ΜΕΡΟΣ 1 Η εχινακοσίδη προκαλεί αγγειοχαλάρωση της πνευμονικής αρτηρίας αρουραίου ανοίγοντας τα κανάλια NO-cGMP-PKG-BKCa και μειώνοντας τα επίπεδα ενδοκυτταρικού Ca2 συν

Πώς η εχινακοσίδη προκαλεί φλεβική χαλάρωση;

Xiang-Yun GAI1, 2, 3, Yu-hai WEI4, Wei ZHANG2, Ta-na WUREN2, Ya-ping WANG2, Zhan-Qiang LI2, Shou LIU2, Lan MA2, Dian-Xiang LU2, Yi ZHOU1, 2, Ri- li GE1, 2, * 1 Τμήμα Φαρμακολογίας, School of Life Science and Biopharmaceutics, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China; 2 Ερευνητικό Κέντρο για την Ιατρική Υψηλού Υψομέτρου, Ιατρικό Κολλέγιο του Πανεπιστημίου Qinghai, Xining 810001, Κίνα. 3 Φαρμακευτική Σχολή, Πανεπιστήμιο Qinghai για Εθνότητες, Xining 810007, Κίνα. 4 Γραφείο επιθεώρησης και καραντίνας εισόδου-εξόδου Qinghai, Xining 810001, Κίνα

Σκοπός:Η παρατεταμένη πνευμονική αγγειοσύσπαση όπως εμφανίζεται σε μεγάλο υψόμετρο μπορεί να οδηγήσει σε πνευμονική υπέρταση (PH). Ο κύριος σκοπός αυτής της μελέτης είναι να διερευνήσει την αγγειοχαλαρωτική επίδραση τουεχινακοσίδη(ECH), ένα φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το θιβετιανό βότανο Lagotis brevituba Maxim καιCistanche tubulosa, στην πνευμονική αρτηρία και τον πιθανό μηχανισμό της.

Μέθοδοι:Οι πνευμονικοί αρτηριακοί δακτύλιοι που ελήφθησαν από αρσενικούς αρουραίους Wistar αιωρήθηκαν σε θαλάμους οργάνων γεμάτους με διάλυμα Krebs-Henseleit και η ισομετρική τάση μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν μετατροπέα δύναμης. Τα ενδοκυτταρικά επίπεδα Ca2 συν μετρήθηκαν σε καλλιεργημένα κύτταρα λείου μυός πνευμονικής αρτηρίας αρουραίου (PASMCs) χρησιμοποιώντας Fluo 4-AM.

Αποτελέσματα: ECH(30-300 μmol/L) χαλάρωσαν τις πνευμονικές αρτηρίες αρουραίου εκ των προτέρων συσταλμένες με νοραδρεναλίνη (NE) με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση, και αυτό το αποτέλεσμα μπορούσε να παρατηρηθεί τόσο σε άθικτο ενδοθήλιο όσο και σε απογυμνωμένους από ενδοθήλιο δακτυλίους, αλλά με σημαντικά χαμηλότερη μέγιστη απόκριση και υψηλότερο EC50 σε απογυμνωμένους από ενδοθήλιο δακτυλίους. Αυτή η επίδραση αποκλείστηκε σημαντικά από τα L-NAME, TEA και BaCl2. Ωστόσο, τα IMT, 4-AP και Gli δεν ανέστειλανECH-προκαλούμενη χαλάρωση. Υπό συνθήκες εξωκυττάριου Ca2 συν χωρίς, η μέγιστη συστολή μειώθηκε σε 24,54 τοις εκατό ± 2,97 τοις εκατό και 10,60 τοις εκατό ± 2,07 τοις εκατό σε δακτυλίους που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 100 και 300 μmol/L ECH, αντίστοιχα. Υπό συνθήκες εξωκυτταρικής εισροής ασβεστίου, η μέγιστη συστολή μειώθηκε σε 112,42 τοις εκατό ± 7,30 τοις εκατό , 100,29 τοις εκατό ± 8,66 τοις εκατό και 74,74 τοις εκατό ± 4,95 τοις εκατό σε δακτυλίους που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 30, 100 και 300 μmol/L ECH, αντίστοιχα. Αφού τα κύτταρα φορτώθηκαν με Fluo 4-AM, η μέση ένταση φθορισμού ήταν χαμηλότερη στα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία μεECH(100 μmol/L) από ότι με ΝΕ.

