Μέρος Ⅰ Η επικουρική αξία των Herba Cistanches όταν χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με στατίνη σε μοντέλα ποντικών

Elaine Wat, Chun Fai Ng, Chi Man Koon, Cheng Zhang, Si Gao, Brian Tomlinson & Clara Bik San Lau

1 Ινστιτούτο Κινεζικής Ιατρικής, Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Σατίν, Νέα Εδάφη, Χονγκ Κονγκ.

2 State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China, The Chinese University of Hong Kong, Shatin, New Territories, Hong Kong.

3 Division of Clinical Pharmacology, Department of Medicine and Therapeutics, The Chinese University of Hong Kong, Shatin, New Territories, Hong Kong. Η Elaine Wat και ο Chun Fai Ng συνέβαλαν εξίσου σε αυτό το έργο. Η αλληλογραφία και τα αιτήματα για υλικό θα πρέπει να απευθύνονται στην CBSL (email: claralau@cuhk.edu.hk)

Για περισσότερες πληροφορίες: emily.li@wecistanche.com

Κάντε κλικ εδώ για να λάβετε περισσότερες πληροφορίες σχετικά με το Cistanche

Αφηρημένη

Οι στατίνες είναι ευρέως γνωστό ότι έχουν προβλήματα μυϊκής τοξικότητας.HerbaΚιστανάκιαΤο (HC) είναι ένα κινέζικο βότανο που χρησιμοποιείται παραδοσιακά για πόνους στην οσφύ και στα γόνατα. Η προηγούμενη in vitro μελέτη μας έδειξε ότι θα μπορούσε να προστατεύσει από τη μυϊκή τοξικότητα που προκαλείται από τις στατίνες. Ωστόσο, είναι in vivo προστατευτική δράση δεν έχει ποτέ διερευνηθεί. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστεί εάν το υδατικό εκχύλισμα απόHerbaCistanche(HCE) θα μπορούσε να αποτρέψει την επαγόμενη από τη σιμβαστατίνη μυϊκή τοξικότητα σε αρουραίους και εάν το Herba Cistanche E θα μπορούσε επίσης να ασκήσει ευεργετικά αποτελέσματα στη μείωση της υπερχοληστερολαιμίας που προκαλείται από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά και της αυξημένης ηπατικής χοληστερόλης, μειώνοντας έτσι τη δόση της σιμβαστατίνης όταν χρησιμοποιείται σε συνδυασμένη θεραπεία. Από τα αποτελέσματά μας, το Herba Cistanche E αποκατέστησε σημαντικά τη μείωση του μυϊκού βάρους που προκλήθηκε από τη σιμβαστατίνη και μείωσε την αυξημένη κινάση της κρεατίνης του πλάσματος σε αρουραίους.HerbaCistancheΤο Ε βελτίωσε επίσης τη μείωση που προκαλείται από τη σιμβαστατίνη στα επίπεδα γλουταθειόνης των μυών, το δυναμικό της μιτοχονδριακής μεμβράνης των μυών και μείωσε τη φλεγμονή των μυών που προκαλείται από τη σιμβαστατίνη. Επιπλέον, το HCE θα μπορούσε να μειώσει το βάρος του ήπατος, τα συνολικά επίπεδα ηπατικών λιπιδίων και τα επίπεδα λιπιδίων στο πλάσμα σε ποντίκια που τρέφονται με υψηλή περιεκτικότητα σε λιπαρά. Συμπερασματικά, η μελέτη μας παρείχε in vivo στοιχεία ότιHerba CistancheΤο Ε έχει πιθανές προστατευτικές επιδράσεις στην επαγόμενη από τη σιμβαστατίνη τοξικότητα στους μύες, καθώς και ευεργετικές επιδράσεις στο μη αλκοολούχο λιπώδες ήπαρ και την υπερλιπιδαιμία που προκαλείται από τη διατροφή όταν χρησιμοποιείται μόνο του ή σε συνδυασμό με σιμβαστατίνη σε μειωμένη δόση.

Οι αναστολείς της αναγωγάσης HMG-CoA, γνωστοί και ως στατίνες, είναι καλά τεκμηριωμένο ότι είναι ωφέλιμοι σε υπερχοληστερολαιμικούς ασθενείς με μέτριο και υψηλό κίνδυνο καρδιαγγειακής νόσου1. Οι στατίνες, μια από τις πιο δημοφιλείς κατηγορίες συνταγογραφούμενων φαρμάκων στον κόσμο, δρουν μέσω της αναστολής της αναγωγής του HMG-CoA σε μεβαλονικό οξύ κατά το πρώιμο στάδιο της οδού μεβαλονικού για τη μείωση της ενδογενούς σύνθεσης χοληστερόλης2, 3. Αν και οι στατίνες είναι συνήθως καλά ανεκτές , μια από τις πιο σημαντικές και γνωστές κλινικές ανεπιθύμητες ενέργειες είναι οι ανωμαλίες των σκελετικών μυών, οι οποίες μπορεί να κυμαίνονται από καλοήθη μυαλγία έως σοβαρή μυοπάθεια4, 5. Σε μια μεγάλη έρευνα σε 10.409 Γάλλους που διεξήχθη μέσω τηλεφωνικής συνέντευξης, το 10 τοις εκατό των ασθενών που έλαβαν Η θεραπεία με στατίνες ανέφερε μυϊκά συμπτώματα, από τα οποία το 30 τοις εκατό αυτών των συμπτωματικών ασθενών οδήγησε σε διακοπή της θεραπείας6. Η Task Force για την ασφάλεια των στατινών της Εθνικής Ένωσης Λιπιδίων έχει παράσχει συστάσεις για τη διαχείριση των συμπτωμάτων που σχετίζονται με τους μυς σε ασθενείς που υποβάλλονται σε θεραπεία με στατίνες. Γενικά, συνιστάται ότι σε ασθενείς με σοβαρά συμπτώματα όπως αυξημένη κινάση κρεατίνης (CK) μεγαλύτερη από 5×ULN, οι στατίνες θα πρέπει να διατηρούνται μέχρι να ομαλοποιηθεί ξανά το επίπεδο της CK5. Λόγω της εμφάνισης αυτών των παρενεργειών, και του ότι δεν υπάρχει αποτελεσματική θεραπεία για μυϊκή τοξικότητα που προκαλείται από στατίνες, υπάρχει επομένως μια παρόρμηση να αναζητηθούν νέες θεραπείες για τη διαχείριση μυϊκών προβλημάτων που προκαλούνται από στατίνες.

