Το Gao-Zi-Yao βελτιώνει τη λειτουργία μάθησης και μνήμης σε παλιούς αυθόρμητους υπερτασικούς αρουραίους Μέρος 2

πειραματόζωα

Αρσενικοί αυθόρμητοι υπερτασικοί αρουραίοι (SHR) δώδεκα μηνών και οκτώ εβδομάδων αγοράστηκαν από το Κέντρο Ζωικών Μοντέλων της Ναντζίνγκ.

Υπάρχει μια ισχυρή σχέση μεταξύ των 8-αρσενικών εβδομάδων και της μνήμης. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, ο εγκέφαλος του αρσενικού πλάσματος αναπτύσσεται γρήγορα και οι συνδέσεις μεταξύ των νευρώνων του αυξάνονται σταδιακά, κάτι που με τη σειρά του επηρεάζει την ανάπτυξη της μνήμης του.

Η έρευνα δείχνει ότι η μνήμη των αρσενικών πλασμάτων συνεχίζει να βελτιώνεται με την ηλικία. Αυτό όχι μόνο έχει σημαντικό αντίκτυπο στην επιβίωση και την αναπαραγωγή τους, αλλά τα βοηθά επίσης να προσαρμοστούν καλύτερα στο περιβάλλον και να αντιμετωπίσουν νέες προκλήσεις.

Ως εκ τούτου, θα πρέπει να ενθαρρύνουμε ενεργά τους νεαρούς άντρες να συμμετέχουν σε μια ποικιλία ευεργετικών δραστηριοτήτων, όπως η επίλυση παζλ, η εκμάθηση νέων δεξιοτήτων και η εξερεύνηση νέων περιοχών. Αυτές οι δραστηριότητες διεγείρουν τον εγκέφαλό τους, επιτρέποντάς τους να αναπτυχθούν πιο γρήγορα και να βελτιώσουν τις μνημονικές τους ικανότητες.

Ταυτόχρονα, θα πρέπει επίσης να παρέχουμε ένα κατάλληλο περιβάλλον και ατμόσφαιρα για τα νεαρά αρσενικά πλάσματα. Κάνοντάς τους να αισθάνονται ασφαλείς και κοντά μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη του εγκεφάλου τους και να βελτιώσει τη μνήμη τους.

Εν ολίγοις, θα πρέπει να κάνουμε ό,τι μπορούμε για να βοηθήσουμε τα νεαρά αρσενικά να βελτιώσουν τη μνήμη τους, ώστε να γίνουν πιο έξυπνα, με μεγαλύτερη αυτοπεποίθηση και ικανά πλάσματα. Αυτό δεν συμβάλλει μόνο στην προσωπική τους ανάπτυξη αλλά και στην ευημερία και την επιβίωση ολόκληρου του είδους. Μπορεί να φανεί ότι πρέπει να βελτιώσουμε τη μνήμη και το Cistanche deserticola μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη μνήμη, επειδή το Cistanche deserticola έχει αντιοξειδωτικά, αντιφλεγμονώδη και αντιγηραντικά αποτελέσματα, τα οποία μπορούν να βοηθήσουν στη μείωση των οξειδωτικών και φλεγμονωδών αντιδράσεων στον εγκέφαλο, προστατεύοντας έτσι τον υγεία του νευρικού συστήματος. Επιπλέον, το Cistanche deserticola μπορεί επίσης να προωθήσει την ανάπτυξη και την επισκευή των νευρικών κυττάρων, ενισχύοντας έτσι τη συνδεσιμότητα και τη λειτουργία των νευρωνικών δικτύων. Αυτά τα αποτελέσματα μπορούν να βοηθήσουν στη βελτίωση της μνήμης, της μάθησης και της ταχύτητας σκέψης και μπορεί επίσης να αποτρέψουν την ανάπτυξη γνωστικής δυσλειτουργίας και νευροεκφυλιστικών ασθενειών.

Κάντε κλικ στα συμπληρώματα γνώσης για να ενισχύσετε τη μνήμη

Σε αυτό το μοντέλο, η υπέρταση αρχίζει να αναπτύσσεται από την ηλικία των 4 μηνών με την εμφάνιση αλλαγών που σχετίζονται με την υπέρταση στο μικροαγγειακό σύστημα του εγκεφάλου έως την ηλικία των 6 μηνών [37].

