Περίληψη

ΣκοπόςΓια τη διερεύνηση του μηχανισμού των γλυκοσιδών φαινυλαιθανόλης Cistanche (CPhGs) στην έμφυτη λειτουργία του ανοσοποιητικού, την ανάπτυξη του όγκου και την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων σε γυμνά ποντίκια που φέρουν ανθεκτικό στα φάρμακα οστεοσάρκωμα.ΜέθοδοιΗ ανθεκτική στο φάρμακο κυτταρική γραμμή ανθρώπινου οστεοσαρκώματος MG-63 καθιερώθηκε με τη μέθοδο της βαθμιδωτής συγκέντρωσης και κατασκευάστηκε ένα γυμνό μοντέλο ποντικού ανθεκτικού στα φάρμακα οστεοσαρκώματος (36 ποντίκια συνολικά, 6 ανά ομάδα). Στην ομάδα του μοντέλου χορηγήθηκε φυσιολογικό ορό με καθετήρα. Η ομάδα μεθοτρεξάτης (MTX) έλαβε ενδοπεριτοναϊκή ένεση MTX (20 mg/kg) κάθε τρεις ημέρες. η ομάδα συνδυασμού έλαβε ενδοπεριτοναϊκή ένεση MTX κάθε τρεις ημέρες σε συνδυασμό με ημερήσιο καθετήρα CPhGs μέσης δόσης (250 mg/kg). Στις ομάδες CPhGs υψηλής, μεσαίας και χαμηλής δόσης χορηγήθηκε καθημερινή καθετήρας CPhGs σε υψηλές (500 mg/kg), μεσαίες (250 mg/kg) και χαμηλές (125 mg/kg) δόσεις, αντίστοιχα. Παρατηρήθηκαν αλλαγές στο μέγεθος του όγκου σε γυμνά ποντίκια, σχεδιάστηκαν καμπύλες του μέσου όγκου όγκου με την πάροδο του χρόνου και υπολογίστηκε ο ρυθμός αναστολής του όγκου. Τα επίπεδα ορού IL-2 και TNF- σε γυμνά ποντίκια ανιχνεύθηκαν με ELISA. Η απόπτωση των καρκινικών κυττάρων μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Το Western blot χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της έκφρασης πρωτεϊνών Bcl-2, Bax που σχετίζονται με την απόπτωση και της έκφρασης των p-AKT, p-mTOR, p-PI3K σε ιστούς όγκου.ΑποτελέσματαΣε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, ο όγκος και το βάρος του όγκου σε όλες τις ομάδες θεραπείας μειώθηκαν σημαντικά (P < 0,001). Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου και την ομάδα MTX, τα επίπεδα ορού των IL-2 και TNF- σε γυμνά ποντίκια όλων των ομάδων CPhGs και της ομάδας συνδυασμού ήταν σημαντικά αυξημένα (P <0,01). Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η έκφραση Bax σε όλες τις ομάδες θεραπείας ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω (P < 0,001) και η έκφραση Bcl-2 σε ομάδες CPhGs υψηλής και μεσαίας δόσης και η ομάδα συνδυασμού ρυθμίστηκε σημαντικά προς τα κάτω (P <0,001). Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου και την ομάδα MTX, το ποσοστό απόπτωσης όγκου σε γυμνά ποντίκια όλων των ομάδων CPhGs και της ομάδας συνδυασμού ήταν σημαντικά αυξημένο, ενώ τα επίπεδα των p-AKT, p-mTOR και p-PI3K μειώθηκαν σημαντικά (P <0,05).ΣύναψηΤα CPhGs μπορούν να βελτιώσουν σημαντικά την ανοσολογική λειτουργία σε γυμνά ποντίκια που φέρουν ανθεκτικό στα φάρμακα οστεοσάρκωμα και να προάγουν την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων ρυθμίζοντας το μονοπάτι σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR και την έκφραση των αποπτωτικών πρωτεϊνών Bax και Bcl-2, αναστέλλοντας έτσι αποτελεσματικά την ανάπτυξη του όγκου.

Λέξεις κλειδιάοστεοσάρκωμα;Γλυκοζίτες φαινυλαιθανόλης Cistanche; MG-63; κύτταρα όγκου? απόπτωση; μηχανισμός δράσης? Διαδρομή σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR

 

ΟΦΕΛΗ CISTANCHE TUBULOSA

 

 

 

 

 

 

Οστεοσάρκωμα (OS)είναι ένας εξαιρετικά κακοήθης πρωτοπαθής όγκος των οστών, με την υψηλότερη συχνότητα μεταξύ των πρωτοπαθών κακοήθων όγκων των οστών των εφήβων, που συνοδεύεται από εξαιρετικά υψηλά ποσοστά αναπηρίας και θνησιμότητας. Επί του παρόντος, η υψηλή δόση μεθοτρεξάτης (MTX) μόνη της ή σε συνδυασμό με άλλους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες μετά από χειρουργική επέμβαση μπορεί να βελτιώσει αποτελεσματικά το ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με OS [1]. Ωστόσο, ορισμένοι ασθενείς με OS δεν είναι ευαίσθητοι στη χημειοθεραπεία λόγω αντοχής στα φάρμακα, γεγονός που οδηγεί σε εξέλιξη του όγκου. Επιπλέον, τα υποσύνολα Τ λεμφοκυττάρων σε ασθενείς με όγκο βρίσκονται συχνά σε κατάσταση ανοσολογικής ανισορροπίας και η χημειοθεραπεία μπορεί να επιδεινώσει περαιτέρω τις ανοσολογικές διαταραχές και την ανοσοκαταστολή βραχυπρόθεσμα [2]. Μελέτες έχουν δείξει ότι η ενίσχυση των ανθρώπινων ανοσολογικών αποκρίσεων μπορεί να βελτιώσει την πρόγνωση των ασθενών με OS από την άποψη των βιολογικών χαρακτηριστικών του OS [3]. Η αντίσταση στη χημειοθεραπεία είναι ένα από τα πιο κοινά και δυσεπίλυτα προβλήματα που οδηγεί σε αποτυχία της θεραπείας σε ασθενείς με OS και η ανοσοκαταστολή είναι επίσης ένας από τους βασικούς παράγοντες που προκαλούν ταχεία εξέλιξη του όγκου [4].

