Ιριδοειδείς και άκυκλοι μονοτερπενικοί γλυκοσίδες, κανκανοσίδες L, M, N, O, και P από το Cistanche Tubulosa

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Cistanche tubulosa(SCHRENK) Το R. WIGHT (Orobanchaceae) είναι ένα πολυετές παρασιτικό φυτό που αναπτύσσεται στις ρίζες του είδους Salvadora ή Calotropis, που διανέμεται στη Βόρεια Αφρική, την Αραβία και τις ασιατικές χώρες.1) Οι βλαστοί αυτού του φυτού (Kanka-nikujuyou στα Ιαπωνικά) έχουν παραδοσιακά χρησιμοποιείται για τη θεραπεία της ανικανότητας, της στειρότητας, της οσφυϊκής μοίρας και της σωματικής αδυναμίας, καθώς και ως παράγοντας προώθησης της κυκλοφορίας του αίματος. είκοσι τέσσερις φαινυλαιθανοειδείς αμινογλυκοσίδες συμπεριλαμβανομένων κανκανοσίδων Η1, Η2, Ι, J1, J2, Κ1 και Κ2, και δύο ακυλιωμένα ολιγοσάκχαρα από φρέσκα στελέχη Cistanchetubulosa.5,6) Επιπλέον, κύριαφαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες,εχινακοσίδη, ακτεοσίδη,και ισοακτεοσίδη, βρέθηκε ότι αναστέλλει την αύξηση των επιπέδων της ασπαρτικής αμινοτρανσφεράσης (sAST) και της αμινοτρανσφεράσης αλανίνης (sALT) στον ορό στο τραυματισμένο ήπαρ των ποντικών που προκαλείται από D-γαλακτοζαμίνη (D-GalN)/λιποπολυσακχαρίτη σε δόσεις 25-100 mg/kg per os. po). Οι δομικές απαιτήσεις των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων για την ηπατοπροστατευτική δράση διευκρινίστηκαν επίσης. και Ν (3), επτά άκυκλοι μονοτερπενικοί γλυκοσίδες συμπεριλαμβανομένων κανκανοσίδων Ο (4) και Ρ(5), τρία φαινυλοπροπανοειδή και τέσσερις λιγνάνες. Αυτή η εργασία ασχολείται με την απομόνωση και την αποσαφήνιση της δομής πέντε νέων ενώσεων (1-5).

Νωποί μίσχοι C. tubulosa (καλλιεργημένοι στο Urumuqi, επαρχία Xin jiang, Κίνα) εκχυλίστηκαν με μεθανόλη υπό αναρροή για να δώσουν ένα μεθανολικό εκχύλισμα (8,36 τοις εκατό από τα φρέσκα στελέχη). Από το μεθανολικό εκχύλισμα, κλάσματα εκλούσματος Η2Ο- και MeOH (5,63 τοις εκατό και 2,73 τοις εκατό, αντίστοιχα) ελήφθησαν με χρωματογραφία στήλης Diaion HP-20 (H2O→MeOH) όπως περιγράφηκε προηγουμένως.5) Το κλάσμα που εκλούστηκε με MeOH ήταν υποβλήθηκε σε χρωματογραφίες στήλης SiO2 και ODS και τελικά HPLC για να δώσει κανκανοσίδες L (1, 0.0026 τοις εκατό ), M (2, 0).{{{ 27}}001 τοις εκατό ), N (3, 0.00{{6{0}}7 τοις εκατό ) , O (4, 0.0{{9{0}}2{{105}} τοις εκατό ) και P (5, {{118} }.0002 τοις εκατό ), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0.197 τοις εκατό ), bartsioside3,7) (7, 0.0583 τοις εκατό ), γλουροζίτη3,7) (8, 0.0443 τοις εκατό ), κανκανοϊσίδη Α3) (9, 22,3 mg, 0,0010 τοις εκατό ), μουσαενοζιδικό οξύ3,7) (10, 0,0056 τοις εκατό ), 8- επιλογανικό οξύ3,8) (11, 0,0023 τοις εκατό ), 8-επιδεοξυλογανικό οξύ3,7) (12, 0,0004 τοις εκατό), γενιποσιδικό οξύ3,7) (13, 0,004 τοις εκατό ), κανκανοσίδη Ε3) (14, 0,0026 τοις εκατό ), (2E,6Z)-8-β D-γλυκοπυρανοσυλοξυ-2,6-διμεθυλ{-2,6-οκταδιενοϊκό οξύ3,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 τοις εκατό), (2E,6E){{95 }},7-διμεθυλ-8-υδροξυοκταδιέν-1-υλ-ObD-glu copyranoside10) (16, 0,0082 τοις εκατό), 8-υδροξυγερανιόλη 8-Ob-D-γλυκοπυρανοσίδη11 ) (17, 0,0044 τοις εκατό ), βετουλαλβουζίδη Α12) (18, 0,0004 τοις εκατό ), κωνοφόρα13) (19, 0,0002 τοις εκατό ), συριγίνη13) (20, 0,0015 τοις εκατό ), σιναπική αλδεΰδη {{128}4, γλυκοζίδη {{128}4, ραβϋ 0,0001 τοις εκατό ), ( )-πινορεσινόλη ObD-γλυκοπυρανοσίδη 4,8,15) (22, 0,0010 τοις εκατό ), eucommin A16) (23, 0,0002 τοις εκατό ), ισοευκομμίνη A17) (24, 0,0010 τοις εκατό -Dsy-ring) και ( ) glucopyra noside4,8,18) (25, 0,0044 τοις εκατό).

