Νέοι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από το Cistanche Tubulosa (SCHRENK) HOOK. FI

HIROMI KOBAYASHI. HIROKO OGUCHI, NOBUO TAKIZAWA, TOSHIO MIYASE, AKIRA UENO, KHAN USMANGHANI και MANSOOR AHMAD

Central Research Laboratories, Yomeishu Seizo Co., Ltd., 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Ιαπωνία, Shizuoka College of Pharmacy,2-2-1 Oshika, Shizuoka- shi 422, Japan and Department of Pharmacognosy, Faculty of Pharmacy, University of Karachi,c Karachi-32, Pakistan

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com

Αφηρημένη

Τέσσερα νέαφαινυλαιθανοειδέςγλυκοσίδες, οι σωληνοζίτες A (II), B (VI), C (VII) και D (VIII), έχουν απομονωθεί απόCistancheσωληνοειδής(ΣΚΡΕΝΚ) ΑΓΚΙΣΤΡΟ. φά. (Orobanchaceae), μαζί με τέσσερα γνωστάφαινυλαιθανοειδέςγλυκοσίδες, εχινακοσίδη (Ι), ακτεοσίδη (III), ισομερές ακτεοσιδίου (IV) και 2'-ακετυλακτεοσίδιο (V). Οι δομές των II, VI, VII και VIII καθορίστηκαν με βάση χημικά στοιχεία και φασματικά δεδομένα. Οι ενώσεις VII και VIII διαθέτουν ένα τμήμα τριακετυλο ραμνοσυλίου ως τελικό σάκχαρο.

Cistancheφαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδηΈχετε πολλά οφέλη για την υγεία

Λέξεις-κλειδιά:Cistancheσωληνοειδής; Orobanchaceae; παρασιτικό φυτό?φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδη; Tubuloside A; Tubuloside B; Tubuloside C; τουμπουλοσίδη Δ

Στη σειρά ερευνών μας σχετικά με τα χημικά συστατικά του Cistanche spp. (Orobanchaceae), τοφαινυλαιθανοειδέςγλυκοσίδες1-3) και ιριδοίδη4) από το Cistanche salsa (CA MEY.) έχει αναφερθεί G. BECK. Η παρούσα εργασία ασχολείται με τους φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από το Cistanche tubulosa (SCHRENK) HOOK. φά. συλλέγονται στο Πακιστάν. Cistanche tubulosa (SCHRENK) ΑΓΚΙΣΤΡΟ. στ.5) είναι ένα παρασιτικό φυτό που αναπτύσσεται στις ρίζες των Salvadora και Calotropis spp., και εμφανίζεται ευρέως στη Βόρεια Αφρική, την Αραβία, τη Δυτική Ασία έως το Πακιστάν και την Ινδία. Ολόκληρο το φυτό χρησιμοποιείται ιατρικά στο Πακιστάν ως φάρμακο για τη διάρροια και τις πληγές.6)

Θέλουμε τώρα να αναφέρουμε την απομόνωση τεσσάρων νέωνφαινυλαιθανοειδέςγλυκοσίδες, που ονομάζονται σωληνοζίτες A (II), B (VI), C (VII) και D (VIII), καθώς και τέσσερις γνωστοί φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, εχινακοσίδης (I), ακτεοσίδης (III), ισομερές ακτεοσιδίου (IV) και 2' -ακετυλολακτεοζίτης (V). Οι δομές αυτών των ενώσεων προσδιορίστηκαν με βάση χημικά στοιχεία και φασματοσκοπικές μελέτες.

ΦαινυλαιθανοειδέςΓλυκοζίτεςσεκιστανάκιμπορεί να αντιφλεγμονώδη

Το αιθανολικό εκχύλισμα ολόκληρου του φυτού εναιωρήθηκε σε νερό. Αυτό το εναιώρημα εκχυλίστηκε με οξικό αιθυλεστέρα και στη συνέχεια με η-βουτανόλη κορεσμένη με νερό. Το διαλυτό κλάσμα n-βουτανόλης χρωματογραφήθηκε σε στήλες πολυαμιδίου και σιλικαζέλ και υποβλήθηκε σε υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) διαδοχικά, για να δώσει οκτώφαινυλαιθανοειδέςγλυκοσίδες(Ι-VIII).

