Ηπατοπροστατευτικές επιδράσεις της χιτοζάνης στην επαγόμενη από θειοακεταμίδη ηπατική τοξικότητα σε αρσενικούς αλμπίνο αρουραίους

Για περισσότερες πληροφορίες. Επικοινωνίαtina.xiang@wecistanche.com

Αφηρημένη: Η χιτοζάνη, ένα φυσικό προϊόν που προέρχεται από χιτίνη, έχει προσελκύσει μεγάλη προσοχή ως μια πολλά υποσχόμενη ένωση πολυσακχαρίτη, λόγω των μοναδικών βιολογικών της δράσεων. Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει τις πιθανές δυνατότητες βελτίωσης της χιτοζάνης, ως φυσικού θαλάσσιου προϊόντοςαναγέννηση του ήπατοςστην ηπατοτοξικότητα που προκαλείται από θειοακεταμίδη σε αρσενικούς αλμπίνους αρουραίους. Πενήντα ζώα χωρίστηκαν σε 5 ομάδες, συμπεριλαμβανομένης της ομάδας ελέγχου. μια ομάδα στην οποία χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκή ένεση με μία μόνο δόση θειοακεταμίδης (300 mg/kg β.β.) για πρόκληση ηπατικής τοξικότητας. μια ομάδα που έλαβε μια δίαιτα που περιείχε 5 τοις εκατό χιτοζάνη για 14 ημέρες. μια ομάδα έλαβε μια δίαιτα που περιείχε 5 τοις εκατό χιτοζάνη για 14 ημέρες, στη συνέχεια έλαβε ένεση με θειοακεταμίδη (300 mg/kg β.β.) μία φορά και στην τελευταία ομάδα που ενέθηκε με θειοακεταμίδη (300 mg/kg β.β.) μία φορά και στη συνέχεια έλαβε μια δίαιτα που περιέχει 5 τοις εκατό χιτοζάνη για 14 ημέρες. Τα βιοχημικά αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι η πρόσληψη χιτοζάνης πριν ή μετά τη δηλητηρίαση με θειοακεταμίδη βελτίωσε τους ηπατικούς δείκτες (ALAT, ASAT, GGT, ALP, λευκωματίνη) και τις λειτουργίες των νεφρών, καθώς και τον TNF- πλάσμα. Η ανάλυση QRT-PCR αποκάλυψε ότι η χιτοζάνη ρυθμίζει προς τα κάτω την ηπατική ποσοτική γονιδιακή έκφραση TNF-, survivin και c-Myc. Επιπλέον, η χιτοζάνη βελτίωσε την ιστολογική εικόνα του ήπατος. Αυτή η μελέτη έδειξε την πολλά υποσχόμενη δράση της χιτοζάνης στην αναγέννηση του ήπατος.

Λέξεις-κλειδιά: θειοακεταμίδιο; χιτοζάνη; αναγέννηση ήπατος;survivin; c-myc; παράγοντας νέκρωσης όγκου- .

1. Εισαγωγή

ΗΠΑΤΙΚΕΣ ΑΣΘΕΝΕΙΕΣείναι οι πιο απειλητικές για τη ζωή παθήσεις παγκοσμίως, ειδικά στην Αίγυπτο [1]. Στην Αίγυπτο, οι ηπατικές ασθένειες είναι η κύρια αιτία ετήσιων θανάτων [2, 3]. Το ήπαρ είναι πολύ ευαίσθητο σε τοξικότητα λόγω του ρόλου του στο μεταβολισμό των περισσότερων ξενοβιοτικών όπως φάρμακα και ξένες ενώσεις. Ευτυχώς, ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός θα μπορούσε να βοηθήσει το ήπαρ να αναγεννηθεί μετά από μεγάλη κυτταρική απώλεια [4,5]. Κατά συνέπεια, οι εναλλακτικές θεραπείες είναι βασικές απαιτήσεις που πρέπει να αντικατασταθούν ή να χρησιμοποιηθούν παράλληλα με τα τρέχοντα σχήματα. Η χιτοζάνη είναι μια πολλά υποσχόμενη φυσική ένωση πολυσακχαρίτη. Θα μπορούσε να ληφθεί από τα απόβλητα κελύφους καβουριών, γαρίδων και καραβίδων και από το κυτταρικό τοίχωμα των μυκήτων.

Η χιτοζάνη είναι μια καλή πηγή διαιτητικών ινών [6,7]. Έχει πολλά οφέλη για την υγεία, όπως ρύθμιση του ανοσοποιητικού, αντικαρκινική δράση, ηπατική προστασία, αντιδιαβητικό και αντιοξειδωτικό[8]. αντιβακτηριακή, υπολιπιδαιμική, αντιφλεγμονώδης [9], επούλωση πληγών [10,11] και ηπατοπροστατευτική δράση [12I. Το ότι είναι μη τοξικό και έχει μεγάλη βιοδιασπασιμότητα καθιστούν μεγάλα πλεονεκτήματα για τη χρήση της χιτοζάνης στη διαχείριση του οξειδωτικού στρες [13].

Τα μολυσμένα τρόφιμα και η έκθεση σε περιβαλλοντικές ή χημικές ουσίες στην εργασία είναι πιθανές πηγές τοξικών ενώσεων. Από αυτές τις τοξικές ενώσεις είναι το θειοακεταμίδιο (TAA), μια ευρέως χρησιμοποιούμενη ένωση που περιέχει θείο που βρίσκεται στο περιβάλλον ως οργανικές ενώσεις θείου και χρησιμοποιείται σε πολλές τεχνικές εφαρμογές [14]. Επίσης, χρησιμοποιείται για την πρόκληση ηπατικής ίνωσης σε αρουραίους για τη μελέτη της θεραπευτικής επίδρασης των αντι-ινωτικών φαρμάκων [15]. Κανονικά το ΤΑΑ στοχεύει το ήπαρ και ως εκ τούτου προκαλεί ηπατική βλάβη παράγοντας αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS)[16,17]. Η θειοθειική ομάδα του ΤΑΑ υποβάλλεται σε περαιτέρω μεταβολισμό μέσω του συστήματος οξειδάσης για να σχηματίσει ακεταμίδιο και ΤΑΑ-S-οξείδιο [18]. Μετά από αυτό. Σχηματίζεται διοξείδιο TAA-S, το οποίο συνδέεται ομοιοπολικά με τα μακρομόρια του ήπατος και προκαλεί ηπατική βλάβη. Αυτός ο τραυματισμός έχει τη μορφή κεντρολοβιακής νέκρωσης [19] και σχηματισμού ROS, που μαζί προκαλούν κυτταρικό θάνατο μέσω οξειδωτικού στρες [10,20]. Καθώς μια εφάπαξ δόση ΤΑΑ προκαλεί εκφυλισμό ηπατοκυττάρων, διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων και αύξησε τα επίπεδα ALP, ALT και AST [21].

