ΜΕΡΟΣ Ⅰ: Η χορήγηση του συνβιοτικού στελέχους Lactobacillus Bulgaricus 6c3, της ινουλίνης και του φρουκτοολιγοσακχαρίτη μειώνει τις συγκεντρώσεις του θειικού ινδοκυλίου και τη νεφρική βλάβη
Mar 23, 2022
ali.ma@wecistanche.com
AlonsoJerez-Morales, JoseS.Merino, Sindy T.Diaz-Castillo & et al.
1. Εισαγωγή
Χρόνια νεφρική νόσος(ΧΝΝ) θεωρείται μόνιμη αλλοίωση τουνεφρότη δομή, τη λειτουργία του ή, στις πιο σοβαρές περιπτώσεις, και τα δύο. Η ΧΝΝ επηρεάζει άμεσα την υγεία και την ποιότητα ζωής του ατόμου [1,2]. Σε φυσιολογικό επίπεδο, η ΧΝΝ που προκαλείται από αλλαγές που παρατηρούνται συχνά είναι αυξημένα επίπεδα κρεατινίνης στον ορό, κυστατίνη κορουρεϊκού αζώτου [2]. Η εντατική επιτήρηση και η ευαισθητοποίηση του πληθυσμού έχουν αυξήσει τις διαγνώσεις ΧΝΝ φτάνοντας, για παράδειγμα, να διαπιστωθεί ότι ένα 15 τοις εκατό του πληθυσμού των ΗΠΑ επηρεάζεται από αυτή την παθολογία [3]. Η εξέλιξη της νόσου, καθώς και οι επιδράσεις των παραπάνω μεταβολιτών, έχουν σοβαρό αντίκτυπο σε πολλαπλά συστήματα του σώματος, συμπεριλαμβανομένου του καρδιαγγειακού και του γαστρεντερικού συστήματος, καθώς η παρουσία αυτών των μεταβολιτών σχετίζεται με αυξημένη θνησιμότητα στο πρώτο και επηρεάζει την αφομοίωση, την κινητικότητα και τη διαπερατότητα των τελευταίων [4,5]. Οι γαστρεντερικές αλλοιώσεις προκαλούν αυξημένη απορρόφηση μεταβολιτών στο έντερο συμβάλλοντας στη διατήρηση μιας συστηματικής φλεγμονής η οποία, με τη σειρά της, επηρεάζει τη σύνθεση της φυσιολογικής μικροχλωρίδας και τις μεταβολικές λειτουργίες του και μπορεί να προκαλέσει εντερική δυσβίωση [6].
Παρενέργειες Click to cistanche και προϊόν Cistanche για νεφρούς
Η συσχέτιση μεταξύ ΧΝΝ και εντερικής δυσβίωσης μπορεί να μην εξηγηθεί μόνο από αλλαγές στη δίαιτα αλλά επίσης, επιπλέον, από την αύξηση του pH του αυλού, δευτεροπαθώς σε αυξημένη συγκέντρωση αμμωνίου [7]. Οι ασθενείς με ΧΝΝ τελικού σταδίου έχουν σημαντικές διαφορές στην αφθονία αρκετών βακτηριακών κατηγοριών στα κόπρανα τους σε σύγκριση με υγιή άτομα [8]. Ειδικότερα, σε επίπεδο βακτηριακού γένους, οι ασθενείς με ΧΝΝ παρουσιάζουν αύξηση των Enterorhabdus, Blautia, Ruminococcus, Parasutterella, Bacteroides, Clostridium (sensu stricto), Escherichia, Shigella και Allobaculum και μείωση των Akkermansia, Bifidobacterium, Clostridium Llostridium, Clostridium, , Leuconostoc, Alkaliphilus και Pseudomonas [9-11]. Είτε λόγω της κακής νεφρικής αποβολής είτε λόγω της εντερικής δυσβίωσης, υπάρχει μείωση των βακτηριακών γενών ικανών να μεταβολίζουν και να αναστέλλουν παθογόνα που παράγουν τοξικούς μεταβολίτες, με αποτέλεσμα την αύξησή τους [12]. Οι Wong et al. [8] απέδειξε ότι οι ασθενείς που έπασχαν από προχωρημένη ΧΝΝ παρουσίασαν αύξηση των βακτηριακών ομάδων που κατείχαν ένζυμα όπως η ουρεάση, η ουρικάση και εκείνων που παράγουν π-κρεσόλη και ινδόλη.