Οι ενώσεις I, III, IV και V απομονώθηκαν ως άμορφες σκόνες, παρουσιάζοντας παρόμοια φάσματα με εκείνα του εχινακοσίδη, 1) ακτεοζίτη, 1) ισομερούς ακτεοσίδης 7) και 2'-ακετυλακτεοζίτη, 2) αντίστοιχα, και ταυτοποιήθηκαν με άμεση σύγκριση με αυθεντικό δείγματα [χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (TLC), υπέρυθρο (IR), πυρηνικός μαγνητικός συντονισμός πρωτονίων (1H-NMR) και άνθρακα-13 φάσματα πυρηνικού μαγνητικού συντονισμού (13C-NMR)].

Το Tubuloside A (II) απομονώθηκε ως άμορφη σκόνη, [ƒ¿]D{{{0}}.7•‹ (MeOH), C37H48O21.3/2 H2O. Το φάσμα υπερύθρων πρότεινε την παρουσία υδροξυλομάδων (3440 cm-1), ενός συζευγμένου εστέρα (1705 cm-1), ενός διπλού δεσμού (1634 cm-1) και αρωματικών δακτυλίων (1608, 1522 cm-1) και το φάσμα υπεριώδους (UV) έδειξε μέγιστα απορρόφησης στα 220, 250 sh, 292 sh και 334 nm. Το φάσμα 1H-NMR του II έδειξε σήματα μιας μεθυλικής ομάδας ραμνόζης [6 1.07 (3H, d, J= 6 Hz)], ενός σήματος μεθυλίου μιας ομάδας ακετοξυλίου [{{27} }.98 (3Η, s)], πρωτόνια βενζυλικού μεθυλενίου [6 2.70 (2Η, t, J= 7 Hz)], δύο πρωτόνια ανωμερικής γλυκόζης [6 4.32, 4,54 (1Η το καθένα, d, J= 8 Hz)], ένα πρωτόνιο ραμνόζης-ανωμερές [6 5.11 (1Η, br s)], δύο τρανς ολεφινικά πρωτόνια [6 6.25 , 7,64 (1Η έκαστο, d, J= 16 Hz)] και αρωματικά πρωτόνια [6 6.5 7 0,2 (6Η)]. Κατά την ακετυλίωση, το II έδωσε το υπό οξικό άλας (IIa), το οποίο ήταν πανομοιότυπο με το οξικό δωδεκάτο του εχινακοσίδη (Ι). Το φάσμα 13C-NMR του II ήταν σχεδόν πανομοιότυπο με αυτό του I, εκτός από τα σήματα που οφείλονται στη γλυκόζη που συνδέεται απευθείας με την αγλυκόνη και την ομάδα ακετοξυλίου [6 20.9 (CH3), 171.5 (C {{62 }})], υποδηλώνοντας ότι η ομάδα ακετοξυλίου είναι συνδεδεμένη με το τμήμα γλυκόζης. Στο φάσμα 13C-NMR του II, η ακυλίωση μετατοπίζεται81 [-2.3 (C{-1),-0.9 (C-2) και-1 .0 (C{-3)] παρατηρήθηκαν στα C-1, C-2 και C-3 της εσωτερικής γλυκόζης με λεπτομερή σύγκριση με το φάσμα του I, υποδεικνύοντας ότι η ομάδα ακετοξυλίου συνδέεται με την C-2 υδροξυλομάδα του τμήματος γλυκόζης στο II. Κατά τη μεθανόλυση του II με ακετυλοχλωρίδιο σε μεθανόλη, καφές μεθυλεστέρας και 3,4-διυδροξυφαιναιθυλική αλκοόλη ανιχνεύθηκαν με TLC και HPLC. Η όξινη υδρόλυση του II με 10 τοις εκατό θειικό οξύ έδωσε γλυκόζη και ραμνόζη σε αναλογία 2 προς 1.

Με βάση τα προαναφερθέντα στοιχεία, η δομή του τουμπουλοσιδίου Α προσδιορίστηκε ότι είναι 2-(3,4-διυδροξυ φαινυλ)αιθυλ 0-aL-ραμνοπυρανοσυλ-(1•¨3)- [ƒÀ-D-γλυκοπυρανοσυλ-(1-6)]-(4-O-caffeoy1)-2-Ο-ακετυλ-fl-D-γλυκοπυρανοσίδη (II).