Συμπέρασμα: ECHκαταστέλλει τη σύσπαση της πνευμονικής αρτηρίας αρουραίου που προκαλείται από ΝΕ μέσω της μείωσης των επιπέδων του ενδοκυτταρικού Ca2 plus και προκαλεί τη χαλάρωση του μέσω της οδού NO-cGMP και του ανοίγματος των καναλιών K plus (BKCa και KIR).

Λέξεις-κλειδιά:Θιβετιανό βότανο?εχινακοσίδη; πνευμονική υπέρταση; Μεγάλο υψόμετρο; αγγειοχαλάρωση; ΟΧΙ; BKCa; KIR; δακτύλιος αρτηρίας? λεία μυϊκά κύτταρα της πνευμονικής αρτηρίας.

Για περισσότερες πληροφορίες επικοινωνήστε με:Joanna.jia@wecistanche.com

Το Cistanche deserticola έχει πολλά αποτελέσματα, κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

Εισαγωγή

Η παρατεταμένη πνευμονική αγγειοσύσπαση όπως εμφανίζεται σε μεγάλο υψόμετρο μπορεί να οδηγήσει σε πνευμονική υπέρταση (PH) και έσω υπερτροφία[1], οι οποίες έχουν αναγνωριστεί ως η κύρια αιτία υπερτροφίας της δεξιάς κοιλίας και καρδιακής ανεπάρκειας[2]. Άτομα που ζουν σε μεγάλο υψόμετρο, είτε προσωρινά είτε μόνιμα, μπορεί να παρουσιάσουν ήπια έως μέτρια πνευμονική υπέρταση και τα άτομα με μεγαλύτερη ευαισθησία στην υποξία μπορεί να έχουν υπερβολική πνευμονική αγγειοσύσπαση, οδηγώντας σε διάφορες ασθένειες μεγάλου υψομέτρου που σχετίζονται με σημαντική νοσηρότητα και θνησιμότητα, όπως π. πνευμονικό οίδημα σε μεγάλο υψόμετρο και καρδιακές παθήσεις[3].Εχινακοσίδη(ECH) (Εικόνα 1) είναι αφαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιοπου βρίσκεται σε μια ποικιλία κινέζικων βοτάνων όπως το θιβετιανό βότανο Lagotis brevituba Maxim καιCistanche tubulosa[4, 5]. Το Lagos brevituba Maxim είναι ένα είδος Lagotis spp που ανήκει στα Scrophulariaceae και αναπτύσσεται ευρέως σε υψόμετρο άνω των 3000 μέτρων στο οροπέδιο Qinghai-Θιβέτ.ECHέχει διάφορα επιθυμητά φαρμακολογικά χαρακτηριστικά, όπως αντιοξειδωτικές, αντιφλεγμονώδεις, νευροπροστατευτικές, ηπατοπροστατευτικές και ιδιότητες δέσμευσης ριζών του μονοξειδίου του αζώτου (NO)[6]. Μπορεί επίσης να προκαλέσει χαλάρωση που εξαρτάται από το ενδοθήλιο σε θωρακικούς αορτικούς δακτυλίους αρουραίου και να θεραπεύσει καρδιαγγειακές παθήσεις[7]. Ωστόσο, από όσο γνωρίζουμε, δεν έχει υπάρξει μελέτη που να διερευνά τις επιπτώσεις του στον αγγειακό τόνο στις πνευμονικές αρτηρίες. Οι σκοποί αυτής της μελέτης είναι οι εξής: (1) να διερευνηθεί εάν η ECH προκαλεί in vitro αγγειοχαλάρωση σε πνευμονικές αρτηρίες αρουραίου που έχουν προσυσπασθεί με νοραδρεναλίνη (NE) και εάν αυτή η επίδραση, εάν υπάρχει, εξαρτάται από το ενδοθήλιο ή δρα απευθείας στους λείους μυς των αγγείων ; (2) για τη διερεύνηση της επίδρασης της ECH στην εξωκυτταρική εισροή ασβεστίου και την ενδοκυτταρική απελευθέρωση ασβεστίου σε κύτταρα λείου μυός των πνευμονικών αρτηριών αρουραίου (PASMCs). και (3) για τον εντοπισμό πιθανών οδών και καναλιών K plus που εμπλέκονται στην επαγόμενη από ECH χαλάρωση.

