Πρόβλεψη μηχανισμού και επαλήθευση της Cistanche Deserticola στη θεραπεία της φλεγμονώδους νόσου του εντέρου ⅰ

ΠΕΡΙΛΗΨΗ

 

ΣΚΟΠΟΣΝα διερευνήσει τον μηχανισμό τουCistanche Deserticola στη θεραπεία της φλεγμονώδους νόσου του εντέρου(IBD).

ΜέθοδοςΟ ενεργόςσυστατικά του C. deserticolaυποβλήθηκαν σε εξέταση με βάση τις εκθέσεις TCMSP και λογοτεχνίας. Οι στόχοι των δραστικών συστατικών ελήφθησαν μέσω της πλατφόρμας πρόβλεψης στόχου της Ελβετίας. Στη συνέχεια, οι στόχοι της νόσου ελήφθησαν αναζητώντας τις βάσεις δεδομένων Genecards και OMIM. Το δίκτυο PPI και το δίκτυο "Drug-Compound-Disease-Target" κατασκευάστηκαν. Τα βασικά στοιχεία και οι βασικοί στόχοι εξετάστηκαν. Διεξήχθησαν αναλύσεις εμπλουτισμού GO και KEGG και διεξήχθη επαλήθευση μοριακής σύνδεσης για βασικούς στόχους και βασικά συστατικά. Το μοντέλο ποντικών IBD δημιουργήθηκε και χωρίστηκε στην ομάδα μοντέλου, θετική ομάδα ελέγχου (δεξαμεθαζόνη, 0. 4 mg/kg) καιΓ. DeserticolaExtract Group (1 0 0, 2 0 0, 4 0 0 mg/kg); Η ομάδα ελέγχου κενών ρυθμίστηκε, με 8 ποντίκια σε κάθε ομάδα. Κάθε ομάδα έλαβε σχετικό φάρμακο, μία φορά την ημέρα, για 7 διαδοχικές ημέρες. Ο δείκτης δραστηριότητας της ασθένειας (DAI) και το μήκος του παχέος εντέρου υπολογίστηκαν και παρατηρήθηκε η παθολογική μορφολογία του παχέος εντέρου των ποντικών. Τα επίπεδα των φλεγμονωδών παραγόντων [ιντερλευκίνη -6 (IL -6), IL1, IL {8}}, μυελοϋπεροξειδάση (MPO), παράγοντας νέκρωσης όγκου (TNF-) Αποτελέσματα Συνολικά ελήφθησαν 39 δραστικά συστατικά και 232 δυνητικοί στόχοι του C. deserticola στη θεραπεία της IBD. Η θεραπεία της IBD με C. deserticola μπορεί να σχετίζεται με βασικά συστατικά όπως η quercetin, η Suchilactone, η -σιθοστερόλη και η Cistanoside Η και οι βασικοί στόχοι όπως το TNF, το AKT1, το STAT3, το EGFR και το SRC. Η ανάλυση της οδού KEGG και του KEGG προέβλεψε ότι οι βιολογικές διεργασίες του C. deserticola στη θεραπεία της IBD σχετίζονταν κυρίως με τη φωσφορυλίωση της πρωτεΐνης και την αρνητική ρύθμιση της απόπτωσης, που περιλαμβάνουν κυρίως τις οδούς σηματοδότησης PI3K/AKT και EGFR τυροσίνης κινάσης. Τα αποτελέσματα της μοριακής σύνδεσης έδειξαν ότι η ενέργεια δέσμευσης μεταξύ των συστατικών του πυρήνα και του βασικού στόχου του C. deserticola ήταν μικρότερος από －4,7 kJ/mol. Τα αποτελέσματα των πειράματος των ζώων έδειξαν ότι μετά από παρέμβαση με εκχύλισμα C. deserticola, το σωματικό βάρος και το μήκος του κόλου ποντικών αυξήθηκαν σημαντικά (p ＜ 0 0 5 ή p ＜ 0. Η συμφόρηση και το οίδημα του βλεννογόνου του παχέος εντέρου μειώθηκαν σημαντικά και η παθολογική βαθμολογία του ιστού του παχέος εντέρου μειώθηκε σημαντικά (P ＜ 0,05 ή P ＜ 0,01). Τα επίπεδα της IL -6, της IL -1, του MPO και του TNF-, καθώς και των εκφράσεων πρωτεΐνης του PI3K, φωσφορυλιωμένου PI3K (P-PI3K), EGFR, TNF-, STAT3, φωσφορυλιωμένο Stat3 (P-STAT3). Το SRC στον ιστό του παχέος εντέρου μειώθηκε σημαντικά (P ＜ 0,05 ή P ＜ 0,01), ενώ το επίπεδο της IL -10 αυξήθηκε σημαντικά στην ομάδα μοντέλων (P ＜ 0,01). Συμπεράσματα C. Η Deserticola μπορεί να ανακουφίσει την IBD ρυθμίζοντας τη μονοπάτι σηματοδότησης SRC/EGFR/PI3K/AKT.