Η οδός σηματοδότησης 3-κινάσης φωσφατιδυλινοσιτόλης (PI3K)/πρωτεϊνική κινάση Β (AKT)/στόχος θηλαστικών της ραπαμυκίνης (mTOR) θεωρείται μία από τις πιο σημαντικές ογκογόνες οδούς στους ανθρώπινους καρκίνους. Αυτό το μονοπάτι συχνά υπερενεργοποιείται στο OS, το οποίο μπορεί να οδηγήσει τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή, τη μετάσταση και την αγγειογένεση των κυττάρων του OS, να αναστέλλει την απόπτωση και περαιτέρω να οδηγήσει σε αντίσταση του OS στα χημειοθεραπευτικά φάρμακα [5]. Μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι οι γλυκοζίτες φαινυλαιθανόλης (CPhGs), το κύριο συστατικό τουCistanche deserticola, μπορεί να ενισχύσει τη λειτουργία του ανοσοποιητικού και να αναστείλει την ανάπτυξη του όγκου σε ποντίκια που φέρουν ηπατώματα [6].In vitroμελέτες έχουν δείξει ότι τα CPhG μπορούν να αναστείλουν σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του ηπατώματος HepG2 και να προκαλέσουν την απόπτωση τους [7]. Η πρόκληση κυτταρικής απόπτωσης είναι ο κύριος μηχανισμός των τρεχόντων αντικαρκινικών φαρμάκων και επίσης ένα ερευνητικό hotspot στη θεραπεία του OS τα τελευταία χρόνια. Τα γυμνά ποντίκια μοιράζονται πολλές ομοιότητες με τους ανθρώπους στην ανατομία, τη φυσιολογία και τη βιολογία, και έχουν υψηλή αποδοχή για μεταμοσχευμένους όγκους, επιτρέποντας την ξενομεταμόσχευση ορισμένων ετερόλογων καρκινικών κυττάρων, χρησιμοποιούνται έτσι ευρέως στη δημιουργία μοντέλων όγκων [8-9]. Αυτή η μελέτη σκοπεύει να κατασκευάσει ένα γυμνό μοντέλο ποντικού ανθεκτικού στα φάρμακα οστεοσαρκώματος, να παρατηρήσει τις επιδράσεις των CPhGs στην ανοσοποιητική λειτουργία και την οδό PI3K/AKT/mTOR σε αυτό το μοντέλο, καθώς και την ανασταλτική του δράση στην ανάπτυξη του όγκου και τον φαρμακολογικό μηχανισμό, ώστε να παρέχει αναφορές για διεύρυνση των ιδεών κλινικής θεραπείας και βασικής έρευνας του OS.

 

CISTANCHE TUBULOSA ΟΦΕΛΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΟΣΤΩΝ

 

ΠΩΛΕΙΤΑΙ CISTANCHE

Υποστήριξη της Wecistanche-Ο μεγαλύτερος εξαγωγέας κιστάνι στην Κίνα:
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Τηλ:+86 15292862950

 

 

1 Υλικά και Μέθοδοι

1.1 Πειραματόζωα

Τριάντα έξι γυμνά ποντίκια βαθμού SPF (ηλικίας 6–8 εβδομάδων, βάρους 19–25 g) αγοράστηκαν από την Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd., με πιστοποιητικό ζώων No.202367524. Αυτό το πείραμα εγκρίθηκε από την Εργαστηριακή Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του Πανεπιστημίου Northwest Minzu (Xbmu-3m-202306).

1.2 Κυτταρική γραμμή

MG-63 κελιά αγοράστηκαν από την Cell Bank της Κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών στη Σαγκάη.

1.3 Φάρμακα και Αντιδραστήρια

Ορός εμβρύου βοοειδούς, μέσο DMEM υψηλής γλυκόζης, 0,25% Trypsin-EDTA, MTX (Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd., αριθμοί παρτίδας PWL001, MA0212, MA0233-1, MB1156-1, αντίστοιχα). CPhGs (Shaanxi Senyuan Biotechnology Co., Ltd., αριθμός παρτίδας SY20231212605); αντίσωμα anti-p-mTOR, αντίσωμα αντι-p-PI3K, αντίσωμα αντι-p-AKT, αντίσωμα αντι-Bcl-2, αντίσωμα αντι-Bax (Hangzhou Huaan Biotechnology Co., Ltd., αριθμοί παρτίδας HA600094, HA721673, ET1607-73, ET1607-73, 5303, αντίστοιχα). Κιτ ELISA για TNF- και IL-2 (Hangzhou Lianke Biotechnology Co., Ltd., αριθμοί παρτίδας EK282, EK202, αντίστοιχα).

1.4 Όργανα

CT14RD επιτραπέζιος φυγόκεντρος ψύξης υψηλής ταχύτητας (Shanghai Tianmei Biochemical Instrument Co., Ltd.); SW-CJ-1FD καθαρός πάγκος (Suzhou Purification Co., Ltd.); CO-5AC θερμοκοιτίδα κυττάρων (Sanyo, Ιαπωνία); Αντεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού AE31 (Xiamen Motic Industrial Group Co., Ltd.); RT-6100 συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (Shenzhen Rayto Life Sciences Co., Ltd.); Σύστημα ηλεκτροφόρησης γέλης PowerPoc, αναλυτής απεικόνισης γέλης ChemiDoc™ (Bio-Rad, ΗΠΑ).

 

1.5 Πειραματικές Μέθοδοι

1.5.1 Δημιουργία κυτταρικής σειράς ανθεκτικής στο φάρμακο ανθρώπινου οστεοσαρκώματος MG-63 (MG-63/MTX)

MG-63 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε λογαριθμική φάση ανάπτυξης με 80% κυτταρική συρροή. Προστέθηκε προπαρασκευασμένο μέσο κυτταροκαλλιέργειας που περιείχε 100 ng/mL ΜΤΧ και το μέσο άλλαξε μετά από 48 ώρες. Όταν τα κύτταρα έφτασαν ξανά σε συρροή 80%, προστέθηκε η ίδια συγκέντρωση μέσου που περιέχει ΜΤΧ. Τα παραπάνω βήματα επαναλήφθηκαν για να μπορέσουν τα κύτταρα οστεοσαρκώματος MG-63 να αναπτυχθούν σταθερά σε μέσο που περιέχει 100 ng/mL MTX. Στη συνέχεια η συγκέντρωση της ΜΤΧ στο μέσο αυξήθηκε σταδιακά με την ίδια μέθοδο, χρησιμοποιώντας διαδοχικά 200 ng/mL, 500 ng/mL, 1000 ng/mL, 2000 ng/mL, 5000 ng/mL και 10000 ng/mL. Μετά από 5 μήνες καλλιέργειας, η ανθεκτική στο οστεοσάρκωμα κυτταρική σειρά (MG-63/MTX) σταθερά αναπτυσσόμενη σε 10000 ng/mL ΜΤΧ επιλέχθηκε για επόμενα πειράματα.