Το Tubuloside B (VI) απομονώθηκε ως άμορφη σκόνη, [a]D,{{0}}.0•‹ (MeOH), C31 H38016, του οποίου το φάσμα 1H-NMR έδειξε την παρουσία μιας αλειφατικής ακετοξυλικής ομάδας [6 1.98 (3Η, s)]. Το φάσμα 13C-NMR του VI ήταν πολύ παρόμοιο με αυτό του ισομερούς ακτεοσίδης (IV) αλλά διέφερε ελαφρώς στα σήματα λόγω του τμήματος γλυκόζης και της παρουσίας της ομάδας ακετοξυλίου [6 20.9 (CH3), 171.6 ( C =0)]. Η θέση της ομάδας ακετοξυλίου στο τμήμα γλυκόζης του VI προσδιορίστηκε από το φάσμα 13C-NMR της με λεπτομερή σύγκριση με αυτό του IV.

Τα σήματα των C{{0}}, C-2 και C-3 του τμήματος γλυκόζης έδειξαν μετατοπίσεις ακυλίωσης (-2.5 (C-1 ), - 0 .6 (C-2) ​​και-1.4 (C{-3)], όπως στην περίπτωση του II, υποδεικνύοντας ότι η ακετοξυ ομάδα είναι συνδεδεμένη με το C{ {12}} υδροξυλομάδα του τμήματος γλυκόζης στο VI. Κατά την ακετυλίωση, το VI έδωσε το οκταξικό (VIa) το οποίο ήταν ταυτόσημο με το μη οξεικό του IV. Κατά τη μεθανόλυση του VI με χλωριούχο ακετύλιο σε μεθανόλη, καφέ μεθυλεστέρα και 3,{{{ 14}}διυδροξυφαιναιθυλική αλκοόλη ανιχνεύθηκε με TLC και HPLC. Η όξινη υδρόλυση του VI με 10 τοις εκατό θειικό οξύ έδωσε γλυκόζη και ραμνόζη σε αναλογία 1 προς 1. Αυτά τα αποτελέσματα μας οδήγησαν στο συμπέρασμα ότι η δομή του tubuloside B είναι {{18} }(3,4-διυδροξυ φαινυλ)αιθυλ 0-aL-ραμνοπυρανοσυλ-(1-3)-(6-0-caffeoy1)- 2-0-ακετία143-D -γλυκοπυρανοσίδη (VI).

Το δραστικό συστατικό τουCistancheέχει ένααντικαρκινικόαποτέλεσμα

Το Tubuloside C (VII) απομονώθηκε ως άμορφη σκόνη, [a],-104.8•‹ (MeOH), C43H54024 H20, του οποίου το φάσμα 1H-NMR έδειξε την παρουσία τεσσάρων αλειφατικών ακετοξυλομάδων [{{7} },80, 1,92, 1,95 και 2,08 (3Η έκαστο, s)]. Το "φάσμα C-NMR του VII ήταν σχεδόν πανομοιότυπο με αυτό του τουμπουλοσιδίου Α (II), το οποίο διαθέτει μια αλειφατική ακετοξυλική ομάδα στην εσωτερική γλυκόζη, εκτός από τα σήματα που οφείλονται στο τμήμα ραμνόζης. Επιπλέον, στο φάσμα 13C NMR του VII , μετατοπίσεις ακυλίωσης') παρατηρήθηκαν στα σήματα λόγω C-2, C-3 και C-4 του τμήματος ραμνόζης με λεπτομερή σύγκριση με τα δεδομένα για το II. Συνεπώς, οι θέσεις από τις τέσσερις ομάδες ακετοξυλίου προσδιορίστηκε ότι είναι C-2 της εσωτερικής γλυκόζης και C-2, C-3, C-4 του τμήματος ραμνόζης στο VII. Κατά την ακετυλίωση, Το VII έδωσε το οκταοξικό που ήταν πανομοιότυπο με τουμπουλοσίδη Α υπό οξικό (IIa). Κατά τη μεθανόλυση του VII με ακετυλοχλωρίδιο σε μεθανόλη, καφεϊκός μεθυλεστέρας και 3,4-διυδροξυφαιναιθυλική αλκοόλη ανιχνεύθηκαν με TLC και HPLC. με 10 τοις εκατό θειικό οξύ έδωσε γλυκόζη και ραμνόζη σε αναλογία 2 προς 1.

Από τα παραπάνω αποτελέσματα, η δομή του τουμπουλοσιδίου C προσδιορίστηκε ότι είναι 2-(3,{4- διυδροξυ φαινυλ)αιθυλ 2,3,4-τρι-Ο-ακετυλ-aL-θαμνοπυρανοσυλ- (1 - συν 3)-[/9-D-γλυκοπυρανοσυλ-(1 - συν 6)]-(4-0-caffeoy1)-2-0-ακετυλ-fl-D -γλυκοπυρανοσίδη (VII).