Cistanche tubulosaβελτίωση της σεξουαλικής λειτουργίας

Δομές Kankanosides L (1), M (2) και N (3)

Η κανκανοσίδη L (1) ελήφθη ως λευκή σκόνη με αρνητική οπτική περιστροφή ([a]D 26 45,7 σε MeOH). Το φάσμα υπερύθρων του έδειξε ισχυρή ζώνη απορρόφησης στα 3433 και 1{{2{{0}}80 cm 1 που υποδηλώνει ένα τμήμα γλυκοσιδίου. Ο γρήγορος βομβαρδισμός ατόμων (FAB)-MS 1 εκτέλεσης σε τρόπους θετικού και αρνητικού ιόντος έδειξε οιονεί μοριακές κορυφές ιόντων σε m/z 371 [M Na] και 347 [MH], αντίστοιχα, και ο μοριακός τύπος προσδιορίστηκε ως C15H24O9 με μέτρηση FAB-MS υψηλής ανάλυσης. Η όξινη υδρόλυση του 1 με 1,0 Μ υδροχλωρικό οξύ (HCl) απελευθέρωσε D-γλυκόζη, η οποία αναγνωρίστηκε με ανάλυση HPLC χρησιμοποιώντας έναν ανιχνευτή οπτικής περιστροφής.3-6) Τα φάσματα 1 H- και 13C-NMR του 1 (CD3OD, Πίνακες 1, 2), τα οποία εκχωρήθηκαν με διάφορα πειράματα NMR,19) έδειξαν σήματα ως σηματοδοτημένα σε τέσσερα μεθυλένια [d 1,43 (1H, br dd, J ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 (1H, br dd, J περίπου 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= περίπου 8, 14 Hz, 6b-H), 3,50 ( 1Η, ddd, J 2.4, 12.5, 13.0 Hz, 3a-H), 3.83 (1H, br dd, J=περίπου 5, 13 Hz, 3b-H), 3.78, 4.12 (1Η το καθένα, και τα δύο d, J 13,1 Hz, 10-H2)], δύο μεθίνες [d 2,15 (1H, dd, J 7,2, 8,9 Hz, 9-H) και 2,23 (1H, m, 5- Η)], και μια ομάδα ακετάλης [d 4,81 (1Η, d, J 8,9 Hz, 1-Η)] μαζί με ένα τμήμα β-γλυκοπυρανοσυλίου [d 4,70 (d, J 7,9 Hz, 1 - Η)]. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1, το πείραμα φασματοσκοπίας συσχέτισης 1 H–1H (1 H–1 H COSY) στο 1 έδειξε την παρουσία μερικών δομών γραμμένων με έντονες γραμμές. Στο πείραμα συσχέτισης ετεροπυρηνικών πολλαπλών δεσμών (HMBC) στο 1, παρατηρήθηκαν συσχετίσεις μεγάλης εμβέλειας μεταξύ των ακόλουθων πρωτονίων και ανθράκων (1-H and 3-C, 8-C; {{ 124}}H and 1-C; 7-H and 8-C, 10-C; 9-H and 8-C; {{131 }}H2 and 7-C, 8-C; 1 -H and 1-C) όπως φαίνεται στο Σχ. 1. Στη συνέχεια, η σχετική στερεοδομή του 1 χαρακτηρίστηκε από ευαίσθητη στη φάση πυρηνική Πείραμα φασματοσκοπίας ενίσχυσης Overhauser (ευαίσθητο στη φάση NOESY), το οποίο έδειξε συσχετίσεις NOE μεταξύ των ακόλουθων ζευγών πρωτονίων (1-H και 3a H; 3a-H και 4a-H; 3b-H και 4b-H; 4b-H και 5-H, 9-H; 5- H and 6b-H, 9-H; 6a-H and 7-H; 7-H και 10-H2), όπως φαίνεται στο Σχ. 1. Τα φάσματα 1 H- και 13C-NMR του 1 ήταν υπερτιθέμενα σε αυτά του κύριου ιριδοειδή συστατικού 6-deoxycatalpol (6), εκτός από τα οφειλόμενα σήματα στο κορεσμένο τμήμα d-λακτόλης. Τέλος, η υδρογόνωση του 6 έδωσε 1, έτσι ώστε η στερεοδομή της κανκανοσίδης L αποσαφηνίστηκε ότι είναι 3,4- διυδρο-6-δεοξυκαταλπόλη (1).