 

 

1.5.2 Καθιέρωση μοντέλου γυμνού ποντικού που φέρει ανθεκτικό στα φάρμακα οστεοσάρκωμα

Το ζωικό μοντέλο οστεοσαρκώματος καθιερώθηκε με αναφορά στη βιβλιογραφία [10]. Κύτταρα MG-63/MTX παρασκευάστηκαν σε ένα κυτταρικό εναιώρημα 4×106/100 μL και 100 μL εγχύθηκαν υποδορίως στη μασχάλη γυμνών ποντικών για να παρατηρηθεί ο σχηματισμός όγκου.

1.5.3 Ομαδοποίηση και παρέμβαση ζώων

Τα γυμνά ποντίκια που έφεραν όγκο χωρίστηκαν τυχαία σε ομάδα μοντέλου, ομάδα MTX, ομάδα MTX σε συνδυασμό με CPhGs (MTX-CPhGs), ομάδα υψηλής δόσης CPhGs (CPhGs-H), ομάδα μεσαίας δόσης CphGs (CPhGs-M) και ομάδα χαμηλής δόσης CphGs, ομάδα CphGL σε κάθε ομάδα. Το Gavage ξεκίνησε την 6η ημέρα μετά το μόντελινγκ. Τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλου έλαβαν 10 μL/g φυσιολογικού ορού ημερησίως με καθετήρα. η ομάδα MTX έλαβε ενδοπεριτοναϊκή ένεση 20 mg/kg MTX κάθε τρεις ημέρες. η ομάδα MTX-CPhGs λάμβανε καθετηριασμό 250 mg/kg CPhGs σε συνδυασμό με ενδοπεριτοναϊκή ένεση 20 mg/kg MTX κάθε τρεις ημέρες. Η ομάδα CPhGs-H λάμβανε καθημερινά καθετηριασμό 500 mg/kg CPhGs. Η ομάδα CPhGs-M έλαβε καθημερινά καθετήρα 250 mg/kg CPhGs. η ομάδα CPhGs-L έλαβε καθημερινά καθετήρα 125 mg/kg CPhGs. Όλα τα γυμνά ποντίκια υποβλήθηκαν σε συνεχή αγωγή για 15 ημέρες.

1.5.4 Μέτρηση του όγκου και του βάρους του όγκου σε γυμνά ποντίκια που φέρουν ανθεκτικό στα φάρμακα οστεοσάρκωμα

Ο όγκος του όγκου γυμνών ποντικών σε κάθε ομάδα παρατηρήθηκε και καταγράφηκε και οι καμπύλες ανάπτυξης όγκου σχεδιάστηκαν. Είκοσι τέσσερις ώρες μετά την τελευταία χορήγηση, τα ποντίκια θυσιάστηκαν με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας, οι όγκοι ανατέμθηκαν και ζυγίστηκαν και υπολογίστηκε ο ρυθμός αναστολής του όγκου. Οι τύποι είναι οι εξής: Όγκος όγκου=1/2 (μακριά διάμετρος όγκου × μικρή διάμετρος όγκου²) Ποσοστό αναστολής όγκου=[(μέσο βάρος όγκου ομάδας μοντέλου − μέσο βάρος όγκου ομάδας θεραπειών)/μέσο βάρος όγκου ομάδας μοντέλου] × 100%

1.5.5 Ανίχνευση επιπέδων IL-2 και TNF- ορού με ELISA

Ο ορός εξήχθη από γυμνά ποντίκια σε κάθε ομάδα και τα επίπεδα ορού IL-2 και TNF- ανιχνεύθηκαν με ELISA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

1.5.6 Ανίχνευση απόπτωσης καρκινικών κυττάρων με κυτταρομετρία ροής

Οι ιστοί όγκου από κάθε ομάδα τεμαχίστηκαν, αλέστηκαν, διηθήθηκαν, φυγοκεντρήθηκαν και τα ερυθρά αιμοσφαίρια λύθηκαν για να παρασκευαστούν εναιωρήματα μονοκυττάρου σε σωλήνες φυγοκέντρησης. Η συγκέντρωση των κυττάρων ρυθμίστηκε σε 1×106/mL, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 100 μL Ρυθμιστικό Διάλυμα Δέσμευσης, προστέθηκαν με 5 μL AV-FITC και PI, επωάστηκαν στο σκοτάδι για 15 λεπτά, φυγοκεντρήθηκαν, επαναιωρήθηκαν και προστέθηκαν με 400 μL ρυθμιστικό διάλυμα σύνδεσης. Μετά την ανάμιξη, τα δείγματα ανιχνεύθηκαν με κυτταρομετρία ροής.

1.5.7 Ανίχνευση p-AKT, p-mTOR, p-PI3K και αποπτωτικών πρωτεϊνών Bcl-2, Bax με στύπωμα Western

Οι ιστοί όγκου από κάθε ομάδα τεμαχίστηκαν και τοποθετήθηκαν σε ομογενοποιητή, λύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα λύσης πρωτεΐνης και ομογενοποιήθηκαν. Μετά τη λύση, το υπερκείμενο συλλέχθηκε με φυγοκέντρηση στα 12000 r/min. Παρασκευάστηκε ηλεκτροφορητική γέλη για διαχωρισμό πρωτεϊνών, ακολουθούμενη από μεταφορά μεμβράνης και αποκλεισμό. Οι μεμβράνες επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα στους 4 βαθμούς όλη τη νύχτα, πλύθηκαν και επωάστηκαν με δευτερεύοντα αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Μετά από πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα TBST σε αναδευτήρα, προστέθηκε διάλυμα φωταύγειας ECL για ανάπτυξη. Μετά τη στερέωση, πραγματοποιήθηκε ανάλυση εικόνας γέλης και οι τιμές γκρι ζώνης πρωτεΐνης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Image J.

