Φαρμακολογία δικτύου και πειραματική επικύρωση ένωσης με βάση το Cistanche στη θεραπεία της καλοήθους υπερπλασίας προστάτη μέσω διαμόρφωσης οδού PI3K/AKT
Jun 17, 2025
Περίληψη
Σκοπός:
Για να εξερευνήσετε τοπροληπτικά και θεραπευτικά αποτελέσματα των κόκκων ένωσης με βάση το Cistancheεπίκαλοήθης υπερπλασία του προστάτη (BPH)και να αποσαφηνίσει τους υποκείμενους μηχανισμούς μέσωδικτυακές φαρμακολογικές προβλέψειςσε συνδυασμό μεπειράματα σε ζώα in vivo.
Φυτικά χάπια με βάση το Cistanche με υψηλά ενεργά συστατικά
Go List Products Λάβετε περισσότερες λεπτομέρειες
Μέθοδοι:
(1) Ενεργά συστατικάτουCistanche deserticolaκαι άλλα υποστηρικτικά βότανα ελέγχθηκαν μέσω τουΒάση δεδομένων TCMSP, που συμπληρώνεται από εξόρυξη λογοτεχνίας. Οι στόχοι αυτών των φυτοχημικών προβλέφθηκαν χρησιμοποιώνταςPubChem, Ελβετική πρόβλεψη στόχου, καιΣυγκριτική Τοξικογονιδιωματική Βάση Δεδομένων (CTD). Στόχοι που σχετίζονται με την BPH συλλέχθηκαν απόGeneCards, CTD, Τράπεζα Φαρμάκων, καιDisGeNET. Εντοπίστηκε ανάλυση τομής125 πιθανούς θεραπευτικούς στόχουςτου Cistanche στη θεραπεία της BPH. ΕΝΑδίκτυο αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης (PPI).κατασκευάστηκε χρησιμοποιώνταςΣΕΙΡΑ, καιΑναλύσεις εμπλουτισμού μονοπατιών GO και KEGGπραγματοποιήθηκαν μέσωMetascape. Μια περιεκτικήδίκτυο "βότανο-ένωση-στόχος-διαδρομή".οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώνταςCytoscape, και οι βασικοί στόχοι επικυρώθηκαν μέσωμοριακή σύνδεσηχρησιμοποιώνταςAutoDock Vina.
(2) Εξήντα αρσενικοί αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε έξι ομάδες: έλεγχος, μοντέλο, θετικός έλεγχος (Qianlie ShutongΚάψουλες, 0,324 g/kg), και τρεις ομάδες δόσηςΚόκκοι ένωσης Cistanche(υψηλή: 3,24 g/kg, μέτρια: 1,62 g/kg, χαμηλή: 0,81 g/kg). Η ΒΡΗ προκλήθηκε απόευνουχισμός και ένεση προπιονικής τεστοστερόνης. Οι αρουραίοι έλαβαν από του στόματος θεραπεία καθημερινά για 30 ημέρες. Υπολογίστηκε το υγρό βάρος και ο δείκτης του προστάτη. Επίπεδα ορού τουCOX-2, VEGF, καιPGE2μετρήθηκαν μέσω ELISA.Ιστοπαθολογικές αλλαγέςπαρατηρήθηκαν με χρώση HE, καιέκφραση πρωτεΐνηςτουAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, καιVEGFαξιολογήθηκε μέσω στυπώματος Western.
Αποτελέσματα:
(1) Συνολικά260 σύνθετοι στόχοι, 1.584 στόχοι που σχετίζονται με την BPH, και125 αλληλοκαλυπτόμενοι θεραπευτικοί στόχοιταυτοποιήθηκαν. Περιλαμβάνονται βασικοί στόχοιAKT1, TNF, TP53, IL1, EGFR, CASP3, καιPTGS2. Οι αναλύσεις εμπλουτισμού έδειξαν ότιIL-17, HIF-1, TNF, καιΜονοπάτια σηματοδότησης PI3K-AKTπαίζουν κρίσιμους ρόλους. Βασικά ενεργά συστατικά όπωςλουτεολίνη, απιγενίνη, γλυκοσίδες πλατανιών, μαγκιφερίνη, καιισοβιτεξίνηεπέδειξε ισχυρές δεσμευτικές συγγένειες με στόχους όπωςAKT1, PTGS2, CASP3, καιIL6, με ενέργειες δέσμευσης Μικρότερο ή ίσο με –6 kcal/mol.