Ενώ προτείνεται ένας συνδυασμός μηχανισμών και θα μπορούσε να είναι υπεύθυνος για τις ανεπιθύμητες ενέργειες της στατίνης, οι μιτοχονδριακοί μηχανισμοί πιστεύεται ότι εμπλέκονται στις ανεπιθύμητες ενέργειες της μυϊκής τοξικότητας της στατίνης1. Το μεβαλονικό δεν είναι μόνο πρόδρομος της χοληστερόλης αλλά είναι επίσης πρόδρομος για σημαντικές ενώσεις, όπως οι σεληνοπρωτεΐνες, η δολιχόλη και η ουβικινόνη7, 8. Η στατίνη μπορεί να μειώσει τη σεληνοπρωτεΐνη όπως η υπεροξειδάση της γλουταθειόνης (GPx), διακυβεύοντας την αντιοξειδωτική πυκνότητα και συμβάλλοντας στην εφέ 4. Οι στατίνες θα μπορούσαν επίσης να οδηγήσουν σε εξάντληση της ουβικινόνης, προκαλώντας μειωμένη κατανάλωση οξυγόνου και σύνθεση ATP9. Επιπλέον, αυξανόμενες in vitro και in vivo μελέτες έδειξαν ότι η στατίνη θα μπορούσε επίσης να δράσει άμεσα στα μιτοχόνδρια των ιστών προκαλώντας αυξημένα είδη αντιδρώντος οξυγόνου (ROS) και μιτοχονδριακό οξειδωτικό στρες, οδηγώντας σε κυτταρικό θάνατο και επομένως συμβάλλοντας σε ηπατική και μυϊκή βλάβη10, 11.

HerbaΚιστανάκια, ολόκληρο το αποξηραμένο φυτό τουCistanchedeserticolaΤο YC Ma (οικογένεια Orobanchaceae), είναι παρασιτικά φυτά που αναπτύσσονται κυρίως στις ερημικές περιοχές της βόρειας και βορειοανατολικής Κίνας12. Σύμφωνα με την κινεζική ιατρική θεωρία, το Herba Cistanches έχει τη γεύση του γλυκού, του ζεστού και του αλμυρού13. Είναι ένα κινέζικο τονωτικό βότανο που τονώνει το Yang που χρησιμοποιείται κυρίως για τη θεραπεία της νεφρικής ανεπάρκειας με συμπτώματα όπως ανικανότητα, στειρότητα, πρόωρη εκσπερμάτιση. Είναι επίσης ένα κινέζικο βότανο που παραδοσιακά συνταγογραφείται σε ασθενείς για πόνους στην οσφύ και στα γόνατα και χρησιμοποιείται συνήθως σε κινεζικά σκευάσματα για τη θεραπεία μυϊκών προβλημάτων12, 14. Είναι ενδιαφέρον ότι αυτό είναι επίσης συνεπές με τις σύγχρονες επιστημονικές μελέτες που απέδειξαν το αντι -Δραστηριότητες κόπωσης ενός πλούσιου σε πολυσακχαρίτες και πλούσιου σε φαινυλαιθανοειδή εκχυλίσματος Herba Cistanches σε αρουραίους μετά την άσκηση, μειώνοντας τη μυϊκή βλάβη και βελτιώνοντας την αποθήκευση ATP15. Επιπλέον, πρόσφατη εργασία έδειξε ότι ένα μεθανολικό εκχύλισμα Herba Cistanches θα μπορούσε να ενισχύσει την παραγωγή μιτοχονδριακού ATP16.HerbaΚιστανάκιααποδείχθηκε επίσης ότι είναι ισχυρό αντιοξειδωτικό και καθαριστής ελεύθερων ριζών σε διάφορα όργανα, μειώνοντας το οξειδωτικό στρες και τις δραστηριότητες ROS in vivo μελέτες17, 18. Σε μια πρόσφατη μελέτη που διεξήχθη από το εργαστήριό μας, είχαμε αποδείξει ότιHerbaΚιστανάκιαΤο υδατικό εκχύλισμα απέτρεψε σημαντικά την επαγόμενη από τη σιμβαστατίνη τοξικότητα στα σκελετικά μυϊκά κύτταρα L6, καθώς και μια δοσοεξαρτώμενη αποκατεστημένη μείωση της επαγόμενης από τη σιμβαστατίνη μείωση της παραγωγής ATP στα κύτταρα L6, υποδηλώνοντας τη δυνατότηταHerbaΚιστανάκιαυδατικό εκχύλισμα για την προστασία από τη μυϊκή τοξικότητα που προκαλείται από στατίνες19. Ωστόσο, τα στοιχεία in vivo λείπουν.

Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότιHerbaΚιστανάκιαΤο υδατικό εκχύλισμα (HCE) θα μπορούσε να ασκήσει ευεργετικά αποτελέσματα στη μυϊκή τοξικότητα που προκαλείται από τη σιμβαστατίνη. Έτσι, αυτή η μελέτη είχε στόχο να καθορίσει εάν η χρήση του HCE θα μπορούσε να μειώσει τη μυϊκή τοξικότητα που προκαλείται από τη σιμβαστατίνη χρησιμοποιώντας ένα ζωικό μοντέλο in vivo και επιπλέον, εάν το HCE θα μπορούσε επίσης να ασκήσει ευεργετικά αποτελέσματα στη μείωση της υπερχοληστερολαιμίας που προκαλείται από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά και της αυξημένης ηπατικής χοληστερόλης , μειώνοντας έτσι τη δόση της χρησιμοποιούμενης σιμβαστατίνης.

Υλικά και μέθοδοι

Έλεγχος ταυτότητας και εξαγωγή φυτικών υλικών.

Ακατέργαστη φυτική ύλη απόHerbaΚιστανάκια(Cistanche deserticola, που προέρχεται από την Εσωτερική Μογγολία) αγοράστηκε από τον Zi Xin, έναν διάσημο προμηθευτή στο Guangzhou της Κίνας. Το Herba Cistanches πιστοποιήθηκε χημικά με χρήση χρωματογραφίας λεπτής στιβάδας και υγρής χρωματογραφίας υπερ-απόδοσης σύμφωνα με την Κινεζική Φαρμακοποιία 201013 όπως περιγράφηκε προηγουμένως19, μεβερμπασκοσίδηκαιεχινακοσίδη(αγοράστηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Ελέγχου Φαρμακευτικών και Βιολογικών Προϊόντων, Κίνα) ως χημικοί δείκτες. Μετά από χημικό έλεγχο ταυτότητας, δείγμα κουπονιού βοτανικούHerbaΚιστανάκιακατατέθηκε στο Μουσείο του Ινστιτούτου Κινεζικής Ιατρικής στο Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, με αριθμό δείγματος κουπονιού 2014-3434.

