In vitro και in vivo Μεταβολισμός του εκχυλίσματος Cistanche Tubulosa σε φυσιολογικούς και χρόνιους απρόβλεπτους καταθλιπτικούς αρουραίους που προκαλούνται από στρες

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Yang Li, et αϊ

ΑΦΗΡΗΜΕΝΗ

Το Cistanche tubulosa, ένα είδος του Cistanches Herba, επιβεβαιώθηκε πρόσφατα ότι έχει αντικαταθλιπτική αποτελεσματικότητα σε αρουραίους χρόνιου απρόβλεπτου στρες (CUS) αποκαθιστώντας την ομοιόσταση της εντερικής μικροχλωρίδας. Σε αυτό το άρθρο, στοχεύουμε να διερευνήσουμε το μεταβολικό προφίλ του C. tubulosa σε φυσιολογικούς και επαγόμενους από CUS καταθλιπτικούς αρουραίους in vitro και in vivo. Χρησιμοποιώντας το UPLC-Q-TOF-MS, ο in vitro γαστρεντερικός μεταβολισμός τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosa(CTE) αξιολογήθηκε τόσο σε φυσιολογικούς όσο και σε CUS αρουραίους. Ταυτόχρονα, in vivo μεταβολισμός της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε φυσιολογικούς και καταθλιπτικούς αρουραίους διερευνήθηκε επίσης σε ούρα και κόπρανα αρουραίων. Συνολικά 20 και 26 μεταβολίτες χαρακτηρίστηκαν από in vitro και in vivometabolism σε φυσιολογικούς και CUS αρουραίους, αντίστοιχα. CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μεταβολίστηκε σε αγλυκόνες και προϊόντα αποικοδόμησης των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων (PhGs) και των ιριδοειδών γλυκοσιδών είτε από φυσιολογικό είτε από καταθλιπτικό εντερικό μικροβίωμα αρουραίου in vitro. Οι μεταβολίτες της φάσης ΙΙ των αγλυκονών και τα προϊόντα αποικοδόμησης των PhGs και οι ιριδοειδής γλυκοσίδες ήταν οι κύριοι μεταβολίτες στα ούρα και τα κόπρανα αρουραίου. Επιπλέον, η μεταβολική ικανότητα παραγωγής δευτερογενών γλυκοσιδών και αγλυκονών σε καταθλιπτική εντερική μικροχλωρίδα αρουραίου ήταν πολύ πιο αδύναμη από αυτή της φυσιολογικής εντερικής μικροχλωρίδας αρουραίου, η οποία αποδόθηκε στις διαταραγμένες γλυκοσιδικές υδρολάσες που παράγονται από την εντερική μικροχλωρίδα σε αρουραίους με καταστολή CUS. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έθεσαν τα θεμέλια για την κατανόηση της μεταβολικής διαδικασίας και του θεραπευτικού μηχανισμού της αντικαταθλιπτικής ιδιότητας του CTE.

Λέξεις-κλειδιά: Cistanche tubulosa, ΚατάθλιψηΜεταβολισμός, In vitro, In vivo, Εντερική μικροχλωρίδα

1. Εισαγωγή

Το Cistanches Herba είναι επίσημα καταγεγραμμένο ως το αποξηραμένο χυμώδες στέλεχος του Cistanche deserticola (YC Ma) και του C. tubulosa (Schrenk), το οποίο χρησιμοποιείται για τη θεραπεία της νεφρικής ανεπάρκειας, της ανικανότητας, της γυναικείας υπογονιμότητας, της νοσηρής λευκορραγίας, της άφθονης μετρορραγίας και της γεροντικής δυσκοιλιότητας [1]. Σύγχρονες φαρμακολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι το Cistanches Herba έχει διάφορες βιολογικές δράσεις όπως κατά του νευροεκφυλισμού, της ανοσορύθμισης και της αντιφλεγμονής [2,3]. Οι προηγούμενες έρευνές μας το έχουν επιβεβαιώσειΕκχύλισμα Cistanche tubulosa(CTE), που αποτελούνται από 48,6 τοις εκατό φαινυλαιθανοειδών γλυκοσίδες (PhGs), 6,9 τοις εκατό ιριδοειδή γλυκοσίδες και 2{5}},0 τοις εκατό ολικούς σακχαρίτες, θα μπορούσαν να ανακουφίσουν σημαντικά τα καταθλιπτικά συμπτώματα των καταθλιπτικών αρουραίων που προκαλούνται από χρόνιο απρόβλεπτο στρες αποκατάσταση της ομοιόστασης της μικροχλωρίδας του εντέρου [4]. Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι οι αλλαγές στη σύνθεση της εντερικής μικροχλωρίδας σχετίστηκαν με την ανάπτυξη και την εξέλιξη της κατάθλιψης [5,6]. Η σχετική αφθονία των μικροβιακών γενών διαταράχθηκε σημαντικά σε αρουραίους μοντέλου με καταθλιπτικό CUS σε σύγκριση με τους κανονικούς μάρτυρες [7]. Σε ασθενείς με κατάθλιψη, η ποικιλομορφία και ο πλούτος της εντερικής μικροχλωρίδας άλλαξαν επίσης σημαντικά [8]. Επιπλέον, διάφορες ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων (PhGs) και των ιριδοειδή γλυκοσίδων θεωρήθηκαν ως τα κύρια συστατικά του Cistanches Herba [2,3], τα οποία μεταβολίζονταν εύκολα στους δευτεροταγείς γλυκοσίδες και τις αγλυκόνες τους, συμπεριλαμβανομένης της υδροξυτυροσόλης (HT), 3,{15} γλυκοσίδη, απογλυκοζυλιωμένο γενιποσιδικό οξύ, κ.λπ. από την ανθρώπινη εντερική μικροχλωρίδα. Αυτοί οι μεταβολίτες απορροφώνται ευκολότερα μέσω του εντέρου και ασκούν βιολογική δραστηριότητα σύμφωνα με το πρωτότυπο συστατικό[9-11]. Έτσι, πιστεύουμε ότι κατά την εμφάνιση και την ανάπτυξη της κατάθλιψης, η διαταραχή της δομής της εντερικής μικροχλωρίδας θα επηρεάσει αναπόφευκτα τον μεταβολισμό των από του στόματος παραδοσιακών κινεζικών φαρμάκων (TCM) στο γαστρεντερικό σωλήνα, επιπλέον του ότι θα επηρεάσει τη φυσιολογική κατάσταση του ξενιστή. Τα περισσότερα από τα υπάρχοντα μεταβολικά δεδομένα του Cistanches Herba προέρχονται από μεταβολικές μελέτες σε υγιή ζώα[12–15]. Ως εκ τούτου, θα ήταν πιο κλινική σημασία να διερευνηθεί το μεταβολικό προφίλ της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)στην παθολογική κατάσταση στην αποσαφήνιση των βιοδραστικών συστατικών του και στην κατανόηση του μηχανισμού δράσης για την αντικαταθλιπτική του αποτελεσματικότητα.