1.6 Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με χρήση λογισμικού GraphPad Prism 7 και SPSS 25.0. Τα δεδομένα μετρήσεων εκφράστηκαν ως μέση ± τυπική απόκλιση (x ± s). Χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ANOVA για σύγκριση μεταξύ ομάδων με κανονική κατανομή και ομοιογενή διακύμανση και η μη παραμετρική δοκιμή χρησιμοποιήθηκε για δεδομένα μη κανονικής κατανομής. Το Paired t-test χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση του ρυθμού αναστολής του όγκου. P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.

 

 

Εικόνα 1. Μορφολογική σύγκριση κυττάρων MG-63 και MG-63/MTX (×200)

2 Αποτελέσματα

2.1 Οστεοσάρκωμα MG-63 ανθεκτική στα φάρμακα κυτταρική σειρά (MG-63/MTX)

Τα αρχικά κύτταρα MG-63 αναπτύχθηκαν σταθερά με μεσαίο μέγεθος, ως επί το πλείστον σε σχήμα ατράκτου, περιστασιακά ακανόνιστα, με μεγάλους πυρήνες και διαυγείς πυρήνες (Εικόνα 1-Α). Τα κύτταρα MG-63/MTX ήταν επιμήκη, ατρακτοειδή ή ακανόνιστα, με εμφανή ψευδοπόδια (Εικόνα 1-Β).

2.2 Σύγκριση ανάπτυξης όγκου σε ποντικούς κάθε ομάδας

Από την 6η ημέρα του καθετήρα, ο όγκος του όγκου στις ομάδες θεραπείας ήταν σημαντικά μικρότερος από εκείνον στην ομάδα μοντέλου. Την ημέρα 21 του καθετήρα, συγκρίθηκαν όγκοι από 3 γυμνά ποντίκια σε κάθε ομάδα (Εικόνα 2-Α). Ο όγκος του όγκου σε όλες τις ομάδες θεραπείας ήταν μικρότερος από εκείνον στην ομάδα μοντέλου (P < 0,001). Ο όγκος του όγκου στις ομάδες CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L και MTX-CPhGs ήταν μικρότερος από εκείνον στην ομάδα MTX (P <0,001). Μεταξύ των ομάδων CPhGs, ο όγκος του όγκου μειώθηκε σταδιακά με την αύξηση της συγκέντρωσης του φαρμάκου και η διαφορά από την ομάδα μοντέλου έγινε πιο σημαντική (Εικόνα 2-Β). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα CPhGs μπορούσαν να αναστείλουν σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου σε ανθεκτικά σε φάρμακα ποντίκια που φέρουν όγκο και το ανασταλτικό αποτέλεσμα συσχετίστηκε θετικά με τη συγκέντρωση CPhGs.

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, το μέσο βάρος όγκου στις ομάδες MTX, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L και MTX-CPhGs ήταν σημαντικά μειωμένο (P <0,001). Σε σύγκριση με την ομάδα MTX, ο ρυθμός αναστολής του όγκου στις ομάδες CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L και MTX-CPhGs ήταν σημαντικά αυξημένος και στις ομάδες CPhGs-H, CPhGs-M και CPhGs-L, ο ρυθμός αναστολής του όγκου εξαρτώμενη από το φάρμακο αυξήθηκε με αυξανόμενη δοσοεξαρτώμενη συγκέντρωση από τον άνθρωπο.

2.3 Επιδράσεις των CPhGs στα επίπεδα IL-2 και TNF- ορού σε γυμνά ποντίκια που φέρουν όγκους ανθεκτικά στα φάρμακα

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, το επίπεδο TNF- ορού στην ομάδα MTX ήταν σημαντικά αυξημένο (P <0,05) και τα επίπεδα TNF- και IL-2 ορού στην ομάδα MTX-CPhGs ήταν σημαντικά αυξημένα (P <0,01). Επιπλέον, τα επίπεδα TNF- ορού στις ομάδες CPhGs-H, CPhGs-M και CPhGs-L ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα της ομάδας μοντέλου (P <0,001), τα επίπεδα IL-2 ορού στην ομάδα CPhGs-M αυξήθηκαν (P <0,01) και τα επίπεδα ορού IL-2 στην ομάδα του μοντέλου αυξήθηκαν σημαντικά (P <0,01) < 0,001). Σε σύγκριση με την ομάδα MTX, τα επίπεδα TNF- και IL-2 ορού στις ομάδες CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L και MTX-CPhGs ήταν σημαντικά αυξημένα (P <0,001) (Πίνακας 2). Αυτό υποδηλώνει ότι τα CPhG μπορεί να βελτιώσουν την έμφυτη λειτουργία του ανοσοποιητικού σε ποντίκια που φέρουν όγκο OS ανθεκτικά σε φάρμακα ρυθμίζοντας την έκφραση του TNF- και του IL-2.

 

Εικόνα 2. Σύγκριση όγκων όγκου σε γυμνά ποντίκια με όγκους σε κάθε ομάδα μετά την παρέμβαση (x ± s, n=3, mm3)

Σημείωση: Ομάδα μοντέλων. Ομάδα MTX; Ομάδα CPhGs-L; χαμηλή δόση Cistanche deserticola φαινυλαιθανόλη ομάδα ολικών γλυκοσιδών? Ομάδα CPhGs-M; μεσαία δόση Cistanche deserticola φαινυλαιθανόλη ομάδα ολικών γλυκοσιδών. CphGs-H ομάδα; ομάδα ολικών γλυκοσιδών φαινυλαιθανόλης υψηλής δόσης Cistanche deserticola. Ομάδα MTX-CPhGs. σε σύγκριση με την ομάδα Model, ***P<0.001; compared with the MTX group, ###P<0.001

Πίνακας 1. Επίδραση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών Cistanche στο βάρος του όγκου σε γυμνά ποντίκια που φέρουν όγκο (n=3)

Ομάδα	Μέσο βάρος όγκου (g)	Ποσοστό αναστολής (%)
Μοντέλο	0.79 ± 0.04	-
MTX	0.49 ± 0.03	35.73 ± 4.61
CPhGs–L	0.33 ± 0.01	58.55 ± 4.02
CPhGs–M	0.31 ± 0.02	60.50 ± 0.98
CPhGs–H	0.28 ± 0.01	64.58 ± 1.77
MTX–CPhGs	0.18 ± 0.01	75.77 ± 1.78

*Σημείωση: Η ομάδα "Μοντέλο" δεν έχει ποσοστό αναστολής που αναφέρεται στον πίνακα προέλευσης (εμφανίζεται ως παύλα em). Αν θέλετε, μπορώ επίσης να προσθέσω τους δείκτες σημασίας (π.χ., *, ##, κ.λπ.) ως υποσημειώσεις ακριβώς όπως στο σχήμα.