Η συσσώρευση ουραιμικών μεταβολιτών κατακράτησης (URMs) στο αίμα, συμπεριλαμβανομένωνθειικό ινδοξύλιο(IS), ο θειικός π-κρεζυλεστέρας (pCS), η τριαιθυλαμίνη και το Ν-οξείδιο της τριμεθυλαμίνης (TMAO)[5] θεωρούνται επιταχυντές της ΧΝΝ [13]. ΕΙΝΑΙ(Θειικό ινδοξύλιο), η πιο γνωστή ουραιμική ινδόλη, εκκρίνεται από τα εγγύς σπειροειδή σωληνάρια τουνεφρόκαι προέρχεται από το μεταβολισμό της τρυπτοφάνης από τη βακτηριακή τρυπτοφανάση. Τα στοιχεία από μοντέλα ζώων δείχνουν ότι το IS(Θειικό ινδοξύλιο)μπορεί να επηρεάσει τη νεφρική λειτουργία και μπορεί να βλάψει τα κύτταρα των σωληναρίων δημιουργώντας οξειδωτικό στρες στα ενδοθηλιακά κύτταρα, αναστέλλοντας τους μηχανισμούς επιδιόρθωσης και ευνοώντας τη διάμεση σωληναριακή ίνωση επειδή αυξάνει τη γονιδιακή έκφραση του TGF-1, του αναστολέα ιστών των μεταλλοπρωτεϊνασών (TIMP -1) και του κολλαγόνου [14]. Ωστόσο, η ανισορροπία της εντερικής μικροχλωρίδας και η ταυτόχρονη παραγωγή τοξικών μεταβολιτών μπορούν να τροποποιηθούν. Έχει περιγραφεί ότι η λήψη συμπληρωμάτων με ορισμένα προβιοτικά και πρεβιοτικά μπορεί να μειώσει την παραγωγή ορισμένων ουραιμικών τοξινών και να αποκαταστήσει τη φυσιολογική μικροχλωρίδα [5]. Για παράδειγμα, μελέτες μετα-ανάλυσης κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι οι ασθενείς με ΧΝΝ που λαμβάνουν συμπληρώματα με προβιοτικά στελέχη αύξησαν τις αντιφλεγμονώδεις κυτοτοκίνες τους και μείωσαν τα επίπεδα ουραιμικών τοξινών [15,16]. Μερικές μελέτες ανέφεραν ότι η χορήγηση συνβιοτικών, ενός συνδυασμού προβιοτικών και πρεβιοτικών, είναι ικανή να μειώσει την εξέλιξη της ΧΝΝ με ευνοϊκά αποτελέσματα [12]. Στο πλαίσιο της παρούσας εργασίας, οι φρουκτάνες τύπου ινουλίνης είναι σχετικά πρεβιοτικά επειδή έχουν δείξει την ικανότητά τους να μειώνουν την εξέλιξη της ΧΝΝ [17] και να μειώνουν τα URM, όπως το pCS και το IS(Θειικό ινδοξύλιο)[18]. Panza et al. (2017) χορήγησε τα προβιοτικά L.acidophlilus και Bifidobacterium longum συν φρουκτοολιγοσακχαρίτες (FOS) σε ασθενείς με ΧΝΝ σταδίου 2-5 και ανέφερε ότι οι ασθενείς που δεν έλαβαν θεραπεία είχαν σημαντικά περισσότερο pCS και είναι(Θειικό ινδοξύλιο)στο αίμα από τους ασθενείς που έλαβαν τη συνβιοτική θεραπεία [19]. Σε αυτή την εργασία, πρώτα αξιολογήσαμε την ικανότητα των προβιοτικών στελεχών να μειώνουν το IS(Θειικό ινδοξύλιο)in vitro για να επιλέξετε το πιο πολλά υποσχόμενο. Στη συνέχεια, αυτό το στέλεχος συνδυάστηκε με τα πρεβιοτικά ινουλίνη και φρουκτοολιγοσακχαρίτες (FOS) για να ληφθεί ένα υποτιθέμενο συνβιοτικό. Αυτά τα πρεβιοτικά επιλέχθηκαν επειδή έδειξαν ότι μπορούν να μειώσουν το pCS και το IS(Θειικό ινδοξύλιο)συγκέντρωση στο αίμα [17,18]. Τέλος, η αποτελεσματικότητα του υποτιθέμενου συνβιοτικού δοκιμάστηκε in vivo, αξιολογώντας το IS αίματος(Θειικό ινδοξύλιο)και τα επίπεδα κρεατινίνης καινεφρόκαι καρδιακή βλάβη με χρήση μοντέλου αρουραίου (αρουραίοι Sprague-Dawley), συμπεριλαμβανομένωννεφρόζώα με ανεπαρκή (νεφρεκτομή) και χωρίς θεραπεία.
