Βελτιστοποίηση της διαδικασίας εκχύλισης για το εκχύλισμα ποτών Congrong–Zaoren–Wumei και αξιολόγηση των επιδράσεών του στη βελτίωση του ύπνου
Jan 30, 2026
Περίληψη:Για τη βελτιστοποίηση της διαδικασίας εκχύλισης ενός ποτού Congrong-Zaoren-Wumei (που αποτελείται από Cistanche deserticola, Ziziphi Spinosae Semen και Mume Fructus) και για την αξιολόγηση των επιδράσεών του στη βελτίωση του ύπνου, καθιερώθηκε μια μέθοδος HPLC για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό της εχινακοσίδης, της βερμπασκοσίδης (ακτοσίνης, της σινοσίνης και της βερμπασκοσίδης) Χρησιμοποιώντας τα περιεχόμενα αυτών των τεσσάρων ενώσεων και πολυσακχαριτών ως κριτήρια αξιολόγησης, η διαδικασία εκχύλισης για το ποτό Congrong–Zaoren–Wumei βελτιστοποιήθηκε μέσω ορθογώνιων πειραμάτων, ακολουθούμενα από δοκιμές επικύρωσης και κλιμάκωσης. Τα αποτελέσματα του εκχυλίσματος για τη βελτίωση του ύπνου διερευνήθηκαν σε ποντίκια χρησιμοποιώντας μια δοκιμή άμεσης ύπνου, δοκιμή ανοιχτού πεδίου, δοκιμή ύπνου νατρίου πεντοβαρβιτάλης υποκατώτερης δόσης και δοκιμή λανθάνουσας κατάστασης ύπνου πεντοβαρβιτάλη νατρίου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι βέλτιστες συνθήκες εκχύλισης ήταν μια θερμοκρασία εκχύλισης 100 μοίρες, μια αναλογία στερεού-υγρού 1:12 (g·mL-1) και ένας χρόνος εκχύλισης 2 ωρών. Η συνεχής χορήγηση για 30 ημέρες δεν προκάλεσε άμεσα ύπνο σε ποντίκια, αλλά μείωσε σημαντικά τη συμπεριφορά που μοιάζει με άγχος στο τεστ ανοιχτού πεδίου, υποδεικνύοντας ηρεμιστικό αποτέλεσμα. Το εκχύλισμα ενίσχυσε την επίδραση της επαγωγής ύπνου μιας δευτερεύουσας δόσης πεντοβαρβιτάλης νατρίου (τα ποσοστά ύπνου για χαμηλές, μεσαίες και υψηλές δόσεις ήταν 33,33%, 41,67% και 50,00%, αντίστοιχα) και μείωσε σημαντικά την επαγόμενη από πεντοβαρβιτάλη νατρίου λανθάνουσα κατάσταση ύπνου 2,2,7 και 7.7. 14,93 λεπτά για χαμηλές, μεσαίες και υψηλές δόσεις, αντίστοιχα). Αυτή η μελέτη βελτιστοποίησε τη διαδικασία εκχύλισης για το ποτό Congrong-Zaoren-Wumei και έδειξε αποτελέσματα βελτίωσης του ύπνου, παρέχοντας μια επιστημονική βάση για την ανάπτυξη προϊόντων που βελτιώνουν τον ύπνο που προέρχονται από το Cistanche deserticola.
Λέξεις-κλειδιά:Cistanche deserticola; Ziziphi Spinosae Semen; Mume Fructus; ορθογώνια πειράματα? εξαρτήματα δείκτη? αναλυτικές μεθόδους
Εισαγωγή:Ο ύπνος είναι απαραίτητος για την κανονική ζωή και τη μάθηση. Ο καλός ύπνος βοηθά στην ανακούφιση της κούρασης και ενισχύει το ανοσοποιητικό [1,2]. Ωστόσο, με την κοινωνική ανάπτυξη και το αυξανόμενο άγχος, η αϋπνία έχει γίνει ένα ευρέως διαδεδομένο πρόβλημα που επηρεάζει την εργασία και την καθημερινή ζωή [3]. Η Λευκή Βίβλος του 2024 για την υγεία του ύπνου των κατοίκων της Κίνας ανέφερε ανεπαρκή διάρκεια ύπνου και επικρατούσες διαταραχές ύπνου στον πληθυσμό: η μέση διάρκεια ύπνου ήταν μόνο 6,75 ώρες και περισσότερα από το ένα τέταρτο των ατόμων κοιμούνταν λιγότερο από 6 ώρες τη νύχτα, υπογραμμίζοντας ανησυχίες για την ποιότητα του ύπνου. Κατά συνέπεια, η έρευνα για λειτουργικές τροφές που βελτιώνουν την ποιότητα του ύπνου και την αϋπνία είναι επείγουσα. Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM), με σχετικά χαμηλές παρενέργειες και ιστορικό χιλιετιών, έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για τη βελτίωση του ύπνου, όπως το αφέψημα Suanzaoren και το αφέψημα Guipi. Με την αυξανόμενη έννοια της «ομολογίας του φαρμάκου και των τροφίμων», η ανάπτυξη λειτουργικών τροφών που βελτιώνουν τον ύπνο από παραδοσιακές φαρμακευτικές-φαγώσιμες πηγές έχει τραβήξει την αυξανόμενη προσοχή.
