μοιρών για 15 δευτερόλεπτα, 58 μοίρες για 30 δευτερόλεπτα και 72 μοίρες για 30 δευτερόλεπτα. Η ανάλυση της καμπύλης τήξης πραγματοποιήθηκε στα προϊόντα PCR για να επαληθευτεί η ειδικότητα του εκκινητή και η καθαρότητα του προϊόντος. Πραγματοποιήθηκε μια καμπύλη διάστασης για κάθε πλάκα για να επιβεβαιωθεί η παραγωγή ενός μόνο προϊόντος. Υπολογίστηκε η σχετική αφθονία κάθε mRNA. Οι εκκινητές PCR που χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη φαίνονται στον Πίνακα 2.

δυτικός κηλίδα. Για ανάλυση έκφρασης AR, η εκχύλιση και η απομόνωση κυτταροπλασματικής και πυρηνικής πρωτεΐνης διεξήχθη χρησιμοποιώντας κιτ εξαγωγής κυτταροπλασματικής και πυρηνικής πρωτεΐνης (Beyotime, Nanjing, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι συγκεντρώσεις κυτταροπλασματικών και πυρηνικών πρωτεϊνών εκτιμήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης Bradford (Beyotime, Jiangsu, Κίνα). Δείγματα πρωτεϊνών (80 ug) έτρεξαν σε πήκτωμα SDS-PAGE 12 τοις εκατό και 5 τοις εκατό και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF. Μετά τον αποκλεισμό, οι μεμβράνες επωάστηκαν με αντισώματα anti-AR IgG (1:1,000; Bioss; Beijing China) και πολυκλωνικά αντισώματα ποντικού κατά GAPDH (1:1,000· Wuhan Boster Βιολογικός

Τεχνολογία, Wuhan, Κίνα) ή πολυκλωνικά αντισώματα αντι-Lamin b1 ποντικού για 2 ώρες. Η μεμβράνη πλύθηκε τρεις φορές με TBST και επωάστηκε με ένα συζευγμένο με HRP αντίσωμα κουνελιού κατά IgG ποντικού (1:5,000· Bioss· Beijing China). Το σήμα οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα απεικόνισης ChemiDoc (Tanon-3,500, Σαγκάη, Κίνα).

Υψηλή απόδοσηΥγρό Χρωματογραφία (HPLC) χημική δοκιμή. Το αίμα συλλέχθηκε σε ηπαρινισμένους γυάλινους σωλήνες. Το πλάσμα διαχωρίστηκε με άμεση φυγοκέντρηση στις 6,000 rpm για 10 λεπτά και αποθηκεύτηκε στους -20 βαθμούς για περαιτέρω πείραμα. Τα δείγματα του υποθαλάμου και των όρχεων από κάθε χρονικό σημείο συγκεντρώθηκαν και ομογενοποιήθηκαν με μεθανόλη. Μετά από φυγοκέντρηση στις 10, 000 rpm στους 4 βαθμούς για 10 λεπτά, το υπερκείμενο συμπυκνώθηκε με Ν₂και το υπόλειμμα διαλύθηκε σε 50 μL μεθανόλης και διηθήθηκε μέσω φίλτρου 0,45 μm. Δέκα μL του φιλτραρισμένου υγρού του δείγματος εγχύθηκαν στο σύστημα HPLC για ανάλυση.

Η τυπική καμπύλη αποτελούνταν από δείγματα που περιείχαν 50, 100, 250, 500 και 750 ng/mL του ECH (Chengdu Pufei De Biotech Co., Ltd, Sichuan, Κίνα). Δείγματα ποιοτικού ελέγχου πλάσματος με 75ng/mL (χαμηλή), 150 ng/mL (μέτρια) και 300 ng/mL (υψηλή) ECH προετοιμάστηκαν αναλόγως για τη μέτρηση της ακρίβειας και της ακρίβειας της μεθόδου.