Υλικά και μέθοδοι

Αντιδραστήρια

Το ECH παρασχέθηκε ευγενικά από τον Δρ. Peng-fei TU του Πανεπιστημίου του Πεκίνου (Πεκίνο, Κίνα), με καθαρότητα μεγαλύτερη από 98 τοις εκατό όπως προσδιορίζεται από υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης. Το διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) αγοράστηκε από την Solar Science & Technology Co, Ltd (Πεκίνο, Κίνα). NE, ακετυλοχολίνη (ACh, μεγαλύτερη από ή ίση με 99 τοις εκατό), ινδομεθακίνη (IMT), υδροχλωρικός μεθυλεστέρας Nω-νιτρο-L-αργινίνης (L-NAME), χλωριούχο τετρααιθυλαμμώνιο (TEA), χλωριούχο βάριο (BaCl2), {{ 9}}αμινοπυριδίνη ({{10}}ΑΡ) και γλιβενκλαμίδη (Gli) από τη Sigma Chemical Co (St Louis, MO, ΗΠΑ). υψηλής περιεκτικότητας σε γλυκόζη Dulbecco's τροποποιημένο μέσο Eagle (DMEM), εμβρυϊκός βόειος ορός (FBS) και θρυψίνη από την Gibco BRL Co, Ltd (Gaithersburg, MD, ΗΠΑ). αντίσωμα πρωτογενούς ακτίνης λείου μυός (-SMA) ποντικού κατά των αρουραίων και δευτερογενές αντίσωμα κατσίκας κατά ποντικού από την Boshide Biotech Co, Ltd (Wuhan, Κίνα). Fluo Calcium Indicators (Fluo 4-AM) από την Invitrogen Corp (Carlsbad, CA, USA); και όλα τα ανόργανα άλατα από την Beijing Chemical Reagent Co, Ltd (Πεκίνο, Κίνα). Το IMT διαλύθηκε σε DMSO και 5 τοις εκατό NaH2PO4, Gli, Fluo 4-AM και ECH διαλύθηκαν σε DMSO και όλα τα άλλα αντιδραστήρια διαλύθηκαν σε διάλυμα Krebs-Henseleit (KH) ή PBS. Προκαταρκτικά πειράματα έδειξαν ότι το DMSO σε λιγότερο από 0,1 τοις εκατό (ο/ο) δεν είχε καμία επίδραση στην ανάπτυξη τάσης απομονωμένων δακτυλίων πνευμονικής αρτηρίας.

πειραματόζωα

Όλες οι διαδικασίες και τα πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Ιατρικού Κολλεγίου του Πανεπιστημίου Qinghai. Αρσενικοί αρουραίοι Wistar, ηλικίας 6-8 εβδομάδων, σωματικού βάρους 250-300 g, αγοράστηκαν από το Κέντρο Ζώων του Πανεπιστημίου Lanzhou (Lanzhou, Κίνα) και διατηρήθηκαν σε τυπική εργαστηριακή δίαιτα και νερό βρύσης κατά βούληση σε θερμοκρασία περιβάλλοντος 22± 2 βαθμοί και σχετική υγρασία 45 τοις εκατό -55 τοις εκατό σε όλα τα πειράματα.

In vitro αιμάτωση πνευμονικής αρτηρίας

Παρασκευή πνευμονικών αρτηριακών δακτυλίων αρουραίου

Αρουραίοι βάρους 250–300 g αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση πεντοβαρβιτάλης νατρίου (40 mg/kg) και στη συνέχεια αφαιρέθηκαν οι καρδιές και οι πνεύμονές τους και βυθίστηκαν αμέσως σε παγωμένο διάλυμα KH που περιείχε (σε mmol/L) : 118 NaCl, 4,7 KCl, 2,5 CaCl2, 1,2 MgS04·7H2O, 1,2 KH2PO4, 25 NaHC03 και 11,1 γλυκόζη (ρΗ 7,4). Οι ενδοπνευμονικές αρτηρίες (διαμέτρου 0,7-1,5 mm) αποκόπηκαν απαλλαγμένες από τον περιβάλλοντα συνδετικό ιστό και τις επιφάνειες και στη συνέχεια κόπηκαν σε δακτυλίους μήκους περίπου 2-3 ​​mm. Οι δακτύλιοι αιωρήθηκαν σε θαλάμους οργάνων γεμάτους με 10 mL διαλύματος KH στους 37 βαθμούς και αεριώθηκαν με 95 τοις εκατό O2–5 τοις εκατό CO2 [8] και η ισομετρική τάση μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν μετατροπέα δύναμης (JH-2, Space Medico -Ινστιτούτο Μηχανικών, Πεκίνο, Κίνα)