Λέξεις -κλειδιά Cistanche Deserticola; φλεγμονώδης νόσος του εντέρου; Φαρμακολογία δικτύου; μοριακή σύνδεση. πειραματική επαλήθευση

 

Νέο συμπλήρωμα προφορικής από βότανα Cistanche για δυσκοιλιότητα

---

Υποστηρικτική υπηρεσία του WECistanche-ο μεγαλύτερος εξαγωγέας Cistanche στην Κίνα:
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950
 

Η φλεγμονώδης νόσος του εντέρου (IBD) είναι ένας γενικός όρος για χρόνιες, μη ειδικές, φλεγμονώδεις ασθένειες της γαστρεντερικής οδού, συμπεριλαμβανομένων δύο υποτύπων: η νόσος του Crohn και η ελκώδη κολίτιδα [1]. Το IBD είναι μία από τις κοινές και δύσκολες ασθένειες του πεπτικού συστήματος στη χώρα μου και είναι επίσης το επίκεντρο, το ζεστό σημείο και η δυσκολία της βασικής έρευνας και της κλινικής διάγνωσης και θεραπείας των ασθενειών του πεπτικού συστήματος. Τα τελευταία 20 χρόνια, η επίπτωση της IBD στη χώρα μου έχει αυξηθεί κάθε χρόνο και αναμένεται να φτάσει τα 150, 000 μέχρι το 2025, κατατάσσεται πρώτα στην Ασία [2].

Πιστεύεται γενικά ότι η γενετική ευαισθησία, οι περιβαλλοντικοί παράγοντες, η ανοσολογική δυσλειτουργία, οι μεταβολές στην εντερική χλωρίδα και η εξασθενημένη λειτουργία του εντερικού βλεννογόνου είναι οι κύριες αιτίες της εμφάνισης και ανάπτυξης της IBD [3]. Η κλινική θεραπεία της IBD βασίζεται κυρίως στη φαρμακευτική θεραπεία, που περιλαμβάνει κυρίως αμινοσαλικυλικό οξύ, αντιβιοτικά, κορτικοστεροειδή και ανοσοκατασταλτικά [4]. Ωστόσο, τα παραπάνω φάρμακα είναι επιρρεπή σε πολλαπλές ανεπιθύμητες ενέργειες και οι ασθενείς θα αναπτύξουν ανοχή μετά από μακροπρόθεσμη χρήση και είναι επιρρεπείς σε υποτροπή μετά τη διακοπή του φαρμάκου [5].
Ως παραδοσιακός ανώτερος πόρος στη χώρα μου, η κινεζική ιατρική έχει τα πλεονεκτήματα της σαφούς αποτελεσματικότητας, του χαμηλού ποσοστού επανεμφάνισης και λίγων ανεπιθύμητων ενεργειών στη θεραπεία χρόνιων ασθενειών. Το Cistanche Deserticola, επίσης γνωστό ως "Ginseng of the Desert", προέρχεται από τα αποξηραμένα σαρκώδη μίσχους με φουσκωτά φύλλα του cistanche deserticola yc ma ή cistanche tubulosa
(Schenk) Wight, ένα φυτό της οικογένειας Orobanchaceae. Είναι ένας μοναδικός και επωφελής φαρμακευτικός πόρος στο Xinjiang. Περιέχει κυρίως δραστικά συστατικά όπως φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδες και τερπένια. Έχει τις επιδράσεις του τόνου του νεφρού και της ενίσχυσης του Γιανγκ, της υγρασίας των εντέρων και της ανακούφισης της δυσκοιλιότητας και χρησιμοποιείται ευρέως στη θεραπεία των εντερικών ασθενειών [6-7]. Τα φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδια είναι τα συστατικά δείκτη για τον προσδιορισμό της ταυτοποίησης και του περιεχομένου της Cistanche deserticola όπως καθορίζεται στην έκδοση του 2020 της κινεζικής φαρμακοποιίας (Μέρος Ι)

