Το υψηλό P16INK4a, ένας δείκτης κυτταρικής γήρανσης, σχετίζεται με νεφρική βλάβη, δυσλειτουργία και έκβαση στη νεφρίτιδα του λύκου
Mar 24, 2022
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗ ΝΕΦΡΙΚΗ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΝΟΣΟ
ΕΙΣΑΓΩΓΗΗ νεφρίτιδα του λύκου (LN) είναι μια σοβαρή επιπλοκή του συστηματικού ερυθηματώδους λύκου (ΣΕΛ), που ξεκινά με εναπόθεση ανοσοσυμπλεγμάτων ή αυτοαντισωμάτων στη σπειραματική βασική μεμβράνη, ακολουθούμενη από στρατολόγηση φλεγμονωδών κυττάρων.Νεφρική βλάβηοδηγεί σε μη αναστρέψιμη ίνωση, με αποτέλεσμα την απώλεια της νεφρικής λειτουργίας. Το LN αντιμετωπίζεται με υψηλές δόσεις κορτικοστεροειδών και άλλους ανοσοκατασταλτικούς παράγοντες. Ωστόσο, το ένα τρίτο των ασθενών παρουσιάζει μείωσηνεφρική λειτουργία, με το 5 τοις εκατό -10 τοις εκατό να αναπτύσσει το τελικό στάδιονεφρική νόσοΜέσα σε 10 χρόνια." Οι προγνωστικοί δείκτες που θα επέτρεπαν την έγκαιρη κλιμάκωση ή τροποποίηση της θεραπείας αναζητούνται επομένως με ανυπομονησία, όπως και νέοι θεραπευτικοί στόχοι. Η κυτταρική γήρανση, που προκαλείται από ερεθίσματα όπως η διάβρωση των τελομερών, το οξειδωτικό στρες και η χρόνια φλεγμονή, οδηγεί τελικά σε μη αναστρέψιμη ανάπτυξη αναστολή μέσω της συσσώρευσης αναστολέων κινάσης που εξαρτώνται από κυκλίνη (CDK), συμπεριλαμβανομένης της πρωτεΐνης pl6Na (CDKN2A): ένα κύριο χαρακτηριστικό της επιστήμης των κυτταροσενίων. Τα γηρασμένα κύτταρα παραμένουν μεταβολικά ενεργά και υφίστανται μια σειρά μορφολογικών και φυσιολογικών αλλαγών, συμπεριλαμβανομένης της αύξησης της δραστηριότητας και της απόκτησης της γαλακτοσιδάσης ενός προφλεγμονώδους εκκριτικού φαινοτύπου που σχετίζεται με τη γήρανση (SASP). Αν και είναι απαραίτητη για την επισκευή και την αναδιαμόρφωση των ιστών (π.χ. κατά τη διάρκεια της εμβρυογένεσης), η κυτταρική γήρανση μπορεί να έχει δυσμενείς επιπτώσεις σε ασθένειες που σχετίζονται με τη γήρανση και σε χρόνιες ασθένειες καθώς και στον καρκίνο. pl6Nk ή -γαλακτοσιδάση θετικά κύτταρα έχουν παρατηρηθεί σενεφρώνγήρανση και ορισμένες νεφρικές παθήσεις, και σχετίστηκαν με ιστολογικές αλλοιώσεις καινεφρώνβλάβη. Η παρουσία θετικών κυττάρων -γαλακτοσιδάσης συσχετίστηκε με πρωτεϊνουρία σε ποντίκια με επιρρεπή σε MRL/lprlupus βαθμό. Ωστόσο, η κυτταρική γήρανση δεν έχει ακόμη αποδειχθεί σαφώς ως θετικό LN. Εδώ, αναφέρουμε την εμφάνιση pl6ka. κύτταρα σε βιοψίες νεφρού από (n=40) ασθενείς με ενεργό LN και η συσχέτισή του μενεφρική βλάβηκαι λειτουργική έκπτωση.
