Το οξειδωτικό στρες είναι ένας από τους σημαντικούς προδρόμους διαφόρων μεταβολικών ασθενειών Μέρος 2

Παρακαλώ επικοινώνησεoscar.xiao@wecistanche.comΓια περισσότερες πληροφορίες

3. Συζήτηση

Οι ελεύθερες ρίζες μπορεί να επιτεθούν σε πρωτεΐνες, λιπίδια ή DNA για να αποκτήσουν ένα ηλεκτρόνιο, με αποτέλεσμα διάφορα προβλήματα υγείας. Για το λόγο αυτό, είναι απαραίτητο να εξισορροπηθεί το αντιοξειδωτικό σύστημα του σώματος και οι ελεύθερες ρίζες που σχηματίζονται από την οξείδωση. Σε περίπτωση επιδείνωσης αυτής της ισορροπίας, προκύπτει οξειδωτικό στρες [29]. Το οξειδωτικό στρες είναι ένας από τους κύριους παράγοντες που οδηγεί σε διάφορες χρόνιες διαταραχές όπως ο καρκίνος, ο διαβήτης, οι καρδιαγγειακές παθήσεις, η νόσος Alzheimer κ.λπ. Ενώ υπάρχουν αυτο-αντιοξειδωτικά συστήματα στο ανθρώπινο σώμα για την καταπολέμηση της οξειδωτικής βλάβης σε ιστούς και όργανα, Τα συστήματα μπορεί να χάσουν την αποτελεσματικότητά τους λόγω διαφορετικών συνθηκών όπως η υπερκατανάλωση αλκοόλ, το κάπνισμα, το άγχος, η χρόνια χρήση ναρκωτικών και η ακτινοβολία κ.λπ. [30]. Διάφορες επιστημονικές αναφορές έχουν δείξει ότι οι δευτερογενείς μεταβολίτες των φυτών παίζουν σημαντικό ρόλο στην πρόληψη του οξειδωτικού στρες και των επιβλαβών επιπτώσεών του [13,14,31] Παρόλο που η βιοδιαθεσιμότητα είναι μια σημαντική παράμετρος που επηρεάζει τη βιοδραστικότητα αυτών των ενώσεων, δεν έχει ληφθεί υπόψη οι περισσότερες μελέτες. Ωστόσο, είναι ευρέως γνωστό ότι οι δευτερογενείς μεταβολίτες υπόκεινται σε δομικούς μετασχηματισμούς λόγω διαφορετικών συνθηκών pH, ενζυματικής δραστηριότητας και θερμοκρασίας σώματος στο γαστρεντερικό σύστημα. Επιπλέον, τα χημικά χαρακτηριστικά των δευτερογενών μεταβολιτών όπως το μοριακό βάρος, η πολικότητα και ο βαθμός δέσμευσης με μακρομόρια στη φυτική μήτρα είναι επίσης σημαντικοί παράγοντες που επηρεάζουν τη βιοδιαθεσιμότητά τους [13]. Κατά συνέπεια, η απορρόφηση των ενώσεων ή των μεταβολιτών τους στην κυκλοφορία του αίματος μόλις καταποθούν είναι απαραίτητη προκειμένου να ασκήσουν τα συστηματικά φυσιολογικά τους αποτελέσματα. Τα μοντέλα προσομοίωσης πέψης in vitro μπορεί να παρέχουν στοιχεία για την αξιολόγηση των πιθανών χαρακτηριστικών βιοδιαθεσιμότητας των ουσιών. Ενώ η επιβεβαίωση σε δοκιμές σε ανθρώπους είναι απαραίτητη για τη διεκδίκηση οποιασδήποτε λειτουργικής ιδιότητας, τα μοντέλα προσομοίωσης in vitro χρησιμοποιούνται ευρέως ως εναλλακτικές σε in vivo μελέτες ή δοκιμές σε ανθρώπους, οι οποίες είναι συχνά συζητήσιμες από ηθική άποψη, απαιτούν πόρους, δαπανηρές και χρονοβόρες [32].

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

Αρκετοί ερευνητές έχουν επίσης διερευνήσει το αντιοξειδωτικό δυναμικό εκχυλισμάτων που παρασκευάζονται από διαφορετικά όργανα των ειδών Cistus. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφική έρευνα, αυτή είναι η πρώτη μελέτη σε είδη Cistus σχετικά με τη βιοδιαθεσιμότητα των φαινολικών ουσιών και την επίδρασή τους στην αντιοξειδωτική δράση με τη χρήση ενός in vitro μοντέλου προσομοίωσης πέψης. Karas et al. [33] πρότεινε ότι το 10 τοις εκατό των πολυφαινολικών συστατικών παραμένουν άπεπτα στη φυτική μήτρα και το 90 τοις εκατό από αυτά υποβάλλονται σε πέψη στη γαστρική ή εντερική φάση (περίπου 48 τοις εκατό και 52 τοις εκατό, αντίστοιχα). Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, όλες οι φαινολικές ποσότητες στα υδατικά εκχυλίσματα επηρεάστηκαν αρνητικά από την in vitro διαδικασία προσομοίωσης της ανθρώπινης πέψης. Έτσι, ανιχνεύθηκαν σημαντικές απώλειες στο φαινολικό περιεχόμενο των βιοδιαθέσιμων δειγμάτων όλων των εκχυλισμάτων. Επιπλέον, οι συνολικές συγκεντρώσεις προανθοκυανιδίνης των δειγμάτων IN ήταν κάτω από το όριο ανίχνευσης σε όλα τα υδατικά εκχυλίσματα. Διάφορες μελέτες προκάλεσαν επίσης την αρνητική επίδραση της διαδικασίας πέψης στις φαινολικές ενώσεις των φυτικών εκχυλισμάτων και συνεπώς στις σχετικές βιοδραστηριότητες. Για παράδειγμα, αναφέραμε το συνολικό φαινολικό περιεχόμενο του Salvia virgata Jacq. επηρεάστηκε επίσης αρνητικά από τη διαδικασία πέψης στην προηγούμενη μελέτη μας Επιπλέον, οι ποσότητες των κύριων μεταβολιτών του εκχυλίσματος, δηλαδή της ρουτίνης και του ροσμαρινικού οξέος, έτειναν να μειώνονται [13]. Αντίθετα, αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει αντιφατικά αποτελέσματα. Στη μελέτη των Celeb et al. [34], παρατήρησαν την αύξηση των ποσοτήτων ολικού φαινολικού οξέος, φλαβονοειδών και φαινολικών στα βιοδιαθέσιμα δείγματα μεθανολικού εκχυλίσματος από Hypericum perfoliatum L. Στην πραγματικότητα, οι κύριοι μεταβολίτες, η κερκιτρίνη, το χλωρογενικό και το γαλλικό οξύ, είχαν αναλογίες βιοπροσβασιμότητας πάνω από 10 τοις εκατό . Αυτές οι μελέτες έδειξαν ότι τα αποτελέσματα της διαδικασίας πέψης μπορεί να διαφέρουν ανάλογα με τα φυτικά υλικά. Προκειμένου να διευκρινιστούν αυτές οι διαφορές, είναι απαραίτητο να εξεταστεί ο μηχανισμός δράσης του πεπτικού συστήματος στις φαινολικές ουσίες. (οφέλη από τα βιοφλαβονοειδή) Serra et al.[35] πρότεινε ότι οι φαινολικές ενώσεις βρίσκονται κυρίως σε γλυκοσίδες, πολυμερή και μορφές εστέρων στη φυτική μήτρα και υδρολύονται στο πεπτικό σύστημα πριν από την απορρόφηση. Διάφοροι παράγοντες μπορεί να επηρεάσουν τους δομικούς μετασχηματισμούς των φαινολικών ενώσεων στο γαστρεντερικό σωλήνα. Για παράδειγμα, ενώσεις με υψηλότερο μοριακό βάρος, όπως οι προανθοκυανιδίνες ή οι προκυανιδίνες, πρέπει να υδρολύονται πριν απορρόφηση στο έντερο. Η δομή της φυτικής μήτρας είναι επίσης ένας σημαντικός παράγοντας στη βιοδιαθεσιμότητα των φαινολικών. (αγοράστε κιστανάκι) οι φαινολικές ενώσεις μπορούν να συνδεθούν με μακρομόρια της φυτικής μήτρας, όπως ίνες, πρωτεΐνες και μόρια λιπιδίων. Έτσι, μόνο τα απελευθερωμένα φαινολικά συστατικά από τη μήτρα μπορούν να γίνουν απορροφήσιμα από τη γαστρεντερική οδό. Επιπλέον, οι διαφορετικές τιμές pH και οι ενζυμικές δράσεις της εντερικής μικροχλωρίδας είναι μεταξύ των άλλων κρίσιμων παραγόντων που επηρεάζουν τον μετασχηματισμό στη χημική δομή των φαινολικών ενώσεων [36]. Υπό το φως αυτών των δεδομένων, μπορούμε να υποθέσουμε ότι διαφορετικά αποτελέσματα που λαμβάνονται από παρόμοιους τύπους πειραματικών μελετών μπορεί να οφείλονται στην πολυπλοκότητα του συστήματος πέψης και στη σύνθεση της φυτικής μήτρας. Όπως παρουσιάζεται στον Πίνακα 3, τα βιοδιαθέσιμα δείγματα εκχυλισμάτων Cistus εμφάνισαν ασθενέστερη αντιοξειδωτική δράση από τα μη χωνευμένα και μεταγαστρικά αντίστοιχα λόγω της χαμηλότερης περιεκτικότητάς τους σε φαινολικά.