Στην παρούσα μελέτη, στοχεύουμε να χαρακτηρίσουμε τα μεταβολικά προφίλ του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)τόσο σε υγιείς όσο και σε καταθλιπτικούς αρουραίους που προκαλούνται από CUS με φασματομετρία μάζας τετραπολικής υγρής χρωματογραφίας υπερ-απόδοσης (UPLC-Q-TOF-MS). Το γαστρικό υγρό, το εντερικό υγρό και η μικροχλωρίδα φυσιολογικών και καταθλιπτικών παθολογικών αρουραίων έχουν χρησιμοποιηθεί για την προσομοίωση της μεταβολικής διαδικασίας της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)στο γαστρεντερικό σωλήνα in vitro, ανεξάρτητα και διαδοχικά. Οι in vivo μεταβολίτες αποσαφηνίζονται επίσης μετά την από του στόματος χορήγηση CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε κανονικούς και CUS αρουραίους. Αυτή η μελέτη παρέχει νέες γνώσεις για τον μεταβολισμό και τους ενεργούς μεταβολίτες του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)για την κατάθλιψη.

2. Υλικό και μέθοδοι

2.1. Υλικό

Αποξηραμένοι μίσχοι του C. tubulosa συλλέχθηκαν από την επαρχία Hetian (Xinjiang, Κίνα). Τα δείγματα κουπονιών επικυρώθηκαν από τον καθηγητή Xiaobo Li και κατατέθηκαν στο ερμπάριο της Φαρμακευτικής Σχολής, Πανεπιστήμιο Jiao Tong της Σαγκάης (Σαγκάη, Κίνα). Η μέθοδος εξαγωγής χρησιμοποιήθηκε όπως διευκρινίστηκε στην προηγούμενη δημοσίευσή μας [4]. οΕκχύλισμα Cistanche tubulosaΤα δείγματα (CTE) αποθηκεύτηκαν στους 4 βαθμούς και επαναδιαλύθηκαν με στείρο νερό πριν από τη χρήση. Τα αποστειρωμένα υδατικά διαλύματα του ΚΤΕ(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)Στη συνέχεια, το δείγμα διηθήθηκε μέσω μεμβράνης 0.22 μm και τα διηθήματα συλλέχθηκαν σε αποστειρωμένους σωλήνες.

Το Echinacoside χορηγήθηκε από το εργαστήριο του Dr. Pengfei Tu, Peking University (Πεκίνο, Κίνα). Ακτεοζίτης, ισοακτεοσίδης, 2'-ακετυλολακτεοσίδης, και κιστανοζίτης Α αγοράστηκαν από την Sichuan Weikeqi BiologicalTechnology Co., Ltd. (Chengdu, Κίνα). Υδροξυτυροσόλη, καφεϊκό οξύ, 3,4-διυδροξυβενζολοπροπιονικό οξύ, 3-υδροξυφαινυλπροπιονικό οξύ και 3-φαινυλπροπιονικό οξύ αγοράστηκαν από την Aladdin IndustrialInc. (Σανγκάη, Κίνα). Η καθαρότητα κάθε συστατικού προσδιορίστηκε ότι είναι > 95 τοις εκατό με HPLC-UV. Το ακετονιτρίλιο ποιότητας HPLC αγοράστηκε από τη Merck (Darmstadt, Γερμανία). Το απιονισμένο νερό παρασκευάστηκε από απεσταγμένο νερό χρησιμοποιώντας ένα σύστημα καθαρισμού νερού Milli-Q (Milipore, Bedford, ΜΑ, ΗΠΑ). Όλα τα άλλα αντιδραστήρια και χημικά που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αναλυτικής ποιότητας.

2.2. Πειράματα σε ζώα

Αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (200 ± 20 g) προμηθεύτηκαν από την Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Company (Πεκίνο, Κίνα) και στεγάστηκαν στο Εργαστηριακό Κέντρο Ζώων του Πανεπιστημίου Shanghai JiaoTong (Σαγκάη, Κίνα). Τα ζώα ήταν σε ελεγχόμενη θερμοκρασία δωματίου σε ομαδικά σπίτια (25 ± 2 βαθμοί, 55 ± 10 τοις εκατό σχετική υγρασία) με κύκλο φωτός-σκότους 12:12 ωρών. Οι αρουραίοι είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε κανονικό εργαστηριακό φαγητό και νερό για 1 εβδομάδα. Οι εγκαταστάσεις και τα πρωτόκολλα για τα ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του Πανεπιστημίου Shanghai Jiao Tong (Σαγκάη, Κίνα).

Μετά από εγκλιματισμό μιας εβδομάδας, δώδεκα αφελείς αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε δύο ομάδες (n=6), την ομάδα ελέγχου και την ομάδα χρόνιου απρόβλεπτου στρες (CUS). Οι αρουραίοι CUS αναπτύχθηκαν όπως στην προηγούμενη έκθεσή μας [4], οι οποίοι υποβλήθηκαν σε μια ποικιλία στρεσογόνων παραγόντων: λευκός θόρυβος (100 dB) για 1 ώρα, στροβοσκοπικός φωτισμός χαμηλής έντασης κατά τη διάρκεια της νύχτας (120 αναλαμπές/λεπτό), στέρηση νερού για 24 ώρες, άδειος μπουκάλια νερού για 1 ώρα (μετά τη στέρηση νερού), στέρηση τροφής για 24 ώρες, φυσική συγκράτηση (1−2 ώρες), αναγκαστική κολύμβηση (5 λεπτά), λερωμένο κλουβί για 24 ώρες (200 mL νερό σε 100 g στρώμα πριονιδιού), πρέζα ουράς ( 1 λεπτό), σοκ για 30 λεπτά, κλίση κλωβού 45 μοιρών για 24 ώρες και ολονύκτιος φωτισμός (12 ώρες). Οι παράγοντες πίεσης εφαρμόστηκαν συνεχώς και τυχαία για 4 εβδομάδες, η λεπτομερής διάταξη περιγράφεται στον Πίνακα S1. Μετά από 4 εβδομάδες στρες, η δοκιμή σακχαροπροτίμησης, η δοκιμή ανοιχτού πεδίου και η δοκιμή τροφοδοσίας με καταστολή καινοτομίας διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [4]. Το περίγραμμα του CUS και του τεστ συμπεριφοράς φαίνεται στο Σχ. S1. Μετά από δοκιμές συμπεριφοράς, τουλάχιστον 4 σφαιρίδια κοπράνων ελήφθησαν από κάθε αρουραίο και τοποθετήθηκαν σε στείρους κωνικούς σωλήνες για in vitro ανάλυση CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μεταβολισμός.