2. Αποτελέσματα
2.1.Απομόνωση στελεχών ικανών να μειώσουν το IS(Θειικό ινδοξύλιο)In vitro
Από 36 δείγματα γαλακτοκομικών προϊόντων, 84 στελέχη απομονώθηκαν σε άγαρ MRS συμπληρωμένο με μπλε βρωμοφαινόλης (MRS-BFB), που χρησιμοποιήθηκε ως διαφορικό μέσο. Αυτό το μέσο επιτρέπει τη διαφοροποίηση των βακτηρίων γαλακτικού οξέος. Σε pH 3 οι αποικίες θα χρωματίζονται κίτρινο και σε pH κοντά στο 5 θα χρωματίζονται μπλε [19]. Και τα 84 στελέχη που απομονώθηκαν δοκιμάστηκαν in vitro για να προσδιοριστεί η ικανότητά τους να μεσολαβούν στη μείωση του IS(Θειικό ινδοξύλιο). Για αυτό, τα στελέχη καλλιεργήθηκαν σε ζωμό MRS συμπληρωμένο με 2,8 mM IS(Θειικό ινδοξύλιο)για 48 ώρες και μετά IS(Θειικό ινδοξύλιο)μετρήθηκε με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC). Τα στελέχη lc2, 6c3 και VIc2 μπόρεσαν να μειώσουν σημαντικά (p<0.05) the="" concentration="" of="" the="" compound="" (table="" 1).="" furthermore,="" the="" three="" strains="" were="" cultured="" together="" for="" 48="" h="" in="" the="" presence="" of="">(Θειικό ινδοξύλιο)να αξιολογήσουν εάν ενήργησαν συνεργικά για τη μείωση του IS(Θειικό ινδοξύλιο). Όταν και τα τρία στελέχη καλλιεργήθηκαν μαζί παρουσία IS(Θειικό ινδοξύλιο), η συγκέντρωση του IS(Θειικό ινδοξύλιο)μειώθηκε επίσης σημαντικά αλλά λιγότερο από αυτό που επιτεύχθηκε μόνο από τα στελέχη, αποκλείοντας την πιθανότητα συνεργικής δράσης (Πίνακας 1).
Τραπέζι 1.Μείωση in vitro, εάνθειικό ινδοξύλιο(IS), αξιολογείται με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC), με τη μεσολάβηση βακτηριακών στελεχών.
2.2. Ταυτοποίηση των επιλεγμένων στελεχών
Τα τρία στελέχη επιλέχθηκαν λόγω της ικανότητάς τους να μειώνουν το IS(Θειικό ινδοξύλιο)Ταυτοποιήθηκαν με αλληλουχία 16S rRNA μετά από ενίσχυση PCR του DNA. Το στέλεχος 1c2 ήταν ένας Gram-θετικός κόκκος που σχηματίζει αλυσίδα ο οποίος, στη μοριακή ανάλυση, ενισχύθηκε με τους εκκινητές LacZ για Streptococcus thermophilus. Τα στελέχη 6c3 και VIc2 ήταν και οι δύο θετικοί κατά Gram βάκιλλοι και ενισχύθηκαν με εκκινητές LbG για να ταυτοποιηθεί το γένος Lactobacillus. Η ανάλυση της αλληλουχίας 16SrRNA επέτρεψε να ταυτοποιηθεί το στέλεχος lc2 ως Streptococcus thermophilus (97,3 τοις εκατό ομοιότητα· Αριθμός πρόσβασης: AY188354.1), το στέλεχος 6c3 ως Lactobacillus bulgaricus (99,7 τοις εκατό ομοιότητα· Αριθμός πρόσβασης: CR253354.1) Ομοιότητα 99,5 τοις εκατό· Αριθμός πρόσβασης: AY773947.1). Μόνο ένα από τα τρία στελέχη επιλέχθηκε για την παρασκευή του συνβιοτικού και για τη διεξαγωγή των ακόλουθων αναλύσεων. Το στέλεχος Streptococcus thermophilus 1c2 απορρίφθηκε επειδή έδειξε χαμηλό ρυθμό ανάπτυξης. Από τα υπόλοιπα δύο στελέχη, επιλέχθηκε το στέλεχος Lactobacillus bul-garicus 6c3 επειδή έδειξε καλύτερη προβιοτική λειτουργικότητα και χαρακτηριστικά ασφάλειας από το στέλεχος Lactobacillus acidophilus VIIc2.
