Παραγωγή λιπάσης από Yarrowia Lipolytica σε ζύμωση στερεάς κατάστασης χρησιμοποιώντας υποπροϊόντα φρούτων Amazon και άλευρα σόγιας ως υπόστρωμα Μέρος 2

2.5. Υδρόλυση Ιχθυελαίου

Οι λιπάσες έχουν χρησιμοποιηθεί στην υδρόλυση λιπαρών οξέων για τη συμπύκνωση πολυακόρεστων λιπαρών οξέων (PUFAs) [44,45]. Το κύριο πλεονέκτημα της εφαρμογής λιπασών στην παραγωγή πολυακόρεστων λιπαρών οξέων είναι η εξειδίκευση του ενζύμου και οι αντιδράσεις που συμβαίνουν σε συνθήκες μέτριας θερμοκρασίας, γεγονός που ευνοεί τη διατήρηση της δομής των PUFAs [44]. Η χρήση λιπασών προτιμάται από τις χημικές μεθόδους, καθώς παρέχουν γλυκερίδια χαμηλής απόδοσης και καθαρότητας [46]. Ο ρόλος των λιπασών στην επιλεκτική υδρόλυση των κορεσμένων λιπαρών οξέων (SFAs) και των μονοακόρεστων λιπαρών οξέων (MUFAs) από τις τριακυλογλυκερόλες (TAGs) είναι να παράγουν γλυκερίδια πλούσια σε PUFAs. Η αρχή αυτής της μεθόδου είναι το στερικό εμπόδιο που προκαλείται από τη μοριακή διαμόρφωση των διπλών δεσμών άνθρακα-cis στα PUFA που προκαλούν την αναδίπλωση των αλυσίδων λιπαρών οξέων. Έτσι, οι ενζυμικές ενεργές θέσεις δεν έχουν πρόσβαση στους εστερικούς δεσμούς αυτών των λιπαρών οξέων με τους σκελετούς γλυκερίνης τους [47,48]. Πολλά οφέλη συνδέονται με την εισαγωγή λιπαρών οξέων στη διατροφή, όπως η ανάπτυξη του παιδιού, η πρόληψη καρδιαγγειακών παθήσεων, καρκίνος και διάφορες ψυχικές διαταραχές (κατάθλιψη, διαταραχή ελλειμματικής προσοχής, υπερκινητικότητα), εκτός από το αντιφλεγμονώδες δυναμικό και την πιθανή υπέρταση. έλεγχος [49].

Ο γλυκοσίδης του cistanche μπορεί επίσης να αυξήσει τη δραστηριότητα του SOD στους ιστούς της καρδιάς και του ήπατος και να μειώσει σημαντικά την περιεκτικότητα σε λιποφουσκίνη και MDA σε κάθε ιστό, καθαρίζοντας αποτελεσματικά διάφορες δραστικές ρίζες οξυγόνου (OH-, H2O2, κ.λπ.) και προστατεύοντας από βλάβη του DNA που προκαλείται από ρίζες ΟΗ. Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες του Cistanche έχουν ισχυρή ικανότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών, υψηλότερη αναγωγική ικανότητα από τη βιταμίνη C, βελτιώνουν τη δραστηριότητα του SOD στο εναιώρημα σπέρματος, μειώνουν την περιεκτικότητα σε MDA και έχουν μια ορισμένη προστατευτική δράση στη λειτουργία της σπερματικής μεμβράνης. Οι πολυσακχαρίτες Cistanche μπορούν να ενισχύσουν τη δραστηριότητα των SOD και GSH-Px σε ερυθροκύτταρα και πνευμονικούς ιστούς πειραματικά γηρασμένων ποντικών που προκαλούνται από D-γαλακτόζη, καθώς και να μειώσουν την περιεκτικότητα σε MDA και κολλαγόνο στους πνεύμονες και στο πλάσμα και να αυξήσουν την περιεκτικότητα σε ελαστίνη. ένα καλό αποτέλεσμα σάρωσης στο DPPH, παρατείνει το χρόνο της υποξίας σε γηρασμένα ποντίκια, βελτιώνει τη δραστηριότητα του SOD στον ορό και καθυστερεί τον φυσιολογικό εκφυλισμό του πνεύμονα σε πειραματικά γηρασμένα ποντίκια Με τον κυτταρικό μορφολογικό εκφυλισμό, τα πειράματα έχουν δείξει ότι το Cistanche έχει την καλή αντιοξειδωτική ικανότητα και έχει τη δυνατότητα να είναι φάρμακο για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών της γήρανσης του δέρματος. Ταυτόχρονα, η εχινακοσίδη στο Cistanche έχει σημαντική ικανότητα να καθαρίζει τις ελεύθερες ρίζες DPPH και έχει την ικανότητα να καθαρίζει δραστικά είδη οξυγόνου και να αποτρέπει την αποικοδόμηση του κολλαγόνου που προκαλείται από ελεύθερες ρίζες, και έχει επίσης μια καλή επίδραση επιδιόρθωσης στη βλάβη των ανιόντων από τις ελεύθερες ρίζες θυμίνης.

Κάντε κλικ στο Cistanche Tubulosa

【Για περισσότερες πληροφορίες:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Η παραγωγή ενζυμικών εκχυλισμάτων που θα εφαρμοστούν σε διαδικασίες όπως η υδρόλυση μπορεί να είναι μια δαπανηρή εργασία. Έτσι, η έρευνα πρώτων υλών που μειώνουν το κόστος παραγωγής μπορεί να προσφέρει μια ενδιαφέρουσα εναλλακτική. Η χρήση ενός στερεού βιοκαταλύτη είναι επιθυμητή επειδή αυτός ο στερεός βιοκαταλύτης μπορεί να επαναχρησιμοποιηθεί σε ενζυμικές αντιδράσεις, εκτός από την εξαιρετική σταθερότητα αποθήκευσης σε θερμοκρασία δωματίου, χωρίς κόστος ψύξης και ευκολία στη μεταφορά [41]. Δεν έχουν υπάρξει αναφορές σχετικά με τη χρήση στερεού βιοκαταλύτη από την Yarrowia lipolytica για την παραγωγή PUFAS με την ενζυματική υδρόλυση ιχθυελαίου. Έτσι, η εφαρμογή του ακατέργαστου ενζυματικού εκχυλίσματος και του στερεού βιοκαταλύτη που παρήχθη χρησιμοποιώντας κέικ ελαίου andiroba και σογιάλευρο (50:50) μελετήθηκε για να αξιολογηθεί η πιθανή εφαρμογή ενζύμων στην υδρόλυση ιχθυελαίου για περαιτέρω παραγωγή πολυακόρεστων λιπαρών οξέων σε μια κατάλληλη διαδικασία (Εικόνα 6). Είναι δυνατό να παρατηρηθεί υψηλός βαθμός υδρόλυσης (DH) σε μικρότερους χρόνους αντίδρασης χρησιμοποιώντας έναν στερεό βιοκαταλύτη (63, 70,8, 72,5 και 74,7 τοις εκατό ) από το ενζυματικό εκχύλισμα (47,5, 61,5, 66,5 και 74,8 τοις εκατό ) μετά τις 24, 48, 72 h και 144 h, αντίστοιχα.

