Επίδραση του πολυσακχαρίτη Astragalus στην κατάσταση των νεφρών και στους δείκτες ίνωσης ενός μοντέλου αρουραίου διαβητικής νεφροπάθειας που προκαλείται από στρεπτοζοτοκίνη

Για περισσότερες πληροφορίες:emily.li@wecistanche.com

Yue Ji, Xue-Rou Yan, Hong-Tao Yang, Kang Yang, Qing-Yun Zhao, Shou-Ci Hu, Qi-Hang Su

1 Πανεπιστήμιο Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής Tianjin, Tianjin, Κίνα.

2 Το Πρώτο Νοσοκομείο Διδασκαλίας του Πανεπιστημίου Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής Tianjin, Tianjin, Κίνα

Καλύτερες στιγμές

Αν και δεν παρατηρήθηκε επίδραση μείωσης της ρύθμισης του σακχάρου στο αίμα, ο πολυσακχαρίτης του astragalus θα μπορούσε να βελτιωθείνεφρώνσωληνοειδήςδιάμεση βλάβη σε αρουραίους με διαβητική νεφροπάθεια και το πρώιμο στάδιο τηςνεφρώνλειτουργίαυλικές ζημιές, το οποίο μπορεί να σχετίζεται με την υπορρύθμιση των TGF- 1 και -SMA.

Αφηρημένη

Αντικείμενο: Να εξεταστεί η επίδραση του πολυσακχαρίτη του αστράγαλου (APS) στους δείκτες νεφρικής κατάστασης και ίνωσης αρουραίων με διαβητική νεφροπάθεια. Μέθοδοι: 72 αρσενικοί αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε τρεις ομάδες: ομάδα αρνητικού ελέγχου (NC, n=24). ομάδα μοντέλου διαβητικής νεφροπάθειας (DNM, n=24); και μοντέλο διαβητικής νεφροπάθειας με ομάδα APS (DNM συν APS, n=24). Οι αρουραίοι των ομάδων DNM και DNM συν APS υποβλήθηκαν τόσο σε μονόπλευρη νεφρεκτομή όσο και σε ένεση στρεπτοζοτοκίνης (STZ) (65 mg/kg). Στους αρουραίους της ομάδας DNM συν APS χορηγήθηκαν 50 IU/kg/d APS με υποδόρια ένεση από την πρώτη εβδομάδα μετά την επέμβαση μέχρι το θάνατο. Στους αρουραίους της ομάδας NC και DNM εγχύθηκε υποδορίως ένας πανομοιότυπος όγκος φυσιολογικού ορού. Στις εβδομάδες 3, 8 και 13 μετά την επέμβαση, 6 αρουραίοι από κάθε ομάδα θυσιάστηκαν τυχαία και συλλέχθηκε αίμα για τη μέτρηση της κρεατινίνης ορού και του αζώτου της ουρίας του αίματος. Την ημέρα πριν από τη θυσία, οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν σε ένα μεταβολικό κλουβί για 24 ώρες για τη συλλογή ούρων. Την εβδομάδα 14 μετά την επέμβαση, 6 αρουραίοι από κάθε ομάδα επιλέχθηκαν τυχαία για τη μέτρηση του σωματικού βάρους και του δείκτη νεφρών. Συλλέχτηκε αίμα για τη μέτρηση της γλυκόζης στο αίμα. Οι νεφροί συλλέχθηκαν για την ανίχνευση παθολογικών αλλαγών με χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Αποτελέσματα: Η ιστολογική αξιολόγηση αρουραίων DNM πρότεινε συμπτώματα βλάβης όπως αποδεικνύεται από υπερπλασία της σπειραματικής μεσαγγειακής μήτρας, ατροφία των νεφρικών σωληναρίων και πάχυνση της βασικής μεμβράνης. Αντίθετα, οι αρουραίοι με διαβητική νεφροπάθεια που προκλήθηκαν από STZ που έλαβαν θεραπεία με APS (50 IU/kg/ημέρα) έδειξαν σημαντικά βελτιωμένα ιστολογικά αποτελέσματα, υποδηλώνοντας ότι το APS έχει ευεργετική επίδραση στηννεφρώνιστούςσε αρουραίους DNM που προκαλούνται από STZ. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι το APS ανακούφισε τη νεφρική βλάβη και βελτίωσε αποτελεσματικά το σωματικό βάρος σε αρουραίους DNM. Η αναλογία του βάρους των νεφρών προς το σωματικό βάρος μειώθηκε και το πρώιμο στάδιο της βλάβης της νεφρικής λειτουργίας βελτιώθηκε μετά τη θεραπεία με APS. Στα τελευταία στάδια της νόσου, η πρωτεΐνη των ούρων 24 ωρών μειώθηκε σημαντικά. Επιπλέον, το APS μείωσε την έκφραση του TGF- 1 και του -SMA του νεφρού. Συμπέρασμα: Το APS βελτιώθηκε σημαντικάνεφρώνσωληνοειδήςδιάμεση βλάβη σε αρουραίους DNM και το πρώιμο στάδιο της βλάβης της νεφρικής λειτουργίας. Ο μηχανισμός μπορεί να σχετίζεται με τη μείωση της έκφρασης του TGF- 1 και του -SMA που καθυστερούν την εξέλιξη της νεφρικής διάμεσης ίνωσης σε αρουραίους DNM.