(2) Τα αποτελέσματα in vivo έδειξαν ότιΟι κόκκοι Cistanche μείωσαν σημαντικά το βάρος και τον δείκτη του προστάτη(Ρ < 0,05 ή Ρ < 0,01), βελτιωμένηαδενική δομήκαι ανακουφίστηκεεπιθηλιακή υπερπλασία. Επίπεδα ορού τουCOX-2, PGE2, καιVEGFμειώθηκαν σημαντικά. Έκφραση τουp-AKT1, p-PI3K, COX-2, καιVEGFστον ιστό του προστάτη ήταν σημαντικά μειωμένη (P < 0,05 ή P < 0,01).
Σύναψη:
Αυτή η μελέτη παρέχει προκαταρκτικά στοιχεία ότιΒοτανοθεραπεία με βάση το Cistancheασκείπροληπτικά και θεραπευτικά αποτελέσματα κατά της ΚΥΠ, κυρίως μέσω της διαμόρφωσης τουΔιαδρομή σηματοδότησης PI3K/AKT, αναστολή τουCOX-2 και PGE2, και καταστολή τουΠροκαλούμενος από VEGF πολλαπλασιασμός προστατικών κυττάρων. Βασικά βιοενεργά συστατικά όπωςγλυκοσίδες πλατανιών, μαγκιφερίνη, καιλουτεολίνημπορεί να χρησιμεύσει ως οι κύριοι φαρμακολογικοί παράγοντες. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν τις δυνατότητες τουΕκχύλισμα Cistancheως αΦυσική θεραπεία για την υγεία του προστάτη.
Λέξεις-κλειδιά:
Cistanche deserticola; Εκχύλισμα Cistanche; καλοήθης υπερπλασία του προστάτη (BPH); φαρμακολογία δικτύου? Μονοπάτι PI3K/AKT. VEGF; COX-2; PGE2; φλεγμονή του προστάτη? Φυσική θεραπεία προστάτη? φυτική θεραπεία για BPH? παραδοσιακή κινεζική ιατρική? φυτοθεραπεία; μοριακή σύνδεση? μοντέλο αρουραίου
Φόντο
Καλοήθης υπερπλασία του προστάτη (BPH)είναι μια κοινή ουρολογική διαταραχή σε μεσήλικες και ηλικιωμένους άνδρες. Στα αρχικά της στάδια, η ΚΥΠ χαρακτηρίζεται από συχνουρία, επείγουσα ανάγκη, διστακτικότητα και ατελή ούρηση. Καθώς η νόσος εξελίσσεται, μπορεί να εμφανιστούν πιο σοβαρά συμπτώματα όπως αιματουρία, επώδυνη ούρηση, πέτρες στην ουροδόχο κύστη, ακόμη και νεφρική δυσλειτουργία [1-2]. Μελέτες [3] έδειξαν ότι η συχνότητα της ΚΥΠ αυξάνεται με την ηλικία, επηρεάζοντας πάνω από το 50% των ανδρών ηλικίας άνω των 50 ετών, μειώνοντας έτσι σημαντικά την ποιότητα ζωής.
Οι τρέχουσες θεραπείες BPH περιλαμβάνουν κυρίωςφαρμακευτικές και χειρουργικές παρεμβάσεις, που μπορεί να οδηγήσει σεπαρενέργειες, επιπλοκές και μακροχρόνιες συνέπειες[4-7]. Επομένως,Παραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική (TCM)σκευάσματα που είναικλινικά αποτελεσματικό με λιγότερες παρενέργειεςέχουν κερδίσει αυξανόμενη προσοχή ως εναλλακτικές θεραπείες για την ΚΥΠ.
Κόκκοι βοτάνων με βάση το Cistancheέχουν επιδείξει αντιφλεγμονώδη, διουρητικά και ιστοπροστατευτικά αποτελέσματα σε ουροποιητικές παθήσεις. Προηγούμενες μελέτες [9-10] έχουν δείξει ότι οι συνταγές με βότανα βασίζονται κυρίως σεCistanche deserticolaασκώπροστατευτικά αποτελέσματακατά της BPH σε ζωικά μοντέλα. Προκαταρκτική έρευνα από την ομάδα μας [11] υποδηλώνει ότι αυτή η φόρμουλα μπορεί να μειώσει τη φλεγμονή του προστάτη κατάαναστολή φλεγμονωδών μεσολαβητώνόπωςCOX-2, PGE2, IL-6, καιTNF-. ΑπόΗ προστατίτιδα είναι συχνά μια συννοσηρή κατάσταση που επιδεινώνει την BPH, η παρούσα μελέτη στοχεύει να αξιολογήσει τηνμηχανισμός δράσης και θεραπευτικές δυνατότητεςτου αΣύνθεση με βάση το Cistancheχρησιμοποιώνταςφαρμακολογία δικτύου και in vivo επικύρωσησε μοντέλο αρουραίου BPH.
