Πώς το υδατικό εκχύλισμα Cistanche προάγει την εντερική περισταλτική και βελτιώνει τη δυσκοιλιότητα;

Shuai Yan, 1,2 Yin-zi Yue, 1 Xiao-peng Wang, 1 Hong-li Dong, 1 Shu-guang Zhen, 1 Ben-sheng Wu, 1 και Hai-hua Qian3

Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική αναφέρθηκε ότι έχει καλά αποτελέσματα στη θεραπεία της λειτουργικής δυσκοιλιότητας. Αυτή η εργασία προσπάθησε να αποδείξει τα αποτελέσματα των υδατικών εκχυλισμάτων του HerbaCistanche(AEHC) για τη θεραπεία STC και για τον προσδιορισμό των πιθανών μηχανισμών με ένα μοντέλο δυσκοιλιότητας αργής διέλευσης (STC) που προκαλείται από τη λοπεραμίδη. Πραγματοποιήθηκε HPLC για ταυτοποίηση και επιβεβαίωση των βιοδραστικών συστατικών στο AEHC. Διαπιστώθηκε ότι το AEHC εξασθενούσε τις αποκρίσεις STC με βάση την αυξημένη ποσότητα κοπράνων, την περιεκτικότητα σε υγρασία και τον ρυθμό εντερικής διέλευσης, καθώς και τα επίπεδα ορού GAS, MTL, SS και CGRP. Τα επίπεδα πρωτεΐνης και mRNA του c-kit, σήμανση των διάμεσων κυττάρων του Cajal (ICC), επίσης αυξήθηκαν. Εν τω μεταξύ, μόνο το επίπεδο πρωτεΐνης του SCF, ενός συνδέτη του ckit, αυξήθηκε. Η ανάλυση των δεδομένων μας πρότεινε ότι το AEHC θα μπορούσε προφανώς να βελτιώσει τη λειτουργία του ICC μέσω μιας οδού σηματοδότησης που περιλαμβάνει PI3K, SCF και c-kit και να ενισχύσει τους δείκτες κινητικότητας του παχέος εντέρου όπως GAS, MTL, SS και CGRP. Είναι ενδιαφέρον να σημειωθεί ότι το AEHC φάνηκε να είναι αποτελεσματικό στη δυσκοιλιότητα, επομένως απαιτούνται περαιτέρω πειράματα για να διευκρινιστούν οι ακριβείς μηχανισμοί που εμπλέκονται.

Για περισσότερες πληροφορίες επικοινωνήστε με:Joanna.jia@wecistanche.com

Η ακτεοσίδη στο κιστάνι έχει καλές επιδράσεις στα αντιοξειδωτικά

1. Εισαγωγή

Η δυσκοιλιότητα είναι μια κοινή λειτουργική γαστρεντερική νόσος και πρόβλημα δημόσιας υγείας, που χαρακτηρίζεται από συνεχή δύσκολη, σπάνια ή ατελή αφόδευση [1]. Ο επιπολασμός της δυσκοιλιότητας ποικίλλει από 0,7 τοις εκατό έως 81 τοις εκατό σε όλο τον κόσμο, ειδικά στους ηλικιωμένους [2, 3]. Η δυσκοιλιότητα αργής διέλευσης (STC) είναι ένα κοινό γαστρεντερικό παράπονο μεταξύ 13-37 τοις εκατό των ασθενών με χρόνια δυσκοιλιότητα ανθεκτική στη θεραπεία [4, 5]. Επιδημιολογικά δεδομένα υποδεικνύουν υψηλότερη συχνότητα STC στις νεαρές γυναίκες από ότι στους άνδρες [6]. Το STC προκαλεί ανίατη δυσκοιλιότητα, παρουσιάζοντας μικρή ανταπόκριση στη συντηρητική θεραπεία και τάση νευροεκφυλιστικής διαταραχής. Όχι τόσο απλή όσο μια λειτουργική ασθένεια, απαιτεί επεμβατική και επιθετική θεραπεία [7].

Ένας αριθμός σύγχρονων χημικών φαρμάκων όπως τα οσμωτικά ή εκκριτικά καθαρτικά και οι παράγοντες όγκου χρησιμοποιούνται παγκοσμίως για

αντιμετωπίζουν τη δυσκοιλιότητα [8], αν και οι εφαρμογές τους είναι περιορισμένες λόγω υψηλών δαπανών και κοιλιακών παρενεργειών όπως πόνος, κράμπες και φούσκωμα [9]. Επί του παρόντος, η ρύθμιση της γαστρεντερικής οδού είναι το κύριο επίκεντρο των θεραπειών της δυσκοιλιότητας. Το Cisapride δημιουργήθηκε αρχικά ως παράγοντας προώθησης για τη θεραπεία γαστρικών παθήσεων, αλλά αργότερα αποσύρθηκε λόγω του κινδύνου καρδιακών αρρυθμιών [10].

Το Tegaserod είναι ένας εκλεκτικός 5-ανταγωνιστής των υποδοχέων υδροξυτρυπταμίνης που μπορεί να διεγείρει την εντερική περισταλτική και έκκριση [11, 12]. Η προυκαλοπρίδη είναι ένα νέο παράγωγο καρβοξαμιδίου διυδροβενζοφουρανίου και 5-αγωνιστής υποδοχέα HT με υψηλή εκλεκτικότητα και ειδικότητα, που μπορεί να ενισχύσει την κινητικότητα του στομάχου, του λεπτού εντέρου και του παχέος εντέρου και λειτουργεί πιο γρήγορα στη δυναμική [13-15]. Ως παράγωγο προσταγλανδίνης Ε1, η λουμπιπροστόνη μπορεί να ενεργοποιήσει επιλεκτικά το κανάλι CIC ​​για την προώθηση της γαστρεντερικής έκκρισης και την αύξηση των επιπτώσεων της εντερικής μετάδοσης [16].

Η κινητικότητα στη δυσκοιλιότητα είναι ένα ευρέως διαδεδομένο πρόβλημα, αλλά η αιτιολογία της δεν είναι ακόμη ξεκάθαρη. Ωστόσο, πειστικά στοιχεία έχουν δείξει τη συμβολή των διάμεσων κυττάρων του Cajal (ICC) στην παθογένεση της δυσκοιλιότητας [17]. Το ICC βρίσκεται μεταξύ των νευρικών απολήξεων και των λείων μυϊκών κυττάρων στο γαστρεντερικό σωλήνα. Το ICC είναι γενικά αναγνωρισμένο ως κύτταρα βηματοδότη για τη γαστρεντερική δραστηριότητα και ως μεσολαβητές νευρομυϊκής μετάδοσης [18]. Μελέτες έχουν δείξει ότι η πυκνότητα ICC στο παχύ έντερο ασθενών με δυσκοιλιότητα βραδείας διέλευσης είναι αξιοσημείωτα χαμηλότερη σε σύγκριση με εκείνες σε φυσιολογικούς ασθενείς [19]. Κατά συνέπεια, ένας μειούμενος αριθμός ICC μπορεί να οδηγήσει σε έλλειψη δραστηριότητας βραδέων κυμάτων, επηρεάζοντας έτσι τη συσταλτική απόκριση και προκαλώντας καθυστερημένη διέλευση σε ασθενείς με δυσκοιλιότητα βραδείας διέλευσης. Για αυτό το σημείο, η βελτίωση του ICC με χρήση φαρμακευτικών προϊόντων μπορεί να είναι κρίσιμη για τη θεραπεία της δυσκοιλιότητας αργής διέλευσης.

