Νιοσωμικοί νανοφορείς για ενισχυμένη παροχή κερκετίνης στο δέρμα με λειτουργίες αντι-τυροσινάσης και αντιοξειδωτικές

Αφηρημένη:

Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να εξετάσει ένα αποτελεσματικό φλαβονοειδές με πολλά υποσχόμενες λευκαντικές και αντιοξειδωτικές ικανότητες και να σχεδιάσει νιοσώματα φορτωμένα με φλαβονοειδή για να βελτιώσει τη διαλυτότητα, τη σταθερότητα και τη διείσδυσή του. Διεξήχθησαν in vitro πειράματα καθαρισμού ελεύθερων ριζών αντι-τυροσινάσης και 1,1-διφαινυλ-2-πικρυλυδραζυλίου (DPPH) για τη διερεύνηση της λευκαντικής και αντιοξειδωτικής ικανότητας αρκετών φλαβονοειδών, συμπεριλαμβανομένης της κερκετίνης, της μορίνης, της φεστίνης, της μυρικετίνης, της ρουτίνης και μπρεβισκαπίνη.

Η αγωγιμότητα, το ιξώδες και το μέγεθος σωματιδίων του σκευάσματος με βάση το Span{{0}}RH40- των μη ιοντικών τασιενεργών κυστιδίων (νιοσωμάτων) με διαφορετικές αναλογίες μάζας μελετήθηκαν για να προσδιοριστεί η καταλληλότερη σύνθεση. Τα φορτωμένα με φάρμακα νιοσώματα χαρακτηρίστηκαν για το μέγεθος, το δυναμικό ζήτα, τη μορφολογία και την αποτελεσματικότητα παγίδευσης. Μελετήθηκαν επίσης η φωτοσταθερότητα, η διαλυτότητα, η συμπεριφορά απελευθέρωσης, η ex vivo διείσδυση του φαρμάκου και η κατακράτηση του δέρματος. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η κερσετίνη έχει σημαντική λευκαντική και αντιοξειδωτική ικανότητα και το Span60-RH40 σε αναλογία μάζας 9:11 σχηματίζει σφαιρικά ή ωοειδή νιοσώματα 97,6 ± 3,1 nm με εύρος ζήτα δυναμικού 31,1 ± 0,9 mV και φάρμακο αποτελεσματικότητα παγίδευσης έως και 87,3 ± 1,6 τοις εκατό . Τα νιοσώματα βελτίωσαν αξιοσημείωτα τη διαλυτότητα και τη φωτοσταθερότητα της κερκετίνης.

Επιπλέον, σε σύγκριση με το διάλυμα κερκετίνης, τα λιποσώματα κερκετίνης είχαν τα πλεονεκτήματα της παρατεταμένης απελευθέρωσης και της βελτιωμένης διαδερμικής διείσδυσης, με κατακράτηση δέρματος 2,95 φορές υψηλότερη από το διάλυμα κερκετίνης.

Αντιοξειδωτικό είναι κάθε ουσία που μπορεί να αναστείλει αποτελεσματικά την αντίδραση οξείδωσης των ελεύθερων ριζών σε χαμηλές συγκεντρώσεις. Ο μηχανισμός δράσης του μπορεί να είναι η άμεση δράση στις ελεύθερες ρίζες ή η έμμεση κατανάλωση ουσιών που είναι εύκολο να παραχθούν ελεύθερες ρίζες για να αποφευχθούν περαιτέρω αντιδράσεις. Ενώ το ανθρώπινο σώμα παράγει αναπόφευκτα ελεύθερες ρίζες, παράγει επίσης φυσικά αντιοξειδωτικές ουσίες που αντιστέκονται στις ελεύθερες ρίζες για να εξουδετερώσει τις οξειδωτικές επιθέσεις των ελεύθερων ριζών στα ανθρώπινα κύτταρα. Μελέτες έχουν αποδείξει ότι το αντιοξειδωτικό σύστημα του ανθρώπινου σώματος είναι ένα σύστημα με πλήρεις και σύνθετες λειτουργίες συγκρίσιμες με το ανοσοποιητικό σύστημα. Όσο ισχυρότερη είναι η αντιοξειδωτική ικανότητα του σώματος, τόσο πιο υγιές είναι και τόσο μεγαλύτερη είναι η διάρκεια ζωής του. Στην έρευνά μας, διαπιστώσαμε ότι το Cistanche deserticola έχει επίσης αντιοξειδωτική δράση. Το Cistanche deserticola είναι πλούσιο σε πολυσακχαρίτες, φλαβονοειδή, αλκαλοειδή, φλαβονοειδή γλυκοσίδες, οξέα φλαβονών και άλλα συστατικά και αυτές οι ουσίες έχουν ισχυρή αντιοξειδωτική δράση. Μπορούν να αντισταθούν στο οξειδωτικό στρες και να μειώσουν την κυτταρική βλάβη δεσμεύοντας τις ελεύθερες ρίζες, μειώνοντας τις αντιδράσεις οξείδωσης και αυξάνοντας τη δραστηριότητα των αντιοξειδωτικών ενζύμων, παίζοντας έτσι αντιοξειδωτικό ρόλο.

Κάντε κλικ στο προϊόν συμπληρώματος cistanche deserticola

Λέξεις-κλειδιά:

αντι-τυροσινάση; αντιοξειδωτικό; νιοσώματα; φωτοσταθερότητα? διαδερμική παράδοση.

1. Εισαγωγή

Τα φλαβονοειδή διανέμονται ευρέως σε φρούτα, λαχανικά και βότανα και έχουν εκτεταμένες βιολογικές δραστηριότητες, συμπεριλαμβανομένων των αντιικών, αντιφλεγμονωδών, αντικαρκινικών, αντιοξειδωτικών και αντι-τυροσινάσης [1,2]. Πρόσφατα, η αναζήτηση ενός ασφαλούς νέου αναστολέα τυροσινάσης έχει λάβει μεγάλη προσοχή στον τομέα των καλλυντικών, επειδή ορισμένοι από τους γνωστούς αναστολείς, όπως το κοτζικό οξύ, η υδροκινόνη και τα κορτικοστεροειδή, μπορεί να προκαλέσουν προβλήματα υγείας, όπως δερματίτιδα και ερεθισμό του δέρματος. , ωχρόνοια, κυτταροτοξικότητα και καρκίνο του δέρματος [3]. Λόγω της χαμηλής τοξικότητάς τους και των σημαντικών αντιοξειδωτικών και αντι-τυροσινασών τους, τα φλαβονοειδή έχουν προσελκύσει μεγάλο ενδιαφέρον ως πιθανοί φυσικοί λευκαντικοί και αντιοξειδωτικοί παράγοντες για χρήση σε προϊόντα περιποίησης δέρματος [4-6].

Ωστόσο, τα φλαβονοειδή έχουν πολλές διαφορετικές δομές, συμπεριλαμβανομένων διαφορετικών διαμορφώσεων με τον ίδιο μητρικό πυρήνα, αλλά εξακολουθεί να είναι ασαφές ποια είδη δομών διαθέτουν ισχυρές ιδιότητες αντι-τυροσινάσης και αντιοξειδωτικής δράσης. Επιπλέον, τα περισσότερα φλαβονοειδή έχουν κακή υδατοδιαλυτότητα και λιποδιαλυτότητα και η μέτρια λιποφιλικότητα και το χαμηλό μοριακό βάρος είναι παράγοντες που είναι γνωστό ότι προάγουν την καλύτερη διείσδυση. Ένας άλλος σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την αποτελεσματικότητα των συστατικών είναι οι βιολογικοί φραγμοί του ίδιου του δέρματος, όπως η κεράτινη στιβάδα. Αν και οι φυσικοχημικές μέθοδοι, συμπεριλαμβανομένης της ιοντοφόρησης, των υπερήχων, των μικροβελονών, των συστημάτων έγχυσης χωρίς βελόνα και των ενισχυτών διείσδυσης, μπορούν να προάγουν τη διείσδυση δραστικών συστατικών μέσω της κεράτινης στιβάδας, αυτές οι μέθοδοι μπορεί να είναι επεμβατικές, να ερεθίζουν το δέρμα και είναι ακριβές.

Από την άλλη πλευρά, έχουν προκύψει κάποια νέα συστήματα παροχής δραστικών συστατικών με τη μεσολάβηση φορέα, συμπεριλαμβανομένων γαλακτώματος, μικκυλίων, κυστιδίων και κυκλοδεξτρίνης, για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας των υπαρχόντων συστατικών, ειδικά αυτών με χαμηλή διαλυτότητα και βιοδιαθεσιμότητα. Τα κυστίδια έχουν λάβει μεγαλύτερη προσοχή για τη διαδερμική παράδοση. Μεταξύ των κυστιδίων, τα τρανσφερσώματα είναι καλά παραμορφώσιμα λιποσώματα με ενισχυμένη διαδερμική διαπερατότητα και μπορούν να βελτιώσουν τη διαλυτότητα και τη σταθερότητα του φαρμάκου. Τα τρανσφερσώματα αποτελούνται από μια συγκεκριμένη αναλογία φωσφολιπιδίων και επιφανειοδραστικών ουσιών, ενώ τα φωσφολιπίδια είναι ακριβά και οξειδώνονται εύκολα.

Επομένως, η αναζήτηση άλλων σταθερών και αντικαταστάσιμων κυστιδίων είναι ένα ενδιαφέρον ερευνητικό αντικείμενο. Τα νιοσώματα είναι μη ιονικά επιφανειοδραστικά φυσαλιδώδη συστήματα, που αναφέρθηκαν για πρώτη φορά το 1979 όταν εφαρμόστηκαν στη βιομηχανία καλλυντικών [7], αλλά έκτοτε έχουν μελετηθεί ως σύστημα χορήγησης φαρμάκων στη φαρμακευτική [8-13]. Οι φυσικές ιδιότητες, οι τεχνικές παρασκευής και οι δομές των νιοσωμάτων είναι πολύ παρόμοιες με εκείνες των λιποσωμάτων. Ωστόσο, τα νιοσώματα έχουν επίσης πλεονεκτήματα στη διαδερμική χορήγηση φαρμάκου, όπως παρατεταμένη απελευθέρωση φαρμάκου, καλύτερη διείσδυση και υψηλότερη συγκράτηση του δέρματος [14], είναι λιγότερο δαπανηρή στην προετοιμασία και είναι πιο σταθερά [15]. Ως εκ τούτου, τα νιοσώματα μπορούν να εφαρμοστούν στη βιομηχανία καλλυντικών [16-18].