Η διαδικασία ενζυματικής υδρόλυσης εφαρμόζεται συνεχώς για τη λήψη συμπυκνωμένων πολυακόρεστων λιπαρών οξέων. Οι Gao et al. [50] χρησιμοποίησε λιπάση στην υδρόλυση του μπακαλιάρου μπακαλιάρου και τα περιεχόμενα των EPA και DHA βελτιώθηκαν κατά 3,{2}} φορές και 1,98- φορές, αντίστοιχα. Οι Aarthi et al. [20] χρησιμοποίησε συμπυκνωμένη λιπάση (1000 U/mL) στην υδρόλυση των ιχθυελαίων και βρήκε επίσης ρυθμό υδρόλυσης πάνω από 60 τοις εκατό μετά από 72 ώρες. Σε αυτή την εργασία, καλύτεροι βαθμοί υδρόλυσης επιτεύχθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ακατέργαστο ενζυματικό εκχύλισμα λιπάσης (δηλαδή, χωρίς καθαρισμό) όταν συγκρίθηκε ο ίδιος χρόνος υδρόλυσης. Άλλοι συγγραφείς έχουν μελετήσει την υδρόλυση του ελαίου από συκώτι Musteleus mustelus και του ελαίου φώκιας, αναφέροντας 75 τοις εκατό και 70 τοις εκατό της υδρόλυσης μετά από 24 και 9 ώρες αντίδρασης, αντίστοιχα [25,26].

Martins et al. [51] χρησιμοποίησε μια εμπορική λιπάση από την Burkholderia cepacia (Amano) για την υδρόλυση του ιχθυελαίου και μετά από 48 ώρες αντίδρασης, έλαβε 55,6 τοις εκατό DHA σε σύγκριση με τη μέγιστη υπολογιζόμενη περιεκτικότητα. Στην εργασία μας, σε μια προκαταρκτική μελέτη, λάβαμε το 70,8 τοις εκατό της υδρόλυσης μετά από 48 ώρες αντίδρασης χρησιμοποιώντας τον στερεό βιοκαταλύτη.

Μέχρι στιγμής, τέτοια ευρήματα έχουν προτείνει τη βιωσιμότητα της χρήσης παραπροϊόντων για την παραγωγή λιπάσης σε ζύμωση στερεάς κατάστασης ως τρόπο μετριασμού της περιβαλλοντικής ζημίας, αξιολόγησης παραπροϊόντων και οικονομικής αποδοτικότητας. Επιπλέον, τα αποτελέσματα δείχνουν την πιθανή εφαρμογή του ενζύμου λιπάση στην υδρόλυση ιχθυελαίου για περαιτέρω παραγωγή πολυακόρεστων λιπαρών οξέων σε μια κατάλληλη διαδικασία.

Παρά το γεγονός ότι υπάρχει αφθονία σε χαμηλού κόστους αγροτοβιομηχανικά υποπροϊόντα, ο προσδιορισμός και η τυποποίηση της σύνθεσης, επιπλέον της εκτίμησης κόστους για την απόκτηση του ενζυματικού εκχυλίσματος και του στερεού βιοκαταλύτη από χαμηλού κόστους αγροτοβιομηχανικά υποπροϊόντα εξακολουθούν να αποτελούν πρόκληση, αλλά εξαρτάται εξαιρετικά από τον τύπο του υποπροϊόντος, την εποχικότητα και την ποσότητα που παράγεται καθώς και από τη διαδικασία που χρησιμοποιείται και τη γεωγραφική θέση, μεταξύ άλλων παραγόντων. Έτσι, ζητήματα όπως η πολυπλοκότητα της αλυσίδας και το υλικοτεχνικό της κόστος, η χρήση πολύπλοκων και δαπανηρών διαδικασιών, η υψηλή κατανάλωση ενέργειας και κανονιστικά ζητήματα, μεταξύ άλλων, πρέπει να ξεπεραστούν. Υπό αυτή την έννοια, η επεξεργασία των υποπροϊόντων πρέπει να ξεπεράσει πολλά εμπόδια προτού καταστεί οικονομικά βιώσιμη, συμπεριλαμβανομένης της ανάγκης επεξεργασίας μεγάλων ποσοτήτων πρώτων υλών, της ικανότητας επεξεργασίας ετερογενών πρώτων υλών, της ολοκληρωμένης εφοδιαστικής με διαφορετικές βιομηχανίες μεταποίησης και της δυνατότητας ολοκλήρωσης διεργασία στη μονάδα επεξεργασίας ώστε να επιτρέπεται η παραγωγή συστατικών υψηλής αξίας, μεταξύ άλλων [52-55].

3. Υλικά και Μέθοδοι

3.1. Υλικό

Το σόγιαλευρο αγοράστηκε από την Caramuru Alimentos (Goiás, Βραζιλία). Το κέικ με λάδι Andiroba που παρήχθη από εξόρυξη λαδιού παρασχέθηκε από την Beraca Ingredientes Naturais (Πάρα, Βραζιλία). Και τα δύο υποστρώματα ήταν τυποποιημένα σχετικά με την κοκκομετρία (<1.18 mm) and properly stored under refrigeration in polypropylene packages until use. The fish oil was purchased from Mundo dos Óleos, and according to the manufacturer, it is extracted by cold pressing and filtration, obtained from raw material with guaranteed origin. All other chemicals used were of analytical grade and used as received without any further purification, being obtained from Tedia (acetone), Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA, glucose, azocasein, agar, yeast extract, ethanol, methanol), Vetec (Tween 80), Oxoid (peptone), Isofar (sodium hydroxide, gum Arabic), and Precision Plus Protein Kaleidoscope—Bio-rad (molecular mass markers, kDa).