Οι αρουραίοι στεγάστηκαν κάτω από τις βέλτιστες συνθήκες με τυπική υγιεινή, διατηρήθηκαν σε θερμοκρασία 25 βαθμών με κύκλο φωτός/σκότους 12/12 και τράφηκαν κατά βούληση με κανονική τροφή και νερό για αρουραίους.

Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν και εκτελέστηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές για τη φροντίδα και τη χρήση των ζώων που καθορίστηκαν από το SoochowUniversity, οι οποίες είναι σύμφωνες με την προηγούμενη έκθεσή μας[35].

Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας για τη Χρήση των Εργαστηριακών Ζώων (NIH, αριθμός δημοσίευσης 85–23, αναθεωρημένο 1996). Η παρούσα μελέτη αναφέρεται από τις οδηγίες ARRIVE.

Το SHR οκτώ εβδομάδων εφαρμόστηκε για έλεγχο γήρανσης (SHR-Young, n=10). Αρουραίοι δώδεκα μηνών υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ή χωρίς Gao-Zi-Yao για απεσταγμένο νερό (Παλιό SHR-C, n=10), χαμηλή δόση (Παλιό SHR-L, n=10), μεσαία δόση (Παλιό SHR-M, n=10), υψηλή δόση (Παλιό SHR-H, n=10) με γαστρική σίτιση.

Δοσολογίες χαμηλού, μεσαίου και υψηλού Gao-Zi-Yao ίσες με 1/2-, 1-, τριπλάσιες δόσεις για εφαρμογή σε κλινικό ασθενή που υπολογίζονται σύμφωνα με την επιφάνεια του σώματος. Το Gao-Zi-Yao διαλύθηκε σε 5 mL απεσταγμένου νερού πριν από την εφαρμογή και χορηγήθηκε μία φορά γαλακτοκομικά για 4 εβδομάδες.

Η αρτηριακή πίεση και ο καρδιακός ρυθμός παρακολουθούνταν κάθε εβδομάδα με τη μέθοδο tail-cuff και το σωματικό βάρος παρακολουθούνταν επίσης κάθε εβδομάδα σύμφωνα με την προηγούμενη παρατήρησή μας [35].

Μετά από 4 εβδομάδες, πραγματοποιήθηκε το πείραμα λαβύρινθου νερού Morris και οι αρουραίοι θυσιάστηκαν υπό αναισθησία με πεντοβαρβιτάλη νατρίου (50 mg/kg ενδοπεριτοναϊκώς), ιστός ιππόκαμπου συλλέχτηκε για περαιτέρω ανάλυση. Όλα τα πειραματικά πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από την επιτροπή αδειών δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Soochow.

Πείραμα υδάτινου λαβύρινθου Morris

Το πείραμα με υδάτινο λαβύρινθο Morris (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, Κίνα) πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως με ορισμένες τροποποιήσεις [38]. Η δοκιμή είχε προγραμματιστεί για 6 ημέρες, οι ημέρες 1 έως 5 ήταν για την περίοδο εκπαίδευσης και η ημέρα 6 ήταν για τα αποτελέσματα των δοκιμών.

Οι αρουραίοι έλαβαν εκπαίδευση για 2 λεπτά γαλακτοκομικά, καταγράφοντας τον χρόνο επιβίβασης στην πλατφόρμα ως χρόνο καθυστέρησης. Την 6η ημέρα η πλατφόρμα αφαιρέθηκε. Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν στο πιο απομακρυσμένο τεταρτημόριο και η τροχιά κολύμβησης καταγράφηκε για 2 λεπτά.

Οι παράμετροι για τη λειτουργία μάθησης και μνήμης υπολογίστηκαν από το λογισμικό.

Μέτρηση επιπέδων ΝΟ και φλεγμονωδών παραγόντων ορού με ELISA

Επίπεδα ορού NO (Αριθμός καταλόγου: S0023), IL-1 (αριθμός καταλόγου: A301BH80153), IL-2 (αριθμός καταλόγου:A31038348), IL-6 (Αριθμός καταλόγου: A30681042), και TNF- (Αριθμός καταλόγου: A38280855) μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA που διατίθενται στο εμπόριο (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai έρευνα ενζύμων. Σαγκάη, Κίνα). Όλα τα βήματα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Χρώση Nissl

Ο ιστός του ιππόκαμπου αρουραίου απομονώθηκε, σταθεροποιήθηκε, ενσωματώθηκε σε παραφίνη και στη συνέχεια επωάστηκε σε διάλυμα χρώσης μπλε τολουιδίνης 1% για 5-10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Δέκα τμήματα ξεπλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό, εμποτίστηκαν σε 95% αιθανόλη για 5-30 λεπτά και αφυδατώθηκαν σε 100% αιθανόλη.