Τα πρώιμα κυστίδια επιφανειοδραστικών παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας ιοντικά τασιενεργά [19-22]. Οι ολοκληρωμένες μελέτες τοξικότητας σε επιφανειοδραστικές ουσίες έδειξαν ότι τα κατιονικά τασιενεργά είναι τα πιο τοξικά, ακολουθούμενα από τα ανιονικά τασιενεργά, ενώ τα μη ιονικά τασιενεργά είναι τα λιγότερο τοξικά. Ως εκ τούτου, λαμβάνοντας υπόψη την ασφάλεια και τη βιομηχανική εφαρμογή, η χρήση λιποσωμάτων που περιλαμβάνουν μη ιονικά τασιενεργά είναι μια καλύτερη επιλογή για διαδερμική χορήγηση. Λόγω της δομής των αμφίφιλων διπλών στρωμάτων, ένα εύρος κλίμακας υδρόφιλης-λιπόφιλης ισορροπίας (HLB) από 4 έως 8 θα είναι ευκολότερο να σχηματίσει νιοσώματα από [14,23,24].

Επομένως, τα τυποποιημένα, μη ιονικά επιφανειοδραστικά με διαφορετικές τιμές HLB θα είναι ευκολότερα για το σχηματισμό νιοσωμάτων. Το Span, το Tween και το Brij είναι κοινά μη ιονικά τασιενεργά που χρησιμοποιούνται για την παρασκευή λιποσωμάτων [15,25-34]. Τα μη ιονικά επιφανειοδραστικά με μακριές αλυσίδες υδρογονάνθρακα χωρίς διπλούς δεσμούς είναι επιλέξιμοι υποψήφιοι επειδή μπορούν να σχηματιστούν σταθερά νιοσώματα με δυνατότητα αυξημένης φόρτισης φαρμάκου. Το Span60, με χαμηλή τιμή HLB, έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για το σχηματισμό νιοσωμάτων [15,29,31,33,34]. Τα μη ιονικά επιφανειοδραστικά με υψηλές τιμές HLB, όπως τα Tween20, Tween60, Tween80, Brij35 και Brij58, δεν σχηματίζουν εύκολα νιοσώματα μόνα τους ή χωρίς βέλτιστη ποσότητα χοληστερόλης [28,35,36], λόγω του ογκώδους υδρόφιλου τους κεφαλές και κοντές αλυσίδες υδρογονανθράκων. Επομένως, μπορούν να σχηματίσουν νιοσώματα μόνο με την προσθήκη χοληστερόλης ή όταν συνταγοποιούνται με άλλα επιφανειοδραστικά [10,27,31,37-39]. Το Cremophor RH40 είναι εξαιρετικά υδρόφιλο και έχει χαμηλή τοξικότητα και χρησιμοποιείται ευρέως σε σκευάσματα από του στόματος φάρμακα, αλλά καμία αναφορά δεν έχει δείξει τη χρήση του Cremophor RH40 στη σύνθεση λιποσωμάτων.

Σε αυτήν τη μελέτη, εξετάσαμε για φλαβονοειδή με καλή λευκαντική και αντιοξειδωτική δράση και διερευνήσαμε το Span60-RH40, ένα μη ιονικό επιφανειοδραστικό σύστημα με διαφορετικές αναλογίες λιπιδίων για το σχηματισμό νιοσωμάτων. Τα νιοσώματα φορτωμένα με κερκετίνη χαρακτηρίστηκαν για το μέγεθος των κυστιδίων, το δυναμικό ζήτα, την αποτελεσματικότητα της ενθυλάκωσης και το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης (TEM) και διερευνήθηκαν επίσης η διαλυτότητα και η φωτοσταθερότητά τους. Επιπλέον, οι αρουραίοι χρησιμοποιήθηκαν για τη διερεύνηση της διαδερμικής διείσδυσης νιοσωμάτων φορτωμένων με κερκετίνη.

2. Αποτελέσματα

2.1. Αναστολή Τυροσινάσης Φλαβονοειδών

Είναι ευρέως γνωστό ότι τα φλαβονοειδή διαθέτουν πολλαπλές ομάδες υδροξυλίου (Εικόνα 1) που είναι σημαντικές για τη δράση κατά της τυροσινάσης. Αναφέρεται ότι ο αριθμός και η θέση των υδροξυλομάδων καθώς και η παρουσία τμημάτων σακχάρου σχετίζονται με την αναστολή της τυροσινάσης. Στον Πίνακα 1, η Myricetin δεν έδειξε δράση κατά της τυροσινάσης επειδή σχηματίζει εύκολα ισχυρούς διαμοριακούς δεσμούς υδρογόνου που μπορεί να εμποδίσουν τη χηλοποίηση με τυροσινάση. Η ρουτίνη και η μπρεβισκαπίνη δεν έδειξαν πολλά υποσχόμενη δράση κατά της τυροσινάσης, ενώ η κερσετίνη, η μορίν και η φεστίνη εμφάνισαν σημαντικά μεγαλύτερη δράση κατά της τυροσινάσης από την αρμπουτίνη, η οποία είναι ένας κοινός λευκαντικός παράγοντας που χρησιμοποιείται στα καλλυντικά.

2.2. Αντιοξειδωτική δράση των φλαβονοειδών

Flavonoids can scavenge free radicals as antioxidants by donating a hydrogen atom. The antioxidant activity of flavonoids is related to the number of hydroxyl groups and their structure. This includes (i) the presence of an ortho-hydroxyl group in the B ring; (ii) the presence of a C2-C3 double bond in the C ring; (iii) or the presence of a C-3 hydroxyl group [40–42]. As shown in Table 2, the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity of the six compounds is in the following order: quercetin = fest in>myricetin=morin > rutin > BHT ≈ breviscapine. Η κερσετίνη και η φεστίνη είχαν την πιο ισχυρή ικανότητα σάρωσης ριζών.

2.3. Σκεύασμα Νιοσωμάτων

2.3.1. Αγωγιμότητα του συστήματος Span60-RH40

Τα τρανσφερσώματα είναι ασταθή επειδή αποτελούνται κυρίως από φωσφολιπίδια που μπορούν εύκολα να οξειδωθούν, προκαλώντας διαρροή φαρμάκου. Τα νιοσώματα ταυτοποιήθηκαν ως εναλλακτική λύση για τα τρανσφερσώματα στη διαδερμική χορήγηση. Αν και πολλά μη ιονικά τασιενεργά μπορούν να σχηματίσουν νιοσώματα [15,26,28], τα μη ιονικά τασιενεργά με ακόρεστες υδρογονανθρακικές αλυσίδες είναι λιγότερο σταθερά από τα μη ιονικά τασιενεργά με αλυσίδες κορεσμένων υδρογονανθράκων [37]. Ως εκ τούτου, σε αυτή τη μελέτη, επιλέξαμε τα Span60 και RH40, τα οποία και τα δύο δεν διαθέτουν διπλούς δεσμούς, για να σχηματίσουν νιοσώματα για να βελτιώσουν τη σταθερότητά τους.

Πραγματοποιήθηκαν μετρήσεις αγωγιμότητας για τον προσδιορισμό της συμπεριφοράς συσσωμάτωσης μη ιονικών επιφανειοδραστικών ουσιών σε ένα υδατικό διάλυμα. Η αγωγιμότητα του Span60-RH40 διασκορπισμένου στο νερό αυξήθηκε σταδιακά από αναλογία μάζας 4:16 σε 9:11, στη συνέχεια έπεσε μεταξύ των αναλογιών μάζας από 9:11 έως 13:7 και μειώθηκε από 13:7 σε 16 :4 (Εικόνα 2α). Δύο σημεία διακοπής μπορεί να υποδηλώνουν αλλαγές στη μικροδομή των αδρανών. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, με αναλογία μάζας 9:11, άρχισαν να σχηματίζονται νιοσώματα.

2.3.2. Μέγεθος του συστήματος Span60-RH40

Το μέγεθος των σωματιδίων είναι ο σημαντικός δείκτης για την αξιολόγηση των σωματιδίων νανομέτρων. Η μέτρηση του μεγέθους του συστήματος Span60-RH40 με διαφορετικές αναλογίες μάζας επιφανειοδραστικής ουσίας θα μπορούσε να αντανακλά περαιτέρω την αλλαγή στη μικροδομή των αδρανών στο σύστημα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2β, αρχικά, το μέγεθος των αδρανών ήταν σχετικά μικρό και σταθερό στην αναλογία μάζας 4:16 έως 9:11. Στη συνέχεια, το μέγεθος των αδρανών αυξήθηκε πολύ στην αναλογία μάζας από 9:11 έως 13:7 και στη συνέχεια αυξανόταν συνεχώς απότομα στην αναλογία μάζας 13:7 έως 16:4, που ήταν ακόμη και έως ~1 μm. Η αυθόρμητη δομική μετάβαση των αδρανών Span60/RH40 επιβεβαιώθηκε περαιτέρω από το μέγεθος των αδρανών σε συνδυασμό με την αγωγιμότητα και το ιξώδες.

2.3.3. Ιξώδες του συστήματος Span60-RH40

Το ιξώδες του συστήματος Span60-RH40 που φαίνεται στο Σχήμα 2γ παρουσίασε τις αντίστοιχες αλλαγές. Πρώτον, το ιξώδες του συστήματος Span60-RH40 ήταν χαμηλό και σταθερό στην αναλογία μάζας 4:16 έως 9:11. Στη συνέχεια, στην αναλογία μάζας 9:11 έως 13:7, το ιξώδες άλλαξε σημαντικά, με το ιξώδες να αυξάνεται και στη συνέχεια να μειώνεται. Η αγωγιμότητα και το μέγεθος που συζητήθηκαν παραπάνω εμφανίστηκαν επίσης που αντιστοιχούν σε αλλαγές σε αυτό το εύρος του λόγου μάζας του Span60-RH40. Στη συνέχεια, στην αναλογία μάζας 13:7 έως 16:4, το ιξώδες αυξήθηκε απότομα.

2.4. Μέγεθος, Ζήτα Δυναμικό, Μορφολογία και Αποτελεσματικότητα Εγκλωβισμού Κερκετίνης-Νιοσωμάτων

Η κερσετίνη φορτώθηκε με νιοσώματα Span60-RH40 και στη συνέχεια ομογενοποιήθηκε με 1500 bar. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, η υδροδυναμική διάμετρος των τυφλων νιοσωμάτων και των λιποσωμάτων κερκετίνης ήταν 146,4 ± 5,4 nm και 97,6 ± 3,1 nm, αντίστοιχα.