2.3. Γαστρεντερικός μεταβολισμός της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από φυσιολογικό και CUS αρουραίο in vitro

2.3.1. Μεταβολισμός CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε προσομοιωμένα γαστρικά και εντερικά υγρά

Πενήντα χιλιοστόγραμμα CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)προστέθηκαν σε 10 mL προσομοιωμένου γαστρικού υγρού και εντερικού υγρού, αντίστοιχα. Στη συνέχεια CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 4 ώρες σε γαστρικό υγρό και 6 ώρες σε εντερικό υγρό. Το καλλιεργημένο μίγμα (1 mL) σβήστηκε με 3 mL κορεσμένης με νερό η-βουτανόλης αμέσως στις 0 και 4 ώρες σε γαστρικό υγρό και στις 0 και 6 ώρες σε εντερικό χυμό. Η μέθοδος επεξεργασίας του δείγματος που χρησιμοποιήθηκε ήταν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9].

2.3.2. Μεταβολισμός CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από φυσιολογικό και CUS εντερικό μικροβίωμα αρουραίου

Φρέσκα φυσιολογικά και CUS δείγματα κοπράνων αρουραίου αρχικά αναμίχθηκαν και ομογενοποιήθηκαν με 25 φορές τον όγκο του ζωμού GAM. Τα ιζήματα απομακρύνθηκαν με διήθηση μέσω τριών κομματιών γάζας. Το εναιώρημα στη συνέχεια επωάστηκε στους 37 βαθμούς σε έναν αναερόβιο επωαστήρα στον οποίο ο αέρας αντικαταστάθηκε από ένα μείγμα αερίων (H2 5 τοις εκατό, το CO2 10 τοις εκατό, το N2 85 τοις εκατό). Πενήντα χιλιοστόγραμμα CTE προστέθηκαν χωριστά σε 5 mL κανονικού εναιωρήματος κοπράνων και CUS αρουραίου, και το εναιώρημα επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 48 ώρες. Το καλλιεργημένο μίγμα απομακρύνθηκε και εκχυλίστηκε με κορεσμένη με νερό η βουτανόλη στις 0, 12, 24 και 48 ώρες. Η μέθοδος επεξεργασίας του δείγματος περιγράφηκε προηγουμένως [9].

2.3.3. Διαδοχικός μεταβολισμός της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από το γαστρικό υγρό, τον εντερικό χυμό, το φυσιολογικό και το εντερικό μικροβίωμα αρουραίου CUS

Πρώτον, 100 mg CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)προστέθηκε σε 1{{10}} mL προσομοιωμένου γαστρικού υγρού και επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 4 ώρες. Η όλη αντίδραση σβήστηκε με 3 φορές τον όγκο της κορεσμένης σε νερό n-βουτανόλης και φυγοκεντρήθηκε στις 3000 rpm για 15 λεπτά, ακολουθούμενη από εξάτμιση του υπερκειμένου υπό ρεύμα αζώτου αέριο στους 37 βαθμούς. Δεύτερον, το υπόλειμμα επαναδιαλύθηκε σε 0,4 mL αποστειρωμένου νερού, προστέθηκε σε 8 mL προσομοιωμένου εντερικού χυμού και επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 6 ώρες. Το δείγμα με γαστρικό υγρό προετοιμάστηκε με τον ίδιο τρόπο. Τέλος, το υπόλειμμα διαλύθηκε ξανά σε 0,3 mL αποστειρωμένου νερού, προστέθηκε σε 6 mL εναιωρήματα κοπράνων κανονικού και CUS αρουραίου αντίστοιχα, και επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 48 ώρες σε αναερόβιο επωαστήρα. Ένα χιλιοστόλιτρο της αντίδρασης σβήστηκε με 3 mL κορεσμένης με νερό n-βουτανόλης αμέσως στις 0 και 4 ώρες σε γαστρικό υγρό, στις 0 και 6 ώρες σε εντερικό υγρό και στις 0, 12, 24 και 48 ώρες σε εντερική μικροχλωρίδα αρουραίου . Το δείγμα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με τον ίδιο τρόπο CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε προσομοιωμένο γαστρικό χυμό.

2.4. Μεταβολισμός CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από κανονικό και CUS αρουραίο in vivo

Κάθε αρουραίος στις δύο ομάδες στεγάστηκε στη συνέχεια σε ένα ξεχωριστό μεταβολικό κλουβί. Μετά από ολονύκτια νηστεία που επέτρεπε μόνο ελεύθερη πρόσβαση σε νερό, όλοι οι αρουραίοι χορηγήθηκαν από το στόμα με 2 mL νερού μέσω γαστρικού σωλήνα. Συλλέχθηκαν τυφλά δείγματα ούρων και κοπράνων από όλους τους αρουραίους από 0 ώρες έως 12 ώρες. Περαιτέρω, CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)(400 mg/kg) χορηγήθηκε με καθετήρα. Συλλέχθηκαν δείγματα ούρων και κοπράνων από 0 έως 24 ώρες. Όλα τα δείγματα ούρων και κοπράνων αποθηκεύτηκαν αμέσως στους -80 βαθμούς.

Δείγματα ούρων και κοπράνων από φυσιολογικό και CUS αρουραίο υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. Όλα τα προκύπτοντα δείγματα αναλύθηκαν με UPLC-Q-TOF-MS.

2.5. Αναλυτική μέθοδος

Το UPLC πραγματοποιήθηκε σε σύστημα Waters ACQUITY UPLC (WatersCorp., Milford, MA, ΗΠΑ) με στήλη ACQUITY UPLC BEH C18 (100 mm × 2,1 mm id, 1,7 μm, Waters Corp. , ΗΠΑ) με βαθμιδωτή έκλουση χρησιμοποιώντας {{10}}.1 τοις εκατό μυρμηκικό οξύ ακετονιτρίλιο (Α) και 0.1 τοις εκατό μυρμηκικό οξύ σε νερό (Β) με ρυθμό ροής 0,4 mL/min . Το προφίλ κλίσης ήταν: 0–5 λεπτά (Α: 5–20 τοις εκατό ), 5–7,5 λεπτά (Α: 20–30 τοις εκατό ), 7,5–10 λεπτά (Α: 30–70 τοις εκατό ), 10–11 λεπτά (Α : 70–100 τοις εκατό), και διατηρήθηκε για 1,5 λεπτό. Η κλίση ανακυκλώθηκε στο 5 τοις εκατό σε 0,5 λεπτό και διατηρήθηκε για 2,5 λεπτά για την επόμενη εκτέλεση. Ο όγκος της ένεσης ήταν 3 μL. Η θερμοκρασία του φούρνου στήλης ρυθμίστηκε στους 35 βαθμούς.