Cistanche(Cistanche deserticola YC Ma ήC. tubulosa (Schenk) Wight, οικογένεια Orobanchaceae) είναι το αποξηραμένο, σαρκώδες στέλεχος με φύλλα λέπια και χρησιμοποιείται για ανεπάρκεια νεφρού yang, ανεπάρκεια ουσίας-αίματος, ανικανότητα και στειρότητα [4]. Η σύγχρονη φαρμακολογία δείχνει ότι το Cistanche ασκεί πολλαπλές δραστηριότητες, όπως ανοσορύθμιση, κατά της κόπωσης, κατά του όγκου, νευροπροστασίας, αντιγήρανσης, κατά της οστεοπόρωσης, ηπατοπροστασίας και υπογλυκαιμικών επιδράσεων [5,6]. Οι συνολικές γλυκοσίδες του Cistanche μπορούν να ρυθμίσουν την έκφραση των συναπτικών δεικτών και να επηρεάσουν τη συναπτική πλαστικότητα, βελτιώνοντας έτσι τη μάθηση και τη γνώση σε μοντέλα αρουραίων με στέρηση ύπνου [7]. Το Cistanche deserticola συμπεριλήφθηκε στον κατάλογο φαρμάκων-βρώσιμων στα τέλη του 2019. Οι σχετικές πιλοτικές εργασίες παραγωγής και λειτουργίας βρίσκονται σε εξέλιξη στην Εσωτερική Μογγολία και στο Gansu και χρησιμοποιείται σε γενικά τρόφιμα και υγιεινά τρόφιμα για την ενίσχυση της ανοσίας και την ανακούφιση της σωματικής κόπωσης. Με βάση τη θεωρία TCM της «συσχέτισης νεφρού-εγκεφάλου», η Cistanche δείχνει ευρείες δυνατότητες σε νευρολογικές διαταραχές και υπόσχεται προϊόντα υγείας που βελτιώνουν τον ύπνο. Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες - κυρίως η εχινακοσίδη και η βερμπασκοσίδη (ακτεοσίδη) - είναι βασικά ενεργά συστατικά του Cistanche [8].
ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΑ εκχυλίσματος CISTANCHE TUBULOSA
Υποστήριξη της Wecistanche-Για περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με τη συνεργασία
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Το σπέρμα Ziziphi Spinosae (Suanzaoren, σπόροι του Ziziphus jujuba Mill.) περιέχει σαπωνίνες, τριτερπενοειδή και φλαβονοειδή με ηρεμιστικά, καταπραϋντικά-υπνωτικά, ανοσοενισχυτικά, θρεπτικά αποτελέσματα στο συκώτι και είναι γνωστό ως «Ανατολικός καρπός ύπνου» [9]. Το Suanzaoren είναι πλούσιο σε συστατικά ενεργά για τον ύπνο [10]. Οι συνολικές σαπωνίνες και τα αλκαλοειδή του μπορούν να ρυθμίσουν το γλουταμικό, το -αμινοβουτυρικό οξύ (GABA) και την 5-υδροξυτρυπταμίνη (5-HT) στον φλοιό και τον ιππόκαμπο. Τα φλαβονοειδή μπορούν να συνδεθούν με τους υποδοχείς -GABA/βενζοδιαζεπίνης, ρυθμίζοντας το GABA ώστε να ασκούν ηρεμιστικά-υπνωτικά αποτελέσματα. Η σπινοσίνη μπορεί να ρυθμίσει το 5-HT, να μειώσει τη νορεπινεφρίνη και να παράγει ηρεμιστικά-υπνωτικά αποτελέσματα [11,12].
