Μέρος 2: Τα εκχυλίσματα Cistanche Deserticola μπορούν να ανταγωνιστούν την ανοσολογικότητα και να παρατείνουν τη διάρκεια ζωής σε ποντίκια με επιρρεπή στη γήρανση 8 (SAM-P8)

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

3.5. Αποσπάσματα δφCistanche deserticola(ECD)Προώθηση.

Απόπτωση και αναστολή νέκρωσης λεμφοκυττάρων σε ποντίκια SAM-P8. Τα επίπεδα νέκρωσης και απόπτωσης σε πληθυσμούς λεμφοκυττάρων αίματος αναλύθηκαν με διπλή χρώση με Annexin V-FITC V/PI. Αυτό αποκάλυψε ότι το ποσοστό των νεκρωτικών λεμφοκυττάρων στο SAM-P8mic ήταν σημαντικά υψηλότερο από ό,τι στα ζώα ελέγχου SAM-R1, ενώ το ποσοστό των αποπτωτικών λεμφοκυττάρων ήταν χαμηλότερο (Εικόνα 7). Η συμπλήρωση της δίαιτας ποντικών SAM-P8 με τρεις διαφορετικές δόσεις ECD ήταν ικανή να αναστείλει τα επίπεδα νέκρωσης που παρατηρήθηκαν σε πληθυσμούς περιφερειακών λεμφοκυττάρων, ενώ μόνο τα δύο υψηλότερα επίπεδα συμπληρώματος ECD προκάλεσαν σημαντική αλλαγή στο επίπεδο των αποπτωτικών λεμφοκυττάρων (Εικόνα 7).

3.6.Αποσπάσματα απόCistanche deserticola(ECD) Μείωση της προφλεγμονώδους κυτοκίνης IL-6 σε ποντίκια SAM-P8.

Ως περαιτέρω δείκτης της ικανότητας του ECD να επηρεάζει τις αλλαγές που σχετίζονται με την ηλικία στο ανοσοποιητικό σύστημα, η επίδραση της συμπλήρωσης δίαιτας ECD στο επίπεδο ενός αριθμού κυτοκινών (IFN-, TNF-, IL-2).IL{{4 }}.IL-10, GM-CSF και IL-3) αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση κυτταρομετρικής διάταξης σφαιριδίων (CBA) που περιλαμβάνει χρώση με επισημασμένα με φθορισμό αντισώματα σε συνδυασμό με κυτταρομετρικά σφαιρίδια σύλληψης. Τα αποτελέσματα (Εικόνα 8) έδειξαν ότι η φλεγμονώδης κυτοκίνη IL-6 δεν ήταν αυξημένη σε 8-ποντίκια SAM-P8 μηνών σε σύγκριση με ποντίκια ελέγχου SAM-R1 της ίδιας ηλικίας, αλλά αυξήθηκε σημαντικά όταν σε σύγκριση με6-ποντίκια SAM-R1 μηνών (τα αποτελέσματα δεν εμφανίζονται). Ωστόσο, τα συμπληρώματα διατροφής με υψηλές και μεσαίες δόσεις ECD μπόρεσαν να προκαλέσουν μια στατιστικά σημαντική μείωση στο επίπεδο της IL{23}} στο πλάσμα (Εικόνες 8(α) και 8(β),<>

(IFN-,TNF-,IL-2,IL-10, GM-CSF και IL-3)δεν εμφάνισαν σημαντικές παραλλαγές μεταξύ ομάδων ποντικών που έλαβαν SAM-P8,SAM-R1,καιECD (δεδομένα δεν φαίνεται).