Το δυναμικό ζήτα μελετήθηκε για την κατανόηση των επιφανειακών φορτίων των νιοσωμάτων. Το δυναμικό ζήτα των κενών νιοσωμάτων και των κερκετίνης-νιοσωμάτων ήταν −41,2 ± 0,6 mV και −31,1 ± 0,9 mV, αντίστοιχα (Πίνακας 3). Η εικόνα TEM στο Σχήμα 4β έδειξε ότι τα νιοσώματα κερκετίνης ήταν σφαιρικά ή ωοειδή. Η αποτελεσματικότητα παγίδευσης των λιποσωμάτων κερκετίνης ήταν 87,3 ± 1,6 τοις εκατό, η οποία ήταν υψηλότερη από εκείνες στην περιοχή από 48,4 τοις εκατό έως 78,4 τοις εκατό σε προηγούμενες εργασίες [37,43,44]. Η αυξημένη αποτελεσματικότητα παγίδευσης φαρμάκου μπορεί να αποδοθεί στη συγγένεια μεταξύ των φαρμάκων και των διπλών στοιβάδων των νιοσωμάτων [45].

2.5. Υδατοδιαλυτότητα και Διαλυτότητα Ισορροπίας Κερσετίνης

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, η διαλυτότητα της κερκετίνης στο νερό ήταν εξαιρετικά χαμηλή. Η διαλυτότητά του δεν είχε σημαντική διαφορά (P > 0.05) σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών με διαφορετικό pH σε σύγκριση με αυτό στο νερό. Το αποτέλεσμα της ισορροπίας διαλυτότητας της κερκετίνης έδειξε ότι η κερκετίνη ήταν ένα εξαιρετικά λιποδιαλυτό συστατικό. Όπως φαίνεται στα Σχήματα 6 και 7, η διαλυτότητα ισορροπίας της κερκετίνης παρέμεινε σταθερή σε διαφορετικές αναλογίες νερού/η-οκτανόλης αλλά μειώθηκε σε ρΗ 8,0 επειδή η δομή της κερκετίνης άλλαξε υπό βασικές συνθήκες, προκαλώντας αύξηση στη διαλυτότητα στο νερό.

Ωστόσο, η κακή υδατοδιαλυτότητα της κερκετίνης περιορίστηκε στην εφαρμογή της. Με βάση τον Πίνακα 4, η διαλυτότητα της κερκετίνης βελτιώθηκε στα επιφανειοδραστικά που συζητούνται παρακάτω, ειδικά στο 0,6 τοις εκατό Tween80 (P < 0.05). Ωστόσο, η διαλυτότητά του βελτιώθηκε περαιτέρω με τη φόρτωσή του σε νιοσώματα. Η κερσετίνη (300 μg/mL) φορτώθηκε σε νιοσώματα και η υψηλή ενθυλάκωση του θορύβου Span60-RH40 ήταν 87,3 ± 1,6 τοις εκατό, επομένως, η διαλυτότητα της κερκετίνης στα νιοσώματα ήταν 261,9 ± 4,8 μg/mL, που ήταν {60-Μg/mL, 17}}πλάσια υψηλότερη από αυτή στο νερό (P < 0,05).

2.6. Φωτοσταθερότητα Κερσετίνης-Νιοσωμάτων

Η κερσετίνη έχει κακή φωτοσταθερότητα και αποικοδομείται γρήγορα υπό την έκθεση στο ηλιακό φως ή στην υπεριώδη ακτινοβολία [46-48], πιθανώς επειδή η κερσετίνη υφίσταται φωτοοξείδωση κατά την ακτινοβολία UV [49]. Ωστόσο, η φωτοσταθερότητα είναι απαραίτητη για την κερκετίνη για να δείξει τις δραστηριότητές της. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 8, τα νιοσώματα βελτίωσαν αποτελεσματικά τη φωτοσταθερότητα της Κερκετίνης και παρέμειναν στο 88,06 τοις εκατό μετά από 10 ημέρες έκθεσης σε ισχυρό φωτισμό. Η κερκετίνη προστατεύτηκε από την υπεριώδη ακτινοβολία επειδή ήταν εγκλωβισμένη στις διπλές στοιβάδες των νιοσωμάτων. Molecules 2019, 24, x ΓΙΑ ΑΝΤΙΚΡΙΣΗ ΟΤΙΚΩΝ 8 από 18 έκθεσης σε έντονο φωτισμό. Η κερκετίνη προστατεύτηκε από την υπεριώδη ακτινοβολία επειδή ήταν εγκλωβισμένη στις διπλές στοιβάδες των νιοσωμάτων.

2.7. Συμπεριφορά In vitro απελευθέρωσης κερκετίνης-νιοσωμάτων

Το κατάλληλο μέσο απελευθέρωσης υποβλήθηκε σε διαλογή για να διατηρηθούν οι συνθήκες βύθισης, επομένως αξιολογήθηκε η διαλυτότητα της κερσετίνης στα διαφορετικά μέσα. Τα αποτελέσματα στον Πίνακα 5 καταδεικνύουν ότι η κερσετίνη είχε υψηλότερη διαλυτότητα στο υδατικό Tween80 και η διαλυτότητά της αυξήθηκε σταδιακά με την αύξηση της συγκέντρωσης του Tween80. Η διαλυτότητα της κερκετίνης αυξήθηκε σε 76,07 ± 3,11 μg/mL σε όξινες συνθήκες. Επομένως, λαμβάνοντας υπόψη το pH του ανθρώπινου δέρματος, επιλέχθηκε το 0,8 τοις εκατό Tween80 (pH 5,0) ως μέσο απελευθέρωσης για τη μελέτη της συμπεριφοράς απελευθέρωσης της ελεύθερης κερκετίνης και των νιοσωμάτων κερκετίνης.

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 9, σε σύγκριση με τα κερκετίνη-νιοσώματα, η ελεύθερη κερκετίνη απελευθερώθηκε πολύ πιο γρήγορα στο μέσο απελευθέρωσης, αποδεικνύοντας ότι τα νιοσώματα είχαν ένα αποτέλεσμα παρατεταμένης απελευθέρωσης. Η παρατεταμένη απελευθέρωση μειώνει τον χρόνο εφαρμογής, μειώνει την τοξικότητα και διατηρεί την αποτελεσματική συγκέντρωση του φαρμάκου.

2.8. Ex Vivo Μελέτες Διαπέρασης και Κατακράτησης Δέρματος

Ένα διάλυμα {{0}},6 τοις εκατό Tween80 χρησιμοποιήθηκε ως μέσο απελευθέρωσης διείσδυσης σε αυτή τη μελέτη. Στη μελέτη διείσδυσης exvivo, δεν ήταν δυνατό να προσδιοριστεί η κερκετίνη στο μέσο απελευθέρωσης διείσδυσης, γεγονός που απέδειξε ότι η κερκετίνη δεν διείσδυσε στο χόριο και δεν έφτασε στο μέσο απελευθέρωσης, αλλά τα νιοσώματα βελτίωσαν αξιοσημείωτα την κατακράτηση της κερκετίνης στο δέρμα (P < 0). {20}}5). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 6, η δερματική κατακράτηση κερκετίνης-νιοσωμάτων (1,92 συν 0,74 ug/cm;), κερκετίνης-νιοσώματος-1 τοις εκατό προπανοδιόλης (2,34 συν 0,40 ug /cm;), και τα μεταφερσώματα κερκετίνης (2,53 συν 0,40 ug/cm-) ήταν σημαντικά υψηλότερα σε σύγκριση με αυτά της κουερκετίνης-προπανοδιόλης (0,65 συν 0,10 ug/cm2) (Ρ < 0,05).

3. Συζήτηση

Προηγούμενες μελέτες έχουν καθορίσει ότι η ελεύθερη υδροξυλική ομάδα στη θέση C-3 έπαιξε σημαντικό ρόλο στην αναστολή της τυροσινάσης [50-52]. Αντίθετα, οι 3-Ο-γλυκοσίδες μπορεί να εμποδίσουν τη δέσμευσή τους στις ενεργές θέσεις της τυροσινάσης και μπορεί να είναι ο λόγος για τον οποίο η ρουτίνη δεν έδειξε δράση κατά της τυροσινάσης. Αντίθετα, το τμήμα σακχάρου που βρίσκεται στη θέση C-7 είχε μικρή επίδραση στη δράση κατά της τυροσινάσης και δεν εμπόδισε τη χηλοποίηση με τυροσινάση [51].

Ωστόσο, η παρουσία μιας πρόσθετης ομάδας υδροξυλίου στη θέση C{0}} του δακτυλίου Β αύξησε την αναστολή της τυροσινάσης [53,54]. Η μπρεβισκαπίνη δεν εμφάνισε δράση κατά της τυροσινάσης επειδή δεν είχε την C{4}} υδροξυλομάδα και την C-30 υδροξυλική ομάδα που μπορεί να είχε επίδραση στη δράση κατά της τυροσινάσης παρά στην παρουσία της 7- Ο-γλυκοσίδες. Κατά την ανάλυση της σχέσης δομής-δραστικότητας της κερσετίνης και του morin, παρατηρήσαμε ότι η τιμή IC50 του morin είναι περίπου το 1/3 αυτής της κερσετίνης και η μόνη διαφορά μεταξύ της δομής της κερκετίνης και του morin είναι η θέση των υδροξυλομάδων στον δακτύλιο Β.

Ως εκ τούτου, η παρουσία ο-διυδροξυλομάδων στον Β δακτύλιο αύξησε τη δράση αντι-τυροσινάσης. Η τιμή IC50 της φεστίνης ήταν περίπου 1/20 αυτής της κερκετίνης και η μόνη διαφορά μεταξύ της δομής της κερκετίνης και της φεστίνης είναι ότι η φεστίνη είναι η απουσία μιας C-5 υδροξυλικής ομάδας στον Α δακτύλιο. Η ομάδα υδροξυλίου στη θέση C-5 παίζει επίσης σημαντικό ρόλο στην αύξηση της δραστηριότητας αναστολής της τυροσινάσης, καθώς μπορεί να χηλώσει το Cu2 plus στην ενεργό θέση της τυροσινάσης με ένα καρβονύλιο στη θέση C-4 [50 ]. Η κουερσετίνη διαθέτει ελεύθερες υδροξυλομάδες, όχι μόνο στις θέσεις C-3 και C-5 του δακτυλίου C αλλά και στη θέση C-30 του δακτυλίου Β. Έτσι, η κερσετίνη εμφανίζει πολύ πιο ισχυρή αναστολή της τυροσινάσης σε σύγκριση με τα άλλα φλαβονοειδή.

Τα φλαβονοειδή όχι μόνο έχουν πολλά υποσχόμενη δράση κατά της τυροσινάσης αλλά έχουν επίσης ισχυρή αντιοξειδωτική δράση. Η κερσετίνη έχει μια επιπλέον C-5 υδροξυλομάδα. Ωστόσο, τόσο η κερσετίνη όσο και η φισετίνη είχαν την ίδια αντιοξειδωτική ικανότητα, υποδηλώνοντας ότι η ομάδα C-5 υδροξυλίου είχε μικρή επίδραση στην απομάκρυνση των ριζών. Η μυρικετίνη διαθέτει περισσότερες υδροξυλομάδες στον δακτύλιο Β, αλλά δεν εμφάνισε ισχυρότερη αντιοξειδωτική δράση από την κερσετίνη ή τη φισετίνη. Αυτό μπορεί να οφείλεται στο ότι η μυρικετίνη μπορεί να σχηματίσει ισχυρούς διαμοριακούς δεσμούς υδρογόνου και να μειώσει τη δωρεά ατόμων υδρογόνου.