Η απόπτωση είναι ένας φυσιολογικά εμφανιζόμενος μηχανισμός κυτταρικού θανάτου που χρησιμοποιείται για την ανάπτυξη και τη διατήρηση υγιών ιστών [22]. Πολλές ασθένειες θα μπορούσαν να αναπτυχθούν λόγω μη ρυθμισμένης απόπτωσης, όπως ο καρκίνος, οι νευροεκφυλιστικές διαταραχές και οι ασθένειες ανοσοανεπάρκειας. Είναι ενδιαφέρον ότι η ίδια η απόπτωση θα μπορούσε να διεγείρει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την αναγέννηση των ιστών σε έναν μηχανισμό γνωστό ως πολλαπλασιασμός που προκαλείται από την απόπτωση. Επιπλέον, η αποπτωτική διαδικασία θα μπορούσε να αποκλειστεί από μια ομάδα οικογενειακών πρωτεϊνών γνωστή ως αναστολέας των πρωτεϊνών απόπτωσης (IAPs) αναστέλλοντας τη δραστηριότητα της κασπάσης. Υπάρχουν οκτώ αναγνωρισμένα μέλη της οικογένειας IAP στο γονιδίωμα των θηλαστικών [23]. Η πιο σημαντική πρωτεΐνη αυτής της οικογένειας είναι η survivin, το μικρότερο μέλος αυτής της οικογένειας. Κωδικοποιείται από το γονίδιο BIRC5 που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 17 της ζώνης της πρωτεΐνης 17q25.3.c-myc βρέθηκε ότι είναι πολύ αυξημένη στη διαδικασία αναγέννησης του ήπατος [24-26]. Το TNF- θα μπορούσε να λειτουργήσει με δύο αντίθετους μηχανισμούς. Θα μπορούσε να λειτουργήσει ως εκκινητής του κυτταρικού θανάτου. Εναλλακτικά, θα μπορούσε να ενισχύσει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό. Κατά συνέπεια, παίζει σημαντικό ρόλο στην παθοφυσιολογία της ιογενούς ηπατίτιδας και των αλκοολικών και μη αλκοολικών ηπατικών παθήσεων [27,28].

Η παρούσα μελέτη διερεύνησε την ισχύ της χιτοζάνης στην ενίσχυση της αναγέννησης των ιστών έναντι της ηπατικής τοξικότητας που προκαλείται από το ΤΑΑ σε αρουραίους. Μελετήθηκε η επίδραση της χιτοζάνης στις ηπατικές και νεφρικές λειτουργίες. Επιπλέον, έγιναν οι μετρήσεις της προφλεγμονώδους κυτοκίνης TNF- στο πλάσμα και η ποσοτική ανάλυση για τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων του survivin, των γονιδίων c-Myc και του TNF- γονιδίου ηπατικού ιστού. Επιπλέον, εξετάστηκε το ιστολογικό χαρακτηριστικό του ήπατος.

Cistancheμπορεί να προσαρμόσει την υπερδομή των ηπατικών κυττάρων, να προωθήσει τη σύνθεση πρωτεϊνών και να προστατεύσει το ήπαρ.Ολικοί γλυκοσίδες φαινυλαιθανόληςμπορεί να αυξήσει την ποσότητα του ηπατικού γλυκογόνου,εχινακοσίδημπορεί να βελτιώσει τη δραστηριότητα του χλοοτάπητα και η βερμπασκοσίδη μπορεί να καθαρίσει τις ελεύθερες ρίζες και να μειώσει την απόπτωση των βλαστοκυττάρων. Το Cistanche μπορεί επίσης να ρυθμίσει το κυκλοφορικό σύστημα και να έχει τα ακόλουθα αποτελέσματα: προστασία του ισχαιμικού μυοκαρδίου. να μειώσει τα λιπίδια του αίματος, να αντισταθεί στην αθηροσκλήρωση και να αντισταθεί στη θρόμβωση. μείωση της περιφερικής αγγειακής αντίστασης, διαστολή των περιφερειακών αιμοφόρων αγγείων και μείωση της αρτηριακής πίεσης. προστατεύουν το συκώτι και αντιστέκονται στο λιπώδες ήπαρ.

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1.Χημικά.

Το ΤΑΑ αγοράστηκε από την Aldrich Chem Co., Αγγλία, ως καθαροί κρύσταλλοι. διαλύθηκε σε φυσιολογικό ορό και παρασκευάστηκε πρόσφατα πριν από κάθε ένεση.

Η χιτοζάνη (CS) ελήφθη από τη Sigma-Aldrich (μοριακό βάρος=100 KDa). Η χιτοζάνη, ένας σημαντικός πολυσακχαρίτης θαλάσσιας προέλευσης, παρασκευάζεται από τα κελύφη των καρκινοειδών και χρησιμοποιείται ως νέα πηγή διαιτητικών ινών στην ανάπτυξη φαρμάκων λόγω της εγγενούς ασφάλειάς του όταν λαμβάνεται από το στόμα [29].

2.2.Πειραματικός σχεδιασμός.

Πενήντα ενήλικοι αρσενικοί αλμπίνο αρουραίοι Wistar βάρους περίπου 120-150 g ελήφθησαν από την Animal House Colony του Εθνικού Κέντρου Ερευνών, Κάιρο, Αίγυπτος. Τα ζώα κρατήθηκαν σε κλουβιά από ανοξείδωτο χάλυβα υπό τυπικές εργαστηριακές συνθήκες με καλό αερισμό και 12-ωρο κύκλο φωτός-σκότους, με σχετική υγρασία 60 ± 5 τοις εκατό , με ελεύθερη πρόσβαση σε τυπική εμπορική τροφή εργαστηρίου και νερό βρύσης.

Πριν από την έναρξη του πειραματικού πρωτοκόλλου, οι αρουραίοι προσαρμόστηκαν σε πειραματικές συνθήκες για 2 εβδομάδες. Η ανθρώπινη φροντίδα εφαρμόστηκε σύμφωνα με τα κριτήρια του τυπικού ιδρύματος για τη φροντίδα και τη χρήση πειραματόζωων σύμφωνα με τη μέθοδο που επιβεβαιώθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Εθνικού Κέντρου Ερευνών (FWA 00014747), η οποία παρακολουθεί τις συστάσεις του Οδηγού Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας for Care and Use of Animals in Laboratory (δημοσίευση αρ.85-23, αναθεωρημένη το 1985).

Τα ζώα χωρίστηκαν σε πέντε ομάδες μετά την περίοδο εγκλιματισμού (10 αρουραίοι η καθεμία) ως εξής:

Ομάδα (1): φυσιολογικά υγιή ζώα χρησίμευσαν ως ομάδα ελέγχου.

Ομάδα (2): (ΤΑΑ) ομάδα στην οποία οι αρουραίοι ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με ΤΑΑ (διαλυμένο σε 0,9 τοις εκατό φυσιολογικό ορό) σε μία δόση (300 mg/kg σωματικού βάρους) σύμφωνα με τους Mustafa et al. [30] για πρόκληση ηπατικής τοξικότητας.