Λέξεις-κλειδιά:νεφρική λειτουργία? Νεφρικές παθήσεις? βιοψίες νεφρού? νεφρική βλάβη? νεφρών
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗΝ ΝΕΦΡΟ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΚΑΘΑΡΡΥΣΗ
ΜΕΘΟΔΟΙ:Ασθενείς και βιοψίες νεφρούΟι ασθενείς προσλήφθηκαν στο Τμήμα Ρευματολογίας, Cliniques Universitaires Saint-Luc (Βρυξέλλες, Βέλγιο). Όλα πληρούσαν τα αναθεωρημένα κριτήρια ταξινόμησης ACR του 1982 για τον ΣΕΛ και είχαν αποδεδειγμένο LN με βιοψία. Οι βιοψίες νεφρών με σταθεροποιημένη παραφίνη (FFPE) ήταν υπολειμματικό σωματικό υλικό που συλλέχθηκε για διαγνωστικούς σκοπούς μεταξύ Ιανουαρίου 1996 και Νοεμβρίου 2019. Οι εκτιμώμενες τιμές του ρυθμού σπειραματικής διήθησης (eGFR) υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο Χρόνιας Νεφροπάθειας Επιδημιολογίας (Epidemiology) Χρόνιας Νεφροπάθειας Epidemiology (Epidemiology) της Χρόνιας Νεφροπάθειας. Δεν απαιτείται η συγκατάθεση του ασθενούς για τη χρήση υπολειπόμενου σωματικού υλικού, σε συμφωνία με τους βελγικούς κανονισμούς για τις μελέτες σε ανθρώπους.
Ιστολογία και ανοσοϊστοχημείαΤαξινόμηση ISN/RPS 2003 του ΣΕΛνεφρώνΟι βιοψίες, οι βαθμολογίες ημιποσοτικής σκλήρυνσης και ο δείκτης δραστηριότητας των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας (NH) (AI) και ο δείκτης χρονιότητας (C) ανακτήθηκαν από ιατρικά αρχεία. Πραγματοποιήθηκε προπόνηση ανοσολογικής προπόνησης με anti-CD8(C8/144B, Dako) και anti-p16INK4 (E6H4, Roche Ventana CINtec Histology) και χρώση Picrosirius Red (PSR) σε σειριακές τομές FFPE 5μm. Οι διαφάνειες ψηφιοποιήθηκαν σε σαρωτή SCN400 (Leica Biosystems, Γερμανία) ή σε πανοραμικό συνεστιακό σαρωτή διαφανειών (3DHistech, Ουγγαρία) σε μεγέθυνση × 20. Η ποσοτικοποίηση ολόκληρης της επιφάνειας των τομών με τη βοήθεια υπολογιστή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το Author V2017.2 (Visi Biopharm, Δανία). Τα αποτελέσματα που εμφανίζονται είναι ο αριθμός pl6K ή CD{18}θετικών κυττάρων ανά μm² ιστού. Οι ημι-ποσοτικές βαθμολογίες PSR (κλίμακα:2-6) είναι οι μέσες βαθμολογίες (σπειραματική συν διάμεση ίνωση) από τρεις (τυφλούς) βαθμολογητές. Περισσότερες λεπτομέρειες παρέχονται στις ηλεκτρονικές συμπληρωματικές ψυχικές μεθόδους 1, στο διαδικτυακό συμπληρωματικό σχήμα 1.Στατιστικές αναλύσειςΠραγματοποιήθηκαν στατιστικές αναλύσεις στο GraphPad Prism V.9.1.0: Δοκιμές Mann-Whitney ή Wilcoxon ταιριασμένων ζευγών υπογεγραμμένης κατάταξης για συγκρίσεις δύο ομάδων, Kruskal-Wallis για συγκρίσεις πολλαπλών ομάδων και συντελεστής συσχέτισης κατάταξης του Spearman.