Cistancheμπορώβελτίωση της ανοσίας

Επιπλέον, και τα δύο εκχυλίσματα του C.saluifolius εμφάνισαν καλύτερη αντιοξειδωτική δράση σε προσδιορισμούς DPPH, CUPRAC, FRAP και TOAC σε σύγκριση με άλλα είδη. Εκτός αυτού, και τα δύο εκχυλίσματα του C.paroifforus έδειξαν υψηλότερη δραστικότητα σάρωσης ριζών DMPD από τα εκχυλίσματα άλλων ειδών. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, τα ολικά φαινολικά, φλαβονοειδή,cistanche bienfaitsκαι οι περιεκτικότητες σε φαινολικό οξύ του C. salviifolius ήταν υψηλότερες από ό,τι στα άλλα δείγματα. Έτσι, το υψηλότερο αντιοξειδωτικό δυναμικό των εκχυλισμάτων C. salviifolius μπορεί να σχετίζεται με το φαινολικό του περιεχόμενο.

Επιπλέον, η μείωση των αντιοξειδωτικών δυνατοτήτων, των ανασταλτικών δραστηριοτήτων σε ένζυμα που σχετίζονται με υδατάνθρακες και AGEs των βιοδιαθέσιμων δειγμάτων μπορεί να σχετίζονται με τη μείωση των φλαβονοειδών γλυκοσιδίων δεικτών. Ωστόσο, τα εκχυλίσματα Cistus περιείχαν και άλλες φαινολικές ουσίες, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1. Επομένως, απαιτείται λεπτομερής χρωματογραφική ανάλυση των εκχυλισμάτων για την παρακολούθηση της επίδρασης της πέψης στη βιολογική δραστηριότητα.