Διάφορα φυτικά φάρμακα και η παραδοσιακή κινεζική συνταγή Mula έχουν πρόσφατα τραβήξει την προσοχή ως νέα θεραπευτικά μέσα για τη θεραπεία της χρόνιας δυσκοιλιότητας ως αποτέλεσμα της βελτιωμένης παραγωγής κοπράνων [20, 21]. HerbaCistancheείναι ένα παραδοσιακό φυτικό φάρμακο που χρησιμοποιείται στη θεραπεία της χρόνιας νεφρικής νόσου, της γυναικείας υπογονιμότητας, της άφθονης μηνορραγίας και της ανικανότητας [22, 23]. HerbaCistancheαποτρέπει την απόπτωση των νευρώνων του εγκεφάλου εκφράζοντας παράγοντες που σχετίζονται με την απόπτωση και νευροτροφικούς παράγοντες στα κύτταρα MES23.5 [24]. Το Herba Cistanche έχει επίσης επιδείξει φαρμακευτικές δυνατότητες στη θεραπεία του συνδρόμου νεφρικής ανεπάρκειας Yang-Qi-Yang. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι η HerbaCistancheενισχύει τη μιτοχονδριακή αναπνοή και την αντιοξειδωτική κατάσταση της γλουταθειόνης στα καρδιομυοκύτταρα H9c2 [25].

Η TCM πιστεύει ότι η δυσκοιλιότητα έχει στενή σχέση με τα νεφρά. Ανοίγοντας στα εξωτερικά γεννητικά όργανα και τον πρωκτό, ο νεφρός διέπει την ούρηση και την αφόδευση. Η μεταφορά των αποβλήτων βασίζεται στην προώθηση του τσι των νεφρών και στην τροφή του γιν των νεφρών. Εάν το νεφρικό yang είναι ανεπαρκές ή η φωτιά της πύλης ζωής σβήσει, η ψυχρή συμφόρηση του παχέος εντέρου θα έχει ως αποτέλεσμα τη στασιμότητα των αποβλήτων. Η δυσκοιλιότητα προκαλείται επίσης από την ξηρή κίνηση του εντέρου, καθώς η ανεπάρκεια της ουσίας των νεφρών αποτυγχάνει να παράγει αρκετό υγρό [26].

HerbaCistancheείναι ένα κοινό ενωτικό βότανο, το οποίο είναι γλυκό και αλμυρό στη γεύση και ζεστό στη φύση. Αποδίδεται στο παχύ έντερο και στους μεσημβρινούς των νεφρών, μπορεί να τονώσει το νεφρικό yang και να υγράνει το έντερο για να ανακουφίσει τη δυσκοιλιότητα. Αυτό το μεμονωμένο βότανο και τα κινέζικα φαρμακευτικά παρασκευάσματα του έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως για τη θεραπεία της δυσκοιλιότητας με αξιοσημείωτη αποτελεσματικότητα [27].

Στην Κίνα, οι επιπτώσεις του HerbaCistancheρίζες σχετικά με τη δυσκοιλιότητα έχουν καταγραφεί [28, 29] και αναφέρονται στην κινεζική Materia Medica του Shen Nong ως «αποξηραμένα χυμώδη στελέχη τουCistancheείδη» [30]· ωστόσο, επιστημονική απόδειξη για την επίδραση του HerbaCistancheρίζες για τη δυσκοιλιότητα δεν έχει υπάρξει μέχρι στιγμής, η κλινικά αποτελεσματική δόση είναι 20 g την ημέρα στην Κινεζική Φαρμακοποιία και το κλινικό αποτέλεσμα δεν αυξάνεται περαιτέρω με τη δόση.

Από την HerbaCistancheείναι τόσο σπάνιο [31], η τυποποίηση της κλινικής του δόσης για τη θεραπεία του STC μέσω πειραματικής μελέτης όχι μόνο αποτρέπει την αποτυχημένη θεραπεία λόγω ανεπαρκούς δοσολογίας, αλλά επίσης κρατά τους ασθενείς μακριά από οικονομική ζημιά και ακόμη και ατυχήματα φαρμάκων λόγω υπερβολικής χρήσης. Ελπίζουμε

Τα αποτελέσματα θα μπορούσαν να θέσουν μια επιστημονική βάση για νέα φάρμακα για τη δυσκοιλιότητα. Επομένως, είναι σημαντικό να διερευνηθεί το υδατικό HerbaΤου Cistancheλειτουργία της εντερικής προαγωγής και η δράση της στο ICC στην παρούσα μελέτη.

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1. Παρασκευή Υδατικού Εκχυλίσματος Herba Cistanche.

Όλα HerbaCistancheαγοράστηκαν από την Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Κίνα), τα οποία συγκομίστηκαν, συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σύμφωνα με τυπικές εθνοβοτανικές πρακτικές από τις φυτείες στην περιοχή Sinkiang της Κίνας. Η ταυτότητα του φυτού εξακριβώθηκε μορφολογικά από τον καθηγητή Tu Lin Lu του Πανεπιστημίου Κινεζικής Ιατρικής του Nanjing, Nanjing, Κίνα. Ένα δείγμα κουπονιού (NUCMCHS-2015628) κατατέθηκε στο College of Health Sciences, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Κίνα.

Φέτες HerbaCistanche, βάρους 500 g, κονιοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ηλεκτρικό μπλέντερ και εκχυλίστηκαν σε 5000 ml απεσταγμένου νερού, μετά το οποίο το υδατικό εκχύλισμα καθαρίστηκε στους 100 C για 2 ώρες χρησιμοποιώντας έναν κυκλοφορούντα εξοπλισμό εκχύλισης

πόρος μεμβράνης (Millipore, Billerica, ΜΑ, ΗΠΑ), και το υπόλειμμα που ελήφθη από τα εκχυλίσματα διαλύθηκαν σε 4000 ml νερού. Μετά την εκχύλιση με κάθετο ψυκτήρα, τα εκχυλίσματα συλλέχθηκαν και εξατμίστηκαν για να ληφθεί το τελικό προϊόν δείγματος. Τα υδατικά εκχυλίσματα συμπυκνώθηκαν σε ξηρά σφαιρίδια (1 g/ml) χρησιμοποιώντας α

για μεταγενέστερη χρήση. Τα στερεά δείγματα ανασυστάθηκαν σε απεσταγμένο νερό για να δώσουν τις απαιτούμενες δόσεις των 10, 20 και 40 mg/kg σωματικού βάρους για το πείραμα.

2.2. Των ζώων.

Το πειραματικό πρωτόκολλο που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη αναθεωρήθηκε και εγκρίθηκε με βάση ηθικές διαδικασίες και επιστημονική φροντίδα από το Νοσοκομείο Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine-Institutional Animal Care and Use Committee, Suzhou, Κίνα (SHTCM-IACUC, αριθμός έγκρισης: PNU{{2} }). Όλοι οι αρσενικοί αρουραίοι (στέλεχος Sprague Dawley) με ag αγοράστηκαν από το Shanghai Laboratory Animal Research Center σύμφωνα με τις οδηγίες των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Τα ζώα είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε μια τυπική δίαιτα (AIN-93 M) και νερό της βρύσης κατά βούληση και στεγάστηκαν μεμονωμένα σε ποσοστό σχετικής υγρασίας από ανοξείδωτο χάλυβα και εκτέθηκαν σε 12 ώρες φυσικό φως και 12 ώρες σκοτάδι καθημερινά.

2.3 Πειραματικός σχεδιασμός.