Cistanche για φλεγμονώδες έντερο

(κυρίως εχινακοσίδη και verbascoside) [8]. Μελέτες έχουν δείξει ότι η εχινακοσίδη μπορεί να βελτιώσει την κολίτιδα σε ποντίκια προάγοντας τον πολλαπλασιασμό των εντερικών επιθηλιακών κυττάρων και την αναστολή της απόπτωσης των κυττάρων [9]. Το verbascoside μπορεί να επιβραδύνει την εξέλιξη της κολίτιδας σε αρουραίους ως καθαριστής ελεύθερων ριζών [10]. Τα συνολικά γλυκοσίδια της Cistanche deserticola μπορούν να αποτρέψουν και να θεραπεύσουν την IBD αναστέλλοντας την έκφραση των φλεγμονωδών παραγόντων [11]. Ωστόσο, δεν υπάρχουν μελέτες σχετικά με τα χημικά συστατικά στο Cistanche Deserticola να διαδραματίζουν θεραπευτικό ρόλο στην IBD μέσω των οποίων οι στόχοι και οι οδοί σηματοδότησης.
Για το σκοπό αυτό, η μελέτη αυτή σκοπεύει να προβλέψει τον δυνητικό μηχανισμό δράσης της Cistanche deserticola στη θεραπεία της IBD μέσω της φαρμακολογίας του δικτύου σε συνδυασμό με την τεχνολογία της μοριακής πρόσδεσης και να επαληθεύσει τα προβλεπόμενα αποτελέσματα από τη φαρμακοδυναμική, έτσι ώστε να διευκρινιστεί συστηματικά ο μοριακός μηχανισμός της στροφής του Cistanche στην αντιμετώπιση του IBD, προκειμένου να προσφέρει μια θεωρητική βάση για την ανίχνευση και τη χρησιμοποίηση της ανάπτυξης της.

 

1 υλικά

1,1 πειραματόζωα

Τα ζώα που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη ήταν αρσενικά ποντίκια C57BL/6, συνολικά 48, που αγοράστηκαν από το Κέντρο Πειράματος Ζώων του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang, ζυγίζοντας 2023-0001. Τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε ένα περιβάλλον με θερμοκρασία (22 ± 2) βαθμός, σχετική υγρασία 50%-70%και ένα φωτισμό κύκλου 12- H. Η μελέτη αυτή συμμορφώνεται αυστηρά με τις απαιτήσεις ευημερίας των ζώων και ηθικών απαιτήσεων της Επιτροπής Δεοντολογίας Πειραματικών Ζώων του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang (αριθμός έγκρισης 20210301-177).