3.2. Συνθήκες καλλιέργειας μικροοργανισμών και εμβολίου

Yarrowia lipolytica IMUFRJ50682, που απομονώθηκε από εκβολές στον κόλπο Guanabara, Ρίο ντε Τζανέιρο, Βραζιλία [56] καλλιεργήθηκε στους 28 ◦C σε μέσο YPD-άγαρ (w/v: εκχύλισμα ζύμης 1 τοις εκατό, πεπτόνη, 2 τοις εκατό, γλυκόζη, 2 τοις εκατό, άγαρ, 3 τοις εκατό). Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε ένα υγρό μέσο που περιείχε εκχύλισμα ζυμομύκητα 1 τοις εκατό (β/ο), πεπτόνη, 2 τοις εκατό (β/ο) και γλυκόζη 2 τοις εκατό (β/ο) για 72 ώρες, 160 σ.α.λ. στους 28 ◦C.

3.3. Χαρακτηρισμός Αγροβιομηχανικού Υποπροϊόντος

Η φυσικοχημική σύνθεση του σογιάλευρου και του κέικ ελαίου andiroba προσδιορίστηκε ως προς την υγρασία, την πρωτεΐνη, τους υδατάνθρακες, τις στάχτες, το εκχύλισμα αιθέρα, τις αδιάλυτες ίνες και την περιεκτικότητα σε διαλυτές ίνες, σύμφωνα με τη μεθοδολογία που αναφέρεται από την Ένωση Επίσημων Αναλυτικών Χημικών (AOAC). ) [57]. Επιπλέον, καθώς η παραγωγή λιπάσης από το Y. lipolytica επηρεάζεται από τον αερισμό [58], το πορώδες της κλίνης στο SSF αξιολογήθηκε σύμφωνα με την Εξίσωση (1), όπου ε είναι το πορώδες (εκφρασμένο σε m3 αέρα·m−3 κλίνης). ρdrysolid είναι η φαινομενική πυκνότητα του ξηρού δείγματος (kg·m−3). και ρwetsolid είναι η πυκνότητα του δείγματος μετά την προσθήκη νερού (kg·m−3 ) [58].

3.4. Lipase Production by SSF

Η στερεά μήτρα που περιέχει σογιάλευρο και κέικ ελαίου andiroba παρασκευάστηκε πριν από τον εμβολιασμό στον αντιδραστήρα τύπου δίσκου με διαφορετικές αναλογίες του υποστρώματος και αποστειρώθηκε σε αυτόκλειστο στους 121 ◦C για 20 λεπτά. Οι σταθερές παράμετροι της διαδικασίας που χρησιμοποιήθηκαν για την παραγωγή λιπάσης ήταν υγρασία 55 τοις εκατό και συγκέντρωση εμβολίου 0,71 mg ξηρής βιομάζας/g υποστρώματος [24]. Οι αντιδραστήρες επωάστηκαν σε θάλαμο Βιοχημικής Απαίτησης Οξυγόνου (BOD) στους 28 ◦C και ελήφθησαν δείγματα θυσίας (δηλ. ένας αντιδραστήρας τύπου δίσκου για το χρόνο δειγματοληψίας) καθ' όλη τη διάρκεια της ζύμωσης για ανάλυση.

Το SSF αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας διαφορετικούς συνδυασμούς κέικ ελαίου andiroba και σογιάλευρου ({{0}}:1{{10}}0; 25:75; 50:50; 75 :25 και 100:0) σε διαφορετικές ώρες (0, 12, 24, 32 και 48 h). Στη συνέχεια, η συμπλήρωση της στερεάς μήτρας που περιείχε κέικ ελαίου andiroba και σογιάλευρο (50:50) αξιολογήθηκε με την προσθήκη 1,5 (ποσοστό w/v) σογιέλαιου με την πάροδο του χρόνου (0, 12, 14, 20, 24, 28, 48, και 72 h) για να επιτευχθεί αύξηση της λιπολυτικής δραστηριότητας. Επιπροσθέτως, δοκιμάστηκε η παρουσία Tween 80 (0,001 τοις εκατό β/ο) στο μέσο ζύμωσης που περιέχει 1,5 (ποσοστό β/ο) σογιέλαιο. Η ζύμωση παρακολουθήθηκε με προσδιορισμό της δραστικότητας λιπάσης και πρωτεάσης καθώς και της υγρασίας και του ρΗ (περιγράφεται στην Υποενότητα "3.6. Αναλυτικοί προσδιορισμοί").

3.5. Ενζυμική Εκχύλιση και Παραγωγή Στερεού Βιοκαταλύτη

Η ενζυμική εκχύλιση διεξήχθη προσθέτοντας 50 mL ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικού καλίου 50 mM ρΗ 7,0 στους βιοαντιδραστήρες που ακολουθείται από επώαση στους 37°C, 200 rpm, για 20 λεπτά. Ακολούθως, το ζυμωμένο υλικό που εναιωρήθηκε στο ρυθμιστικό συμπιέστηκε χρησιμοποιώντας ένα πολτοποιητή με βλέμμα και φυγοκεντρήθηκε στις 3000 rpm για 5 λεπτά. Ο στερεός βιοκαταλύτης ελήφθη από την ξήρανση με ψύξη ολόκληρης της μάζας που ελήφθη στο τέλος της διαδικασίας ζύμωσης για 72 ώρες και αποθηκεύτηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 7 μήνες για να επαληθευτεί η ενζυματική σταθερότητα.