Ομάδα (3): ομάδα χιτοζάνης στην οποία τα ζώα τρέφονταν με μικτή βασική δίαιτα χιτοζάνης σε αναλογία 5 τοις εκατό (50 g συν 950 g βασική δίαιτα) σύμφωνα με τους AboZaid et al. [9] για 14 ημέρες.

Ομάδα (4): χιτοζάνη και μετά ομάδα ΤΑΑ στην οποία τα ζώα έλαβαν μια δίαιτα που περιείχε 5 τοις εκατό χιτοζάνη 9] για 14 ημέρες και στη συνέχεια εγχύθηκε ενδοπεριτοναϊκά με μία μόνο δόση ΤΑΑ (300 mg/kg σωματικού βάρους) όπως αναφέρθηκε παραπάνω.

Ομάδα (5): ΤΑΑ και μετά ομάδα χιτοζάνης στην οποία τα ζώα ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με εφάπαξ δόση ΤΑΑ (300 mg/kgb.w) όπως αναφέρθηκε παραπάνω, και στη συνέχεια τράφηκαν με δίαιτα που περιείχε 5 τοις εκατό χιτοζάνη για 14 ημέρες.

Το σωματικό βάρος κάθε ζώου καταγραφόταν κάθε εβδομάδα και στο τέλος του πειράματος για την παρακολούθηση της αλλαγής του σωματικού βάρους. Στο τέλος της πειραματικής περιόδου, τα ζώα νήστευαν για 12 ώρες. Στη συνέχεια αναισθητοποιήθηκαν μέσω εισπνοής διαιθυλαιθέρα. δείγματα αίματος αφαιρέθηκαν από το οπισθοτροχιακό φλεβικό πλέγμα σε φυγοκεντρικούς σωλήνες χρησιμοποιώντας ηπαρινισμένα αποστειρωμένα γυάλινα τριχοειδή.

Για τον διαχωρισμό του πλάσματος, ένα μέρος όλων των δειγμάτων αίματος συγκεντρώθηκε σε EDTA, το άλλο μέρος συναρμολογήθηκε σε ένα σωληνάριο που δεν περιέχει αντιπηκτικά προκειμένου να διαχωριστεί ο ορός. Αμφότερα τα δείγματα ορού και πλάσματος διαχωρίστηκαν με χρήση ψυχρής φυγοκέντρησης στις 3000 rpm για 15 λεπτά στους 4 βαθμούς. Δείγματα πλάσματος και ορού διατηρήθηκαν σε -20 βαθμό για βιοχημική ανάλυση.

Μόλις συλλεχθεί το αίμα, τα ζώα θυσιάστηκαν με αυχενικό αποκεφαλισμό

Το συκώτι κάθε αρουραίου αφαιρέθηκε και πλύθηκε επιμελώς με χρήση ισοτονικού φυσιολογικού ορού, ξηράνθηκε και χωρίστηκε σε δύο τμήματα. το πρώτο τμήμα καταψύχθηκε άμεσα σε υγρό άζωτο και διατηρήθηκε σε -80 βαθμό πριν από την απομόνωση RNA για ανάλυση γονιδιακής έκφρασης. Αντίθετα, το δεύτερο μέρος στερεώθηκε σε επίσημο αλατούχο διάλυμα (10 τοις εκατό ) για να χρησιμοποιηθεί στην ιστοπαθολογική εξέταση.

2.3.Βιοχημική ανάλυση.

Δραστηριότητες ασπαρτικής αμινοτρανσφεράσης (ASAT), αμινοτρανσφεράσης αλανίνης (ALAT), αλκαλικής φωσφατάσης (ALP) και γ-γλουταμυλοτρανσφεράσης (GGT), καθώς και λευκωματίνη

Τα επίπεδα ουρίας και κρεατινίνης, υπολογίστηκαν φασματοφωτομετρικά χρησιμοποιώντας κιτ αντιδραστηρίων που αγοράστηκαν από την bio-diagnostic Co., Αίγυπτος. Η συγκέντρωση του παράγοντα νέκρωσης όγκου πλάσματος-άλφα(TNF-a) υπολογίστηκε μέσω τεχνικής ELISA χρησιμοποιώντας ένα κιτ TNF-ELISA αρουραίου που αγοράστηκε από την Glory Science Co., Ltd., Η.Π.Α.

2.4. Ανάλυση γονιδιακής έκφρασης.

Χρησιμοποιώντας μια ποσοτική ανάλυση (Real-Time PCR), προσδιορίστηκε η έκφραση των γονιδίων survivin, c-Myc και TNF- σε δείγματα ηπατικού ιστού.

2.4.1. Απομόνωση RNA, καθαρισμός και ποσοτική RT-PCR σε πραγματικό χρόνο.

Το RNA απομονώθηκε από ένα δείγμα ιστού ήπατος 100 mg με ρυθμιστικό διάλυμα Qiazol (Qiagen, ΗΠΑ). Το RNA στη συνέχεια καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ RNAeasy Mini (Qiagen, ΗΠΑ). Το RNA μεταγράφηκε αντίστροφα και το cDNA που προέκυψε ενισχύθηκε στη συνέχεια. Οι αριθμοί αντιγράφων γονιδίων ακτίνης, survivin, c-myc και TNF-άλφα προσδιορίστηκαν ποσοτικά χρησιμοποιώντας το κιτ QuantiFast Sybergreen RT-PCR (Qiagen, ΗΠΑ). Όλα τα δείγματα εκτελέστηκαν εις τριπλούν και οι αριθμοί των αντιγράφων κανονικοποιήθηκαν σε 100,000 αντίγραφα του γονιδίου της βήτα-ακτίνης του housekeeping. Οι αλληλουχίες εκκινητών παρατίθενται στον Πίνακα 1. Η RT και οι επακόλουθες συνθήκες κύκλου PCR ήταν ως εξής, 50 βαθμοί για 10 λεπτά, 95 μοίρες για 5 λεπτά, 95 μοίρες για 15 δευτερόλεπτα, μετά 60 μοίρες για 30 δευτερόλεπτα, ο αριθμός των κύκλων ήταν 40 κύκλοι . Ο θερμικός κύκλος MiniOpticonTM Bio-Rad σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιήθηκε για την κβαντοποίηση της γονιδιακής έκφρασης.

2.5. Ιστοπαθολογική εξέταση.

Μετά τη στερέωση των ηπατικών ιστών σε 10 τοις εκατό επίσημο αλατούχο διάλυμα για είκοσι τέσσερις ώρες, τα δείγματα ιστών πλύθηκαν σε τρέχον νερό βρύσης. στη συνέχεια υποβλήθηκε σε αφυδάτωση χρησιμοποιώντας αιθύλιο (σειριακές αραιώσεις προς τα πάνω σε απόλυτο αιθύλιο). Τα δείγματα καθαρίστηκαν σε ξυλόλιο και ενσωματώθηκαν σε παραφίνη στους 56 βαθμούς σε φούρνο θερμού αέρα για 24 ώρες. Τα μπλοκ ιστού κεριού παρασκευάστηκαν για τομή σε πάχος 4 μικρών με μικροτόμο λάσπης. Οι τομές αποπαραφινώθηκαν, χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη και τελικά διερευνήθηκαν μέσω ηλεκτρικού μικροσκοπίου φωτός [31].