Ομοίως, το morin έδειξε χαμηλότερη αντιοξειδωτική ικανότητα από την κερσετίνη και τη φεστίνη λόγω της υδροξυλικής διαμόρφωσης του δακτυλίου Β, η οποία επεξηγεί ότι το ο-διυδροξυλικό στον δακτύλιο Β είναι σημαντικό για την αύξηση της ικανότητας δέσμευσης ριζών. Ωστόσο, η ρουτίνη και η μπρεβισκαπίνη είχαν σημαντικά χαμηλότερες αντιοξειδωτικές ικανότητες, επειδή η ρουτίνη έχει γλυκοσίδες στη θέση C-3 που παράγουν στερικό εμπόδιο. Η μπρεβισκαπίνη έχει μία μόνο ομάδα υδροξυλίου στον δακτύλιο Β και έχει λιγότερες ελεύθερες υδροξυλομάδες. Κατά συνέπεια, τα αποτελέσματα σε αυτό το έγγραφο υποδεικνύουν ότι η διαμόρφωση υδροξυλίου του δακτυλίου Β ήταν σημαντική για την αντιοξειδωτική ικανότητα των φλαβονοειδών, ενώ ο δακτύλιος Α είχε μικρή επίδραση στην ικανότητα σάρωσης ριζών. Επιπλέον, ο αποκλεισμός ή η αφαίρεση της ομάδας υδροξυλίου στη θέση C-3 μπορεί να μειώσει την ικανότητα δέσμευσης ριζών των φλαβονοειδών.

Τα Span60 και RH40 δεν έχουν δυνατότητα ιονισμού. Επομένως, τα φορτία φαίνεται να προέρχονται από την αλληλεπίδραση μεταξύ των υδρόφιλων ομάδων κεφαλής των Span60 και RH40 που σχηματίζουν δεσμούς υδρογόνου [55], όταν σχηματίζονται φορτισμένα συσσωματώματα μεταξύ του λιπόφιλου Span60 και του υδρόφιλου RH40.

Επομένως, η αγωγιμότητα μπορεί να οφείλεται στον συνδυασμό Span60 και RH40. Η αγωγιμότητα αυξήθηκε αρχικά, πιθανώς επειδή η προσθήκη του Span60, που συνδέεται με το RH40, σχηματίζει φορτισμένα μικτά μικκύλια. Η αύξηση του Span60 αύξησε επίσης τον αριθμό των φορτισμένων αδρανών και η αγωγιμότητα αυξήθηκε σταδιακά. Σημειώθηκε σημείο διακοπής στην αναλογία μάζας 9:11. Η ξαφνική αλλαγή υποδηλώνει ότι η μικροδομή των αδρανών μπορεί να αλλάξει και να σχηματιστούν νιοσώματα. Η αγωγιμότητα στη συνέχεια μειώθηκε ελαφρώς και παρέμεινε σχετικά σταθερή, γεγονός που μπορεί να υποδηλώνει το σχηματισμό νιοσωμάτων, καθώς τα φορτία περικλείονταν. Ένα άλλο σημείο θραύσης εμφανίστηκε στην αναλογία μάζας 13:7 και η αγωγιμότητα μειώθηκε απότομα, ωστόσο, το μέγεθος των αδρανών αυξήθηκε με την αύξηση του Span60, πιθανώς λόγω του σχηματισμού πυκνών συστάδων των μεγαλύτερων πολυστρωματικών νιοσωμάτων και της εμφάνισης λευκού ιζήματος [56 ,57], προκαλώντας τη μείωση των ελεύθερων χρεωμένων μεγεθών.

Η αυθόρμητη δομική μετάβαση των αδρανών Span60-RH40 επιβεβαιώθηκε περαιτέρω από το μέγεθος των αδρανών σε συνδυασμό με την αγωγιμότητα και το ιξώδες. Όταν το κλάσμα μάζας του RH40 ήταν κυρίαρχο, το μέγεθος των αδρανών ήταν σχετικά σταθερό και μικρό. Το σύστημα είχε ιξώδες που μοιάζει με νερό και μπορεί να σχηματιστούν μικτά μικκύλια. Με ένα αυξανόμενο κλάσμα μάζας του Span60, η υδροφοβικότητα του συστήματος αυξήθηκε και το ιξώδες και το μέγεθος των αδρανών αυξήθηκαν. Το αυξανόμενο Span60 μπορεί να προκαλέσει το σχηματισμό νιοσωμάτων. Ωστόσο, με μια περαιτέρω αύξηση στο Span60, το ιξώδες και το μέγεθος αυξήθηκαν επίσης απότομα λόγω της ύπαρξης άφθονων μεγαλύτερων πολυστρωματικών νιοσωμάτων, τα οποία προκάλεσαν σχηματισμό ιζήματος. Ο σχηματισμός νιοσωμάτων επαληθεύτηκε επίσης από το TEM (Εικόνα 3).

Όταν η συγκέντρωση του Span60 ήταν χαμηλή, το σύστημα Span60-RH40 είχε ιξώδες σαν το νερό και το μέγεθος του συσσωματώματος ήταν σχετικά μικρό, ενδεικτικό του σχηματισμού μικτών μικκυλίων. Από την αναλογία μάζας 9:11 έως 13:7, το ιξώδες και η θολότητα του συστήματος αυξήθηκαν ταυτόχρονα. Η προφανής αλλαγή στο ιξώδες μπορεί να σχετίζεται με τη μετάβαση του μικκυλίου σε ένα άκαμπτο και παχύρρευστο θόρυβο, καθώς τα επιφανειοδραστικά συσκευάζονται σφιχτά και σχηματίζονται διπλές στοιβάδες. αυτή η παρατήρηση ήταν συνεπής με τη βιβλιογραφία [57,58]. Μεταξύ των αναλογιών μάζας 13:7 και 16:4, το ιξώδες αυξήθηκε σημαντικά, πιθανώς λόγω της ύπαρξης άφθονων μεγαλύτερων πολυστρωματικών νιοσωμάτων που προκαλούν σχηματισμό ιζήματος.

Είναι ενδιαφέρον ότι τα κερκετίνη-νιοσώματα είχαν μικρότερα μεγέθη από τα τυφλά νιοσώματα, όπως ήταν από προηγούμενες δημοσιευμένες μελέτες [43]. Έχει διευκρινιστεί ότι εάν μόρια που δείχνουν καλή συγγένεια με τα συστατικά τασιενεργά των νιοσωμάτων ενσωματώνονταν μέσα στις διπλές στοιβάδες, θα προκαλούσε μείωση του μεγέθους των κυστιδίων. Αυτή η παρατήρηση μπορεί να οφείλεται στην επίδραση μιας ισχυρής συγγένειας για φάρμακα και νιοσώματα στη συγκράτηση των διαφορετικών ελασμάτων, καθιστώντας τη μεμβράνη πιο άκαμπτη [14]. Η απόλυτη τιμή του δυναμικού ζήτα για τα λιποσώματα κερκετίνης ήταν χαμηλότερη από αυτή των κενών λιποσωμάτων (Πίνακας 3). Αυτό μπορεί να οφείλεται στην αλληλεπίδραση της κερσετίνης με την ομάδα επιφανειοδραστικών ουσιών που εξουδετερώνουν τα αρνητικά φορτία στην επιφάνεια των νιοσωμάτων. Αυτή η παρατήρηση αναφέρθηκε επίσης στο παρελθόν. ότι τα φάρμακα θα μπορούσαν να μειώσουν τα αρνητικά επιφανειακά φορτία [59].

Προσδιορίσαμε ότι η κερσετίνη ήταν αδιάλυτη στο νερό και στο ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών. Σε προηγούμενες μελέτες, για να διατηρηθεί μια κατάσταση βύθισης κακώς διαλυτών φαρμάκων σε ένα μέσο απελευθέρωσης διείσδυσης, χρησιμοποιούνται συχνά συνδιαλύτες, συμπεριλαμβανομένων των αλκοολών και των επιφανειοδραστικών ουσιών [14], επομένως, ένα 0.6 τοις εκατό διάλυμα Tween80 χρησιμοποιήθηκε ως μέσο απελευθέρωσης διείσδυσης για να διατηρείται η κατάσταση του νεροχύτη.

Ωστόσο, λαμβάνοντας υπόψη την αποτελεσματικότητα, για τη φροντίδα του δέρματος και τη θεραπεία δερματικών παθήσεων, είναι πιο αποτελεσματικό και ασφαλέστερο να συγκρατούνται συστατικά ή φάρμακα βαθιά στο δέρμα παρά να εισέρχονται στην κυκλοφορία του αίματος. Στη μελέτη μας, αν και η κερκετίνη δεν διείσδυσε μέσω του χόριου στο μέσο, ​​τα πειράματα συγκράτησης του δέρματος έδειξαν ότι σε σύγκριση με την ελεύθερη κερκετίνη, τα νιοσώματα βελτίωσαν τη διείσδυση της κερκετίνης στην επιδερμίδα.

Ως εκ τούτου, τα νιοσώματα μπορεί να είναι ένα πολλά υποσχόμενο σύστημα διανομής για κοσμητικούς σκοπούς και τη θεραπεία δερματικών παθήσεων. Η κερκετίνη είναι εξαιρετικά λιποδιαλυτή και η χαμηλή υδατοδιαλυτότητά της έχει περιορίσει την ανάπτυξη και την εφαρμογή της. Τα νιοσώματα με κερκετίνη δεν έχουν βελτιώσει μόνο τη υδατοδιαλυτότητα αλλά και τη διαδερμική απορρόφηση της κερκετίνης. Τα κερκετίνη-νιοσώματα είχαν 3-πλάσια αύξηση στην κατακράτηση του δέρματος σε σχέση με το διάλυμα κερκετίνης-προπανοδιόλης. Μετά την προσθήκη 1 τοις εκατό προπανοδιόλης, ενός ενισχυτή διείσδυσης, στην αρχική σύνθεση των νιοσωμάτων Span60-RH40, η διαδερμική απορρόφησή της βελτιώθηκε, συγκρίσιμη με αυτή των τρανσφερσωμάτων κερκετίνης.