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ:p16k4-θετικά κύτταρα σε βιοψίες νεφρού από ασθενείς με ενεργό LNΑξιολογήσαμε την πρωτεΐνη p16Nk με ανοσοϊστοχημεία στιςνεφρώνβιοψίες που λαμβάνονται κατά τη διάγνωση από 40 ασθενείς με ενεργό LN, συμπεριλαμβανομένης της περιστατικής νεφρίτιδας (n=31) και της υποτροπής (n=9). Τα δημογραφικά, βιολογικά και κλινικά δεδομένα συνοψίζονται στον διαδικτυακό συμπληρωματικό πίνακα 1.p16INkA. Θετικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε όλα, αλλά με σημαντική μεταβλητότητα μεταξύ των δειγμάτων: από σχεδόν κανένα έως περιστασιακά διάσπαρτα κύτταρα, σε έντονα θετικές περιοχές (εικόνα lA, διαδικτυακό συμπληρωματικό σχήμα 2A-D). Η ποσοτικοποίηση της χρώσης pl6 επιβεβαίωσε την ετερογένεια των βιοψιών LN (εύρος: 1,76×10~-260×10~, διάμεσος: 14,7×10-κύτταρα/μm) (εικόνα 1B,C). ενδοθηλιακά κύτταρα ή ποδοκύτταρα στα σπειράματα, βρεγματικά επιθηλιακά κύτταρα στις κάψουλες του Bowman, εγγύς ή άπω σωληναριακά κύτταρα και διάμεση κύτταρα (εικόνα ID). Αν και η πυκνότητα των pl{17}θετικών κυττάρων (ανά μm) ήταν σημαντικά υψηλότερη στα σπειράματα από στην διάμεση κοιλότητα (εικόνα 1Γ), αυτές οι τιμές (ανά δείγμα) έδειξαν σημαντική θετική συσχέτιση (r=0.7591, p<0.0001)(online supplemental="" figure="" 3).="" importantly,="" pl6ka="" accumulation="" was="" not="" associated="" with="" patient="" age,="" gender,="" or="" ethnicity="" (online="" supplemental="" figure="">
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗΝ ΝΕΦΡΙΚΗ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΛΟΙΜΩΞΗ
p16"K4 σχετίζεται με νεφρική δυσλειτουργία κατά την έναρξη και 5 χρόνια μετά τη θεραπείαΗ θετικότητα p16INKEa συσχετίστηκε σημαντικά με μειωμένηνεφρική λειτουργία: βιοψίες από ασθενείς με eGFR<60 at="" the="" time="" of="" sampling="" had="" significantly="" higher="" pl6inf-positive="" cells/μm²,="" and="" conversely,="" samples="" with="" high(="">Το 75ο εκατοστημόριο) p16a συσχετίστηκε με σημαντικά χαμηλότερο βασικό eGFR (εικόνα 2AB). Η συσχέτιση με το eGFR ήταν αληθής τόσο για το σπειραματικό όσο και για το διάμεσο pl6a (διαδικτυακό συμπληρωματικό σχήμα 5Α,Β). Είναι ενδιαφέρον ότι, ενώ η υψηλή σπειραματική p16 συσχετίστηκε επίσης με σημαντικά υψηλότερη πρωτεϊνουρία (αναλογία πρωτεΐνης ούρων/κρεατινίνης), η οποία αντικατοπτρίζει κυρίως την αίγλη-δεν (διαδικτυακή συμπτωματική βλάβη, διάμεση pl6ka νοητική φιγούρα 5C,D). Σε αντίθεση με τη σύνδεσή του με δεν συνδέθηκε με φτωχούςνεφρική λειτουργία,pl6NK4a παράμετροι συστηματικής νόσου όπως αντισώματα αντισώματος δίκλωνου DNA ορού ή επίπεδα C3 ή με ταξινόμηση ISN/RPS (διαδικτυακό συμπληρωματικό σχήμα 6A-D). Ελαφρώς (μη σημαντικά) υψηλότερο pl6k παρατηρήθηκε σε βιοψίες από ασθενείς με μεγαλύτερη διάρκεια μεταξύ διάγνωσης SLE και LN και σε υποτροπή σε σύγκριση με περιστατική νεφρίτιδα (διαδικτυακό συμπληρωματικό σχήμα 7A,B). Είναι σημαντικό ότι η ανάλυση μόνο των περιστατικών LN επιβεβαίωσε τη συσχέτιση μεταξύ pl6 και eGFR (διαδικτυακή συμπληρωματική εικόνα 7C), υποδηλώνοντας ότι δεν εξαρτάται αποκλειστικά από τη διάρκεια της νεφρικής νόσου. Τέλος, το υψηλό p16Nkia στις βασικές βιοψίες συσχετίστηκε επίσης με χαμηλότερο eGFR 5 χρόνια μετά τη θεραπεία (αλλά όχι κατά το έτος), γεγονός που υποδηλώνει ότι μπορεί να είναι προγνωστικό για κακή μακροπρόθεσμηνεφρώνεξέλιξη (εικόνα 2C,D).