Η λοπεραμίδη χρησιμοποιήθηκε για την πρόκληση δυσκοιλιότητας σε αρουραίους σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες [32, 33]. Συνολικά 60 αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε 5 ομάδες (ανά ομάδα): Α: κανονική ομάδα (NG), Β: ομάδα μοντέλου (ομάδα που έλαβε θεραπεία με Lop συν όχημα), Γ: ομάδα αρουραίων δυσκοιλιότητας που έλαβαν θεραπεία με χαμηλό υδατικό εκχύλισμα Herba Cistanche (ομάδα που έλαβε θεραπεία με Lop συν LAEHC), D: μια ομάδα αρουραίων με δυσκοιλιότητα που έλαβαν θεραπεία με μεσαίο υδατικό εκχύλισμα Herba Cistanche (ομάδα θεραπείας με Lop συν MAEHC) και Ε: μια ομάδα αρουραίων δυσκοιλιότητας που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με υψηλό υδατικό εκχύλισμα Herba Cistanche (ομάδα αγωγής με Lop συν HAEHC). Η ομάδα Α υποβλήθηκε σε αγωγή με φυσιολογικό ορό (10 ml/kg). Η ομάδα Β υποβλήθηκε σε θεραπεία με λοπεραμίδη

(4 mg/kg); Η ομάδα C υποβλήθηκε σε αγωγή με λοπεραμίδη (4 mg/kg) και χαμηλό υδατικό εκχύλισμα Herba Cistanche (1 g/kg). Η ομάδα Δ υποβλήθηκε σε αγωγή με λοπεραμίδη (4 mg/kg) και μεσαίο υδατικό εκχύλισμα Herba Cistanche (2 g/kg), και η ομάδα Ε υποβλήθηκε σε αγωγή με λοπεραμίδη (4 mg/kg) και υψηλό υδατικό εκχύλισμα Herba Cistanche (4 g/ κιλό). Σε όλους τους αρουραίους από την κανονική ομάδα έγινε ένεση με 0,9 τοις εκατό χλωριούχο νάτριο, ενώ στους άλλους ενέθηκε με λοπεραμίδη σε 0,9 τοις εκατό χλωριούχο νάτριο δύο φορές την ημέρα για 3 διαδοχικές ημέρες για να προκληθεί δυσκοιλιότητα. Το υδατικό εκχύλισμα του Herba Cistanche εναιωρήθηκε σε νερό και χορηγήθηκε από του στόματος μία φορά την ημέρα από την ημέρα 4 έως την ημέρα 18 στην Ομάδα Γ, Ομάδα Δ και Ομάδα Ε, ενώ οι Ομάδες Α και Β έλαβαν σταθερό όγκο νερού μέσω καθετήρα.

2.4. Χρωματογραφική Κατάσταση.

Το προφίλ HPLC πραγματοποιήθηκε στο υγρό χρωματογραφικό σύστημα Shimadzu (Τόκιο, Ιαπωνία), που αποτελείται από μια αντλία LC-20AT και μια

παρακολουθήθηκαν στα 330 nm στους 30 C. Η ισοκρατική κινητή φάση αποτελούνταν από μεθανόλη 0,1 τοις εκατό μυρμηκικό οξύ (80: 20, ν/ν) και έτρεξε με ρυθμό ροής 1,0 ml/min . Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός ήταν

μέγεθος σωματιδίων 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Πεκίνο, Κίνα).

2.5. Ανάλυση Άσκησης, Πρόσληψης Τροφής, Πρόσληψης Νερού, Σώματος

Αρόσιμο κόμμι (υδατικό εναιώρημα 20 τοις εκατό ξυλάνθρακα και 10 τοις εκατό αρόσιμο κόμμι) χορηγήθηκε από το στόμα σε όγκο 25 ml/kg κάθε ζώου. Μετά από 30 λεπτά, τα ζώα θυσιάστηκαν ανθρώπινα με εξάρθρημα του τραχήλου της μήτρας και ανατέμθηκαν. Τα λεπτά έντερα από τον πυλωρό μέχρι το τυφλό έντερο διασχίστηκαν και μετρήθηκε η απόσταση που κάλυψε το κάρβουνο και το συνολικό μήκος του λεπτού εντέρου. Για έναν μεμονωμένο αρουραίο, το ποσοστό της εντερικής διέλευσης υπολογίστηκε ως το ποσοστό της απόστασης που διανύθηκε από το γεύμα με άνθρακα σε σχέση με το συνολικό μήκος του λεπτού εντέρου. Η ακόλουθη εξίσωση υπολογίζει το ποσοστό εντερικής διέλευσης (%): απόσταση που διανύθηκε από τον άνθρακα/απόσταση από τον πυλωρό στο τυφλό έντερο 100 τοις εκατό.

2.6. Συλλογή δειγμάτων αίματος και ιστών. Στο τέλος της πειραματικής περιόδου, οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε νηστεία 12 ωρών αλλά τους επιτράπηκε ελεύθερη πρόσβαση στο νερό. Όλοι οι αρουραίοι στη συνέχεια αναισθητοποιήθηκαν 30 λεπτά αργότερα με ενδοπεριτοναϊκή ένεση πεντοβαρβιτάλης νατρίου (50 mg/kg) και τοποθετήθηκαν σε τραπέζι με ρύθμιση θερμοκρασίας. Συλλέχθηκαν δείγματα αίματος και φυγοκεντρήθηκαν στις 3500 rpm για 15 λεπτά για να ληφθεί ορός. Το κόλον χωρίστηκε αμέσως και ξεπλύθηκε με φυσιολογικό ορό στους 4 C και στη συνέχεια χωρίστηκε σε δύο κομμάτια. Το ένα θραύσμα στερεώθηκε σε φορμαλίνη 10 τοις εκατό και υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε διαχωρισμένη παραφίνη για επακόλουθη ανοσοϊστοχημική (IHC) ανάλυση, ενώ το άλλο ήταν Βάρος και Μαλλιά. Αλλαγές στην άσκηση, πρόσληψη τροφής, νερό

αποθηκεύονται στους 80 C έως ότου αναλυθούν. Η πρόσληψη, το σωματικό βάρος και τα μαλλιά παρατηρήθηκαν και καταγράφηκαν καθημερινά σε όλη την πειραματική περίοδο. Παρατηρήσαμε "αλλαγές στην άσκηση" ακολουθώντας τα συγκεκριμένα βήματα: το αυτο-κατασκευασμένο κουτί (60 cm ύψος, 50 cm μήκος και 80 cm πλάτος με σκούρο περιφερειακό τοίχωμα) χρησιμοποιείται για δοκιμή ανοιχτού πεδίου. Το λευκό έδαφος χωρίστηκε σε διαμάντια (12 cm) από τη μαύρη γραμμή σε ένα σκοτεινό και ήσυχο δωμάτιο. μια λάμπα 100 W κρεμασμένη 1 m πάνω από το κέντρο του κουτιού. Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν στο κέντρο του κουτιού την 4η, 6η, 12η και 18η ημέρα της μοντελοποίησης. Ο αριθμός των τετραγώνων από τα οποία πέρασαν οι αρουραίοι μέσα σε 5 λεπτά χρησιμοποιήθηκε ως βαθμολογία οριζόντιας κίνησης και ο χρόνος όρθιας θέσης των αρουραίων εντός 5 λεπτών χρησιμοποιήθηκε ως βαθμολογία κάθετης κίνησης. Οι οριζόντιες βαθμολογίες και οι βαθμολογίες κίνησης συν βαθμολογίες κάθετης κίνησης υποδεικνύουν την ποσότητα άσκησης των αρουραίων. Κάθε αρουραίος μετρήθηκε μία φορά [34, 35].

2.7. Μέτρηση παραμέτρων κοπράνων.

Την τελευταία ημέρα της από του στόματος χορήγησης, φρέσκα σφαιρίδια κοπράνων από κάθε αρουραίο SD συλλέχθηκαν σε σωληνάρια με πώμα με στρογγυλό πυθμένα για 6 ώρες και καταγράφηκαν τα συνολικά βάρη από κάθε ομάδα. Για να προσδιορίσουμε την περιεκτικότητα σε υγρασία στα κόπρανα, χρησιμοποιήσαμε μια ηλεκτρική ζυγαριά για να στεγνώσουμε τα σφαιρίδια κοπράνων μέχρι να επιτευχθεί σταθερό βάρος και μετρήσαμε το ξηρό βάρος. Η περιεκτικότητα σε υγρασία

2.8. Αξιολόγηση GAS, MTL, SS και CGRP.