Η φασματομετρία μάζας διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα φασματόμετρο μαζών Waters Vion IMS (Waters Corp., Milford, ΜΑ, ΗΠΑ). Ο ιονισμός πραγματοποιήθηκε σε λειτουργία αρνητικού ηλεκτροψεκασμού (ESI−). Οι παράμετροι MS ήταν οι εξής: τριχοειδής τάση, −2.0 kV; τάση κώνου, 20 V; θερμοκρασία πηγής, 120 βαθμοί ; θερμοκρασία αποδιάλυσης, 500 βαθμοί ; ροές αερίου κώνου και αποδιάλυσης, 50 και 1000 L/h, αντίστοιχα. Για ακριβή μέτρηση μάζας, χρησιμοποιήθηκε λευκίνη-εγκεφαλίνη ως μάζα κλειδώματος για τη δημιουργία ιόντων [M–H]− (m/z 554,2615). Ένα πείραμα MSE (Mass SpectrometryElevatedEnergy) σε δύο λειτουργίες σάρωσης διεξήχθη ως εξής: συνάρτηση 1 (χαμηλή ενέργεια): m/z 50–1000, χρόνος σάρωσης 0,25 s, καθυστέρηση ενδιάμεσης σάρωσης 0,02 s, ενέργεια σύγκρουσης 6 eV. λειτουργία 2 (υψηλής ενέργειας): m/z50–1000, χρόνος σάρωσης 0,25 s, καθυστέρηση ενδιάμεσης σάρωσης 0,02 s, ενεργειακή ράμπα σύγκρουσης 20–45 eV.

2.6. Επεξεργασία δεδομένων

Τα δεδομένα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας το λογισμικό UNIFI 1.8.1 (Waters Corp., Milford, MA, USA) για την ταυτοποίηση μεταβολιτών εντός των ακριβών ακατέργαστων δεδομένων πλήρους σάρωσης μάζας που συλλέχθηκαν μέσω του MSE. Οι ενώσεις αναγνωρίστηκαν με βάση την ακριβή μάζα, θραύσματα στη φασματομετρία μαζών υψηλής ενέργειας. Το όριο έντασης ορίστηκε ως 100,0 μετρήσεις. Η αναγνώριση στόχου, η ανοχή αντιστοίχισης θραυσμάτων και άλλες παράμετροι ορίστηκαν αυτόματα.

3. Αποτελέσματα

3.1. Αλλαγές συμπεριφοράς στον αρουραίο που προκάλεσε κατάθλιψη από CUS

Οι αρουραίοι με καταθλιπτικά συμπτώματα που προκαλούνται από CUS αξιολογήθηκαν με δοκιμές συμπεριφοράς, συμπεριλαμβανομένης της δοκιμής προτίμησης σακχαρόζης, της δοκιμής ανοιχτού πεδίου και της δοκιμής σίτισης κατασταλμένης από καινοτομία. Το Student's t-test αποκάλυψε ότι η προτίμηση σακχαρόζης στη δοκιμή προτίμησης σακχαρόζης (p < 0,001),="" η="" συνολική="" απόσταση="" που="" καλύπτεται="" στη="" δοκιμή="" ανοιχτού="" πεδίου="" (p="">< 0,001)="" και="" ο="" λανθάνοντας="" χρόνος="" φαγητού="" στο="" τεστ="" κατασταλτικής="" τροφοδοσίας="" (p="">< 0,01)="" ήταν="" σημαντικά="" διαφορετικό="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου="" μετά="" από="" 4-εβδομαδιαία="" θεραπεία="" cus="" (εικ.="" 1).="" αυτά="" τα="" ευρήματα="" έδειξαν="" ότι="" το="" μοντέλο="" του="" χρόνιου="" απρόβλεπτου="" στρες="" αναπτύχθηκε="" με="">

3.2. Χαρακτηρισμός χημικών συστατικών του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)

Μια ολοκληρωμένη ανάλυση των πρωτότυπων συστατικών του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)πραγματοποιήθηκε από το UPLC-Q-TOF-MS. Συνολικά, 27 ψηφοφόροι από το CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)ανιχνεύθηκαν και χαρακτηρίστηκαν δοκιμαστικά, συμπεριλαμβανομένων 20 PhGs, 5 ιριδοειδή και ιριδοειδή γλυκοσίδες και 2 ολιγοσακχαρίτες. Λεπτομερείς πληροφορίες, συμπεριλαμβανομένου του χρόνου κατακράτησης, των ακριβών ιόντων MS και θραυσμάτων MS/MS παρατίθενται στις Υποστηρικτικές πληροφορίες (Πίνακας S2) για να παρέχουν πληροφορίες σχετικά με τη δομή αυτών των χημικών συστατικών. UPLC-Q-TOF-MS ολικό ιονοχρωματόγραμμα (TIC) του CTE φαίνεται στο Σχ. S2.

3.3. Γαστρεντερικός μεταβολισμός της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από φυσιολογικό και CUS αρουραίο in vitro

Σε αυτή τη μελέτη, οι πιθανοί μεταβολίτες του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από φυσιολογικούς και CUSrats in vitro ανιχνεύθηκαν από τα TIC και ταυτοποιήθηκαν με έναν συνδυασμό στοιχειακών συνθέσεων και φάσματος μάζας θραυσμάτων MS/MS μετά τη σύγκριση τους με τα δείγματα ελέγχου. Όλοι οι μεταβολίτες από CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε προσομοιωμένα γαστρικά και εντερικά υγρά, η φυσιολογική και η εντερική μικροχλωρίδα αρουραίου CUS παρατίθενται στον Πίνακα 1.

3.3.1. Μεταβολισμός CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε προσομοιωμένα γαστρικά και εντερικά υγρά

Επτά μεταβολίτες του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε προσομοιωμένο γαστρικό υγρό ταυτοποιήθηκαν δοκιμαστικά με ακριβείς πληροφορίες μάζας και θραύσματος MSE: M1 (m/z315.1074, C14H20O8, 1.66 min), M4 (m/z 459.1501, C20H28O12,2.36 min), M5 (m/z315.1074, C14H20O8, 1.66 min), M4 (m/z 459.1501, C20H28O12,2.36 min), M5 (m/z315.1074. 2,60 λεπτά), M7 (m/z 179,0338, C9H8O4, 2,85 λεπτά), M12 (m/z 785,2481, C35H46O20,4,77 min), M16 (m/z 827,2580, C37H48O23, M1, και M15H48O21, λεπτ .1968, C29H36O15, 5,81 λεπτά). Η απογλυκοζυλίωση, η αφυδροξυλίωση, η αφυδρογόνωση και ο ισομερισμός θεωρήθηκαν ως οι κύριες μεταβολικές οδοί για CTE στο γαστρικό υγρό. Τα Μ4 και Μ5 βρέθηκαν να έχουν μοριακό βάρος 2 Da και 16 Da χαμηλότερο από το πρωτότυπο συστατικό τους, τον δεκαφεοϋλακτεοζίτη, και έτσι ταυτοποιήθηκαν ως αφυδρογονωμένα και αφυδροξυλιωμένα προϊόντα τους, αντίστοιχα. Το Μ12 ταυτοποιήθηκε ως ισομερές της εχινακοσίδης, παράγοντας τα ίδια ιόντα με την εχινακοσίδη στα m/z 623.2178, 477.1601, 315.1055, 161.0237.