Η χρωματογραφία πραγματοποιήθηκε με σύστημα HPLC (D2{{1{{0}}00 σειρά Elite, Hitachi, Ιαπωνία) σε συνδυασμό με ανιχνευτή UV (L-2400, Hitachi, Ιαπωνία). Ο διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε σε στήλη Thermo-C18 (250 mm × 4,6 mm id, σωματίδια 4,6 μm) που διατηρήθηκε στους 25 βαθμούς. Η κινητή φάση ήταν μια βαθμίδωση που παρασκευάστηκε από 0,1 τοις εκατό φωσφορικό οξύ που περιείχε 0,04 τοις εκατό τριμεθυλαμίνη (συστατικό Α) και μεθανόλη (συστατικό Β). Η γραμμική κλίση ήταν η εξής: 70–90 τοις εκατό A σε 0-2 λεπτά, 60–70 τοις εκατό A σε 2–6 λεπτά, 55–60 τοις εκατό Β σε 6–8 λεπτά και στη συνέχεια επέστρεψε στο 90 τοις εκατό A σε 8 λεπτά αμέσως. Ο ρυθμός ροής ήταν 0,8 mL/min. Ο ανιχνευτής UV λειτούργησε στα 332 nm. Η περιοχή κορυφής αξιολογήθηκε ως η αναλυτική μέτρηση.

Φαρμακοκινητική σπουδές σε ποντίκια. Η διείσδυση της ECH στον υποθάλαμο και τον όρχι υποβλήθηκε σε φαρμακοκινητική ανάλυση με λογισμικό Drug and Statistics (Drug and Statistics, Mathematical Pharmacology Professional Committee of China). Οι φαρμακοκινητικές παράμετροι προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μη-διαμερισματική μέθοδο που βασίζεται στη στατιστική θεωρία ροπών. Οι προκαταρκτικές φαρμακοκινητικές παράμετροι, συμπεριλαμβανομένου του χρόνου έως την αιχμή σταθερά (T_{Μέγιστη}), μέγιστη συγκέντρωση (C_{Μέγιστη}), σταθερά ρυθμού αποβολής (Kε), χρόνος ημιζωής αποβολής (T_0.5), την περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC_0–12), φαινομενικός όγκος διανομής (Vγ) και η κάθαρση (CL) ελήφθη για περαιτέρω ανάλυση. Οι αναλογίες εγκεφάλου/πλάσματος υπολογίστηκαν με βάση την AUC_0-tτιμές για το πλάσμα και τον εγκέφαλο.

ECH-Οβαλβουμίνη (ECH-OVA) σύνθεση και ταυτοποίηση. Συνολικά 9,8 mg ECH και 1,0 mg ανυδρίτη βουτανοδιόλης διαλύθηκαν σε 2 mL πυριδίνης, αναμίχθηκαν για 12 ώρες με ανάδευση σε θερμοκρασία δωματίου. Το μίγμα συμπυκνώθηκε με Ν₂και το υπόλειμμα συνδυάστηκε με 10,8 mgN-υδροξυηλεκτριμίδιο (NHS) και 19,3 mg δικυκλοεξυλ καρβοδιιμιδίου (DCC) και διαλυμένα σε 4 mLN, N-διμεθυλοφορμαμίδιο (DMF) για 12 ώρες με ανάδευση σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από φυγοκέντρηση στα 2,{3}} g για 5 λεπτά στους 4 βαθμούς, το υπερκείμενο προστέθηκε σε 5 mL PBS στο οποίο διαλύθηκαν 14,4 mg ωοαλβουμίνης (OVA). Το νέο μίγμα αναδεύτηκε για 24 ώρες στους 4 βαθμούς. Το διάλυμα της αντίδρασης στη συνέχεια υποβλήθηκε σε διαπίδυση έναντι PBS για τρεις ημέρες. Η παρουσία ECH-OVA επιβεβαιώθηκε από τα φάσματα UV (Shimadzu Scientifc Instruments, Inc. Columbia, MD USA) σε μήκος κύματος που κυμαίνεται από 190 έως 400 nm καθώς και με μετουσίωση της PAGE.