Η κανκανοσίδη Μ (2) ελήφθη ως λευκή σκόνη με αρνητική οπτική περιστροφή ([a]D 26 18,7 σε MeOH). Το φάσμα IR του 2 έδειξε ζώνες απορρόφησης στα 3433, 1736, 1655 και 1076 cm 1 που αποδίδονται σε υδροξύλιο, d-λακτόνη, ολεφίνη και αιθερικά τμήματα. Το φάσμα θετικών ιόντων FAB-MS 2 έδειξε μια κορυφή οιονεί μοριακού ιόντος σε m/z 353 [Μ Na] και ο μοριακός τύπος προσδιορίστηκε ως C15H22O8 με μέτρηση FAB-MS θετικών ιόντων υψηλής ανάλυσης. Οξύ υδρόλυση του 2 με 1,0 Μ HCl απελευθερωμένη D-γλυκόζη. Τα φάσματα 1H- και 13C NMR του 2 (CD3OD, Πίνακες 1, 2) έδειξαν σήματα που μπορούν να αποδοθούν σε τέσσερα μεθυλένια [d 1,66, 2,11 (1Η το καθένα, και τα δύο m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1Η το καθένα , αμφότερα m, 6-H2), 4.29 (1H, ddd, J 2.8, 8.4, 14.3 Hz, 3b-H), 4.32, 4.51 (1H το καθένα, και τα δύο d, J 13.1 Hz, 10- Η2), 4,35 (1Η, ddd, J 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], δύο μεθίνες [d 2,97 (1Η, m, 5-Η), 3,82 (1Η, br s, {{ 84}}Η)], μια ολεφίνη [d 5,94 (1Η, m, 7-Η)], και μια ομάδα κορεσμένης λακτόνης (d C 174,9) μαζί με ένα τμήμα bD-γλυκοπυρανοσυλίου [d 4,32 (1Η, d J 7,9 Ηζ, 1-Η)]. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1, το πείραμα 1 H–1H COZY στο 2 έδειξε την παρουσία μερικών δομών γραμμένων με έντονες γραμμές και, στο πείραμα HMBC, παρατηρήθηκαν συσχετίσεις μεγάλης εμβέλειας μεταξύ των ακόλουθων ζευγών πρωτονίων και άνθρακα ({{105 }}H και 1-C; 7-H και 9-C; 9-H και 1-C, 8-C; {{112} }H2 και 7-C, 8-C, 9-C· 1 -H και 10-C). Η σχετική στερεοδομή του 2 χαρακτηρίστηκε από ένα ευαίσθητο στη φάση πείραμα NOESY, το οποίο έδειξε συσχετίσεις NOE μεταξύ των ακόλουθων ζευγών πρωτονίων (3a-H και 4a-H; 3b-H και 4b-H; 4b-H και 5- Η· 5-Η και 6b-H, 9-Η) όπως φαίνεται στο Σχ. 1. Έτσι, η στερεοδομή του 2 διευκρινίστηκε όπως φαίνεται.

Η κανκανοσίδη Ν (3) απομονώθηκε ως λευκή σκόνη με αρνητική οπτική περιστροφή ([a]D 25 24,6 σε MeOH). Στο FAB-MS θετικού ιόντος του 3, παρατηρήθηκε κορυφή οιονεί μοριακού ιόντος σε m/z 371 [Μ Na]. Ο μοριακός τύπος C16H28O8 προσδιορίστηκε με μέτρηση FAB-MS υψηλής ανάλυσης. Οξύ υδρόλυση του 3 με 1.0 Μ HCl απελευθερωμένη D-γλυκόζη. Τα δεδομένα 1H- και 13C-NMR (CD3OD, Πίνακες 1, 2) έδειξαν σήματα που μπορούν να αποδοθούν σε ένα μεθύλιο [d 1.07 (3H, d, J 7.2 Hz, 10-H3)] , τέσσερα μεθυλένια {d 1,37, 1,87 (1Η το καθένα, και τα δύο m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1Η έκαστο, αμφότερα m, 6-Η2), [3,65 (1Η, dd, J 9,1 , 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J 5,9, 9,8 Hz), 11-H2], και [3,70 (1H, dd, J 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), {{ 71}}Η2]}, τέσσερις μεθίνες [d 1,69 (1Η, m, 4-Η), 1,75 (1Η, m, 9-Η), 2,06 (1Η, m, 8- Η), 2,16 (1Η, m, 5-Η)], και μια ομάδα ημιακετάλης [d 4,67 (1Η, d, J 7,4 Hz, 1-Η)] μαζί με ένα τμήμα bD-γλυκοπυρανοσυλίου [ d 4,26 (1Η, d, J 7,9 Hz, 1-Η)]. Η ιριδοειδής δομή του 3 διευκρινίστηκε με πειράματα 1 H–1 H COZY και HMBC και η σχετική στερεοδομή χαρακτηρίστηκε από ένα ευαίσθητο στη φάση πείραμα NOESY όπως φαίνεται στο Σχ. 1. Συνεπώς, η στερεοδομή του 3 διευκρινίστηκε όπως φαίνεται.