4. Συζήτηση

Η ανοσολογική άμυνα ενάντια σε νεοδιηθητικούς μικροοργανισμούς ή ενδογενή κύτταρα όγκου εξαρτάται από την ποικιλομορφία του ρεπερτορίου των Τ κυττάρων, το οποίο με τη σειρά του βασίζεται στη δημιουργία και τη συντήρηση των αφελών Τ-κυττάρων[19]. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας γήρανσης, η ποικιλομορφία του ρεπερτορίου των Τ-κυττάρων έχει αποδειχθεί ότι συρρικνώνεται δραματικά λόγω της προοδευτικής εξάντλησης των αφελών Τ κυττάρων στην περιφερειακή δεξαμενή αποθεμάτων. Είναι αυτή η έλλειψη αποκρινόμενων αφελών Τ-κυττάρων που πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνη για την ευαισθησία των ηλικιωμένων σε λοιμώξεις, καρκίνο και κακή έκβαση μετά τον εμβολιασμό [20]. Διάφορες παρεμβάσεις, συμπεριλαμβανομένου του θερμιδικού περιορισμού [7], της άσκησης [21] και της χορήγησης συμπληρωμάτων βιταμίνης Ε [8], έχουν χρησιμοποιηθεί για την επιτυχή αναπλήρωση των αφελών Τ κυττάρων και συνεπώς την παράταση της διάρκειας ζωής και τη μείωση της εμφάνισης λοίμωξης και καρκίνου στους ηλικιωμένους. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι η ECD είναι ικανή να αυξήσει το επίπεδο των αφελών Τ κυττάρων στην περιφερική δεξαμενή και υπήρξε παράταση της διάρκειας ζωής και μείωση της συχνότητας σχηματισμού όγκων σε ποντίκια με επιτάχυνση της γήρανσης (ECDθεραπευτική ομάδα έναντι SAM-P8 ,0 έναντι 1/6). Ως εκ τούτου, φαίνεται λογικό να συμπεράνουμε ότι η ικανότητα του ECD να αναστρέφει την εξαρτώμενη από την ηλικία εξάντληση των περιφερειακών αφελών Τ-κυττάρων μπορεί να συμβάλει στα γνωστά αποτελέσματά του στη μείωση της σχετιζόμενης με την ηλικία νόσου που προκύπτει από μακροχρόνιες κλινικές παρατηρήσεις.

5. Υλικά και Μέθοδοι

5.1.Υλικά.

Σε φυσιολογική ανοσοαπόκριση, μετά τον περιορισμό και την εξάλειψη ενός ξένου αντιγόνου, τα περισσότερα από τα κλωνικά διευρυμένα Τ-κύτταρα υφίστανται απόπτωση με ένα μικρό μόνο κλάσμα να διατηρείται ως Τ κύτταρα μνήμης. Κατά συνέπεια, καθώς ο ανοσολογικά ικανός οργανισμός γερνάει, τα περιφερειακά Τ κύτταρα μνήμης συσσωρεύονται ως αποτέλεσμα μιας ολόκληρης ζωής έκθεσης σε ξένα αντιγόνα που μετατρέπουν τα αφελή Τ-κύτταρα σε κύτταρα μνήμης[22,23]. Ένας αριθμός μελετών έχει προτείνει ότι τα ελαττώματα της απόπτωσης των λεμφοκυττάρων σε ηλικιωμένα ζώα και ανθρώπους συμβάλλουν επίσης στη διεύρυνση του διαμερίσματος των Τ-κυττάρων μνήμης [24,25]. Επιπλέον, μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι η υπερβολική αφθονία των Τ-κυττάρων περιφερειακής μνήμης μπορεί να αναστείλει τον ομοιοστατικό πολλαπλασιασμό των αφελών Τ κυττάρων [26]. Αυτές οι πρόσφατες μελέτες έχουν επίσης προτείνει ότι τα κύτταρα Τ μνήμης μπορεί να εκκρίνουν υψηλά επίπεδα προφλεγμονωδών κυτοκινών που μπορεί να συμβάλλουν σε επίμονες φλεγμονές σε διάφορους ιστούς των ηλικιωμένων. Κατά συνέπεια, η μείωση του επιπέδου των Τ-κυττάρων μνήμης θα πρέπει να είναι ευεργετική τόσο για τον ομοιοστατικό πολλαπλασιασμό των αφελών Τ κυττάρων όσο και για την ανακούφιση της περίσσειας φλεγμονώδους κατάστασης που παρατηρείται σε ηλικιωμένους οργανισμούς. Σε αυτή τη μελέτη, τα συμπληρώματα διατροφής με ECD αποδείχθηκε ότι μπορούν να μειώσουν το επίπεδο των Τ-κυττάρων περιφερειακής μνήμης και να αυξήσουν τα επίπεδα των αφελών Τ κυττάρων. Επιπλέον, η συμπλήρωση ECD αύξησε τον χώρο απόπτωσης για νέα αφελή λεμφοκύτταρα. Η νέκρωση στα περιφερικά λεμφοκύτταρα, η οποία προκαλείται κυρίως από το οξειδωτικό στρες σε γεροντικά ζώα, αναστάλθηκε επίσης.