Σχήμα 1 p16NK43-θετικά κύτταρα σε βιοψίες νεφρού από ασθενείς με ενεργό LN.(A) χρώση p16, CD8 και PSR των σειριακών τομών FFPE από μια βασική βιοψία νεφρού LN. Επισκόπηση (αριστερά πλαίσια), κοντινό πλάνο (δεξιά) που δείχνει θετικά κύτταρα p16 εντός ενός σπειράματος, περισπειραματικά CD8-θετικά κύτταρα και εναποθέσεις κολλαγόνου μέσα και γύρω από την κάψουλα Bowman του ίδιου σπειράματος. (Β) Ποσοτικοποίηση του p16xa (θετικά κύτταρα/μm² που δείχνει βαθμό ετερογένειας μεταξύ των δειγμάτων. (Γ) Ποσοτικοποίηση του p16< （positive="" cells/um²）="" in="" glomerular="" vs="" interstitial="" areas="" of="" the="" same="" samples.p-value:="" wilcoxon="" matched-pair="" signed-rank="" test.="" (d)="" representative="" image="" from="" a="" sample="" showing="" p16-positive="" cells="" within="" glomeruli="" (#),="" in="" bowman's="" capsules="" (filled="" star),="" proximal="" tubules(filled="" arrow),="" distal="" tubules(arrow)="" and="" dispersed="" in="" the="" interstitium="" (arrowhead).ffpe,="" formalin-fixed="" paraffin-embedded;="" ln,="" lupus="" nephritis;="" psr,="" picrosirius="">
Το p16NK43 σχετίζεται με νεφρική διήθηση CD8* Τ κυττάρων και ίνωση p16MaΈχει αποδειχθεί ότι τα CD8tTlymphocytes είναι ο κυρίαρχος τύπος ανοσοκυττάρων που διεισδύουν στο νεφρό LN και ότι η παρουσία τους σχετίζεται μενεφρική νόσοσοβαρότητα Βρήκαμε ότι οι βιοψίες pl6-υψηλού επιπέδου εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερη διήθηση κυττάρων CD8t Τ (εικόνα 3Α). Συσχετίστηκαν επίσης σημαντικά με αυξημένη ίνωση: κολλαγόνο
εναπόθεση όπως αντικατοπτρίζεται από ημι-ποσοτικές βαθμολογίες χρώσης PSR και βαθμολογίες σκλήρυνσης και NH CI που παρέχονται από νευροπαθολόγο (εικόνα 3Β-Δ). Οι βαθμολογίες NIH AI, αντίθετα, δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές μεταξύ των ομάδων p16INK4a (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παραδόξως, κατά την εξέταση τομών ιστού, παρατηρήσαμε αυτό που φαινόταν να είναι μια χωρική συν-κατανομή μεταξύ ισχυρής χρώσης pl6k (που έτεινε να είναι σπειραματική) και ομαδοποιημένων θετικών CD8-κυττάρων (συνήθως περισπειραματικά) σε ορισμένες βιοψίες LN (εικόνα IA, διαδικτυακό συμπληρωματικό σχήμα 2). Εμείς λοιπόν. ποσοτικοποίησε τον αριθμό των CD8* Τ κυττάρων που βρίσκονται σε ακτίνα 30μm γύρω από κάθε σπείραμα, το πάχος της κάψουλάς του Bowman και τον αριθμό των pl6k-θετικών κυττάρων μέσα σε αυτό (διαδικτυακό συμπληρωματικό σχήμα 1). Αυτό έγινε σε όλα τα σπειράματα που είναι ορατά στις τρεις σειριακές τομές, σε όλα τα δείγματα. Τα σπειράματα με υψηλή pl6K4-θετική συσσώρευση κυττάρων εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερα CD8 Τ κύτταρα περιγο-ωχράς κηλίδας (εικόνα 3Ε), καθώς και αυξημένο πάχος των καψουλών Bowman, αντανακλώντας τη σπειραματική ίνωση (εικόνα 3F).