Οι ίδιοι μεταβολίτες ανιχνεύθηκαν μετά από CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)επώαση σε εντερικό χυμό. Είναι αξιοσημείωτο ότι η ομάδα καφεοϋλίου στη θέση C-6' στα PhGs μεταβολιζόταν εύκολα από πεπτικά ένζυμα στον εντερικό χυμό για να παράγει τους μεταβολίτες του δεκαφεϋλίου και το καφεϊκό οξύ.

3.3.2. Μεταβολισμός CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από φυσιολογικό και CUS εντερικό μικροβίωμα αρουραίου

Συνολικά 20 μεταβολίτες βιομετασχηματίστηκαν από CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε φυσιολογικά μικροβιακά εντερικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν και ταυτοποιήθηκαν (Εικ. 2). Από εκείνα τα αποτελέσματα, παρατηρήθηκε ότι τα PhGs αποικοδομήθηκαν σε υδροξυτυροσόλη αγλυκόνης (ΗΤ) Μ2 (m/z 153,0550, C8H10O3, 1,78 min) και καφεϊκό οξύ (CA) M7 (m/z 179,0338, C9H8O5 min), στη συνέχεια 2. Μεταβολίστηκαν περαιτέρω σε M3 (m/z 163,0390, C9H8O3, 2,02 λεπτά), M6 (m/z181,0501, C9H10O4, 2,76 λεπτά), M10 (m/z 195,0655, C10H12O4, 4,35 min.) και 5015 min. C9H10O3, 4,36 λεπτά) μέσω αφυδροξυλίωσης, αναγωγής και μεθυλίωσης. Επιπλέον, οι κεντρικές μεταβολικές οδοί που παρήγαγαν άμεσους μεταβολίτες των πρωτοτύπων ενώσεων PhG από CTE σε φυσιολογικό εντερικό μικροβίωμα αρουραίου είναι η αναγωγή, η μεθοξυλίωση, η απογλυκοζυλίωση, η αποκαφεοϋλίωση, η αφυδρογόνωση και ο ισομερισμός.

Μετά την επώαση σε εντερική μικροχλωρίδα αρουραίου που προκαλείται από κατάθλιψη, CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μετατράπηκε σε 20 μεταβολίτες μέσω των ίδιων μεταβολικών οδών με τους κανονικούς αρουραίους.

3.3.3. Διαδοχικός μεταβολισμός του CTE από το γαστρικό υγρό, τον εντερικό υγρό, το φυσιολογικό και το εντερικό μικροβίωμα CUS αρουραίου

Μετά από διαδοχική επώαση σε γαστρικό υγρό, εντερικό υγρό, φυσιολογικό και CUS εντερικό μικροβίωμα αρουραίου, CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μεταβολίστηκε σε 14 μεταβολίτες (συμπεριλαμβανομένων 8 με γαστρικό υγρό, 7 με εντερικό υγρό, 11 με φυσιολογικό και 10 με εντερική μικροχλωρίδα CUS επίμυος). Μεταξύ αυτών, το M2(HT) και το M11 (3-υδροξυφαινυλοπροπιονικό οξύ, 3-HPP) ήταν οι τελικοί μεταβολίτες των PhGs μετά από διαδοχική επώαση του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε γαστρικό υγρό, εντερικό υγρό και εντερική μικροχλωρίδα. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στους μεταβολίτες μεταξύ φυσιολογικού και CUS αρουραίου.

Τα M8, M9, M14, M17, M19 και M20 ανιχνεύθηκαν μόνο στον ανεξάρτητο μεταβολισμό του CTE από φυσιολογικό εντερικό μικροβίωμα αρουραίου και CUS. Αυτοί οι μεταβολίτες ήταν κυρίως μεταβολικά ενδιάμεσα που είχαν μεταβολιστεί πλήρως σε τελικούς μεταβολίτες στη μελέτη του διαδοχικού μεταβολισμού του CTE και επομένως είναι δύσκολο να ανιχνευθούν.

3.3.4. Διαφορές μεταξύ του μεταβολικού ρυθμού του CTE από το φυσιολογικό και το CUS εντερικό μικροβίωμα

Για να διευκρινιστούν οι διαφορές μεταξύ του μεταβολικού ρυθμού της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από φυσιολογικό εντερικό μικροβίωμα και CUS αρουραίου, τα σχετικά περιεχόμενα 27 ενώσεων πρωτοτύπων και 20 μεταβολιτών μετά από επώαση με γαστρικό υγρό, εντερικό υγρό, φυσιολογικό και εντερικό μικροβίωμα CUS αρουραίου προσδιορίστηκαν ξεχωριστά και διαδοχικά (Πίνακες S3 και S4). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αν και δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μεταβολιτών φυσιολογικών και καταθλιπτικών αρουραίων, παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στους μεταβολικούς ρυθμούς τους. Για παράδειγμα, τα C2 και C5 ταυτοποιήθηκαν ως 8-επιλογανικό οξύ ή ισομερές του. Μεταβολίστηκαν πλήρως σε κανονικά δείγματα εντός 12 ωρών επώασης. Σε παθολογικά καταθλιπτική εντερική μικροχλωρίδα αρουραίου, ωστόσο, μεταβολίστηκαν πλήρως μετά από 48 ώρες επώασης. Ήταν προφανές ότι ο μεταβολικός ρυθμός στον φυσιολογικό αρουραίο ήταν ταχύτερος από αυτόν στον αρουραίο CUS. Παρόμοια αποτελέσματα ανακαλύφθηκαν από το C18 (ισοακτεοσίδη). Επιπλέον, είναι αξιοσημείωτο ότι το εμβαδόν κορυφής του Μ12 (ισομερισμός εχινακοσίδης) και του Μ16 (ισομερισμός τουμπουλοσίδης Α) σε κανονικά δείγματα ήταν πολύ μεγαλύτερο από αυτό στα δείγματα CUS, υποδεικνύοντας ότι η αντίδραση ισομερισμού του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)ήταν πιο διαδεδομένος σε φυσιολογικό εντερικό μικροβιόθανο επίμυος σε εντερική μικροχλωρίδα αρουραίου κατάθλιψης.

3.4. Μεταβολισμός CTE από φυσιολογικό και CUS αρουραίο in vivo

Συγκρίνοντας βιολογικά δείγματα της ομάδας που υποβλήθηκε σε θεραπεία με CTE με τυφλά βιολογικά δείγματα, συνολικά 26 μεταβολίτες (ένωση 1–26) της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)ανιχνεύθηκαν μη φυσιολογικοί και CUS αρουραίοι (Πίνακας 2). Τυπικά χρωματογραφήματα UPLC δειγμάτων ούρων φυσιολογικών και CUS αρουραίων παρουσιάζονται στο Σχ. 3.