Αξιολόγηση δραστηριότητας δακτυλίου αγγείου και αξιολόγηση ενδοθηλιακής λειτουργίας

Οι δακτύλιοι των αγγείων αφέθηκαν να εξισορροπηθούν για 2 ώρες υπό βασική τάση 400 mg, κατά τη διάρκεια του οποίου το διάλυμα KH άλλαζε κάθε 15 λεπτά. Στη συνέχεια προστέθηκε 1 μmol/L NE στον θάλαμο για να εκτιμηθεί η δραστηριότητα κάθε δακτυλίου ανιχνεύοντας το ποσοστό συστολής. Πριν και μετά το πειραματικό πρωτόκολλο, μετρήθηκε το ποσοστό συστολής (Εικόνα 2Α και 2Β). Το ενδοθήλιο αφαιρέθηκε σε μερικούς δακτυλίους τρίβοντας απαλά την εσωτερική επιφάνεια με λεπτό χαλύβδινο σύρμα και η ακεραιότητα αξιολογήθηκε ποιοτικά από τον βαθμό χαλάρωσης που προκαλείται από την ACh (10 μmol/L) στο ποσοστό του συσταλτικού τόνου που προκαλείται από NE (1 μmol/L). Εάν η χαλάρωση με ACh ήταν μεγαλύτερη από 80 τοις εκατό, το ενδοθήλιο παρέμενε σε καλή κατάσταση. εάν η χαλάρωση ήταν μικρότερη από 30 τοις εκατό, το ενδοθήλιο καταστράφηκε (Εικόνα 2Α και 2Β)[9].

Απομόνωση και καλλιέργεια PASMCs αρουραίου

Οι άπω πνευμονικές αρτηρίες απομονώθηκαν από πνευμονικούς λοβούς αρουραίων και το ενδοθήλιο και η περιφυτίτιδα αφαιρέθηκαν προσεκτικά. Αφού οι ιστοί τεμαχίστηκαν σε κομμάτια {{0}}mm, προστέθηκαν αμέσως στις φιάλες, διατηρήθηκαν στους 37 βαθμούς και 5 τοις εκατό CO2 σε υγροποιημένο επωαστήρα για περίπου τέσσερις ώρες και στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν με DMEM υψηλής γλυκόζης συμπληρωμένο με 20 τοις εκατό FBS, 100 U/mL πενικιλίνης και 100 U/mL στρεπτομυκίνης για περίπου πέντε ημέρες. Το μισό από τα μέσα καλλιέργειας αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο όταν εμφανίστηκαν κύτταρα. Όταν τα κύτταρα έφτασαν στο 80 τοις εκατό συρροή, συλλέχθηκαν με 0,125 τοις εκατό θρυψίνη και σπάρθηκαν σε φιάλες (αναλογία 1:2) που περιείχαν DMEM υψηλής γλυκόζης συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό FBS, 100 U/mL πενικιλίνης και 100 U/mL στρεπτομυκίνης. . Κύτταρα με τρεις έως οκτώ διόδους χρησιμοποιήθηκαν για όλα τα πειράματα.

Αναγνώριση των PASMCs με ανοσοϊστοχημεία

Τα PASMC ήταν θετικά για ανοσοχημική χρώση όταν παρατηρήθηκαν τυπικά χαρακτηριστικά "λόφου και κοιλάδας". Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε 6-πλάκες με γυάλινες καλυπτρίδες. Όταν τα κύτταρα έφτασαν στο 80 τοις εκατό συρροή, σταθεροποιήθηκαν σε 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη, μπλοκαρίστηκαν με 3 τοις εκατό υπεροξείδιο του υδρογόνου για 15 λεπτά, και στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτεύον αντίσωμα -SMA κατά ποντικού κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 4 βαθμούς. Αφού πλύθηκαν τρεις φορές σε PBS για 10 λεπτά, τα κύτταρα επωάστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα κατσίκας κατά ποντικού σε θερμοκρασία δωματίου για 45 λεπτά, πλύθηκαν ξανά τρεις φορές σε PBS για 10 λεπτά και εμφανίστηκαν οπτικά με διαμινοβενζιδίνη.