Cistanche tubulosa

Δομές Κανκανοσίδων Ο (4) και Ρ (5)

Οι κανκανοσίδες Ο (4) και Ρ (5), C16H26O8, ελήφθησαν επίσης ως λευκές σκόνες με αρνητικές οπτικές περιστροφές (4: [a]D 23 26,1· 5: [a]D 21 32,7 αμφότερες σε MeOH). Τα φάσματα υπερύθρων των 4 και 5 έδειξαν ζώνες απορρόφησης στα 3433, 1696, 1647 και 1076 cm 1 για 4 και στα 3434, 1701, 1647 και 1{{96} }76 cm 1 για 5, που αποδίδονται σε γλυκοσιδικές, καρβοξυλικές και ολεφινικές λειτουργίες. Τα φάσματα υπεριώδους ακτινοβολίας τους έδειξαν κοινό μέγιστο απορρόφησης στα 217 nm, υποδεικνύοντας την παρουσία ενός τμήματος β-ακόρεστου καρβοξυλικού οξέος και στα δύο. Η όξινη υδρόλυση των 4 και 5 απελευθέρωσε D-γλυκόζη, ενώ με την ενζυματική υδρόλυση με β γλυκοσιδάση, 4 και 5 έδωσαν (2E,6E)-8-υδροξυ-2,6-διμεθυλ{{39 }},{{40}}οκταδεκενοϊκό οξύ20) (4a) και (2E,6E)-8-υδροξυ-3,7- διμεθυλ{{ 48}},6-οκταδεκενοϊκό οξύ21) (5α), αντίστοιχα. Τα δεδομένα 1H- και 13C-NMR του 4 (CD3OD, Πίνακες 2, 3) έδειξαν σήματα που μπορούν να αποδοθούν σε δύο μεθύλια [d 1.71 (3H, br s, 10-H3), 1.81 (3H, d, J 1.0 Hz , 9-H3)], τρία μεθυλένια {d 2.19 (2H, br t, J περίπου 7 Hz, 5-H2), 2.36 (2H, m, 4-H2), [ 4.24 (1Η, dd, J 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1Η, dd, J 6.2, 12.0 Hz), 8-Η2]}, και δύο τρις ​​υποκατεστημένες ολεφίνες [d 5.41 (1Η, ddd, J 1. 6.2, 7.6 Hz, 7- H), 6.75 (1H, tq, J 7.2, 1.0 Hz, 3-H)] μαζί με ένα μέρος bD γλυκοπυρανοσυλίου [d 4.34 (d, J 7.8 Hz, 1 -Η)]. Με τη σύγκριση των σημάτων άνθρακα στο φάσμα 13C-NMR του 4 με αυτά του 4a, παρατηρήθηκε μετατόπιση γλυκοζυλίωσης στη θέση 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Η θέση του δεσμού γλυκοζίτη επιβεβαιώθηκε επίσης από πειράματα HMBC όπως φαίνεται στο Σχ. 2. Συνεπώς, η στερεοδομή του 4 διευκρινίστηκε ότι είναι (2E,6E)-8-bD-γλυκοπυρανοσυλοξυ-2,{{{ 143}}διμεθυλ{-2,6-οκταδεκενοϊκό οξύ. Από την άλλη πλευρά, τα δεδομένα 1 H- και 13C-NMR του 5 (CD3OD, Πίνακες 2, 3) έδειξαν την παρουσία ενός (2E,6E)-8-υδροξυ-3,{{158} }διμεθυλ-2,6-ομάδα οκταδεκενοϊκού οξέος [d 1.70 (3H, br s, 10-H3), 2.14 (3H, br s, 9-H3), 2.24 ( 2Η, m, 4-Η2), 2,27 (2Η, m, 5-Η2), 4,05, 4,20 (1Η έκαστο, και τα δύο br d, J περίπου 12 Hz, 8-Η2) , 5,47 (1Η, tq, J 7,1, 0,9 Hz, 6-Η), 5,67 (1Η, br s, 1-Η)] μαζί με ένα τμήμα bD-γλυκοπυρανοσυλίου [d 4,23 (d, J 7,7 Hz, 1-Η)]. Η συνδεσιμότητα του τμήματος bD-γλυκοπυρανοσυλίου στο 5 διευκρινίστηκε με βάση πειράματα HMBC όπως φαίνεται στο Σχ. 2. Επιπλέον, παρατηρήθηκε μια τυπική μετατόπιση γλυκοζυλίωσης για τα σήματα στη θέση 8- (d C 5: 75,6; 5α: 68,8). Με βάση τα προαναφερθέντα στοιχεία, η στερεοδομή του 5 προσδιορίστηκε ότι είναι (2E,6E)-8-bD-γλυκοπυρανοσυλοξυ-3,7-διμεθυλ{-2,{ {230}}οκταδιενοϊκό οξύ.