2.3. Επίδραση του Synbiotic στην κρεατινίνη αίματος και το IS(Θειικό ινδοξύλιο)Επίπεδα
Το προβιοτικό L. bulgaricus 6c3 λυοφιλοποιήθηκε σε συνδυασμό με τα πρεβιοτικά Ινουλίνη και FOS, που είναι η συγκέντρωση του προβιοτικού CFU/g 10 βαθμών λυοφιλοποιημένου προϊόντος. Δέκα γραμμάρια συνβιοτικού χορηγήθηκαν καθημερινά, στο πόσιμο νερό, στην ομάδα των αρουραίων Sprague-Dawley (Lac) που υποβλήθηκαν σε νεφρεκτομή. Η ομάδα που υποβλήθηκε σε νεφρεκτομή χωρίς θεραπεία (Nef) και η ομάδα ελέγχου χωρίς νεφρεκτομή δεν έλαβαν το συν-βιοτικό. Κρεατινίνη ορού και IS(Θειικό ινδοξύλιο)Τα επίπεδα των αρουραίων μετρήθηκαν με HPLC στην αρχή (μία εβδομάδα μετά τη νεφρεκτομή) και στο τέλος της δοκιμασίας. Επιπλέον, καταγράφηκαν οι αιματοκρίτες των ζώων όλων των ομάδων. Η διακύμανση των επιπέδων κρεατινίνης ορού στο τέλος της ανάλυσης ήταν σημαντικά διαφορετική (σελ<0.05) in="" the="" nef="" and="" lac="" groups,increasing="" 127%and="" 121%,="" respectively,="" when="" compared="" to="" their="" initial="" values(figure="" 1).="" the="" control="" group="" showed="" a="" non-significant="" creatinine="" increase="" of="" only="" 2%.="" the="" increase="" of="" creatinine="" serum="" levels="" in="" the="" nef="" and="" lac="" groups="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" but="" not="" significantly="" different="" between="" the="" nef="" and="" lac="" groups.="" nevertheless,="" all="" three="" groups="" maintained="" their="" creatinine="" levels="" within="" de="" normal="" limits="" for="" these="" rats.="" on="" the="" other="" hand,="" serum="">(Θειικό ινδοξύλιο)Τα επίπεδα αυξήθηκαν σημαντικά μόνο στην ομάδα Nef που αντιστοιχεί στα ζώα με νεφρεκτομή (νεφρική ανεπάρκεια) στα οποία δεν χορηγήθηκε το συνβιοτικό (38,8 τοις εκατό ) (p<0.05).>(Θειικό ινδοξύλιο)Τα επίπεδα έδειξαν μη σημαντική 0.5 τοις εκατό αύξηση στην ομάδα ελέγχου και μη σημαντική 0.8 τοις εκατό μείωση στην ομάδα Lac (Εικόνα 2). Όταν συγκρίθηκαν οι ομάδες των ζώων που είχαν υποστεί νεφρεκτομή, η ομάδα που δεν κατανάλωνε το συνβιοτικό (Nef) έδειξε σημαντικά υψηλότερο επίπεδο IS(Θειικό ινδοξύλιο)σε σύγκριση με την ομάδα που κατανάλωνε το συνβιοτικό (Lac). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ της ομάδας Lac και της ομάδας ελέγχου. Η ανάλυση των δεδομένων για την αναζήτηση πιθανής συσχέτισης μεταξύ κρεατινίνης και IS(Θειικό ινδοξύλιο)Τα επίπεδα έδειξαν ότι αυτή η συσχέτιση δεν υπήρχε (Συμπληρωματικό Υλικό: Εικόνες S1-S3). Τέλος, τα αποτελέσματα του αιματοκρίτη δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των τριών ομάδων (Εικόνα 3).