Λέξεις-κλειδιά: ΔιαβητικόςΝεφροπάθεια, Πολυσακχαρίτης Astragalus,Νεφρώνδείκτης, Ίνωση, TGF- 1, -SMA

Το Cistanche είναι καλό για τη νεφρική λειτουργία

Ιστορικό

Η διαβητική νεφροπάθεια (DN) είναι μια συχνή κρανιοεγκεφαλική επιπλοκή του διαβήτη με υψηλή νοσηρότητα. Περίπου 25-50 τοις εκατό των ασθενών με διαβήτη πάσχουν από DN. Αυτοί οι ασθενείς εμφανίζουν προοδευτική απώλεια τουνεφρώνλειτουργία, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε νεφρική νόσο τελικού σταδίου όπως νεφρική ανεπάρκεια [1]. Η παθογένεια και ο μηχανισμός της DN δεν είναι απολύτως σαφείς. Πρόσφατες μελέτες έδειξαν ότι η δυσλειτουργία του ενεργειακού μεταβολισμού και η δυστροφία μπορούν να πυροδοτήσουν τη μεταβολική μνήμη, η οποία αναστέλλει την ανάπτυξη και τη λειτουργία έκκρισης των παγκρεατικών κυττάρων, καταλήγοντας τελικά σε DN [2].

Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για τη θεραπεία της DN και έχει δείξει καλά αποτελέσματα. Σύμφωνα με τη θεωρία TCM, ο αιτιολογικός παράγοντας του DN είναι η στάση του αίματος, η οποία προκαλεί διαταραχές στη λειτουργία του σώματος, αναστέλλει την παραγωγή Qi και αίματος και προκαλεί ανεπάρκεια Qi. Η ανεπάρκεια Qi μπορεί να προκαλέσει εξέλιξη του DN. Μελέτες έχουν δείξει ότι η ένεση Shuxuetong [εκχύλισμα Shuizhi (Hirudo) και Dilong (lumbricus)] βελτιώνει δραματικά τα επίπεδα γλυκόζης στο αίμα καινεφρώνλειτουργίαασθενών με DN [3]. Το εκχύλισμα Huangkui Capsule Huangkui (abelmosk)] βελτιώνει τη μικροφλεγμονή σε ασθενείς με DN [4]. Τα χάπια Bailing ανακουφίζουν από τη μικροφλεγμονή και το οξειδωτικό στρες σε ασθενείς που πάσχουν από χρόνια επαγόμενη από DNνεφρώναποτυχία[5]. Επιπλέον, το χάπι Tangweikang, συμπεριλαμβανομένων των Huangqi (Radix Astragali seu Hedsari), Shuizhi (Hirudo) και Wuweizhi (Fructus Schisandrae Chinensis), χρησιμοποιούνται ευρέως στην κλινική πράξη [6, 7]. Οι ερευνητές απέδειξαν ότι το χάπι Tangweikang ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση της μεταλλοπρωτεάσης μήτρας-9 και μειώνει την έκφραση του αναστολέα ιστού των μεταλλοπρωτεϊνασών-1 σε νεφρό αρουραίων με μοντέλο διαβητικής νεφροπάθειας (DNM) [8, 9].

Το Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari), το οποίο συμπληρώνει το Qi, ενεργοποιεί την κυκλοφορία και μειώνει τη στάση του αίματος, είναι ένα από τα πιο σημαντικά βότανα για τη θεραπεία της DN στην κλινική[10,11]. Όπως αναφέρεται σε ορισμένα κλασικά αρχαία βιβλία του TCM, συμπεριλαμβανομένου του Tang Ye Ben Cao που συγκεντρώθηκε από τον Wang Haogu[12] και τον Yi Zong. Ο Jin Jian που συντάχθηκε από τον Wu Qian [13], τα συμπτώματα της DN είναι παρόμοια με εκείνα της "νόσος διασποράς-δίψας", "υδρώδη", "θολά στα ούρα" και "ασθένεια κατανάλωσης" στην κινεζική ιατρική και η κύρια παθογένεια της DN οφείλεται στην ανωμαλία του Sanjiao (άνω, ή μεσαίο, ή κάτω)[14]. Η ανεπάρκεια Qi και Yin είναι εκδηλώσεις δυσλειτουργιών των σπλάχνων ή των εντέρων. Το Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari) έχει εφαρμοστεί στο DN[15] για τη θεραπεία τραυματισμών του πνεύμονα, του σπλήνα, του ήπατος και των νεφρών καθώς και για τον εμπλουτισμό του Qi και του Yin, για την αύξηση της ροής του αίματος και για τον καθαρισμό των αγγείων του δικτύου. Ο πολυσακχαρίτης Astragalus (APS) (Approved No. Z20040085) είναι ένα από τα κύρια εξαιρετικά ενεργά συστατικά στο Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari). Τα τελευταία χρόνια, το APS βρέθηκε να έχει ένα ευρύ φάσμα φαρμακολογικών επιδράσεων στην έκφραση των μορίων σηματοδότησης της ινσουλίνης στον νεφρικό ιστό των διαβητικών αρουραίων τύπου 2 [16]. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τους παράγοντες που επηρεάζουν τους μηχανισμούς του μέσου και του όψιμου σταδίου της DN. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει την επίδραση του APS στην κατάσταση των νεφρών και στους δείκτες ίνωσης αρουραίων με DN.