2.4 Επιδράσεις των CPhGs στην απόπτωση των καρκινικών κυττάρων σε γυμνά ποντίκια ανθεκτικά στα φάρμακα που φέρουν όγκο

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, ο ρυθμός απόπτωσης όγκου στις ομάδες MTX και CPhGs-L ήταν σημαντικά αυξημένος (P <0,05) και ότι στις ομάδες CPhGs-H, CPhGs-M και MTX-CPhGs αυξήθηκε σημαντικά (P <0,001). Σε σύγκριση με την ομάδα ΜΤΧ, ο ρυθμός απόπτωσης όγκου στις ομάδες CPhGs-H, CPhGs-M και MTX-CPhGs ήταν αυξημένος (Ρ < 0,001) (Εικόνα 3, Πίνακας 3). Τα παραπάνω αποτελέσματα δείχνουν ότι τα CPhGs μπορούν να προάγουν την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων σε γυμνά ποντίκια που φέρουν όγκο ανθεκτικά στα φάρμακα.

2.5 Επιδράσεις των CPhGs στην έκφραση των p-AKT, p-mTOR και p-PI3K σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών ανθεκτικών στα φάρμακα που φέρουν όγκους

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η έκφραση p-AKT σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών ανθεκτικών στο φάρμακο στην ομάδα ΜΤΧ μειώθηκε σημαντικά (P <0,001). Τα επίπεδα έκφρασης των p-AKT, p-mTOR και p-PI3K σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών σε ομάδες MTX-CPhGs, CPhGs-H και CPhGs-M μειώθηκαν σημαντικά (P < 0,001), η έκφραση p-AKT στην ομάδα CPhGs-L μειώθηκε (P < 0,01 p<3mK και η έκφραση p-PP ήταν πιο σημαντική και η έκφραση p-PP ήταν πιο σημαντική. 0,001). Σε σύγκριση με την ομάδα MTX, τα επίπεδα έκφρασης των p-AKT, p-mTOR και p-PI3K σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών στις ομάδες MTX-CPhGs και CPhGs-H ήταν επίσης σημαντικά μειωμένα (P < 0,001), η έκφραση p-AKT στην ομάδα CPhGs-M μειώθηκε ελαφρώς και η έκφραση p-3Km ήταν ελαφρώς μειωμένη (P<30Km περισσότερο). (Ρ < 0,001), η έκφραση p-AKT στην ομάδα CPhGs-L μειώθηκε (Ρ < 0,01) και η έκφραση p-mTOR και p-PI3K μειώθηκε πιο σημαντικά (Ρ < 0,001) (Εικόνα 4-Α έως 4-Δ).

 

Πίνακας 2. Επίπεδα έκφρασης TNF- και IL-2 ορού σε κάθε ομάδα (n=3)

Ομάδα	TNF- (pg/mL)	IL-2 (pg/mL)
Μοντέλο	79.90 ± 3.60	28.36 ± 2.35
MTX	93.71 ± 2.86*	28.87 ± 1.60
MTX–CPhGs	118.00 ± 3.78***###	40.92 ± 1.54***###
CPhGs–H	122.76 ± 2.97***###	45.03 ± 4.95***###
CPhGs–M	117.52 ± 3.60***###	41.44 ± 3.87***###
CPhGs–L	124.19 ± 8.37***###	44.77 ± 2.31***###

 

Σημειώσεις (όπως φαίνεται στο σχήμα):Ομάδα μοντέλων μοντέλου =. MTX=ομάδα μεθοτρεξάτης. CPhGs–L/M/H=ομάδα γλυκοσιδών φαινυλαιθανοειδών Cistanche χαμηλής/μέτριας/υψηλής δόσης. Ομάδα συνδυασμού MTX–CPhGs =. Σημασία έναντι μοντέλου: * Π<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

2.6 Επιδράσεις των CPhGs στην έκφραση του Bcl-2 και του Bax σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών ανθεκτικών στα φάρμακα που φέρουν όγκο

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η έκφραση Bax σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών ανθεκτικών στα φάρμακα σε όλες τις ομάδες θεραπείας αυξήθηκε σημαντικά (P <0,001), η έκφραση Bcl-2 στην ομάδα MTX αυξήθηκε (P <0,05) και η έκφραση Bcl-2 σε MTX-CPhGs, CPhGs-H και CPhGs-H και CPhGs-M ομάδες ήταν σημαντικά μειωμένη <0,0P. Σε σύγκριση με την ομάδα MTX, η έκφραση Bcl-2 στους ιστούς όγκου των ομάδων CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L και MTX-CPhGs ήταν σημαντικά μειωμένη (P < 0,001) και η έκφραση Bax στις ομάδες CPhGs-H και CPhGs-M ήταν σημαντικά αυξημένη (P <4E, Σχήμα 01,01) 4-F). Υποδεικνύει περαιτέρω ότι τα CPhG μπορούν να προάγουν την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων σε γυμνά ποντίκια που φέρουν όγκο ανθεκτικά σε φάρμακα ρυθμίζοντας την έκφραση των Bcl-2 και Bax.

 

 

3 Συζήτηση

Η αντίσταση στη χημειοθεραπεία και η ανοσοκαταστολή σε ασθενείς με OS αποτελούν σημεία συμφόρησης στην κλινική θεραπεία της OS. Επί του παρόντος, ο κύριος μηχανισμός των αντικαρκινικών φαρμάκων είναι η προώθηση της απόπτωσης των καρκινικών κυττάρων, η οποία αντανακλά άμεσα την αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας. Από την άλλη πλευρά, η ανοσία του σώματος είναι μια ισχυρή εγγύηση για τους ασθενείς να ανεχθούν τα χημειοθεραπευτικά φάρμακα. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να μελετηθεί πώς να προωθηθεί αποτελεσματικά η απόπτωση των ανθεκτικών στα φάρμακα OS κυττάρων και να μειωθεί η προκαλούμενη από χημειοθεραπεία ανοσοανεπάρκεια.