Εμμεσος ELISA (iELISA). Μια πλάκα μικροτιτλοδότησης επικαλύφθηκε με ECH-OVA (2 ug/100 μL) και επωάστηκε όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς. Η πλάκα πλύθηκε τρεις φορές με PBST και δύο φορές με PBS, και προστέθηκε 5 τοις εκατό PBSM (PBS που περιέχει 5 τοις εκατό αποβουτυρωμένο γάλα) για να αποκλείσει τις μη δεσμευμένες θέσεις στους 37 βαθμούς για 2 ώρες. Αφού οι πλάκες πλύθηκαν με PBST και PBS, τα φρεάτια χωρίστηκαν σε 4 ομάδες. πειραματική ομάδα, 1 ug ολικής πρωτεΐνης AR/100 μL. θετική ομάδα, αντίσωμα αντι-OVA κουνελιού (1:1,000); αρνητική ομάδα, 1 μg αλβουμίνης ορού βοοειδών. και μια κενή ομάδα που περιέχει PBS. Μετά από επώαση για 1,5 ώρα, οι πλάκες πλύθηκαν και 100 μL/φρεάτιο IgG συζευγμένου με HRP κουνελιού (1:1,000) προστέθηκαν στη θετική ομάδα, προστέθηκαν 100 μL/φρεάτιο αντι-AR (1:1,000) στις άλλες ομάδες. Μετά από επώαση για 1,5 ώρα, αραίωση IgG συζευγμένης με HRP κουνελιού (1:5,000) προστέθηκε στις πλάκες. Μετά από επώαση στους 37 βαθμούς για 1 ώρα, οι πλάκες πλύθηκαν τρεις φορές με PBST και δύο φορές με PBS. Στη συνέχεια προστέθηκε ΤΜΒ και επωάστηκε για 10 λεπτά στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου και 2 ΜΗ₂ΕΤΣΙ₄προστέθηκε για να σταματήσει η αντίδραση. Η απορρόφηση μετρήθηκε σε μήκος κύματος 450 nm.

Μοριακός ελλιμενισμός. Πραγματοποιήθηκε μια μελέτη μοριακής σύνδεσης για τη διερεύνηση του τρόπου δέσμευσης της ένωσης ECH στον ανθρώπινο υποδοχέα ανδρογόνου (AR) χρησιμοποιώντας το Autodock vina 1.1.2. Η τρισδιάστατη (3D) δομή του AR (PDB ID: 2YHD) λήφθηκε από την Protein Data Bank. Η τρισδιάστατη δομή του ECH λήφθηκε από το λογισμικό ChemBioDraw Ultra 14.0 και ChemBio 3D Ultra 14.0. Το πακέτο AutoDockTools 1.5.6 χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία των αρχείων εισόδου σύνδεσης. Το πλέγμα αναζήτησης του AR αναγνωρίστηκε ως κέντρο x: 36.141, κέντρο y: 8.513 και κέντρο z:

21.304 με διαστάσεις μέγεθος x: 15, μέγεθος y: 15 και μέγεθος z: 15. Η τιμή εξαντλητικότητας ορίστηκε στο 20. Για τη σύνδεση Vina, χρησιμοποιήθηκαν οι προεπιλεγμένες παράμετροι, εάν δεν αναφερόταν. Η πόζα με το καλύτερο σκορ όπως κρίθηκε από το σκορ σύνδεσης Vina επιλέχθηκε και αναλύθηκε οπτικά χρησιμοποιώντας το λογισμικό PyMOL 1.7.6

Δεδομένα ανάλυση και στατιστικός μεθόδους. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας στατιστικό λογισμικό SPSS 19. 0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ANOVA για σύγκριση μεταξύ των ομάδων. Προσδιορίστηκαν οι δοκιμές σύγκρισης του Tukey για σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± τυπική απόκλιση (SD) χρησιμοποιώντας το λογισμικό Graph Pad Prism v.7 (GraphPad Software, Inc, Καλιφόρνια, ΗΠΑ).