Επιδράσεις των συστατικών στην κυτταροτοξικότητα που προκαλείται από τον παράγοντα νέκρωσης όγκου-α (TNF-a) σε κύτταρα L929

Ο TNF-a είναι γνωστό ότι προκαλεί μια ποικιλία τραυματισμών οργάνων μέσω της πρόκλησης κυτταρικής απόπτωσης. Στην περίπτωση του ήπατος, οι βιολογικές επιδράσεις του TNF-a έχουν εμπλακεί σε ηπατική βλάβη που προκαλείται από ηπατικές τοξίνες, ισχαιμία/επαναιμάτωση, ιογενή ηπατίτιδα και αλκοόλ.22-24) Επομένως, ο TNF-a θεωρείται σημαντικός στόχος της ανακάλυψης αντιφλεγμονωδών και ηπατοπροστατευτικών παραγόντων. Βάσει της προαναφερθείσας ιδέας, διερευνήσαμε προστατευτικά συστατικά από φυσικά απαντώμενα προϊόντα στον επαγόμενο από TNF-α κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα L929, μια ευαίσθητη κυτταρική σειρά TNF-a.25) Στο παρελθόν, έχουμε αναφέρει ότι αρκετά συστατικά από Piper Chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30, 31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) και Sapindus rarak, 36-38) βρέθηκαν να παρουσιάζουν ανασταλτικές επιδράσεις του TNF-a -επαγόμενη κυτταροτοξικότητα σε κύτταρα L929. Δεδομένου ότι τα φαινυλαιθανοειδή συστατικά του C. tubulosa (π.χ. εχινακοσίδη, ακτεοσίδη και ισοακτεοσίδη, κ.λπ.) 5) ανέστειλαν επίσης αυτή την κυτταροτοξικότητα, εξετάσαμε περαιτέρω τα συστατικά ιριδοειδή, φαινυλοπροπανοειδών και λιγνάνης όπως φαίνεται στον Πίνακα 4. Ως αποτέλεσμα, (9, αναστολή: 16,3 2.0 τοις εκατό στα 100 mM), μουσαινοσιδικό οξύ (10, 44,7 8,7 τοις εκατό), 8-επιλογανικό οξύ (11, 10,7 0,4 τοις εκατό), {{44}υδροξυγερανιόλη 8-Ο ObD-γλυκοπυρανοσίδης (17, 21,3 2,4 τοις εκατό ) και η ( )-πινορεσινόλη ObD-γλυκοπυρανοσίδη (22, 22,3 1,6 τοις εκατό ), βρέθηκε να παρουσιάζουν σημαντική δραστηριότητα. Αν και οι δραστηριότητές τους ήταν πιο αδύναμες από εκείνες του εχινακοσίδη (IC50 31,1 mM), του ακτεοσιδίου (17,8 mM) και του ισοακετοζίτη (22,7 mM), των βασικών συστατικών φαινυλαιθανοειδών.5)

Πειραματικός

Τα ακόλουθα όργανα χρησιμοποιήθηκαν για τη λήψη φασματικών και φυσικών δεδομένων: ειδικές περιστροφές, ψηφιακό πολόμετρο Horiba SEPA-300 (l 5 cm). Φάσματα UV, φασματόμετρο Shimadzu UV-1600. Φάσματα υπερύθρων, φασματόμετρο Shimadzu FTIR-8100. 1 H- και 13C-NMR φάσματα, JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) και JEOL JNM-ECS400 (400, 100 HMz) φασματόμετρα με τετραμεθυλοσιλάνιο ως εσωτερικό πρότυπο. FAB-MS και FAB-MS υψηλής ανάλυσης, φασματόμετρο μάζας JEOL JMS-SX 102A. Ανιχνευτής HPLC, Shimadzu RID-10Δείκτης διάθλασης, Shimadzu SPD-10A UV–VIS και Shodex OR-2 οπτικοί ανιχνευτές περιστροφής. Στήλες HPLC, Cosmosil 5C18-MS-II και pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) και (250 20 mm id) στήλες χρησιμοποιήθηκαν για αναλυτικούς και προπαρασκευαστικούς σκοπούς, αντίστοιχα.

Χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθες πειραματικές συνθήκες για τη χρωματογραφία: χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής κανονικής φάσης (CC), σιλικαζέλ 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., 63—210 mesh, σφαιρικό, ουδέτερος); αντίστροφης φάσης silica gel CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui) και Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., 100—200 mesh); TLC κανονικής φάσης, προεπικαλυμμένες πλάκες TLC με σιλικαζέλ 60F254 (Merck, 0,25 mm). TLC αντίστροφης φάσης, προεπικαλυμμένες πλάκες TLC με σιλικαζέλ RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm). αντίστροφης φάσης HPTLC, προεπικαλυμμένες πλάκες TLC με σιλικαζέλ RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm), η ανίχνευση επιτεύχθηκε με ψεκασμό με 1 τοις εκατό Ce(SO4)2– 10 τοις εκατό υδατικό H2SO4, ακολουθούμενη από θέρμανση .