Το Tubuloside D (VIII) απομονώθηκε ως άμορφη σκόνη, [oc], -91.4 βαθμοί (MeOH), C43H54023. Η2Ο, του οποίου το φάσμα 1H-NMR έδειξε την παρουσία τεσσάρων αλειφατικών ακετοξυλομάδων [6 1.81, 1.93, 1.96 και 2.09 (3Η έκαστη, s)]. Κατά την ακετυλίωση, το VIII έδωσε το επταοξικό (VIIa), του οποίου το φάσμα 1H-NMR έδειξε οκτώ αλειφατικά [6 1.87, 1.94, 1.96, 1.99, 2.10 (3Η το καθένα, s) και 2.02 (9Η, s) τρία αρωματικά [6 2.27, 2.30 και 2.32 (3Η το καθένα, s)] σήματα ακετοξυμεθυλίου. Το φάσμα 13C-NMR του VIII ήταν σχεδόν πανομοιότυπο με αυτό του τουμπουλοσιδίου C (VII), εκτός από τα σήματα που οφείλονται στο τμήμα του ρ-κουμαρικού οξέος. Κατά τη μεθανόλυση του VIII με ακετυλοχλωρίδιο σε μεθανόλη, ρ-κουμαρικός μεθυλεστέρας και 3,4-διυδροξυφαιναιθυλική αλκοόλη ανιχνεύθηκαν με TLC και HPLC. Η όξινη υδρόλυση του VIII με 10 τοις εκατό θειικό οξύ έδωσε γλυκόζη και ραμνόζη σε αναλογία 2 προς 1.

Με βάση αυτά τα αποτελέσματα, η δομή του τουμπουλοσιδίου D προσδιορίστηκε ότι είναι 2-(3,4- διυδροξυ φαινυλ)αιθυλ 2,3,4-τρι-Ο-ακετυλ-α-Lrhamnopyranosyl- (1•¨3)-[ƒÀ-D-γλυκοπυρανοσύ-](1→6)} (4-0-ρ-κουμαρία1)-2-0-ακετυλ-fl-D-γλυκοπυρανοσίδη (VIII).

Πολλάφαινυλαιθανοειδέςγλυκοσίδεςόπως φορσυθοσίδη Α,' βαθμός) λευκοσκεπτοσίδη Α, 7 ισομαρ τινοσιδέλη) και ούτω καθεξής, έχοντας ένα τμήμα ραμνόζης ως τελικό σάκχαρο έχει αναφερθεί. Σε αυτές τις περιπτώσεις, το τμήμα ραμνόζης δεν ακετυλιώνεται. Οι σωληναρίδες C (VII) και D (VIII) περιέχουν ένα τμήμα ακετυλιωμένης ραμνόζης και είναι οι πρώτες φυσικές ενώσεις που έχουν ένα τμήμα τριακετυλο ραμνόζης που αναφέρεται.

Το δραστικό συστατικό τουCistancheέχεινευροπροστατευτικόαποτέλεσμα

Πειραματικός

Τα σημεία τήξης προσδιορίστηκαν σε συσκευή μικροσημείου τήξης Mitamura και δεν είναι διορθωμένα. Οι οπτικές περιστροφές μετρήθηκαν με ψηφιακό πολόμετρο JASCO DIP-140. Τα φάσματα υπερύθρων καταγράφηκαν με υπέρυθρο φασματοφωτόμετρο Hitachi 270-30 και τα φάσματα UV με φασματόμετρο Hitachi 200-20. Τα φάσματα H-NMR και CN MR καταγράφηκαν με μηχανή JEOL FX-90Q (89,55 και 22,5 MHz, αντίστοιχα). Οι χημικές μετατοπίσεις δίνονται στην κλίμακα 6 (ppm) με τετραμεθυλοσιλάνιο (TMS) ως εσωτερικό στάνταρ (s, μονή, d, διπλή, t, τριπλή, br, ευρεία). Η χρωματογραφία αερίου-υγρού (GC) εκτελέστηκε σε συσκευή Shimadzu GC-4CM με ανιχνευτή ιονισμού φλόγας. Διεξήχθη HPLC σε Μηχανή Hitachi 655A-11. Για χρωματογραφία στήλης χρησιμοποιήθηκε πήκτωμα πυριτίου (Wako gel C-300, Wako Pure Chemical). Χρησιμοποιήθηκαν προεπικαλυμμένες πλάκες Kieselgel 60 F254 (Merck) για TLC και η ανίχνευση πραγματοποιήθηκε με ψεκασμό 10 τοις εκατό H2SO4 ακολουθούμενο από θέρμανση.