Υπάρχουν εκτεταμένα στοιχεία που δείχνουν ότι η γήρανση σε έναν οργανισμό δεν χαρακτηρίζεται μόνο από ανοσοανεπάρκεια αλλά και από αύξηση της χρόνιας φλεγμονής[27. Η προφλεγμονώδης κατάσταση εκδηλώνεται πιο ξεκάθαρα στην αυξημένη και IL-1 στην κυκλοφορία σε συνδυασμό με αυξημένες συχνότητες χρόνιων φλεγμονωδών νόσων που σχετίζονται με τη γήρανση, όπως η νόσος του Alzheimer, οι ασθένειες του Parkinson και η αθηροσκλήρωση. Μία από τις πιο εμφανείς φλεγμονώδεις κυτταροκίνηση είναι η IL-6 και η συγκέντρωσή της στο πλάσμα αυξάνεται με τη γήρανση και τις ασθένειες που σχετίζονται με την ηλικία [18,28,29] και οι επιδημιολογικές μελέτες υποδηλώνουν ότι η IL-6 είναι ένας καλός βιοδείκτης μακροζωίας καθώς σχετίζεται στενά με τη θνησιμότητα σε κοορτές ηλικιωμένων ασθενών [30,31]. Σύμφωνα με αυτό, ένας αριθμός θεραπευτικών παρεμβάσεων που μειώνουν τη συγκέντρωση της IL{10}} μπορούν να