Το ανασταλτικό δυναμικό των φυτικών εκχυλισμάτων σε πεπτικά ένζυμα έχει προσελκύσει πρόσφατα περισσότερη προσοχή λόγω της ανησυχίας για την ασφάλεια των συνθετικών αναστολέων. Ως εκ τούτου, η ανασταλτική δράση των φυτικών εκχυλισμάτων προσδιορίστηκε σε αρκετές μελέτες, και αυτή η επίδραση γενικά συσχετίστηκε με φαινολικές ουσίες όπως φλαβονοειδή, φαινολικά οξέα, προανθοκυανιδίνες, κ.λπ. Sun et al. [37] πρότεινε ότι οι πολυφαινολικές ενώσεις εμφανίζουν τα ανασταλτικά τους αποτελέσματα δεσμεύοντας με τα ένζυμα που αναφέρονται παραπάνω με τη βοήθεια υδρόφοβων δυνάμεων και μη ομοιοπολικών δεσμών. Επομένως, η αναστολή της δραστικότητας του ενζύμου ο-αμυλάσης και α-γλυκοσιδάσης από τις πολυφαινόλες σχετίζεται με τις μοριακές τους δομές. Ενώ αυτός ο μηχανισμός αλληλεπίδρασης έχει μελετηθεί με τη χρήση διαφορετικών τεχνικών όπως η κινητική αναστολής, η μοριακή σύνδεση, η απόσβεση φθορισμού κ.λπ., δεν έχει ακόμη εξαχθεί κανένα σίγουρο συμπέρασμα [38]. Ωστόσο, πολυάριθμες μελέτες έχουν αναφέρει ότι οι αναστολές των πεπτικών ενζύμων των φυτικών εκχυλισμάτων σχετίζονται άμεσα με το φαινολικό τους περιεχόμενο. Παρόμοιες μελέτες σχετικά με την ανασταλτική δράση των ενζύμων των ειδών Cistus έχουν επίσης αναφερθεί στο παρελθόν. Οι Sayah et al. [39] διερεύνησε τις ανασταλτικές δραστηριότητες -αμυλάσης και -γλυκοσιδάσης του 8{10}} τοις εκατό μεθανολικών και υδατικών εκχυλισμάτων από C. monspeliensis και C. saluifolius. Τα αποτελέσματά τους ήταν σύμφωνα με την παρούσα μελέτη, αποκαλύπτοντας ότι το υδατικό εκχύλισμα C. salvifolius παρουσίασε υψηλότερη ο-γλυκοσιδάση (ICso ug/mL:0.95±0.14) και -αμυλάση(IC5{ {55}} ug/mL:217,1±0,15) ανασταλτική δράση από το υδατικό εκχύλισμα C. monspeliensis (IC50 ug/mL∶ 14,58±1,26) και (IC50 4g/mL:886,10±0,1), αντίστοιχα. Οι ανασταλτικοί ρυθμοί και των δύο υδατικών εκχυλισμάτων σε αυτά τα ένζυμα ήταν υψηλότεροι από την ένωση αναφοράς ακαρβόζη (ICso ug/mL:18,01±2.00) Παρόμοια με τη μελέτη μας, βρήκαν συσχέτιση με τα ποσοστά αναστολής ενζύμων και το συνολικό ποσότητες φαινολικών και φλαβονοειδών. Τόσο η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικό όσο και η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή του υδατικού εκχυλίσματος C. saloijfolius (408,43±1,09 mg GAE και 140.{39}}±1,15 RE, αντίστοιχα) ήταν υψηλότερες από το υδατικό εκχύλισμα C.monspeliensis (261,76±1,9mg GAE και 1,9m 78.00±1,15 RE αντίστοιχα). Orhan et al. [40] διερεύνησε επίσης τις ανασταλτικές δυνατότητες του πεπτικού ενζύμου 80 τοις εκατό υδατικών και αιθανολικών εκχυλισμάτων από τα φύλλα του C.laurifolius. Σύμφωνα με τα αποτελέσματά τους, το 80 τοις εκατό αιθανολικό εκχύλισμα (71,7 τοις εκατό ± 0,6) εμφάνισε ισχυρή ανασταλτική δράση της αμυλάσης σε σύγκριση με το υδατικό εκχύλισμα (39,3 τοις εκατό ± 2,2) σε συγκέντρωση 1 mg/mL. Πρότειναν ότι οι φαινολικές ενώσεις, ειδικά τα φλαβονοειδή, επηρεάζουν άμεσα την έκκριση ινσουλίνης αποτρέποντας την απόπτωση των βήτα κυττάρων και υποστηρίζοντας την αντιδιαβητική δραστηριότητα. Αυτή η υπόθεση, που συσχετίζεται με τα αποτελέσματά μας, σηματοδοτεί ότι το δείγμα ND υδατικών εκχυλισμάτων του C. salviifolius άσκησε την υψηλότερη συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή και φαινολικά και τις μεγαλύτερες ανασταλτικές δραστηριότητες -αμυλάσης και ο-γλυκοσιδάσης. Όπως δίνεται στον Πίνακα 4, το υδατικό εκχύλισμα του C. salviifolius εμφάνισε καλύτερες ανασταλτικές δραστηριότητες σε πεπτικά ένζυμα από τα άλλα εκχυλίσματα. Επιπροσθέτως,cistanche χοληστερόληΤα δείγματα IN των υδατικών εκχυλισμάτων περιείχαν χαμηλότερες ποσότητες φαινολικών και φλαβονοειδών από τα δείγματα ND και έτσι αποκάλυψαν χαμηλότερες ανασταλτικές δραστηριότητες ενζύμων στην παρούσα εργασία. Ενώ τα φαινολικά περιεχόμενα των εκχυλισμάτων επηρεάστηκαν αρνητικά από τη διαδικασία πέψης, εξακολουθούσαν να παρουσιάζουν σημαντική ανασταλτική δράση του πεπτικού ενζύμου. Σε αρκετές μελέτες, οι φλαβονοειδή γλυκοσίδες αναφέρθηκαν ως οι κύριοι μεταβολίτες φυτικών εκχυλισμάτων με ισχυρά ανασταλτικά δυναμικά -αμυλάσης και γλυκοσιδάσης[41-43]Ενώ ο ανασταλτικός μηχανισμός των φαινολικών ενώσεων στα πεπτικά ένζυμα δεν έχει ακόμη αποκαλυφθεί, η δομή- Έχουν διεξαχθεί μελέτες σχέσης δραστηριότητας σε ορισμένα φαινολικά συστατικά όπως τα φλαβονοειδή, τα φαινολικά οξέα, οι προανθοκυανιδίνες και οι τανίνες. Μελέτες σχέσης δομής-δραστικότητας σχετικά με τα φλαβονοειδή έδειξαν ότι ο διπλός δεσμός C2=C3 του δακτυλίου C ενισχύει το δυναμικό αναστολής του πεπτικού ενζύμου τέτοιων ενώσεων. Δεδομένου ότι αυτός ο δεσμός αυξάνει την πυκνότητα των ηλεκτρονίων, η ισχύς της αλληλεπίδρασης μεταξύ του φλαβονοειδούς και του ενζύμου αυξάνεται [44]. Επιπλέον, οι ομάδες υδροξυλίου στο C-5 και το C-7 διευκολύνουν το ανασταλτικό δυναμικό της αμυλάσης των φλαβονοειδών. Προτάθηκε επίσης ότι η υδροξυλίωση του σκελετού των φλαβονοειδών επηρεάζει θετικά τις ανασταλτικές τους δυνατότητες ενζύμων α-αμυλάσης και -γλυκοσιδάσης[45]. Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, όλα τα φλαβονοειδή-δείκτες στην παρούσα μελέτη ήταν γλυκοσίδες φλαβονόλης που έφεραν αυτές τις δομικές απαιτήσεις που περιγράφονται παραπάνω. Ωστόσο, μετά τη διαδικασία πέψης in vitro, οι σχετικές δραστηριότητές τους μειώθηκαν σημαντικά σε βιοδιαθέσιμα δείγματα των υδατικών εκχυλισμάτων.