Ηθική έγκριση και συγκατάθεση προς την συμμετέχω. Η ηθική έγκριση για αυτήν τη μελέτη λήφθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ινστιτούτου Τεχνολογίας Anyang.

Εχινακοσίδησεκιστανάκιμπορεί να θεραπεύσειΝεφρική Νόσος

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Cano, SN, Misra, M. & Ackerman, KE Άσκηση, προπόνηση και ο άξονας υποθαλάμου-υπόφυσης-γοναδικής μοίρας σε άνδρες και γυναίκες.

Εμπρός. Horm. Res.47, 27–43 (2016).

2. Papadopoulos, V. & Miller, WL Role of mitochondria in steroidogenesis.Καλύτερος Πρακτική. Res. Cl. En. 26, 771–790 (2012).

3. Rone, MBet al. Προσδιορισμός ενός δυναμικού συμπλόκου μιτοχονδριακών πρωτεϊνών που οδηγεί την εισαγωγή, τη διακίνηση και το μεταβολισμό της χοληστερόλης σε μια στεροειδή ορμόνη.ΜοΙ. Endocrinol. 26, 1868–1882 (2012).

4. Shibari, S., Ylonen, H. & Palme, R. Απέκκριση και μέτρηση μεταβολιτών κορτικοστερόνης και τεστοστερόνης σε τραπεζοειδείς όγκους (Myodes glareolus).Γεν. Comp. Endocrinol. 243, 39–50 (2017).

5. Ο'Χάρα, Λ.et al. Η σηματοδότηση των υποδοχέων ανδρογόνων της υπόφυσης ρυθμίζει την προλακτίνη αλλά όχι τις γοναδοτροπίνες στο αρσενικό ποντίκι.PloS ένας. 10, e0121657 (2015).

6. Amador, AG, Parkening, TA, Beamer, WG, Bartke, A. & Collins, TJ Testicular LH υποδοχείς και κυκλοφορούντα επίπεδα ορμονών σε τρία μοντέλα ποντικών για κληρονομικές ασθένειες (Tfm/y, lit/lit και hyt/hyt).Endocrinol. Exp. 20, 349–58 (1986).

7. Bulldan, A., Dietze, R., Shihan, M. & Scheiner-Bobis, G. Η μη κλασική σηματοδότηση τεστοστερόνης που διαμεσολαβείται μέσω του ZIP9 διεγείρει την έκφραση της κλαδίνης και τον σχηματισμό σφιχτού συνδέσμου στα κύτταρα Sertoli.Κύτταρο. Σήμα. 28, 1075–85 (2016).

8. Walker, WH σηματοδότηση τεστοστερόνης και ρύθμιση της σπερματογένεσης.Σπερματογένεση. 1, 116–20 (2011).

9. Cao, C. & Kindscher, K. The Medicinal Chemistry of Echinacea Species (επιμ. Kindscher, K.) 127–145 (Springer, 2016).

10. Jiang, ZH, Jian, W., Li, XP & Zhang, XY Echinacoside and Cistanchetubulosa (Schenk) R. Ο Wight βελτιώνει τη βλάβη των όρχεων και του σπέρματος που προκαλείται από τη δισφαινόλη Α σε αρουραίους μέσω στεροειδογόνων ενζύμων που ρυθμίζονται από τον άξονα των γονάδων.J. Ethnopharmacol. 193, 321–328 (2016).

11. Chiou, SY, Sung, JM, Huang, PW & Lin, SD Αντιοξειδωτικές, αντιδιαβητικές και αντιυπερτασικές ιδιότητες του εκχυλίσματος λουλουδιών Echinacea purpurea και παραγώγων οξέος καφεΐνης χρησιμοποιώνταςσε vitro μοντέλα.J. Med. Φαγητό. 20, 171–179 (2017).