3.6. Αναλυτικοί Προσδιορισμοί

3.6.1. Δραστηριότητα λιπάσης

Η δραστικότητα λιπάσης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο που προτείνεται από τους Freire et al. [59]. Το μέσο αντίδρασης γαλακτωματοποιήθηκε σε ομογενοποιητή Ultra Turrax (IKA) χρησιμοποιώντας 5 τοις εκατό (w/v) ελαιόλαδο και 5 τοις εκατό (w/v) αραβικό κόμμι σε 100 mM ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (pH 7.0). Ενζυματικό εκχύλισμα (1 mL) ή 0,5 g του στερεού βιοκαταλύτη προστέθηκε σε 19 mL του μίγματος της αντίδρασης και επωάστηκε για 20 λεπτά, 200 rpm στους 37◦C. Η αντίδραση διακόπηκε με την προσθήκη 20 mL διαλύματος ακετόνης-αιθανόλης και τα ελεύθερα λιπαρά οξέα τιτλοδοτήθηκαν σε αυτόματο τιτλοδοτητή (Metrohm 916—Ti-Touch) χρησιμοποιώντας διάλυμα NaOH 0,04 mol/L. Μία μονάδα δραστικότητας λιπάσης (U) ορίστηκε ως η ποσότητα του ενζύμου που παράγει 1 μmol λιπαρού οξέος ανά λεπτό, υπό τις συνθήκες της δοκιμασίας.

3.6.2. Δραστηριότητα πρωτεάσης

Η δραστηριότητα πρωτεάσης ποσοτικοποιήθηκε σύμφωνα με τη μεθοδολογία των Charney και Tomarelli [60]. Ενζυματικό εκχύλισμα (0.5 mL) προστέθηκε σε 0.5 mL διαλύματος 0.5 τοις εκατό (w/v) αζοκαζεΐνης που παρασκευάστηκε με 50 mM ρυθμιστικό οξικού άλατος (pH) και επωάστηκε στους 32 ◦C για 40 λεπτά. Η αντίδραση διακόπηκε με την προσθήκη 0,5 mL διαλύματος τρι-χλωροοξικού οξέος 15 τοις εκατό (β/ο) και τα δείγματα φυγοκεντρήθηκαν στις 3000 rpm για 15 λεπτά. Το υπερκείμενο (100 μL) προστέθηκε σε 96-πλάκα μικροτιτλοδότησης που περιείχε 100 μL υδροξειδίου του καλίου 5 Μ, και η απορρόφηση στα 428 nm μετρήθηκε σε συσκευή ανάγνωσης πλακών μικροτιτλοδότησης (SpectraMax, Molecular Devices). Μία μονάδα δραστικότητας ορίστηκε ως η ποσότητα ενζύμου ικανή να προάγει μια μοναδιαία αύξηση στην απορρόφηση ανά λεπτό.

3.6.3. Περιεκτικότητα σε υγρασία και pH

Η περιεκτικότητα σε υγρασία παρακολουθήθηκε χρησιμοποιώντας μια ισορροπία αναλυτή υγρασίας (AND MX-50). Το pH μετρήθηκε σε ένα μετρητή pH (TECNAL, μοντέλο TR-107 PT100, Βραζιλία).

3.7. SDS-PAGE

Η ηλεκτροφόρηση πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που αναφέρεται από τον Laemmli [61] σε ένα πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου (5 τοις εκατό στοίβαξη, 15 τοις εκατό διαχωρισμός, 0, πάχος 75 mm). Τα δείγματα αναμίχθηκαν σε αναλογία (1:4) από συνδυασμό κέικ ελαίου andiroba και σόγιας (50:50) με ρυθμιστικό διάλυμα δείγματος που περιείχε -μερκαπτοαιθανόλη, θερμάνθηκε στους 95 °C για 5 λεπτά και εφαρμόστηκε στο πήκτωμα. Πραγματοποιήθηκε ηλεκτροφόρηση στα 150 V για 30 λεπτά (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) και το πήκτωμα αποκαλύφθηκε χρησιμοποιώντας Coomassie Blue R-250. Χρησιμοποιήθηκε ένας τυπικός δείκτης πρωτεΐνης (Bio-rad, Hercules, CA, USA) με μοριακό βάρος που κυμαίνεται από 10 έως 250 kDa.

3.8. Υδρόλυση ιχθυελαίου: μια πιθανή εφαρμογή

Ο βαθμός υδρόλυσης (DH) του ιχθυελαίου μετρήθηκε ζυγίζοντας 1 g ιχθυελαίου και προσθέτοντας 25 mL ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών pH 7.0 για να επαληθευτεί η πιθανή εφαρμογή του ενζύμου στην υδρόλυση του ιχθυελαίου. Στη συνέχεια, 5 mL του ενζυματικού εκχυλίσματος (37 U) σε κεχριμπαρένιες φιάλες αναδεύτηκαν για 168 ώρες. Η αντίδραση διακόπηκε με 20 mL ακετόνης και τα ελεύθερα λιπαρά οξέα τιτλοδοτήθηκαν σε αυτόματο τιτλοδοτητή με 0,1 Μ μεθανολικό ΚΟΗ. Το τυφλό της αντίδρασης ελήφθη με την προσθήκη του ενζύμου μόνο στο τέλος της αντίδρασης.

Ο βαθμός υδρόλυσης (DH) υπολογίστηκε σύμφωνα με την Εξίσωση (2):

όπου Όπως είναι η οξύτητα του δείγματος. Αα είναι η οξύτητα από την αυτοϋδρόλυση. Το Si είναι ο δείκτης σαπωνοποίησης.

3.9. Στατιστική ανάλυση

Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές. Σε κάθε αναπαραγωγή, οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. Τα αποτελέσματα αντιστοιχούσαν στη μέση ± τυπική απόκλιση. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) ενώ το τεστ Tukey (ρ < 0.05) χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο των διαφορών μεταξύ των μέσων με χρήση του Sisvar 5.6.

4. Συμπεράσματα

Το μέσο ζύμωσης που προέκυψε μετά την ανάμειξη κέικ ελαίου andiroba και σογιάλευρου ήταν πολύ αποτελεσματικό στην παραγωγή λιπάσης. Η επιλεγμένη μήτρα ζύμωσης ήταν το μείγμα κέικ ελαίου andiroba και σογιάλευρου σε αναλογία 50:50, που παράγει 63,70 U·g −1 λιπολυτικής δραστηριότητας. Η μέγιστη λιπολυτική δραστηριότητα ελήφθη (82,52 U·g −1) μετά τη χρήση της αναλογίας κέικ ελαίου andiroba και σογιάλευρου 50:50 μετά από συμπλήρωμα με Tween 80 (0,001 τοις εκατό) και σογιέλαιο (1,5 τοις εκατό ). Στην ηλεκτροφορητική ανάλυση, ανιχνεύθηκαν ζώνες πρωτεϊνών που έχουν ήδη αναφερθεί στη βιβλιογραφία ως YL Lip2 (37 και 40 kDa). Η προηγούμενη εφαρμογή λιπάσης σε υδρόλυση ελαίου παρείχε έως και 63 τοις εκατό της υδρόλυσης μετά από 24 ώρες. Αυτή η μελέτη έδειξε ότι είναι δυνατό να παραχθεί λιπάση χρησιμοποιώντας υποπροϊόντα από την περιοχή του Αμαζονίου σε συνδυασμό με σογιάλευρα και να εφαρμοστεί στην υδρόλυση ιχθυελαίου για περαιτέρω παραγωγή πολυακόρεστων λιπαρών οξέων σε μια κατάλληλη διαδικασία.