Το Mume Fructus (Wumei· αποξηραμένος, σχεδόν ώριμος καρπός του Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zucc.) είναι ένα κοινό φαρμακευτικό-βρώσιμο TCM που υποβάλλεται σε επεξεργασία με ξήρανση και μαύρισμα σε χαμηλή θερμοκρασία. Συνταγές όπως το αφέψημα Wumei–Zaoren [13] και το χάπι Wumei [14] χρησιμοποιούνται ευρέως κλινικά για την αϋπνία και τις διαταραχές ύπνου. Το Mume περιέχει άφθονα οργανικά οξέα, μεταξύ των οποίων το κιτρικό οξύ είναι το κύριο συστατικό και ένας δείκτης φαρμακοποιίας [15]. Επιπλέον, το Cistanche, το Suanzaoren και το Wumei είναι όλα πλούσια σε πολυσακχαρίτες. συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι οι πολυσακχαρίτες βελτιώνουν τον ύπνο μέσω πολλαπλών μηχανισμών και η έρευνα ύπνου που εστιάζεται στους πολυσακχαρίτες γίνεται ένα hotspot. Ωστόσο, δεν έχουν ακόμη αναφερθεί μελέτες για προϊόντα που αποτελούνται κυρίως από Cistanche, Suanzaoren και Wumei για τη βελτίωση του ύπνου.
Σε αυτή τη μελέτη, δημιουργήσαμε μια μέθοδο HPLC για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό της εχινακοσίδης, της βερμπασκοσίδης (ακτεοσίδη), της σπινοσίνης και του κιτρικού οξέος. Χρησιμοποιώντας τα περιεχόμενα αυτών των τεσσάρων συστατικών και πολυσακχαριτών στο εκχύλισμα ενός ποτού Congrong-Zaoren-Wumei ως δείκτες αξιολόγησης, βελτιστοποιήσαμε τη διαδικασία παρασκευής μέσω ορθογώνιων πειραμάτων, ακολουθούμενα από επικύρωση και κλιμάκωση. Σύμφωνα με το Health Food Function Test and Evaluation Methods (Σχέδιο σχολίων 2022), αξιολογήσαμε τη βελτίωση του ύπνου του εκχυλίσματος σε πειράματα σε ζώα, με στόχο την παροχή επιστημονικών στοιχείων για την ανάπτυξη προϊόντων που βελτιώνουν τον ύπνο με βάση το Cistanche.
Note on industrial background: Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd (WECISTANCHE) is a vertically integrated cistanche developer and manufacturer established in 2003, headquartered in Luopu County, Xinjiang, China. The company operates extensive seed-breeding and cultivation bases (>105.000 στρέμματα μαζί), διαθέτει εργαστήρια παραγωγής πιστοποιημένα με GMP με προηγμένες εγκαταστάσεις υπερδιήθησης και νανοδιήθησης, και εργαστήριο επώασης μικροοργανισμών και διαθέτει πολλαπλές πιστοποιήσεις (π.χ. China SC, HACCP, βιολογικές πιστοποιήσεις συμπεριλαμβανομένου NOP). Με 14 διπλώματα ευρεσιτεχνίας που σχετίζονται με το Cistanche και συνεργασίες με κορυφαία πανεπιστήμια, το WECISTANCHE παρέχει μια ισχυρή βιομηχανική πλατφόρμα για την κλιμάκωση των διαδικασιών εκχύλισης και την παραγωγή τυποποιημένων εκχυλισμάτων Cistanche ευθυγραμμισμένα με τα πρότυπα ΗΠΑ/ΕΕ. Αυτή η βιομηχανική ικανότητα υποστηρίζει τη μετάφραση βελτιστοποιημένων παραμέτρων εξαγωγής εργαστηριακής κλίμακας σε εμπορική παραγωγή για λειτουργικά ποτά και προϊόντα υγείας.
1 Υλικά και Μέθοδοι
1.1 Υλικά
Cistanche deserticola: Inner Mongolia Mandela Biotechnology Co., Ltd.; Ziziphi Spinosae Semen and Mume Fructus: Sichuan Xinhuhua Chinese Herbal Slices Co., Ltd.; κιτρικό οξύ, εχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη και σπινοσίνη: Chengdu Lemeitian Pharmaceutical Technology Co., Ltd.; γλυκόζη: Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.; δισκία εσταζολάμη: Shanghai Sine Pharmaceutical Co., Ltd.; πεντοβαρβιτάλη νατρίου: Shanghai Sine Pharmaceutical Co., Ltd.; αλατούχο διάλυμα: Dezhou Jingxin Pharmaceutical Co., Ltd.
1.2 Όργανα
HWS-24 ηλεκτρικό θερμοστατικό λουτρό νερού: Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd.; Ρυθμιζόμενος ηλεκτρικός θερμαντήρας DW: Shanghai Leigu Instruments Co., Ltd.; Agilent 1200 HPLC: Agilent Technologies; STARTER 3100 pH meter: OHAUS; 71-5804 φυγόκεντρος: Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd.; Αναγνώστης μικροπλακών Thermo Varioskan LUX: Thermo Fisher Scientific; XR-XZ301 τεσσάρων καναλιών ανοιχτού πεδίου συσκευή για ποντίκια: Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.; Ηλεκτρονική ισορροπία LE225D: Sartorius Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.