HerbaΚιστανάκιαυδατικό εκχύλισμα παρασκευάστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως19. Εν συντομία, 1 kg ακατέργαστου βοτάνου εμποτίστηκε για 1 ώρα, ακολουθούμενη από εκχύλιση δύο φορές με θέρμανση για 1 ώρα υπό αναρροή στους 100 βαθμούς χρησιμοποιώντας 10x απεσταγμένο νερό. Τα υδατικά εκχυλίσματα (HCE) στη συνέχεια συνδυάστηκαν και διηθήθηκαν, και το διήθημα συμπυκνώθηκε υπό ελαττωμένη πίεση στους 60 βαθμούς. Το συμπυκνωμένο εκχύλισμα λυοφιλοποιήθηκε μέχρι ξηρού. Το ποσοστό απόδοσης ήταν 50,1 τοις εκατό β/β. Όλη η εκχυλισμένη σκόνη συσκευάστηκε υπό κενό και αποθηκεύτηκε μέχρι τη χρήση.

πειραματόζωα.

Η σιμβαστατίνη αγοράστηκε από την SR Pharmasolutions Ltd. Αρσενικοί αρουραίοι Sprague Dawley (180–200 g) και αρσενικοί ποντικοί C57Bl/6J (ηλικίας 8-εβδομάδων) παρασχέθηκαν από το Κέντρο Εργαστηριακών Υπηρεσιών Ζώων, του Κινεζικού Πανεπιστημίου του Χονγκ Κονγκ. Τα πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας Πειραμάτων σε Ζώα του Κινεζικού Πανεπιστημίου του Χονγκ Κονγκ (Αρ. αναφοράς 12/074/MIS). Όλες οι πειραματικές μέθοδοι διεξήχθησαν σύμφωνα με τις εγκεκριμένες οδηγίες που καθορίζονται από την Επιτροπή Δεοντολογίας Πειραμάτων σε Ζώα του Κινεζικού Πανεπιστημίου του Χονγκ Κονγκ. Όλοι οι αρουραίοι (3 ζώα ανά κλουβί) και τα ποντίκια (5 ζώα ανά κλουβί) στεγάστηκαν σε κανονικά τυπικά κλουβιά σε σταθερή θερμοκρασία 21 βαθμών με 12-ωρο κύκλο φωτός-σκότους. Κάθε τυπικό κλουβί περιείχε ασπέν ως υλικό κλινοστρωμνής. Σε όλα τα ζώα επετράπη ad libitum πρόσβαση σε δίαιτα και νερό.

Μελέτη μυϊκής τοξικότητας που προκαλείται από στατίνες σε αρουραίους.

Όλοι οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε 5 ομάδες (n=5–10). Όλα τα ζώα ακολουθούσαν μια κανονική δίαιτα. Τους χορηγήθηκε επίσης απεσταγμένο νερό ή σιμβαστατίνη καθημερινά και με ή χωρίς θεραπεία HCE ενδογαστρικά. Για τα ζώα στα οποία απαιτείται η χορήγηση και σιμβαστατίνης και HCE, το HCE χορηγήθηκε 3 ώρες μετά τη χορήγηση σιμβαστατίνης για να αποφευχθεί οποιαδήποτε άμεση χημική αλληλεπίδραση βοτάνου-φαρμάκου. Το φυτικό εκχύλισμα ή σιμβαστατίνη διαλύθηκε σε 0,5 τοις εκατό μεθυλοκυτταρίνη σε απεσταγμένο νερό σε γνωστή συγκέντρωση. Ένας προ-υπολογισμένος όγκος δόθηκε ενδογαστρικά σε κάθε ζώο σύμφωνα με το βάρος του ατόμου, έτσι ώστε ο υπολογισμένος όγκος να περιέχει την ποσότητα της προτεινόμενης δόσης που απαιτείται. Αναλυτικά οι ομάδες αυτές έχουν ως εξής:

Ομάδα α) Δίαιτα κανονικής τροφής συν απεσταγμένο νερό (κανονική ομάδα ελέγχου)

Ομάδα β) Δίαιτα κανονικής διατροφής συν σιμβαστατίνη (640 mg/kg)

Ομάδα γ) Δίαιτα κανονικής τροφής συν σιμβαστατίνη (640 mg/kg) συν χαμηλή δόση HCE (1,1 g/kg ζώου)

Ομάδα δ) Δίαιτα κανονικής τροφής συν σιμβαστατίνη (640 mg/kg) συν υψηλή δόση HCE (2,2 g/kg ζώου)

Ομάδα ε) Δίαιτα κανονικής τροφής συν υψηλή δόση HCE (2,2 g/kg ζώου)

Η πρόσληψη τροφής καταγράφηκε καθημερινά και το σωματικό βάρος μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα. Η θεραπεία δόθηκε για 4 εβδομάδες. Μετά από αυτό, τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μίγμα κεταμίνης (100 mg/kg) και ξυλαζίνης (10 mg/kg) ενδοπεριτοναϊκά. Το αίμα αφαιρέθηκε με καρδιακή παρακέντηση και αφέθηκε να πήξει. Στη συνέχεια, το πλάσμα διαχωρίστηκε με φυγοκέντρηση (3,000 rpm για 10 λεπτά). Διάφοροι μύες (τετρακέφαλος, γαστροκνήμιος, πέλμα, πρόσθιος κνημιαίος και εκτεινόμενος δακτύλιος) αφαιρέθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -80 βαθμούς μέχρι την ανάλυση.

Μέτρηση κινάσης κρεατίνης πλάσματος. Η δραστηριότητα της κρεατινικής κινάσης (CK) του πλάσματος προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ Stanbio CK Liqui-UV® (2910-430, Stanbio Laboratory, ΗΠΑ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Μέτρηση μυϊκής υπεροξειδάσης γλουταθειόνης. Η μυϊκή υπεροξειδάση της γλουταθειόνης (GPx) μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το εμπορικά διαθέσιμο κιτ (703102, Cayman Chemical, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, οι μυϊκοί ιστοί ξεπλύθηκαν με PBS σε pH 7,4 για να αφαιρεθούν τυχόν ερυθρά αιμοσφαίρια και ομογενοποιήθηκαν σε 5-10 ml ψυχρού ρυθμιστικού λύσης, μετά από το οποίο το ομογενοποιημένο προϊόν φυγοκεντρήθηκε στα 10,000 g για 15 λεπτά στους 4 βαθμούς. Το υπερκείμενο στη συνέχεια απομακρύνθηκε και προσδιορίστηκε για δραστικότητα GPx χρησιμοποιώντας το εμπορικό κιτ.