2.6. Στατιστική ανάλυση.

Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας την έκδοση 13 του στατιστικού πακέτου που βασίζεται σε υπολογιστή για τις κοινωνικές επιστήμες. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέσοι όροι ± SD τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Η στατιστική σημασία της διαφοράς προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) ακολουθούμενη από LSD post hoc συγκρίσεις δοκιμής στο p Μικρότερο ή ίσο με 0.05, το οποίο ορίστηκε ως στατιστικά σημαντικό.

3. Αποτελέσματα και Συζητήσεις

3.1.Αποτελέσματα.

Τα δεδομένα που παρουσιάζονται στο Σχήμα 1 έδειξαν ότι το κέρδος σωματικού βάρους της ομάδας των μεθυσμένων ζώων με ΤΑΑ ήταν σημαντικά μειωμένο (-308,5 τοις εκατό ), ενώ αυτό της ομάδας μόνο με χιτοζάνη έδειξε σημαντική αλλαγή (50 τοις εκατό) όταν και οι δύο ομάδες ήταν σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Είναι ενδιαφέρον ότι η ομάδα ζώων χιτοζάνης και έπειτα TAA παρουσίασε σημαντική αύξηση (289,7 τοις εκατό) στην αύξηση του σωματικού βάρους. Ομοίως, η ομάδα ζώων με ΤΑΑ και στη συνέχεια χιτοζάνη έδειξε σημαντική αύξηση (239,56 τοις εκατό) στην αύξηση του σωματικού βάρους όταν και οι δύο ομάδες συγκρίθηκαν με την ομάδα των ζώων που είχαν μεθυσθεί με ΤΑΑ.

Όσον αφορά τις δοκιμές ηπατικής λειτουργίας, η σίτιση φυσιολογικών επίμυων με βασική δίαιτα 5 τοις εκατό χιτοζάνης για 14 ημέρες, ούτε διαταραγμένες δοκιμασίες ηπατικής ή νεφρικής λειτουργίας αντικατοπτρίζουν την ασφαλή επίδρασή τους σε αυτή τη συγκέντρωση στη δίαιτα. Αντίθετα, η επαγόμενη από ΤΑΑ ηπατική τοξικότητα σε αρουραίους αύξησε σημαντικά (94,47 τοις εκατό) τη δραστηριότητα της ασπαρτικής αμινοτρανσφεράσης ορού (ASAT) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Ωστόσο, καταγράφηκε σημαντική μείωση (-32 τοις εκατό και-15,4 τοις εκατό ) στη δραστηριότητα ASAT ορού και στα δύο σχήματα τροφοδοσίας με χιτοζάνη (ομάδες χιτοζάνης-ΤΑΑ και ΤΑΑ-χιτοζάνης, αντίστοιχα) σε σύγκριση με Ομάδα μέθης με ΤΑΑ. Σημαντική αύξηση (91,89 τοις εκατό) στη δραστηριότητα της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALAT) ορού καταγράφηκε στην ομάδα ΤΑΑ σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Σε ένα πολλά υποσχόμενο αποτέλεσμα, οι ομάδες χιτοζάνης, κατόπιν ΤΑΑ και ΤΑΑ και μετά χιτοζάνης οδήγησαν σε σημαντική μείωση (-40,8 τοις εκατό και 32,3 τοις εκατό, αντίστοιχα) στη δραστηριότητα ορού (ALAT) σε σύγκριση με την ομάδα ΤΑΑ. Ομοίως, μια σημαντική αύξηση (232,9 τοις εκατό) στη δραστηριότητα της αλκαλικής φωσφατάσης (ALP) ορού ανιχνεύθηκε στην ομάδα ζώων που είχαν μεθυσθεί με ΤΑΑ σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Ευνοϊκά, η σίτιση αρουραίων με μικτή δίαιτα χιτοζάνης για 14 ημέρες πριν από τη δηλητηρίαση με ΤΑΑ είχε ως αποτέλεσμα σημαντική μείωση (-54.06 τοις εκατό) της δραστικότητας ALP ορού. Επίσης, μια σημαντική μείωση (-50,6 τοις εκατό) στη δραστηριότητα ALP ορού καταγράφηκε στην ομάδα των ζώων που τάισαν μικτή δίαιτα χιτοζάνης μετά τη δηλητηρίαση με ΤΑΑ όταν και οι δύο ομάδες ζώων συγκρίθηκαν με την ομάδα που έλαβε μόνο ΤΑΑ.

Όσον αφορά τη δραστηριότητα της γ-γλουταμυλοτρανσφεράσης ορού (GGT), η επαγόμενη από ΤΑΑ τοξικότητα στο ήπαρ αύξησε σημαντικά (223,5 τοις εκατό ) τη δραστηριότητα της GGT ορού, ενώ η ομάδα ζώων που έλαβε μόνο αγωγή με χιτοζάνη δεν επιδείνωσε τη δραστηριότητά της όταν και οι δύο ομάδες συγκρίθηκαν με αυτήν της ομάδας ελέγχου. Είναι ενδιαφέρον ότι η διατροφή των ζώων με μικτή διατροφή χιτοζάνης πριν

Η δηλητηρίαση με ΤΑΑ έδειξε σημαντική μείωση (-50.28 τοις εκατό ) στη δραστηριότητα GGT ορού. Ομοίως, μια σημαντική μείωση (-41.0 τοις εκατό o) στη δραστηριότητα GGT παρατηρήθηκε στην ομάδα των ζώων που μέθυσαν με ΤΑΑ πριν τραφούν με μικτή δίαιτα χιτοζάνης όταν και τα δύο συγκρίθηκαν με το ΤΑΑ- μεθυσμένη ομάδα. Το επίπεδο λευκωματίνης ορού μειώθηκε σημαντικά (-36,58 τοις εκατό ) μετά την ένεση ΤΑΑ (ομάδα ΤΑΑ), ενώ η ομάδα χιτοζάνης αποκάλυψε ασήμαντη αλλαγή (2,4 τοις εκατό ο) στο επίπεδο λευκωματίνης ορού όταν και οι δύο ομάδες συγκρίθηκαν με την ομάδα ελέγχου . Ωστόσο, η σίτιση των ζώων με χιτοζάνη σε διαφορετικά σχήματα, είτε πριν είτε μετά τη δηλητηρίαση με ΤΑΑ, αποκάλυψε σημαντική αύξηση (50 τοις εκατό και 38,4 τοις εκατό, αντίστοιχα) στα επίπεδα αλβουμίνης ορού όταν και τα δύο συγκρίθηκαν με την ομάδα ΤΑΑ (Πίνακας 2).