Ανίχνευση της ενδοκυτταρικής συγκέντρωσης ασβεστίου σε PASMCs αρουραίου

Τα PASMC σπάρθηκαν σε {{{0}}πλάκες φρεατίων με γυάλινες καλυπτρίδες. Όταν τα κύτταρα έφτασαν στο 80 τοις εκατό συρροή, τα μέσα καλλιέργειας αντικαταστάθηκαν με DMEM χωρίς ορό. Είκοσι τέσσερις ώρες αργότερα, τα κύτταρα φορτώθηκαν με 7 μmol/L Fluo 4-AM στους 37 βαθμούς για 30 λεπτά σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5 τοις εκατό CO2. Η υπολειμματική βαφή πλύθηκε με διάλυμα Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS) που περιέχει τα ακόλουθα (σε mmol/L): 1,26 CaCl2, 0,49 MgCl2·6H2O, 0,41 MgSO4·7H2O, 5,33 KCl, 0,44 KH2PO4, 4,17 NaHC03, 137,93 NaCl, 0,34 Na2HPO4 και 5,56 D-γλυκόζη, χωρίς ερυθρό φαινόλης. Κύτταρα φορτωμένα με Fluo 4-AM εκτέθηκαν σε μία από τις τρεις συνθήκες θεραπείας: (1) την ομάδα ελέγχου (ομάδα con), στην οποία τα κύτταρα επωάστηκαν με DMEM χωρίς ορό. (2) η ομάδα NE, στην οποία τα κύτταρα επωάστηκαν με DMEM χωρίς ορό συμπληρωμένο με 1 μmol/L NE για 10 λεπτά. και (3) την ομάδα NE συν ECH (100 μmol/L) (ομάδα NE συν ECH100), στην οποία τα κύτταρα επωάστηκαν με DMEM χωρίς ορό συμπληρωμένο με 1 μmol/L NE για 10 λεπτά και 100 μmol/L ECH για 20 λεπτά. Η ένταση του φθορισμού παρατηρήθηκε και φωτογραφήθηκε με μικροσκόπιο φθορισμού (IX71, Olympus, Τόκιο, Ιαπωνία)[11]. Έξι οπτικά πεδία (200×) συλλέχθηκαν για κάθε δείγμα. Η ενδοκυτταρική συγκέντρωση ασβεστίου ποσοτικοποιήθηκε με μέτρηση της μέσης έντασης φθορισμού χρησιμοποιώντας το λογισμικό Image Pro-Plus 6.0.

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως η μέση τιμή±SD. Όταν μια κατάλληλη, σημαντική διαφορά αξιολογήθηκε με τη δοκιμή Dunnett ή τη δοκιμή Student-Newman-Keuls για πολλαπλές συγκρίσεις μετά από μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA). Ένα επίπεδο πιθανότητας P<0.05 was="" considered="">

Αποτελέσματα Αγγειοχαλαρωτικές επιδράσεις της ECH σε απομονωμένη πνευμονική αρτηρία

Στην αρχή του πειράματος, η αθροιστική προσθήκη ECH από 30 έως 300 μmol/L δεν είχε σημαντική επίδραση στη βασική τάση της πνευμονικής αρτηρίας. Αφού η επαγόμενη από NE αγγειοσυστολή έφτασε σε ένα επίπεδο, η ECH προστέθηκε αθροιστικά (30-300 μmol/L) στο άθικτο ενδοθήλιο (Ε συν , Εικόνα 2C) ή στους απογυμνωμένους από το ενδοθήλιο δακτυλίους (E–, Εικόνα 2C). Σε άθικτους δακτυλίους ενδοθηλίου, η αθροιστική προσθήκη ECH διεύρυνε τα αγγεία με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση, με μέγιστο