Φιγούρα 1. (α) Επίπεδα κρεατινίνης ορού αρουραίων Sprague-Dawley στην αρχή και στο τέλος της χορήγησης 16 εβδομάδων του συνβιοτικού. (β) Διαφορές των μέσων για τις τελικές συγκεντρώσεις κρεατινίνης με 95 τοις εκατό ταυτόχρονα διαστήματα εμπιστοσύνης Tukey (Εάν ένα διάστημα δεν περιέχει μηδέν, οι αντίστοιχες μέσες τιμές διαφέρουν σημαντικά). Nef: αρουραίοι που έχουν υποβληθεί σε νεφρεκτομή που δεν λαμβάνουν το συνβιοτικό, Lac: αρουραίοι με νεφρεκτομή που λαμβάνουν το συνβιοτικό, Έλεγχος: επίμυες που έχουν υποβληθεί σε εικονική νεφρεκτομή.
Σχήμα 2.(α) Ορόςθειικό ινδοξύλιο(IS) επίπεδα αρουραίων Sprague-Dawley στην αρχή και στο τέλος των 16 εβδομάδων χορήγησης του συνβιοτικού. (β) Διαφορές των μέσων για το τελικό IS(Θειικό ινδοξύλιο)συγκεντρώσεις με 95 τοις εκατό ταυτόχρονα διαστήματα εμπιστοσύνης Tukey (Εάν ένα διάστημα δεν περιέχει μηδέν, οι αντίστοιχες μέσες τιμές διαφέρουν σημαντικά). Nef: αρουραίοι με νεφρεκτομή που δεν λαμβάνουν το συνβιοτικό, Lac: αρουραίοι με νεφρεκτομή που λαμβάνουν το συνβιοτικό, Έλεγχος: επίμυες που έχουν υποστεί εικονική νεφρεκτομή.
2.4. Η ιστολογική ανάλυση έδειξε ότι η χορήγηση του συβιοτικού μείωσε την εξέλιξη της ΧΝΝ
Στο τέλος του πειράματος, οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε ευθανασία για να ληφθούν δείγματα από τα αριστεράνεφράκαι καρδιές προς επεξεργασία για ιστολογική ανάλυση. Η ινωτική περιοχή προσδιορίστηκε από τη χρώση τριχρωμίου Masson (MT) χρησιμοποιώντας το πληροφοριακό εργαλείο Image-Pro Plus 3.0 (Media Cybernetics, Rockville, MD, ΗΠΑ) για τον υπολογισμό του ποσοστού της κατεστραμμένης (δηλ. ινωτικής) περιοχής (Πίνακας 2) και με μικροσκόπιο διέγερσης δύο φωτονίων, μια μέθοδος που ανιχνεύει το κολλαγόνο με την εκπομπή δύο φωτονίων, προκαλώντας το κολλαγόνο να δημιουργήσει μια δεύτερη αρμονική, η οποία μπορεί να οπτικοποιηθεί με ομοεστιακή μικροσκοπία να παίρνει μια συγκεκριμένη εικόνα κοντά στον οργανισμό και κατανομή του κολλαγόνου στο εσωτερικό του ιστού. Κατά τη σύγκριση των ινωτικών περιοχών των νεφρών, που αξιολογήθηκαν με τη χρώση MT, ήταν δυνατό να παρατηρηθεί ότι οι ινωτικές περιοχές ήταν 25 τοις εκατό μεγαλύτερες στην ομάδα Nef αλλά μόνο 12 τοις εκατό μεγαλύτερες στην ομάδα Lac, που χορηγήθηκε το snbiotic σε σύγκριση με το ψευδο ζώα ελέγχου με νεφρεκτομή. Οι βλάβες που παρατηρήθηκαν με αυτή τη διαδικασία χρώσης εντοπίστηκαν στο βρεγματικό στρώμα της κάψουλας του Bowman και στη βασική μεμβράνη των εγγύς