Απομόνωση

Φρέσκα ολόκληρα φυτά C. tubulosa (22 kg), που συλλέχθηκαν τον Δεκέμβριο του 1984, στο Καράτσι του Πακιστάν, εκχυλίστηκαν με EtOH. Το αιθανολικό εκχύλισμα εναιωρήθηκε σε Η2Ο και εκχυλίστηκε με EtOAc και στη συνέχεια με n-BuOH κορεσμένο με Η20. Το εκχύλισμα n-BuOH (99,1 g) απορροφήθηκε σε στήλη Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) και η ρητίνη εκλούστηκε με Me{0H αφού πλύθηκε με Η2{0 . Το έκλουσμα Me{17}}Η (15,4 g) χρωματογραφήθηκε σε στήλη πολυαμιδίου C-200 (Wako Pure Chemical) χρησιμοποιώντας Η20 και στη συνέχεια Me0Η. Το κλάσμα που εκλούστηκε με Me{{50}}H συμπυκνώθηκε για να δώσει ένα υπόλειμμα (φαινολικές ακατέργαστες γλυκοσίδες) (8,0 g). Μετά από επαναλαμβανόμενη χρωματογραφία του υπολείμματος σε σιλικαζέλ με CHC13—Me0H—H20 (70:30:5) και HPLC με σύστημα διαλυτών H2O—CH3CN ή H2O—MeOH, απομονώθηκαν οκτώ γλυκοσίδες (I---VIII). Ι, 230 mg; II, 200 mg; III, 240 mg; IV, 60 mg; V, 210 mg; VI, 100 mg; VII, 60 mg, VIII, 65 mg. Προϋποθέσεις για HPLC: στήλη, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm). διαλύτης, Ι, II (17 τοις εκατό CH3CN), III, IV (20 τοις εκατό CH3CN), V (22 τοις εκατό CH3CN), VI (25 τοις εκατό CH3CN), VII (53 τοις εκατό Me0H), VIII (55 τοις εκατό Me0H); ανιχνευτής (UV), 220 nm; ταχύτητα ροής, 6,9 ml/min.

Εχινακοσίδη (Ι)

Άμορφη σκόνη. IR 0,;,Eas,r, cm-1: 3400, 1690, 1625, 1600, 1518. 11-I-NMR (μεθανόλη-d4) 6: 1,09 (3Η, d , J=6 Hz, CH3 ραμνόζης), 2,79 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH{2-), 4,29, 4,37 (1Η έκαστο, d, J{{ 28}} Hz, H-1 γλυκόζης), 5.16 (1H, d, J=1 Hz, H-1 ραμνόζης), 6.26 (1H, d, J{{38} } Hz, Ar-CH=CH-), 6.4-7.1 (6H, aromatic H), 7.59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH{{ 51}}CH-). 13C-NMR: Πίνακας I.

Tubuloside A (H)

Άμορφη σκόνη, [a]{{0}}.7 (c=1.08, Me0H). Πρωκτικός. Υπολογ. για C371-14021 3/2 H20: C, 51,93; Η, 6.01. Βρέθηκε: C, 51,80; Η, 5,81. IR vrtr, cm': 3440, 1732, 1705, 1634, 1608, 1522. UV An" nm (log e): 220 (4,14), 250 sh (3,85), 292 sh (3,95), 334 (4,3). 1H-NMR (μεθανόλη-d4): βλέπε κείμενο 13C-NMR: Πίνακας I.

Ακτεοσίδη (III)

Άμορφη σκόνη. IR v cm-1: 3420, 1696, 1634, 1606, 1520. 1H-NMR (μεθανόλη-d4) 5: 1.10 (3H, d, J=6 Hz, CH3 ραμνόζης), 2.78 ( 2Η, t, J= 7 Hz, Ar-CH{2-), 4.36 (1Η, d, J= 8 Hz, Η-1 γλυκόζης), 5.17 (1Η, d, J=1 Hz, H-1 ραμνόζης), 6.25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.{{ 40}}.1 (6Η, αρωματικό Η), 7.58 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Πίνακας I.