Εικόνα 6: Οι επιδράσεις του συμπληρώματος διατροφής ECD στο αντιγόνο βλαστοκυττάρων-1 (Sca-1) στα λεμφοκύτταρα του περιφερικού αίματος ποντικών SAM-P8. Αρσενικά ποντίκια SAM-P8 οκτώ μηνών και μάρτυρες SAM-RI χωρίστηκαν σε 5 ομάδες. Οι 3 ομάδες θεραπείας των ζώων SAM-P8 τράφηκαν για τέσσερις εβδομάδες με δίαιτες συμπληρωμένες με χαμηλές (100 mg/kg), μέτριες 500 mg/kg) και υψηλές 250 mg/kg δόσεις ECD και οι δύο ομάδες ζώων ελέγχου τράφηκαν με ίδια δίαιτα χωρίς συμπληρώματα. Μετά από νηστεία για 12 ώρες, συλλέχθηκε περιφερικό αίμα από αναισθητοποιημένα ζώα και υποβλήθηκε σε ανάλυση FACS, όπως περιγράφεται στην Ενότητα 5. (α) Αντιπροσωπευτικές γραφικές παραστάσεις FACS των διαφορετικών ομάδων ποντικών που δημιουργήθηκαν με πύλη σε αντιγόνο βλαστοκυττάρων-1 (Sca{{ 20}})θετικά κύτταρα. (β) Ιστόγραμμα που δείχνει το ποσοστό των θετικών κυττάρων αντιγόνου βλαστοκυττάρων{-1 (Sca-1) στο περιφερικό αίμα των διαφορετικών ζωικών ομάδων. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το SD του κρέατος (σε κάθε ομάδα,{ {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Εικόνα 7: Οι επιδράσεις του συμπληρώματος διατροφής ECD στην απόπτωση και τη νέκρωση των λεμφοκυττάρων σε ηλικιωμένους ποντικούς SAM-P8. Αρσενικά ποντίκια SAM-P8 οκτώ μηνών και μάρτυρες SAM-RI χωρίστηκαν σε 5 ομάδες. Οι 3 ομάδες θεραπείας των ζώων SAM-P8 τρέφονταν για τέσσερις εβδομάδες με δίαιτες συμπληρωμένες με χαμηλές (100 mg/kg), μέτριες (500 mg/kg) και υψηλές (2500 mg/kg) δόσεις ECD και οι δύο ομάδες ζώων ελέγχου τρέφονταν με την ίδια δίαιτα χωρίς συμπληρώματα. Μετά από νηστεία για 12 ώρες, συλλέχθηκε περιφερικό αίμα από αναισθητοποιημένα ζώα και υποβλήθηκε σε ανάλυση FACS, όπως περιγράφεται στην Ενότητα 5. (α) Αντιπροσωπευτικά γραφήματα FACS των διαφορετικών ομάδων ποντικών που δημιουργήθηκαν με πύλη σε διπλά χρωματισμένα λεμφοκύτταρα αίματος με αννεξίνη V-FITC /ΠΙ. (β) Ιστόγραμμα που δείχνει το ποσοστό των αποπτωτικών λεμφοκυττάρων (θετικά κύτταρα Annexin V-FITC) στο περιφερικό αίμα των διαφόρων ζωικών ομάδων. (γ) Ιστόγραμμα που δείχνει το ποσοστό των νεκρωτικών λεμφοκυττάρων (PI-θετικά κύτταρα) στο περιφερικό αίμα των διαφόρων ζωικών ομάδων. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το SD (σε κάθε ομάδα,= 10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Εικόνα 8: Επιδράσεις του συμπληρώματος διατροφής ECD στο επίπεδο προφλεγμονώδους κυτοκίνης L6 ορού ποντικών SAM-P8. Τα αρσενικά ποντίκια SAM-P8 οκτώ μηνών και τα ποντίκια ελέγχου SAM-RI χωρίστηκαν σε 5 ομάδες. Οι 3 ομάδες θεραπείας των ζώων SAM-P8 τράφηκαν για τέσσερις εβδομάδες με δίαιτες συμπληρωμένες με χαμηλή (100mg/kg), μέτρια (500mg/ kg), και υψηλές (2500 mg/kg) δόσεις ECD, και οι δύο ομάδες ζώων ελέγχου τρέφονταν με την ίδια δίαιτα χωρίς συμπλήρωμα. Μετά από νηστεία για 12 ώρες, τα πλάσματα συλλέχθηκαν και οι κυτοκίνες του πλάσματος στις διαφορετικές ομάδες ζώων προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρική ανοσοδοκιμασία σειράς σφαιριδίων, όπως περιγράφεται στην Ενότητα 5. (α) Αντιπροσωπευτικές γραφικές παραστάσεις EACS των διαφορετικών ομάδων ποντικών που δημιουργήθηκαν από το gatingonIL-6 κυτταρομετρική σειρά σφαιριδίων. (β) Ιστόγραμμα που δείχνει τις συγκεντρώσεις της κυτοκίνης IL6 στο πλάσμα των διαφορετικών ζωικών ομάδων. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν τη μέση±SD (σε κάθε ομάδα,= 10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

ανακουφίζει από ασθένειες που σχετίζονται με την ηλικία [18]. Σε αυτό το πλαίσιο, ήταν σημαντικό ότι σε αυτή τη μελέτη το συμπλήρωμα διατροφής με ECD ήταν σε θέση να μειώσει τις συγκεντρώσεις της περιφερικής IL-6, με την έννοια ότι αυτή η επίδραση μπορεί να συμβάλει στους υποκείμενους μηχανισμούς μείωσης της συχνότητας των ασθενειών που σχετίζονται με την ηλικία που έχουν ληφθεί μέσω της μακροχρόνιας χρήσης της ECD στην κλινική πράξη.