Όσον αφορά τους όρχεις νεφρικής λειτουργίας (Πίνακας 2), μια σημαντική αύξηση (82,67 τοις εκατό και 232,77 τοις εκατό ) παρατηρήθηκε στα επίπεδα τόσο της ουρίας όσο και της κρεατινίνης στον ορό, αντίστοιχα, στην ομάδα που έλαβε το ΤΑΑ. Εν τω μεταξύ, η ομάδα που έλαβε μόνο θεραπεία με χιτοζάνη εμφάνισε ασήμαντη αλλαγή (19,3 τοις εκατό και -15 τοις εκατό, αντίστοιχα) όταν και οι δύο ομάδες συγκρίθηκαν με την ομάδα ελέγχου. Με πολλά υποσχόμενο τρόπο, η ομάδα ζώων χιτοζάνης και μετά TAA παρουσίασε σημαντική μείωση (-36,04 τοις εκατό και -45,2 τοις εκατό ) στα επίπεδα της ουρίας και της κρεατινίνης στον ορό, αντίστοιχα, σε σύγκριση με την ομάδα TAA . Επιπλέον, η σίτιση των αρουραίων με μικτή δίαιτα χιτοζάνης για 14 ημέρες μετά τη δηλητηρίαση με ΤΑΑ κατέδειξε σημαντική μείωση (-30.6% και-35.10%) στα επίπεδα της ουρίας και της κρεατινίνης στον ορό, αντίστοιχα όταν και οι δύο ομάδες συγκρίθηκαν με την ομάδα ζώων που έλαβαν θεραπεία με ΤΑΑ.

Όπως απεικονίζεται στο σχήμα (2), μια σημαντική αύξηση (98,26 τοις εκατό) καταγράφηκε στο επίπεδο του παράγοντα νέκρωσης όγκου άλφα(TNF-) της ομάδας των ζώων που είχαν εθιστεί με ΤΑΑ. ενώ η ομάδα χιτοζάνης έδειξε ασήμαντη αλλαγή (-2.6 τοις εκατό) στο επίπεδο του TNF στο πλάσμα όταν συγκρίθηκαν και οι δύο ομάδες ζώων με την ομάδα ελέγχου. Με έναν αγαπημένο τρόπο, η σίτιση των ζώων με μικτή δίαιτα χιτοζάνης σε διαφορετικά σχήματα, είτε πριν είτε μετά τη δηλητηρίαση με ΤΑΑ, αποκάλυψε σημαντική μείωση (-36,6 τοις εκατό και -31,57 τοις εκατό, αντίστοιχα) στο επίπεδο του TNF- στο πλάσμα όταν και τα δύο συγκρίθηκαν με την ομάδα ΤΑΑ.

3.1.1. Γονιδιακή έκφραση.

Όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 3, η ομάδα των μεθυσμένων με ΤΑΑ ζώων εμφάνισε σημαντική μείωση (-81 τοις εκατό ) στην έκφραση του γονιδίου του ήπατος survivin, ενώ η ομάδα μόνο με χιτοζάνη πραγματοποίησε ασήμαντες αλλαγές στην έκφραση γονιδίου του ήπατος survivin όταν συγκρίθηκαν και οι δύο ομάδες με την ομάδα ελέγχου. Δυστυχώς, και οι δύο ομάδες ζώων που έλαβαν χιτοζάνη, μετά ΤΑΑ και ΤΑΑ, στη συνέχεια, δεν εμφάνισαν αξιοσημείωτες αλλαγές (1,27 τοις εκατό και -3, 2, τοις εκατό, αντίστοιχα) στην έκφραση αυτού του γονιδίου σε σύγκριση με τα μεθυσμένα με ΤΑΑ ομάδα ζώων.

Όσον αφορά την έκφραση του γονιδίου c-myc, η ομάδα μόνο με χιτοζάνη έδειξε σημαντική αύξηση (400 τοις εκατό ). Ωστόσο, η ομάδα των ζώων που είχαν μεθυσθεί με ΤΑΑ δεν επηρέασε (0,0 τοις εκατό ο) την έκφραση αυτού του γονιδίου όταν και οι δύο ομάδες συγκρίθηκαν με την ομάδα ελέγχου. Επιπλέον, και οι δύο ομάδες χιτοζάνης, μετά ΤΑΑ και ΤΑΑ και στη συνέχεια χιτοζάνης παρουσίασαν σημαντική αύξηση (300 τοις εκατό & 700 τοις εκατό, αντίστοιχα) στα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου c-myc σε σύγκριση με την ομάδα ΤΑΑ (Εικόνα 4).

Τα δεδομένα αποκάλυψαν ότι η ομάδα των ζώων που έλαβε θεραπεία με χιτοζάνη κατέγραψε μόνο μια αξιοσημείωτη αύξηση (73,33 τοις εκατό) στο επίπεδο έκφρασης του ηπατικού γονιδίου TNF-. Επιπλέον, η ομάδα των μεθυσμένων με ΤΑΑ ζώων έδειξε σημαντική αύξηση (368,3 τοις εκατό) όταν συγκρίθηκαν και οι δύο ομάδες με την ομάδα ελέγχου. Αυτή η αύξηση μειώθηκε σημαντικά (-66,5 τοις εκατό &-57,3 τοις εκατό, αντίστοιχα) με τη θεραπεία με χιτοζάνη, είτε πριν είτε μετά τη δηλητηρίαση με ΤΑΑ, σε σύγκριση με την ομάδα ζώων ΤΑΑ (Εικόνα 5).

3.1.2.Ιστολογικό εύρημα.

Η φυσιολογική ομάδα ελέγχου έδειξε φυσιολογική αρχιτεκτονική ηπατικού ιστού με τη φυσιολογική κεντρική φλέβα, διατηρημένη πυλαία οδό με ελάχιστηφλεγμονώδηςκύτταρα και κυρίως φυσιολογικά ηπατοκύτταρα (Εικόνα 6). Εν τω μεταξύ, οι έρευνες της ομάδας ΤΑΑ αποκάλυψαν ηπατικές αλλοιώσεις που αντιπροσωπεύονται από κενοτοπιασμένα κύτταρα ηπατοκυττάρων, διευρυμένη συμφόρηση της κεντρικής φλέβας, συμφορημένη πυλαία οδό και μέτρια διάσπαρτα φλεγμονώδη κύτταρα (Εικόνα 7). Οι ομάδες φαρμάκων χιτοζάνης έδειξαν φυσιολογική αρχιτεκτονική ηπατικού ιστού με ελαφρώς διευρυμένη, κεντρική, φυσιολογική πυλαία οδό με ελάχιστα φλεγμονώδη κύτταρα και φυσιολογικά ηπατοκύτταρα (Εικόνα 8). Η ομάδα χιτοζάνης στη συνέχεια ΤΑΑ αποκάλυψε παραμορφωμένη διεσταλμένη κεντρική φλέβα, διάσπαρτα φλεγμονώδη κύτταρα και διεσταλμένους συμφορημένους ημιτονοειδείς χώρους, έντονο εκφυλισμό ηπατοκυττάρων με λιπαρές αλλαγές και αυξημένο πάχος ηπατοκυττάρων (πάχος άνω των 2 κυττάρων) (Εικόνα 9). Επιπλέον, η ομάδα ΤΑΑ στη συνέχεια χιτοζάνης έδειξε συμφορημένα διεσταλμένα φλεγμονώδη κύτταρα διάσπαρτα στην κεντρική φλέβα, επισήμανση διευρυμένης συμφορημένης πυλαίας οδού και διάσπαρτα εκφυλισμένα ηπατοκύτταρα (Εικόνα 10).