Οι συγκεντρώσεις της γαστρίνης (GAS), της μοτιλίνης (MTL), της σωματοστατίνης (SS) και του πεπτιδίου που σχετίζεται με το γονίδιο της καλσιτονίνης (CGRP) στον ορό υπολογίστηκαν με ELISA χρησιμοποιώντας κιτ που διατίθενται στο εμπόριο.

2.9. Ιστολογική Ανάλυση.

Εγκάρσια κόλον που συλλέχθηκαν από αρουραίους SD σταθεροποιήθηκαν με φορμαλίνη 10 τοις εκατό για 12 ώρες, ενσωματωμένα

m παχιές φέτες που χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (H&E, Sigma- Aldrich, MO, USA). Μορφολογικά χαρακτηριστικά αυτών των τομών παρατηρήθηκαν κάτω από μικροσκόπιο φωτός, μετά το οποίο μετρήθηκαν το μήκος της λάχνης, το πάχος της κρύπτης και το πάχος των μυών χρησιμοποιώντας τη Leica Application Suite (Leica Microsystems, Ελβετία).

2.10. Ανοσοϊστοχημική Ανάλυση.

Ακολουθήσαμε τις μεθόδους των Zhu et al. (2016) [36]; ήταν άβαφα τμήματα 5 m

χρώση με κουνέλι anti-c-kit (1: 100) στους 4 C όλη τη νύχτα. Η μέθοδος του δευτερογενούς αντισώματος και του συμπλέγματος αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ένας αρνητικός σε ανοσοσφαιρίνη έλεγχος χρησιμοποιήθηκε για την εξάλειψη της μη ειδικής δέσμευσης. Επίπεδα έκφρασης του c-kit

2.11. Ανάλυση Ρυθμού Εντερικής Διέλευσης.

Ο λόγος εντερικής διέλευσης πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με πρωτόκολλα που αναφέρθηκαν προηγουμένως [36]. εν συντομία, μετά από 14 ημέρες θεραπείας, όλοι οι αρουραίοι με SD υποβλήθηκαν σε νηστεία 12 ωρών αλλά τους επετράπη ελεύθερη πρόσβαση στο νερό.

Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο. Τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης των mRNA c-kit, SCF και PI3K στο κόλον προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας κιτ εξαγωγής ολικού RNA (TIANGEN Biotech,

Πεκίνο, Κίνα) σύμφωνα με τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή. Πραγματοποιήθηκε PCR πραγματικού χρόνου με σύστημα PCR πραγματικού χρόνου ABI StepOnePlus (ABI). Το SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japan) χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση προϊόντων PCR. Οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. Στη συνέχεια, φρέσκος ιστός παχέος εντέρου αρουραίου βάρους 0,5 g ήταν ομόλογος-

l) εκχυλίστηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TRIZol (Invitrogen, ΗΠΑ). Ένα κιτ αντίστροφης μεταγραφής-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.) χρησιμοποιήθηκε για τη σύνθεση του πρώτου κλώνου του cDNA σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Όλες οι στοχευόμενες παράμετροι φαίνονται στον Πίνακα 1. Το πρωτόκολλο ανακύκλωσης ήταν υπό τις ακόλουθες συνθήκες: 95 C για 5 λεπτά (μετουσίωσης DNA), ακολουθούμενο από 40 κύκλους των 95 C για 15 δευτερόλεπτα, 60 C για 20 δευτερόλεπτα και 72 C για 40 δευτ. Πραγματοποιήθηκε ανάλυση καμπύλης τήξης στο τέλος των κύκλων ενίσχυσης.

2.12. Ανάλυση Western Blot.

Τα περιεχόμενα πρωτεΐνης του c-kit και του SCF σε ομογενοποιήματα δειγμάτων παχέος εντέρου αξιολογήθηκαν με στύπωμα Western. Εν συντομία, οι συνολικές πρωτεΐνες των ομογενοποιημένων προϊόντων προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία δικινχονικού οξέος (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Γέλη δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) χρησιμοποιήθηκε για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών στο σύστημα ηλεκτροφόρησης BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA). Οι πρωτεΐνες στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (PVDF). Μετά από 2 ώρες επεξεργασία με ρυθμιστικό αποκλεισμού σε TBS που περιέχει 5 τοις εκατό άπαχο γάλα σε θερμοκρασία δωματίου, οι μεμβράνες PVDF επωάστηκαν όλη τη νύχτα με 1: 1000 αραιωμένο anti-c-kit (Santa Cruz, CA, USA), 1: 500 αραιωμένο αντι- SCF (Sigma, MO,

ΗΠΑ), και 1: 8000 αραιωμένα αντισώματα κατά της ακτίνης (Kangchen, Shanghai, China), αντίστοιχα. Η δέσμευση του πρωτογενούς αντισώματος ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας το αντίστοιχο δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με HRP (Beyotime, Jiangsu, Κίνα). Ένα κιτ βελτιωμένης χημειοφωταύγειας (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) και το Σύστημα Υπέρυθρης Απεικόνισης Odyssey (Gene Company Ltd., Χονγκ Κονγκ) χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση χημειοφωταύγειας. Ως έλεγχος φόρτωσης χρησιμοποιήθηκε η προλακτίνη οικιακής χρήσης. Η ποσότητα της έκφρασης πρωτεΐνης παρουσιάζεται σε σχέση με τα επίπεδα της ακτίνης.

2.13. Στατιστική ανάλυση.

Τα δεδομένα μετρήσεων αναφέρθηκαν ως το μέσο τυπικό σφάλμα του μέσου όρου (SEM) και αναλύθηκαν με SPSS

16.0 λογισμικό (SPSS, Chicago, IL, USA). Η μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) ακολουθούμενη από δοκιμές πολλαπλών εύρους Duncan χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό σημαντικών διαφορών σε όλες τις παραμέτρους. Οι τιμές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές στο

3. Αποτελέσματα

3.1. Σύνθεση και λειτουργικά συστατικά του Herba Cistanche.

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, οι ρίζες του Herba Cistanche περιέχουν υψηλές συγκεντρώσεις αρκετών βιοδραστικών συστατικών που σχετίζονται με καθαρτικά αποτελέσματα. Οι συγκεντρώσεις των ολικών εχινοσιδών και των ολικών βερβακοσιδών ήταν 0,64 mg/g και 0,16 mg/g, αντίστοιχα. Δύο κορυφές που υποδεικνύουν υψηλά επίπεδα εχινακοσίδης και βερμπασκοσίδης ανιχνεύθηκαν στο LP σε κατάλληλο χρόνο κατακράτησης με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC).

3.2. Γενική Παρατήρηση.

Οι αρουραίοι SP δεν πέθαναν καθ' όλη τη διάρκεια του πειράματος, υποδεικνύοντας καλύτερη ασφάλεια και λειτουργικότητα του ζωικού μοντέλου. Σε σύγκριση με την ομάδα Α, οι αρουραίοι στην ομάδα μοντέλων εμφάνισαν χνουδωτή γούνα, ατονία, ξηρά κόπρανα και

επιδεινώθηκε με την παράταση του χρόνου μοντελοποίησης.

3.3. Επίδραση του AEHC στον αριθμό των κοπράνων και την περιεκτικότητα σε υγρασία σε αρουραίους με δυσκοιλιότητα που προκαλείται από λοπεραμίδη.

Σε σύγκριση με τα κανονικά κόπρανα, τα κόπρανα στις Ομάδες Β, Γ, Δ και Ε ήταν ξηρά, μικρά και σκληρά και ήταν χωρίς γυάλισμα πριν από τη θεραπεία.

Άλλωστε, στους αρουραίους έγινε ένεση λοπεραμίδης (που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με φάρμακο έχουν ανακουφίσει τα συμπτώματα ως σώμα και 3(β)).