ποσοστό χαλάρωσης της μητέρας 89,22 τοις εκατό ±0,32 τοις εκατό σε 300 μmol/L και EC50 51,60±0,57 μmol/L (Εικόνα 2Α και 2Γ). Παρομοίως, σε απογυμνωμένους από ενδοθήλιο δακτυλίους, η ECH διεύρυνε επίσης τα αγγεία με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση, αλλά με σημαντικά χαμηλότερη μέγιστη απόκριση 67,72 τοις εκατό ± 1,69 τοις εκατό (P<0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings)="" and="" a="" higher="" ec50="" of="" 108.51±2.8="" μmol/l=""><0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings,="" figure="" 2b="" and="" 2c).="" the="" sustained="" plateau="" of="" the="" high-contraction="" percentage="" induced="" by="" ne="" (1="" μmol/l)="" after="" the="" experimental="" protocol="" indicated="" that="" the="" rings="" pretreated="" with="" ech="" (30–300="" μmol/l)="" had="" good="" activity="" (figure="" 2a="" and="">

Επιδράσεις της ECH στην ενδοκυτταρική απελευθέρωση ασβεστίου και στην εξωκυτταρική εισροή ασβεστίου

Οι απογυμνωμένοι από το ενδοθήλιο δακτύλιοι εκτέθηκαν σε 1 μmol/L NE μέχρι να επιτευχθεί η μέγιστη συστολή. Κάτω από εξωκυτταρικές συνθήκες χωρίς Ca2 plus, οι δακτύλιοι εξισορροπήθηκαν σε διάλυμα ΚΗ χωρίς Ca2 plus που περιείχε 0,2 mmol/L EGTA πριν από την έναρξη των πειραμάτων. Μετά από τρεις πλύσεις με διάλυμα KH χωρίς Ca2 plus - και EGTA, οι δακτύλιοι προεπωάστηκαν με ECH (30, 100 και 300 μmol/L) για 20 λεπτά και στη συνέχεια εκτέθηκαν ξανά σε 1 μmol/L NE. Τα δαχτυλίδια παράγονται

μη παρατεταμένες συσπάσεις που επέστρεψαν γρήγορα στην αρχική τους τιμή, σε σύγκριση με τις αρχικές συσπάσεις που προκλήθηκαν από τη ΝΕ, η οποία χρησίμευσε ως αναφορά. Η μέγιστη συστολή του μάρτυρα ήταν 33,27 τοις εκατό ± 2,94 τοις εκατό (Εικόνα 3Α και 3Ε) αλλά μειώθηκε σημαντικά σε 24,54 τοις εκατό ±2,97 τοις εκατό και 10,60 τοις εκατό ±2,07 τοις εκατό σε δακτυλίους που είχαν υποστεί προεπεξεργασία με 100 και 300 μmol/L ECH, αντίστοιχα<0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3c–3e).="" under="" extracellular="" calcium="" influx="" conditions,="" 2.5="" mmol/l="" cacl2="" was="" added="" to="" the="" chamber="" when="" the="" curve="" reached="" a="" plateau.="" the="" control="" group="" produced="" sustained="" contractions,="" with="" a="" maximum="" contraction="" of="" 139.89%±7.38%="" (figure="" 3a="" and="" 3e);="" but="" the="" maximum="" contraction="" was="" significantly="" reduced="" to="" 112.42%±7.30%,="" 100.29%±8.66%,="" and="" 74.74%±4.95%="" in="" rings="" pretreated="" with="" 30,="" 100,="" and="" 300="" μmol/l="" of="" ech,="" respectively=""><0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3b–3e).="" under="" these="" conditions,="" the="" maximal="" effect="" caused="" by="" ech="" was="" more="" pronounced="" with="" 300="" μmol/l="" than="" with="" 100="" or="" 30="" μmol/l=""><0.01 vs="" 30="" or="" 100="" μmol/l="" ech="" group).="" different="" concentrations="" of="" ech="" all="" shortened="" the="" platform="" of="" sustained="" contraction,="" which="" was="" induced="" by="" extracellular="" calcium="" influx="" at="" different="" levels="" (figure="">

Ρόλος διαφορετικών αναστολέων στην επαγόμενη από ECH αγγειοχαλάρωση πνευμονικής αρτηρίας αρουραίου