3.2.Συζήτηση.

Το ήπαρ αντιπροσωπεύει τον μεγαλύτερο αδένα του σώματος, όπου ελέγχει πολλές βιολογικές διεργασίες που απαιτούν ενέργεια, όπως ο μεταβολισμός, η βιοσύνθεση, η απέκκριση, η έκκριση και η αποτοξίνωση. Αυτές οι μεγάλες ενεργειακές απαιτήσεις κάνουν το συκώτι έναν ιστό εξαιρετικά εξαρτώμενο από το οξυγόνο. Μετά από μια μαζική κυτταρική απώλεια, ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων βοηθά στην αναγέννηση του ήπατος. Ωστόσο, η αναγέννηση μπορεί να αποτύχει εάν η απώλεια υπερβαίνει ορισμένα όρια, με αποτέλεσμα ηπατική ανεπάρκεια και τελικά θάνατο 32].

Διεξήχθησαν πολλές μελέτες για να δοκιμαστούν οι επιδράσεις των αντιοξειδωτικών στη βελτίωση των ηπατικών ασθενειών και στην υποστήριξη του φυσιολογικού ήπατος. Τα αντιοξειδωτικά έχουν αναδειχθεί ως μια θεραπευτική επιλογή για τη θεραπεία και την πρόληψη ασθενειών που σχετίζονται με τον τρόπο ζωής. Ωστόσο, χρειάζεται περαιτέρω μελέτες για να αποσαφηνιστεί ο τρόπος δράσης του 33,34]. Η χιτοζάνη (CS) είναι ένας πολύτιμος θαλάσσιος πολυσακχαρίτης που λαμβάνεται από τα κελύφη ορισμένων καρκινοειδών. Έχει πολλά καθιερωμένα βιολογικά οφέλη, όπως ρύθμιση του ανοσοποιητικού, αντικαρκινική, ηπατική προστασία, αντιδιαβητική, αντιβακτηριακή, αντιοξειδωτική, αντι-παχυσαρκία, επούλωση πληγών και υπολιπιδαιμική δράση [5].

Η παρούσα μελέτη διερεύνησε την προστατευτική και θεραπευτική αποτελεσματικότητα της χιτοζάνης στην ενίσχυση της αναγέννησης των ιστών στην ηπατική τοξικότητα που προκαλείται από ΤΑΑ σε αρουραίους. Το ΤΑΑ χρησιμοποιείται παραδοσιακά για την πρόκληση ηπατικής βλάβης σε πειραματόζωα [15,35]. Η τοξική επίδραση του ΤΑΑ οφείλεται στους μεταβολίτες του όπως το ακεταμίδιο, το θειικό και τα συστατικά που προέρχονται από σουλφοξείδιο. Αυτός ο μεταβολίτης προκαλεί δομικές παραμορφώσεις των δομικών πρωτεϊνών και ενζύμων, με αποτέλεσμα την αδρανοποίησή τους. Με το ρόλο του, ο μεταβολίτης ΤΑΑ μεταβάλλει τη διαπερατότητα των κυττάρων, αυξάνει τον πυρηνικό όγκο, συγκεντρώνει το ενδοκυτταρικό ασβέστιο και αναστέλλει τη μιτοχονδριακή δραστηριότητα, με αποτέλεσμα τον κυτταρικό θάνατο. Λόγω αυτού του μεταβολίτη, τα λευκοτριένια, ως ένας ισχυρός φλεγμονώδης μεσολαβητής που εκκρίνεται από τα ηπατικά κύτταρα, είναι μειωμένα [36].

Σε αυτή τη μελέτη, η θεραπεία με χιτοζάνη επηρέασε θετικά τα ηπατικά ένζυμα. Αντίθετα και ως αναμενόμενες επιδράσεις της δηλητηρίασης με ΤΑΑ, οι δραστηριότητες των ASAT, ALAT, ALP και GGT ορού έδειξαν σημαντική αύξηση στην ομάδα που έλαβε θεραπεία με ΤΑΑ σε σύγκριση με τον κανονικό έλεγχο. Αυτά τα αποτελέσματα συμφωνούν με τους Baskaran et al. [37], Jain and Singhai [38,39]Osama et al. [40], ο οποίος συνέδεσε την αύξηση στις δραστηριότητες των τρανσαμινασών του ορού με το οξειδωτικό στρες και την υπεροξείδωση των λιπιδίων που είναι αποτέλεσμα της τοξικής επίδρασης του ΤΑΑ όπου τα λιπίδια, οι πρωτεΐνες και το DNA καταστρέφονται από τη δράση των ελεύθερων ριζών με αποτέλεσμα ηπατοκυτταρική προσβολή και νέκρωση. Κανονικά, τα νεκρωτικά κύτταρα εκκενώνουν το περιεχόμενό τους στην κυκλοφορία του αίματος με αποτέλεσμα την αύξηση της δραστηριότητας των τρανσαμινασών. Από την άλλη πλευρά, οι προστατευτικές και θεραπευτικές ομάδες που έλαβαν χιτοζάνη έδειξαν μια σαφή μείωση στις δραστηριότητες ALAT, ASAT, ALP και GGT που θα μπορούσαν να αποδοθούν σε αντιοξειδωτικά, ανοσοτροποποίηση και/ή επούλωση τραυμάτων και ηπατική προστασία της χιτοζάνης [9]. Ομοίως, το επίπεδο λευκωματίνης ορού μειώθηκε σε αρουραίους που είχαν τοξίξει με ΤΑΑ ως αποτέλεσμα ηπατικής δυσλειτουργίας της πρωτεϊνοσύνθεσης λόγω του εξασθενημένου ενδοπλασματικού δικτύου και των μιτοχονδρίων των ηπατοκυττάρων. Ωστόσο, αυτό το επίπεδο ρυθμίστηκε προς τα πάνω και κανονικοποιήθηκε με τη θεραπεία με χιτοζάνη είτε σε προστατευτικές είτε σε θεραπευτικές ομάδες.