Υλικά και αντιδραστήρια

Ζώα και θεραπεία

Ζώα εργαστηρίου και περιβάλλον διατροφής. Εβδομήντα δύο υγιείς αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley, με μέσο σωματικό βάρος 180± 20 g σε ηλικία 8 εβδομάδων, στεγάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου (23±1 βαθμός) με κύκλο φωτός 12 ωρών και κύκλο σκότους 12 ωρών (φώτα αναμμένα από 6:00 π.μ. έως 6:00 μ.μ.). Τροφή και νερό ήταν διαθέσιμα κατά βούληση. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τους θεσμικούς κανονισμούς και τα εθνικά κριτήρια για πειράματα σε ζώα. Η Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του Ιδρύματος εξέτασε ολόκληρο το πρωτόκολλο για τα ζώα πριν από τη διεξαγωγή των πειραμάτων. Οι πειραματικές διαδικασίες συμμορφώθηκαν με την οδηγία 2010/63/ΕΕ του Ευρωπαϊκού Κοινοβουλίου και ο χειρισμός όλων των ζώων έγινε σύμφωνα με τις οδηγίες της Επιτροπής Ζωικής Έρευνας του Πανεπιστημίου Tianjin της TCM (TCMLAEC2014005).

Ομαδοποίηση και μοντελοποίηση ζώων. Η DN προκλήθηκε με μονόπλευρη νεφρεκτομή και εφάπαξ ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση 65 mg/kg στρεπτοζοτοκίνης (STZ)[17. 21], το οποίο διαλύθηκε σε ρυθμιστικό κιτρικού νατρίου σε ρΗ 4.2.4.5. Στα ζώα ελέγχου εγχύθηκαν φορείς (ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου, ρΗ 4.2-4.5). Οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε τρεις ομάδες αρνητική ομάδα ελέγχου (NC, n =24). DNM,n=24;και DNM με ομάδα APS (DNM συν APS,n =24). Στους αρουραίους της ομάδας DNM συν APS χορηγήθηκε APS (50 IU/kg/ημέρα) με υποδόρια ένεση από την πρώτη εβδομάδα μετά την επέμβαση μέχρι το θάνατο. Οι αρουραίοι της ομάδας NC και DNM εγχύθηκαν υποδόρια με ίδιο όγκο φυσιολογικού ορού.

Δείκτες και μέθοδοι ανίχνευσης

Γενική δήλωση. Την εβδομάδα 14 μετά την επέμβαση, 6 επίμυες από κάθε ομάδα επιλέχθηκαν τυχαία για τη μέτρηση του σωματικού βάρους, του βάρους των νεφρών και του δείκτη νεφρού. Το αίμα συλλέχθηκε με τη μέθοδο του εσωτερικού κανθού για βιοχημικό έλεγχο γλυκόζης αίματος (ACCU -CHEK, Indianapolis, IN, ΗΠΑ). Ο δείκτης νεφρών υπολογίστηκε ως εξής: δείκτης νεφρού=βάρος νεφρού/σωματικό βάρος ×100 τοις εκατό .

Νεφρική λειτουργία και 24-h πρωτεΐνη ούρων. Τις εβδομάδες 3, 8 και 13 μετά την επέμβαση, 6 επίμυες από κάθε ομάδα θυσιάστηκαν τυχαία και συλλέχθηκε αίμα με τη μέθοδο της κοιλιακής αορτής για βιοχημική εξέταση κρεατινίνης ορού (Scr) και αζώτου ουρίας αίματος (BUN). Την ημέρα πριν από τη θυσία, οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν σε μεταβολικούς κλωβούς για 24 ώρες για να συλλέξουν ούρα, τα οποία δοκιμάστηκαν με την αντίδραση διουρίας για πρωτεΐνη ούρων 24 ωρών. Τα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν στις 3000 rpm για 15 λεπτά και ο ορός συλλέχθηκε και αποθηκεύτηκε σε-80 βαθμό μέχρι την ανάλυση όπως περιγράφεται παρακάτω. Το Scr, το BUN και η ολική πρωτεΐνη ούρων σε 24 ώρες δοκιμάστηκαν σε συσκευή ανάγνωσης πλάκας χρησιμοποιώντας ένα πειραματικό κιτ αντιδραστηρίων. Παθολογική και ανοσοϊστοχημική εξέταση. Όπως περιγράφηκε παραπάνω, μετά τη λήψη του αίματος και των ούρων, όλα τα ζώα θυσιάστηκαν με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας. Οι νεφροί εκτέθηκαν πλήρως και διαχωρίστηκαν προσεκτικά από τον περιφερικό ιστό και την νεφρική κάψουλα. Μετά την πραγματοποίηση μιας διαμήκους τομής μαζί με τους ιστούς των νεφρών με μια αιχμηρή λεπίδα και τη συγκομιδή, διεξήχθη 10 τοις εκατό καθήλωση με φορμαλίνη για την ανίχνευση παθολογικών αλλαγών με χρώση αιματοξυλίνης και ηωσίνης (HE) και ανοσοϊστοχημεία (IHC). Στη συνέχεια, οι ιστοί των νεφρών ενσωματώθηκαν σε παραφίνη και κόπηκαν σε τομές 5 μΜ για χρώση με ΗΕ, ενώ η έκφραση του TGF- 1 και -SMA ανιχνεύθηκε με IHC χρησιμοποιώντας τη μέθοδο στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης.