4. Υλικά και Μέθοδοι

4.1. Υλικά

Κερσετίνη, morin, festin, myricetin, rutin και breviscapine αγοράστηκαν από την DATIAN Biology Co (Shanxi, Κίνα), -arbutin από Beijing Brilliance Biochemical Co, Ltd (Πεκίνο, Κίνα) και 1,1-diphenyl{{ 3}}πικρυυλυδραζύλιο (DPPH) από την Guangzhou Qiyun Bio-technology Co (Guangzhou, Κίνα). Το δισόξινο φωσφορικό νάτριο, το όξινο φωσφορικό δινάτριο, το διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) και η απόλυτη αιθυλική αλκοόλη αγοράστηκαν από την DAMAO CHEMICAL REAGENT FACTORY (Tianjin, Κίνα). Το Span60 αγοράστηκε από την Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co, Ltd (Tianjin, Κίνα) και το Cremophor RH40 από την Guangzhou Jiefu Trading Co, Ltd (Guangzhou, Κίνα). Αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (200 ± 20 g) χρησιμοποιήθηκαν και παρασχέθηκαν από το Κέντρο Πειραμάτων Ζώων Guangdong (Guangzhou, Κίνα). Οι αρουραίοι διατηρήθηκαν υπό κανονικές συνθήκες θερμοκρασίας, υγρασίας και φωτός, με τυπική δίαιτα τρωκτικών και νερό. Η έρευνα εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Πειραματικών Ζώων του Φαρμακευτικού Πανεπιστημίου Guangdong (NO. SPF2017120, Guangzhou, Κίνα).

4.2. In vitro Δραστηριότητα Αναστολής Τυροσινάσης Φλαβονοειδών

Ο προσδιορισμός αναστολής τυροσινάσης πραγματοποιήθηκε με βάση μια προηγούμενη μελέτη με ελαφρές τροποποιήσεις [2]. Η δραστικότητα της αναστολής της τυροσινάσης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο παρακολουθώντας το σχηματισμό ντοπαχρώματος στα 493 nm. Το σύστημα αντίδρασης, όπως φαίνεται στον Πίνακα 7, περιείχε 0.5 mL διαφορετικών συγκεντρώσεων φλαβονοειδών, συμπεριλαμβανομένης της αρμπουτίνης, της κερκετίνης, του morin, της φεστίνης, της ρουτίνης και της μπρεβισκαπίνης, και 0.5 mL τυροσινάσης (120 μονάδες/mL σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών, pH 6,8), τα οποία συνδυάστηκαν με 1,5 mL ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών (pH 6,8). Μετά από επώαση στους 30 ◦C για 10 λεπτά, προστέθηκαν 0,5 mL 1-τυροσίνης στα συστήματα. Τα συστήματα αντίδρασης επωάστηκαν στους 30◦C για 20 λεπτά και η απορρόφηση προσδιορίστηκε στα 493 nm. Η αρμπουτίνη χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας. Ο βαθμός αναστολής του δείγματος εκφράστηκε ως συγκέντρωση αναστολής 50 τοις εκατό (IC50).

4.3. In Vitro Αντιοξειδωτική Δραστηριότητα Φλαβονοειδών

Η αντιοξειδωτική δράση των φλαβονοειδών μετρήθηκε με τον ρυθμό λεύκανσης της DPPH, που αναφέρθηκε από τον Blois [60]. Στη ριζική του μορφή, το DPPH απορροφά στο μήκος κύματος των 515 nm, αλλά η απορρόφησή του μειώνεται κατά την αναγωγή από ένα αντιοξειδωτικό ή μια ριζική ένωση. Η δραστηριότητα δέσμευσης ριζών DPPH των φλαβονοειδών αξιολογήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον Rui Yang, με ορισμένες τροποποιήσεις [61]. Εν συντομία, 5 mL DPPH (30 μg/mL) αναμίχθηκαν με 0,1 mL απόλυτης αιθυλικής αλκοόλης και 0,1 mL δειγμάτων με διαφορετικές συγκεντρώσεις. Στη συνέχεια, η απορρόφηση των μιγμάτων προσδιορίστηκε στα 515 nm. Η δραστηριότητα καθαρισμού ριζών DPPH υπολογίστηκε ως εξής:

4.4. Σκεύασμα Νιοσωμάτων

Με βάση προηγούμενες έρευνες και δημοσιευμένες εργασίες που έδειξαν ότι το Span60 είναι ένα κοινό τασιενεργό που χρησιμοποιείται για το σχηματισμό νιοσωμάτων [15,27,31], σχεδιάσαμε ένα σύστημα σύνθεσης μη ιοντικών τασιενεργών χρησιμοποιώντας Span60 και RH40 σε διαφορετικές αναλογίες μάζας. Η αγωγιμότητα, το ιξώδες και το μέγεθος ως δείκτες διερευνήθηκαν για να προσδιοριστεί η σωστή αναλογία μη ιοντικών τασιενεργών που σχηματίζουν λιποσώματα.

Οι λόγοι μάζας του Span60 και του RH40 που ερευνήθηκαν ήταν 4:16, 6:14, 8:12, 9:11, 10:10, 12:8, 13:7, 14:6 , 15:5 και 16:4 (συνολικό βάρος: 2 g). Το Span60 τήχθηκε στους 80 ◦C και στη συνέχεια αναμίχθηκε με RH40 με αναδευτήρα για 2 λεπτά. Στη συνέχεια, τα μίγματα ενυδατώθηκαν με 100 mL νερού στους 80 ◦C για 10 λεπτά, αντίστοιχα. Η αγωγιμότητα (DDS-11A αγωγόμετρο, Shanghai Ridao Scientific Instruments Co., Ltd., Shanghai, Κίνα), το ιξώδες (ιξωδόμετρο Ubbelode, 0,4–0,5 mm, Shanghai Liangjing Glass Instrument Factory, Shanghai, Κίνα) και το μέγεθος (Nano-ZS90, Malvern, Malvern, UK) των συστημάτων μη ιοντικών τασιενεργών μετρήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου.

4.5. Παρασκευή και αξιολόγηση νιοσωμάτων με κερκετίνη

4.5.1. Παρασκευή νιοσωμάτων με κερκετίνη

Με βάση την εικόνα TEM του συστήματος Span{{0}}RH40 (Εικόνα 3), Span60 και RH40 σε αναλογία μάζας 9:11, φαίνεται να σχηματίζονται σφαιρικά ή οβάλ νιοσώματα. Επομένως, νιοσώματα φορτωμένα με κερκετίνη παρασκευάστηκαν με αναλογία μάζας Span60/RH40 9:11 χρησιμοποιώντας μια συσκευή μαγνητικής ανάδευσης. Το Span60 (0,9 g), το RH40 (1,1 g) και η κερκετίνη (30 mg) τήκονται μαζί. Στη συνέχεια, 100 mL καθαρισμένου νερού στους 80°C προστέθηκαν στο μίγμα και ενυδατώθηκαν για 10 λεπτά. Τα φορτωμένα με κερκετίνη νιοσώματα σχηματίστηκαν και στη συνέχεια ψύχθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου. Διαυγή νιοσώματα αποκτήθηκαν με επεξεργασία με ομογενοποίηση υψηλής πίεσης στα 1500 bar.

4.5.2. Μέγεθος, Ζήτα Δυναμικό και Μορφολογία Νιοσωμάτων Φορτισμένων με Κερσετίνη

Το μέγεθος και το δυναμικό ζήτα των κενών νιοσωμάτων και των νιοσωμάτων με κερκετίνη μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας Malvern Zetasizer (ZS90 συν MPT-2, Malvern, Malvern, UK). Η μορφολογία των νιοσωμάτων με κερκετίνη χαρακτηρίστηκε με ηλεκτρονική μικροσκοπία μετάδοσης. Τα δείγματα κερκετίνης-νιοσωμάτων εναποτέθηκαν σε ένα χάλκινο πλέγμα και μετά από 1 λεπτό, η περίσσεια του δείγματος αφαιρέθηκε με διηθητικό χαρτί. Χρησιμοποιήθηκε TEM για την παρατήρηση των δειγμάτων μετά από αρνητική χρώση με φωσφοβολφραμικό οξύ.

4.5.3. Αποτελεσματικότητα παγίδευσης φαρμάκων

Η αποτελεσματικότητα παγίδευσης φαρμάκου των φορτωμένων με κερσετίνη νιοσωμάτων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την τεχνική φυγοκέντρησης mini στήλης. Η Minicolumn παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας ενυδατωμένη διασπορά Sephadex G50 σε σύριγγα 5 mL, η οποία φυγοκεντρήθηκε για 30 δευτερόλεπτα στις 900 rpm. Ένα κλάσμα νιοσωμάτων φορτωμένων με κερκετίνη (400 μL) ελήφθη στη μινιστήλη και τα εκλούσματα συλλέχθηκαν με χρήση φυγοκέντρησης στις 1500 rpm για 3 λεπτά. Τα εκλούσματα αραιώθηκαν στα 10 mL με μεθανόλη και στροβιλίστηκαν, και 10 μL των φιλτραρισμένων δειγμάτων εγχύθηκαν σε υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC). Στη συνέχεια, η ελεύθερη κερκετίνη εκλούστηκε με φυγοκέντρηση με 25 mL μεθανόλης 80 τοις εκατό και η περιεκτικότητα σε κερκετίνη προσδιορίστηκε με HPLC.

4.6. Υδατοδιαλυτότητα και Διαλυτότητα Ισορροπίας Κερσετίνης

Η υδατοδιαλυτότητα της κερσετίνης μετρήθηκε με 15 mL καθαρού νερού, ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών με διαφορετικές τιμές pH (pH 5.0, 6.0, 6.8, 7.4, 8.{10}}) , και περίσσεια κερσετίνης, και τοποθετούνται σε φιαλίδια. Τα φιαλίδια ανακινήθηκαν για 24 ώρες σε λουτρό νερού 37 ◦C και το υπερκείμενο προσδιορίστηκε με HPLC μετά από φυγοκέντρηση.

Η διαλυτότητα ισορροπίας της κερκετίνης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα n-οκτανόλης-νερού με αναλογίες n-οκτανόλης/νερού 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1: 7 και 1:8. Στη συνέχεια, παρασκευάστηκαν 70 μg/mL διαλύματος κερσετίνης με κορεσμένο σε νερό διάλυμα n-οκτανόλης και ελήφθη 1 mL διαλύματος κερκετίνης 70 μg/mL σε οκτώ φιαλίδια και στη συνέχεια 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL. 6 mL, 7 mL και 8 mL καθαρού νερού προστέθηκαν σε αντίστοιχα φιαλίδια.