το βάρος δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ όλων των πειραματικών ομάδων, αν και η ομάδα Ε έδειξε ελαφρώς χαμηλότερο σωματικό βάρος από τις άλλες ομάδες (Εικόνα 2(α)). Επιπλέον, οι αρουραίοι με ΣΔ με δυσκοιλιότητα έφαγαν σημαντικά λιγότερη τροφή από την Ομάδα Α ( ), ενώ οι διαφορές μεταξύ των Ομάδων Β, Γ, Δ και Ε (Εικόνα 2(β)) δεν ήταν σημαντικές. Η κατανάλωση νερού επίσης δεν άλλαξε μεταξύ της Ομάδας Α και της Ομάδας Β. Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση στην κατανάλωση νερού

ότι η θεραπεία με το AEHC δεν προκάλεσε καμία αλλαγή. Αν και το ποσοστό εντερικής διέλευσης στις Ομάδες C, D και ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερο, οι Ομάδες C, D και E είχαν σημαντικά χαμηλότερες αναλογίες από την Ομάδα Α.

3.4. Επίδραση του AEHC στον ρυθμό διέλευσης του λεπτού εντέρου σε αρουραίους με δυσκοιλιότητα που προκαλείται από λοπεραμίδη.

Όπως φαίνεται από το Σχήμα 4, δεν ανιχνεύθηκαν διαφορές στον βασικό χρόνο διέλευσης του λεπτού εντέρου μεταξύ των πέντε ομάδων. Η ομάδα Β έχει εμφανώς χαμηλότερη αναλογία προώθησης σκόνης άνθρακα σε σύγκριση με την Ομάδα Α (𝑃 < 0.01).="" αν="" και="" ο="" ρυθμός="" εντερικής="" διέλευσης="" στις="" ομάδες="" c,="" d="" και="" e="" ήταν="" επίσης="" σημαντικά="" υψηλότερος="" από="" εκείνον="" στην="" ομάδα="" β="" (𝑃="">< 0,05),="" οι="" ομάδες="" c,="" d="" και="" e="" είχαν="" σημαντικά="" χαμηλότερες="" αναλογίες="" από="" την="" ομάδα="">

3.5. Η παρέμβαση με AEHC ενισχύει μερικώς τη λειτουργία του δείκτη κινητικότητας του παχέος εντέρου.

Τα επίπεδα ορού GAS και MTL που ελήφθησαν από αρουραίους της Ομάδας Β μειώθηκαν σημαντικά σε σύγκριση με εκείνα της Ομάδας Α (𝑃 < {{0}}.01,="" αντιστοίχως).="" από="" την="" άλλη="" πλευρά,="" οι="" ομάδες="" c,="" d="" και="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" αντιστοίχως)="" έχουν="" αποτελεσματικά="" υψηλότερα="" επίπεδα="" gas="" και="" mtl="" από="" τη="" χορήγηση="" εκχυλισμάτων="" herba="" cistanche="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" β="" οι="" τιμές="" ss="" στους="" αρουραίους="" της="" ομάδας="" β="" ήταν="" υψηλότερες="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" α="" (𝑃="">< 0.01).="" οι="" ομάδες="" c,="" d="" και="" e="" έχουν="" εξασθενημένα="" επίπεδα="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (εικόνα="" 5).="" σε="" σύγκριση="" με="" τους="" αρουραίους="" με="" δυσκοιλιότητα,="" τα="" επίπεδα="" cgrp="" στους="" φυσιολογικούς="" αρουραίους="" της="" ομάδας="" α="" (𝑃="">< 0,01)="" και="" στις="" ομάδες="" c,="" d="" και="" ε="" στις="" οποίες="" χορηγήθηκε="" herba="" cistanche="" ήταν="" σταθερά="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Ιστολογική αλλοίωση του παχέος εντέρου.

Για να διερευνηθεί εάν η θεραπεία με AEHC μπορεί να προκαλέσει δομική αλλοίωση του ιστού του παχέος εντέρου, το μήκος της λάχνης, το πάχος του στρώματος της κρύπτης και το πάχος των μυών μετρήθηκαν σε εγκάρσια κόλον αρουραίων στις πέντε ομάδες μετά από χρώση Η&Ε. Συγκρίνοντας την παθολογία του παχέος εντέρου των αρουραίων σε κάθε ομάδα, ο βλεννογόνος του παχέος εντέρου ήταν λείος και περιέχει μικρές αρτηρίες και μικρές φλέβες στον υποβλεννογόνο και μεγάλο αριθμό λιπωδών κυττάρων. Επιπλέον, η μυϊκή στιβάδα αποτελούνταν από λεία μυϊκά κύτταρα και ο υποορός ήταν πλήρης. Το μέσο μήκος της λάχνης ήταν σημαντικά μικρότερο στην Ομάδα Β από ότι στην Ομάδα Α (𝑃 < {{0}}.01).="" ωστόσο,="" το="" μέσο="" μήκος="" της="" λάχνης="" στην="" ομάδα="" γ="" αυξήθηκε="" σημαντικά="" κατά="" περισσότερο="" από="" 30="" τοις="" εκατό="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" β="" (εικόνες="" 6="" και="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" εν="" τω="" μεταξύ,="" το="" μέσο="" μήκος="" της="" λάχνης="" αυξάνεται="" πολύ="" στις="" ομάδες="" δ="" και="" ε="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" β="" (εικόνες="" 6(α)="" και="" 6(β))="" (𝑃="">< 0,01).="" επιπλέον,="" η="" μεταβολή="" του="" πάχους="" των="" μυών="" ήταν="" πολύ="" παρόμοια="" με="" το="" μήκος="" της="" λάχνης.="" στην="" ομάδα="" β,="" το="" πάχος="" των="">

ήταν δραματικά πιο λεπτή σε σύγκριση με την Ομάδα Α. Ωστόσο, τα επίπεδα πάχους μυών στις Ομάδες C, D και E αυξήθηκαν κατά 30-35 τοις εκατό σε σχέση με αυτό της Ομάδας Β (Εικόνες 6 και 7). Συνολικά, αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι το AEHC μπορεί να αυξήσει το μήκος της λάχνης και το πάχος των μυών στο κόλον αρουραίων με δυσκοιλιότητα.

3.7. Χορήγηση θεραπείας AHEC Αύξηση της έκφρασης πρωτεΐνης του c-Kit και του SCF.

