Αφηρημένη

Η D-σερίνη, που υπάρχει μόνο σε ίχνη στον άνθρωπο, θεωρείται πλέον βιοδείκτης της χρόνιας νεφρικής νόσου (ΧΝΝ). η πρωτοπαθής νεφρική νόσος στη ΧΝΝ είναι ετερογενής και η διάγνωσή της απαιτεί βιοψία νεφρού. Σε αυτή τη μελέτη, εξετάσαμε εάν η in vivo δυναμική της D-σερίνης (όπως υποδεικνύεται από τα επίπεδά της στο αίμα και τα ούρα) αντικατοπτρίζει την προέλευση της νεφρικής νόσου. Στο ίδιο κέντρο πραγματοποιήθηκαν βιοψίες νεφρού σε ασθενείς με έξι νεφρικές παθήσεις. Τα επίπεδα D-σερίνης και L-σερίνης προσδιορίστηκαν με δισδιάστατη υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης. Η συσχέτιση μεταξύ της προέλευσης της νεφρικής νόσου και της in vivo δυναμικής της d-σερίνης εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση συστάδων πολλαπλών μεταβλητών. Σε αντίθεση με τους ασθενείς με ΧΝΝ, η δυναμική της D-σερίνης ήταν ευρέως κατανεμημένη σε ασθενείς με ΧΝΝ. Τα επίπεδα της D-σερίνης στο πλάσμα διαδραματίζουν βασικό ρόλο στην ανίχνευση της νεφρικής νόσου, ενώ ο συνδυασμός των επιπέδων D-σερίνης στο πλάσμα και στα ούρα μπορεί να διακρίνει την προέλευση της ΧΝΝ, ειδικά στη νεφρίτιδα του λύκου. η in vivo δυναμική της D-σερίνης είναι σημαντική για την πρόβλεψη της ανάπτυξης νεφρικής νόσου. Η παρακολούθηση της D-σερίνης μπορεί να καθοδηγήσει την ειδική θεραπεία της προέλευσης της νεφρικής νόσου.

Λέξεις-κλειδιά:D-Serine ;Βιοψία νεφρού ; Διάγνωση ;Νεφρίτιδα λύκου; Χρόνια νεφρική νόσος ; Βιοδείκτης;Cistanche tubulosa

Κάντε κλικ εδώ για να λάβετετι ωφελεί το εκχύλισμα Cistanche για τα νεφρά

Εισαγωγή

Η χρόνια νεφρική νόσος (ΧΝΝ) είναι ένα παγκόσμιο πρόβλημα με περισσότερους από 10 εκατομμύρια ασθενείς στην Ιαπωνία και 850 εκατομμύρια παγκοσμίως. Η ΧΝΝ συχνά ορίζεται ως μια χρόνια ανωμαλία στη δομή ή τη λειτουργία των νεφρών, συμπεριλαμβανομένου του ρυθμού σπειραματικής διήθησης (GFR) και είναι ετερογενούς προέλευσης. Η προέλευση της ΧΝΝ περιλαμβάνει ανοσοποιητική, διαβητική, σχετιζόμενη με τη γήρανση, σπάνια ανθεκτική και άγνωστης αιτιολογίας. Η πρόγνωση και η θεραπεία της ΧΝΝ ποικίλλουν ανάλογα με την Προέλευση ποικίλλει και η παθολογική εξέταση των δειγμάτων βιοψίας νεφρού παρέχει συχνά βασικές πληροφορίες για τη διάγνωση και την αξιολόγηση της δραστηριότητας της νόσου. Αν και η νεφρική βιοψία είναι μια σημαντική διαδικασία, ενέχει κινδύνους και εκτελείται μόνο όταν τα οφέλη της υπερτερούν των κινδύνων. Επομένως, οι βιοδείκτες που μπορούν να βοηθήσουν στη διάγνωση της νεφρικής νόσου βρίσκονται υπό διερεύνηση.