Μελετήθηκε επίσης η διαλυτότητα ισορροπίας της κερκετίνης σε συστήματα n-οκτανόλης-ρυθμιστικού διαλύματος σε διαφορετικές τιμές pH. Η αναλογία ρυθμιστικού διαλύματος η-οκτανόλης επιλέχθηκε σε 1:2 με βάση το αποτέλεσμα της διαλυτότητας ισορροπίας της κερκετίνης στο σύστημα n-οκτανόλης-νερού. Ένας όγκος 2 mL 70 μg/mL διαλύματος κερσετίνης και 4 mL κορεσμένων ρυθμιστικών διαλυμάτων φωσφορικών με n-οκτανόλη σε διαφορετικές τιμές pH προστέθηκαν στα φιαλίδια και τα φιαλίδια ανακινήθηκαν για 24 ώρες σε θερμοκρασία 37 ◦C. μπάνιο. Στη συνέχεια, λήφθηκαν 0,2 mL διαλύματος κερσετίνης στη στιβάδα η-οκτανόλης και αραιώθηκαν στα 5 mL (περίπου 2,8 μg/mL) χρησιμοποιώντας κινητή φάση (μεθανόλη-1 τοις εκατό φωσφορικό οξύ=60:40). Τα δείγματα προσδιορίστηκαν με HPLC. Πρότυπο διάλυμα κερκετίνης η-οκτανόλης (70 μg/mL) αραιώθηκε και προσδιορίστηκε όπως περιγράφεται παραπάνω.

4.7. Φωτοσταθερότητα Κερσετίνης-Νιοσωμάτων

Διάλυμα μεθανόλης κερκετίνης (300 μg/mL) προστέθηκε σε διαφανή φιαλίδια και τοποθετήθηκε κάτω από το φως του ήλιου. Στη συνέχεια, η περιεκτικότητα σε κερκετίνη προσδιορίστηκε με HPLC στις 0, 12, 24, 36, 48, 60 και 72 ώρες. Τα κερκετίνη-νιοσώματα κατανεμήθηκαν σε διαφανή φιαλίδια και τοποθετήθηκαν μέσα στο θάλαμο δοκιμής σταθερότητας φωτός (PTOP-500B, Zhejiang TOP Instrument Co., Ltd., Zhejiang, Κίνα) με φωτεινότητα 4500 ± 500 LX για 10 ημέρες. Ένα δείγμα 0,2 g λιποσωμάτων κερκετίνης αφαιρέθηκε τις ημέρες 0, 5 και 10 και διαλύθηκε σε 10 mL αιθανόλης. Τα δείγματα προσδιορίστηκαν με HPLC μετά από φυγοκέντρηση και διήθηση με μεμβράνη φίλτρου Millipore 0,22 μm. Η φωτοσταθερότητα αξιολογήθηκε με το ποσοστό της εναπομείνασας κερσετίνης σε διαφορετικούς χρόνους ακτινοβόλησης, σε σύγκριση με μη εκτεθειμένα δείγματα.

4.8. Μελέτη Έκδοσης In Vitro

4.8.1. Η διαλυτότητα της κερκετίνης σε διαφορετικό μέσο αποδέσμευσης

Η διαλυτότητα της κερκετίνης διερευνήθηκε σε διαφορετικά μέσα απελευθέρωσης, συμπεριλαμβανομένων των {{0}}.1 τοις εκατό, 0.2 τοις εκατό, 0.3 τοις εκατό, 0.4 % 0,6 τοις εκατό SDS υδατικό διάλυμα. Ένα υδατικό διάλυμα 15 mL Tween80 και SDS σε διαφορετικές συγκεντρώσεις και περίσσεια κερσετίνης τοποθετήθηκαν σε καθένα από τα φιαλίδια. Τα φιαλίδια ανακινήθηκαν σε υδατόλουτρο 32 ◦C για 24 ώρες. Μετά από 24 ώρες, 5 mL εναιωρήματος φυγοκεντρήθηκαν σε 3000 RMP για 15 λεπτά και 0,2 mL του υπερκειμένου αραιώθηκαν σε 2 mL και προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας HPLC.

4.8.2. Απελευθέρωση φαρμάκου με αιμοκάθαρση

Η μελέτη διαλυτότητας της κερκετίνης που παρουσιάζεται στον Πίνακα 5 απέδειξε ότι το υδατικό διάλυμα 0,8 τοις εκατό Tween80 (ρΗ 5.0) πληρούσε τις συνθήκες βύθισης και αντιστοιχούσε στην τιμή του pH του ανθρώπινου δέρματος. Επομένως, οι συμπεριφορές απελευθέρωσης της ελεύθερης κερκετίνης και των λιποσωμάτων κερκετίνης διερευνήθηκαν στο υδατικό διάλυμα 0,8 τοις εκατό Tween80 (pH 5,0).

Ο σάκος διαπίδυσης (8000-14,000 μοριακό βάρος αποκοπής) υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 2 τοις εκατό NaHC03 και 1 mmol/mL διαλύματα EDTA. Προστέθηκαν 10 mL (300 μg/mL) κερκετίνης-νιοσωμάτων και διαλύματος κερκετίνης-προπανοδιόλης σε σάκους διαλύματος διάλυσης και τοποθετήθηκαν σε δοχεία διάλυσης που περιείχαν 1000 mL υδατικού διαλύματος Tween80 0,8 τοις εκατό (ρΗ 5,0) στους 32°C. Τα δοχεία διάλυσης τοποθετήθηκαν σε μαγνητικό αναδευτήρα με ταχύτητα 100 rpm. Το μέσο απελευθέρωσης (2 mL) αποσύρθηκε στις 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 και 24 ώρες και αντικαταστάθηκε με ένα τυφλό μέσο απελευθέρωσης (2 mL). Τα 2 mL του μέσου απελευθέρωσης που αφαιρέθηκαν φυγοκεντρήθηκαν σε 3000 r/min για 15 λεπτά και διηθήθηκαν. Η απελευθερωμένη κερσετίνη ποσοτικοποιήθηκε με HPLC.

4.9. Ex Vivo Μελέτες Διαπέρασης Φαρμάκων και Κατακράτησης Δέρματος

Οι αρουραίοι θυσιάστηκαν με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας, ξυρίστηκαν τρίχες στην κοιλιά και στη συνέχεια το κοιλιακό δέρμα διαχωρίστηκε και τοποθετήθηκε σε φυσιολογικό ορό. Στη συνέχεια, ο υποδόριος ιστός (μύες, λίπος και αγγείο) αφαιρέθηκε χρησιμοποιώντας χειρουργικό ψαλίδι και αιμοστατική λαβίδα και στη συνέχεια αποθηκεύτηκε στους 4 ◦C με φυσιολογικό ορό για περαιτέρω διερεύνηση.

Οι μελέτες διείσδυσης και διατήρησης φαρμάκων στο δέρμα κερκετίνης-νιοσωμάτων, κερσετιννιοσωμάτων-1 τοις εκατό προπανοδιόλης, κερκετίνης-τρανσφερσωμάτων (που αποτελούνται από φωσφολιπίδιο και Tween80 σε αναλογία μάζας 9:11) και ελεύθερη κερκετίνη -Διάλυμα προπανοδιόλης διεξήχθησαν για τη διερεύνηση της διαδερμικής απελευθέρωσής τους χρησιμοποιώντας συσκευή διαδερμικής διάχυσης TK-20Β με αποτελεσματική περιοχή διάχυσης 2,99 cm2. Στη συνέχεια, επιλέχθηκε διάλυμα 0,6 τοις εκατό Tween80 ως μέσο απελευθέρωσης διείσδυσης. Οι ιστοί του δέρματος τοποθετήθηκαν μεταξύ του κυττάρου διάχυσης και του κυττάρου υποδοχέα, και 0.4 mL παρασκευασμάτων κερκετίνης (ισοδύναμα με 120 μg κερκετίνης) εφαρμόστηκαν στο δέρμα. Το μέσο διείσδυσης (0,5 mL) αποσύρθηκε από το κύτταρο υποδοχέα στις 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 και 24 ώρες με την αντικατάσταση του φρέσκου μέσου διείσδυσης (0,5 mL). Τα μέσα διείσδυσης που αφαιρέθηκαν σε διαφορετικά χρονικά σημεία αραιώθηκαν σε 7 mL με μεθανόλη και προσδιορίστηκαν με HPLC μετά από φυγοκέντρηση και διήθηση.

Μετά το πείραμα διείσδυσης, διεξήχθη πειραματισμός κατακράτησης δέρματος φαρμάκου. Μετά από 24 ώρες, οι ιστοί του δέρματος απομονώθηκαν, στη συνέχεια κόπηκαν πλήρως σε 7 mL μεθανόλης μετά από έκπλυση της κερσετίνης στην επιφάνεια χρησιμοποιώντας απεσταγμένο νερό και εκχυλίστηκαν για 4 0 λεπτά με υπερήχους. Στη συνέχεια, τα δείγματα στροβιλίστηκαν και φυγοκεντρήθηκαν και το υπερκείμενο αναλύθηκε χρησιμοποιώντας HPLC μετά από διήθηση μέσω μεμβράνης φίλτρου Millipore 0,22 μm.

4.10. Μέθοδος HPLC

Η αναλυτική στήλη ήταν Dimark C18 (150 mm χ 4,6, 5 μm). Η κινητή φάση αποτελούνταν από μεθανόλη και 1 τοις εκατό Η3ΡΟ4 (60:40, ο/ο). Ο ρυθμός ροής ρυθμίστηκε σε 1 mL/min στους 30 ◦C και όγκος έγχυσης 10 μL. Η κορυφή της κερσετίνης ανιχνεύθηκε στα 363 nm.

4.11. Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράζονται ως ο μέσος όρος των πειραμάτων ± η τυπική απόκλιση (SD) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA), ακολουθούμενη από τη μετα-δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης του Tukey. Οι στατιστικές διαφορές που αποδίδουν P < 0.05 θεωρούνται στατιστικά σημαντικές.

5. Συμπεράσματα

Εξετάσαμε την κερκετίνη, ένα φυσικό φλαβονοειδές που διαθέτει ισχυρές λευκαντικές και αντιοξειδωτικές ικανότητες, και διαμορφώσαμε λιποσώματα χρησιμοποιώντας ένα μη ιονικό επιφανειοδραστικό σύστημα για να βελτιώσουμε τη διαλυτότητα, τη φωτοσταθερότητα και την ικανότητα διείσδυσης στο δέρμα της κερσετίνης.

Συνεισφορές συγγραφέα:

Conceptualization, WC και XL; μεθοδολογία, WC; λογισμικό, YH; επικύρωση, BL, YH και ZC. επίσημη ανάλυση, BL; έρευνα, JY; πόροι, HX; επιμέλεια δεδομένων, BL; γραφή — προετοιμασία πρωτότυπου σχεδίου, BL; συγγραφή — κριτική και επεξεργασία, XL; οπτικοποίηση, WC; εποπτεία, XL; εξαγορά χρηματοδότησης, XL

Χρηματοδότηση:

Αυτή η έρευνα δεν έλαβε εξωτερική χρηματοδότηση.