Υποστήριξη της Wecistanche-Επικοινωνήστε μαζί μας για να λάβετε μια τιμή χονδρικής
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
1. Υλικά και Μέθοδοι
1.1 Πειραματόζωα
Συνολικά 70 αρσενικοί αρουραίοι SD βαθμού SPF (180–220 g) παρασχέθηκαν από το Εργαστηριακό Κέντρο Ζώων του Ιατρικού Πανεπιστημίου Guangxi (άδεια: SCXK [Gui] 2020-0003). Τα πρωτόκολλα για τα ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Θεσμών για τα Ζώα (αριθμός έγκρισης: GXBGMP20220602). Οι αρουραίοι στεγάστηκαν σε τυπικές συνθήκες με ελεγχόμενη θερμοκρασία (23 ± 2 βαθμοί), υγρασία (60 ± 5%) και κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών.
1.2 Φάρμακα και Αντιδραστήρια
Κόκκοι ένωσης Cistanche (δοκιμαστική σύνθεση)
Θετικός έλεγχος: Κάψουλες Qianlie Shutong (0,324 g/kg)
Ένεση προπιονικής τεστοστερόνης (15 mg/kg)
Κιτ ELISA για COX-2, PGE2, VEGF
Αντισώματα: anti-AKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, VEGF, GAPDH
Αντιδραστήρια Western blot, γέλες SDS-PAGE και συστήματα απεικόνισης
Όλα τα αντιδραστήρια αγοράστηκαν από αξιόπιστους εγχώριους και διεθνείς προμηθευτές
1.3 Εξοπλισμός
Αναλυτικό υπόλοιπο (0,0001g ακρίβεια)
Αντεστραμμένο βιολογικό μικροσκόπιο (Olympus IX73)
Συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (Tecan M200)
Σύστημα Western blot (Bio-Rad)
Σταθμός απεικόνισης (GE Imager 680)
1.4 Πρόβλεψη στόχου για δραστικές ενώσεις Cistanche
Δραστικά συστατικά τουCistanche deserticolaκαι άλλα συμπληρωματικά βότανα ανακτήθηκαν από τοΒάση δεδομένων TCMSP, φιλτραρισμένο κατάβιοδιαθεσιμότητα από το στόμα (ΟΒ μεγαλύτερη από ή ίση με 30%)καιομοιότητα με το φάρμακο (DL Μεγαλύτερο ή ίσο με 0,18). Συμπεριλήφθηκαν επίσης βιοδραστικές ενώσεις επαληθευμένες με βιβλιογραφία που δεν πληρούσαν αυτά τα όρια. Οι πιθανοί στόχοι είχαν προβλεφθεί μέσωPubChem, SwissTargetPrediction, καιCTD, χρησιμοποιώντας φίλτρα για υψηλή απορρόφηση GI και ευνοϊκές ιδιότητες ADME.
1.5 Προσδιορισμός στόχων που σχετίζονται με την BPH
Το "BPH" αναζητήθηκε σε πολλές βάσεις δεδομένων, συμπεριλαμβανομένωνDisGeNET, CTD, GeneCards, καιΤράπεζα Φαρμάκωνγια τη συγκέντρωση στόχων που σχετίζονται με ασθένειες. Μόνο οι στόχοι με βαθμολογίες συνάφειας πάνω από τη διάμεση τιμή διατηρήθηκαν και τα διπλότυπα αφαιρέθηκαν για να ληφθεί ένα σύνολο στόχων BPH υψηλής εμπιστοσύνης.
1.6 Ανάλυση τομής για πιθανούς θεραπευτικούς στόχους
Με τομήΣτόχοι ένωσης Cistancheμε γνωστόΓονίδια που σχετίζονται με την BPH, εντοπίσαμε δυνατότητεςθεραπευτικούς στόχους κατά της BPH, οπτικοποιημένο μέσωΔιαγράμματα Vennχρησιμοποιώντας το λογισμικό R.