Παρασκευή μιτοχονδριακών και κυτοσολικών κλασμάτων μυών. Μιτοχονδριακά και κυτοσολικά κλάσματα από δείγματα μυών παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας κιτ απομόνωσης Mitochondria (MITOISO, Sigma-Aldrich Corporation, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, τα φρέσκα δείγματα μυών υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με βούτυρο εκχύλισης, κόπηκαν σε μικρά κομμάτια και ομογενοποιήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα εκχύλισης. Τα ομογενοποιήματα ιστού στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν. Το υπερκείμενο συλλέχθηκε και κρατήθηκε για ανάλυση κυτοσολικού κλάσματος. Τα μιτοχονδριακά σφαιρίδια στη συνέχεια πλύθηκαν και φυγοκεντρήθηκαν ξανά και χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση μιτοχονδριακού κλάσματος.

Μέτρηση μυϊκού μιτοχονδριακού αντιδραστικού είδους οξυγόνου (ROS). Το ROS μετρήθηκε με το πρωτόκολλο τροποποιημένο από την προηγούμενη βιβλιογραφία20. Εν συντομία, το ROS μετρήθηκε από το μιτοχονδριακό κλάσμα (50 μg πρωτεΐνης/ml) ​​χρησιμοποιώντας διάλυμα DCFDA (C6827, Invitrogen, USA). Το μίγμα επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά στο σκοτάδι, μετά από το οποίο επωάστηκε με διάλυμα υποστρώματος (10 mM πυροσταφυλικό, 15 mM μηλικό) για φωτο-ενεργοποίηση. Η ένταση του φθορισμού μετρήθηκε κάθε 5 λεπτά για 60 λεπτά από το BioRad Fluostar Optima 413-101 BMG Fluorescent Microplate Reader σε διέγερση 485 nm και εκπομπή 520 nm. Οι εντάσεις φθορισμού υπολογίστηκαν για τη μέτρηση της παραγωγής ROS.

Μυϊκό δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης. Το δυναμικό της μιτοχονδριακής μεμβράνης του μιτοχονδριακού κλάσματος από δείγματα μυών προσδιορίστηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (MITOISO, Sigma-Aldrich Corporation, USA). Αυτή η διαδικασία είναι μια δοκιμασία σταθερού σημείου που μετρά την πρόσληψη του JC-1 με το σχηματισμό των συσσωματωμάτων J. Εν συντομία, το μιτοχονδριακό εναιώρημα αραιώθηκε για να περιέχει 20 μg πρωτεΐνης και επωάστηκε με τη χρώση JC-1 για 7 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτό το 7-λεπτό είναι ένας χρόνος βελτιστοποιημένος και επικυρωμένος από τον κατασκευαστή χρησιμοποιώντας διάφορες ενώσεις (όπως αναφέρεται στο πρωτόκολλο του κατασκευαστή), καθώς ο παρατηρούμενος φθορισμός του διαλύματος θα ανέλθει σε ένα επίπεδο μετά από 5–10 λεπτά, ακολουθούμενο από δραστική μείωση του ο φθορισμός JC-1 λόγω εξισορρόπησης των συγκεντρώσεων JC-1 εντός και εκτός της μιτοχονδριακής μήτρας. Η ένταση φθορισμού μετρήθηκε με BioRad Fluostar Optima 413-101 BMG Fluorescent Microplate Reader σε διέγερση 490 nm και εκπομπή 590 nm. Οι εντάσεις φθορισμού υπολογίστηκαν για τη μέτρηση των πιθανών κλίσεων.

Αξιολόγηση μυϊκής ιστολογίας και φλεγμονής. Η ανοσοϊστοχημεία των φλεγμονωδών κυττάρων εντός των μυών αξιολογήθηκε με χρώση CD68 και CD163 όπως περιγράφηκε προηγουμένως21-23. Κόπηκαν τμήματα παραφίνης των 5 μm, κολλήθηκαν σε γυάλινες πλάκες Superfrost™ Plus (Menzel-Gläser, Γερμανία). Τα κύρια αντισώματα CD68, ED1 και CD163 ποντικού κατά αρουραίου, ED2, (Bio-Rad, USA) εφαρμόστηκαν στις τομές σε αραίωση 1:100. Ειδική χρώση ανιχνεύθηκε από τα συστήματα EnVision™ (Dako, Δανία), χρησιμοποιώντας το δευτερεύον αντίσωμα, συζευγμένο με πολυμερές EnVision-HRP αντι-ποντικίσιο IgG σε αραίωση 1:200 και ανιχνεύθηκε με χρήση διαλύματος DAB (Dako, Δανία) με αντιχρώση με αιματοξυλίνη. Οι τομές στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε διβουτυλ-φθαλικό εστέρα σε ιστόνη (DPX). Η παρουσία ουδετερόφιλων στους μύες ανιχνεύθηκε με ποσοτική ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ.

Ανάλυση έκφρασης μυϊκού γονιδίου. Δοκιμασία PCR που προσδιορίζει τα γονίδια που σχετίζονται με το οξειδωτικό στρες πραγματοποιήθηκε με χρήση συστοιχιών PCR οξειδωτικού στρες και αντιοξειδωτικής άμυνας αρουραίου (PARN-065Z, SABiosciences, Frederick, USA). Η συστοιχία PCR πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, το ολικό RNA απομονώθηκε με επιλεκτική δέσμευση σε μεμβράνη που βασίζεται σε πυριτική γέλη μετά τη λύση και την ομογενοποίηση των μυϊκών δειγμάτων σε ένα μετουσιωτικό ρυθμιστικό θειοκυανικής γουανιδίνης (RNeasy kit, Qiagen). Το RNA μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA χρησιμοποιώντας το κιτ RT2 First Strand (SABiosciences, Frederick, USA). Αυτό το cDNA στη συνέχεια προστέθηκε στο RT2 SYBR Green qPCR Master Mix (SABiosciences, Frederick, USA). Στη συνέχεια, κάθε δείγμα κατανεμήθηκε σε συστοιχίες PCR οξειδωτικού στρες και αντιοξειδωτικής άμυνας σε αρουραίους (SABiosciences, Frederick, USA). Όλα τα βήματα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή.

Μελέτη της υπερλιπιδαιμίας και της ηπατικής στεάτωσης που προκαλείται από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά σε ποντικούς.