Η ανοσοαντιδραστικότητα του ανιχνεύθηκε στο κόλον καθώς τα κύτταρα σε όλες τις ομάδες ήταν θετικά για c-kit. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 8, το επίπεδο έκφρασης του c-kit στην Ομάδα Β ήταν χαμηλότερο από αυτό στην Ομάδα Α (𝑃 < 0.05).="" το="" επίπεδο="" έκφρασης="" του="" c-kit="" στην="" ομάδα="" γ="" ήταν="" υψηλότερο="" από="" αυτό="" στην="" ομάδα="" β="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" ενώ="" περισσότερο="" c-kit="" υπήρχε="" στις="" ομάδες="" δ="" και="" ε="" από="" ό,τι="" στην="" ομάδα="" β="" (𝑃="">< 0.05).="" μετά="" από="" επεξεργασία="" με="" διαφορετικές="" συγκεντρώσεις="" υδατικού="" εκχυλίσματος="" herba="" cistanche="" για="" 2="" εβδομάδες,="" τα="" επίπεδα="" έκφρασης="" πρωτεΐνης="" του="" c-kit="" και="" του="" scf="" ανιχνεύθηκαν="" με="" ανάλυση="" western="" blot.="" η="" ανάλυση="" western="" blot="" έδειξε="" ότι="" τα="" επίπεδα="" έκφρασης="" c-kit="" και="" scf="" ήταν="" αξιοσημείωτα="" χαμηλότερα="" μετά="" από="" θεραπεία="" με="" λοπεραμίδη="" σε="" κόλον="" αρουραίων="" (εικόνα="" 9).="" το="" σχήμα="" 8(ε)="" δείχνει="" ότι="" το="" μειωμένο="" c-kit="" σε="" αρουραίους="" με="" δυσκοιλιότητα="" αυξήθηκε="" σημαντικά="" κατά="" 31,2="" τοις="" εκατό="" μετά="" τη="" θεραπεία="" των="" αρουραίων="" με="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃="">< 0,05).="" επιπλέον,="" η="" θεραπεία="" με="" 100="" και="" 200="" ​​g/ml="" aehc="" αύξησε="" τα="" επίπεδα="" έκφρασης="" πρωτεΐνης="" c-kit.="" η="" έκφραση="" της="" πρωτεΐνης="" scf="" αυξήθηκε="" σημαντικά="" κατά="" 20,1,="" 24,7="" και="" 8,4="" τοις="" εκατό="" κατά="" τη="" θεραπεία="" με="" 100,="" 200="" και="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc,="" αντίστοιχα="" (εικόνα="" 9).="" 3.8.="" επίδραση="" του="" aehc="" στην="" έκφραση="" mrna="" του="" c-kit,="" scf="" και="" pi3k.="" για="" να="" διερευνηθεί="" εάν="" η="" θεραπεία="" με="" aehc="" μπορεί="" να="" επηρεάσει="" τη="" ρύθμιση="" του="" mrna="" που="" σχετίζεται="" με="" τη="" μυϊκή="" σύσπαση,="" παρατηρήθηκαν="" αλλαγές="" στα="" επίπεδα="" έκφρασης="" c-kit,="" scf="" και="" pi3k="" σε="" κόλον="" αρουραίων="" με="" δυσκοιλιότητα="" χρησιμοποιώντας="" ειδικούς="" εκκινητές.="" τα="" αποτελέσματα="" έδειξαν="" ότι="" τα="" επίπεδα="" mrna="" του="" c-kit="" στην="" ομάδα="" β="" ήταν="" σημαντικά="" χαμηλότερα="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" α="" (𝑃="">< 0,05),="" ενώ="" τα="" επίπεδα="" mrna="" στις="" ομάδες="" c,="" d="" και="" e="" ήταν="" υψηλότερα="" από="" ό,τι="" στην="" ομάδα="" β="" (𝑃="">< 0,05)="" (εικόνα="" 10).="" εξετάσαμε="" επίσης="" το="">

έκφραση του SCF, ενός συνδετήρα του κιτ. Η έκφραση mRNA του SCF σε αρουραίους της Ομάδας Β ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ό,τι στην Ομάδα Α, ενώ η θεραπεία με AEHC στις Ομάδες C, D και Ε αύξησε την έκφραση mRNA SCF (Εικόνα 10). Επιπλέον, εξετάσαμε την επίδραση του AEHC στην έκφραση του γονιδίου PI3K. Την ημέρα 14, το επίπεδο έκφρασης του γονιδίου PI3K ήταν σημαντικά υψηλότερο στις Ομάδες C, D και E από ό,τι στην Ομάδα Β (𝑃 <>

4. Συζήτηση

Η δυσκοιλιότητα είναι μια πολύ συχνή διαταραχή που χαρακτηρίζεται από κακές κινήσεις του εντέρου. Μειώνει σημαντικά την ποιότητα ζωής και επιφέρει τεράστια οικονομική επιβάρυνση τόσο για τους ασθενείς όσο και για την εθνική ασφάλιση υγείας [32]. Τα φυσικά προϊόντα και τα φαρμακευτικά τρόφιμα προσελκύουν τώρα ολοένα και αυξανόμενη προσοχή λόγω της δυνατότητάς τους να γίνουν νέα φάρμακα που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία της δυσκοιλιότητας [37, 38]. Ως εκ τούτου, μελετήσαμε τα θεραπευτικά αποτελέσματα του AEHC σε αρουραίους με δυσκοιλιότητα που προκαλούνται από λοπεραμίδη. Η λοπεραμίδη, η διφαινοξυλική ατροπίνη και η μορφίνη χρησιμοποιούνται ευρέως για την πρόκληση δυσκοιλιότητας σε πειραματόζωα. Μεταξύ των τριών φαρμάκων, η λοπεραμίδη προκαλεί παρατεταμένη διάρκεια εκκένωσης κοπράνων και καθυστέρηση της εντερικής διέλευσης από τον αυλό, καθώς αναστέλλει τόσο την έκκριση νερού όσο και την ομαλή κίνηση στο εντερικό τοίχωμα [39]. Η ανάλυση του σωματικού βάρους σε αυτή τη μελέτη δεν βρήκε καμία διαφορά σε κάθε ομάδα. Μετά το πείραμα, δεν βρέθηκε καμία διαφορά. Η ομάδα χαμηλής δόσης του AEHC είχε ακόμα το χαμηλότερο σωματικό βάρος, ωστόσο η ομάδα μοντέλου και η κανονική ομάδα παρουσίασαν το υψηλότερο σωματικό βάρος. Η δυσκοιλιότητα είναι γενικά μια λειτουργική ασθένεια. Η δυσκοιλιότητα αργής διέλευσης που προκλήθηκε σε αυτή τη μελέτη δεν επηρέασε την πρόσληψη θρεπτικών ουσιών από τους αρουραίους και το σωματικό τους βάρος κατά τη διάρκεια του πειράματος. Διαφορές στις ποσότητες των περιττωμάτων των αρουραίων και στην περιεκτικότητά τους σε υγρασία δεν υπήρχαν μεταξύ των ομάδων πριν από τη μοντελοποίηση. Ωστόσο, και τα δύο μειώθηκαν σημαντικά μετά τη μοντελοποίηση και η περιεκτικότητα σε υγρασία των κοπράνων αυξήθηκε μετά τη χρήση AEHC σε διαφορετικές δόσεις. Μετά τη μελέτη του προωθητικού ρυθμού της σκόνης άνθρακα του παχέος εντέρου.