 

 

 

 

1.2 Κύρια φάρμακα και αντιδραστήρια

Το εκχύλισμα Cistanche (CE, καθαρότητα μεγαλύτερη ή ίση με 85%, εχινακοσίδη μεγαλύτερη ή ίση με 40%, verbascoside μεγαλύτερο ή ίσο με 16%, αριθμός παρτίδας 20230103) αγοράστηκε από το Xinjiang HetianDichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd.;

 

Wecistanche έδρα Hetian Dicheng Cistanche Base

Wecistanche έδρα Hetian Dicheng Cistanche Base

Η έδρα Wecistanche Hetian Dicheng Cistanche Extract

---

Υποστηρικτική υπηρεσία του Wecistanche
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950
 

Το νάτριο θειικής δεξτράνης (DSS, σχετικό μοριακό βάρος 36, 000-50, 000, αριθμός παρτίδας C16013701) αγοράστηκε από τη Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd. Το κιβώτιο ποιοτικής ανίχνευσης αίματος κοπράνων (αριθμός παρτίδας ML1095013) αγοράστηκε από την Shanghai Elisa Biotechnology Co., Ltd.; Η ουσία αναφοράς δεξαμεθαζόνης (καθαρότητα μεγαλύτερη ή ίση με 98%, ο αριθμός παρτίδας 54231207002) αγοράστηκε από την Beijing Solebaugh Technology Co., Ltd. Ο παράγοντας νέκρωσης όγκου- (TNF-), interleukin 6 (interleukin -6, IL -6), il -10, il -1, μυελοϋπεροξειδάση (MPO) ενζυμική ανοσοσοφία assory (batch { 88-7064, 88-7105, 88-7013, EMMPO) αγοράστηκαν από την Invitrogen, USA; Κουνέλι TNF-, πρωτεϊνική κινάση Β1 (AKT1), φωσφορυλιωμένο Akt1 (P-AKT1), μεταγωγή σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3 (STAT3), φωσφορυλιωμένο STAT3 (P-STAT3), υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) 3- Κινάση (PI3K), φωσφορυλιωμένα ΡΙ3Κ (Ρ-ΡΙ3Κ) και επισημασμένη υπεροξειδάση ανοσοσφαιρίνη ανοσοσφαιρίνης αγροτεμάχης (GB11188, GB11689, GB15000, GB1176, GB15000, GB1562, GB1176, GB15000 GB11, GB15000, GB1176, GB1156 GB112343, GB112544, GB11525 και GB23303, αντίστοιχα) αγοράστηκαν από την Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd.

 

1.3 Κύρια όργανα

Τα κύρια όργανα που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη περιλαμβάνουν τον αναγνώστη μικροπλάνων Multiskan (Thermo Fisher Scientific, USA), RM2016 Pathology Slicer (Leica Instruments, Shanghai), Gel.Doc.XR Gel Discusting Analysis Analysis και Mini Trans-Blot Protein Instrument (BIO-RAD, USA).

 

2 μέθοδοι

2.1 Ανάλυση φαρμακολογίας δικτύου

2.1.1 Πρόβλεψη ενεργών συστατικών και στόχων

The active ingredients of Cistanche deserticola were screened using the TCMSP platform (http://lsp.nwu.edu.cn/) (with oral availability ≥30% and drug-like properties ≥0.18 as screening conditions) [12], and the active ingredients of Cistanche deserticola with anti-IBD effects reported in the literature were supplemented. The Swiss Target Prediction platform was used to search for the active ingredient targets of Cistanche deserticola (probability parameter>0), και μετά την απομάκρυνση διπλών, ελήφθησαν οι δραστικοί στόχοι του cistanche deserticola. Χρησιμοποιώντας τη "φλεγμονώδη νόσος του εντέρου" ως όρος αναζήτησης, οι στόχοι της νόσου συλλέχθηκαν από τη βάση δεδομένων των γενετικών καρτών (http://www.genecards.org/) και η βάση δεδομένων OMIM (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim) και οι δυνητικοί στόχοι λήφθηκαν μετά από ανακαλύψεις αντιγράφων.

 

2.1.2 Σχέδιο διαγράμματος Venn και "Διαδραστική κατασκευή δικτύου"

 

Το εργαλείο ανάλυσης του Venny 2.1 online χρησιμοποιήθηκε για να διασταυρώσει τους ενεργούς στόχους του συστατικού της Cistanche deserticola με δυνητικούς στόχους για να επιτευχθεί οι δυνητικοί στόχοι της Cistanche deserticola για τη θεραπεία της IBD. Το λογισμικό Cytoscape 3.9.1 χρησιμοποιήθηκε για την κατασκευή ενός διαγράμματος δικτύου πολλαπλών επιπέδων του "στόχου-ενίσχυσης του ναρκωτικού-ενσωμάτωσης" και την εκτέλεση τοπολογικής ανάλυσης. Τα κορυφαία 4 συστατικά με την τιμή υψηλότερου βαθμού επιλέχθηκαν ως τα βασικά συστατικά της Cistanche Deserticola για τη θεραπεία της IBD.