Εικόνα 3. Το ποσοστό απόπτωσης κυττάρων ιστού όγκου σε κάθε ομάδα ποντικών (n=3, %)

Σημείωση: Α. Ομάδα μοντέλων. Β. Ομάδα μεθοτρεξάτης (MTX). Γ. Μεθοτρεξάτη σε συνδυασμό με ομάδα ολικών γλυκοσιδών φαινυλαιθανόλης Cistanche deserticola (MTX-CPhGs). Δ. Ομάδα ολικών γλυκοσιδών φαινυλαιθανόλης (CPhGs-H) υψηλής δόσης Cistanche deserticola. Ε. Μέση δόση Cistanche deserticola ομάδα ολικών γλυκοσιδών φαινυλαιθανόλης (CPhGs-M). ΣΤ. Ομάδα ολικών γλυκοσιδών φαινυλαιθανόλης (CPhGs-L) χαμηλής δόσης Cistanche deserticola.

Πίνακας 3. Ποσοστό απόπτωσης κυττάρων ιστού όγκου σε κάθε ομάδα (n=3)

Ομάδα	Ποσοστό απόπτωσης (%)
Μοντέλο	14.47 ± 1.10
MTX	19.77 ± 1.32*
MTX–CPhGs	29.21 ± 0.77***###
CPhGs–H	31.66 ± 1.93***###
CPhGs–M	30.13 ± 2.16***###
CPhGs–L	22.49 ± 3.02**

Σημειώσεις (όπως φαίνεται στο σχήμα):Ομάδα μοντέλων μοντέλου =. MTX=ομάδα μεθοτρεξάτης. CPhGs–L/M/H=ομάδα γλυκοσιδών φαινυλαιθανοειδών Cistanche χαμηλής/μέτριας/υψηλής δόσης. Ομάδα συνδυασμού MTX–CPhGs =. Σημασία έναντι μοντέλου: * Π<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

 

 

Cistanche deserticolaέχει φαρμακολογικές επιδράσεις για τη θέρμανση των νεφρών και την αναπλήρωση της ουσίας, την υγρασία των εντέρων, την αντιοξειδωτική δράση και τη βελτίωση της ανοσίας. Οι Zhang et al. [11] ανέφερε το 1988 ότι το υδατικό εκχύλισμα τουCistanche deserticolaθα μπορούσε να βελτιώσει τη λειτουργία του ανοσοποιητικού και να διεγείρει την ανάπτυξη ανοσοποιητικών οργάνων όπως ο θύμος αδένας σε ποντίκια. Μεταγενέστεροςin vivoμελέτες περαιτέρω διαπίστωσαν ότιCistancheΟι πολυσακχαρίτες είχαν δράση κατά του καρκίνου του πνεύμονα και κατά του σαρκώματος [12]. Μελέτες έχουν δείξει ότι τα CPhG, το κύριο συστατικό τουCistanche deserticola, έχει φαρμακολογικές επιδράσεις όπως αντιοξείδωση, αντιγήρανση, νευροπροστασία, ενίσχυση του ανοσοποιητικού, ηπατική προστασία και θεραπεία σπερματογόνων διαταραχών [13], και επίσης ασκεί αντικαρκινικά και ανοσοενισχυτικά αποτελέσματα σε διάφορους κακοήθεις όγκους συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του ήπατος, του πνεύμονα, του μαστού και του καρκίνου των ωοθηκών [14]. Η προηγούμενη μελέτη μας βρήκε ότιCistanche deserticolaθα μπορούσε να προάγει την απόπτωση των ανθεκτικών στα φάρμακα κυττάρων OSin vitroμε τη μείωση της έκφρασης της MRP1 και των μεταλλαγμένων πρωτεϊνών P53 [15]. Αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι ο όγκος και το βάρος του όγκου στις ομάδες θεραπείας ήταν μικρότεροι από εκείνους στην ομάδα μοντέλου και ο όγκος του όγκου σε διαφορετικές ομάδες συγκέντρωσης CPhGs και ομάδα MTX-CPhGs ήταν επίσης μικρότερος από εκείνον στην ομάδα MTX, με αυξημένο ρυθμό αναστολής όγκου. Αυτό δείχνει ότι τα CPhGs μπορούν να αναστείλουν σημαντικά την ανάπτυξη όγκου σε ανθεκτικά σε φάρμακα ποντίκια που φέρουν όγκο OS και η ανασταλτική δράση συσχετίζεται θετικά με τη συγκέντρωση CPhGs, η οποία είναι βασικά σύμφωνη με τη μελέτη των Hou et al. [16] σχετικά με την ανασταλτική δράση των CPhGs σε υποδόριους μεταμοσχευμένους όγκους σε ποντικούς που φέρουν ηπατώματα Η22.

Η λειτουργία του ανοσοποιητικού συστήματος σχετίζεται στενά με την εμφάνιση και την ανάπτυξη του όγκου. Το IL-2 είναι ένας τύπος κυτταρικού αυξητικού παράγοντα στο ανοσοποιητικό σύστημα, ο οποίος μπορεί να βελτιώσει την ανοσοποιητική λειτουργία του σώματος προάγοντας τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των Τ κυττάρων και να παράγει ανοσοκύτταρα με αντικαρκινική δραστηριότητα [17]. Ο TNF- ασκεί αντικαρκινικά αποτελέσματα δεσμεύοντας σε υποδοχείς για να επάγει την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων, να ενισχύσει την ανοσοποιητική λειτουργία του ξενιστή, να δρα στα ενδοθηλιακά κύτταρα των αγγείων του όγκου, να αυξήσει την αγγειακή διαπερατότητα, να προκαλέσει προγραμματισμένο θάνατο και στη συνέχεια να προκαλέσει αιμορραγία και νέκρωση του όγκου [18]. Η ανάλυση της έκφρασης ορού IL-2 και TNF- σε ποντικούς κάθε ομάδας έδειξε ότι τα επίπεδα έκφρασης του TNF- και του IL-2 στον ορό σε ποντικούς-μοντέλους που φέρουν όγκο διαφορετικών ομάδων συγκέντρωσης CPhGs και ομάδας MTX-CPhGs ήταν σημαντικά αυξημένα. Αυτό υποδηλώνει ότι τα CPhG μπορεί να βελτιώσουν την ανοσολογική λειτουργία σε ανθεκτικά σε φάρμακα OS ποντίκια που φέρουν όγκους ρυθμίζοντας την έκφραση των TNF- και IL-2, αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των ανθεκτικών στα φάρμακα κυττάρων οστεοσαρκώματος και έτσι ασκούν αντικαρκινικά αποτελέσματα.