των αρουραίων, η ομάδα μοντέλου είδε μια εμφανή μείωση του ρυθμού, ενώ παρέμεινε φυσιολογική σε ομάδες χαμηλής δόσης, μεσαίας δόσης και υψηλής δόσης AEHC. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η επαγόμενη από τη λοπεραμίδη χρόνια δυσκοιλιότητα διέλευσης που αντιμετωπίζεται με διαφορετικές δόσεις Herba Cistanche μπορεί να ανακτήσει την προωθητική λειτουργία του παχέος εντέρου σε διαφορετικούς βαθμούς. Οι γαστρεντερικές ορμόνες είναι βιοενεργές ουσίες υψηλής απόδοσης που εκκρίνονται από τα ενδοκρινικά κύτταρα του γαστρεντερικού βλεννογόνου και του παγκρέατος, με αποτελέσματα τόσο διέγερσης όσο και αναστολής στη ρύθμιση της κινητικής λειτουργίας του γαστρεντερικού [40, 41], εκ των οποίων τα GAS, MTL και SS έχουν σημαντικές επιδράσεις. Οι δύο πρώτες ορμόνες διεγείρουν την έκκριση του πεπτικού υγρού, συστέλλουν τους λείους μυς του γαστρεντερικού συστήματος, προάγουν την κίνηση του γαστρεντερικού περιεχομένου και διεγείρουν την κινητικότητα του γαστρεντερικού. Το SS, αντίθετα, αναστέλλει την έκκριση του πεπτικού υγρού, τη σύσπαση των λείων μυών του γαστρεντερικού συστήματος και την γαστρεντερική κένωση [42]. Τα επίπεδα GAS και MTL στον ιστό του παχέος εντέρου της ομάδας μοντέλου βρέθηκαν να είναι τα χαμηλότερα, υποδεικνύοντας ότι η μέθοδος μοντελοποίησης σίγουρα μείωσε τη συγκέντρωση των GAS και MTL στον ιστό του παχέος εντέρου. Ως οι κύριες γαστρεντερικές ορμόνες της κινητικότητας του παχέος εντέρου, η συγκέντρωση του GAS και του MTL αυξήθηκε με διαφορετικές δόσεις AEHC και έτσι ενίσχυσε την κινητικότητα του παχέος εντέρου. Αντίθετα, το επίπεδο SS στον ιστό του παχέος εντέρου της ομάδας μοντέλου ήταν το υψηλότερο, υποδεικνύοντας ότι η μέθοδος μοντελοποίησης μπορεί να προάγει τη συγκέντρωση του SS στον ιστό του παχέος εντέρου. Το CGRP είναι ένα από τα πιο ισχυρά αγγειοδιασταλτικά και η χαλαρωτική του δράση είναι 10-πλάσια ισχυρότερη από τη συστολή. Ως σημαντικός νευροδιαβιβαστής ή νευροδιαμορφωτής που ρυθμίζει τις πεπτικές λειτουργίες, το CGRP μπορεί να αναστείλει την πλειοψηφία της γαστρεντερικής κινητικότητας και την έκκριση διαφόρων πεπτικών υγρών [43]. Η συγκέντρωση του CGRP στην ομάδα του μοντέλου ήταν υψηλότερη από την Ομάδα Α, υποδεικνύοντας ότι η μέθοδος μοντελοποίησης μπορεί να αυξήσει τη συγκέντρωση CGRP στον ιστό του παχέος εντέρου, η οποία μπορεί επίσης να είναι ένας από τους παράγοντες για μειωμένη περισταλτικότητα του παχέος εντέρου που θα οδηγήσει σε δυσκοιλιότητα. Η συγκέντρωση CGRP στον ιστό του παχέος εντέρου των ομάδων AEHC ήταν χαμηλότερη από εκείνη στην ομάδα μοντέλου, υποδηλώνοντας ότι η AEHC είχε σχετικά ασθενή ανασταλτική επίδραση στην κίνηση του παχέος εντέρου. Το c-Kit είναι μια διαμεμβρανική πρωτεΐνη. Ο παράγοντας βλαστοκυττάρων (SCF) του συνδέτη του παράγεται από κύτταρα νευρώνων και λεία μυϊκά κύτταρα. Προάγει την ανάπτυξη και διαφοροποίηση του ICC και διατηρεί τη φυσιολογική του φυσιολογική λειτουργία. Η σήμανση c-Kit αντικατοπτρίζει έμμεσα την ποσότητα και την πυκνότητα του ICC [44, 45]. Επιπλέον, το κύτταρο ICC παίζει βασικό ρόλο στη ρύθμιση της γαστρεντερικής κινητικότητας και δρα ως βηματοδότης της γαστρεντερικής κίνησης. Έτσι, ορισμένες διαταραχές της κινητικότητας του γαστρεντερικού εντέρου μπορεί να βρουν μείωση της ποσότητας και της λειτουργίας των κυττάρων ICC. Σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες, ο αριθμός των κυττάρων στο παχύ έντερο ασθενών με χρόνια δυσκοιλιότητα διέλευσης μειώθηκε. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη παρατήρησε τα κύτταρα του παχέος εντέρου των αρουραίων με τη χρήση ειδικών τεχνικών έκφρασης και ανοσοϊστοχημικών. Σε σύγκριση με την κανονική ομάδα, ο αριθμός των κυττάρων στην ομάδα μοντέλου μειώθηκε σημαντικά αλλά αυξήθηκε μετά τη θεραπεία. Η μελέτη έδειξε ότι τα κύτταρα ICC και οι παράγοντες βλαστοκυττάρων (SCF) σχετίζονται στενά με την οδό σήματος c-kit/SCF. Το SCF είναι το φυσικό πρόσδεμα του c-kit που εκφράζεται σε διάφορους ιστούς του σώματος αλλά κυρίως

που παράγονται από τα στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών. Κάθε μονομερές c-kit συνδυάζεται με ένα SCF μέσω των εξωκυτταρικών περιοχών 1-3. Μετά τον διμερισμό SCF, η δομή του μονομερούς c-kit αλλάζει και παράγει ομοδιμερισμό, ο οποίος στη συνέχεια οδηγεί στην αυτοφωσφορυλίωση των υπολειμμάτων αμινοξέων στην κυτταρική μεμβράνη και διεγείρει διάφορα μόρια δεύτερου σήματος για να ρυθμίσουν τις κυτταρικές λειτουργίες του ICC. Το δεύτερο μόριο σήματος είναι η 3-κινάση της φωσφατιδυλινοσιτόλης (PI3K), μια απολιποπρωτεΐνη που μετατρέπει την 4,5- διφωσφοϊνοσιτίδη σε 3,4,{10}}τριφωσφοϊνοσιτίδη μέσω του συνδυασμού με τυροσίνη 721 του c-kit. Προηγούμενη έρευνα έδειξε ότι οι αναστολείς PI3K Wortmannin και LY294002 προκάλεσαν ανώμαλη ανάπτυξη του ICC μπλοκάροντας το σήμα [46]. Το πείραμά μας βρήκε ότι οι εκφράσεις πρωτεΐνης c-kit και SCF και mRNA στην ομάδα μοντέλου μειώθηκαν αρχικά, αλλά στη συνέχεια αυξήθηκαν σε ομάδες AEHC διαφορετικών δόσεων, αν και σε επίπεδα κάτω από τα φυσιολογικά. Η έκφραση mRNA του PI3K αυξήθηκε αξιοσημείωτα. Επομένως, το SCF/c-kit μπορεί να τεθεί σε ισχύ μέσω του PI3K. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το AEHC μπορούσε να ρυθμίσει τους λείους μυς της γαστρεντερικής οδού αυξάνοντας την ποσότητα των κυττάρων ICC. Η χαμηλή δόση AEHC δεν είχε σημαντική επίδραση στη δυσκοιλιότητα, ενώ η μεσαία και η υψηλή δόση μείωσαν τον πρώτο χρόνο αφόδευσης των αρουραίων, αύξησαν την περιεκτικότητα σε υγρασία στα κόπρανα, βελτίωσαν τον προωθητικό ρυθμό του παχέος εντέρου, βελτίωσαν την ποσότητα των κοπράνων, αύξησαν το GAS , τα επίπεδα MTL και CCK και ενίσχυσαν τη συσταλτικότητα του παχέος εντέρου. Η αποτελεσματική δόση του AEHC είναι αρχικά 20 g/ημέρα μετά τη μετατροπή, η οποία είναι ισοδύναμη με τη μεσαία δόση και την υψηλή δόση σε αυτή τη μελέτη.

5. Συμπεράσματα

Το AEHC προάγει την εντερική κινητικότητα βελτιώνοντας τη λειτουργία του ICC και ρυθμίζοντας τους νευροδιαβιβαστές σε αυτή τη μελέτη, η οποία απέδειξε ότι το AEHC έχει τη δυνατότητα να θεραπεύει και να αποτρέπει τη δυσκοιλιότητα. Τα εκχυλίσματα βελτίωσαν την παραγωγή αργών κυμάτων του παχέος εντέρου και ρύθμισαν τον ρυθμό της συσταλτικής δραστηριότητας SCF mRNA ποσότητα PI3K mRNA ποσότητα c-Kit mRNA ποσότητα12 Συμπληρωματική και εναλλακτική ιατρική λείων μυών με βάση τεκμήρια αυξάνοντας την ποσότητα ICC μέσω του PI3K/SCF/ διαδρομή σήματος c-kit. Ωστόσο, περαιτέρω λεπτομερείς πειραματικές μελέτες μπορεί να βελτιώσουν την κατανόηση των άλλων μοριακών οδών του AEHC στη θεραπεία του STC και να βοηθήσουν στην καθοδήγηση προοπτικών κλινικών μελετών για την αξιολόγηση των επιπτώσεων και της ασφάλειάς του.

Συγκρούσεις συμφερόντων

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν συγκρούσεις συμφερόντων.

Συνεισφορές Συγγραφέων

Ο Shuai Yan και ο Yin-Zi Yue συνέβαλαν εξίσου σε αυτό το έργο. Όλοι οι συγγραφείς έχουν εγκρίνει την τελική εργασία.