Γενικά, το ανασταλτικό δυναμικό των φυτικών εκχυλισμάτων στα AGEs σχετίζεται με διάφορους παράγοντες, π.χ. το φαινολικό τους περιεχόμενο, τις αντιοξειδωτικές δυνατότητες, τις ικανότητες χηλοποίησης μετάλλων, τις πρωτεϊνικές αλληλεπιδράσεις και τις δραστηριότητες αποκλεισμού των υποδοχέων AGE [13]. Όπως παρουσιάζεται στον Πίνακα 4, τα βιοδιαθέσιμα δείγματα των υδατικών εκχυλισμάτων εμφάνισαν χαμηλότερες ανασταλτικές AGE δραστικότητες σε σύγκριση με τα δείγματα ND αφού η διαδικασία πέψης in vitro επηρέασε αρνητικά την περιεκτικότητα σε φαινολικά των εκχυλισμάτων. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα της τρέχουσας μελέτης, το δείγμα ND υδατικού εκχυλίσματος C. (cistanche και tongkat ali reddit) Το saluifolius κατείχε την υψηλότερη ανασταλτική δράση AGE καθώς και ολική περιεκτικότητα σε φαινολικά και φλαβονοειδή. Συγκριτικά, το IN δείγμα υδατικού εκχυλίσματος C. monspeliensis έδειξε το ασθενέστερο δυναμικό αναστολής AGE, το οποίο μπορεί να αποδοθεί στη χαμηλότερη συνολική περιεκτικότητά του σε φλαβονοειδή και φαινολικά. Δεδομένου ότι τα φλαβονοειδή έχουν ευρεία κατανομή σε φυτικά εκχυλίσματα, φρούτα, λαχανικά και ποτά, αρκετές μελέτες έχουν ενταθεί σχετικά με τη δυνατότητα αναστολής των φλαβονοειδών στους σχηματισμούς AGE. Τα ίδια φλαβονοειδή που αποδίδονται ως φαινολικά δείκτες σε αυτήν τη μελέτη αναφέρθηκαν επίσης ως ενώσεις-δείκτες σε άλλες μελέτες[46-48].

Παρόμοια με την αναστολή του πεπτικού ενζύμου, οι ανασταλτικές δραστηριότητες AGE των φλαβονοειδών διεγέρθηκαν από τον διπλό δεσμό C2=C3 και την υδροξυλίωση των δακτυλίων Α και C. Ωστόσο, η προσκόλληση σακχάρου στον σκελετό των φλαβονοειδών οδηγεί σε μειωμένη ανασταλτική δραστηριότητα [49]. Από την άλλη, οι Cervantes-Lauren et al.[50] πρότεινε ότι η φλαβον-3-των γλυκοσιδών είχε μεγαλύτερο δυναμικό αναστολής της AGE από τους άλλους φλαβονοειδείς γλυκοσίδες. Αυτή η υπόθεση μπορεί να είναι μια εξήγηση για τη μειωμένη αναστολή AGE σε βιοδιαθέσιμα δείγματα. Για παράδειγμα, η κερκιτρίνη και η υπεροσίδη δεν ανιχνεύθηκαν σε βιοδιαθέσιμα δείγματα του υδατικού εκχυλίσματος του C.monspeliensis, γεγονός που είναι ο λόγος για τη χαμηλότερη δραστηριότητα των δειγμάτων IN του C. monspeliensis σε σύγκριση με τα εκχυλίσματα άλλων ειδών. Παρόλο που η κερκιτρίνη δεν ανιχνεύθηκε στο υδατικό εκχύλισμα του C. saloifolius, σημαντικά υψηλότερες ποσότητες υπεροσίδης και σαλιδροζίτης μπορεί να είναι η αιτία της υψηλής αναστολής της AGE. Γενικά, παρατηρήθηκε θετική συσχέτιση μεταξύ της περιεκτικότητας σε φλαβονοειδή δείκτη των δειγμάτων και των ανασταλτικών τους δυνατοτήτων στα AGEs.

4. Υλικό και Μέθοδοι

4.1.Χημικά

Όλες οι αναφορές, τα ένζυμα και οι χημικές ουσίες που χρησιμοποιήθηκαν στα πειράματα αγοράστηκαν από τη Sigma Chemical Co. (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Στα πειράματα χρησιμοποιήθηκαν υλικά αναλυτικής ποιότητας.

4.2.Δείγματα φυτών

Τα εναέρια μέρη του C.creticus και του C.saloifolius συγκεντρώθηκαν από την πανεπιστημιούπολη του Πανεπιστημίου Yeditepe (Kayisdagi, Κωνσταντινούπολη) την τελευταία εβδομάδα του Απριλίου 2018. Εναέρια μέρη του C.mon-speliensis και του C. paroiflorus συγκεντρώθηκαν από κοντά στο Alacant Kutlu Aktas Balaji, Cesme, Izmir τη δεύτερη εβδομάδα του Μαΐου 2018. Εναέρια μέρη του C. laurifolius συλλέχθηκαν από τον δρόμο Kemer-Doganhisar, Ικόνιο, την πρώτη εβδομάδα του Ιουνίου 2018. Ο καθηγητής Dr. Erdem Yesilada επικύρωσε τα φυτικά υλικά. Δείγματα κουπονιών για το C. creticus (YEF18013), το C. Lauri folium (YEF18017), το C.monspeliensis (YEF18015), το C.paroiflorus (YEF18016) και το C.salvifolius (YEF18014) αποθηκεύτηκαν στο Herbarharmacognosy του Τμήματος Φαρμακευτικής, Πανεπιστήμιο Yeditepe, Κωνσταντινούπολη, Τουρκία. 4.3.Διαδικασία εξαγωγής

Η υδατική εκχύλιση επιλέχθηκε καθώς χρησιμοποιείται ευρέως ως τεχνική παρασκευής στην παραδοσιακή ιατρική. Τα χονδροειδή ξηρανθέντα στον αέρα και κονιοποιημένα εναέρια μέρη του είδους Cistus (100 g) εκχυλίστηκαν με ζεστό απεσταγμένο νερό (80 βαθμοί, 1,5 L) χρησιμοποιώντας μια συσκευή ανακίνησης για 15 λεπτά. Στη συνέχεια, τα υδατικά εκχυλίσματα διηθήθηκαν μέσω διηθητικού χαρτιού και εξατμίστηκαν μέχρι ξηρού υπό μειωμένη πίεση. Μετά την ολοκλήρωση της διαδικασίας λυοφιλοποίησης, τα εκχυλίσματα διαλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό για περαιτέρω επεξεργασία (μη χωνεμένο δείγμα: ND) (η απόδοση των εκχυλισμάτων: 13,04 τοις εκατό για το C.creticus, 15,7 τοις εκατό για το C.laurifolus, 12,8 τοις εκατό για το C.monspeliensis ,14,94 τοις εκατό για το C.parviflorus, 14,74 τοις εκατό για το C.salvifolius). 4.4. In vitro Μέθοδος Προσομοίωσης Ανθρώπινης Πέψης