Η επαγόμενη από ECH αγγειοχάλαση της πνευμονικής αρτηρίας επίμυος διερευνήθηκε παρουσία ή απουσία των ακόλουθων αναστολέων: L-NAME (αναστολέας eNOS), IMT (αναστολέας κυκλοοξυγενάσης), TEA (μεγάλης αγωγιμότητας Ca2 συν ενεργοποιημένος αναστολέας καναλιού K συν), BaCl2 ( προς τα μέσα ανορθωτή K συν αναστολέας καναλιού), 4-AP (εξαρτώμενος από την τάση αναστολέας καναλιού K συν) και Gli (ευαίσθητος σε ATP αναστολέας καναλιού K συν). Οι δακτύλιοι συστέλλονται στο μέγιστο με 1 μmol/L NE και στη συνέχεια L-NAME (100 μmol/L), IMT (10 μmol/L), TEA (1 mmol/L) Προστέθηκαν BaCl2 (1 mmol/L), 4-AP (1 mmol/L) ή Gli (10 μmol/L), αντίστοιχα. Μόλις επιτευχθεί ένα νέο οροπέδιο, το ECH προστέθηκε με αθροιστικό τρόπο από 30 έως 300 μmol/L. Οι καμπύλες συγκέντρωσης-απόκρισης παρουσία διαφορετικών αναστολέων φαίνονται στο Σχήμα 4. Η αγγειοχαλαρωτική επίδραση της ECH στους πνευμονικούς αρτηριακούς δακτυλίους που συστέλλονται με 1 μmol/L NE παρεμποδίστηκε σημαντικά από το L-NAME (100 μmol/L), το TEA ( 1 mmol/L) και BaCl2 (1 mmol/L), με μέγιστες χαλαρώσεις 64,41 τοις εκατό ±3,20 τοις εκατό , 84,38 τοις εκατό ±0,70 τοις εκατό και 75,27 τοις εκατό ±0,93 τοις εκατό, αντίστοιχα (Ρ<0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 89.22%±0.32%),="" and="" the="" values="" of="" ec50="" were="" increased="" to="" 197.32±2.75="" μmol/l,="" 91.42±2.11="" μmol/l,="" and="" 115.49±1.75="" μmol/l,="" respectively=""><0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 51.60±0.57="" μmol/l)="" (table="" 1).="" however,="" imt="" (10="" μmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l)="" did="" not="" inhibit="" the="" ech-induced="" relaxation="" (figure="" 4="" and="" table="" 1).="" to="" validate="" the="" effects="" of="" these="" inhibitors="" on="" ech-induced="" relaxation,="" the="" rings="" precontracted="" with="" 1="" μmol/l="" of="" ne="" were="" treated="" with="" l-name="" (100="" μmol/l),="" imt="" (10="" μmol/l),="" tea="" (1="" mmol/l),="" bacl2="" (1="" mmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l).="" after="" a="" new="" plateau="" was="" reached,="" ech="" was="" added="" to="" the="" chamber="" at="" a="" single="" concentration="" of="" 300="" μmol/l="" rather="" than="" in="" a="" cumulative="" manner.="" the="" maximum="" relaxation="" was="" reduced="" to="" 56.33%±0.90%,="" 82.21%±0.92%,="" and="" 72.16%±0.76%="" following="" the="" addition="" of="" l-name,="" tea,="" and="" bacl2,="">

Ταυτοποίηση PASMCs αρουραίου

At low magnification, spindle cells were densely packed, and almost all the cells were stained positively for PASMCs (the PASMC purity was >95 τοις εκατό) (Εικόνα 6Α). Καφέ-χρωματισμένα μυοινίδια παρατηρήθηκαν ξεκάθαρα στο κυτταρόπλασμα σε υψηλή μεγέθυνση (Εικόνα 6Β).

Cistancheεχινακοσίδημπορεί να αντισταθείαπόπτωση

Επίδραση της ECH στην ενδοκυτταρική συγκέντρωση ασβεστίου σε PASMCs αρουραίου

Το NE (1 μmol/L) αύξησε σημαντικά την ενδοκυτταρική συγκέντρωση ασβεστίου (n=6, P<0.01 vs="" the="" control="" group)="" in="" rat="" pasmcs,="" and="" ech="" could="" decrease="" the="" mean="" fluorescence="" intensity="" (n="6,"><0.01 vs="" the="" ne="" group)="" (figure="">