3.4.1. Χαρακτηρισμός των μεταβολιτών της CTE σε φυσιολογική και CUS ρατουρίνη

Συνολικά 18 in vivo μεταβολίτες της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε φυσιολογικά δείγματα ούρων αρουραίων εντοπίστηκαν δοκιμαστικά. Οι μεταβολίτες αποικοδόμησης των PhGs συμπεριλαμβανομένων των HT και CA, και η περαιτέρω θείωση τους (ένωση 1, 2, 3, 5, 8 και 16), η μεθυλίωση (6, 21, 22 και 24) και η μεθοξυλίωσή τους (13 και 14) ήταν οι κύριοι μεταβολίτες στα φυσιολογικά ούρα αρουραίων. Οι ιριδοειδείς γλυκοσίδες μεταβολίστηκαν εύκολα σε αγλυκόνες (23, 25 και 26) μέσω απογλυκοζυλίωσης. Αξίζει να σημειωθεί ότι κανένα πρωτότυπο συστατικό δεν ανιχνεύθηκε στο φυσιολογικό δείγμα ούρων αρουραίου.

Στο δείγμα ούρων του καταθλιπτικού αρουραίου, 22 μεταβολίτες της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)εντοπίστηκαν και χαρακτηρίστηκαν. Μία πρωτότυπη ένωση, το 8-επιλογανικό οξύ, ανιχνεύτηκε σε παθολογικά ούρα αρουραίου. Άλλοι μεταβολίτες ήταν σύμφωνοι με αυτούς που βρέθηκαν στα φυσιολογικά ούρα αρουραίου, συμπεριλαμβανομένων των θειικών μεταβολιτών (1, 2, 3, 8, 10 και 16), μεθυλιωμένων μεταβολιτών (6, 11, 19 και 22), μεθοξυλιωμένων μεταβολιτών (13 και 14) HT και CA, και θεαγλυκόνες ιριδοειδών γλυκοσιδών (25 και 26).

3.4.2. Χαρακτηρισμός των μεταβολιτών της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε κανονικές και CUS περιττώματα αρουραίων

Σε αυτή τη μελέτη, μόνο ένας μεταβολίτης (ένωση 20, 3-HPP) του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)εντοπίστηκε σε κανονικά κόπρανα αρουραίου. Τα περισσότερα PhG αρχικά αποικοδομήθηκαν σε CA και κατά συνέπεια υποβλήθηκαν σε περαιτέρω μεταβολισμό στον κύριο μικροβιακό μεταβολίτη τους, 3-HPP. Στο δείγμα κοπράνων από τον αρουραίο CUS, χαρακτηρίστηκαν προληπτικά 3 μεταβολίτες, συμπεριλαμβανομένου του θειικού 3-HPP (ένωση 16) και του θειικού HT (ενώσεις 2 και 3).

3.4.3. Διαφορές μεταξύ των in vivo μεταβολιτών του CTE σε φυσιολογικούς και CUS αρουραίους

Μετά από από του στόματος χορήγηση CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche), οι in vivo μεταβολίτες έδειξαν προφανείς διαφορές σε υγιείς και καταθλιπτικούς αρουραίους μοντέλου. 21 μεταβολίτες (ένωση 1-3, 5, 6, 8-14, 16, 17 και 19-26) ανιχνεύθηκαν τόσο σε υγιή όσο και σε δείγματα CUS αρουραίων. Η ένωση 23 (απογλυκοζυλιωμένο γενιποσιδικό οξύ) ταυτοποιήθηκε μόνο σε υγιή δείγματα αρουραίων, ενώ οι ενώσεις 4 (ΗΤ), 7 (8-επιλογανικό οξύ), 15 (3, 4-διυδροξυβενζολοπροπιονικό οξύ) και 18 ({{{ 19}}σύζευξη γλυκουρονιδίου HPP) ανιχνεύθηκαν μόνο σε δείγματα αρουραίου μοντέλου CUS. Συνοπτικά, τα συστατικά του πρωτοτύπου ανιχνεύθηκαν μόνο σε αρουραίους CUS, ενώ οι μεταβολίτες περισσότερο φάσης ΙΙ ανακαλύφθηκαν σε φυσιολογικούς αρουραίους.

4. Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, τρία μοντέλα επώασης in vitro συμπεριλαμβανομένου του γαστρικού υγρού, του εντερικού υγρού, του φυσιολογικού και του εντερικού μικροβιώματος CUS αρουραίου χρησιμοποιήθηκαν ανεξάρτητα και διαδοχικά για τη διερεύνηση του γαστρεντερικού μεταβολικού προφίλ της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)in vitro. Βρέθηκε ότι PhGs και ιριδοειδή γλυκοσίδια σε CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μεταβολίστηκαν εύκολα στους δευτερογενείς γλυκοσίδες και τις αγλυκόνες τους από το καταθλιπτικό εντερικό μικροβίωμα αρουραίου που προκαλείται από CUS. Μετά από αυτό, in vivo μεταβολισμός της CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε κανονικούς και CUS αρουραίους επαληθεύτηκε επίσης. Οι προτεινόμενες μεταβολικές οδοί για CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε υγιείς και επαγόμενους από CUS καταθλιπτικούς αρουραίους φαίνονται στο Σχ. 4. Τα PhGs, όπως η εχινακοσίδη και η ακτεοσίδη, μεταβολίστηκαν σε HT και CA, και η CA υποβλήθηκε σε περαιτέρω μεταβολισμό στον κύριο μικροβιακό μεταβολίτη της, 3-HPP. Τα HT, CA και 3-HPP στη συνέχεια μεταβολίστηκαν στους θειικούς, μεθυλιωμένους και μεθοξυλιωμένους μεταβολίτες τους. Οι ιριδοειδείς γλυκοσίδες συμπεριλαμβανομένου του γενιποσιδικού οξέος, της κανκανοσίδης Α και της κανκανοσίδης Ν μεταβολίστηκαν στις αγλυκόνες τους μέσω απογλυκοζυλίωσης. Αυτά έδειξαν περαιτέρω ότι τα PhGs και οι ιριδοειδής γλυκοσίδες στο CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μεταβολίστηκαν εύκολα σε δευτερογενείς γλυκοσίδες και αγλυκόνες σε αρουραίους CUS. Αυτοί οι μεταβολίτες φυσιολογικά εμφανίζουν καλύτερη εντερική απορρόφηση και βιοδιαθεσιμότητα για περαιτέρω απορρόφηση στο αίμα για να ασκήσουν βιολογική δραστηριότητα [16-18]. Αξίζει να σημειωθεί ότι ο ισομερισμός ήταν διαδεδομένος για τα PhGs στη γαστρεντερική οδό, οι σχετικοί μεταβολίτες ταυτοποιήθηκαν αφού συγκρίθηκαν με τον χρόνο κατακράτησης UPLC των πρωτότυπων ενώσεων τους με βάση το μη βελτιστοποιημένο ιδανικό προφίλ βαθμίδωσης UPLC.