Συνεισφορές συγγραφέα:Conceptualization, BDR, ACL και MAZC. Μεθοδολογία, ASSC, JCSS, FVdN, CECdS, BDR, ACL και MAZC. Τυπική ανάλυση, ASSC, JCSS και FVdN. Έρευνα, ASSC, JCSS και FVdN; Πόροι, ASSC, JCSS και FVdN. Επιμέλεια δεδομένων, ASSC, JCSS και FVdN. Σύνταξη—προετοιμασία πρωτότυπου σχεδίου, ASSC, JCSS, FVdN και CECdS. Γράψιμο — κριτική και επεξεργασία, BDR, CECdS, ACL και MAZC. Εποπτεία, BDR, CECdSACL και MAZC. Διαχείριση έργου, BDR, ACL και MAZC. Απόκτηση χρηματοδότησης, BDR, ACL και MAZC Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και έχουν συμφωνήσει με τη δημοσιευμένη έκδοση του χειρογράφου.

Ευχαριστίες: Οι συγγραφείς αναγνωρίζουν το Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior—Brasil (CAPES—Finance Code 001). το Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico (CNPq)· και το Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ).

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Serra, JL; Rodrigues, AMdC; Freitas, RA; Meirelles, AJdA; Darnet, SH; Silva, LHMd Εναλλακτικές πηγές ελαίων και λιπών από φυτά του Αμαζονίου: Λιπαρά οξέα, εργαλεία μεθυλίου, ολικά καροτενοειδή και χημική σύνθεση. Food Res. Int. 2019, 116, 12–19. [CrossRef] [PubMed]

2. Penido, C.; Conte, FP; Chagas, MS; Rodrigues, CA; Pereira, JF; Henriques, MG Αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις των φυσικών τετρανορτριτερπενοειδών που απομονώθηκαν από το Carapa guianensis Aublet σε αρθρίτιδα που προκαλείται από zymosan σε ποντίκια. φλεγμονή. Res. 2006, 55, 457-464. [CrossRef] [PubMed]

3. Penido, C.; Costa, KA; Pennaforte, RJ; Costa, MF; Pereira, JF; Siani, AC; Henriques, MG Αντιαλλεργικές επιδράσεις των φυσικών τετρανορτριτερπενοειδών που απομονώθηκαν από το Carapa guianensis Aublet στην επαγόμενη από αλλεργιογόνα αγγειακή διαπερατότητα και υπεραλγησία. φλεγμονή. Res. 2005, 54, 295–303. [CrossRef]

4. Santos, KIP; Benjamim, JKF; Costa, KAD; Reis, AS; Souza Pinheiro, WB; Santos, AS Metabolomics τεχνικές που εφαρμόζονται στη διερεύνηση φαινολικών οξέων από το αγροβιομηχανικό υποπροϊόν του Carapa guianensis Aubl. Αραβας. J. Chem. 2021, 14, 103421. [CrossRef]

5. Lourenço, JNP; Ferreira, LMM; Martins, GC; Nascimento, DG Produção, Biometria de Frutos e Sementes e Extração do Óleo de Andiroba (Carapa Guianensis Aublet; Sob Manejo Comunitário em Parintins, AM: Brasília, Βραζιλία, 2017, σελ. 36.

6. Organic, S. Óleo de Andiroba.

7. Conab. Boletim da Sociobiodiversidade; Conab: Μπραζίλια, Βραζιλία, 2017; Τόμος 1, σελ. 67.

8. Souza, CR; Λίμα, RMB; Azevedo, CP; Rossi, LMB Andiroba (Carapa guianensis Aubl.); Embrapa Amazônia Ocidental: Μπραζίλια, Βραζιλία, 2006; 21π.

9. Oliveira, F.; Souza, CE; Peclat, VROL; Salgado, JM; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ; Venâncio, Α.; Belo, I. Βελτιστοποίηση παραγωγής λιπάσης από Aspergillus ibericus από κέικ λαδιού και εφαρμογή της σε αντιδράσεις εστεροποίησης. Food Bioprod. Επεξεργάζομαι, διαδικασία. 2017, 102, 268–277. [CrossRef]

10. Pandey, Α. Ζύμωση στερεάς κατάστασης. Biochem. Eng. J. 2003, 13, 81–84. [CrossRef]

11. Martínez, Ο.; Sánchez, Α.; Γραμματοσειρά, X.; Barrena, R. Ενίσχυση της βιοπαραγωγής αρωματικών ενώσεων προστιθέμενης αξίας μέσω ζύμωσης στερεάς κατάστασης βαγάσσης ζαχαροκάλαμου και μελάσας ζαχαρότευτλων: Λειτουργικές στρατηγικές και κλιμάκωση της διαδικασίας. Bioresour. Τεχνολ. 2018, 263, 136–144. [CrossRef] [PubMed]

12. Άνω, Τ.; Jin, GY; Mizumoto, S.; Rahman, MS; Okuno, Κ.; Shoda, Μ. Ζύμωση στερεάς κατάστασης του λιποπεπτιδικού αντιβιοτικού ιτουρίνης Α χρησιμοποιώντας ένα νέο σύστημα αντιδραστήρα ζύμωσης στερεάς κατάστασης. J. Environ. Sci. 2009, 21 (Suppl. S1), S162–S165. [CrossRef]

13. Vandenberghe, LPS; Karp, SG; Oliveira, PZ; Carvalho, JC; Rodrigues, C.; Soccol, CR Κεφάλαιο 18—Ζύμωση στερεάς κατάστασης για την παραγωγή οργανικών οξέων. Στις Τρέχουσες Εξελίξεις στη Βιοτεχνολογία και τη Βιομηχανική. Pandey, Α., Larroche, C., Soccol, CR, Eds.; Elsevier: Άμστερνταμ, Ολλανδία, 2018; σελ. 415–434.