Σύγκρουση συμφερόντων:

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Chhikara, Ν.; Kaur, R.; Jaglan, S.; Sharma, R.; Gat, Υ.; Panghal, Α. Βιοδραστικές ενώσεις και φαρμακολογικές και διατροφικές εφαρμογές του Syzygium cumini—Μια ανασκόπηση. Λειτουργία Τροφίμων. 2018, 9, 6096. [CrossRef] [PubMed]

2. Carol López de Dicastillo Carol López Bustos, F.; Valenzuela, Χ.; López-Carballo, G.; Vilariño, JM; Galotto,MJ Chilean berry, Ugni molinae, Turcz. Εκχύλισμα φρούτων και φύλλων με ενδιαφέρουσες αντιοξειδωτικές, αντιμικροβιακές και ανασταλτικές ιδιότητες της τυροσινάσης. Food Res. Int. 2017, 102, 119–128.

3. Chiari, ME; Vera, DM; Palacios, SM; Carpinella, MC Tyrosinase ανασταλτική δραστηριότητα μιας 6-ισοπρενοειδούς υποκατεστημένης φλαβανόνης που απομονώθηκε από Dalea elegans. Bioorg. Med. Chem. 2011, 19, 3474–3482. [CrossRef] [PubMed]

4. Sirat, HM; Ρεζάλι, MF; Ujang, Z. Isolation and Identification of Radical Scavenging and Tyrosinase Inhibition of Polyphenols from Tibouchina semidecandra. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 10404–10409. [CrossRef] [PubMed]

5. Xiong, Ζ.; Liu, W.; Zhou, L.; Chen, J. Mushroom (Agaricus bisporus) οξειδάση πολυφαινόλης που αναστέλλεται από απιγενίνη: Πολυφασματοσκοπικές αναλύσεις και υπολογιστική προσομοίωση σύνδεσης. Food Chem. 2016, 203, 430–439. [CrossRef] [PubMed]

6. Yan-Zhen, Ζ.; Da-Fu, C.; Geng, D.; Guo, R. The Substituent Effect on the Radical Scavenging Activity of Apigenin. Molecules 2018, 23, 1989.

7. Handjani-Vila, RM; Ribier, Α.; Rondot, Β.; Vanlerberghie, B. Διασπορές ελασματοειδών φάσεων μη ιοντικών λιπιδίων σε καλλυντικά προϊόντα. Int. J. Cosmet. Sci. 1979, 1, 303-314. [CrossRef] [PubMed]

8. Yoshida, Η.; Lehr, CM; Kok, W.; Junginger, HM; Verhoef, JC; Bouwstra, JA Niosomes για από του στόματος χορήγηση πεπτιδικών φαρμάκων. J. Control. Release 1992, 21, 145–153. [CrossRef]

9. Uchegbu, IF; Διπλό, JA; Kelland, LR; Turton, JA; Florence, AT The Activity of Doxorubicin Niosomes ενάντια σε μια κυτταρική γραμμή καρκίνου των ωοθηκών και τρία in Vivo μοντέλα όγκου ποντικιού. J. Drug Target. 1996, 3, 399-409. [CrossRef]

10. Alsarra, IA; Bosela, AA; Ahmed, SM; Mahrous, GM Proniosomes ως φορέας φαρμάκου για διαδερμική χορήγηση κετορολάκης. Ευρώ. J. Pharm. Biopharm. 2005, 59, 485–490. [CrossRef]

11. Hong, Μ.; Zhu, S.; Jiang, Υ.; Tang, G.; Pei, Υ. Αποτελεσματική στόχευση όγκου φορτωμένων με υδροξυ καμπτοθεκίνη PEGυλιωμένων λιποσωμάτων τροποποιημένων με τρανσφερίνη. J. Control. Έκδοση 2009, 133, 96–102. [CrossRef] [PubMed]

12. Tavano, L.; Muzzalupo, R.; Picci, Ν.; de Cindio, Β. Συνενθυλάκωση αντιοξειδωτικών σε λιποσωμικούς φορείς: Μελέτες γαστρεντερικής απελευθέρωσης για διατροφικές εφαρμογές. Colloid Surf. B Biointerface 2014, 114, 82–88. [CrossRef] [PubMed]

13. Sohrabi, S.; Haeri, Α.; Mahboubi, Α.; Mortazavi, Α.; Dadashzadeh, S. Chitosan ενσωματωμένα σε γέλη νιοσώματα μοξιφλοξασίνης: Ένα αποτελεσματικό αντιμικροβιακό υβριδικό σύστημα για μόλυνση από εγκαύματα. Int. J. Biol. Macromol. 2016, 85, 625–633. [CrossRef] [PubMed]

14. Kumar, Ν.; Goindi, S. Στατιστικά σχεδιασμένα μη ιονικά επιφανειοδραστικά κυστίδια για δερματική χορήγηση ιτρακοναζόλης: Χαρακτηρισμός και in vivo αξιολόγηση χρησιμοποιώντας ένα τυποποιημένο μοντέλο μόλυνσης από Tinea pedis. Int. J. Pharm. 2014, 472, 224–240. [CrossRef] [PubMed]

15. Cerqueira-Coutinho, C.; Dos Santos, EP; Mansur, CR Niosomes as Nano-Delivery Systems in the Pharmaceutical Field. Κριτ. Σεβ.Θερ. Drug Carr. Συστ. 2016, 33, 195. [CrossRef]

16. Yeh, MI; Huang, HC; Liaw, JH; Huang, MC; Huang, KF; Hsu, FL Δερματική χορήγηση από νιοσώματα εκχυλίσματος μαύρου τσαγιού ως αντηλιακό. Int. J. Dermatol. 2013, 52, 239–245. [CrossRef] [PubMed]

17. Manconi, Μ.; Sinico, C.; Valenti, D.; Loy, G.; Fadda, AM Niosomes ως φορείς για την τρετινοΐνη. I. Παρασκευή και ιδιότητες. Int. J. Pharm. 2002, 234, 237–248. [CrossRef] 18. Manconi, M.; Valenti, D.; Sinico, C.; Lai, F.; Loy, G.; Fadda, AM Niosomes ως φορείς για τρετινοΐνη: II. Επίδραση της ενσωμάτωσης φυσαλίδων στη φωτοσταθερότητα της τρετινοΐνης. Int. J. Pharm. 2003, 260, 261–272. [CrossRef]

19. Kunitake, Τ.; Takahata, Υ. Μια συνθετική διπλοστοιβάδα μεμβράνη. Μαρμελάδα. Chem. Soc. 1977, 99, 3860–3861. [CrossRef]

20. Brady, JE; Evans, DF; Kachar, Β.; Ninham, ΒΜ Αυθόρμητα κυστίδια. Μαρμελάδα. Chem. Soc. 1984, 106, 4279–4280. [CrossRef]

21. Kaler, Ε.; Murthy, Α.; Rodriguez, Β.; Zasadzinski, J. Αυθόρμητος σχηματισμός κυστιδίων σε υδατικά μίγματα επιφανειοδραστικών ουσιών με μονή ουρά. Science 1989, 245, 1371–1374. [CrossRef] [PubMed]

22. Kaler, EW; Herrington, KL; Murthy, AK; Zasadzinski, JAN Συμπεριφορά φάσης και δομές μειγμάτων ανιονικών και κατιονικών τασιενεργών. J. Phys. Chem. 1992, 96, 6698–6707. [CrossRef]

23. Uchegbu, IF; Vyas, SP Κυστίδια με βάση μη ιοντικά επιφανειοδραστικά (νιοσώματα) στην παροχή φαρμάκου. Int. J. Pharm. 1998, 172, 33–70. [CrossRef]

24. Mahale, NB; Thakkar, PD; Μάλι, RG; Walunj, DR; Chaudhari, SR Niosomes: Νέα μη ιονικά σταθερά φυσαλιδώδη συστήματα παρατεταμένης απελευθέρωσης-Μια επισκόπηση. Adv. Colloid Interface Sci. 2012, 183–184, 46–54. [CrossRef] [PubMed]

25. Udupa, Ν.; Chandraprakash, KS; Umadevi, Ρ.; Pillai, GK Formulation and Evaluation of Methotrexate Niosomes. Drug Dev. Commun. 1993, 19, 12. [CrossRef]

26. Uchegbu, IF; Florence, AT Μη ιοντικά επιφανειοδραστικά κυστίδια (νιοσώματα): Φυσική και φαρμακευτική χημεία. Adv. Colloid Interface Sci. 1995, 58, 1–55. [CrossRef]

27. Yoshioka, Τ.; Sternberg, Β.; Florence, AT Παρασκευή και ιδιότητες κυστιδίων (νιοσωμάτων) μονοεστέρων σορβιτάνης (Span 20, 40, 60 και 80) και τριεστέρα σορβιτάνης (Span 85). Int. J. Pharm. 1994, 105, 1–6. [CrossRef]

28. Μανοσρόη, Α.; Wongtrakul, Ρ.; Manosroi, J.; Sakai, Η.; Sugawara, F.; Yuasa, Μ.; Abe, M. Χαρακτηρισμός κυστιδίων που παρασκευάζονται με διάφορα μη ιονικά επιφανειοδραστικά αναμεμειγμένα με χοληστερόλη. Colloid Surf. B Biointerface 2003, 30, 129–138. [CrossRef]

29. Alsarra, IA Αξιολόγηση πρωτεασωμάτων ως εναλλακτική στρατηγική για τη βελτιστοποίηση της διαδερμικής χορήγησης πιροξικάμης. J. Microencapsul. 2009, 26, 272-278. [CrossRef]

30. Sharma, S.; Das, Α.; Dasgupta, Α.; Lee, WM; Kim, JO; Ω, DH; Kim, DD; Kim, JS; Yoo, BY; Choi, HG; et al. Σκεύασμα και in vitro αξιολόγηση νιοσωμάτων μινοξιδίλης για ενισχυμένη χορήγηση στο δέρμα. Int. J. Pharm. 2009, 377, 1–8.