Η δηλητηρίαση από ΤΑΑ οδήγησε σε ανεπάρκεια της νεφρικής λειτουργίας καθώς αυξήθηκαν τα επίπεδα ουρίας και κρεατινίνης στον ορό. αυτή η επιδείνωση έχει ταλαιπωρηθεί από τους Begum et al. 41], ο οποίος ανέφερε σωληναριακή βλάβη στην οξεία σωληναριακή νέκρωση είναι κυρίως υπεύθυνος για τη μειωμένη σπειραματική διήθηση. Προτάθηκε επίσης ότι οι εμπλεκόμενες σωληναριακές ανωμαλίες είναι απόφραξη των σωληναρίων, προκαλώντας μια προς τα πίσω ροή του σπειραματικού διηθήματος. Έτσι, η νεφρική αλλοίωση σε αρουραίους που έλαβαν TAA μπορεί να οφείλεται στις επιβλαβείς επιδράσεις του ROS. Ωστόσο, αυτή η αύξηση αντιστράφηκε κατά τη θεραπεία με χιτοζάνη είτε ως προστατευτική είτε ως θεραπευτική θεραπεία. Αυτή η παρατήρηση είναι σύμφωνη με εκείνη του Mohamed [42], ο οποίος ανέφερε ότι η κατάποση χιτοζάνης μείωσε σημαντικά τα επίπεδα ουρίας και κρεατινίνης σε ασθενείς με νεφρική ανεπάρκεια και απέδωσε αυτή την επίδραση σε έναν ή δύο πιθανούς μηχανισμούς: ο πρώτος είναι η ενεργοποίηση της νεφρικής λειτουργίας για κάθαρση του μεταβολίτη του αζώτου με αποτέλεσμα τη μείωση της ουρίας και της κρεατινίνης, ενώ η δεύτερη πιθανότητα είναι η χιτοζάνη να συνδυάζεται με τον μεταβολίτη του αζώτου στην πεπτική οδό και στη συνέχεια να αποβάλλεται με αποτέλεσμα τη μείωση της ουρίας και της κρεατινίνης.

Στην τρέχουσα μελέτη, η οξεία τοξικότητα του ΤΑΑ μείωσε σημαντικά την έκφραση του γονιδίου survivin στον ηπατικό ιστό σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Ωστόσο, η σίτιση των ζώων με βασική δίαιτα αναμεμειγμένη με χιτοζάνη, ως έλεγχος φαρμάκου και ως προστατευτική θεραπεία πριν από την τοξικότητα ΤΑΑ, είχε ως αποτέλεσμα μια μη σημαντική αύξηση στα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου survivin. Το Survivin έχει μια καλά εδραιωμένη λειτουργία στη φάση του κυτταρικού κύκλου G2/M. κατά τη διάρκεια της κυτταρικής διαίρεσης, το survivin θέτει σε κίνδυνο μια υπομονάδα του χρωμοσωμικού συμπλέγματος επιβατών [43,44]. Το Survivin εκφράζεται σε φυσιολογικούς πολλαπλασιαζόμενους και αναγεννόμενους ιστούς και αναφέρθηκε ότι καταστέλλει την απόπτωση και βοηθά στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου [45]. Η έκφραση Survivin βρέθηκε να έχει θετική συσχέτιση με τον αριθμό των ηπατοκυττάρων στο αναγεννόμενο ήπαρ. Αυτό μπορεί να εξηγηθεί από το εύρημα ότι το survivin εμπλέκεται στον διαχωρισμό των αδελφών χρωματιδών κατά τη διάρκεια της μίτωσης 46]. Αυτά τα γεγονότα μπορεί να ερμηνεύσουν τη μείωση της έκφρασης του γονιδίου survivin εδώ μετά τη δηλητηρίαση με ΤΑΑ. Hagemann et al. [46] ανέφερε ότι όταν η έκφραση του survivin μειώνεται, διακόπτεται ο εντοπισμός των μελών του χρωμοσωμικού συμπλέγματος επιβατών και ως εκ τούτου, με μειωμένη δραστηριότητα Aurur B, οι διαδικασίες φωσφορυλίωσης και κυτταροκίνησης των κεντρομερών πρωτεϊνών-στόχων επηρεάζονται.

Σε προηγούμενες μελέτες σε τρωκτικά, η έκφραση του survivin αυξήθηκε σημαντικά μετά από μερική ηπατεκτομή και μετεγχειρητική. Επιπλέον, η έκφραση survivin βρέθηκε να είναι αυξημένη στο μόσχευμα στη μεταμόσχευση ανθρώπινου ήπατος. Τόσο στα τρωκτικά όσο και στους ανθρώπους, η υπερέκφραση survivin σχετίζεται με πολλαπλασιασμό και όχι με απόπτωση. Κατά συνέπεια, το survivin είναι σημαντικό στον πολλαπλασιασμό των ηπατοκυττάρων και στη μίτωση, όχι μόνο στην αναγέννηση αλλά και κατά τη διάρκεια της φυσιολογικής ανάπτυξης [46].

Η επαγόμενη από το ΤΑΑ οξεία τοξικότητα δεν επηρέασε σημαντικά το επίπεδο έκφρασης του γονιδίου c-myc στον ηπατικό ιστό. Πράγματι, η θεραπεία με χιτοζάνη ως έλεγχος φαρμάκου, προστατευτική ή θεραπευτική θεραπεία ρυθμίζει σημαντικά και δραματικά το επίπεδο έκφρασης του γονιδίου c-myc. Αναφέρθηκε ότι τα αναπτυξιακά και μιτογόνα σήματα σε φυσιολογικά, μη μετασχηματισμένα κύτταρα ρυθμίζουν την έκφραση του c-myc [47]. Οι κύριοι ρόλοι του c-myc είναι να ενισχύει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και να εμποδίζει τη διαφοροποίηση των κυττάρων. Η εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου βρέθηκε ότι ενισχύεται από το c-myc μέσω της ρύθμισης πολλών πρωτεϊνών που ελέγχουν τον κυτταρικό κύκλο, όπως οι κυκλίνες (D, E, A και B1) και οι εξαρτώμενες από κυκλίνη κινάσες (CDK1.2. 4,6). Παράγοντες μεταγραφής E2F. Από την άλλη πλευρά, το c-myc βρέθηκε ότι καταστέλλει τη δραστηριότητα των αναστολέων του κυτταρικού κύκλου, όπως τα p15, p21 και p27 με πολλούς τρόπους [48].

Η μείωση του βάρους και του πολλαπλασιαζόμενου πυρηνικού αντιγόνου των κυττάρων σχετίζεται με τη μείωση της έκφρασης της πρωτεΐνης c-myc κατά την αναγέννηση του ήπατος. Επιπλέον, η πρωτεΐνη ρ53 που ρυθμίζει τον κυτταρικό κύκλο και ο αριθμός των κυττάρων στη φάση G2 του κυτταρικού κύκλου μειώθηκαν σημαντικά. Κατά συνέπεια, το c-myc θεωρείται ισχυρός θετικός ρυθμιστής του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Επιπλέον, το αντιπληροφοριακό c-myc βρέθηκε ότι περιορίζει την αναγέννηση του ήπατος σε αρουραίους [24,26].