Η D-σερίνη αναδύεται τώρα ως βιοδείκτης για νεφρική νόσο. Η d-σερίνη είναι ένα από τα d-αμινοξέα, το κατοπτρικό εναντιομερές (χειρόμορφο) της σερίνης, το οποίο, σε αντίθεση με την άφθονη l-σερίνη, υπάρχει μόνο σε ίχνη στη φύση. Για την ακριβή μέτρηση της ποσότητας d-σερίνης σε ανθρώπινα δείγματα, χρησιμοποιήθηκε ένα δισδιάστατο σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (2D-HPLC). Το σύστημα 2D-HPLC ενισχύει την ακριβή μέτρηση των ιχνοποσοτήτων d-σερίνης στο ανθρώπινο αίμα. Το επίπεδο της D-σερίνης στο αίμα παρέχει κρίσιμες κλινικές πληροφορίες επειδή συσχετίζεται με το GFR, μια από τις νεφρικές λειτουργίες, και επίσης αντανακλά τη νεφρική πρόγνωση των ασθενών με ΧΝΝ. Επιπλέον, η απέκκριση D-σερίνης στα ούρα παρέχει πρόσθετες πληροφορίες για την ανίχνευση νεφρικής νόσου. Επομένως, η αξιολόγηση της in vivo κινητικής της D-σερίνης με μέτρηση του επιπέδου της D-σερίνης στο αίμα και την απέκκριση στα ούρα είναι χρήσιμη για την παρακολούθηση της νεφρικής λειτουργίας και της βιωσιμότητας της νόσου.

Αυτά τα γεγονότα εγείρουν την υπόθεση για το εάν οι νεφρικές παθήσεις μπορεί να επηρεάσουν διαφορετικά αυτές τις δυναμικές ανάλογα με την προέλευσή τους. Εάν ναι, η παρακολούθηση της δυναμικής της D-σερίνης in vivo μπορεί να είναι χρήσιμη για τη διάγνωση της προέλευσης της ΧΝΝ. Η παρούσα μελέτη αξιολόγησε τη δυναμική της d-σερίνης σε ασθενείς με ΧΝΝ που υποβλήθηκαν σε βιοψία νεφρού και εξέτασε τη δυνατότητα της D-σερίνης στον προσδιορισμό της προέλευσης της νεφρικής νόσου.

Εκχύλισμα Cistanche tubulosa

Υλικά και μέθοδοι

Πληθυσμός μελέτης

Επιστρατεύσαμε προοπτικά διαδοχικούς ασθενείς που υποβλήθηκαν στην πρώτη τους βιοψία νεφρού για διαγνωστικούς ή/και θεραπευτικούς σκοπούς στο Τμήμα Νεφροπαθειών και Υπέρτασης του Γενικού Ιατρικού Κέντρου της Οσάκα από τις 2006 έως το 2016. Τα δείγματα βιοψίας αναλύονταν τακτικά με χρήση φωτός, διαδικασίες ανοσοφθορισμού και ηλεκτρονικής μικροσκοπίας. Οι κλινικές και παθολογικές διαγνώσεις καθιερώθηκαν με συναίνεση μεταξύ έμπειρων νεφρολόγων και παθολόγων. Εξάγαμε κοινές αιτίες νεφρικής νόσου με αναφορά στο ιστολογικό σχήμα ταξινόμησης των σπειραματικών παθήσεων που δημοσιεύθηκε από τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας το 1995. Η προέλευση των νεφρικών παθήσεων περιλαμβάνει τη νεφρίτιδα IgA (IgAN), τη νόσο μικροσκοπικής αλλαγής (MCD), τη μεμβρανώδη νεφροπάθεια (MN) , διαβητική νεφροπάθεια (DN), υπερτασική νεφροπάθεια (HT) και νεφρίτιδα λύκου (LN). Δέκα ασθενείς από την κοόρτη της μελέτης συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη για κάθε προέλευση νεφρικής νόσου. Τα κριτήρια συμπερίληψης για κάθε νόσο ήταν τα εξής: IgAN, εύρος πρωτεΐνης ούρων 0.5 - 1,5 g/gCre και eGFR >60 mL/min/1,73 m2. MCD, MN, πληρούν κριτήρια για νεφρωσικό σύνδρομο. DN, ιστορικό σακχαρώδους διαβήτη, αναλογία λευκωματίνης/κρεατινίνης ούρων 30 mg/gCre, eGFR 30 ml/min/1,73 m2; HN, ιστορικό υπέρτασης, eGFR > 30 mL/min/1,73 m2. eGFR> 60; LN, που πληροί τα κριτήρια ταξινόμησης του 2003 International Society of Nephrology (ISN) / Renal Pathology Society (RPS) για τον ΣΕΛ. Τα κριτήρια αποκλεισμού περιελάμβαναν (i) περιπτώσεις στις οποίες είχε ξεκινήσει η πρεδνιζολόνη ή/και ανοσοκατασταλτικά φάρμακα, (ii) περιπτώσεις στις οποίες η βιοψία νεφρού έδειξε λιγότερα από 10 σπειράματα, (iii) περιπτώσεις οξείας νεφρικής βλάβης (AKI) και (iv) περιπτώσεις της δευτερεύουσας ΜΝ. Τα κλινικά δημογραφικά στοιχεία, τα εργαστηριακά δεδομένα, ο δείκτης δραστηριότητας της νόσου του SLE κατά τη στιγμή του LN (SLE-dai) και δείγματα πλάσματος και ούρων συλλέχθηκαν τη στιγμή της νεφρικής βιοψίας. Τα επίπεδα d-σερίνης στο πλάσμα και στα ούρα μετρήθηκαν πριν από τη νεφρική βιοψία. Δεδομένα αναφοράς για μη ΧΝΝ ελήφθησαν από προηγούμενη αναφορά. Το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Γενικού Ιατρικού Κέντρου της Οσάκα (#29- S0606) και του NIBIOHN (#236). Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις ηθικές αρχές της Διακήρυξης του Ελσίνκι και όλοι οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση.