Όλα τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε 5 ομάδες (n=8–10) και έλαβαν τα ακόλουθα: Ομάδα α) Δίαιτα κανονικής διατροφής (Πίνακας 1). Ομάδες β έως ε) Δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά (περιέχει 21 τοις εκατό λίπος και 0.15 τοις εκατό χοληστερόλη) (Πίνακας 2). Δόθηκαν δίαιτες για 8 εβδομάδες για τα ζώα να προκαλέσουν παχυσαρκία. Μετά από 8 εβδομάδες, σε όλες τις ομάδες που τρέφονταν με υψηλή περιεκτικότητα σε λιπαρά δόθηκε απεσταγμένο νερό ή σιμβαστατίνη καθημερινά και ή θεραπεία HCE ενδογαστρικά, 3 ώρες μετά τη χορήγηση σιμβαστατίνης. Το φυτικό εκχύλισμα ή σιμβαστατίνη διαλύθηκε σε 0,5 τοις εκατό μεθυλοκυτταρίνη (Sigma-Aldrich Corporation, ΗΠΑ) σε απεσταγμένο νερό σε γνωστή συγκέντρωση. Ένας προ-υπολογισμένος όγκος δόθηκε ενδογαστρικά σε κάθε ζώο σύμφωνα με το βάρος του ατόμου, έτσι ώστε ο υπολογισμένος όγκος να περιέχει την ποσότητα της προτεινόμενης δόσης που απαιτείται. Αναλυτικά οι ομάδες αυτές έχουν ως εξής:

Ομάδα α) Δίαιτα κανονικής τροφής συν απεσταγμένο νερό

Ομάδα β) Δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά συν απεσταγμένο νερό

Ομάδα γ) Δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά συν σιμβαστατίνη (50 mg/kg)

Ομάδα δ) Δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά συν HCE (4,4 g/kg)

Ομάδα ε) Δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά συν σιμβαστατίνη (25 mg/kg) συν HCE (4,4 g/kg)

Η πρόσληψη τροφής καταγράφηκε καθημερινά και το σωματικό βάρος μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα. Στο τέλος της μελέτης 16-εβδομάδων, όλα τα ποντίκια θυσιάστηκαν μετά από 16-ωρη ολονύκτια νηστεία. Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με ένα μίγμα κεταμίνης (100 mg/kg) και ξυλαζίνης (10 mg/kg) ενδοπεριτοναϊκά. Το αίμα αφαιρέθηκε με καρδιακή παρακέντηση και αφέθηκε να πήξει. Το πλάσμα διαχωρίστηκε με φυγοκέντρηση (3,000 rpm για 10 λεπτά). Τα συκώτια αποκόπηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -80 βαθμούς μέχρι την ανάλυση.

Μέτρηση λιπιδίων πλάσματος και ήπατος.

Τριγλυκερίδια πλάσματος, χοληστερόλη (11488872216 και 11489232216, Roche Diagnostics, Ελβετία), λιποπρωτεΐνη υψηλής πυκνότητας και χαμηλής πυκνότητας χοληστερόλη (L-Type HDL-C και L-Type LDL-C και L-Type LDL-C μετρήθηκαν από την Japans, Wako Industrials, ενζυματικές μέθοδοι χρησιμοποιώντας το κιτ που διατίθεται στο εμπόριο σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η δραστηριότητα της κρεατινικής κινάσης (CK) του πλάσματος προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ Stanbio CK Liqui-UV® (2910-430, Stanbio Laboratory, ΗΠΑ). Τα συνολικά λιπίδια του ήπατος προσδιορίστηκαν βαρυμετρικά μετά την εκχύλιση με τη μέθοδο των Bligh και Dyer24. Τα μεμονωμένα ηπατικά λιπίδια ποσοτικοποιήθηκαν ενζυματικά (όπως περιγράφεται παραπάνω) μετά από διαλυτοποίηση σε ισοπροπανόλη (Sigma-Aldrich, ΗΠΑ)25.

Αξιολόγηση ιστοπαθολογίας ήπατος και φλεγμονής. Χρώση αιματοξυλίνης και ηωσίνης (χρώση H&E). Τομές κρότωνων (5 μm) ιστού ενσωματωμένου σε παραφίνη κόπηκαν με μικροτόμο και τοποθετήθηκαν σε αντικειμενοφόρους πλάκες μικροσκοπίου SuperFrost Plus® (Thermo Scientific, ΗΠΑ). Οι τομές υποβλήθηκαν σε χρώση Η&Ε σύμφωνα με τη μέθοδο των Harris et al. 26 και τοποθετήθηκε με διβουτυλ-φθαλικό εστέρα σε ιστόνη (DPX) (Sigma-Aldrich, ΗΠΑ)25.

Mac-3 χρώση και ποσοτικοποίηση. Παχιά τμήματα (5 μm) ιστού ενσωματωμένου σε παραφίνη κόπηκαν χρησιμοποιώντας μικροτόμο και τοποθετήθηκαν σε αντικειμενοφόρους πλάκες μικροσκοπίου SuperFrost Plus® (Thermo Scientific, ΗΠΑ). Πραγματοποιήθηκε ανάκτηση αντιγόνου, ακολουθούμενη από αποκλεισμό με μπλοκ υπεροξειδάσης (Dako Cytomation, Δανία). Πρωτεύον καθαρισμένο αντίσωμα αντι-ποντικού Mac-3 (BD Pharmingen, ΗΠΑ) εφαρμόστηκε στις τομές σε αραίωση 1:50. Ανιχνεύθηκε ειδική χρώση χρησιμοποιώντας τα συστήματα EnVision™ (Dako, Δανία). Τα πλακίδια επωάστηκαν με το δευτερεύον αντίσωμα, συζευγμένο με πολυμερές EnVision-HRP αντι-κουνελιού IgG σε αραίωση 1:200. Mac-3 ανιχνεύθηκε με χρήση διαλύματος DAB (Dako, Δανία) και αντιχρωματίστηκε με αιματοξυλίνη. Τα τμήματα στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε DPX. Η παρουσία μακροφάγων στο ήπαρ ανιχνεύθηκε με ποσοτική ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ.

Στατιστική ανάλυση. Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων θεραπείας και ελέγχου δοκιμάστηκαν με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA), ακολουθούμενη από τη δοκιμασία πολλαπλής σύγκρισης posthoc Bonferroni. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας GraphPad Prism Έκδοση 6.0 (GraphPad, ΗΠΑ). Μια πιθανότητα p<0.05 would="" be="" considered="" statistically="">

Αποτελέσματα

Επίδραση τουHerbaCistancheΕ σχετικά με τη μυϊκή τοξικότητα που προκαλείται από τη σιμβαστατίνη σε αρουραίους. Μυϊκό βάρος και μέτρηση κινάσης κρεατίνης πλάσματος. Πέντε διαφορετικοί τύποι μυών (τετρακέφαλος, γαστροκνήμιος, πέλμα, πρόσθιος κνημιαίος και εκτεινόμενος μακρός δακτύλιος) απομονώθηκαν από όλους τους αρουραίους που έλαβαν θεραπεία. Τα αποτελέσματα διαφορετικών θεραπειών στο μυϊκό βάρος φαίνονται στο Σχ. 1α. Η σιμβαστατίνη (640 mg/kg) προκάλεσε σημαντική μείωση βάρους στους τετρακέφαλους, γαστροκνήμιους και πρόσθιους μύες της κνήμης σε αρουραίους, ενώ αυτές οι μειώσεις αποκαταστάθηκαν σημαντικά με HCE στους τετρακέφαλους και τους γαστροκνήμιους μύες με τρόπο δοσοεξαρτώμενο. ΠαρόλοHerbaCistancheΟ Ε άσκησε μια τάση για την αποκατάσταση των βαρών του πρόσθιου κνημιαίου μυός σε αρουραίους που έλαβαν σιμβαστατίνη, καμία από αυτές τις ομάδες θεραπείας δεν είχε φτάσει σε στατιστική σημασία. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση της θεραπείας με HCE μόνο στο μυϊκό βάρος σε σύγκριση με τους αρουραίους ελέγχου (Εικ. 1α).