14. Sala, Α.; Vittone, S.; Barrena, R.; Sánchez, Α.; Artola, A. Σάρωση αγροβιομηχανικών αποβλήτων ως υποστρώματα για παραγωγή βιοπαρασιτοκτόνων μυκήτων: Χρήση Beauveria bassiana και Trichoderma harzianum στη ζύμωση στερεάς κατάστασης. J. Environ. Manag. 2021, 295, 113113. [CrossRef] [PubMed]

15. Banat, IM; Carboué, Q.; Saucedo-Castañeda, G.; de Jesús Cázares-Marinero, J. Biosurfactants: Η πράσινη γενιά εξειδικευμένων χημικών ουσιών και η πιθανή παραγωγή με χρήση τεχνολογίας ζύμωσης στερεάς κατάστασης (SSF). Bioresour. Τεχνολ. 2021, 320, 124222. [CrossRef] [PubMed]

16. Pereira, AS; Sant'Ana, GCF; Amaral, PFF Mango αγροβιομηχανικά απόβλητα για παραγωγή λιπάσης από Yarrowia lipolytica και τη δυνατότητα του ζυμωμένου στερεού ως βιοκαταλύτη. Food Bioprod. Επεξεργάζομαι, διαδικασία. 2019, 115, 68–77. [CrossRef]

17. Brígida, AIS; Amaral, PFF; Coelho, MAZ; Gonçalves, LRB Lipase από Yarrowia lipolytica: Παραγωγή, χαρακτηρισμός και εφαρμογή ως βιομηχανικός βιοκαταλύτης. J. ΜοΙ. Καταλ. Β Ένζυμο. 2014, 101, 148–158. [CrossRef]

18. Treichel, Η.; Oliveira, D.; Mazutti, MA; Di Luccio, Μ.; Oliveira, JV Μια ανασκόπηση για την παραγωγή μικροβιακών λιπασών. Food Bioprocess Technol. 2010, 3, 182–196. [CrossRef]

19. Mehta, Α.; Guleria, S.; Sharma, R.; Gupta, R. 6 — Οι λιπάσες και οι εφαρμογές τους με έμφαση στη βιομηχανία τροφίμων. Στη Μικροβιακή Βιοτεχνολογία στα Τρόφιμα και την Υγεία. Ray, RC, Εκδ.; Academic Press: Cambridge, MA, ΗΠΑ, 2021; σελ. 143–164.

20. Aarthy, Μ.; Saravanan, Ρ.; Ayyadurai, Ν.; Gowthaman, MK; Kamini, NR Μια διαδικασία δύο σταδίων για την παραγωγή συμπυκνωμάτων ωμέγα 3-πολυακόρεστων λιπαρών οξέων από έλαιο σαρδέλας χρησιμοποιώντας Cryptococcus sp. MTCC 5455 λιπάση. J. ΜοΙ. Καταλ. Β Ένζυμο. 2016, 125, 25–33. [CrossRef]

21. Nascimento, FV; Castro, AM; Secchi, AR; Coelho, MAZ Insights σχετικά με τη συμπλήρωση μέσων στη ζύμωση στερεάς κατάστασης φλοιών σόγιας από την Yarrowia lipolytica: Επίδραση στην παραγωγή λιπάσης στο δίσκο και στους βιοαντιδραστήρες μονωμένων συσκευασμένων κλινών. Biochem. Eng. J. 2021, 166, 107866. [CrossRef]

22. Sales, JCS; Castro, AM; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Συμπλήρωμα φλοιών καρπουζιού ως ενισχυτής παραγωγής λιπάσης και εστεράσης από Yarrowia lipolytica σε ζύμωση στερεάς κατάστασης και πιθανή χρήση τους ως βιοκαταλύτες σε αντιδράσεις αποπολυμερισμού πολυ(τερεφθαλικού αιθυλενίου) (PET). Biocatal. Βιομετασχηματισμός. 2020, 38, 457–468. [CrossRef]

23. Aguieiras, ECG; de Barros, DSN; Fernandez-Lafuente, R.; Freire, DMG Παραγωγή λιπασών σε άλευρο βαμβακόσπορου και εφαρμογή του ζυμωμένου στερεού ως βιοκαταλύτη σε αντιδράσεις εστεροποίησης και μετεστεροποίησης. Ανανεώνω. Energy 2019, 130, 574–581. [CrossRef]

24. Souza, CEC; Farias, MA; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Προσθέτοντας Αξία σε Αγροβιομηχανικά Συμπροϊόντα από Εκχύλιση Κανόλας και Σογιέλαιου μέσω Παραγωγής Λιπάσης Χρησιμοποιώντας Yarrowia lipolytica σε Ζύμωση Στερεάς Κατάστασης. Waste Biomass Valorization 2017, 8, 1163–1176. [CrossRef]

25. He, Η.; Li, Υ.; Zhang, L.; Ding, Ζ.; Shi, G. Κατανόηση και εφαρμογή της ρύθμισης του αζώτου του Bacillus: Μια προοπτική συνθετικής βιολογίας. J. Adv. Res. 2022; υπό έκδοση. [CrossRef]

26. Almeida, AF; Taulk-Tornisielo, SM; Carmona, EC Επίδραση πηγών άνθρακα και αζώτου στην παραγωγή λιπάσης από ένα πρόσφατα απομονωμένο στέλεχος Candida Viswanathan. Αννα. Microbiol. 2013, 63, 1225–1234. [CrossRef]

27. Salihu, Α.; Alam, MZ; AbdulKarim, MI; Salleh, παραγωγή HM Lipase: Μια εικόνα για τη χρήση ανανεώσιμων γεωργικών υπολειμμάτων. Πόρος. Συντήρηση. Ανακυκλωνω. 2012, 58, 36–44. [CrossRef]

28. Liu, Χ.; Yu, Χ.; Αυτός, Α.; Xia, J.; He, J.; Deng, Υ.; Xu, Ν.; Qiu, Ζ.; Wang, X.; Zhao, P. Ζύμωση σε ένα δοχείο για παραγωγή ερυθριτόλης από σπόρους οινοπνευματοποιών με τη συγκαλλιέργεια Yarrowia lipolytica και Trichoderma reesei. Bioresour. Τεχνολ. 2022, 351, 127053. [CrossRef] [PubMed]