Το μοντέλο προσομοίωσης ανθρώπινης πέψης εφαρμόστηκε σε δείγματα Cistus in vitro, ακολουθώντας τη μέθοδο που αναφέρθηκε νωρίτερα από τους Celeb et al.[34]. Πρώτον, 1 g NaCl και 1,6 g πεψίνης διαλύθηκαν σε 500 mL απεσταγμένου νερού για να ληφθεί ένα προσομοιωμένο διάλυμα γαστρικού υγρού (SGF). αναμίχθηκε με 2,5 mL φυτικών δειγμάτων και αυτό το μίγμα τοποθετήθηκε στο αναδευόμενο υδατόλουτρο στους 37 βαθμούς για 2 ώρες για να μιμηθεί τις περισταλτικές κινήσεις του συστήματος πέψης. Μετά από 2 ώρες, τα δείγματα τοποθετήθηκαν σε λουτρό πάγου για να αδρανοποιηθούν οι ενζυμικές αντιδράσεις· 2 mL των δειγμάτων αφέθηκαν στην άκρη ως "μεταγαστρικό" (PG) δείγμα για περαιτέρω πειράματα. Μια κυτταρινική μεμβράνη αιμοκάθαρσης φορτωμένη με κατάλληλη ποσότητα NaHC03 (1 Μ, pH7) εντοπίστηκε στα ψυχρά διαλύματα δείγματος. Έτσι, μιμήθηκε η γαστρεντερική απορρόφηση. Στη συνέχεια, 4,5 mL διαλύματος χολικών οξέων/παγκρεατίνης συνδυάστηκαν με τα διαλύματα και το μίγμα επωάστηκε για άλλες 2 ώρες στους 37 βαθμούς. Τέλος, το υγρό εντός της μεμβράνης αιμοκάθαρσης αποκτήθηκε ως το «βιοδιαθέσιμο» δείγμα (ΙΝ). Μετά το πέρας της διαδικασίας, όλα τα δείγματα διατηρήθηκαν σε -20 βαθμό για περαιτέρω πειράματα. 4.5. Εκτίμηση in vitro του φαινολικού προφίλ 4.5.1. Προσδιορισμός Ολικού Φαινολικού Περιεχομένου Ο φασματοφωτομετρικός προσδιορισμός της συνολικής περιεκτικότητας σε φαινολικά δείγματα διεξήχθη σε 96-πρότυπο πλάκας φρεατίου σύμφωνα με τη μέθοδο που αναφέρθηκε προηγουμένως από τους Barak et al.【32】;75 uL NagCO3 (20 τοις εκατό σε H2O ） προστέθηκε σε 20 μL πρόσφατα παρασκευασμένου δείγματος και διαλυμάτων αναφοράς. Στη συνέχεια, 100 μL αντιδραστηρίου Folin-Ciocalteu συνδυάστηκαν με το μείγμα. Μετά από περίοδο επώασης 30 λεπτών σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 690 nm. Το γαλλικό οξύ χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για τη δημιουργία μιας καμπύλης βαθμονόμησης και τα συνολικά περιεχόμενα φαινολών εκφράστηκαν ως ισοδύναμα γαλλικού οξέος (GAE). 4.5.2. Προσδιορισμός ολικού περιεχομένου φλαβονοειδών Ο φασματοφωτομετρικός προσδιορισμός της συνολικής περιεκτικότητας σε φλαβονοειδή των δειγμάτων έγινε σε ένα 96-πρότυπο πλακός φρεατίου σύμφωνα με τη μέθοδο που εξηγήθηκε προηγουμένως από τους Bardakci et al. 【51】;150 μL αιθανόλης 75 τοις εκατό, 10 μL χλωριούχου αργιλίου και 10 μL τριένυδρου οξικού νατρίου 1 Μ συνδυάστηκαν με 50 uL διαλύματος δείγματος και αναφοράς, χωριστά. Στη συνέχεια, αυτά τα μείγματα επωάστηκαν σε θερμοκρασία σκοτεινού δωματίου για 30 λεπτά. Μετά την περίοδο επώασης, η απορρόφηση υπολογίστηκε στα 405 nm. Η κερσετίνη χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για τη δημιουργία μιας καμπύλης βαθμονόμησης και τα συνολικά περιεχόμενα φλαβονοειδών αντιπροσωπεύτηκαν ως ισοδύναμα κερκετίνης (QE).

4.5.3.Δοκιμασία ολικής περιεκτικότητας σε φαινολικό οξύ

Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικό οξύ των δειγμάτων μετρήθηκε φασματοφωτομετρικά ακολουθώντας τη διαδικασία που αναφέρθηκε προηγουμένως από τους Barak et al. [52]. Πρώτον, οι κατάλληλες ποσότητες νιτρώδους νατρίου και μολυβδαινικού νατρίου διαλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό για να ληφθεί το αντιδραστήριο Arnow. Στη συνέχεια, 1 ml των δειγμάτων συνδυάστηκε με 1 mL αντιδραστηρίου Arnow, 1 mL 0.1 Μ HCl και 1 mL 1 Μ NaOH, ξεχωριστά. Μετά από αυτό, ο όγκος του μίγματος ρυθμίστηκε στα 10 ml με απεσταγμένο νερό και η απορρόφηση διαβάστηκε αμέσως στα 490 nm. Το καφεϊκό οξύ χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για να ληφθεί μια καμπύλη βαθμονόμησης και η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικό οξύ δόθηκε ως ισοδύναμα καφεϊκού οξέος (CAE).

4.5.4.Δοκιμασία Συνολικού Περιεχομένου Προανθοκυανιδίνης

Ο φασματοφωτομετρικός προσδιορισμός της συνολικής περιεκτικότητας σε προανθοκυανιδίνη των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε σε ένα 96-πρότυπο πλακός φρεατίου ακολουθώντας τη μέθοδο των Barak et al. [11]. Εν συντομία, 25 uL των διαλυμάτων δείγματος αναμίχθηκαν με 150 uL διαλυμάτων 4 τοις εκατό βανιλίνης και 75 uL διαλυμάτων HCl (32 τοις εκατό), αντίστοιχα. Μετά από χρόνο επώασης 15 λεπτών σε θερμοκρασία σκοτεινού θαλάμου, η απορρόφηση ρυθμίστηκε στα 492 nm. Η ένυδρη κατεχίνη χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για να ληφθεί μια καμπύλη βαθμονόμησης. Ως διάλυμα ελέγχου χρησιμοποιήθηκε μεθανόλη. Η συνολική περιεκτικότητα σε προανθοκυανιδίνη των δειγμάτων δηλώθηκε ως ισοδύναμα κατεχίνης (CE).

4.6. Δοκιμασίες δραστηριότητας καθαρισμού ελεύθερων ριζών 4.6.1. Δοκιμασία δραστηριότητας καθαρισμού ριζών DPPH

Η δραστηριότητα δέσμευσης ριζών DPPH των δειγμάτων προσδιορίστηκε σε ένα 96-πρότυπο πλακός φρεατίου ακολουθώντας τη μέθοδο που τροποποιήθηκε από τους Celeb et al.[53]. Αρχικά, παρασκευάστηκαν πρόσφατα 150 μΜ διαλύματος DPPH. Στη συνέχεια, 200 μL διαλύματος DPPH αναμίχθηκαν με 25 uL διαλυμάτων δείγματος. Στη συνέχεια, αυτό το μίγμα επωάστηκε σε θερμοκρασία σκοτεινού δωματίου για 50 λεπτά. Η απορρόφηση υπολογίστηκε στα 540 nm. Ως διάλυμα αναφοράς χρησιμοποιήθηκε βουτυλιωμένο υδροξυτολουόλιο (ΒΗΤ) σε διαφορετικές συγκεντρώσεις. Ως διάλυμα ελέγχου χρησιμοποιήθηκε μεθανόλη. Η δραστηριότητα των δειγμάτων παρουσιάστηκε ως EC50, που αντιστοιχεί στη συγκέντρωση που δείχνει 50 τοις εκατό δραστικότητα.