Εκτός από τις αλλαγές στην προσαρμοστική ανοσοαπόκριση που συμβαίνουν με την ηλικία, υπάρχουν επίσης σημαντικές αλλαγές στην έμφυτη ανοσία καθώς γερνάει ο οργανισμός. Μεταξύ αυτών, οι αλλαγές στα φυσικά φονικά κύτταρα [18], την πρώτη σειρά κυτταρικών συστατικών που παρέχουν άμεση κυτταροτοξική λύση των καρκινικών κυττάρων και των μολυσμένων από ιούς κυττάρων, ήταν εκτεταμένες αφού τα ηλικιωμένα άτομα δείχνουν αυξημένη ευαισθησία τόσο στην ανάπτυξη όγκου όσο και στις λοιμώξεις από ιούς [32. ]. Αυτή η μελέτη έδειξε ότι τα κύτταρα CD3 συν Ly49 συν NK ήταν παρόντα σε σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα σε γεροντικούς ποντικούς SAM-P8 σε σύγκριση με ζώα ελέγχου SAM-R1, που μπορεί να είναι ένας άλλος υποκείμενος παράγοντας που ευθύνεται για την αυξημένη ευαισθησία των ηλικιωμένων ποντικών στον καρκίνο και τη μόλυνση από ιούς. Η αύξηση του επιπέδου των ΝΚ κυττάρων που παρατηρήθηκε σε αυτή τη μελέτη μετά από συμπλήρωμα διατροφής με ECD θα μπορούσε επομένως να είναι ευεργετική για τους ηλικιωμένους οργανισμούς όσον αφορά την αυξημένη αντίσταση στην ανάπτυξη όγκου και τη μόλυνση από ιό. Ωστόσο, απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για να διευκρινιστεί ο ρόλος της επίδρασης της ECD στα κύτταρα ΝΚ σε ηλικιωμένους οργανισμούς.

Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη έδειξε ότι η θεραπεία του επιρρεπούς στη γήρανση υποστρώματος ποντικού, SAM-P8, με ECD μπορεί να προκαλέσει σημαντική αναστροφή των αλλαγών της ανοσογήρανσης που σχετίζονται με την ηλικία. Οι ανεπάρκειες τόσο στους περιφερειακούς όσο και στους πληθυσμούς των σπληνικών κυττάρων των αφελών Τ-κυττάρων και των ΝΚ κυττάρων μειώθηκαν, ενώ τα επίπεδα των περιττών κυττάρων μνήμης μειώθηκαν επίσης. Επιπλέον, τα συμπληρώματα διατροφής με ECD ήταν σε θέση να καταστέλλουν τόσο τις νεκρώσεις στα περιφερικά λεμφοκύτταρα όσο και τα επίπεδα της προφλεγμονώδους κυτοκίνης, IL-6. Τέλος, επιπλέον, για να επιφέρει αλλαγές στο γεροντικό ανοσοποιητικό σύστημα, το συμπλήρωμα διατροφής ECD παρέτεινε σημαντικά τη διάρκεια ζωής του μικροφώνου γεροντικού SAM-P8.

βιβλιογραφικές αναφορές

[1] Y.Jiang και PF.Tu, «Ανάλυση χημικών συστατικώνCistancheείδη, "Journal of Chromatography A, vol.1216, no. 11, pp.1970-1979,2009.

[2] Q.Xiong K. Hase Y.Tezuka, T.Tani, T.Namba και SKadota. «Ηπατοπροστατευτική δράση φαινυλαιθανοειδών απόCistanche deserticola," PlataMedica, τόμος 64, αρ. 2, σελ.120-125, 1998.

[3]"Immunology and aging in Europe. Proceeding of the 2nd Conference on Basic Biology and Clinical Impact of Immunosenescence Μάρτιος 22-26, 2001, Cordoba, Ισπανία, "Experimental Gerontology, vol.37, αρ.{{5} }, σελ.183-473,2002.

[4] Γ.-Δ. Xuan και C.-Q. Liu, «Έρευνα για τοεπίδραση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών (PEG) του Cistanche deserticolaεπίαντι γήρανσησε ηλικιωμένα ποντίκια που προκαλούνται από D-γαλακτόζη,"Journal of Chinese Medicinal Materials, vol31, no 9, pp. 1385-1388,2008.

[5] D.Aw, ABSilva και DBPalmer, "Immunosenescence emerging challenges for an aging popular," Immwmology, vol.120, no.4, pp.435-446,2007.