29. Wang, W.; Wei, Η.; Alahuhta, Μ.; Chen, Χ.; Hyman, D.; Johnson, DK; Zhang, Μ.; Himmel, ME Ετερόλογη έκφραση των ενζύμων ξυλανάσης σε λιπογενή ζύμη Yarrowia lipolytica. PLoS ONE 2014, 9, e111443. [CrossRef] [PubMed]

30. Nascimento, FVd; Lemes, AC; Castro, AMd; Secchi, AR; Zarur Coelho, MA A Temporal Evolution Perspective of Lipase Production by Yarrowia lipolytica in Solid-State Fermentation. Processes 2022, 10, 381. [CrossRef]

31. Mandari, V.; Nema, Α.; Devarai, SK Διαδοχική βελτιστοποίηση και μεγάλης κλίμακας παραγωγή λιπάσης χρησιμοποιώντας μίγμα τριών υποστρωμάτων από Aspergillus niger MTCC 872 με ζύμωση στερεάς κατάστασης. Process Biochem. 2020, 89, 46–54. [CrossRef]

32. Mala, JG; Edwinoliver, NG; Kamini, NR; Puvanakrishnan, R. Μικτό υπόστρωμα στερεάς κατάστασης ζύμωση για παραγωγή και εκχύλιση λιπάσης από Aspergillus niger MTCC 2594. J. Gen. Appl. Microbiol. 2007, 53, 247–253. [CrossRef]

33. Barth, G.; Gaillardin, C. Yarrowia lipolytica. Σε Μη Συμβατικές Ζύμες στη Βιοτεχνολογία. Wolf, Κ., Εκδ.; Springer: Νέα Υόρκη, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ, 1996; σελ. 313–388.

34. Moftah, OA; Grbavˇci´c, S.; Zuža, Μ.; Lukovic, N.; Bezbradica, D.; Kneževi´c-Jugovi´c, Z. Προσθήκη αξίας στο κέικ λαδιού ως απόβλητο από τη βιομηχανία επεξεργασίας λαδιού: Παραγωγή λιπάσης και πρωτεάσης από την Candida που χρησιμοποιούνται στη ζύμωση στερεάς κατάστασης. Appl. Biochem. Biotechnol. 2012, 166, 348–364. [CrossRef]

35. Contesini, FJ; da Silva, VC; Maciel, RF; de Lima, RJ; Barros, FF; de Oliveira Carvalho, P. Ανάλυση επιφάνειας απόκρισης για την παραγωγή μιας εναντιοεκλεκτικής λιπάσης από Aspergillus niger με ζύμωση στερεάς κατάστασης. J. Microbiol. 2009, 47, 563-571. [CrossRef]

36. Rigo, Ε.; Ninow, JL; Di Luccio, Μ.; Oliveira, JV; Polloni, AE; Remonatto, D.; Arbter, F.; Vardanega, R.; Oliveira, D.; Treichel, H. Lipase παραγωγή με στερεά ζύμωση σογιάλευρου με διαφορετικά συμπληρώματα. LWT Food Sci. Τεχνολ. 2010, 43, 1132–1137. [CrossRef]

37. Sun, SY; Xu, Y. Ζύμωση στερεάς κατάστασης για παραγωγή «συνθετικής λιπάσης ολόκληρων κυττάρων» από Rhizopus chinensis και ταυτοποίηση του λειτουργικού ενζύμου. Process Biochem. 2008, 43, 219-224. [CrossRef]

38. Farias, MA; Valoni, EA; Castro, AM; Coelho, MAZ Lipase Production by Yarrowia Lipolytica σε ζύμωση στερεάς κατάστασης με χρήση διαφορετικών αγρο-βιομηχανικών υπολειμμάτων. Chem. Eng. Μεταφρ. 2014, 38, 301–306.

39. Sidhu, Ρ.; Sharma, R.; Soni, SK; Gupta, JK Παραγωγή εξωκυτταρικής αλκαλικής λιπάσης από ένα νέο θερμόφιλο Bacillus sp. Folia Microbiol. 1998, 43, 51–54. [CrossRef]

40. Corzo, G.; Revah, S. Παραγωγή και χαρακτηριστικά της λιπάσης από Yarrowia lipolytica 681. Bioresour. Τεχνολ. 1999, 70, 173-180. [CrossRef]

41. Σούζα, CEC; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Χαρακτηρισμός και εφαρμογή της λιπάσης Yarrowia lipolytica που λαμβάνεται με ζύμωση στερεάς κατάστασης στη σύνθεση διαφορετικών εστέρων που χρησιμοποιούνται στη βιομηχανία τροφίμων. Appl. Biochem. Biotechnol. 2019, 189, 933–959. [CrossRef]

42. Fickers, Ρ.; Fudalej, F.; Dall, MTL; Casaregola, S.; Gaillardin, C.; Thonart, Ρ.; Nicaud, JM Ταυτοποίηση και χαρακτηρισμός γονιδίων LIP7 και LIP8 που κωδικοποιούν δύο εξωκυτταρικές λιπάσες τριακυλογλυκερόλης στη ζύμη Yarrowia lipolytica. Μυκητιακός Genet. Biol. 2005, 42, 264–274. [CrossRef]

43. Cheng, Υ.-Η.; Hsiao, FS-H.; Wen, C.-M.; Wu, C.-Y.; Dybus, Α.; Yu, Y.-H. Μικτή ζύμωση αλεύρου σόγιας από πρωτεάση και προβιοτικά και τα αποτελέσματά της στην απόδοση ανάπτυξης και την ανοσολογική απόκριση στα κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής. J. Appl. Anim. Res. 2019, 47, 339–348. [CrossRef]

44. Chakraborty, Κ.; Paul Raj, R. Επιλεκτικός εμπλουτισμός n−3 πολυακόρεστων λιπαρών οξέων με μήκος αλυσίδας ακυλίου C18–C20 από έλαιο σαρδέλας χρησιμοποιώντας λιπάση Pseudomonas fluorescens MTCC 2421. Food Chem. 2009, 114, 142–150. [CrossRef]

45. Zarai, Ζ.; Eddehech, Α.; Rigano, F.; Oteri, Μ.; Micalizzi, G.; Dugo, Ρ.; Mondello, L.; Cacciola, F. Χαρακτηρισμός μονοακυλογλυκερολών και διακυλογλυκερολών πλούσιων σε πολυακόρεστα λιπαρά οξέα που παράγονται με υδρόλυση ηπατικού ελαίου Musteleus mustelus που καταλύεται από ακινητοποιημένη βακτηριακή λιπάση. J. Chromatogr. 2020, 1613, 460692. [CrossRef]