1.3 Πειραματόζωα
Αρσενικά ποντίκια ICR (6 εβδομάδες), n=180, που αγοράστηκαν από τη Vital River (Σαγκάη, Κίνα), άδεια SYXK (Hu) 2018-0028. Τα ζώα εγκλιματίστηκαν για μία εβδομάδα (12 ώρες φως/σκοτάδι, 20–25 μοίρες, 50–60% RH) με τροφή και νερό κατά βούληση. Όλες οι διαδικασίες συμμορφώθηκαν με τους κανονισμούς για τη διαχείριση των εργαστηριακών ζώων της ΛΔΚ και τη δεοντολογία των ζώων. εγκεκριμένο από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του Πανεπιστημίου Shanghai Jiao Tong (Αρ. Έγκρισης A2024082-003).
1.4 Πειραματικές Μέθοδοι
1.4.1 Έρευνες ενός παράγοντα για την εξαγωγή του ποτού Congrong–Zaoren–Wumei
Ακολουθώντας την αναλογία τύπου, τρεις παρτίδες μικτών ακατέργαστων βοτάνων (Cistanche, Suanzaoren, Wumei) εκχυλίστηκαν με 50 mL καθαρού νερού (αναλογία στερεού-υγρού 1:3) στους 60, 80 και 100 βαθμούς, τρεις φορές, 1 ώρα η κάθε μία. Τα συνδυασμένα εκχυλίσματα προσδιορίστηκαν για κιτρικό οξύ, εχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη, σπινοσίνη και ακατέργαστους πολυσακχαρίτες για να εκτιμηθεί προκαταρκτικά η επίδραση της θερμοκρασίας. Στη συνέχεια, πέντε παρτίδες εκχυλίστηκαν στους 80 βαθμούς με αναλογίες στερεού-υγρού 1:3, 1:5, 1:7, 1:10, 1:12 (g·mL-1), τρεις φορές για 1 ώρα η καθεμία και προσδιορίστηκαν για να εκτιμηθεί η αναλογία στερεού-υγρού. Τέλος, πέντε παρτίδες εκχυλίστηκαν στους 80 βαθμούς για 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 και 3,0 ώρες (τρεις εκχυλίσεις) και δοκιμάστηκαν για να εκτιμηθεί ο χρόνος εκχύλισης.
1.4.2 Ορθογώνιος σχεδιασμός για βελτιστοποίηση εξαγωγής
Με βάση τα αποτελέσματα ενός παράγοντα, επιλέχθηκαν τρεις παράγοντες - θερμοκρασία εκχύλισης (Α), αναλογία στερεού-υγρού (Β) και χρόνος εκχύλισης (C) - ο καθένας σε τρία επίπεδα. Χρησιμοποιήθηκε ένας ορθογώνιος πίνακας L9 (3^3). Το συνολικό περιεχόμενο των συστατικών δεικτών στο απόσπασμα χρησίμευσε ως δείκτης αξιολόγησης.
1.4.3 Επικύρωση και Κλιμάκωση
Σύμφωνα με τις βελτιστοποιημένες συνθήκες, τρεις παρτίδες εκχυλίστηκαν σε αναλογία στερεού-υγρού 1:12 (g·mL-1), 100 μοίρες, για 2,0 ώρες, τρεις φορές και προσδιορίστηκαν για κιτρικό οξύ, εχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη, σπινοσίνη και ακατέργαστους πολυσακχαρίτες. Για την κλιμάκωση, οι ποσότητες των Cistanche, Suanzaoren και Wumei αυξήθηκαν 40 φορές, υποβλήθηκαν σε επεξεργασία εις τριπλούν υπό τις ίδιες συνθήκες και προσδιορίστηκαν.
1.4.4 Προσδιορισμός Περιεχομένων Στοιχείων
Μετά την Κινεζική Φαρμακοποιία (έκδοση 2020) με βελτιστοποιήσεις μεθόδων και επικύρωση, καθιερώθηκε μια μέθοδος HPLC για τον ταυτόχρονο ποσοτικό προσδιορισμό του κιτρικού οξέος, της εχινακοσίδης, της βερμπασκοσίδης και της σπινοσίνης. Οι ακατέργαστοι πολυσακχαρίτες αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο φαινόλης-θειικού οξέος.