Το καφεϊκό οξύ ήταν το κύριο προϊόν αποικοδόμησης του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)από καταθλιπτικό παθολογικό εντερικό μικροβίωμα αρουραίου. Προηγούμενες δημοσιεύσεις ανέφεραν ότι το καφεϊκό οξύ παράγει αντικαταθλιπτικά αποτελέσματα στο τεστ αναγκαστικής κολύμβησης σε ποντίκια. Τόσο το επίπεδο mRNA του νευροτροφικού παράγοντα (BDNF) που προέρχεται από τον εγκέφαλο στον μετωπιαίο φλοιό και το επίπεδο mRNA του TrkB στην αμυγδαλή μειώθηκαν σημαντικά μετά το τεστ αναγκαστικής κολύμβησης και η πρώτη μείωση αναστέλλεται σημαντικά από το καφεϊκό οξύ [19]. Η υδροξυτυροσόλη ήταν η αγλυόνη των PhGs. που προστατεύει τη νευρογένεση και τη γνωστική λειτουργία αποτρέποντας την επαγόμενη από το στρες υπορρύθμιση της νευρικής πρωτεΐνης BDNF [20]. Επομένως, είναι απαραίτητο να δοθεί μεγαλύτερη προσοχή σε ορισμένους βιοδραστικούς μεταβολίτες (δηλαδή, HT και CA) που μετασχηματίζονται από το εντερικό μικρόβιο μετά από χορήγηση από το στόμα.

Επιπλέον, τα παρόντα ευρήματα παρέχουν ενδείξεις ότι στην καταθλιπτική μικροχλωρίδα του εντέρου, η μεταβολική ικανότητα να δημιουργεί δευτερογενείς γλυκοσίδες και αγλυκόνες ήταν σημαντικά πιο αδύναμη από αυτή της μη φυσιολογικής εντερικής μικροχλωρίδας αρουραίου. Ο λόγος είναι πιθανό να αποδοθεί στις δομικές αλλαγές της εντερικής μικροχλωρίδας που προκαλούνται από την κατάθλιψη, οι οποίες οδηγούν σε μειωμένη δραστηριότητα των μεταβολικών ενζύμων που παράγονται από την εντερική μικροχλωρίδα [21]. Είναι ενδιαφέρον ότι μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι τοphylum Bacteroidetes κωδικοποιούσε τα πιο άφθονα γονίδια γλυκοσιδικής υδρολάσης και πολυσακχαριτικής λυάσης για την υδρόλυση γλυκοσιδίων και τη διάσπαση σύνθετων υδατανθράκων με μηχανισμό αποβολής [22]. Ειδικότερα, το Bacteroides spp. συμπεριλαμβανομένων των B. caccae, B. dorei, B. finegoldii, B. fragilis, B. intestinalis, B. ovatus, B. thetaiotaomicron, B. uniformis, andB. Οι ξυλανισόλες έδειξαν κυρίαρχο συνολικό αριθμό γονιδίων που κωδικοποιούν GHs και PLs. Το Parabacteroides distasonis έχει επίσης τα ίδια χαρακτηριστικά [22]. Οι προηγούμενες μελέτες μας επιβεβαίωσαν ότι η 28-ημερήσια χρόνια χρόνια απρόβλεπτη διέγερση στρες μείωσε τη σχετική αφθονία των γενών Bacteroides, Parabacteroides, Butyricimonas και Weissella, ενώ αύξησε τους Ruminococcus και Deinococcus σε αρουραίους [4]. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα Bacteroides και Parabacteroides ήταν τα δύο πιο άφθονα μικροβιακά είδη που αντιπροσώπευαν περίπου το 20 τοις εκατό σχετική αφθονία σε κανονικούς αρουραίους. Μετά τη θεραπεία με CUS, η σχετική αφθονία των Bacteroides και Parabacteroides μειώθηκε απότομα σε περίπου 5 τοις εκατό σε καταθλιπτικούς αρουραίους μοντέλου. Επομένως, αυτό αναπόφευκτα θα οδηγήσει σε μείωση του συνολικού αριθμού των ενζύμων GH και PL σε αρουραίους CUS και περαιτέρω διαταράσσει την απογλυκοζυλιωμένη αντίδραση από την καταθλιπτική εντερική μικροχλωρίδα με CUS μετά από από του στόματος χορήγηση CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)σε αρουραίους-μοντέλους.

5. Συμπέρασμα

Στην παρούσα μελέτη, η τεχνική UPLC-Q-TOF-MS καθιερώθηκε και εφαρμόστηκε για τον έλεγχο και τον εντοπισμό μεταβολιτών τουΕκχύλισμα σωληναρίσματος Cistancheσε φυσιολογικούς και καταθλιπτικούς αρουραίους με CUS in vitro και in vivo. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)μεταβολίστηκε σε αγλυκόνες και προϊόντα αποικοδόμησης των PhGs και ιριδοειδή γλυκοσίδες τόσο από υγιή όσο και από καταθλιπτική εντερική μικροχλωρίδα. Μετά από από του στόματος χορήγηση CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche), μεταβολίτες φάσης ΙΙ των αγλυκονών και προϊόντα αποικοδόμησης των PhGs και των ιριδογλυκοσιδών βρέθηκαν κυρίως στα ούρα αρουραίου. Η μεταβολική ικανότητα να δημιουργεί δευτερογενείς γλυκοσίδες και αγλυκόνες σε καταθλιπτική εντερική μικροχλωρίδα ήταν πολύ πιο αδύναμη από αυτή στην εντερική μικροχλωρίδα του φυσιολογικού αρουραίου, η οποία αποδόθηκε στις διαταραγμένες γλυκοσιδυδρολάσες που παράγονται από την εντερική μικροχλωρίδα σε αρουραίους με κατάθλιψη με CUS. Αυτή η μελέτη παρέχει μια νέα προοπτική για τους μετέπειτα ανάπτυξη του CTE(Εκχύλισμα σωληνίσκου Cistanche)ως πιθανό αντικαταθλιπτικό.

Ευχαριστίες

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Πρόγραμμα Έρευνας και Ανάπτυξης της Κίνας (2017YFC1702400).

Παράρτημα Α. Συμπληρωματικά στοιχεία

Μπορείτε να βρείτε συμπληρωματικά δεδομένα σε αυτό το άρθρο στο διαδίκτυο στη διεύθυνση HTTPS://doi.org/10.1016/j.jchromb.2019.121728

Από: «In vitro και in vivo μεταβολισμός τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosaσε φυσιολογικούς και χρόνιους απρόβλεπτους καταθλιπτικούς αρουραίους που προκαλούνται από στρες» απόYang Li, et αϊ