46. ​​Yang, J.; Τραγούδι, Χ.; Wang, L.; Cui, Q. Περιεκτική ανάλυση μεταβολικών αλλοιώσεων στο Schizochytrium sp. στελέχη με διαφορετική περιεκτικότητα σε DHA. J. Chromatogr. B 2020, 1160, 122193. [CrossRef]

47. Yang, Ζ.; Jin, W.; Cheng, Χ.; Dong, Ζ.; Chang, Μ.; Wang, X. Ενζυματικός εμπλουτισμός n-3 γλυκεριδίων πολυακόρεστων λιπαρών οξέων με εκλεκτική υδρόλυση. Food Chem. 2021, 346, 128743. [CrossRef]

48. Okada, Τ.; Morrissey, MT Παραγωγή n-3 συμπυκνώματος πολυακόρεστων λιπαρών οξέων από έλαιο σαρδέλας από ακινητοποιημένη λιπάση Candida rugosa. J. Food Sci. 2008, 73, C146–C150. [CrossRef]

49. Riediger, ND; Othman, RA; Suh, Μ.; Moghadasian, MH Μια συστημική ανασκόπηση των ρόλων των n-3 λιπαρών οξέων στην υγεία και τις ασθένειες. Μαρμελάδα. Διατροφή. Αναπλ. 2009, 109, 668–679. [CrossRef] [PubMed]

50. Gao, Κ.; Chu, W.; Sun, J.; Mao, X. Ταυτοποίηση μιας αλκαλικής λιπάσης ικανής για καλύτερο εμπλουτισμό του EPA από το DHA λόγω της εκλεκτικότητας και της τοποεκλεκτικότητας λιπαρών οξέων. Food Chem. 2020, 330, 127225. [CrossRef]

51. Martins, PA; Trobo-Maseda, L.; Λίμα, FA; de Morais Júnior, WG; De Marco, JL; Salum, TFC; Παραγωγή Guisán, JM Omega-3 με υδρόλυση ιχθυελαίου με χρήση λιπάσης από Burkholderia gladioli BRM58833 ακινητοποιημένη και σταθεροποιημένη με τεχνικές μετά την ακινητοποίηση. Biochem. Biophys. Rep. 2022, 29, 101193. [CrossRef] [PubMed]

52. Lemes, AC; Egea, MB; Oliveira Filho, JGd; Gautério, GV; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Biological Approaches for Extraction of Bioactive Compounds from Agro-industrial Subproducts: A Review. Εμπρός. Bioeng. Biotechnol. 2022, 9, 1–18. [CrossRef] [PubMed]

53. Lemes, AC; Sala, L.; Ores, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Μια ανασκόπηση των τελευταίων εξελίξεων στα κρυπτογραφημένα βιοενεργά πεπτίδια από απόβλητα πλούσια σε πρωτεΐνες. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef]

54. Lemes, AC; Coelho, MAZ; Gautério, GV; Paula, LC; Filho, JGdO; Egea, MB Κεφάλαιο 11—Βιομηχανικά απόβλητα και υποπροϊόντα: Μια πηγή λειτουργικών τροφίμων, θρεπτικών ουσιών και βιοπολυμερών. Σε βιοπολυμερή σε θρεπτικά προϊόντα και λειτουργικά τρόφιμα. The Royal Society of Chemistry: Λονδίνο, Ηνωμένο Βασίλειο, 2023. σελ. 329–360.

55. Pintado, ME; Teixeira, JA Valorização de subprodutos da dústria alimentar: Obtenção de ingredientes de valor acrescentado. Bol. Biotecnol. 2015, 1, 10–12.

56. Hagler, AN; Mendonça-Hagler, LC Ζύμες από θαλάσσια και εκβολικά νερά με διαφορετικά επίπεδα ρύπανσης στην πολιτεία του Ρίο ντε Τζανέιρο, Βραζιλία. Appl. Περιβάλλω. Microbiol. 1981, 41, 173-178. [CrossRef]

57. ΑΟΑΚ. Επίσημες Μέθοδοι Ανάλυσης της AOAC International. Association of Official Analytical Chemists: Washington, DC, USA, 1995.

58. Castro, AMd; Castilho, LdR; Freire, DMG Χαρακτηρισμός κέικ babassu, canola, καστορόσπορου και ηλίανθου για χρήση ως πρώτες ύλες για διαδικασίες ζύμωσης. Ind. Crops Παρ. 2016, 83, 140–148. [CrossRef]

59. Freire, DM; Teles, EM; Bon, ΕΡ; Sant' Anna, GL, Jr. Περιορισμένη παραγωγή λιπάσης από το Penicillium σε ζυμωτήρα πάγκου: Επίδραση διατροφής άνθρακα και αζώτου, ανάδευση και αερισμός. Appl. Biochem. Biotechnol. 1997, 63–65, 409–421. [CrossRef]

60. Charney, J.; Tomarelli, RM Μια χρωματομετρική μέθοδος για τον προσδιορισμό της πρωτεολυτικής δραστηριότητας του χυμού του δωδεκαδακτύλου. J. Biol. Chem. 1947, 171, 501–505. [CrossRef] [PubMed]

61. Laemmli, Η.Β. Διάσπαση δομικών πρωτεϊνών κατά τη συναρμολόγηση της κεφαλής του βακτηριοφάγου Τ4. Nature 1970, 227, 680–685. [CrossRef] [PubMed]

Αποποίηση ευθύνης/Σημείωση εκδότη:Οι δηλώσεις, οι απόψεις και τα δεδομένα που περιέχονται σε όλες τις δημοσιεύσεις είναι αποκλειστικά του μεμονωμένου συγγραφέα ή συντελεστών και όχι του MDPI ή/και του συντάκτη. Το MDPI ή/και ο συντάκτης αποποιούνται την ευθύνη για οποιονδήποτε τραυματισμό ατόμων ή περιουσίας που προκύπτει από οποιεσδήποτε ιδέες, μεθόδους, οδηγίες ή προϊόντα που αναφέρονται στο περιεχόμενο.

【Για περισσότερες πληροφορίες:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】