τυποποιημένο Cistanche

Εξισώσεις GFR και υπολογισμός κάθαρσης νεφρού

Ο εκτιμώμενος GFR (eGFR) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την ιαπωνική εξίσωση GFR με βάση την κρεατινίνη ορού (eGFRcreat):

eGFRcreat(mL∕min∕1,73 m2)= 194 × Cr−1.094× ηλικία−0.287× 0,739 (εάν είναι γυναίκα)

Η κρεατινίνη ορού και ούρων προσδιορίστηκε ενζυματικά. Τα επίπεδα σταθερού σημείου στα ούρα των χειρόμορφων αμινοξέων προσαρμόστηκαν με κρεατινίνη. Το κλάσμα απέκκρισης (FE, ποσοστό ) υπολογίστηκε διαιρώντας την κάθαρση του υποστρώματος με την κάθαρση κρεατινίνης, ως εξής:

Όπου το Us και το Ps αντιπροσωπεύουν τα επίπεδα υποστρώματος ούρων και πλάσματος, αντίστοιχα. FE είναι η αναλογία του υποστρώματος που απεκκρίνεται στα ούρα μετά τη σπειραματική διήθηση. Το χαμηλό και το υψηλό FE υποδηλώνουν σωληναριακή επαναρρόφηση και απέκκριση, αντίστοιχα.

Η προετοιμασία των δειγμάτων

Η προετοιμασία του δείγματος από ανθρώπινο πλάσμα και ούρα πραγματοποιήθηκε και τροποποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Στο δείγμα προστέθηκε είκοσι φορές ο όγκος της μεθανόλης και αυτό (10 μL του υπερκειμένου που ελήφθη από το ομογενοποιημένο προϊόν μεθανόλης) τοποθετήθηκε σε σκιασμένο καφέ σωλήνα για παραγωγοποίηση NBD (1.0 μL από το προϊόν της μεθανόλης). χρησιμοποιήθηκε πλάσμα για την αντίδραση). Μετά από ξήρανση υπό μειωμένη πίεση, 20 μL ρυθμιστικού διαλύματος βορικού νατρίου 200 mM (pH 8,0) και 5 μL φθορίζοντος αντιδραστηρίου σήμανσης [40 mM 4-fuoro-7-nitro-2 ,1,3-βενζοξαδιαζόλη (nnd -f) σε άνυδρο MeCN] προστέθηκαν και θερμάνθηκαν στους 60 βαθμούς για 2 λεπτά. Λήφθηκαν 2 μL του μείγματος της αντίδρασης με την προσθήκη 0,1 τοις εκατό (v/v) υδατικού διαλύματος TFA (75 μL) για 2D-HPLC.