Το Σχήμα 1β έδειξε τις επιδράσεις των διαφορετικών αγωγών στα επίπεδα της κινάσης της κρεατίνης (CK) του πλάσματος σε αρουραίους. Η σιμβαστατίνη προκάλεσε σημαντική αύξηση στη δραστηριότητα της κρεατινικής κινάσης σε αρουραίους, η οποία μειώθηκε σημαντικά από τις συνθεραπείες με HCE και στις δύο δόσεις. Δεν υπήρξε επίσης σημαντική επίδραση της θεραπείας με HCE μόνο στα επίπεδα CK σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Δεδομένου ότι ο γαστροκνήμιος φάνηκε να είναι ευαίσθητος στη θεραπεία με σιμβαστατίνη και είναι ο μεγαλύτερος μυς που απομονώθηκε κατά μάζα, επιλέξαμε αυτόν τον μυ για περαιτέρω ανάλυση, συμπεριλαμβανομένης της μέτρησης της μυϊκής υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης (GPx), της μέτρησης MMP και ROS των μιτοχονδρίων και της αξιολόγησης της ιστολογίας και της φλεγμονής των μυών .

Μέτρηση μυϊκής υπεροξειδάσης γλουταθειόνης (GPx). Τα επίπεδα μυϊκής υπεροξειδάσης γλουταθειόνης μετρήθηκαν και φαίνονται στο Σχ. 2α. Η χορήγηση σιμβαστατίνης προκάλεσε μια τάση για μείωση της μέτρησης της μυϊκής υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης (GPx) σε αρουραίους. Ωστόσο, η HCE άσκησε μια τάση βελτίωσης της επαγόμενης από τη σιμβαστατίνη μείωσης της μυϊκής GPx και στις δύο δόσεις 1,1 g/kg και 2,2 g/kg. Δεν υπήρξε επίσης σημαντική επίδραση της θεραπείας με HCE μόνο στα επίπεδα GPx των μυών σε σύγκριση με τους κανονικούς αρουραίους ελέγχου.

Δυνατότητα μιτοχονδριακής μεμβράνης (MMP) και μέτρηση ROS. Η θεραπεία με σιμβαστατίνη (640 mg/kg) προκάλεσε σημαντική μείωση της μυϊκής MMP (Εικ. 2β). Αυτή η μείωση βελτιώθηκε ανάλογα με τη δόση σε αρουραίους που έλαβαν τη συν-θεραπεία HCE και σιμβαστατίνης (Εικ. 2b). Από την άλλη πλευρά, είναι ενδιαφέρον ότι η ομάδα θεραπείας με σιμβαστατίνη μόνη της είχε σημαντικά μειωμένα επίπεδα μιτοχονδριακού ROS των μυών σε σύγκριση με την κανονική ομάδα ελέγχου (Εικ. 2γ). Ωστόσο, η θεραπεία με HCE που δόθηκε σε αρουραίους που έλαβαν σιμβαστατίνη άσκησε μια δοσοεξαρτώμενη τάση για την αποκατάσταση των επιπέδων του μιτοχονδριακού ROS των μυών στο φυσιολογικό επίπεδο. Επίσης, δεν υπήρξε σημαντική επίδραση της θεραπείας με HCE μόνο σε αρουραίους σε σύγκριση με την κανονική ομάδα ελέγχου για τη μέτρηση τόσο της MMP όσο και της ROS των μιτοχονδρίων.

Αξιολόγηση μυϊκής ιστολογίας και φλεγμονής. Οι γαστροκνήμιοι μύες από αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκαν διαφορετικές θεραπείες αναλύθηκαν περαιτέρω ιστολογικά και αντιπροσωπευτικές χρωματισμένες τομές φαίνονται στο Σχ. 3α. Τα ζώα της ομάδας ελέγχου επέδειξαν τις ιστολογικές τομές των φυσιολογικών μυών. Αντίθετα, τομές Η&Ε από ζώα που έλαβαν σιμβαστατίνη αποκάλυψαν διήθηση φλεγμονωδών δεικτών (κίτρινα βέλη), η οποία μειώθηκε σημαντικά σε αυτές τις μυϊκές τομές των αρουραίων δεδομένου του συνδυασμού σιμβαστατίνης και HCE. Πραγματοποιήθηκαν επίσης ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις για την παρουσία μακροφάγων CD68 και CD163 στα Σχήματα 4a και 5a, αντίστοιχα, με ποσοτικοποιήσεις των αντίστοιχων μακροφάγων που φαίνονται στα Σχήματα 4b και 5b. Η ανοσοϊστοχημική ανάλυση τμημάτων μυών αποκάλυψε την παρουσία μακροφάγου (CD68) σε επίμυες που έλαβαν σιμβαστατίνη (καφέ χρωματισμός), η οποία μειώθηκε σημαντικά σε αρουραίους, δεδομένης της συν-θεραπείας με HCE και στις δύο δόσεις (Εικ. 4β). Δεν παρατηρήθηκε επίσης σημαντική φλεγμονή σε ζώα που έλαβαν μόνο HCE. Παρομοίως, η ανοσοϊστοχημική ανάλυση τμημάτων μυών αποκάλυψε την παρουσία CD{11}θετικών μακροφάγων σε επίμυες που έλαβαν σιμβαστατίνη (καφέ χρωματισμός), η οποία μειώθηκε σημαντικά σε αρουραίους, δεδομένης της συν-θεραπείας με HCE στα 2,2 g/kg (Εικ. 5β ). Δεν παρατηρήθηκε επίσης σημαντική φλεγμονή σε ζώα που έλαβαν μόνο HCE.