12. Ross, SM Echinacea purpura: Ένα ιδιόκτητο εκχύλισμα πορφύρας εχινάκειας αποδεικνύεται ασφαλές και αποτελεσματικό στην πρόληψη του κοινού κρυολογήματος.Ολιστής. Νοσηλευτές. Πρακτική. 30, 54–57 (2016).

13. Wang, T.et al. Cistanche tubulosaΤο εκχύλισμα αιθανόλης διαμεσολαβεί τα επίπεδα ορμονών του φύλου επίμυ μέσω επαγωγής στεροειδογόνων ενζύμων στους όρχεις.

Pharma. Biol.54, 1–7 (2015).

14. Hotaling, JMet al. Δημογραφικές και κοινωνικοοικονομικές διαφορές μεταξύ ανδρών που αναζητούν αξιολόγηση υπογονιμότητας και όσων αναζητούν χειρουργική στείρωση: από την Εθνική Έρευνα για την Οικογενειακή Ανάπτυξη.BJU. Int. 116, 288–292 (2015).

15. Jodar, Μ., Solerventura, A. & Oliva, R. Semen proteomics and menfertility.J. Proteomics. org/

16. Rahman, MSet al. Η δισφαινόλη-Α επηρεάζει την ανδρική γονιμότητα μέσω πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη γονιμότητα στα σπερματοζωάρια.Sci. Μαλλομέταξο ύφασμα. 5, 9169 (2015).

17. Xi, W.et al. Επίδραση της περιγεννητικής και μεταγεννητικής έκθεσης δισφαινόλης Α στα ρυθμιστικά κυκλώματα στον άξονα υποθάλαμος-υπόφυση-γοναδική οδό ποντικών CD-1.Αναπαραγωγή. Toxicol. 31, 409–17 (2011).

18. Wisniewski, P.et al. Η έκθεση των ενηλίκων στη δισφαινόλη Α (BPA) σε αρουραίους Wistar μειώνει την ποιότητα του σπέρματος με διαταραχή του άξονα υποθαλάμου-υπόφυσης-όρχεως.Τοξικολογία. 329, 1–9 (2015).

19. Wang, T., Zhang, X. & Xie, W.Cistanche deserticolaYC Ma, "Desert ginseng": μια κριτική.Είμαι. J. Πηγούνι. Med. 40, 1123–1141 (2012).

20. Li, Y., Zhou, G., Peng, Y., Tu, P. & Li, X. Διαλογή και ταυτοποίηση τριών τυπικών μεταβολιτών φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από το Cistanches Herba από ανθρώπινα εντερικά βακτήρια χρησιμοποιώντας UPLC/Q-TOF-MS .J. Pharmaceut Biome. 118, 167–176 (2016).

21. Matsumoto, AM Andropause κλινικές επιπτώσεις της μείωσης των επιπέδων τεστοστερόνης στον ορό με τη γήρανση στους άνδρες.J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 57, M76–M99 (2002).

22. Aluja, A.et al. Αλληλεπιδράσεις μεταξύ της παρορμητικότητας, της τεστοστερόνης, της σφαιρίνης που δεσμεύει τη σεξουαλική ορμόνη και του γονιδίου υποδοχέα ανδρογόνων μήκους επανάληψης CAG.Physiol. Συμπεριφορά. 147, 91–96 (2015).

23. Walters, KA, Simanainen, U. & Handelsman, DJ Μοριακές γνώσεις για τις δράσεις των ανδρογόνων στην αναπαραγωγική λειτουργία ανδρών και γυναικών από μοντέλα νοκ-άουτ υποδοχέων ανδρογόνων.Βουητό. Αναπαραγωγή. Εκσυγχρονίζω. 16, 543–558 (2010).

24. Sar, Μ., Lubahn, DB, French, FS & Wilson, ΕΜ Ανοσοϊστοχημικός εντοπισμός του υποδοχέα ανδρογόνου σε ιστούς αρουραίου και ανθρώπου.Ενδοκρινολογία. 127, 3180–3186 (1990).