Προσδιορισμός εναντιομερών σερίνης με 2D-HPLC

Τα εναντιομερή της σερίνης ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας μια πλατφόρμα 2D-HPLC. Εν συντομία, τα παράγωγα NBD των αμινοξέων υποβλήθηκαν σε χρωματογραφία ανάστροφης φάσης (στήλη Singularity RP, 1.0 mm id × 50 mm· KAGAMI Inc., Osaka, Japan) χρησιμοποιώντας μια υδατική κινητή φάση που περιέχει MeCN και μυρμηκικό οξύ για βαθμιδωτή έκλουση. Για τον ξεχωριστό προσδιορισμό της d-σερίνης και της l-σερίνης, το κλάσμα σερίνης συλλέχθηκε αυτόματα χρησιμοποιώντας μια βαλβίδα πολλαπλών βρόχων και μεταφέρθηκε σε μια στήλη p-αντι-επιλεκτικής (Singularity CSP-001S, 1,5 mm id × 75 mm· KAGAMI Inc.). Η D-σερίνη και η l-σερίνη διαχωρίστηκαν στη συνέχεια σε μια δισδιάστατη βάση χρησιμοποιώντας μια εναντιοεκλεκτική στήλη. Η κινητή φάση ήταν ένα μίγμα MeOH-MeCN που περιείχε μυρμηκικό οξύ, και τα NBD-αμινοξέα ανιχνεύθηκαν φθορίζοντα με δύο σωλήνες φωτοπολλαπλασιαστή υπό διέγερση 530 nm. Η κορυφή στόχος ποσοτικοποιήθηκε με κλιμάκωση του τυπικού σχήματος κορυφής.

Συμπλήρωμα Cistanche

Επεξεργασία δεδομένων και πολυπαραγοντική ανάλυση

Τα δεδομένα επικεντρώθηκαν στη διάμεσο και μετασχηματίστηκαν λογαριθμικά για πολυμεταβλητή ανάλυση. Η ανάλυση μη εποπτευόμενης κύριας συνιστώσας (PCA) ή η εποπτευόμενη ορθογώνια ανάλυση μερικών ελαχίστων τετραγώνων (OPLS) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση της σχέσης μεταξύ των χειρόμορφων αμινοξέων και των κλινικών παραμέτρων. Η ανάλυση του κύριου στοιχείου προβάλλει γεωμετρικά πολύπλοκα δεδομένα υψηλών διαστάσεων σε δεδομένα χαμηλών διαστάσεων που ονομάζονται κύρια συστατικά. Τα διαγράμματα φόρτωσης απεικονίζουν τον βαθμό επιρροής κάθε μεταβλητής στην κύρια συνιστώσα, καθώς και τη συσχέτιση μεταξύ κάθε μεταβλητής. Η τιμή βαθμολογίας κάθε παρατήρησης απεικονίζεται στο διάγραμμα βαθμολογίας για να καταδειχθεί η ομαδοποίηση των παρατηρήσεων. Η μέθοδος OPLS-DA εφαρμόστηκε για να ελεγχθεί η διακριτή κατανομή των μεταβλητών με βάση τις μεταβλητές πρόβλεψης. Η βελτιστοποίηση ft των μοντέλων OPLS αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το R²Υ και Q²Τιμές Υ. R²Το Y δείχνει το ποσοστό διακύμανσης στις εξεταζόμενες μεταβλητές που εξηγείται από το μοντέλο, ενώ το Q²Το Y υποδεικνύει την προγνωστική απόδοση του μοντέλου. R²Υ και Q²Το Y μεγαλύτερο από 0.5 υποδηλώνει καλή βελτιστοποίηση ft και πραγματοποιήθηκαν περισσότερες από 20 δοκιμές αντικατάστασης για κάθε μοντέλο OPLS για την εσωτερική επικύρωση του μοντέλου. Κατά την ανάπτυξη του μοντέλου LN, επιλέξαμε έναν αμετάβλητο παράγοντα, το φύλο και τον αφαιρέσαμε από την ανάλυση συσχέτισης.