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν με λογισμικό SPSS 13.0 (SPSS. Inc., Chicago, IL, USA). Όλα τα δεδομένα εκφράστηκαν ως η μέση ± τυπική απόκλιση στους πίνακες και υποδεικνύονται με κάθετες ράβδους στα σχήματα. Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων προσδιορίστηκαν με ανάλυση διακύμανσης. Μια τιμή πιθανότητας P μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε σημαντική.

Αποτέλεσμα

Γενικά χαρακτηριστικά

Το σωματικό βάρος στην ομάδα DNM μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με την ομάδα (P=0.001, Πίνακας 1). Το σωματικό βάρος στην ομάδα DNM συν APS αυξήθηκε σημαντικά σε σύγκριση με την ομάδα DNM (P=0.017, Πίνακας 1). Ο δείκτης νεφρών ήταν υψηλότερος στην ομάδα DNM από ότι στην ομάδα NC (P=0.001, Πίνακας 1). Επιπλέον, ο δείκτης νεφρών μειώθηκε στην ομάδα DNM συν APS σε σύγκριση με την ομάδα DNM (P= 0.026, Πίνακας 1). Η γλυκόζη αίματος αυξήθηκε στην ομάδα DNM σε σύγκριση με την ομάδα NC (P=0.001, Πίνακας 1), ενώ δεν υπήρχε εμφανής διαφορά στην ομάδα DNM γλυκόζης αίματος, μεταξύ της ομάδας ] και DNM συν APPS που υποδηλώνει ότι Το APS μόνο για τη διατήρηση σταθερών επιπέδων σακχάρου στο αίμα την εβδομάδα 14 δεν είναι αποτελεσματικό.

Βιοχημικοί δείκτες

Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο επίπεδο Scr και BUN ή στο επίπεδο πρωτεΐνης ούρων 24 ωρών σε διαφορετικά χρονικά σημεία σε κάθε ομάδα (Πίνακας 2-3), Σε σύγκριση με την ομάδα NC, οι αρουραίοι της ομάδας DNM έδειξαν προφανώς υψηλότερα επίπεδα BUN σε διάφορα χρονικά σημεία (P=0.021, P=0.012, P=0.008, αντίστοιχα, Πίνακας 2). Σε σύγκριση με την ομάδα DNM, οι αρουραίοι DNM συν APS εμφάνισαν προφανώς χαμηλότερα επίπεδα BUN στις εβδομάδες 3 και 8 (P=0.017 και P{13}}.015, αντίστοιχα, Πίνακας 2). Σε σύγκριση με την ομάδα NC, οι αρουραίοι της ομάδας DNM εμφάνισαν προφανώς υψηλότερα επίπεδα Scr σε διάφορα χρονικά σημεία (P=0.033, P=0.026, P=0.028, αντίστοιχα, Πίνακας 3 ) Σε σύγκριση με την ομάδα DNM. Οι αρουραίοι DNM συν APS έδειξαν προφανώς χαμηλότερα επίπεδα Scr την εβδομάδα 8 (P= 0.021, Πίνακας 3), ενώ δεν παρατηρήθηκε διαφορά στις εβδομάδες 3 και 13. Σε σύγκριση με την ομάδα NC, οι αρουραίοι της ομάδας DNM έδειξαν σημαντικά υψηλότερα 24 h επίπεδα πρωτεΐνης ούρων (P=0.021, P= 0.037, P= 0.019, αντίστοιχα, Πίνακας 4) και μετά την εβδομάδα 8, η πρωτεΐνη των ούρων αυξήθηκε δραματικά (P{{ 38}}.017, Πίνακας 4). Σε σύγκριση με την ομάδα DNM. Οι αρουραίοι DNM συν APS εμφάνισαν σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα πρωτεΐνης ούρων 24 ωρών την εβδομάδα 13 (Ρ=0.011, Πίνακας 4).

Παθολογικά ευρήματα

Η σπειραματική δομή ήταν καθαρή στην ομάδα NC και δεν παρατηρήθηκε εμφανής ανωμαλία μεσεγχυματική υπερπλασία ή πάχυνση της βασικής μεμβράνης. Το φλοιώδες και μυελικόνεφρώνσωληνοειδήςΟι δομές ήταν κανονικές, διατεταγμένες στη σειρά, χωρίς φλεγμονή και ίνωση (Εικόνα 1Α), σε σύγκριση με την ομάδα NC. Η χρώση HE στην ομάδα DNM (Εικόνα 1Β) αποκάλυψε υπερπλασία της σπειραματικής μεσαγγειακής μήτρας, ατροφία των νεφρικών σωληναρίων και πάχυνση της βασικής μεμβράνης. Σε ορισμένες περιοχές, παρατηρήθηκε εστιακή σπειραματοσκλήρωση, πάχυνση της κάψουλας Bowman και διήθηση νεφρικών διάμεσων φλεγμονωδών κυττάρων και ινώδης πολλαπλασιασμός. Αυτές οι παθολογικές αλλαγές σε σύγκριση με την ομάδα DNM ανακουφίστηκαν σε ποικίλους βαθμούς στην ομάδα DNM συν APS (Εικόνα 1C). Επιπλέον, η ομάδα DNM συν APS έδειξε ότι η ατροφία των νεφρικών σωληναρίων μειώθηκε δραματικά και η νεφρική διάμεση ίνωση δεν παρατηρήθηκε καθαρά στη χρώση HE.