1.7 Κατασκευή δικτύου αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης (PPI).
Οι πιθανοί στόχοι ανέβηκαν στοSTRING v11.5βάση δεδομένων για τη δημιουργία ενός δικτύου PPI. Η οπτικοποίηση και η τοπολογική ανάλυση (κεντρικότητα βαθμών) πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώνταςCytoscape 3.9.1.
1.8 Ανάλυση εμπλουτισμού GO και KEGG
Αναλύσεις εμπλουτισμού γιαΓονιδιακή Οντολογία (GO)λειτουργίες καιμονοπάτια KEGGδιεξήχθησαν χρησιμοποιώνταςMetascape, με τη σημασία που ορίζεται σεP < 0,01.
1.9 Κατασκευή Δικτύου "Herb-Compound-Target-Pathway".
Οι βασικές οδοί που σχετίζονται με την BPH επιλέχθηκαν από τα αποτελέσματα εμπλουτισμού KEGG. ΕΝΑπολυεπίπεδο δίκτυοσυνδέοντας βότανα, δραστικές ενώσεις, στόχους και μονοπάτια κατασκευάστηκαν στο Cytoscape και οι κόμβοι-κλειδιά αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τοΑναλυτής δικτύουπρόσθετο.
1.10 Επαλήθευση μοριακής σύνδεσης
Έξι πρωτεΐνες-στόχοι πυρήνων (PTGS2, AR, CASP3, IL6, PTGS1, AKT1) και ενώσεις κορυφαίας κατάταξης (λουτεολίνη, απιγενίνη, ισοβιτεξίνη, μαγγιφερίνη, γλυκοσίδες πλατανιών) επιλέχθηκαν γιαμοριακή σύνδεση. Οι πρωτεϊνικές κρυσταλλικές δομές λήφθηκαν από τοRCSB Protein Data Bank(https://www.rcsb.org) και η σύνδεση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώνταςAutoDock Vina. Οι ενέργειες δέσμευσης οπτικοποιήθηκαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώνταςPyMOL.
1.11 Ζωικό μοντέλο και ομαδοποίηση
Μετά από 7 ημέρες εγκλιματισμού, 60 αρσενικοί αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε 6 ομάδες (n=10): έλεγχος, μοντέλο, θετικός έλεγχος και χαμηλή, μεσαία, υψηλή δόσηΟμάδες ενώσεων Cistanche(0,81, 1,62, 3,24 g/kg). Η ΒΡΗ προκλήθηκε μέσωορχεκτομήακολουθούμενη απόενέσεις προπιονικής τεστοστερόνης(15 mg/kg) για 28 ημέρες. Η χορήγηση του φαρμάκου άρχισε την 29η ημέρα και συνεχίστηκε για 30 ημέρες.
1.12 Συλλογή δειγμάτων
Μετά την τελική θεραπεία, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν και συλλέχθηκε αίμα από την κοιλιακή αορτή. Οι προστάτες ανατέμνονταν, ζυγίστηκαν και οιδείκτης προστάτη (mg/g)υπολογίστηκε. Τα δείγματα αποθηκεύτηκαν στους -80 βαθμούς για ανάλυση.
1.13 ELISA για φλεγμονώδεις δείκτες ορού
Επίπεδα ορού τουCOX-2, PGE2, καιVEGFπροσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
1.14 Ιστολογική Ανάλυση (Χρώση H&E)
Οι προστατικοί ιστοί σταθεροποιήθηκαν, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν και χρωματίστηκαν μεαιματοξυλίνη και ηωσίνη (H&E). Παρατηρήθηκαν παθολογικές αλλαγές με μικροσκόπιο φωτός.
1.15 Western Blotting
Επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης τουAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, καιVEGFαναλύθηκαν απόWestern blot. Η ένταση της ζώνης ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώνταςImageJ, μεGAPDHως εσωτερικός έλεγχος.
1.16 Στατιστική Ανάλυση
Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώνταςSPSS 22.0. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ωςμέσος όρος ± SD. Μονόδρομος ANOVA καιΔοκιμή LSD-tχρησιμοποιήθηκαν για συγκρίσεις ομάδων, μεΡ < 0,05θεωρείται στατιστικά σημαντική.