Ισομερές ακτεοσιδίου (IV)

Άμορφη σκόνη. IR v cm-1: 3280, 1686, 1624, 1602, 1512. 11-I-NMR (μεθανόλη-d4) 6: 1,26 (3Η, d, J=6 Hz, CH3 από ραμνόζη), 2.77 (2Η, t, J= 7 Hz, Ar-Cl.2-Ι.2 4.33 (3Η, d, J=8 Hz, H{ {26}} γλυκόζης), 5,18 (1Η, br s, Η-1 ραμνόζης), 6,28 (1Η, d, 1=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.4-7.1 (6Η, αρωματικό Η), 7.54 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-) 13C-NMR: Πίνακας Ι.

2'-Ακετυλακτεοζίτης (V)

Άμορφη σκόνη. IR vT cm-1: 3450, 1735, 1705, 1640, 1610, 1535. 1H-NMR (μεθανόλη-d4) 6: 1,07 (3Η, d, 1= 6 Hz, CH3 ραμνόζης), 1. (3H, s, OAc), 2.69 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH{2-), 4.50 (1H, d, J=8 Hz, H{{30 }} γλυκόζης), 5,16 (1Η, br s, Η-1 ραμνόζης), 6,25 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6 .5-7.2 (6Η, αρωματικό Η), 7.59 (1Η, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Πίνακας I.

Tubuloside B (VI)

Άμορφη σκόνη, [{{0}}.0 βαθμός (c= 1.05, Me0H). Πρωκτικός. Υπολογ. για Cm H38016: C, 55,85; Η, 5,75. Βρέθηκε: C, 55,91; Η, 6.00. IR v:, 111 cm-1: 3420, 1734, 1696, 1634, 1608, 1522. UV 4 ear nm (log e): 220 (4,32), 246 sh (4,09), 292 sh (34,21), (4.31). 1H-NMR (μεθανόλη-d4) 6: 1,24 (3Η, d, J=6 Hz, CH3 ραμνόζης), 1,98 (3Η, s, OAc), 2,69 (2Η, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4.48 (1H, d, J=8 Hz, H-1 γλυκόζης), 6.32 (1H, d, J{=16 Hz, Ar-CH - CH-), 6.5-7.2 (6Η, αρωματικό Η), 7.61 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Πίνακας I.

Tubuloside C (VII)

Άμορφη σκόνη, [a] - iO4.8© (c=1.86, Me0H). Πρωκτικός. Υπολογ. για C43H54024' H20: C, 53.08; Η, 5,80. Βρέθηκε: C, 53,28; Η, 5,68. IR v cm': 3440, 1748, 1634, 1608, 1522. UV 2" nm (log c): 220 sh (4,06), 250 sh (3,7), 292 sh (3,88), 333 (4,04). 1Η-ΝΜ (μεθανόλη-d4) 6: 1,02 (3Η, d, J=6 Hz, CH3 ραμνόζης), 1,80, 1,92, 1,95, 2,08 (3Η έκαστο, s, OAc), 2,70 (2Η, t, J{ {57}} Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,56 (1Η έκαστο, d, J=8 Hz, Η-1 γλυκόζης), 5,02 (1Η, br s, Η-1 ραμνόζης), 6.30 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.5-7.2 (6Η, αρωματικό Η. ), 7.66 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-) 13C-NMR: Πίνακας Ι.

Tubuloside D (VIII)

Άμορφη σκόνη, [a]P{{{0}}.4 βαθμοί (c= 1.85, Me0H). Πρωκτικός. Υπολογ. για C43H54023 'H20: C, 54.00; Η, 5,90. Βρέθηκε: C, 54,10; Η, 5,75. IR v:,111 cm-1: 3440, 1750, 1634, 1608, 1518. UV 2,',1,2" nm (log a): 228 (4,16), 292 sh (4,21), 302 sh (4.26), 318 (4.35). 11-I-NMR (μεθανόλη-d4) 6: 1.00 (3Η, d, J=6 Hz, CH3 της ραμνόζης), 1.81 , 1,93, 1,96, 2,09 (3Η το καθένα, s, OAc), 2,70 (2Η, t, J=7 Hz, Ar-CH{2-), 4,32, 4,53 (1Η το καθένα, d, J{ {68}} Hz, H{-1 γλυκόζης), 5.03 (1H, br s, H-1 ραμνόζης), 6.38 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.52-6.75 (3Η, αρωματικό Η), 6.84 (2Η, d, J= 9 Hz, Η-3, Η{{90 }} του π-κουμαρικού οξέος), 7,54 (2Η, d, J=9 Hz, Η{-2, Η-6 του π-κουμαρικού οξέος), 7,74 (1Η, d, J =16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Πίνακας I.