Ανοσοχρώση του TGF- 1 και -SMA στον ιστό των νεφρών

Το αποτέλεσμα ανοσοχρώσης του TGF- 1 στην ομάδα NC (Εικόνα 2Α) αποκάλυψε ελαφρώς θετική έκφραση στα νεφρικά σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα που εμφανίζονται ως διάχυτα καφέ-κίτρινα ή καφέ σωματίδια και τα περισσότερα σπειράματα έδειξαν αρνητική έκφραση. Σε σύγκριση με την ομάδα NC, πολυάριθμοι καφέ-κίτρινοι θετικοί κόκκοι παρατηρήθηκαν στις νεφρικές σωληναριακές και νεφρικές ενδιάμεσες περιοχές στην ομάδα DNM (Εικόνα 2Β), υποδεικνύοντας ότι η έκφραση του TGF- 1 στηννεφρόήταν υψηλότερο από αυτό στην ομάδα NC. Επιπλέον, στην ομάδα DNM συν APS (Εικόνα 2C) το επίπεδο των κίτρινων κοκκωδών θετικών αντιδραστηρίων έδειξε μια ελαφρά απώλεια χρώματος και μειώθηκε σε σύγκριση με εκείνα της ομάδας DNM. Στην ομάδα NC (Εικόνα 2D), η θετική έκφραση του -SMA εμφανίστηκε ως μερικά καφέ-κίτρινα ή καφέ σωματίδια που εντοπίζονται κυρίως στα λεία μυϊκά κύτταρα των νεφρικών αρτηριακών αγγείων και περιστασιακά στα νεφρικά σωληνάρια και στο νεφρικό διάμεσο. Σε σύγκριση με την ομάδα NC, η πιο νεφρική διάμεση περιοχή καλυπτόταν από καφέ-κίτρινα ή καφέ σωματίδια, υποδεικνύοντας ότι η έκφραση του a-SMA ενισχύθηκε στην ομάδα DNM (Εικόνα 2Ε). Επιπλέον, στην ομάδα DNM συν APS (Εικόνα 2ΣΤ) το επίπεδο των κίτρινων κοκκωδών θετικών αντιδραστηρίων έδειξε μια ελαφρά απώλεια χρώματος και μειώθηκε σε σύγκριση με την ομάδα DNM.

Συζήτηση

Το DN είναι μια σοβαρή διαβητική επιπλοκή με κλινικά χαρακτηριστικά του ρυθμού απέκκρισης πρωτεΐνης ούρων να αυξάνεται με την πάροδο του χρόνου και η νεφρική υπολειτουργία να εξελίσσεται σε νεφροποίηση στο τελικό στάδιο. Πολλά διαβητικά παθολογικά προϊόντα, συμπεριλαμβανομένων των κατεχολαμινών, της ενδοθηλίνης, του αυξητικού παράγοντα που μοιάζει με ινσουλίνη-1, των τελικών προϊόντων προηγμένης γλυκοζυλίωσης και του TGF- 1, έχουν συσχετιστεί με ίνωση οργάνων. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι το μονοπάτι σηματοδότησης που προκαλείται από TGF- 1-ασκεί σημαντικό συμμετοχικό ρόλο στηννεφρώνίνωσηκάτω από ορισμένες νεφρικές παθολογικές καταστάσεις [22]. Σε αυτή τη μελέτη, ετοιμάσαμε ένα ζωικό μοντέλο DN με μη νεφρεκτομή και ένεση στρεπτοζοτίνης [23]. Οι αρουραίοι στην ομάδα DNM εμφάνισαν σοβαρή μορφήνεφρώνβλάβησυμπεριλαμβανομένων αυξημένων επιπέδων γλυκόζης αίματος και BUN ορού και αυξημένων επιπέδων πρωτεΐνης ούρων στις 24 ώρες, καθώς και σημαντική μείωση του σωματικού βάρους. Επιπλέον, παθολογικές μελέτες στο νεφρό αποκάλυψαν υπερπλασία της σπειραματικής μεσαγγειακής μήτρας, ατροφία των νεφρικών σωληναρίων και διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων, υποδεικνύοντας ότι η DN σε αρουραίους οδηγεί σε μεγάλο όγκο πρωτεϊνουρίας. Τα αποτελέσματα της τρέχουσας μελέτης έδειξαν ότι το APS, ένα συστατικό του TCM, ρυθμίζει προς τα κάτω την έκφραση του a-SMA και του TGF- 1 στους διαβητικούς νεφρούς και παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη νεφρικής ίνωσης που σχετίζεται με DN σε ποντικούς .

Η συσσώρευση της εξωκυτταρικής μήτρας είναι μια αιτία σπειραματοσκλήρωσης και σωληναριδικής ίνωσης στην παθολογική διαδικασία της DN και ο TGF- 1 παίζει σημαντικό ρόλο στη σωληναρισμοδιάμεσο ίνωση. Ο TGF- 1 μπορεί να προκαλέσει την προσκόλληση και την καθίζηση της μεσοκυτταρικής μήτρας και να αναστέλλει την αποικοδόμηση της κυτταρικής μήτρας, συμβάλλοντας στη σωληναρισιακή διάμεση ίνωση [24, 25]. Έτσι, η αναστολή του TGF- 1 μπορεί να ανακουφίσει την εξέλιξη του DN. Ο Jeremiah [26] διεξήγαγε πειράματα UUO σε αρουραίους και έδειξε ότι μετά την αφαίρεση μιας απόφραξης, η νεφρική σωληναριακή διάμεση ίνωση ανακουφίστηκε και η έκφραση του TGF- 1 μειώθηκε, υποστηρίζοντας ότι η αναστολή της υψηλής έκφρασης του TGF- 1 μπορεί να ανακουφίσει ή να καθυστερήσει διάμεση ίνωση των νεφρικών σωληναρίων.