--Journal of Chromatography B 1125 (2019) 121728

βιβλιογραφικές αναφορές

[1] Επιτροπή Κινέζικης Φαρμακοποιίας, The Pharmacopeia of the People's Republic of China, 2015 εκδ., China Medical Science Press, Πεκίνο, Κίνα, 2015, σελ. 135 Μέρος Ι.
[2] Y. Jiang, P.-F. Tu, Ανάλυση χημικών συστατικών σε είδη Cistanche, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[3] Z. Fu, X. Fan, X. Wang, X. Gao, Cistanches Herba: μια επισκόπηση της χημείας, της φαρμακολογίας και της φαρμακοκινητικής του ιδιότητας, J. Ethnopharmacol. (2017), https://doi.org/10.1016/j.jep.2017.10.015.
[4] Y. Li, Y. Peng, P. Ma, H. Yang, H. Xiong, M. Wang, C. Peng, P. Tu, X. Li, Antidepressant-like effect ofΕκχύλισμα Cistanche tubulosaσε αρουραίους χρόνιου απρόβλεπτου στρες μέσω της αποκατάστασης της ομοιόστασης της μικροβιακής χλωρίδας του εντέρου, Εμπρός. Pharmacol. (2018), https://doi.org/10.3389/fphar.2018.00967.
[5] JA Foster, MV Neufeld, Άξονας εντέρου-εγκεφάλου: πώς το μικροβίωμα επηρεάζει το άγχος και την κατάθλιψη, Trends Neurosci. 36 (2013) 305–312.
[6] E. Sherwin, TG Dinan, JF Cryan, Πρόσφατες εξελίξεις στην κατανόηση του ρόλου της μικροχλωρίδας του εντέρου στην υγεία και τη νόσο του εγκεφάλου, Ann. NY Acad. Sci. 12 (2017) e0177977.
[7] Y. Meng, H. Jia, Z. Chao, Y. Yong, Z. Yang, M. Yang, Z. Zou, Variations in gut microbiota and fecal metabolic phenotype που σχετίζεται με την κατάθλιψη μέσω αλληλουχίας γονιδίου 16S rRNA και LC/ Metabolomics που βασίζεται σε MS, J. Pharm. Biomed. Πρωκτικός. 138 (2017) 231–239.

[8] JR Kelly, Y. Borre, BC O', E. Patterson, AS El, J. Deane, PJ Kennedy, S. Beers, K. Scott, G. Moloney, Transferring the blues: Depression-associated gut microbiota induces νευροσυμπεριφορικές αλλαγές στον αρουραίο, J. Psychiatr. Res.. 82 (2016) 109–118.
[9] L. Yang, P. Ying, M. Wang, P. Tu, X. Li, Human gastrointestinal metabolism of the Cistanches Herba water extract in vitro: διευκρίνιση του μεταβολικού προφίλ με βάση την πλήρη ταυτοποίηση μεταβολιτών στο γαστρικό υγρό, εντερικό χυμός, ανθρώπινα εντερικά βακτήρια, και εντερικά μικροσώματα, J. Agric. Food Chem. 65 (2017) 7447–7456.
[10] Y. Li, G. Zhou, S. Xing, P. Tu, X. Li, Identification of echinacoside metabolites που παράγονται από ανθρώπινα εντερικά βακτήρια χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία υπερ-απόδοσης/φασματομετρία μάζας χρόνου πτήσης, J. Αγρ. Food Chem. 63 (2015) 6764–6771.
[11] Y. Li, G. Zhou, Y. Peng, P. Tu, X. Li, Έλεγχος και ταυτοποίηση τριών τυπικών μεταβολιτών φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων από το Cistanches Herba από ανθρώπινα εντερικά βακτήρια χρησιμοποιώντας UPLC/Q-TOF-MS, J. Pharm. Biomed. Πρωκτικός. 118 (2016) 167–176.
[12] L. Yang, P. Ying, M. Wang, G. Zhou, Y. Zhang, X. Li, Rapid screening and identification of the differences between metabolites of Cistanche deserticola and C. tubulosa water extract in rats by UPLC- Q-TOF-MS συνδυασμένη ανάλυση αναγνώρισης προτύπων, J. Pharm. Biomed. Πρωκτικός. 131 (2016) 364–372.
[13] C. Q, P. Y, B. X, Z. W, C. L, L. X, Συστηματικά χαρακτηρίζουν τους μεταβολίτες της εχινακοσίδης και της ακτεοσίδης από το Cistanche tubulosa στο πλάσμα, τη χολή, τα ούρα και τα κόπρανα αρουραίου με βάση UPLC-ESI-Q-TOF-MS, Biomed. Χρωματογραφ. 30 (2016) 1406–1415.
[14] Y. Wang, H. Hao, G. Wang, P. Tu, Y. Jiang, Y. Liang, L. Dai, H. Yang, L. Lai, C. Zheng, Μια προσέγγιση για τον προσδιορισμό διαδοχικών μεταβολιτών του ένα τυπικό φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο, η εχινακοσίδη, με βάση το χρόνο παγίδευσης ιόντων υγρής χρωματογραφίας
ανάλυση φασματομετρίας μάζας πτήσης, Talanta 80 (2009) 572–580.
[15] C. Jia, H. Shi, W. Jin, K. Zhang, Y. Jiang, M. Zhao, P. Tu, Μεταβολισμός της εχινακοσίδης, ενός καλού αντιοξειδωτικού, σε αρουραίους: απομόνωση και ταυτοποίηση των χοληφόρων μεταβολιτών του, Drug Metab. Dispos. 37 (2009) 431–438.
[16] J. Xu, HB Chen, SL Li, Κατανόηση των μοριακών μηχανισμών της αλληλεπίδρασης μεταξύ φυτικών φαρμάκων και μικροχλωρίδας του εντέρου, Med. Res. Αναθ. 37 (2017) 1140–1185.
[17] H. Liu, J. Yang, F. Du, X. Gao, X. Ma, Y. Huang, F. Xu, W. Niu, F. Wang, Y. Mao, Absorption and disposition of ginsenosides after oral χορήγηση εκχυλίσματος Panax notoginseng σε αρουραίους, Drug Metab. Dispos. 37 (2009) 2290–2298.
[18] JM Laparra, Y. Sanz, S. Schaffer, F. Visioli, Interactions of gut microbiota with functional food components and nutraceuticals, Pharmacol. Res. 61 (2010) 219–225.
[19] H. Takeda, M. Tsuji, T. Yamada, J. Masuya, K. Matsushita, M. Tahara, M. Iimori, T. Matsumiya, Το καφεϊκό οξύ εξασθενεί τη μείωση της έκφρασης mRNA του φλοιού BDNF που προκαλείται από την έκθεση σε εξαναγκασμένο κολυμβητικό στρες σε ποντίκια, Eur. J. Pharmacol. 534 (2006) 115–121.
[20] A. Zheng, L. Hao, C. Ke, X. Jie, Z. Xuan, L. Yuan, C. Cong, J. Liu, Z. Feng, Μητρική χορήγηση υδροξυτυροσόλης βελτιώνει τη νευρογένεση και τη γνωστική λειτουργία σε προγεννητικό στρες απόγονοι, J. Nutr. Biochem. 26 (2015) 190–199.
[21] H. Li, J. He, W. Jia, The influence of gut microbiota on drug metabolism and toxicity, Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 12 (2016) 31.
[22] KA El, F. Armougom, JI Gordon, D. Raoult, B. Henrissat, Η αφθονία και η ποικιλία των υδατανθράκων ενεργών ενζύμων στο μικροβίωμα του ανθρώπινου εντέρου, Nat. Rev. Microbiol. 11 (2013) 497–504.