Φυτική ύλη

Αυτό το στοιχείο περιγράφηκε σε προηγούμενη αναφορά.

Εξαγωγή και απομόνωση

Νωποί μίσχοι C. tubulosa (2,98 kg) κόπηκαν λεπτά και εκχυλίστηκαν τρεις φορές με μεθανόλη υπό αναρροή για 3 ώρες. Η εξάτμιση του διαλύτη υπό μειωμένη πίεση έδωσε ένα μεθανολικό εκχύλισμα (249,1 g, 8,36 τοις εκατό). Το μεθανολικό εκχύλισμα υποβλήθηκε σε Diaion HP-20 CC (5,0 kg, H2O→MeOH) για να δώσει κλάσματα εκλουόμενα από Η2Ο- και MeOH (167,84 g, 5,63 τοις εκατό και 81,21 g, 2,73 τοις εκατό, αντίστοιχα). Το κλάσμα που εκλούστηκε με MeOH (61,00 g) υποβλήθηκε σε κανονικής φάσης σιλικαζέλ CC [1,8 kg, CHCl3– MeOH–H2O (15 : 3 : 0.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] για να δώσει επτά κλάσματα [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 (0,89 g), 4 (10,69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g) και 7 (4,6{{104}} g)], όπως περιγράφηκε προηγουμένως.5) Το κλάσμα 1 (1,12 g) διαχωρίστηκε με αντίστροφης φάσης silica gel CC [55 g, MeOH–H2O (4 0 : 60, v/v)→MeOH] για να δώσει πέντε κλάσματα [Fr. 1-1 (132,8 mg), 1-2 (267.{0 mg), 1-3 (182,8 mg), {{80}} (31{{ 156}}.9 mg) και 1-5 (91.4 mg)]. Το κλάσμα 1-1 (132,8 mg) καθαρίστηκε περαιτέρω με HPLC [Cosmosil 5C{{9{{160}}}}MS-II, CH3CN–1 τοις εκατό υδατικό AcOH (1{{166} } : 90, v/v)] για να δώσει κανκανοσίδη M (2, 2,8 mg, 0.{{203}}{{22{{24{{248 }}}}}}01 τοις εκατό ), βαρτσιοσίδη (7, 5,2 mg, 0.0002 τοις εκατό ), σιναπική αλδεΰδη {{1{{295 }}6}}O-bD-γλυκοπυρανοσίδη (21, 1,4 mg, {{3{{3{3{{{310}}}9}}5}}{{320} }}}.0001 τοις εκατό ). Το κλάσμα 1-2 (267.{{350}} mg) καθαρίστηκε περαιτέρω με HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 τοις εκατό υδατικό AcOH (7:93, v/v)] για να δώσει (2E,6E)-3,{7-διμεθυλ-8-υδροξυοκταδιέν{{13{{360}}}}υλ-Ο-bD -γλυκοπυρανοσίδη (16, 15,8 mg, {{370}}.{{406}}007 τοις εκατό ), 8-υδροξυγερανιόλη 8-ObD γλυκοπυρανοσίδη (17, 5,2 mg, 0,0002 τοις εκατό ), ( )-pinoresinol ObD-glucopyra noside (22, 22,0 mg, 0,0010 τοις εκατό ), eucommin A (23, 5,0 mg, 0,000 τοις εκατό A, 0,00eu2%) (24, 21,3 mg, 0,0010 τοις εκατό), και ()-συριγγαρεσινόλη ObD-γλυκοπυ ρανοσίδη (25, 98,0 mg, 0,0044 τοις εκατό). Το κλάσμα 2 (9,56 g) διαχωρίστηκε με αντίστροφης φάσης σιλικαζέλ CC [400 g, MeOH–H2O (10: 90, ν/ν)→MeOH→ ακετόνη] για να δώσει πέντε κλάσματα [Fr. 2-1 (55,9 mg), 2-2 (4,48 g), 2-3 (3,42 g), 2-4 (1,16 g) και 2-5 (31,9 mg) ], όπως περιγράφηκε προηγουμένως.5) Το κλάσμα 2-2 (500,0 mg) υποβλήθηκε σε HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 τοις εκατό υδατικό AcOH (5 : 95, ν/ν )] για να δώσει κανκανοσίδη L (1, 6,6 mg, 0,0026 τοις εκατό) και 6-δεοξυκαταλπόλη (6, 455,5 mg, 0,182 τοις εκατό). Το κλάσμα 2-3 (1,00 g) υποβλήθηκε σε HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 τοις εκατό υδατικό AcOH (7: 93, ν/ν)] για να δώσει επτά κλάσματα [Fr . 2-3-1 (66,5 mg), 2-3-2 (20,4 mg), 2-3-3 (26,0 mg), 2-3-4 (136,6 mg), 2-3-5 [ 7 (380,6 mg) , 0,0581 τοις εκατό )], 2-3-6 [γλουροζίτη (8, 285,1 mg, 0,0435 τοις εκατό )] και 2-3-7 (84,9 mg)]. Το κλάσμα 2-3-4 (106,6 mg) καθαρίστηκε περαιτέρω με HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 τοις εκατό υδατικό AcOH (5: 95, ν/ν)] για να δώσει το 6 (68,4 mg, 0,0134 τοις εκατό) μαζί με σαλιδροζίδη5) (13,7 mg, 0,0027 τοις εκατό). Το κλάσμα 2-4 (1,16 g) υποβλήθηκε σε HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 τοις εκατό υδατικό AcOH (15: 85, ν/ν) και Cosmosil pNAP, CH3CN-1 τοις εκατό υδατικό AcOH (10:90 ή 15:85, ν/ν)] για να δώσει κανκανοσίτες Ν (3, 15,6 mg, 0,0007 τοις εκατό), Ο (4, 44,1 mg, 0,0020 τοις εκατό) και Ρ (5, 4,2 mg, 0,0002 ποσοστιαία κανκανοσίδη Ε (14, 58,1 mg, 0,0026 τοις εκατό), (2E,6Z)-8-bD-γλυκοπυ ρανοσυλοξυ-2,6-διμεθυλ-2,{{341}οκταδιενοϊκό οξύ (15, 31,0 mg, 0,0014 τοις εκατό), 16 (168,6 mg, 0,0075 τοις εκατό), 17 (94,3 mg, 0,0042 τοις εκατό), βετουλαλβουζίδη Α (18, 8,1 mg, 0,0004 τοις εκατό), κωνοφόρα (19,0,0 τοις εκατό) ), και συριγίνη (20, 33,9 mg, 0,0015 τοις εκατό). Το κλάσμα 4 (10,69 g) διαχωρίστηκε με αντίστροφης φάσης πυριτική πηκτή CC [500 g, MeOH–H2O (30: 70, ν/ν)→MeOH→ακετόνη] για να δώσει τέσσερα κλάσματα [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7,06 g), 4-3 (1,57 g) και 4-4 (792,8 mg)], όπως περιγράφηκε προηγουμένως.5) το κλάσμα 4-1 (500,0 mg) καθαρίστηκε με HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 τοις εκατό υδατικό AcOH (10: 90, ν/ν)] για να δώσει μουσσαινοσιδικό οξύ (10, 39,1 mg, 0,0031 τοις εκατό) και γενιποσιδικό οξύ (13, 51,2 mg, 0,0040 τοις εκατό). Το κλάσμα 5 (8,84 g) διαχωρίστηκε με αντίστροφης φάσης σιλικαζέλ CC [400 g, MeOH–H2O (20: 80→30: 70, ν/ν)→MeOH→ακετόνη] για να δώσει επτά κλάσματα [Fr. 5-1 ​​(870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g) και 5-7 (130,1 mg)], όπως περιγράφηκε προηγουμένως. 5) Το κλάσμα 5-1 (870,2 mg) καθαρίστηκε περαιτέρω με HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN –1 τοις εκατό υδατικό AcOH (5:95, ν/ν)] για να δώσει 10 (55,3 mg, 0,0025 τοις εκατό) και 8-επιλογανικό οξύ (11, 51,5 mg, 0,0023 τοις εκατό).