Τα τελευταία χρόνια, οι περισσότερες μελέτες του TGF- έχουν εξερευνήσει την οδό μεταγωγής σήματος του. Ο TGF- μπορεί να προκαλέσει ενεργοποίηση μιας ποικιλίας μορίων σηματοδότησης, όπως οι πρωτεΐνες Smad, οι ενεργοποιημένες από μιτογόνο πρωτεϊνικές κινάσες και η κινάση της φωσφατιδυλινοσιτόλης 3/πρωτεϊνική κινάση Β, κ.λπ., και η οδός σηματοδότησης TGF- 1/Smad είναι μια σημαντική επαγωγέας [27] της νεφρικής ίνωσης. -Το SMA είναι μια πρωτεΐνη κυτταροσκελετού σε ευκαρυωτικά κύτταρα που επηρεάζει τη δομή των μικρονημάτων των κυττάρων [28]. Στο φυσιολογικό νεφρικό ιστό, το -SMA εκφράζεται μόνο στο μέσο του νεφρικού αγγείου και σπάνια εκφράζεται στα σπειράματα και στο νεφρικό διάμεσο. Κάτω από παθολογικές καταστάσεις στο νεφρό, το -SMA μπορεί να εκφραστεί και να πολλαπλασιαστεί γύρω από τη σπειραματική μεσεγχυματική περιοχή, τη γύρω περιοχή του σπειράματος, τη γύρω περιοχή της ίνωσης και γύρω από τα αιμοφόρα αγγεία [29].

Οι ινοβλάστες μπορούν να μετατραπούν σε μυοϊνοβλάστες υπό ορισμένες συνθήκες και οι αλλαγές στο μικροπεριβάλλον μπορεί να επηρεάσουν τη μετατροπή των ινοβλαστών σε μυοϊνοβλάστες. Όχι μόνο η διαδιαφοροποίηση της λειτουργίας των νεφρικών σωληναριακών επιθηλιακών κυττάρων αλλά και η ενεργοποίηση των νεφρικών διάμεσων ινοβλαστών οδηγεί σε νεφρική διάμεση ίνωση, με αποτέλεσμα τον πολλαπλασιασμό της ενεργοποίησης των μυϊκών ινοβλαστών. Πολλές μελέτες νεφρικής νόσου έχουν επιβεβαιώσει ότι ο αριθμός των μυϊκών ινοβλαστών, το επίπεδο έκφρασης -SMA και ο βαθμός της νεφρικής διάμεσης ίνωσης συσχετίζονται θετικά με την εξέλιξη της νεφρικής νόσου. Η πρωτεΐνη δείκτης -SMA είναι ένας σημαντικός δείκτης της εξέλιξης της νεφρικής διάμεσης ίνωσης [30].

Άλλες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η TCM έχει ευεργετικά αποτελέσματα στη θεραπεία της DN. Οι Chen et al [31] ανέφεραν ότι ένα μείγμα Gegen (Radix Puerariae) και Shanzha (Fructus Crataegi) αναστέλλει τη νεφρική βλάβη στον διαβήτη τύπου 2 μέσω της μείωσης του PI3K/Akt. Οι Zhang et al [32] υπέδειξαν ότι τα κοκκία Shenkang βελτιώνουν τη νεφρική βλάβη σε ένα μοντέλο DN αρουραίου αποτρέποντας τη συσσώρευση εξωκυτταρικής μήτρας, μειώνοντας την έκφραση του κολλαγόνου Ι και III και αναστέλλοντας την έκφραση των μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας-2 και { {5}} στον νεφρικό ιστό. Ιδιαίτερα σχετικά με την παρούσα μελέτη είναι τα πρόσφατα ευρήματα ότι ένας συνδυασμός APS και άλλου εκχυλίσματος TCM, της ρείνης, ανακουφίζει τις παθολογίες της χρόνιαςνεφρώναποτυχία, συμπεριλαμβανομένης της λειτουργικής βλάβης στα σπειράματα, της διάμεσης φλεγμονής και της απόπτωσης των νεφρικών σωληναριακών κυττάρων [33].

Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι το APS μείωσε την έκφραση των -SMA και TGF- 1 in vivo και ανακούφισε τη βλάβη του νεφρικού ιστού. Σε σύγκριση με προηγούμενες μελέτες για το TCM στο DN, το προστατευτικό αποτέλεσμα εμφανίστηκε μέσω διαφορετικού μηχανισμού, υποδηλώνοντας ότι μια θεραπευτική στρατηγική για την ένωση TCM για DN μπορεί να είναι αποτελεσματική.