1.4.4.1 Συνθήκες HPLC
Θερμοκρασία στήλης: 10 βαθμοί ; ένεση: 10 µL; ρυθμός ροής: 1 mL·min–1; Μήκη κύματος ανίχνευσης: 210, 330, 335 nm. στήλη: Agilent Eclipse XDB-C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μm). κινητή φάση Α: 0,5% NH4H2PO4 (ρΗ 2,92); κινητή φάση Β: μεθανόλη. Διαβάθμιση: 0–7 λεπτά (0,5–1,5% (φ) B); 7–17 λεπτά (1,5–40% (φ) B); 17–20 λεπτά (40–47% (φ) B); 20–30 λεπτά (47–52% (φ) B); 30–35 λεπτά (100% (φ) Β).
1.4.4.2 Επικύρωση μεθόδου HPLC
Γραμμικότητα, LOD και LOQ: Μικτό πρότυπο διάλυμα που περιείχε κιτρικό οξύ, εχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη και σπινοσίνη στα 2,0160, 0,1100, 0,1125 και 0,0183 mg·mL–1, αντίστοιχα, παρασκευάστηκε σε 50% μεθανόλη 3-2-φολ και σε serdi. Διεξήχθη γραμμική παλινδρόμηση στην περιοχή κορυφής έναντι της συγκέντρωσης ανά Ενότητα 1.4.4.1. Το LOD ορίστηκε στο S/N=3, το LOQ στο S/N=10. Ακρίβεια: συνεχείς έξι ενέσεις του ίδιου διαλύματος δοκιμής που παρασκευάζεται από τα βότανα της φόρμουλας. Τα περιεχόμενα κάθε δείκτη υπολογίστηκαν. Σταθερότητα: ενέσεις σε διαφορετικά χρονικά σημεία. Επαναληψιμότητα: έξι ανεξάρτητα παρασκευασμένα δείγματα από την ίδια παρτίδα. Ανάκτηση: έξι δείγματα με γνωστές ποσότητες των τεσσάρων προτύπων σε προστιθέμενο περιεχόμενο περίπου 1:1. υπολογίστηκε ανάκτηση (%).
1.4.4.3 Δοκιμασία ακατέργαστου πολυσακχαρίτη
Ένα κλάσμα (2 mL) διαλύματος δείγματος σε καθορισμένη συγκέντρωση αναμίχθηκε με 1 mL φαινόλης 5 wt.% και 5 mL πυκνού θειικού οξέος, θερμάνθηκε στους 90 βαθμούς για 15 λεπτά, ψύχθηκε σε θερμοκρασία δωματίου και η OD στα 485 nm μετρήθηκε για να υπολογιστεί η περιεκτικότητα σε ακατέργαστο πολυσακχαρίτη.
1.4.4.4 Επικύρωση για Δοκιμασία Πολυσακχαρίτη
LOD: μετρημένο τυφλό διάλυμα 20 φορές. Το LOD αντιστοιχούσε σε τρεις φορές το SD. Ειδικότητα: OD στα 485 nm τυφλού διαλύτη και τυφλού ελέγχου ανά Ενότητα 1.4.4.3. Γραμμικότητα: το απόθεμα γλυκόζης αραιώθηκε σε διάφορες συγκεντρώσεις. Η OD έναντι της συγκέντρωσης υποχώρησε για να ληφθεί η εξίσωση βαθμονόμησης. Ακρίβεια: έξι διαδοχικές μετρήσεις ενός διαλύματος δοκιμής. Σταθερότητα: μετρήσεις σε διαφορετικά χρονικά σημεία. Επαναληψιμότητα: έξι ανεξάρτητα παρασκευασμένα δείγματα από την ίδια παρτίδα.
1.4.5 Ομαδοποίηση και διαχείριση ζώων
Τα πειράματα διεξήχθησαν σε τρεις παρτίδες (άμεσος ύπνος, ύπνος υποκατωφλίου δόσης πεντοβαρβιτάλη νατρίου και λανθάνουσα κατάσταση ύπνου νατρίου πεντοβαρβιτάλης), 60 ποντίκια ανά παρτίδα. Κάθε παρτίδα περιελάμβανε πέντε ομάδες (n=12/ομάδα): τυφλό, θετικό μάρτυρα και ομάδες εκχυλίσματος χαμηλής/μέτριας/υψηλής δόσης. Ενδογαστρική χορήγηση μία φορά την ημέρα για 30 ημέρες. Οι αξιολογήσεις πραγματοποιήθηκαν εντός 20 λεπτών μετά τον τελευταίο καθετήρα. Η ανθρώπινη ημερήσια δόση ακατέργαστου βοτάνου για το ρόφημα είναι 8,40 g για έναν ενήλικα 70 kg, που αντιστοιχεί σε 1,09 g·kg–1 για τα ποντίκια. Η δόση θετικού ελέγχου της εσταζολάμης για ενήλικες είναι 1–2 mg/ημέρα, που αντιστοιχεί σε 0,26 mg·kg–1 σε ποντικούς.