Κανκανοσίδη L (1): Λευκή σκόνη, [a]D 26 45,7 (c 0,48, MeOH). Υψηλής ανάλυσης θετικού ιόντος FAB-MS: Υπολογ. για C15H24O9Na [M Na] 371,1318; Βρέθηκαν 371.1309. IR (KBr, cm1): 3433, 2928, 1080. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: δίνεται στον Πίνακα 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: δίνεται στον Πίνακα 2. Θετική- ιόν FAB-MS m/z: 371 [Μ Na]. Αρνητικού ιόντος FAB-MS m/z: 347 [ΜΗ].

Κανκανοσίδη Μ (2): Λευκή σκόνη, [a]D 26 18,7 (c 0,11, MeOH). Υψηλής ανάλυσης θετικού ιόντος FAB-MS: Υπολογ. για C15H22O8Na [M Na] 353,1212; Βρέθηκαν 353.1208. IR (KBr, cm1): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: δίνεται στον Πίνακα 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: δίνεται σε 2. FAB-MS θετικού ιόντος m/z: 353 [Μ Na].

Κανκανοσίδη Ν (3): Λευκή σκόνη, [a]D 25 24,6 (c 1.00, MeOH). Υψηλής ανάλυσης θετικού ιόντος FAB-MS: Υπολογ. για C16H28O8Na [Μ Na] 371,1682; Βρέθηκαν 371,1686. IR (KBr, cm1): 3415, 2874, 1076, 1028. 1H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: δίνεται στον Πίνακα 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: δίνεται στον Πίνακα 2. FAB-MS θετικού ιόντος m/z: 371 [Μ Na].