Ομοίως, στον ιστό των νεφρών, το c-mycgene βρέθηκε να ενεργοποιείται στα κύτταρα των νεφρικών σωληναρίων κατά την αναγέννηση και μετά από νεφρική βλάβη που προκαλείται από φολικό οξύ στο Vivo [49]. Βρέθηκε επίσης ότι το C-myc προάγει τη βιοσύνθεση πρωτεϊνών, όπου η πρωτεϊνοσύνθεση ήταν υψηλότερη τρεις φορές σε ινοβλάστες που υπερέκφραζαν το c-myc από ότι στις εγγενείς κυτταρικές σειρές τους. Το C-myc ασκεί αυτή τη δράση ρυθμίζοντας τη μεταγραφή και τη βιογένεση του ριβοσώματος. Επίσης, το c-myc λειτουργεί σε συντονισμό με τις πυρηνικές RNA πολυμεράσες (RNA pol I και III) για τη ρύθμιση της βιογένεσης και της μετάφρασης του ριβοσώματος.

Επιπλέον, η μεταγραφή του ριβοσωμικού RNA διεγέρθηκε από το c-myc, το οποίο ενεργοποιεί την πρωτεϊνοσύνθεση [50].

Στις παρούσες έρευνες, η οξεία τοξικότητα του ΤΑΑ οδήγησε σε σημαντική αύξηση των επιπέδων έκφρασης του γονιδίου TNF στον ηπατικό ιστό καθώς και σε αυξημένα επίπεδα πλάσματος, ενώ αυτή η αύξηση μειώθηκε σημαντικά κατά τη θεραπεία με χιτοζάνη τόσο ως προστατευτική όσο και ως θεραπευτική αγωγή σε σύγκριση με την ΤΑΑ- μεθυσμένη ομάδα. Αυτό το εύρημα είναι σύμφωνο με την προηγούμενη παρατήρηση των Park et al. [51], οι οποίοι ανέφεραν μια βελτιωτική επίδραση της χιτοζάνης στο επίπεδο του TNF. Οι Zhang et al. [52] ανέφερε ότι η διασυνδεδεμένη καρβοξυμεθυλχιτοζάνη αύξησε τις δραστηριότητες των ενζύμων φλεγμονωδών παραγόντων στην αρχή της θεραπείας. Ωστόσο, τα επαναφέρει στο κανονικό τους επίπεδο μετά από αυτό. Πρότειναν επιδράσεις επούλωσης τραυμάτων της διασυνδεδεμένης καρβοξυμεθυλοχιτοζάνης μέσω των ρυθμιστικών της επιδράσεων στη δραστηριότητα των ηπατικών ενζύμων των αρουραίων.

Ο TNF- παράγεται από νευρωνικά κύτταρα, ινοβλάστες, λεμφοειδή κύτταρα, μαστοκύτταρα, ενδοθηλιακά κύτταρα και μακροφάγα. Ο TNF- μεσολαβεί στα προφλεγμονώδη και προ-αποπτωτικά του αποτελέσματα μέσω της αλληλεπίδρασης με τους μεμβρανικούς υποδοχείς του (TNF-R1 και TNF-R2). Και οι δύο υποδοχείς διαμεσολαβούν δύο διαφορετικά μονοπάτια σηματοδότησης και η ενεργοποίηση του ενός συνοδεύεται από την αδρανοποίηση του άλλου [51].

Τα αποτελέσματά μας υποδηλώνουν θετικό ρόλο της χιτοζάνης στην αναγέννηση των ιστών που είναι σύμφωνα με τους Shilpa et al.[53], οι οποίοι βρήκαν ότι η θεραπεία αρουραίων με μερική ηπατεκτομή με νανοσωματίδια χιτοζάνης και γάμμα-αμινοβουτυρικό οξύ αύξησε την πρόσληψη τριτιωμένης θυμιδίνης σε σύγκριση με μερικώς ηπατεκτομημένες ομάδες χωρίς νανοσωματίδια θεραπευτική αγωγή. Το συνολικό αποτέλεσμα της θεραπείας με νανοσωματίδια χιτοζάνης σε συνδυασμό με γάμμα-αμινοβουτυρικό οξύ είναι η ενίσχυση της αναγέννησης των ηπατοκυττάρων και ο μειωμένος κυτταρικός θάνατος σε σύγκριση με αρουραίους με ηπατεκτομή του ήπατος. Τα τρέχοντα αποτελέσματα είναι επίσης σύμφωνα με τους Chen et al. [54], ο οποίος ανέφερε ότι τα νανοσωματίδια χιτοζάνης ενίσχυσαν την αναγέννηση του ήπατος σε αρουραίους που έπασχαν από οξεία ηπατική ανεπάρκεια. Η ικανότητα δέσμευσης μήτρας της χιτοζάνης επιτρέπει την ανάπτυξη και την ενεργοποίηση των μακροφάγων που είναι απαραίτητα για την αναγέννηση των ιστών. Μια πληγή που έγινε σε ένα σκύλο που έλαβε θεραπεία με χιτοζάνη έδειξε πλήρη θεραπεία μετά από τρεις εβδομάδες. Ωστόσο, στην ομάδα ελέγχου που υποβλήθηκε σε θεραπεία με φυσιολογικό ορό, μόνο η διαδικασία σκλήρυνσης διαρκεί τέσσερις εβδομάδες. Στην ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με χιτοζάνη, σχηματίστηκε ένα στρώμα κερατίνης ως ένδειξη αναγέννησης του συνδετικού ιστού. Επιπλέον, ένα δίκτυο ινών κολλαγόνου σχηματίστηκε για να προστατεύει τα νεοαγγεία του τραύματος [55].

Στην τρέχουσα μελέτη, το ιστολογικό εύρημα αποκάλυψε ένα επιδεινωμένο πρότυπο ηπατικού ιστού στην ομάδα ΤΑΑ. Ωστόσο, αυτό το μοτίβο βελτιώθηκε πολύ στην προστατευτική ομάδα χιτοζάνης και κατά κάποιο τρόπο στην θεραπευτική ομάδα χιτοζάνης.

4. Συμπεράσματα

Συμπεραίνεται ότι η χιτοζάνη μπορεί να ενισχύσει την αναγέννηση του ήπατος στην ηπατική τοξικότητα που προκαλείται από ΤΑΑ, είτε ως θεραπευτικό είτε ως πολλαπλασιαστικό. Επιπλέον, έδειξε αντιφλεγμονώδη δράση καθώς μείωσε το επίπεδο του TNF- , τόσο σε επίπεδα γονιδίων όσο και σε πρωτεϊνικά επίπεδα. Αντίθετα, η χιτοζάνη αύξησε τη γονιδιακή έκφραση του survivin και του c-myc, που είναι ενισχυτές του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Θα μπορούσαν να διεξαχθούν περαιτέρω μελέτες για να αποσαφηνιστεί ο ακριβής μηχανισμός με τον οποίο η χιτοζάνη επηρεάζει την έκφραση των γονιδίων c-myc, survivin και TNFC-. Κατά συνέπεια, η χιτοζάνη συνιστάται να χρησιμοποιείται σε ηπατικές παθήσεις όπου απαιτείται αναγέννηση ιστού.