Ανάλυση έκφρασης μυϊκού γονιδίου. Για τον προσδιορισμό των επιδράσεων της σιμβαστατίνης και του HCE σε γονίδια που σχετίζονται με το οξειδωτικό στρες εντός του μυός, πραγματοποιήθηκε ανάλυση PCR που προσδιορίζει τα γονίδια που σχετίζονται με το οξειδωτικό στρες χρησιμοποιώντας συστοιχίες PCR οξειδωτικού στρες και αντιοξειδωτικής άμυνας σε αρουραίους. Γονίδια που επηρεάστηκαν σημαντικά από τη θεραπεία με σιμβαστατίνη αναλύθηκαν και παρουσιάστηκαν στο Σχ. 6. Για το προφίλ έκφρασης των γονιδίων που ρυθμίζουν τα αντιοξειδωτικά, οι αρουραίοι που έλαβαν σιμβαστατίνη (640 mg/kg) αύξησαν την έκφραση των γονιδίων που ρυθμίζουν τα αντιοξειδωτικά. Το Tese περιλαμβάνει υπεροξειδάσες γλουταθειόνης (GPx) GPx1 και GPx7, και άλλες υπεροξειδάσες συμπεριλαμβανομένων των Serpinb1b και club (Εικ. 6a). Το HCE και στις δύο δόσεις (1,1 ή 2,2 g/kg) μείωσε αυτές τις επαγόμενες από τη σιμβαστατίνη αυξήσεις στα GPxs και άλλες υπεροξειδάσες σε φυσιολογικά επίπεδα. Από την άλλη πλευρά, η θεραπεία με HCE από μόνη της αύξησε σημαντικά τα επίπεδα έκφρασης της GPx1. Όσον αφορά την έκφραση των γονιδίων που ρυθμίζουν το μεταβολισμό των ROS, η σιμβαστατίνη προκάλεσε σημαντικά την έκφραση άλλων γονιδίων μεταβολισμού υπεροξειδίου, συμπεριλαμβανομένων των Cyba, Ncf1, Ncf2, Scd1 και Ucp2. Ομοίως, το HCE και στις δύο δόσεις μείωσε σημαντικά αυτές τις αυξήσεις (Εικ. 6β). Επιπλέον, η σιμβαστατίνη προκάλεσε έκφραση γονιδίων που ανταποκρίνονται στο οξειδωτικό στρες, συμπεριλαμβανομένων των Apoe, Ccl5 και Txn1, ενώ αυτές οι εκφράσεις μειώθηκαν σημαντικά σε ζώα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με HCE και στις δύο δόσεις (Εικ. 6c). Από την άλλη πλευρά, η σιμβαστατίνη προκάλεσε σημαντική μείωση στη γονιδιακή έκφραση του Txnip. Δεν υπήρξε σημαντική επίδραση του HCE στην επαγόμενη από τη σιμβαστατίνη μείωση στην έκφραση του γονιδίου Txnip (Εικ. 6c). Η σιμβαστατίνη άσκησε επίσης σημαντική αύξηση στην έκφραση των γονιδίων που ρυθμίζουν τους μεταφορείς οξυγόνου συμπεριλαμβανομένων των Slc38a1 και Vim. Η συν-θεραπεία με HCE μείωσε την έκφραση αυτών των γονιδίων και στις δύο δόσεις (Εικ. 6δ).

Επιδράσεις της συνδυασμένης χρήσης σιμβαστατίνης και HCE στην πρόσληψη τροφής και το σωματικό βάρος σε ποντίκια. Το Σχήμα 7α έδειξε την ημερήσια πρόσληψη τροφής ποντικών για όλες τις ομάδες θεραπείας. Μια δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά προκάλεσε σημαντική αύξηση στην ημερήσια πρόσληψη τροφής των ζώων σε σύγκριση με τα ζώα που τρέφονταν με τροφή (σ.<0.001). there="" was="" however="" no="" significant="" effect="" of="" the="" herb="" or="" drug="" treatments="" among="" all="" high-fat-fed="" groups="" (fig.="">

Εβδομαδιαία μέτρηση σωματικού βάρους. Μετά από 16 εβδομάδες διατροφής με υψηλή περιεκτικότητα σε λιπαρά, τα ζώα που τρέφονταν με HF κέρδισαν σημαντικά περισσότερο βάρος από τα ζώα που τρέφονταν με τροφή (Εικ. 7β). Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική επίδραση μεταξύ των ποντικών που τρέφονταν με HF και όλων των ομάδων θεραπείας που έλαβαν HF. Δεν υπήρχε επίσης σημαντική διαφορά μεταξύ των ποντικών που τρέφονταν με HF που έλαβαν τη συν-θεραπεία με σιμβαστατίνη και των ποντικών που τρέφονταν με HCE και των ποντικών που έλαβαν HCE ή θεραπεία με σιμβαστατίνη μόνο (Εικ. 7β).

Επιδράσεις της συνδυασμένης χρήσης σιμβαστατίνης και HCE στην υπερλιπιδαιμία και την ηπατική στεάτωση σε ποντικούς. Μέτρηση δραστηριότητας λιπιδίων και κρεατινικής κινάσης στο πλάσμα. Τα επίπεδα λιπιδίων του πλάσματος όλων των ποντικών φαίνονται στην Εικ. 8. Σε σύγκριση με τα κανονικά ποντίκια που τρέφονταν με τροφή, τα ποντίκια που τρέφονταν με HF είχαν σημαντικά αυξημένα επίπεδα ολικής χοληστερόλης στο πλάσμα (TC), τα οποία μειώθηκαν σημαντικά σε όλες τις ομάδες θεραπείας (Εικ. 8α). . Τα ποντίκια που έλαβαν HF που έλαβαν θεραπεία με σιμβαστατίνη και HCE είχαν σημαντικά χαμηλότερη TC πλάσματος σε σύγκριση με ζώα με καρδιακή ανεπάρκεια που έλαβαν μόνο σιμβαστατίνη ή ζώα με HF που έλαβαν μόνο HCE (ρ.<0.001 and=""><0.01, respectively)="" (fig.="" 8a).="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" between="" hf-fed="" mice="" receiving="" hce="" alone="" vs="" simvastatin="" alone="" treatment="" group,="" suggesting="" hce="" has="" comparable="" effects="" as="" simvastatin.="" besides,="" hf-fed="" mice="" also="" had="" significantly="" higher="" plasma="" triglyceride="" (tg)="" levels="" compared="" to="" mice="" given="" a="" normal="" chow="" diet=""><0.05) (figure="" 8b).="" there="" was="" a="" trend="" for="" a="" reduction="" in="" simvastatin="" treatment="" alone="" group="" on="" plasma="" tg="" in="" hf-fed="" animals,="" though="" this="" did="" not="" reach="" statistical="" significance.="" however,="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment="" significantly="" reduced="" plasma="" tg="" compared="" to="" control="" hf-fed="" animals=""><0.001 and=""><0.01, respectively).="" when="" comparing="" between="" simvastatin="" treatment="" alone="" group="" with="" simvastatin="" co-treatment="" with="" hce="" group,="" hce="" co-treatment="" with="" simvastatin="" had="">