 

Εικόνα 4. Διάγραμμα αποτελεσμάτων ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2 και Bax σε ιστό όγκου γυμνών ποντικών (x ± s, n=3, mm3)

Σημείωση: Μοντέλο, ομάδα μοντέλων. MTX, ομάδα μεθοτρεξάτης; MTX-CPhGs, μεθοτρεξάτη σε συνδυασμό με ομάδα ολικών γλυκοσιδών φαινυλαιθανόλης Cistanche deserticola. CPhGs-L, ομάδα ολικών γλυκοσιδών χαμηλής δόσης Cistanche deserticola φαινυλαιθανόλης. CPhGs-M, ομάδα ολικών γλυκοσιδών μεσαίας δόσης Cistanche deserticola φαινυλαιθανόλης. CPhGs-H, ομάδα ολικών γλυκοσιδών υψηλής δόσης Cistanche deserticola φαινυλαιθανόλης. Α. Αποτελέσματα Western Blot πρωτεϊνών p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2 και Bax. Β. p-mTOR; C. p-PI3K; D. ρ-ΑΚΤ; Ε. Bcl-2; F. Bax; Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλων, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001; Σε σύγκριση με την ομάδα MTX, # P < 0,05, ## P < 0,01, ### P < 0,001.

 

Η φωσφορυλίωση AKT στο μονοπάτι σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR μπορεί άμεσα ή έμμεσα να ρυθμίσει μια σειρά παραγόντων που σχετίζονται με την απόπτωση, όπως η οικογένεια Bcl-2, ο συνδεδεμένος με Χ αναστολέας της πρωτεΐνης απόπτωσης (XIAP), το διπλό λεπτό 2 ποντικού (MDM-2) και η πρωτεΐνη X1 που σχετίζεται με το Bcl-2 (Bax) [9]. Η μη φυσιολογικά ενεργοποιημένη οδός σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR μπορεί να ρυθμίσει προς τα πάνω την έκφραση των μεταφορέων μεμβράνης ABCB1 και ABCC1, μειώνοντας έτσι την αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας και μεσολαβώντας την αντίσταση του OS στα χημειοθεραπευτικά φάρμακα [20]. Μια ποικιλία μονομερών παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής μπορεί να προάγει την απόπτωση των κυττάρων OS αναστέλλοντας την οδό σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR, όπως η προκυανιδίνη Β2, η κερκετίνη, η λουτεολίνη καιLactarius deliciosusπολυσακχαρίτες [21]. Αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι με την απλή δράση του MTX, η έκφραση της πρωτεΐνης p-AKT μειώθηκε σημαντικά, ενώ η έκφραση της πρωτεΐνης p-mTOR και p-PI3K δεν παρουσίασε σημαντική διαφορά, υποδεικνύοντας ότι η MTX έχει μικρή επίδραση στο μονοπάτι σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών ανθεκτικών σε φάρμακα που φέρουν όγκους. Ωστόσο, η έκφραση των πρωτεϊνών p-AKT, p-mTOR και p-PI3K σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικιών ανθεκτικών σε φάρμακα OS που φέρουν όγκο σε διαφορετικές ομάδες συγκέντρωσης CPhGs και ομάδα MTX-CPhGs ήταν χαμηλότερη από αυτή στην ομάδα μοντέλου και επίσης σημαντικά χαμηλότερη από αυτήν στην ομάδα MTX, αποκαλύπτοντας ότι το CPhGmTORKs έχει σημαντική επίδραση στο μονοπάτι σε ανθεκτικά στα φάρμακα OS κύτταρα. Η ανίχνευση της απόπτωσης των καρκινικών κυττάρων με κυτταρομετρία ροής έδειξε ότι ο ρυθμός απόπτωσης όγκου σε κάθε ομάδα αυξήθηκε σημαντικά μετά την παρέμβαση φαρμάκου. Η ανίχνευση της έκφρασης πρωτεΐνης Bax και Bcl-2 έδειξε ότι η έκφραση Bax σε ιστούς όγκου γυμνών ποντικών ανθεκτικών σε φάρμακο OS που φέρουν όγκο σε διαφορετικές ομάδες συγκέντρωσης CPhGs και ομάδα MTX-CPhGs αυξήθηκε σημαντικά, ενώ η έκφραση Bcl-2 σε ιστούς όγκου ποντικών μοντέλου σε ομάδες MTX-CPhGs, CPhGhGs-HM ήταν σημαντικά μειωμένη. Αυτό υποδηλώνει ότι μια ορισμένη συγκέντρωση CPhG μπορεί να προάγει την απόπτωση των ανθεκτικών στα φάρμακα κυττάρων OSin vivoαναστέλλοντας την οδό σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR, ρυθμίζοντας προς τα κάτω την έκφραση Bcl-2 και ρυθμίζοντας προς τα πάνω την έκφραση Bax.

Συμπερασματικά, τα CPhGs μπορούν να προάγουν την απόπτωση των ανθεκτικών στα φάρμακα OS κυττάρων και να αναστείλουν την ανάπτυξη του όγκουin vivo, και ο μηχανισμός του μπορεί να επιτευχθεί με την αναστολή της οδού σηματοδότησης PI3K/AKT/mTOR και τη ρύθμιση της έκφρασης των Bcl-2 και Bax. Εν τω μεταξύ, τα CPhG μπορούν να βελτιώσουν τη λειτουργία του ανοσοποιητικού συστήματος σε ανθεκτικά σε φάρμακα ποντίκια που φέρουν όγκο OS, ρυθμίζοντας προς τα πάνω τα επίπεδα έκφρασης του TNF- και του IL-2, ασκώντας έτσι συνεργιστικά αντικαρκινικά αποτελέσματα. Ωστόσο, το δυναμικό κλινικής εφαρμογής του χρειάζεται ακόμη περαιτέρω εξερεύνηση και έρευνα.