Ακετυλίωση των II και VII

Η επεξεργασία του II ή VII (30 mg) με Ac20 (1 ml) και πυριδίνη (1 ml) σε θερμοκρασία δωματίου κατά τη διάρκεια της νύχτας ακολουθούμενη από τη συνήθη επεξεργασία έδωσε ένα ακατέργαστο οξικό άλας, το οποίο καθαρίστηκε με χρωματογραφία σε σιλικαζέλ με βενζόλιο-ακετόνη (5: 1) για να δώσει το υπό οξικό (IIa) (25 mg) από το II ή το οκταοξικό (22 mg) από το VII, ως άχρωμες βελόνες από Me0H, mp 130-131 C. IR v cm ': 1775, 1660, 1523, 1450. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,05 (3Η, d, J= 6 Hz, CH3 της ραμνόζης), 1,89, 1,96, 1,97, 2,11, έκαστο s, OAc), 2.03 (9H, s, OAc x 3), 2.29 (3H, s, Ar-OAc), 2.31 (9H, s, Ar-OAc x 3), 2.88 (2H, t, J{{52 }} Hz, Ar-CH2-), 6.35 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH=CH-), 7.0-7.4 ( 6Η, αρωματικό Η), 7,66 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). Αυτά τα προϊόντα βρέθηκαν να είναι πανομοιότυπα με το δωδεκαοξικό της εχινακοσίδης (Ι) με άμεση σύγκριση (TLC, μικτό mp, IR και 1H-NMR).

Ακετυλίωση του VI

Η ένωση VI (40 mg) ακετυλιώθηκε με τον ίδιο τρόπο όπως περιγράφηκε για το II και το προϊόν της αντίδρασης καθαρίστηκε με χρωματογραφία σε σιλικαζέλ με βενζόλιο-ακετόνη (9:1) για να δώσει το οκταοξικό (VIa) (30 mg) ως άμορφο σκόνη. IR v cm': 1742, 1630, 1498. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,14 (3Η, d, J=6 Hz, CH3 της ραμνόζης), 1,95, 2,03, 2,05, 2,09 (3Η. , s, OAc), 2,27, 2,31 (6Η έκαστο, s, Ar-OAc x 2), 2,87 (2Η, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 6,42 (1Η, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6.9-7.5 (6H, αρωματικό Η), 7.64 (1H, d, J= 16 Hz, Ar CH=CH-). Το VIa βρέθηκε να είναι ταυτόσημο με το εννεοξεικό του ισομερούς ακτεοζίτη (IV) με άμεση σύγκριση (TLC, IR και 11-1-NMR.

Ακετυλίωση του VIII

Η ένωση VIII (35 mg) ακετυλιώθηκε με τον ίδιο τρόπο όπως περιγράφηκε για II για να δώσει το επταοξικό (VIIIa) (30 mg) ως άμορφη σκόνη. IR κατά cm': 1760, 1638, 1604, 1510. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,03 (3Η, d, J= 6 Hz, CH3 της ραμνόζης), 1,87, 1,94, 1,19 (1,99,2). 3Η έκαστο, s, OAc), 2,02 (9Η, s, OAc x 3), 2,27, 2,30, 2,32 (3Η έκαστο, s, Ar-OAc), 2,88 (2Η, t, J=7 Hz, Ar -CH2-), 6,36 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 7.0-7.2(3H, αρωματικό H) , 7,25 (2H, d, J=9 Hz, H{-3, H-5 του p-κουμαρικού οξέος), 7,57 (2H, d, J{=9 Hz, H -2, Η-6 του ρ-κουμαρικού οξέος), 7,72 (1Η, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-).

Μεθανόλυση των II, VI, VII και VIII

Η ένωση II, VI, VII ή VIII (περίπου 1 mg) θερμάνθηκε υπό κάθετο ψυκτήρα με μεθανολικό 5 τοις εκατό CH3COCl (2 ml) για 30 λεπτά και στη συνέχεια τα αντιδραστήρια εξατμίστηκαν. Η παρουσία καφέ μεθυλεστέρα και 3,4- διυδροξυφαιναιθυλικής αλκοόλης στο υπόλειμμα των II, VI, και VII, και ρ-κουμαρικού μεθυλεστέρα και 3,4-διυδροξυφαιναιθυλικής αλκοόλης σε αυτό του VIII, καταδείχθηκε με TLC [CHC13—MeOH (20: 1)] και HPLC [στήλη, TSK GEL LS-410AK (4 x 300 mm); διαλύτης, Η20-Me0H (4: 6); ανιχνευτής (UV), 250 nm; ταχύτητα ροής, 1,0 ml/min]. Καφεϊκός μεθυλεστέρας [R•¬ 0,20, tR (min) 10,8], π-κουμαρικός μεθυλεστέρας [R•¬ 0,40, tR (min) 15,6], 3.4-διυδροξυφαιναιθυλική αλκοόλη [R•¬ 0,06, tR (min ) 2,8].