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, καταδεικνύουμε τη χρησιμότητα της παρακολούθησης της d-σερίνης στη διάγνωση της προέλευσης της νεφρικής νόσου. Η δυναμική της d-σερίνης in vivo εξαρτάται από τις διάφορες προελεύσεις της νεφρικής νόσου και έχει τη δυνατότητα να διαφοροποιήσει την προέλευση της νεφρικής νόσου. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης συμβάλλουν στην ακριβή διάγνωση της προέλευσης της νεφρικής νόσου και στη σωστή διάγνωση των περιπτώσεων που απαιτούν βιοψία νεφρού. Η διαφορική έκφραση της d-σερίνης σε διαφορετικές νεφρικές παθήσεις έχει σημαντικές επιπτώσεις, επειδή μπορεί να συμβάλουν στην ανακάλυψη νέας παθοφυσιολογίας της νεφρικής νόσου.

Η παρούσα μελέτη έχει αρκετούς περιορισμούς που πρέπει να αναγνωριστούν προκειμένου να ερμηνευτούν τα αποτελέσματα. Ο περιορισμένος αριθμός ασθενών με κάθε νόσο, η πρόγνωση αυτών των ασθενών δεν έχει μελετηθεί και αυτά τα χαρακτηριστικά μπορεί να συγκαλύπτουν περαιτέρω σχέσεις μεταξύ της d-σερίνης και της νεφρικής νόσου. Λόγω του περιορισμένου αριθμού συμμετεχόντων, η ανάλυση υποομάδας είναι απαραίτητη για ασθένειες με ευρύ φάσμα ασθενειών, όπως το IgAN και το DN. Ακόμη και με αυτούς τους περιορισμούς, αυτή η μελέτη προσδιορίζει ξεκάθαρα την προέλευση της νεφρικής νόσου και οι ασθενείς θα ωφεληθούν από την παρακολούθηση της d-σερίνης για διάγνωση.

Συνοπτικά, η αξιολόγηση της in vivo δυναμικής της d-σερίνης είναι χρήσιμη για τη διάγνωση της πρωτοπαθούς νεφρικής νόσου. Η παρακολούθηση της d-σερίνης μπορεί να καθοδηγήσει την ειδική θεραπεία της νεφρικής νόσου, ιδιαίτερα προέλευσης LN. Αυτή η μελέτη ανοίγει μια νέα κατεύθυνση για την ιατρική ακριβείας χρησιμοποιώντας μετρήσεις d-σερίνης.

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1. Imai Ε, Horio Μ, Iseki Κ, Yamagata Κ, Watanabe Τ, Hara S, et αϊ. Ο επιπολασμός της χρόνιας νεφρικής νόσου (ΧΝΝ) στον γενικό πληθυσμό της Ιαπωνίας προβλέπεται από την εξίσωση MDRD τροποποιημένη από έναν ιαπωνικό συντελεστή. Clin Exp Nephrol. 2007; 11:156-63.

2. International Society of Nephrology. Η υπο-αναγνωρισμένη επιδημία: παγκοσμίως, πάνω από 850 εκατομμύρια άνθρωποι πάσχουν από νεφρικές παθήσεις. 2018.

3. Levey AS, Atkins R, Coresh J, Cohen EP, Collins AJ, Eckardt KU, et al. Η χρόνια νεφρική νόσος ως παγκόσμιο πρόβλημα δημόσιας υγείας: προσεγγίσεις και πρωτοβουλίες - μια δήλωση θέσης από τη Νεφρική Νόσος Βελτιώνοντας Παγκόσμια Αποτελέσματα. Kidney Int. 2007; 72:247-59.

4. Hogan JJ, Mocanu M, Berns JS. Η εγγενής βιοψία νεφρού: ενημέρωση και στοιχεία για την καλύτερη πρακτική. Clin J Am Soc Nephrol. 2016; 11:354–62.

5. Srivastava A, Palsson R, Kaze AD, Chen ME, Palacios P, Sab bisetti V, et al. Η προγνωστική αξία των ιστοπαθολογικών βλαβών σε δείγματα αυτοφυούς βιοψίας νεφρού: αποτελέσματα από τη μελέτη κοόρτης βιοψίας νεφρού της Βοστώνης. J Am Soc Nephrol. 2018; 29:2213–24.