Ωστόσο, η επίδραση μείωσης της ρύθμισης του σακχάρου στο αίμα δεν παρατηρήθηκε μετά τη θεραπεία με APS. Προβλέπουμε ότι καθώς η νόσος προχωρούσε (περίοδος παρατήρησης: 13 εβδομάδες), η χρήση μόνο του APS για τη διατήρηση σταθερών επιπέδων σακχάρου στο αίμα με την πάροδο του χρόνου δεν είναι αποτελεσματική. Προηγούμενα πειράματα έδειξαν παρόμοια αποτελέσματα [34, 35], ωστόσο, απαιτείται περαιτέρω επιβεβαίωση. Σε ορισμένες κλινικές δοκιμές, οι παράγοντες TCM συνταγογραφούνται ως μεμονωμένοι παράγοντες και η συγχορήγηση δύο ή περισσότερων παραγόντων (APS συν μετφορμίνη ή APS συν ινσουλίνη) μπορεί να είναι απαραίτητη για τους περισσότερους ασθενείς.

συμπέρασμα

Συμπερασματικά, δείξαμε ότι το APS έχει σημαντικές επιδράσεις στο DN, το APS όχι μόνο μείωσε σημαντικά τη βλάβη της νεφρικής λειτουργίας στο αρχικό στάδιο και τη λευκωματίνη των ούρων στο μέσο και το τελευταίο στάδιο, αλλά επίσης βελτίωσε τη νεφρική σωληναριακή διάμεση βλάβη σε αρουραίους DN. Ο μηχανισμός μπορεί να σχετίζεται με την αρνητική ρύθμιση της έκφρασης του TGF- 1 και του -SMA και κατά συνέπεια με καθυστέρηση στην εξέλιξη της νεφρικής διάμεσης ίνωσης σε αρουραίους DN.

βιβλιογραφικές αναφορές

1 Pang GM, Yan Y, Zhu P, et al. Προσχέδιο κλινικής προδιαγραφής της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής σχετικά με τη διαβητική περιφερική νευροπάθεια. Chin J Tradit Chin Med Pharm 2010,

2: 260-264. 2. Wang YZ, Zhang ZH. Μηχανισμός διαβητικής νεφροπάθειας. Chin Rem Clin 2008, 8: 58-60.

3. Xiang HD. Παθολογική στη διαβητική νεφροπάθεια. Int J Endocrinol 2004, 24: 125-136.

4. Min XL, Lan LG. Επίδραση της ένεσης Shu-Tong στη διαβητική νεφροπάθεια. Shanxi J Tradit Chin Med 2008, 29: 407-409.

5. Gao ZT, Wang G. Επίδραση της κάψουλας Huangkui στη μικρο-φλεγμονή σε ασθενείς με διαβήτη. Chin J Integr Tradit West Nephrol 2011, 12: 1104-1105.

6. L Lin, Ni Q, Liu XM. Η κάψουλα Tang-Wei-Kang αναστρέφει τη διαβητική νεφροπάθεια σε 132 ασθενείς. J Med Res 2008, 37: 46-50. 7. Wang HW, Qing N, Pang JL, et al. Μελέτη του κανόνα σχετικά με την κινεζική ιατρική στη θεραπεία της διαβητικής νεφροπάθειας. Chin Arch Tradit Chin Med 2008, 26: 2365-2368.

8. Lin L, Guo L. Επίδραση του TWK στην έκφραση της MMP -9 στον νεφρικό φλοιό σε διαβητικούς αρουραίους που προκαλούνται από στρεπτοζοτοκίνη. J Shanxi Coll Tradit Chin Med 2003, 4: 8-18.

9. Lin L, Qing Q, Liu XM. Επιδράσεις και μηχανισμοί της κάψουλας Tang-Wei-Kang που προστατεύει τη νεφρική λειτουργία σε αρουραίους με διαβήτη. Chin J Chin Mat Med 2003, 28: 62-66.

10. Wang W, Koka V, Lan HY. Μετασχηματισμός αυξητικού παράγοντα-βήτα και σηματοδότησης Smad σε νεφρικές παθήσεις. Nephrol 2005, 10: 48-56.

11. Αλεξόπουλος Ε, Γιονανλής Λ, Παπαγιάννη Ε, κ.ά. Προγνωστικοί παράγοντες έκβασης στην ιδιοπαθή ταχέως προοδευτική σπειραματονεφρίτιδα. BMC Nephrol 2006, 7: 1-13.

12. Wang HG. Αφέψημα και Υλικό Medica. People's Medical Publishing House, 1986.

13. Wu Q. The Golden Mirror Of Medicine. Chinese Medicine Press, 2002.

14. Ji Y, Li JC, Meng JY, et αϊ. Μελέτη της διπλής κατεύθυνσης ρυθμιστικής επίδρασης του ζεύγους φαρμάκων Ban Xia (Pinellia ternata) και Huanglian (Coptis Chinensis) στη γαστρεντερική κίνηση των ποντικών. Tradit Med Res 2018, 3: 148-156.

15. Ji Y, Wang TR, Zhang KX, et αϊ. Βιβλιογραφική ανάλυση της κανονικότητας και των ανεπιθύμητων ενεργειών της κανέλας και των συνταγογραφούμενων παρασκευασμάτων της. Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 163-168.

16. Zhou Y, Wu Y. Effects of astragalus polysaccharide on ινσουλίνη μεταγωγή σήματος σε νεφρικό ιστό διαβητικών αρουραίων τύπου 2. J Hubei Med Univ 2005, 18: 242-247.

17. Xu Y, Zhou SW, Tang JL, et αϊ. Βέλτιστη επιλογή μοντέλων αρουραίων πειραματικής διαβητικής νεφροπάθειας. Acta Acad Med Milita 2006, 28: 2247-2249.