 

Αναφορές

1 Zhang C, Hu J, Zhu K, et αϊ. Επιβίωση, επιπλοκές και λειτουργικά αποτελέσματα τσιμεντοειδών μεγαπροσθέσεων για υψηλού βαθμού οστεοσάρκωμα γύρω από το γόνατο[J]. Int Orthop, 2018, 42(4):927-938. DOI:10.1007/s00264-018-3770-9.2 Liu Q, Xu R, Xu X, et al. Χαρακτηριστικά και σημασία των υποομάδων Τ λεμφοκυττάρων στο περιφερικό αίμα ποντικών οστεοσαρκώματος [J]. Transl Cancer Res, 2022, 11(6):1503-1509. DOI:10.21037/tcr22-264.3 Wu W, Jing DD, Cao L, et al. Τρέχουσα κατάσταση και προοπτικές ανοσοθεραπείας για οστεοσάρκωμα [J]. Cancer Research on Prevention and Treatment, 2022, 49(7):721-726. DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2022.21.1281.4 Wang CZ, Liu YF, Zhang XQ, et al. Πρόοδος της έρευνας σχετικά με τον μηχανισμό της αστραγαλοσίδης Ⅳ που ρυθμίζει την αντινεοπλασματική δράση των ανοσοκυττάρων[J]. Κινεζικά Αρχεία Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής, 2024, 42(11):145-149. DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2024.11.029.5 Zhang J, Yu XH, Yan YG, et al. Σηματοδότηση PI3K/Akt στο οστεοσάρκωμα[J]. Clin Chim Acta, 2015, 444:182-192. DOI:10.1016/j.cca.2014.12.041.6 Hu Q, You SP, Liu T, et al. Μια έρευνα σχετικά με την αντικαρκινική επίδραση του ήπατος του cistanche[J]. Carcinogenesis, Teratogenesis & Mutagenesis, 2018, 30(3):194-199. DOI:10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.006.7 Qi XX, You SP, He ZX, et al. Επίδραση του γλυκοζίτη φαινυλαιθανόλης Cistache deserticola στον πολλαπλασιασμό και την απόπτωση των κυττάρων HepG2 in vitro[J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2021, 44(9):1041-1047. DOI:10.3639/j.issn.1009-5551.2021.09.012.8 Panaampon J, Sasamoto K, Kariya R, et al. Εγκατάσταση γυμνών ποντικών χωρίς κύτταρα ΝΚ και εφαρμογή τους για ξενομοσχεύματα ανθρώπινου όγκου[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2021, 22(4):1069-1074. DOI:10.31557/APJCP.2021.22.4.1069.9 Yu CB, Sun P, Zhang XW, et al. Η μελέτη ζωικού μοντέλου ξενομοσχεύματος καρκίνου του παγκρέατος σε γυμνά ποντίκια[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2012, 12(9):1648-1650. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.10 Xu XR, Wang N, Sun MM, et al. Διαφορετικές επιδράσεις σε ποντίκια μοντέλου οστεοσαρκώματος με βελονισμό σε ένα μόνο σημείο και συμβατότητα σημείων βελονισμού [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy, 2020, 35(5):2271-2276. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.11 Zhang HQ, Zhang AX, Du NS, et al. Επιδράσεις του Cistanche deserticola στην ανοσολογική λειτουργία ποντικών [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1988, (12):736-737, 710. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZZXJ198812019.htm.12 Zhang HQ, Xu AH, Li DD. Φαρμακολογικές επιδράσεις των πολυσακχαριτών Cistanche σε όγκους και ποντίκια που φέρουν όγκο [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1997, (S1):155-156, 294. https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=mg_qcPBBapnmsDqon66yc8-zI2VqwJgixywPNSnAl0qboPnZqB4FNuT0bsHSSvs0Dn72KJV2Cy_Zv -S-Wcbp5ClislhRETaTYT6KGBMKP3_EreGXg3-BH52Itk0rqWiNksajNxzld06uvdfRzCDj-utLfgfANyySxJMHM-g==&uniplatform-&uniplatform-&langu- Xue HY, Jiao CY, Yao J. Τρέχουσα κατάσταση των φαρμακολογικών επιδράσεων των γλυκοζιτών του Cistanches Herba[J]. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4):486-488. DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.04.026.14 Tang Y, Wu JQ. Αντικαρκινικές επιδράσεις των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών που στερούνται από το Cistanche deserticola[J]. Current Biotechnology, 2023, 13(3):399-405. DOI:10.19586/j.2095-2341.2023.0040.15 Xu W, Ding JX, Xie XW, et al. Επίδραση του Cistanche deserticola σε κύτταρα οστεοσαρκώματος ανθεκτικά στη χημειοθεραπεία και έκφραση των MRP1 και P53[J]. Journal of Li-shizhen Traditional Chinese Medicine, 2021, 32(3):551-554. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2021.03.11.16 Hou XT, Liu T, Su DQ. Αντικαρκινικό αποτέλεσμα γλυκοζιτών φαινυλαιθανόλης από Cistanche deserticola σε ποντίκια που φέρουν όγκο Η22[J]. Journal of Toxicology, 2021, 35(3):231-235, 240. DOI:10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010.17 Zhang XY, Wang D, Fu CX, et al. Έρευνα για τη θεραπεία όγκων με ιντερλευκίνη-2[J]. Oncology Progress, 2024, 22(6):581-585, 618. DOI:10.11877/j.issn.1672-1535.2024.22.06.01.18 Gao SY, Li D. Έρευνες προόδους στον παράγοντα νέκρωσης όγκου και στον καρκίνο[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2020, 36(9):1209-1213. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2020.09.006.19 Zhou H, Hai GF, Zhang T, et al. Πρόοδος της έρευνας της οδού PI3K/AKT/mTOR και των στοχευμένων αναστολέων της στη θεραπεία του καρκίνου[J]. China Pharmaceuticals, 2023, 32(5):127-135. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.05.030.20 Liu YJ, Cao YH, Kuang R. Πρόοδος έρευνας του μηχανισμού της αντοχής σε πολλαπλά φάρμακα του όγκου και της αναστροφής από την παραδοσιακή κινεζική ιατρική[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2024, 59(7):561-570. DOI:10.11669/cpj.2024.07.001.21 Yang HD, Li N, Xie XW, et al. Μονομερή κινεζικής ιατρικής στη θεραπεία του οστεοσαρκώματος με ρύθμιση της οδού σηματοδότησης PI3K/Akt/mTOR: μια ανασκόπηση[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2023, 29(3):254-262. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.20221527.