25. Liang, YQet al. Οι επιδράσεις της προγεστερόνης στα προφίλ μεταγραφικής έκφρασης των γονιδίων που σχετίζονται με άξονες υποθαλάμου-υπόφυσης-γοναδικού και υποθαλάμου-υπόφυσης-επινεφριδίων κατά την πρώιμη ανάπτυξη του ψαριού ζέβρα (Daniorerio).Χημειόσφαιρα. 128, 199–206 (2015).

26. O'Hara, L. & Smith, LB Οι ρόλοι των υποδοχέων ανδρογόνων στη σπερματογένεση και τη στειρότητα.Καλύτερος. Πρακτική. Res. Cl. En. 29, 595–605 (2015).

27. Lindzey, J., Kumar, MV, Grossman, Μ., Young, C. & Tindall, DI Molecular mechanisms of androgen action.Βιταμίνη. Horm. 49, 383–432 (1994).

28. Η λειτουργία υποδοχέα ανδρογόνων Holdcraft, RW & Braun, RE απαιτείται στα κύτταρα Sertoli για την τερματική διαφοροποίηση απλοειδών σπερματοειδών.Ανάπτυξη. 131, 459–467 (2004).

29. Holdcraft, RW & Braun, RE Ορμονική ρύθμιση της σπερματογένεσης.Int. J. Androl. 27, 335–342 (2004).

30. Luu-The, V. Assessment of steroidogenesis and steroidogenic enzyme functions.J. Στεροειδές. Biochem. ΜοΙ. Biol. 137, 176–182 (2013).

31. Ye, L., Su, ZL & Ge, RS Αναστολείς βιοσυνθετικών και μεταβολικών ενζύμων ενεργοποίησης τεστοστερόνης.Μόρια 16, 9983–10001 (2011).

32. Khan, D. & Ahmed, SA Επιγενετική ρύθμιση των μη λεμφικών κυττάρων από τη Δισφαινόλη Α, ένα μοντέλο ενδοκρινικού διαταράκτη: πιθανές επιπτώσεις για την ανοσορύθμιση.Εμπρός. Endocrinol. 6, 91 (2015).

33. Mohamad, NV, Soelaiman, IN & Chin, KY Μια συνοπτική ανασκόπηση της τεστοστερόνης και της υγείας των οστών.Clin. Interv Γηράσκων. 11, 1317 (2016).

34. Akerman, J. Kovac, JR & Lipshultz, LI Η θεραπεία με τεστοστερόνη βελτιώνει την ευεξία και την ψυχολογική υγεία.Curr. Γνώμη. Urology. (2017).

Ευχαριστίες

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το Πρόγραμμα για Επιστήμη και Τεχνολογία Καινοτομίας Ταλέντο στα Πανεπιστήμια της Επαρχίας Χενάν (18HASTIT035), HASTIE, Construction Program of Modern Biological Technology Research Institute of Anyang Institute of Technology, και The Key Constructions Program (2015SD0018) της International Cooperation Base in S&T, επαρχία Shaanxi, Κίνα.

Συνεισφορές Συγγραφέων

Οι Zhi-hui Jiang και Bo Zhou σχεδίασαν έρευνα, πραγματοποίησαν έρευνα, ανέλυσαν δεδομένα και έγραψαν την εργασία. Οι Xin-ping Li και Gordon M. Kirby σχεδίασαν έρευνα και ανέλυσαν δεδομένα. Ο Xiao-Ying Zhang σχεδίασε την έρευνα.

Επιπλέον πληροφορίες

Ανταγωνιστικά ενδιαφέροντα:Οι συγγραφείς δεν δηλώνουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εκδότες Σημείωση: Το Springer Nature παραμένει ουδέτερο όσον αφορά τις διεκδικήσεις δικαιοδοσίας σε δημοσιευμένους χάρτες και θεσμικές σχέσεις.