1.4.6 Δοκιμές απευθείας ύπνου και ανοιχτού πεδίου
After 30-day administration, within 20 min after the final dose, direct sleep was assessed using loss of righting reflex for >1 λεπτό ως κριτήριο ύπνου. καταγράφηκαν οι αριθμοί των κοιμισμένων ποντικών και η διάρκεια του ύπνου. Αμέσως μετά πραγματοποιήθηκε η δοκιμή ανοιχτού πεδίου. Τα ποντίκια εγκλιματίστηκαν στην αίθουσα δοκιμών για τουλάχιστον 1 ώρα, στη συνέχεια τοποθετήθηκαν απαλά στο κέντρο της αρένας και κινηματογραφήθηκαν χωρίς ενόχληση. Καταγράφηκε η συνολική απόσταση που διανύθηκε και ο αριθμός των εισόδων στο κέντρο εντός 5 λεπτών. Η συσκευή καθαρίστηκε με ιατρικό οινόπνευμα μεταξύ των εξετάσεων.
1.4.7 Δοκιμασία ύπνου με νάτριο πεντοβαρβιτάλη υποκατωφλίου-δόσης
Within 20 min after the last administration, mice received an intraperitoneal injection of sodium pentobarbital at 175 mg·kg–1. The number of mice that fell asleep (loss of righting reflex >1 λεπτό) καταγράφηκε μέσα σε 30 λεπτά.
1.4.8 Δοκιμή λανθάνοντος ύπνου με πεντοβαρβιτάλη νατρίου
Within 20 min after the last administration, mice received sodium pentobarbital at 250 mg·kg–1 intraperitoneally. Sleep latency (time from injection to loss of righting reflex for >1 λεπτό) καταγράφηκε.
1.5 Ανάλυση Δεδομένων
Οι στατιστικές πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας SPSS 26.0. Τα διαγράμματα δημιουργήθηκαν με GraphPad Prism 8. Τα δεδομένα ανοιχτού πεδίου αναλύθηκαν με τη δοκιμή t Student. επίπτωση ύπνου (μετράει) με τεστ χ-τετράγωνο. λανθάνουσα κατάσταση ύπνου με μονόδρομη ANOVA και LSD post hoc τεστ. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως x̄ ± s, με το P < 0,05 να θεωρείται στατιστικά σημαντικό.
Αποτελέσματα και συζήτηση (σύνοψη σύμφωνα με την Περίληψη): Ο ορθογώνιος σχεδιασμός εντόπισε 100 μοίρες, αναλογία στερεού-υγρού 1:12 (g·mL-1) και 2 ώρες ως βέλτιστες συνθήκες εκχύλισης για τη μεγιστοποίηση των συνολικών περιεχομένων των τεσσάρων ενώσεων δεικτών και των ακατέργαστων πολυσακχαριτών. Η επικύρωση και η 40πλάσια κλίμακα επιβεβαίωσαν την ευρωστία και τη δυνατότητα μεταφοράς της διαδικασίας. In vivo, η χορήγηση 30 ημερών δεν προκάλεσε άμεσο ύπνο, αλλά μείωσε σημαντικά τη συμπεριφορά που μοιάζει με άγχος στο τεστ ανοιχτού πεδίου, σύμφωνα με ένα ηρεμιστικό προφίλ. Το εκχύλισμα αύξησε τη συχνότητα του ύπνου με το νάτριο πεντοβαρβιτάλη υπό κατώφλι και μείωσε την επαγόμενη από πεντοβαρβιτάλη λανθάνουσα κατάσταση ύπνου ανάλογα με τη δόση, υποστηρίζοντας τη δυνατότητα βελτίωσης του ύπνου.
Σημείωση βιομηχανοποίησης: Δεδομένων των βελτιστοποιημένων παραμέτρων υδατικής εκχύλισης και της απαίτησης για σταθερά προφίλ δεικτών (εχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη, σπινοσίνη, κιτρικό οξύ, συν πολυσακχαρίτες), η παραγωγή σε κλίμακα GMP αξιοποιεί τον προηγμένο διαχωρισμό μεμβράνης, την υπερδιήθηση και τη νανοδιήθηση-όπως υλοποιείται στις εγκαταστάσεις WECISTANC0-class WECISTANC0, support10000 τυποποιημένα εκχυλίσματα. Η ολοκληρωμένη γεωργική βάση της εταιρείας (εκτροφή και καλλιέργεια σπόρων άνω των 100.000 στρεμμάτων) και η ικανότητα αποθήκευσης ψυκτικής αλυσίδας για φρέσκο Cistanche διευκολύνουν τον ποιοτικό έλεγχο της πρώτης ύλης. Οι υπάρχουσες πιστοποιήσεις (SC, HACCP, βιολογικά, NOP) και η υποδομή QC (10.000 μικροβιολογικά εργαστήρια) ευθυγραμμίζονται με τις απαιτήσεις ποιότητας εξαγωγικής ποιότητας και μπορούν να επιταχύνουν τη μετάφραση σε συμβατά λειτουργικά ποτά, συμπληρώματα υγείας ή αφεψήματα TCM για εγχώριες και διεθνείς αγορές.