 

2.1.3 Σχέδιο δικτύου αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης

The potential targets of Cistanche deserticola for the treatment of IBD were imported into the STRING database (http://string-db.org/), the species was limited to "Homo sapiens", the interaction score was limited to >0. Οι στόχοι με τις τιμές των κορυφαίων 5 βαθμών λήφθηκαν ως βασικοί στόχοι.

 

2.1.4 Ανάλυση λειτουργίας και εμπλουτισμού οδού των δυνητικών στόχων

Οι δυνητικοί στόχοι της Cistanche Deserticola για τη θεραπεία της IBD εισήχθησαν στη βάση δεδομένων David (https://david.ncifcrf.gov) για την Οντολογία Gene (GO) και την Κυκλική Εγκυκλοπαίδεια των γονιδίων και των γονιδίων ( (https://www.bioinformatics.com.cn/). Ο βαθμός εμπλουτισμού μετρήθηκε με τον αριθμό των στόχων και την τιμή -LGP των αντίστοιχων οδών εμπλουτισμένων. Οι κορυφαίες 10 συμμετοχές στην ανάλυση GO επιλέχθηκαν για να σχεδιάσουν ένα γράφημα ράβδων και οι κορυφαίες 20 μονοπάτια στην ανάλυση KEGG επιλέχθηκαν για να σχεδιάσουν ένα γράφημα φυσαλίδων.

2.1.5 Μοριακή σύνδεση
Το λογισμικό Autodock Vina χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση επαλήθευσης μοριακής σύνδεσης στους στόχους πυρήνα (TNF, AKT1, STAT3, EGFR και SRC) και συστατικά πυρήνα (Quercetin, Sucinolone, -Sitosterol και Cistancheside Η). Όσο χαμηλότερη είναι η ελεύθερη ενέργεια δέσμευσης, τόσο υψηλότερη είναι η συγγένεια του συστατικού πυρήνα για δέσμευση στην πρωτεΐνη του υποδοχέα [13].

 

 

2.2 Επαλήθευση πειράματος ζώων

2.2.1 Μοντελοποίηση, ομαδοποίηση και χορήγηση φαρμάκων

48 αρσενικά ποντίκια C57BL/6 (6-7 εβδομάδων) χωρίστηκαν σε ομαδική ομάδα ελέγχου, μοντέλο ομάδας, θετική ομάδα ελέγχου (dexamethasone, {}} 0, 400 mg/k. Σύμφωνα με την αναφορά [14]) σύμφωνα με το σωματικό βάρος μετά από 1 εβδομάδα προσαρμοστικής διατροφής, με 8 ποντίκια σε κάθε ομάδα. Τα ποντίκια στην ομάδα κενού ελέγχου έτρωγαν και έπιναν νερό κανονικά κάθε μέρα, ενώ τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλων και η ομάδα διοίκησης φαρμάκων έπιναν διάλυμα 3% DSS ελεύθερα κάθε μέρα για μοντελοποίηση και έφαγαν ελεύθερα. Ταυτόχρονα με τη μοντελοποίηση, τα ποντίκια σε κάθε ομάδα δόσης CE ήταν γεμάτοι με την αντίστοιχη δόση CE (διαλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό πριν από τη χρήση), τα ποντίκια στην ομάδα θετικού ελέγχου ήταν ενδοπεριτοναϊκά ένεση με δεξαμεθαζόνη και τα ποντίκια στην κενή ομάδα ελέγχου και η ομάδα μοντέλου είχαν ρυθμιστεί με αποστειρωμένο νερό σε 0,01 mL/G κάθε μέρα, μια μέρα για 7 συνόδους. Κατά τη διάρκεια του πειράματος, ένα ποντίκι πέθανε σε κάθε ομάδα μοντέλου, θετική ομάδα ελέγχου και ομάδα χαμηλής δόσης CE. Μετά την τελευταία διοίκηση, τα ποντίκια ήταν νηστεία για 12 ώρες. Μετά από αναισθησία, τα μάτια απομακρύνθηκαν για να συλλέξουν ιστούς αίματος και παχέος εντέρου για μεταγενέστερη χρήση.