χαμηλότερη TG πλάσματος σε σύγκριση με ποντίκια που τρέφονταν με HF που έλαβαν μόνο θεραπεία με σιμβαστατίνη (σελ<0.01) (fig.="" 8b).="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" between="" hf-fed="" mice="" receiving="" hce="" alone="" vs="" the="" simvastatin="" treatment="" group,="" though="" hce="" had="" a="" slightly="" better="" reduction="" in="" tg="" levels.="" in="" addition,="" high-fat-diet-induced="" significant="" increase="" in="" plasma="" high-density="" lipoprotein="" (hdl)="" cholesterol="" and="" plasma="" low-density="" lipoprotein="" (ldl)="" cholesterol="" in="" mice="" compared="" to="" normal="" chow-fed="" animals="" (fig.="" 8c="" and="" d).="" simvastatin="" treatment="" alone="" significantly="" reduced="" both="" lipids="" in="" high-fat-fed="" mice.="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment="" also="" significantly="" reduced="" both="" types="" of="" plasma="" lipids="" compared="" to="" mice="" given="" hf="" diet="" alone.="" there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" both="" lipids="" among="" all="" treatment="" groups.="" figure="" 8e="" showed="" the="" effect="" of="" different="" treatments="" on="" plasma="" creatine="" kinase="" (ck)="" levels.="" interestingly,="" hf="" diet-induced="" significant="" increase="" in="" plasma="" ck="" levels="" in="" mice="" compared="" to="" normal-chow-fed="" mice="" (fig.="" 8e).="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" the="" co-treatment="" of="" simvastatin="" significantly="" reduced="" plasma="" ck="" levels="" compared="" to="" mice="" given="" hf="" diet="" alone=""><0.01 and=""><0.01, respectively).="" simvastatin="" treatment="" alone="" also="" significantly="" reduced="" the="" high-fat="" diet-induced="" increase="" in="" plasma="" ck="" levels.="" there="" was="" also="" no="" significant="" difference="" in="" plasma="" ck="" levels="" among="" all="" active="" treatment="" groups="">μέτρηση λιπιδίων του ήπατος.

Τα αποτελέσματα των διαφορετικών ομάδων θεραπείας στην επαγόμενη από HF ηπατομεγαλία (μεγέθυνση ήπατος) συσχετίστηκαν με σημαντική μείωση της συνολικής περιεκτικότητας σε ηπατικά λιπίδια, εκφραζόμενη ως χιλιοστόγραμμα λιπιδίου ανά ήπαρ (Εικ. 9α). Η συνολική περιεκτικότητα σε λιπίδια του ήπατος ήταν σημαντικά υψηλότερη στα ποντίκια που τρέφονταν με HF σε σύγκριση με τα κανονικά ποντίκια που τρέφονταν με τροφή (3.0- φορές υψηλότερη, p.<0.001). simvastatin="" exerted="" no="" significant="" effect="" on="" the="" high-fat="" diet-induced="" increase="" in="" total="" liver="" lipid.="" interestingly,="" hce="" significantly="" reduced="" such="" a="" diet-induced="" increase="" in="" liver="" lipid=""><0.05). on="" the="" other="" hand,="" simvastatin="" co-treatment="" with="" hce="" exerted="" a="" trend="" to="" reduce="" the="" liver="" lipid="" content="" though="" did="" not="" reach="" statistical="" significance="" (p="0.15)." however,="" when="" comparing="" the="" liver="" lipid="" content="" among="" all="" treatment="" groups,="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" all="">

Όπως φαίνεται στο Σχ. 9β και γ, η μέτρηση της ολικής χοληστερόλης του ήπατος (TC) και των τριγλυκεριδίων του ήπατος (TG) αποκάλυψε ότι τα ποντίκια που τρέφονταν με HF είχαν αυξημένα επίπεδα και των δύο λιπιδίων σε σύγκριση με τα κανονικά ποντίκια που τρέφονταν με τροφή (δηλ. 3.{{4} }πλάσια αύξηση του TC, σελ<0.001; and="" 3.4-fold="" increase="" in="" tg,=""><0.001). simvastatin="" treatment="" significantly="" reduced="" liver="" total="" cholesterol="" levels=""><0.05) but="" not="" triglyceride="" levels.="" on="" the="" other="" hand,="" hce="" treatment,="" with="" or="" without="" simvastatin="" co-treatment,="" significantly="" reduced="" both="" liver="" total="" cholesterol="" and="" triglyceride="" levels="" in="" high-fat-fed="" mice.="" when="" comparing="" the="" effects="" among="" all="" groups,="" we="" observed="" no="" significant="" difference="" in="" liver="" total="" cholesterol,="" but="" there="" was="" a="" significant="" reduction="" in="" liver="" tg="" for="" the="" hce="" treatment="" group="" as="" compared="" to="" the="" simvastatin="" treatment="" group="" (fig.="" 9b="" and="">

Αξιολόγηση ηπατικής φλεγμονής. Πραγματοποιήθηκε ανοσοϊστοχημική χρώση για τη χρώση για την παρουσία μακροφάγων (Mac-3) (Εικ. 10a). Η ανοσοϊστοχημική ανάλυση τμημάτων του ήπατος αποκάλυψε την παρουσία Mac-3 τόσο σε ποντίκια που τρέφονται με υψηλή περιεκτικότητα σε λιπαρά όσο και σε κανονικά ποντίκια που τρέφονται με τροφή (καφέ χρωματισμός). Αυτή η φλεγμονή αυξήθηκε περαιτέρω σε ζώα που έλαβαν σιμβαστατίνη, αν και μια τέτοια αύξηση δεν είχε στατιστική σημασία. Είναι ενδιαφέρον ότι η θεραπεία με HCE, με ή χωρίς συν-θεραπεία με σιμβαστατίνη, μείωσε σημαντικά τη φλεγμονή στα ποντίκια που τρέφονταν με υψηλή περιεκτικότητα σε λιπαρά. Κατά τη σύγκριση μεταξύ όλων των ομάδων θεραπείας, η θεραπεία με HCE, με ή χωρίς συν-θεραπεία με σιμβαστατίνη είχε επίσης σημαντικά χαμηλότερη φλεγμονή σε σύγκριση με την ομάδα θεραπείας με σιμβαστατίνη (σ.<0.001 and=""><0.001, respectively).="" these="" data="" are="" also="" presented="" as="" percentage="" areas="" in="" fig.="">

Συνέχισε να διαβάζεις ...