4.6.2.Δοκιμασία Δραστηριότητας Σάρωσης Ριζικής DMPD

Η δραστικότητα δέσμευσης ριζών DMPD* (Ν, Ν-διμεθυλ-ρ-φαινυλενοδιαμίνη) των δειγμάτων διεξήχθη σε ένα εκμαγείο πλάκας φρεατίου 96- σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως από τους Inan et al. [13]. Πρώτον, 10{{1{0}} mM DMPD συν διάλυμα, 0,05 M FeCl; Διάλυμα 6Η2Ο και ρυθμιστικό διάλυμα οξικού 0,01 Μ παρασκευάστηκαν πρόσφατα. Στη συνέχεια, 1 mL διαλύματος DMPD, 100 mL ρυθμιστικού διαλύματος οξικού και 0,2 mL διαλύματος FeCl3-6H2O αναμίχθηκαν και αργότερα διαλύματα δείγματος 15 uLof συνδυάστηκαν με 210 μL αυτού του μείγματος. Μετά την περίοδο επώασης σε θερμοκρασία σκοτεινού δωματίου για 50 λεπτά, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 492 nm. Το Trolox χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για να ληφθεί μια καμπύλη βαθμονόμησης. Οι συγκεντρώσεις των διαλυμάτων του δείγματος ήταν 1 mg/mL. Οι δραστηριότητες καθαρισμού ριζών DMPD των δειγμάτων δηλώθηκαν ως ισοδύναμα Trolox (TE). 4.7.Δοκιμασίες Αναγωγικής Δραστηριότητας Μετάλλων

4.7.1. Δοκιμασία αντιοξειδωτικής δύναμης μείωσης σιδήρου (FRAP)

Ο προσδιορισμός της δραστικότητας FRAP των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε σε ένα πρότυπο πλάκας 96 φρεατίων ακολουθώντας τη διαδικασία που αναφέρθηκε προηγουμένως από τους Bardakci et al.[54]. Στην αρχή του πειράματος, το αντιδραστήριο FRAP σχηματίστηκε με ανάμειξη διαλυμάτων οξικού ρυθμιστικού διαλύματος, τριπυριδυλτριαζίνης σιδήρου και FeCl;6H2O. Μετά από αυτό, το αντιδραστήριο FRAP τοποθετήθηκε σε φούρνο 37 βαθμών για 30 λεπτά. Στη συνέχεια, 10 uL από τα διαλύματα του δείγματος συνδυάστηκαν με 30 μL απεσταγμένου νερού και 260 uL αντιδραστηρίου FRAP, αντίστοιχα. Μετά από χρόνο επώασης στους 37 βαθμούς για 30 λεπτά, η απορρόφηση ρυθμίστηκε στα 593 nm. Δημιουργήθηκε μια τυπική καμπύλη χρησιμοποιώντας διαφορετικές μοριακές μοριακότητες διαλύματος θειικού σιδήρου (0.{15}} mM) για την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων. Το ΒΗΤ χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις. Οι δραστηριότητες FRAP των δειγμάτων παρουσιάστηκαν ως mM FeS04 σε 1 g ξηρού εκχυλίσματος.

4.7.2. Δοκιμασία Μειωτικής Αντιοξειδωτικής Ικανότητας Κυπριακού (CUPRAC)

Η δραστηριότητα CUPRAC των δειγμάτων προσδιορίστηκε σε ένα 96-πρότυπο πλακός φρεατίου ακολουθώντας τη μέθοδο που τροποποιήθηκε από τους Celeb et al. 【31】; 85 μL διαλύματος CuSO4 (10 mM), νεοκυπραΐνης και οξικού αμμωνίου και 51 uL απεσταγμένου νερού προστέθηκαν σε 43 uL διαλυμάτων δείγματος, χωριστά. Μετά από περίοδο επώασης (20 λεπτά) στους 50 βαθμούς σε υδατόλουτρο, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm. Το ασκορβικό οξύ χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για την απόκτηση μιας καμπύλης βαθμονόμησης. Οι δραστηριότητες CUPRAC των δειγμάτων παρουσιάστηκαν ως ισοδύναμα ασκορβικού οξέος (ΑΑΕ). 4.8. Προσδιορισμός Ολικής Αντιοξειδωτικής Δραστηριότητας (TOAC)

Ο προσδιορισμός της συνολικής αντιοξειδωτικής δραστηριότητας των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε σε ένα 96-πρότυπο πλάκας φρεατίου ακολουθώντας τη διαδικασία των Celeb et al. [55]. Αρχικά, μια ορισμένη ποσότητα μονοβασικού φωσφορικού νατρίου, τετραένυδρου μολυβδαινικού αμμωνίου και θειικού οξέος αναμίχθηκαν για να ληφθεί το διάλυμα TOAC. Στη συνέχεια, 300 μL διαλύματος TOAC προστέθηκαν σε 30 uL διαλυμάτων δείγματος. Μετά την περίοδο επώασης στους 95 βαθμούς σε λουτρό νερού για 90 λεπτά, η απορρόφηση προσδιορίστηκε στα 690 nm. Το ασκορβικό οξύ χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για την απόκτηση μιας καμπύλης βαθμονόμησης. Οι δραστηριότητες TOAC των δειγμάτων αντιπροσωπεύτηκαν ως ισοδύναμα ασκορβικού οξέος (ΑΑΕ). 4.9. Εκτίμηση Δείκτη Βιοδιαθεσιμότητας

Ο δείκτης βιοδιαθεσιμότητας (BAvI) υπολογίστηκε σύμφωνα με τη θεωρητική εξίσωση που περιγράφεται από τους Inan et al.[13]:

BAVI=CIN/CND Ο "δείκτης βιοδιαθεσιμότητας" (BAvI) περιγράφηκε ως η αναλογία του αριθμού των φαινολικών στο βιοδιαθέσιμο δείγμα (IN) προς αυτόν στο μη χωνευμένο δείγμα (ND). 4.10. Ποσοτικοποίηση Φλαβονοειδών Δείκτη με HPTLC