 

2.2.2 Υπολογισμός του δείκτη δραστηριότητας της νόσου και η ανίχνευση του μήκους του παχέος εντέρου

Κατά τη διάρκεια του πειράματος, το βάρος και τα κόπρανα των ποντικών καταγράφηκαν καθημερινά. Η απώλεια βάρους, τα χαρακτηριστικά των κοπράνων και το αίμα στο σκαμνί κάθε ομάδας ποντικών αξιολογήθηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια βαθμολόγησης [15] και ο δείκτης δραστηριότητας της νόσου (DAI) υπολογίστηκε. DAI=(βαθμολογία απώλειας βάρους + βαθμολογία χαρακτηριστικών κοπράνων + έκτακτης αιμορραγίας αιμορραγίας ή κόλου αιμορραγίας) / 3. Μετά το πείραμα, μετρήθηκε και φωτογραφήθηκε το μήκος του παχέος εντέρου ποντικού.

 

2.2.3 Παρατήρηση της παθολογίας ιστών του παχέος εντέρου

Μέρος του ιστού του παχέος εντέρου του ποντικού σταθεροποιήθηκε με 4% πολυφοραλδεΰδη, ενσωματωμένο σε παραφίνη, διαχωρίστηκε και χρωματίστηκε με αιματοξυλίνη-ηωσίνη (HE). Η παθολογική μορφολογία του ιστού του παχέος εντέρου του ποντικού παρατηρήθηκε υπό μικροσκόπιο και η παθολογική βαθμολογία υπολογίστηκε σύμφωνα με το βαθμό της απώλειας κυττάρων κρυπτών και της διήθησης των φλεγμονωδών κυττάρων [16].

 

2.2.4 Ανίχνευση επιπέδων φλεγμονώδους παράγοντα στον ιστό του παχέος εντέρου

Μέρος του ιστού του παχέος εντέρου των ποντικών ομογενοποιήθηκε στον πάγο και το ομογενοποιητικό φυγοκεντρήθηκε στο 3 500 r/min για 15 λεπτά σε 4 μοίρες. Το υπερκείμενο συλλέχθηκε και τα επίπεδα του IL -10, IL -6, IL {{5}, TNF- και MPO στον ορό ανιχνεύθηκαν από τον αναγνώστη μικροπλάστης σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ.

 

2.2.5 Ανίχνευση έκφρασης πρωτεΐνης -στόχου πυρήνα στον ιστό του παχέος εντέρου

Μια κατάλληλη ποσότητα ιστού παχέος εντέρου 3 ποντικών λήφθηκε από κάθε ομάδα. Η πρωτεϊνική έκφραση των στόχων πυρήνα που διαλογήθηκαν με βάση τη φαρμακολογία του δικτύου επαληθεύτηκε με κηλίδωση Western. Η γκρίζα τιμή των ζωνών πρωτεϊνών αναλύθηκε με λογισμικό Image J. -Ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερική αναφορά για τον υπολογισμό του επιπέδου έκφρασης κάθε πρωτεΐνης.

 

2.3 στατιστικές μεθόδους

Το λογισμικό SPSS 22. 0 χρησιμοποιήθηκε για στατιστική ανάλυση των δεδομένων. Τα ποσοτικά δεδομένα εκφράστηκαν ως x ± S και η σύγκριση μεταξύ πολλαπλών ομάδων πραγματοποιήθηκε με μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης και η σύγκριση μεταξύ δύο ομάδων πραγματοποιήθηκε με δοκιμή LSD-T. Το επίπεδο δοκιμής =0. 05.