Οξύ υδρόλυση των II, VI, VII και VIII

Ένα διάλυμα γλυκοσίδης (περίπου 2 mg) σε 10 τοις εκατό H2SO4 (1 ml) θερμάνθηκε σε λουτρό ζέοντος νερού για 30 λεπτά. Το διάλυμα διήλθε μέσω στήλης Amberlite IR-45 και το έκλουσμα συμπυκνώθηκε για να δώσει ένα υπόλειμμα, το οποίο ανήχθηκε με βοροϋδρίδιο του νατρίου (περίπου 3 mg) για 1 ώρα. Το μίγμα της αντίδρασης πέρασε μέσω στήλης Amberlite IR-120 και συμπυκνώθηκε μέχρι ξηρού. Το βορικό οξύ απομακρύνθηκε με απόσταξη με MeOH και το υπόλειμμα ακετυλιώθηκε με Ac2O (1 σταγόνα) και πυριδίνη (1 σταγόνα) στους 100•Ζ για 1 ώρα. Τα αντιδραστήρια εξατμίστηκαν. Η οξική γλυκιτόλη και η οξική ραμνιτόλη ανιχνεύθηκαν σε αναλογία 2 προς 1 από II, VII και VIII, και 1 προς 1 από VI με GC. tR (min): 2,0 (οξική ραμνιτόλη), 5,5 (οξική γλυκιτόλη). Συνθήκες για GC: στήλη, 1,5 τοις εκατό OV-17 (3 mm x 1,5 m). θερμοκρασία στήλης, 180•Ž; φέρον αέριο, Ν2 (30 ml/min).

Αναγνώριση

Είμαστε ευγνώμονες στον Καθ. Δρ. SI Ali, Τμήμα Βοτανικής, Πανεπιστήμιο του Καράτσι, για την ταυτοποίηση του φυτού.

Παραπομπές και Σημειώσεις

1) Η. Kobayashi, Η. Karasawa, Τ. Miyase, and S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3009 (1984).

2) Η. Kobayashi, Η. Karasawa, Τ. Miyase, and S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3880 (1984).

3) α) Η. Kobayashi, Η. Karasawa, Τ. Miyase, and S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 33, 1452 (1985); β) Η. Karasawa, Η. Kobayashi, Ν. Takizawa, Τ. Miyase, and S. Fukushima, Yakugaku Zasshi, 106, 562 (1986); γ) Idem, ό.π., 106, 721 (1986).

4) α) Η. Kobayashi and J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); β) Η. Kobayashi, Η. Karasawa, Τ. Miyase, and S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 1729 (1984); γ) Idem, ό.π., 33, 3645 (1985).

5) E. Nasir and SI Ali, "Flora of West Pakistan," Vol. 98, Shamin Printing Press, Karachi, 1976, σελ. 4.

6) SR Baquar and M. Tasnif, "Medicinal Plants of Southern West Pakistan," Vol. 3, Pakistan Council of Scientific and Industrial Research Bulletin/Monograph, Karachi, 1967, p. 56.

7) T. Miyase, Α. Koizumi, Α. Ueno, T. Noro, Μ. Kuroyanagi, S. Fukushima, Y. Akiyama, and T. Takemoto, Chem. Pharm. Bull., 30, 2732 (1982).

8) Κ. Yoshimoto, Υ. Itatani, and Υ. Tsuda, Chem. Pharm. Bull., 28, 2065 (1980).

9) Ι. Kitagawa, HK Wang, Μ. Saito, Α. Takagi, and Μ. Yoshikawa, Chem. Pharm. Bull., 31, 698 (1983).

10) Κ. Endo, Κ. Takahashi, Τ. Abe, and Η. Hikino, Heterocycles, 16, 1311 (1981). 11) Ι. Calis, MF Lahloub, Ε. Rogenmoser, and Ο. Sticher, Phytochemistry, 23, 2313 (1984).