Ο ποσοτικός προσδιορισμός των συγκεντρώσεων salidroside, hyperoside και quercitrin σε όλα τα δείγματα προσομοίωσης (ND, PG, IN) των υδατικών εκχυλισμάτων από είδη Cistus πραγματοποιήθηκε με υψηλής απόδοσης χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (HPILC) (CAMAG, Muttenz, Ελβετία) ακολουθώντας τη μέθοδο που επικυρώθηκε από τους Guzelmeric et al. [16]. Η υπεροσίδη, η σαλιδροσίδη και η κουερσιτρίνη παρασκευάστηκαν σε συγκεντρώσεις 25,50 και 10{{3{0}} ug/mL και οι συγκεντρώσεις των διαλυμάτων προσφάτως παρασκευασμένων δειγμάτων προσαρμόστηκαν σε 10 mg/mL. Αυτά τα διαλύματα εφαρμόστηκαν σε πλάκες σιλικαζέλ με γυάλινη πλάτη κανονικής φάσης (20 cm × 10 cm, Merck, Darmstadt, Γερμανία) με ορισμένους όγκους (1-5 μL τυπικά διαλύματα και διαλύματα δειγμάτων 5 μL) χρησιμοποιώντας σύριγγες 100 μL ( Hamilton, Bonaduz, Ελβετία). Η διαδικασία εφαρμογής πραγματοποιήθηκε με εφαρμογή δειγμάτων Linomat 5. Η διαδικασία ανάπτυξης πραγματοποιήθηκε σε θάλαμο αυτοματοποιημένης ανάπτυξης (ADC 2) και οξικό αιθυλεστέρα: διχλωρομεθάνιο, οξικό οξύ, μυρμηκικό οξύ: νερό (10:25:10 :10:10:10me) επιλέχθηκε ως κινητή φάση. Στη συνέχεια, οι πλάκες παραγωγοποιήθηκαν με Αντιδραστήριο Φυσικού Προϊόντος (NPR) (1 g διφαινυλβορικού οξέος 2-αμινοαιθυλεστέρας σε 200 mLof οξικό αιθυλεστέρα) στη συσκευή εμβάπτισης (CAMAG) Ενώ η υπεροσίδη και η κουερσιτρίνη αναλύθηκαν φασματοφωτομετρικά στα 260 nm, η ποσότητα της σαλιδροζίδης μετρήθηκε στα 330 nm με σαρωτή UV. Οι τιμές Rf των προτύπων προσδιορίστηκαν ως υπεροσίδη (≈0,35）, quercitrin （roside, 4c0). 0,65）. Οι συντελεστές συσχέτισης (r²) βρέθηκαν να είναι ×0,98 για τον ποσοτικό προσδιορισμό των φλαβονοειδών δείκτη.

4.11. Ανασταλτική δράση σε ένζυμα που σχετίζονται με τον διαβήτη 4.11.1. - Ανασταλτική Δραστηριότητα Γλυκοζιδάσης

-Οι ανασταλτικές δραστηριότητες της γλυκοσιδάσης των μη χωνευμένων και βιοδιαθέσιμων δειγμάτων που ελήφθησαν από τα υδατικά εκχυλίσματα των ειδών Cistus εξετάστηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο που εξηγήθηκε προηγουμένως από τους Balan et al. [56]. Πρώτον, οι κατάλληλες ποσότητες φωσφορικού μονονάτριου και φωσφορικού δινατρίου αναμίχθηκαν με την προμήθεια ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικού 100 mM (pH7). Το ένζυμο γλυκοσιδάσης ac διαλύθηκε σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών για να ληφθεί το διάλυμα -γλυκοσιδάσης (0.2 U/mL). Στη συνέχεια, 170 uL ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών, 20 μL διαλύματος -γλυκοσιδάσης και 20 μL διαλυμάτων δείγματος συνδυάστηκαν και επωάστηκαν σε φούρνο 37 βαθμών για 15 λεπτά. Μετά από αυτό, προστέθηκαν στο μίγμα 20 uL διαλύματος π-νιτροφαινυλ- -D-γλυκοπυρανοσίδης 2,5 mM σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού καλίου 100 mM (ρΗ 7,0) και μια άλλη περίοδος επώασης εκτελέστηκε στους 37 βαθμούς για 15 λεπτά. Στη συνέχεια, 80 μL διαλύματος ανθρακικού νατρίου 0,2 Μ προστέθηκαν στο μείγμα για να τερματιστεί η αντίδραση. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 405 nm. Ως αναφορά χρησιμοποιήθηκε διάλυμα κερσετίνης σε διαφορετικές συγκεντρώσεις. Τα αποτελέσματα υπολογίστηκαν ως το ποσοστό της ανασταλτικής δράσης σε συγκεντρώσεις 1 mg/mL και 0,5 mg/mL δειγμάτων ND και IN των υδατικών εκχυλισμάτων του είδους Cistus.

4.11.2. -Ανασταλτική δράση αμυλάσης

-Η ανασταλτική δράση αμυλάσης μη χωνευμένων και βιοδιαθέσιμων δειγμάτων που ελήφθησαν από τα υδατικά εκχυλίσματα των ειδών Cistus προσδιορίστηκε ακολουθώντας τη διαδικασία που περιγράφηκε προηγουμένως από τους Balan et al.[56]. Ο φασματοφωτομετρικός προσδιορισμός των ανασταλτικών δράσεων α-αμυλάσης των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση αντιδραστηρίου DNS (3,5-δινιτροσαλικυλικό οξύ). Όπως αναφέρεται στη μέθοδο, η μαλτόζη σχηματίζεται από τη μετατροπή του αμύλου και το κίτρινο χρώμα του αλκαλικού DNS μετατρέπεται σε πορτοκαλοκόκκινο χρώμα λόγω της μαλτόζης που παράγεται από το άμυλο. Έτσι, παρασκευάστηκε διάλυμα DNS 96 mM από το μίγμα διαλύματος τρυγικού καλίου νατρίου (διαλυμένο σε 2 Μ NaOH) και ορισμένης ποσότητας DNS (διαλυμένο σε απεσταγμένο νερό). Στη συνέχεια, παρασκευάστηκε 20mM ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου με 6,7 mM NaCl (συμπαράγοντας του ενζύμου α-αμυλάσης) στους 20 βαθμούς (ρΗ: 6,9). το ένζυμο α-αμυλάση (1 U/mL) και το άμυλο (10 mg/mL) διαλύθηκαν σε αυτό το ρυθμιστικό διάλυμα. Στη συνέχεια, 50 μL ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικού νατρίου και 10 μL διαλύματος ενζύμου α-αμυλάσης αναμίχθηκαν με 20 μL των διαλυμάτων του δείγματος. Αυτό το μίγμα επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 45 λεπτά. Μετά την περίοδο επώασης, 20 μL διαλύματος αμύλου προστέθηκαν στο μείγμα. Μια άλλη περίοδος επώασης ξεκίνησε στους 37 βαθμούς για 45 λεπτά. Η ίδια διαδικασία εφαρμόστηκε στα δείγματα χωρίς την προσθήκη ενός διαλύματος ενζύμου ο-αμυλάσης που ονομάζεται "υπόβαθρο δείγματος". Η ομάδα ελέγχου μελετήθηκε με την ίδια διαδικασία απουσία διαλυμάτων δειγμάτων. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 540 nm. Η ακαρβόζη χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις. Τα αποτελέσματα παρουσιάστηκαν ως ποσοστό ανασταλτικής δράσης σε συγκεντρώσεις 1 mg/mL και 0,5 mg/mL δειγμάτων ND και IN από υδατικά εκχυλίσματα ειδών Cistus. 4.11.3. Ανασταλτική Δραστηριότητα AGE