και άπω περιελιγμένων σωληναρίων των ζώων των ομάδων Nef και Lac. Στην περίπτωση της ομάδας Nef, συμπεριλαμβανομένων των ζώων στα οποία δεν χορηγήθηκε το συνβιοτικό, παρατηρήθηκε απώλεια κυτταροπλάσματος των κυττάρων των σπειροειδών σωληναρίων με ταυτόχρονη ανάπτυξη ινωτικού ιστού. Όταν οι ιστοί των νεφρών αναλύθηκαν με μικροσκόπιο διέγερσης δύο φωτονίων, το κολλαγόνο παρατηρήθηκε σε όλα τα δείγματα με διαμόρφωση τύπου πλέγματος. Οι ομάδες Nef και Lac εμφάνισαν περισσότερες βλάβες από την ομάδα ελέγχου, στην οποία βρέθηκε μόνο μία ινωτική περιοχή (Εικόνα 4). Δεν βρέθηκαν βλάβες στα νεφρικά σωματίδια σε κανένα δείγμα όταν παρατηρήθηκαν σε μικροσκόπιο διέγερσης δύο φωτονίων.
Πίνακας 2.Ποσοστό χρώσης ινώδους περιοχής στο τρίχρωμο του Massonνεφρόιστολογικές τομές. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέσος όρος συν τυπικό σφάλμα.
 |  |
| Εικόνα 3.Τιμές αιματοκρίτη αρουραίων Sprague-Dawley στο τέλος της 16ης εβδομάδας χορήγησης του συνβιοτικού. Nef: αρουραίοι με νεφρεκτομή που δεν λαμβάνουν το συνβιοτικό, Lac: αρουραίοι με νεφρεκτομή που λαμβάνουν το συνβιοτικό, Έλεγχος: επίμυες που έχουν υποστεί εικονική νεφρεκτομή. | Εικόνα 4.Ιστολογικές τομές νεφρών αρουραίων Sprague-Dawley.(AC): Τριχρωμική χρώση νεφρώνων Masson. Οι ινωτικές περιοχές παρατηρούνται με μπλε χρώμα (βέλη).(DF): ο ίδιος ιστός που παρατηρείται με μικροσκοπία διέγερσης δύο φωτονίων. Ο ινώδης ιστός παρατηρείται με πράσινο χρώμα. Nef: αρουραίοι με νεφρεκτομή που δεν λαμβάνουν το συνβιοτικό, Lac: αρουραίοι με νεφρεκτομή που λαμβάνουν το συνβιοτικό, Έλεγχος: επίμυες που έχουν υποστεί εικονική νεφρεκτομή. Γραμμή κλίμακας∶ 100 μm για μικρογραφίες (AC) και 50 μm για μικρογραφίες (DF). |
2.5. Η χορήγηση του Synbiotic δεν εξασθένησε την καρδιακή ίνωση
Στην καρδιά, η χρώση ΜΤ έδειξε την παρουσία ινωτικών περιοχών στον ιστό αρουραίων που είχαν υποστεί νεφρεκτομή, ενώ αυτές οι περιοχές απουσίαζαν στα ζώα ελέγχου. Η πρόκληση ΧΝΝ σε αρουραίους προκαλεί καρδιακή ίνωση η οποία δεν προλήφθηκε με τη χορήγηση της συνβιοτικής θεραπείας σε αρουραίους που έχουν υποβληθεί σε νεφρεκτομή (Εικόνα 5).
Εικόνα 5.Τρίχρωμη (MT) χρώση Masson της καρδιάς των αρουραίων Sprague-Dawley. Οι ινωτικές περιοχές χρωματίζονται με μπλε (βέλη). Nef: αρουραίοι με νεφρεκτομή που δεν λαμβάνουν το συνβιοτικό, Lac: αρουραίοι με νεφρεκτομή που λαμβάνουν το συνβιοτικό. Έλεγχος: επίμυες που έχουν υποβληθεί σε εικονική νεφρεκτομή. Μπάρα ζυγαριάς 100 um.