Αναφορές
[1] ZHOU ES, RECKLITIS C J. Η παρέμβαση αϋπνίας που παρέχεται μέσω Διαδικτύου βελτιώνει τον ύπνο και την ποιότητα ζωής για εφήβους και νεαρούς ενήλικες που επιβιώνουν από καρκίνο. Pediatr Blood Cancer, 2020, 67(9): e28506.
[2] MORIN CM, BENCA R. Χρόνια αϋπνία. The Lancet, 2012, 379(9821): 1129–1141.
[3] CHEN Y, KARTSONAKI C, CLARKE R, et al. Χαρακτηριστικά και συσχετισμοί της διάρκειας του ύπνου, του ημερήσιου υπνάκου, του ροχαλητού και των συμπτωμάτων αϋπνίας μεταξύ 0,5 εκατομμυρίων Κινέζων ανδρών και γυναικών. Sleep Medicine, 2017, 44: 67–75.
[4] Tu PF, Jiang Y. Re-examination of the materia medica of Cistanche. China Journal of Chinese Materia Medica, 2022, 47(20): 5670–5679. (στα κινέζικα)
[5] FU Z, FAN X, WANG X, et al. Cistanches Herba: μια επισκόπηση της χημείας, της φαρμακολογίας και της φαρμακοκινητικής του ιδιότητας. Journal of Ethnopharmacology, 2018, 219: 233–247.
[6] SONG Y, ZENG K, JIANG Y, et al. Cistanches Herba, από είδος υπό εξαφάνιση σε μεγάλη μάρκα κινεζικής ιατρικής. Medicinal Research Reviews, 2021, 41(3): 1539–1577.
[7] Zhang SB, Wang L, Li H, et al. Επιδράσεις των συνολικών γλυκοσιδών του Cistanche στη μάθηση, τη γνωστική ικανότητα και τη συναπτική πλαστικότητα σε αρουραίους μοντέλων στέρησης ύπνου. Journal of Baotou Medical College, 2024, 40(6): 14–19+36. (στα κινέζικα)
[8] JIANG Y, LI SP, WANG YT, et al. Διαφοροποίηση Herba Cistanches με δακτυλικό αποτύπωμα με HPLC-DAD-MS. Journal of Chromatography Α, 2009, 1216(11): 2156–2162.
[9] SHERGIS JL, NI X, SARRIS J, et al. Σπόροι Ziziphus spinosa για την αϋπνία: Μια ανασκόπηση της χημείας και της ψυχοφαρμακολογίας. Phytomedicine, 2017, 34: 38–43.
[10] JIANG JG, HUANG XJ, CHEN J, et al. Σύγκριση των ηρεμιστικών και υπνωτικών επιδράσεων των φλαβονοειδών, σαπωνινών και πολυσακχαριτών που εξάγονται από τζιτζιφιές Semen Ziziphus. Natural Product Research, 2007, 21(4): 310–320.
[11] WANG LE, BAI YJ, SHI XR, et al. Η σπινοσίνη, ένα φλαβονοειδές C-γλυκοσιδίου από το σπέρμα Zizyphi spinosae, ενίσχυσε τον ύπνο που προκαλείται από πεντοβαρβιτάλη μέσω του σεροτονινεργικού συστήματος. Pharmacology Biochemistry & Behavior, 2008, 90(3): 399–403.
[12] DU CH, YAN Y, SHEN CX, et al. Συγκριτική φαρμακοκινητική έξι κύριων ενώσεων σε φυσιολογικούς και αϋπνικούς αρουραίους μετά από από του στόματος χορήγηση υδατικού εκχυλίσματος σπέρματος Ziziphi Spinosae. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2020, 4: 385–395.