31. Junyaprasert, VB; Singh, Ρ.; Suksiriworapong, J.; Chantasart, D. Φυσικοχημικές ιδιότητες και διαπερατότητα δέρματος Span 60/Tween 60 νιοσώματα ελλαγικού οξέος. Int. J. Pharm. 2012, 423, 303. [CrossRef] [PubMed]

32. Μανοσρόη, Α.; Khanrin, Ρ.; Lohcharoenkal, W.; Götz, F.; Manosroi, W.; Manosroi, J. Αύξηση διαδερμικής απορρόφησης μέσω δέρματος αρουραίου γαλλιδερμίνης φορτωμένης σε λιποσώματα. Int. J. Pharm. 2010, 392, 304–310. [CrossRef] [PubMed]

33. Auda, SH; Fathalla, D.; Fetih, G.; El-Badry, Μ.; Shakeel, F. Niosomes ως σύστημα διαδερμικής χορήγησης φαρμάκων για celecoxib: In vitro και in vivo μελέτες. Πολυμ. Ταύρος. 2016, 73, 1229–1245. [CrossRef]

34. Μανοσρόη, Α.; Jantrawut, Ρ.; Manosroi, J. Αντιφλεγμονώδης δράση γέλης που περιέχει νέα ελαστικά νιοσώματα παγιδευμένα με δικλοφενάκη διαιθυλαμμώνιο. Int. J. Pharm. 2008, 360, 156–163. [CrossRef] [PubMed]

35. Shahiwala, Α.; Misra, A. Μελέτες στην τοπική εφαρμογή της φυσιολογικά παγιδευμένης νιμεσουλίδης. J. Pharm. Pharm. Sci. 2002, 5, 220–225. [PubMed]

36. Pardakhty, Α.; Varshosaz, J.; Rouholamini, Α. In vitro μελέτη νιοσωμάτων πολυοξυαιθυλενίου αλκυλαιθέρα για παροχή ινσουλίνης. Int. J. Pharm. 2007, 328, 130–141. [CrossRef] 37. Abdelbary, G.; El-Gendy, Ν. Ενθυλακωμένη με Niosome Gentamicin for Ophthalmic Controlled Delivery. Aaps Pharmscitech 2008, 9, 740–747. [CrossRef] [PubMed]

38. Wadda Abbad, S.; Yu, F.; Munyendo, WLL; Wang, J.; Lv, Η.; Zhou, J. Σκεύασμα, χαρακτηρισμός και φαρμακοκινητική των νιοσωμάτων ένυδρου Morin που παρασκευάζονται από διάφορα μη ιονικά τασιενεργά. Int. J. Pharm. 2013, 456, 446–458. [CrossRef]

39. Mishra, J.; Swain, J.; Mishra, AK Ανίχνευση των αλλαγών που εξαρτώνται από τη θερμοκρασία της διεπιφανειακής ενυδάτωσης και του ιξώδους του Tween20: Νιόσωμα μεμβράνης χοληστερόλης (1:1) χρησιμοποιώντας Fisetin ως φθορίζον μοριακό ανιχνευτή. Phys. Chem. Chem. Phys. 2018, 20, 13279–13289. [CrossRef]

40. Procházková, D.; Boušová, I.; Wilhelmová, N. Αντιοξειδωτικές και προοξειδωτικές ιδιότητες των φλαβονοειδών. Fitoterapia 2011, 82, 513–523. [CrossRef]

41. Cherak, SA; Mokhtari-Soulimane, N.; Berroukeche, F.; Bensenane, Β.; Cherbonnel, Α.; Merzouk, Η.; Elhabiri, M. In Vitro Antioxidant versus Metal Ion Chelating Properties of Flavonoids: A Structure-Activity Investigation. PLoS ONE 2016, 11, e0165575. [CrossRef] [PubMed]

42. Amic, D.; Davidovic-Amic, D.; Beslo, D.; Rastija, V.; Lucic, Β.; Trinajstic, N. SAR και QSAR της αντιοξειδωτικής δράσης των φλαβονοειδών. Curr. Med. Chem. 2007, 14, 827–845. [CrossRef] [PubMed]

43. Machado, ND; Fernando, SO; De Rossi, RH; Fernandez, MA Τροποποιήθηκαν νιοσώματα με κυκλοδεξτρίνη για να εγκλωβίσουν υδρόφιλες ενώσεις. RSC Adv. 2018, 8, 29909–29916. [CrossRef]

44. Imran, Μ.; Shah, MR; Ullah, F.; Ullah, S.; Elhissi, AMA; Nawaz, W.; Ahmad, F.; Sadiq, Α.; Ali, I. Λιποσωματικός νανοφορέας με βάση τη γλυκοσίδη για την ενισχυμένη in vivo απόδοση της Cefixime. Int. J. Pharm. 2016, 505, 122–132. [CrossRef] [PubMed]

45. Hao, Υ.; Zhao, F.; Li, Ν.; Yang, Υ.; Li, K. Μελέτες για υψηλή ενθυλάκωση της κολχικίνης από ένα θορυβώδες σύστημα. Int. J. Pharm. 2002, 244, 73–80. [CrossRef]

46. ​​Anandam, S.; Selvamuthukumar, S. Κατασκευή νανοσπόγγων κυκλοδεξτρίνης για παροχή κερκετίνης: φυσικοχημικός χαρακτηρισμός, φωτοσταθερότητα και αντιοξειδωτικά αποτελέσματα. J. Mater. Sci. 2014, 49, 8140–8153. [CrossRef]

47. Lv, X.; Liu, Τ.; Ma, Η.; Tian, ​​Υ.; Li, L.; Li, Ζ.; Gao, Μ.; Zhang, J.; Tang, Z. Παρασκευή μικρογαλακτωμάτων με βάση αιθέριο έλαιο για τη βελτίωση της διαλυτότητας, της σταθερότητας του pH, της φωτοσταθερότητας και της διαπερατότητας του δέρματος της κερκετίνης. AAPS PharmSciTech 2017, 18, 3097–3104. [CrossRef]

48. Azzi, J.; Jraij, Α.; Auezova, L.; Fourmentin, S.; Greige-Gerges, H. Νέα ευρήματα για την ενθυλάκωση και τη διατήρηση της κουερσετίνης με κυκλοδεξτρίνες, λιποσώματα και φάρμακο-σε-κυκλοδεξτρίνη-σε-λιποσώματα. Food HydroColloid 2018, 81, 328–340. [CrossRef]

49. Smith, GJ; Thomsen, SJ; Markham, KR; Andary, C.; Cardon, D. Οι φωτοσταθερότητες των φυσικών 5-υδροξυ φλαβονών, φλαβονολών, των γλυκοσιδών τους και των συμπλόκων αλουμινίου τους. J. Photochem. Photobiol. A Chem. 2000, 136, 87–91. [CrossRef]

50. Kubo, Ι.; Kinsthori, I. Φλαβονόλες από το άνθος του σαφράν: Ανασταλτική δράση της Τυροσινάσης και μηχανισμός αναστολής. J. Agric. Food Chem. 1999, 47, 4121–4125. [CrossRef]

51. Kim, YJ; Uyama, H. Αναστολείς Τυροσινάσης από φυσικές και συνθετικές πηγές: Δομή, μηχανισμός αναστολής και προοπτική για το μέλλον. Κύτταρο. ΜοΙ. Life Sci. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef] [PubMed]

52. Kim, D.; Park, J.; Kim, J.; Han, C.; Yoon, J.; Kim, Ν.; Seo, J.; Lee, C. Flavonoids as Mushroom Tyrosinase Inhibitors: A Fluorescence Quenching Study. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 935–941. [CrossRef] [PubMed]

53. Fan, Μ.; Zhang, G.; Hu, Χ.; Xu, Χ.; Gong, D. Quercetin ως αναστολέας τυροσινάσης: Ανασταλτική δραστηριότητα, διαμορφωτική αλλαγή και μηχανισμός. Food Res. Int. 2017, 100, 226–233. [CrossRef] [PubMed]

54. Didem ¸Söhreto ˘glu Suat, S.; Burak, Β.; Özel, A. Αναστολή της τυροσινάσης από ορισμένα φλαβονοειδή: Ανασταλτική δράση, ο μηχανισμός από in vitro και μελέτες πυριτίου. Bioorg. Chem. 2018, 81, 168–174. [CrossRef] [PubMed]

55. Gopinath, D.; Ravi, D.; Karwa, R.; Rao, Β.; Shashank, Α.; Rambhau, D. Φαρμακοκινητική της Ζιδοβουδίνης Μετά την Ενδοφλέβια χορήγηση Βλωμού ενός νέου παρασκευάσματος νιοσώματος χωρίς χοληστερόλη. Arzneimittelforschung 2011, 51, 924–930. [CrossRef] [PubMed]

56. Ghosh, S.; Ghatak, C.; Banerjee, C.; Mandal, S.; Kuchlyan, J.; Sarkar, N. Spontaneous Transition of Micelle-Vesicle-Micelle in a Mixture of Cationic Surfactant and Anionic Surfactant-like Ionic Liquid: A Pure Nonlipid Small Unilamellar Vesicular Template Used for Solvent and Rotational Relaxation Study. Langmuir 2013, 29, 10066–10076. [CrossRef]

57. Sakai, Τ.; Ikoshi, R.; Toshida, Ν.; Kagaya, M. Θερμοδυναμικά σταθερός σχηματισμός κυστιδίων και μετάβαση κυστιδίων σε μικκύλλιο του ανιονικού επιφανειοδραστικού παράγοντα μιας ουράς στο νερό. J. Phys. Chem. B 2013, 117, 5081. [CrossRef]

58. Ghosh, S.; Mondal, S.; Pan, Α.; Mitra, RK; Ghosh, S. Ιονική μεσολάβηση μικκυλίου σε κυστίδιο μετάβασης ενός κατιονικού τασιενεργού διδύμου: Μια φασματοσκοπική έρευνα. Soft Matter 2018, 14, 4185–4193.

59. Mukherjee, Β.; Πάτρα, Β.; Layek, Β.; Mukherjee, A. Παρατεταμένη απελευθέρωση acyclovir από νανο-λιποσώματα και νανο-λιποσώματα: Μια in vitro μελέτη. Int. J. Nanomed. 2007, 2, 213-225.

60. Blois, MS Antioxidant Determinations by the Use of a Stable Free Radical. Nature 1958, 181, 1199–1200. [CrossRef]

61. Rui, Υ.; Ying, G.; Weixin, W.; Chen, Η.; Αυτός, Ζ.; Jia, A.-Q. Αντιοξειδωτική ικανότητα φαινολικών στα άνθη Camellia nitidissima Chi και η ταυτοποίησή τους με HPLC Triple TOF MS/MS. PLoS ONE 2018, 13, e0195508.

Διαθεσιμότητα δείγματος:

Δείγματα των ενώσεων δεν είναι διαθέσιμα από τους συγγραφείς.

© 2019 από τους συγγραφείς. Δικαιούχος άδειας MDPI, Βασιλεία, Ελβετία. Αυτό το άρθρο είναι ένα άρθρο ανοιχτής πρόσβασης που διανέμεται σύμφωνα με τους όρους και τις προϋποθέσεις της άδειας Creative Commons Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Λήψη: 2 Απριλίου 2019; Αποδοχή: 21 Ιουνίου 2019; Δημοσιεύθηκε: 24 Ιουνίου 2019

For more information:1950477648nn@gmail.com