Κανκανοσίδη Ο (4): Λευκή σκόνη, [a]D 23 26,1 (c 2,30, MeOH). Υψηλής ανάλυσης θετικού ιόντος FAB-MS: Υπολογ. για C16H26O8Na [M Na] 369,1525; Βρέθηκαν 369.1528. UV [l max (log e), MeOH, nm]: 217 (4,04). IR (KBr, cm1): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: δίνεται στον Πίνακα 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: δίνεται σε 2. FAB-MS θετικού ιόντος m/z: 369 [Μ Na].

Κανκανοσίδη Ρ (5): Λευκή σκόνη, [a]D 21 32,7 (c 0,18, MeOH). Υψηλής ανάλυσης θετικού ιόντος FAB-MS: Υπολογ. για C16H26O8Na [M Na] 369,1525; Βρέθηκαν 369.1520. UV [l max (log e), MeOH, nm]: 217 (4,08). IR (KBr, cm1): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: δίνεται στον Πίνακα 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: δίνεται σε 2. FAB-MS θετικού ιόντος m/z: 369 [Μ Na].

Οξική υδρόλυση κανκανοσιδών L—P (1—5): Διαλύματα 1—5 (κάθε 1.0 mg) σε 1.0 M HCl (1.0 ml) ήταν. θερμαίνεται στους 80 βαθμούς για 3 ώρες. Αφού ψύχθηκε, το μίγμα της αντίδρασης εξουδετερώθηκε με Amberlite IRA-400 (μορφή ΟΗ) και οι ρητίνες απομακρύνθηκαν με διήθηση. Μετά την απομάκρυνση του διαλύτη υπό μειωμένη πίεση, το υπόλειμμα διαχωρίστηκε με τη στήλη φυσιγγίου Sep-Pak C18 (H2O→MeOH). Το κλάσμα που εκλούστηκε με Η2Ο υποβλήθηκε σε ανάλυση HPLC υπό τις ακόλουθες συνθήκες: στήλη HPLC, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan). ανίχνευση, οπτική περιστροφή [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Τόκιο, Ιαπωνία); κινητή φάση, CH3CN–H2O (85: 15, ν/ν); αναλογία 0,8 ml/min]. Η ταυτοποίηση της D-γλυκόζης που υπάρχει στα κλάσματα 1-5 που εκλούστηκαν με H2O πραγματοποιήθηκε με σύγκριση των χρόνων κατακράτησης και της οπτικής περιστροφής τους με εκείνη ενός αυθεντικού δείγματος [tR 17,9 min (θετικό)].

Υδρογόνωση {{0}}Deoxycatalpol (6) Ένα εναιώρημα 6 (12.0 mg) και 10 τοις εκατό άνθρακα παλλαδίου (5.0 mg) σε MeOH (2,0 ml) αναδεύτηκε σε θερμοκρασία δωματίου υπό ατμόσφαιρα Η2 για 2 ώρες. Ο καταλύτης διηθήθηκε και το διήθημα συμπυκνώθηκε υπό ελαττωμένη πίεση για να δώσει 1 (12,0 mg, ποσοτική).

Ενζυματική Υδρόλυση Κανκανοσιδών Ο (4) και Ρ (5) με β-γλυκοσιδάση Σε διάλυμα 4 (8,0 mg) σε Η2Ο (1,5 ml) προστέθηκε β-γλυκοσιδάση (4,7 mg, από αμύγδαλο, Oriental Yeast Co., Τόκιο, Ιαπωνία) και το διάλυμα αναδεύτηκε στους 37 βαθμούς για 24 ώρες. Η αντίδραση σβήστηκε με την προσθήκη EtOH (5,0 ml), το μίγμα συμπυκνώθηκε υπό μειωμένη πίεση. Το υπόλειμμα εκχυλίστηκε με EtOAc και η εξάτμιση του διαλύτη έδωσε (2Ε, 6Ε)-8-υδροξυ-2,{{20}}διμεθυλ-2,{{22} }οκταδεκενοϊκό οξύ20) (4a, 3,9 mg, 92 τοις εκατό). Μέσω μιας παρόμοιας διαδικασίας, (2E,6E)-8-υδροξυ-3,7-διμεθυλ-2,6-οκταδεκενοϊκό οξύ21) (5a, 0,9 mg, 94 τοις εκατό ) ελήφθη από κανκανοσίδη Ρ (5, 1,8 mg).

Μέθοδος βιοδοκιμασίας Η ανασταλτική επίδραση στην επαγόμενη από TNF-α κυτταροτοξικότητα σε κύτταρα L929 προσδιορίστηκε με τη μέθοδο που περιγράφηκε σε προηγούμενη εργασία.5)

Στατιστικά Οι τιμές εκφράζονται ως μέσοι όροι SEM Μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) ακολουθούμενη από δοκιμή Dunnett για στατιστική ανάλυση. Οι τιμές πιθανότητας (p) μικρότερες από 0.05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

βότανο κιστανάκι