[13] Wu YX, Liu HN, Wu M L. Επιδράσεις του αφεψήματος Wumei–Zaoren σε συνδυασμό με μετφορμίνη στη γλυκόζη του αίματος, την ποιότητα του ύπνου και τα αποτελέσματα σε διαβήτη τύπου 2 με διαταραχές ύπνου. Diabetes New World, 2023, 26(22): 13–17. (στα κινέζικα)
[14] Zhu XS, Peng SX, Zuo ZW, et al. Η ποιότητα του ύπνου και η μικροχλωρίδα του εντέρου αλλάζει μετά από από του στόματος χορήγηση τροποποιημένου χαπιού Wumei σε ασθενείς με αϋπνία. Shandong Medical Journal, 2022, 62(11): 47–49. (στα κινέζικα)
[15] Chen L, Zhang Q, Zhu YF, et al. Ανάλυση και σύγκριση φυσικοχημικών δεικτών και περιεκτικότητας σε κιτρικό οξύ Mume από διαφορετική προέλευση. Pharmacy and Clinical Research, 2022, 30(4): 327–330. (στα κινέζικα)
[16] Liu LS, Zhang Q, You L, et al. Τεχνολογία υδατικής εκχύλισης φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από Cistanche tubulosa. Επιστήμη και Τεχνολογία Τροφίμων, 2019, 44(4): 225–229. (στα κινέζικα)
[17] Wang BQ, Ying CM, Liu FX, et al. Προόδους στους μηχανισμούς TCM που ρυθμίζουν τους κιρκάδιους ρυθμούς για τη θεραπεία διαταραχών ύπνου. World Chinese Medicine, 2024, 19(24): 3881–3888. (στα κινέζικα)
[18] Shi CL, Jiang LJ, Shen HY, et al. Προόδους στις επιδράσεις και στους μηχανισμούς βελτίωσης του ύπνου των αλκαλοειδών από το φαρμακευτικό-φαγώσιμο TCM. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2024, 55(23): 8290–8300. (στα κινέζικα)
[19] Li XP, Niu YF, Wang MM, et al. Επιδράσεις ενός σύνθετου στερεού ροφήματος που αποτελείται κυρίως από Suanzaoren και Poria στον ύπνο. Journal of Food Safety and Quality, 2021, 12(11): 4453–4458. (στα κινέζικα)
[20] ZHAO W, ZHANG H, LI L, et al. Η σπινοσίνη ενισχύει τον ύπνο χωρίς γρήγορη κίνηση των ματιών και μεταβάλλει την έκφραση του c-Fos στις ρυθμιστικές περιοχές του εγκεφάλου ύπνου-εγρήγορσης σε ποντίκια. Sleep and Breathing, 2025, 29(1): 101.
[21] Liao DQ, Chu LS, Zhang JP, et al. Επιδράσεις της σπινοσίνης από το Suanzaoren στην έκφραση του υποθαλαμικού MCH και της Orexin-A σε αρουραίους που στερούνται ύπνου. Chinese Patent Medicine, 2019, 41(4): 907–910. (στα κινέζικα)
[22] RAZAVI BM, ZARGARANI N, HOSSEINZADEH H. Αντι-αγχωτικές και υπνωτικές επιδράσεις αιθανολικών και υδατικών εκχυλισμάτων φύλλων Lippia citriodora και βερμπασκοσίδης σε ποντίκια. Avicenna Journal of Phytomedicine, 2017, 7(4): 353–365.
[23] Dai HY, Di Y, Li X, et al. Επιδράσεις των πολυσακχαριτών Acanthopanax senticosus σε νευρωνική βλάβη του ιππόκαμπου σε αρουραίους που στερούνται ύπνου μέσω της οδού SIRT1/PGC-1. Journal of Traditional Chinese Medicine Guide, 2025, 31(1): 48–52. (στα κινέζικα)
Επικοινωνία και βιομηχανική συνεργασία: Η Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. καλωσορίζει συνεργασίες για Ε&Α, κλιμάκωση, OEM/ODM λειτουργικών ποτών και εκχυλισμάτων με βάση το Cistanche. Διεύθυνση: No.1, Όροφος 26, Μονάδα 1, Κτήριο 6, Οδός Sheng'an No.133, Περιοχή υψηλής τεχνολογίας, Chengdu, Sichuan, Κίνα (Πιλοτική Ζώνη Ελεύθερων Συναλλαγών). E-mail: admin@wecistanche.com; Τηλέφωνο: +86 15899210156; Τηλ: +86 028 68170085.
Θέλετε να το μορφοποιήσω ως χειρόγραφο περιοδικού (IMRAD με πίνακες/σχήματα), να προσθέσω μια αγγλική περίληψη με λέξεις-κλειδιά ή να μετατρέψω τις λεπτομέρειες της μεθόδου σε ένα φύλλο SOP/προδιαγραφών κατάλληλο για μεταφορά παραγωγής GMP;