Ευχαριστίες

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από επιχορήγηση από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC) και χρηματοδοτήθηκε από την κινεζική κυβέρνηση (81573979). Η μελέτη υποστηρίχθηκε επίσης από το τεχνολογικό έργο της Επαρχιακής Διοίκησης Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής Jiangsu, Κίνα (αρ. YB2017061), το Πρόγραμμα Επιστημονικής και Τεχνολογικής Ανάπτυξης Suzhou, Κίνα (αρ. SYSD2015172), το Project of Suzhou Industrial Technology Innovation, China ( SYSD2016136, αρ. SYS201775 και αρ. SYS201776) και το Κολεγιακό Έργο του Νοσοκομείου Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής του Σουζού, Κίνα (YQN2015007). Οι συγγραφείς αναγνωρίζουν με ευγνωμοσύνη την οικονομική υποστήριξη από ένα έργο που χρηματοδοτείται από το China Postdoctoral Science Foundation (2017M620220).

βιβλιογραφικές αναφορές

[1] JY Chang, GR Locke, MA McNally, et al., "Impact of functional gastrointestinal disorders on survival in the community," American Journal of Gastroenterology, τομ. 105, αρ. 4, σελ. 822– 832, 2010. [2] SM Mugie, M. A Bennington, and C. Di Lorenzo, "Epidemiology of constipation in children and adults: a systematic review," Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, vol. 25, αρ. 1, σελ. 18, 2011. [3] NC Suares και AC Ford, "Επιπολασμός και παράγοντες κινδύνου για τη χρόνια ιδιοπαθή δυσκοιλιότητα στην κοινότητα: συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση," American Journal of Gastroenterology, vol. 106, αρ. 9, σελ. 1582–1591, 2011. [4] A. Lembo and M. Camilleri, «Chronic constipation», The New England Journal of Medicine, vol. 349, αρ. 14, σελ. 1360–1368, 2003. [5] S. Singh, S. Heady, E. Coss-Adame, and SSC Rao, "Clinical utility of colonic manometry in slow-transit constipation," Neurogastroenterology & Motility, τομ. 25, αρ. 6, σελ. 487–495, 2013. [6] DM Preston και JE Lennard-Jones, «Σοβαρή χρόνια δυσκοιλιότητα νεαρών γυναικών: «ιδιοπαθής δυσκοιλιότητα αργής διέλευσης», Gut, τομ. 27, αρ. 1, σελ. 41-48, 1986. [7] P. Kashyap, PJ Gomez-Pinilla, MJ Pozo, et al., "Immunoreactivity for Ano1 detect depletion of Kit-positive interstitial cells of Cajal in ασθενείς με δυσκοιλιότητα βραδείας διέλευσης ," Neurogastroenterology & Motility, τομ. 23, αρ. 8, σελ. 760–765, 2011. [8] JD Belsey, M. Geraint, and TA Dixon, "Συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση: Πολυαιθυλενογλυκόλη σε ενήλικες με μη οργανική δυσκοιλιότητα", International Journal of Clinical Practice, τομ. . 64, αρ. 7, σελ. 944–955, 2010. [9] AC Ford και NC Suares, "Effect of laxatives and pharmacological therapies in χρόνια ιδιοπαθής δυσκοιλιότητα: συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση", Gut, τομ. 60, αρ. 2, σελ. 209–218, 2011. [10] OM Aboumarzouk, T. Agarwal, R. Antakia, U. Shariff, and RL Nelson, «Cisapride for intestinal constipation», Cochrane Database of Systematic Reviews, τομ. 19, αρ. 1, σελ. CD007780, 2011. [11] MA Kamm, S. Muller-Lissner, NJ Talley, et al., "Tegaserod for ¨ the treatment of χρόνια δυσκοιλιότητα: Μια τυχαιοποιημένη, διπλά τυφλή, ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο πολυεθνική μελέτη," American Journal of Γαστρεντερολογία, τόμ. 100, αρ. 2, σελ. 362–372, 2005. [12] A. Shin, M. Camilleri, G. Kolar, P. Erwin, CP West, and MH Murad, "Systematic review with meta-analysis: Highly Selective {{80} } Αγωνιστές ΗΤ4 (προκαλοπρίδη, βελουστραγκ ή ναροναπρίδη) στη χρόνια δυσκοιλιότητα," Alimentary Pharmacology & Therapeutics, τομ. 39, αρ. 3, σελ. 239–253, 2014. [13] J.-H. Chen, Q. Zhang, Y. Yu et al., "Neurogenic and Myogenic Properties of Pan-Colonic Motor Patterns and their Spatiotemporal Organization in Rats", PLoS ONE, τομ. 8, αρ. 4, Article ID e60474, 2013. [14] VL Serebruany, ME Mouelhi, H.-J. Pfannkuche, K. Rose, M. Marro και DJ Angiolillo, "Investigations on 5-HT4 receptor expression and effect of tegaserod on human platelet aggregation in vitro," American Journal of Therapeutics, τομ. 17, αρ. 6, σελ. 543–552, 2010. [15] HS Winter, C. Di Lorenzo, MA Benninga, et al., "Προουκαλοπρίδη από το στόμα σε παιδιά με λειτουργική δυσκοιλιότητα", Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, τομ. 57, αρ. 2, σελ. 197–203, 2013. [16] A. Bove, F. Puccini, M. Bellini, et al., "Συναινετική δήλωση AIGO/SICCR: Διάγνωση και θεραπεία χρόνιας δυσκοιλιότητας και παρεμποδισμένης αφόδευσης (μέρος Ι: Διάγνωση )," World Journal of Gastroenterology, τομ. 18, αρ. 14, σελ. 1555–1564, 2012. [17] GL Lyford, C.-L. He, E. Soffer, et αϊ., "Παγκόσμια μείωση στα διάμεση κύτταρα του Cajal σε ασθενείς με δυσκοιλιότητα βραδείας διέλευσης", Gut, τομ. 51, αρ. 4, σελ. 496–501, 2002. [18] J.-P. Wang, G.-F. Ding και Q.-Z. Wang, "Interstitial κύτταρα του Cajal μεσολαβούν διεγερτική συμπαθητική νευροδιαβίβαση στον προστάτη ινδικού χοιριδίου", Cell and Tissue Research, τόμ. 352, αρ. 3, σελ. 479–486, 2013. [19] W.-D. Tong, B.-H. Liu, L.-Y. Zhang, S.-B. Zhang, and Y. Lie, «Μειωμένα διάμεση κύτταρα του Cajal στο σιγμοειδές κόλον ασθενών με δυσκοιλιότητα βραδείας διέλευσης», International Journal of Colorectal Disease, τομ. 19, αρ. 5, σελ. 467–473, 2004. [20] D. Wu, X. Wang, J. Zhou, et al., "Παραδοσιακή κινεζική φόρμουλα, λιπαντικό χάπι εντέρου, βελτιώνει τη δυσκοιλιότητα αρουραίων που προκαλείται από λοπεραμίδη που εμπλέκεται στην ενίσχυση του Cl- έκκριση σε όλο το περιφερικό επιθήλιο του παχέος εντέρου," Journal of Ethnopharmacology, τομ. 130, αρ. 2, σελ. 347–353, 2010. [21] Δ.-Υ. Αυτός και ο Σ.-Μ. Dai, "Αντιφλεγμονώδη και ανοσοτροποποιητικά αποτελέσματα της Paeonia lactiflora Pall., ένα παραδοσιακό κινέζικο φυτικό φάρμακο," Frontiers in Pharmacology, τομ. 2, άρθρο 10, 2011. [22] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao και C.-M. Tzeng, «Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Ένα από τα καλύτερα φαρμακευτικά δώρα της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής», Frontiers in Pharmacology, τομ. 7, άρθρο 41, 2016.