6. Kimura Τ, Hamase Κ, Miyoshi Υ, Yamamoto R, Yasuda Κ, Mita Μ, et αϊ. Χειρική μεταβολομική αμινοξέων για νέο έλεγχο βιοδεικτών στην πρόγνωση της χρόνιας νεφρικής νόσου. Sci Rep. 2016; 6:26137.

7. Hesaka Α, Sakai S, Hamase Κ, Ikeda Τ, Matsui R, Mita Μ, et αϊ. Η d-σερίνη αντικατοπτρίζει τη λειτουργία των νεφρών και τις ασθένειες. Sci Rep. 2019; 9:5104.

8. Hesaka Α, Yasuda Κ, Sakai S, Yonishi Η, Namba-Hamano Τ, Takahashi Α, et αϊ. Η δυναμική της d-σερίνης αντανακλούσε την πορεία ανάρρωσης ενός ασθενούς με ταχέως εξελισσόμενη σπειραματονεφρίτιδα. CEN Case Rep. 2019; 8:297–300.

9. Kimura T, Hesaka A, Isaka Y. d-Αμινοξέα και παθήσεις των νεφρών. Clin Exp Nephrol. 2020; 24:404–10.

10. Krebs HA. Μεταβολισμός αμινοξέων: απαμίνωση αμινοξέων. Biochem J. 1935; 29:1620-44.

11. Hashimoto Α, Nishikawa Τ, Hayashi Τ, Fujii Ν, Harada Κ, Oka Τ, et al. Η παρουσία ελεύθερης d-σερίνης στον εγκέφαλο αρουραίου. FEBS Lett. 1992; 296:33-6.

12. Miyoshi Y, Hamase K, Tojo Y, Mita M, Konno R, Zaitsu K. Προσδιορισμός d-σερίνης και d-alanine στους ιστούς και τα φυσιολογικά υγρά ποντικών με διάφορες δραστηριότητες οξειδάσης d-αμινοξέος χρησιμοποιώντας δισδιάστατη υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης με ανίχνευση φθορισμού. J Chromatogr B. 2009;877:2506–12.

13. Hamase Κ, Miyoshi Υ, Ueno Κ, Han Η, Hirano J, Morikawa Α, et αϊ. Ταυτόχρονος προσδιορισμός υδρόφιλων εναντιομερών αμινοξέων σε ιστούς και φυσιολογικά υγρά θηλαστικών με την εφαρμογή μιας πλήρως αυτοματοποιημένης μικρο-δισδιάστατης υγρής χρωματογραφικής ιδέας υψηλής απόδοσης. J Chromatogr A. 2010;1217:1056–62.

14. Kimura T, Hesaka A, Isaka Y. Utility of d-serine monitoring in νεφρική νόσο. Biochim Biophys Acta Proteins Proteom. 2020;1868:140449.

15. Weening JJ, D'Agati VD, Schwartz MM, Seshan SV, Alpers CE, Appel GB, et al. Επανεξετάστηκε η ταξινόμηση της σπειραματονεφρίτιδας στον συστηματικό ερυθηματώδη λύκο. Kidney Int. 2004; 65:521-30.

16. Bombardier C, Gladman DD, Urowitz MB, Caron D, Chang CH. Παραγωγή του ΣΛΕΔΑΙ. Ένας δείκτης δραστηριότητας της νόσου για ασθενείς με λύκο. Η Επιτροπή Μελετών Πρόγνωσης στον ΣΕΛ. Ρευματική αρθρίτιδα. 1992; 35:630-40.

17. Matsuo S, Imai Ε, Horio Μ, Yasuda Υ, Tomita Κ, Nitta Κ, et αϊ. Αναθεωρημένες εξισώσεις για εκτιμώμενο GFR από κρεατινίνη ορού στην Ιαπωνία. Am J Kidney Dis. 2009; 53:982–92.

18. Hamase Κ, Ikeda Τ, Ishii C, Ishigo S, Masuyama Κ, Akita Τ, et αϊ. Προσδιορισμός ιχνοποσοτήτων χειραλικών αμινοξέων σε πολύπλοκα βιολογικά δείγματα με χρήση δισδιάστατης υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης με μια καινοτόμο μέθοδο αναγνώρισης/ποσοτικοποίησης κορυφών «προσαρμογής σχήματος». Χρωματογραφία. 2018; 39:147–52.