ΣΥΖΗΤΗΣΗΑυτή είναι η πρώτη απόδειξη, σε μια μεγάλη σειρά ασθενών, ότι το pl6Na, ένα κύριο χαρακτηριστικό της κυτταρικής γήρανσης, σχετίζεται με τη σοβαρότητα της νόσου στο LN. Το IHC για την πρωτεΐνη pl16 χρησιμοποιείται ευρέως για την εκτίμηση της γήρανσης ex vivo και έχει συσχετιστεί με τη σοβαρότητα άλλωννεφρώνασθένειες. Η εκλεκτική εξάλειψη των pl6-θετικών κυττάρων σε μοντέλα ποντικών γήρανσης και επαγόμενης νεφροπάθειας έχει επίσης αποδειχθεί ότι ανακουφίζει τις ινωτικές βλάβες και βελτιώνεινεφρική λειτουργία», προτείνοντας έναν βασικό ρόλο σενεφρώνπαθογένεση. Γιατί μπορεί να συμβεί κυτταρική γήρανση στο LN είναι άγνωστο. Το φλεγμονώδες, οξειδωτικό περιβάλλον του νεφρού LN μπορεί να είναι πηγή κυτταρικού στρες. Αρκετοί προφλεγμονώδεις παράγοντες έχουν εμπλακεί στην επαγωγή γήρανσης, 14 εκπνέοντας ιντερφερόνη-Β3 που έχει συνδεθεί με τον γηρασμένο φαινότυπο των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων του μυελού των οστών από ασθενείς με SLE15Ενώ η μελέτη μας υπογραμμίζει μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της αφθονίας των pl6-θετικών κυττάρων και της σοβαρότητας του LN, η χρήση πρόσθετων δεικτών κυτταρικής γήρανσης, σε μια μεγαλύτερη κοόρτη, θα είναι απαραίτητη για την επιβεβαίωση της συνάφειάς της στο LN. Εάν και πώς η κυτταρική γήρανση συμβάλλει στην εξέλιξη της νόσου (ή αν απλώς αντανακλά τραυματισμό ιστού) μένει να διερευνηθεί. Μια επιζήμια επίδραση μπορεί να ασκηθεί μέσω του προφλεγμονώδους, προφλεγμονώδους εκκρίματος (SASP) που είναι τυπικό των γηρασμένων κυττάρων. Σύμφωνα με αυτήν την υπόθεση, περιγράφουμε μια σφιχτή χωρική συν-κατανομή μεταξύ των θετικών pl6Nk κυττάρων, της ίνωσης και της διήθησης των CD8* Τ κυττάρων στους νεφρούς LN. Ένας άλλος παθογόνος μηχανισμός μπορεί να περιλαμβάνει τη συσσώρευση λειτουργικά ανίκανων κυττάρων, για παράδειγμα,νεφρώνπρογονικά κύτταρα (RPC, ένα υποσύνολο βρεγματικών επιθηλιακών κυττάρων που βρίσκονται στην κάψουλα των σπειραμάτων του Bowman).'" Ενώ τα υγιή RPC αναγεννούν σπειραματικές και σωληναριακές δομές χάρη στην ικανότητά τους να πολλαπλασιάζονται και να διαφοροποιούνται σενεφρώνκυτταρικά υποσύνολα, τα γηρασμένα RPC θα μπορούσαν να εμποδίσουν την επιδιόρθωση των ιστών. Τέλος, ενώ το SASP είναι ιδιαίτερα κατάλληλο για την εμπλοκή του ανοσοποιητικού συστήματος (συμπεριλαμβανομένων των CD8t Τ λεμφοκυττάρων)»8 για την κάθαρση των γηρασμένων κυττάρων, το τελευταίο μπορεί να ανατρέψει τη διαδικασία αναστέλλοντας cyto lyic celk." Έχει προταθεί ότι η επιμονή των γηρασμένων κυττάρων (λόγω της συντριπτικής ή αναστολής της ανοσοαπόκρισης) οδηγεί την ισορροπία από θετική σε αρνητική επίδραση." Θα απαιτηθούν περαιτέρω πειράματα in vitro για την ανατομή του ρόλος των pl6Nk-θετικών κυττάρων στην παθογένεση του LN. Αυτό μπορεί να έχει σημαντικές επιπτώσεις στη θεραπεία, καθώς η πρώτη ανοιχτή πιλοτική μελέτη που χρησιμοποιεί τα σενολυτικά φάρμακα dasatinib συν κερκετίνη (DQ) έχει δείξει πολλά υποσχόμενα αποτελέσματα στην ιδιοπαθή πνευμονική ίνωση και τη διαβητική νεφρική νόσο.Τέλος η συσχέτιση της υψηλής βασικής γραμμής pl6INk4 με μειωμένηνεφρική λειτουργίαΗ έναρξη 5 ετών μετά τη θεραπεία υποδηλώνει ότι μπορεί να είναι ένας πολλά υποσχόμενος προγνωστικός παράγοντας της σοβαρότητας της νόσου. Θα ήταν ενδιαφέρον να αξιολογηθεί για το pl6 και τους σχετικούς δείκτες του (ίνωση και διήθηση Τ-λεμφοκυττάρων CD8) σε βιοψίες παρακολούθησης 1-έτους καθώς και σε μεγαλύτερη κοόρτη, καθώς η εξέλιξη αυτών των δεικτών από την αρχική τιμή σε Το 1 έτος μπορεί να αντικατοπτρίζει καλύτερα την ανταπόκριση της θεραπείας από ό,τι οποιοδήποτε χρονικό σημείο και μόνο.