18. Li ZJ, Zhang Y. Η πρόοδος στην έρευνα σε ένα ζωικό μοντέλο διαβητικής νεφροπάθειας. Chin B Life Sci 2011, 23: 90-95.

19. Yang F, Tang LQ, Wang FL, et al. Παράγοντες επιρροής στην εγκαθίδρυση πειραματικής διαβητικής νεφροπάθειας σε αρουραίους. Anhui Med Pharma J 2012, 16: 735-738.

20. Yaribeygi Η, Mohammadi ΜΤ, Rezaee R, et al. Η φαινοφιμπράτη βελτιώνει τη νεφρική λειτουργία βελτιώνοντας την έκφραση NOX-4, IL-18 και p53 σε ένα πειραματικό μοντέλο διαβητικής νεφροπάθειας. J Cell Biochem 2018.

21. Zhao Y, Huang W, Wang J, et αϊ. Η ταξιφολίνη εξασθενεί τη διαβητική νεφροπάθεια σε διαβητικούς αρουραίους που προκαλούνται από στρεπτοζοτοκίνη. Am J Transl Res 2018, 10: 1205-1210.

22. Boukhalfa G, Desmouliere Α, Rondeau Ε, et al. Σχέση μεταξύ έκφρασης ακτίνης άλφα λείων μυών και ινωτικών αλλαγών στον ανθρώπινο νεφρό. Exp Nephrol 1996, 4: 241-247.

23. Hewitson TD, Becker GJ. Διάμεσοι μυοϊνοβλάστες στη σπειραματονεφρίτιδα IgA. Am J Nephrol 1995, 15: 111-117.

24. Tang WW, Van GY, Qi M. Myofibroblast and alpha 1 (III) collagen in πειραματική σωληναρισιακή διάμεση νεφρίτιδα. Kidney Int 1997, 51: 926-931.

25. Iwano Μ, Plieth D, Danoff ΤΜ, et al. Απόδειξη ότι οι ινοβλάστες προέρχονται από το επιθήλιο κατά την ίνωση των ιστών. J Clin Invest 2002, 110: 341-350.

26. Grupp C, Lottermoser J, Cohen DI, et αϊ. Μετασχηματισμός εσωτερικών μυελικών ινοβλαστών αρουραίου σε μυοϊνοβλάστες in vitro. Kidney Int 1997, 52: 1279-1290.

27. Ina Κ, Kitamura Η, Tatsukawa S, et αϊ. Σημασία του -SMA στους μυοϊνοβλάστες που εμφανίζονται σε νεφρική σωληναρισιακή διάμεση ίνωση. Histol Histopathol 2011, 26: 855-866.

28. Murphy JT, Duffy SL, Hybki DL, et al. Η διαπερατότητα των ανθρώπινων μικροαγγειακών πνευμονικών ενδοθηλιακών κυττάρων που προκαλείται από τη θρομβίνη εξαρτάται από το ασβέστιο. J Trauma 2001, 50: 213-222.

29. Satpathy Μ, Gallagher Ρ, Lizotte-Waniewski Μ, et al. Προκαλούμενη από θρομβίνη φωσφορυλίωση της ρυθμιστικής ελαφριάς αλυσίδας της μυοσίνης II σε καλλιεργημένα ενδοθηλιακά κύτταρα κερατοειδούς βοοειδούς. Exp Eye Res 2004, 79: 477-486.

30. Birukova AA, Smurova Κ, Birukov KG, et αϊ. Ο ρόλος του Rho GT περνά στη δυσλειτουργία του φραγμού των πνευμονικών αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων που προκαλείται από θρομβίνη. Microvasc Res 2004, 67: 64-77.

31. Z Chen, Y Yuan, X Zou, et al. Το μείγμα Radix Puerariae και Fructus Crataegi αναστέλλει τη νεφρική βλάβη στον διαβήτη τύπου 2 μέσω της μείωσης του AKT/PI3K. Bmc Complementary & Alternative Medicine 2017, 17: 454-458.

32. Yu Zhang, N Zhou, H Wang, S Wang, et al. Επίδραση των κοκκίων Shenkang στην εξέλιξη της χρόνιας νεφρικής ανεπάρκειας σε αρουραίους με νεφρεκτομή 5/6. Experimental & Therapeutic Medicine 2015, 9: 2034-2042.

33. Y Lian, L Xie, M Chen, et αϊ. Επιδράσεις ενός συνδυασμού πολυσακχαρίτη astragalus και ρηίνης στην απόπτωση σε αρουραίους με χρόνια νεφρική ανεπάρκεια [J]. Evid Based Complement Alternat Med 2014, 27:1862-1868.

34. Lai YN, Yu MH, Zhu QY, et αϊ. Επίδραση πολυσακχαριτών του αστράγαλου στον TGF- 1 σε νεφρικό ιστό διαβητικών αρουραίων. Fudan Univ J Med Sci 2002, 29: 255-257. 35. Li ZJ, Zhang Y, Liu YM, et αϊ. Επίδραση πολυσακχαριτών του αστράγαλου στην έκφραση νεφρίνης και ποδοκίνης σε ποδοκύτταρα αρουραίων πρώιμης διαβητικής νεφροπάθειας. Chin J Pathophysiol 2011, 27: 1772-1776.