Η ανασταλτική δραστηριότητα AGE των μη χωνευμένων και βιοδιαθέσιμων δειγμάτων από υδατικά εκχυλίσματα ειδών Cistus προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Starow-icz et al. [57]. Πριν από οποιαδήποτε διαδικασία, 1 mg/mL και 0,5 mg/mL συγκεντρώσεις δειγμάτων ND και IN παρασκευάστηκαν πρόσφατα. Στη συνέχεια, 1 mL συγκέντρωσης 10 mg/mL διαλύματος αλβουμίνης ορού βοοειδών (BSA) προστέθηκε σε 1 mL διαλυμάτων δειγμάτων ND και IN. Τα δείγματα ελέγχου παρασκευάστηκαν χωρίς προσθήκη διαλυμάτων δειγμάτων ND και IN και τα τυφλά δείγματα παρασκευάστηκαν χωρίς προσθήκη 0,5 Μ γλυκόζης. Στη συνέχεια, όλα τα παρασκευασμένα δείγματα επωάστηκαν για 40 ώρες σε αναδευόμενο υδατόλουτρο στους 55 βαθμούς. Μετά το τέλος της περιόδου επώασης, χρησιμοποιήθηκε η συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών Thermo ScientificTM VarioskanTMLUX πολλαπλών οδών στην περιοχή διέγερσης 370 nm/440 nm εκπομπής για τον υπολογισμό της έντασης φθορισμού. Η κερσετίνη χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα αναφοράς σε διαφορετικές συγκεντρώσεις.

5. Συμπεράσματα

Στην παρούσα μελέτη, τα υδατικά εκχυλίσματα όλων των ειδών Cistus που καταγράφηκαν στην τουρκική χλωρίδα διερευνήθηκαν για τα φαινολικά τους προφίλ και τις in vitro αντιοξειδωτικές και αντιδιαβητικές τους δυνατότητες. Δεδομένου ότι το αφέψημα ή το έγχυμα είναι η κοινή μορφή στα παραδοσιακά φάρμακα, η χρήση υδατικών εκχυλισμάτων για την αξιολόγηση της δραστηριότητας σε πειραματικές μελέτες είναι ιδιαίτερα σημαντική. Από την άλλη πλευρά, τα υδρόφιλα συστατικά στο υδατικό εκχύλισμα υποβάλλονται σε μια σειρά μεταβολικών μετασχηματισμών στο γαστρεντερικό σύστημα μόλις καταποθούν. Επομένως, για τη σωστή αξιολόγηση της δραστικότητας των παραδοσιακών σκευασμάτων, θα πρέπει επίσης να διερευνηθούν οι δραστηριότητες των βιοδιαθέσιμων μεταβολιτών.

Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που εξετάζει τις συνέπειες της in vitro μεθόδου προσομοίωσης της ανθρώπινης πέψης στα τουρκικά είδη Cistus. Επιπλέον, η δυνατότητα αναστολής του τουρκικού είδους Cistus σε AGEs μελετήθηκε σε αυτή τη μελέτη για πρώτη φορά. Επιπλέον, η σαλιδροσίδη, η υπεροσίδη και η κουερσιτρίνη έλαβαν φλαβονοειδή-δείκτες και οι μεταβολές στις συγκεντρώσεις τους παρακολουθήθηκαν στη διαδικασία πέψης in vitro. Ενώ το φαινολικό περιεχόμενο και οι αντιδιαβητικές και αντιοξειδωτικές δράσεις των εκχυλισμάτων επηρεάστηκαν αρνητικά από τις διαδικασίες γαστρεντερικής πέψης, εξακολουθούν να παρουσιάζουν σημαντική βιοδραστικότητα. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα, το εκχύλισμα C. salviifolius ανιχνεύθηκε ως το πιο ισχυρό φυτό όσον αφορά την περιεκτικότητα σε φαινόλη και τις αντιοξειδωτικές και αντιδιαβητικές δράσεις. Συμπερασματικά, τα εναέρια μέρη από το τουρκικό είδος Cistus έχουν πλούσια περιεκτικότητα σε φαινολικά και πιθανή αντιοξειδωτική και αντιδιαβητική δράση. Ενώ η in vitro μέθοδος προσομοίωσης πέψης χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της βιοδιαθεσιμότητας, ενδέχεται να μην μιμείται πλήρως τις μεταβολικές οδούς που εμφανίζονται στον οργανισμό. Επομένως, απαιτούνται περαιτέρω in vivo και κλινικές μελέτες για να αξιολογηθεί λεπτομερώς η βιοδιαθεσιμότητα των φαινολικών ενώσεων και η συμβολή τους στις αναφερόμενες φαρμακολογικές επιδράσεις.

Συνεισφορές συγγραφέα:Conceptualization, YI, EC, EY; μεθοδολογία, YI, SA, IK, EC formal analysis, YI, IK.-C., SA; έρευνα, YI, IK.-C, SA; πόρους, YI, IK.SA, EC και EY· data curation, YI, IK-C., SA; γραφή-—YI, γραφή—ανασκόπηση και επεξεργασία, YI, EC, EY; οπτικοποίηση, YI; επίβλεψη, EC και EYA Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και έχουν συμφωνήσει με τη δημοσιευμένη έκδοση του χειρογράφου.

Χρηματοδότηση:Αυτή η έρευνα δεν έλαβε εξωτερική χρηματοδότηση. Δήλωση του Συμβουλίου Θεσμικής Αναθεώρησης: Δεν ισχύει. Δήλωση συγκατάθεσης μετά από ενημέρωση: Δεν ισχύει.

Δήλωση διαθεσιμότητας δεδομένων:Τα δεδομένα που παρουσιάζονται σε αυτή τη μελέτη είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος από τον αντίστοιχο συγγραφέα.

Σύγκρουση συμφερόντων:Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

Διαθεσιμότητα δείγματος:Δείγματα των ενώσεων δεν είναι διαθέσιμα από τους συγγραφείς.

Αυτό το άρθρο εξάγεται από το Molecules 2021, 26, 5322. https://doi.org/10.3390/molecules26175322 https://www.mdpi.com/journal/molecules