Μετά την αφυδάτωση, η φέτα τοποθετήθηκε σε ξυλόλιο και γλίστρησε με κάλυμμα χρησιμοποιώντας ένα μέσο ρητίνης. Ο αριθμός των νευρώνων στις περιοχές CA1, CA2 και οδοντωτής έλικας (DG) του ιππόκαμπου παρατηρήθηκε και αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα ανάλυσης ImageJ.

Western blot για πρωτεΐνες που σχετίζονται με τη μάθηση και τη μνήμη

Το Western blot για πρωτεΐνες που σχετίζονται με τη μάθηση και τη μνήμη πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται στην προηγούμενη έκθεσή μας με ορισμένες τροποποιήσεις [39].

Οι ιπποκάμπωτες ομογενοποιήθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα RIPA (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, ρΗ 7,0) που περιέχει φαινυλομενθανοσουλφονυλοφθορίδιο (R&D Systems Inc., Minneapolis, US). Τα ομογενοποιημένα προϊόντα φυγοκεντρήθηκαν στους 12,000 × g για 10 λεπτά στους 4 βαθμούς.

Οι κυτταρικές πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Hybond ΤΜ-ECL, AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν σε 5% μη λιπαρό γάλα σε PBS και 0.1% Tween-20σε θερμοκρασία δωματίου.

Τα στυπώματα στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα: Αντιγλουταμινικός υποδοχέας 1 (1:1000, Abcam, Inc., Αρ. Καταλόγου: ab183797), αντίσωμα AntiNMDAR2B (1:1000, Abcam, Inc., Αρ. Καταλόγου: ab28373), Αντι-φωσφο -Αντίσωμα CaMKII (1:1000, Abcam, Inc., Αρ. Καταλόγου: ab171095), αντίσωμα Antiphospho-CREB (1:1000, Abcam, Inc., Αρ. Καταλόγου: 32096) ή αντι-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Αριθμός καταλόγου: sc-47724).

Στη συνέχεια, οι μεμβράνες επωάστηκαν για 1 ώρα με ένα δευτερεύον αντίσωμα (HRPconjugated anti-rabbit Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Αρ. Καταλόγου: ab205718). Οι μεμβράνες στη συνέχεια πλύθηκαν τρεις φορές για 15 λεπτά χρησιμοποιώντας TBS-T για την απομάκρυνση περίσσειας αντισωμάτων πριν από την επώαση για 1 λεπτό με αντιδραστήρια χημειοφωταύγειας (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, ΜΝ, ΗΠΑ).

Περαιτέρω, ανοσοαντιδραστικές ζώνες ανιχνεύθηκαν με σύστημα ανάλυσης γέλης ηλεκτροφόρησης (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). Η ένταση των ζωνών αναλύθηκε με το λογισμικό Image J. Η ποσότητα των πρωτεϊνών-στόχων κανονικοποιήθηκε με έκφραση GAPDH [39].

Στατιστική ανάλυση

Για στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε το λογισμικό SPSS 18.0. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος±SEM Τα ομαδοποιημένα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μια μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από τη δοκιμή Student–Newman–Keuls. Μια τιμή P < 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική όπως η προηγούμενη αναφορά μας [35].

Αποτελέσματα

Συστολική αρτηριακή πίεση (SBP), καρδιακός ρυθμός και σωματικό βάρος μεταξύ νεαρών SHR και ηλικιωμένων SHR

Ο Yong SHR έδειξε χαμηλότερο SBP τις δύο πρώτες εβδομάδες σε σύγκριση με το παλιό SHR, στη συνέχεια αυξήθηκε σε καμία διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων τις τελευταίες τρεις εβδομάδες (Εικ. 2Α).

Αντίθετα, ο καρδιακός ρυθμός δεν ήταν καμία διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων τις πρώτες δύο εβδομάδες, στη συνέχεια η νεαρή SHR αυξήθηκε σημαντικά σε σύγκριση με την παλιά SHR τις τελευταίες τρεις εβδομάδες (Εικ. 2Β). Το νεαρό SHR έδειξε χαμηλότερο σωματικό βάρος σε σύγκριση με το παλιό SHR κατά τη διάρκεια ολόκληρης της περιόδου παρατήρησης (Εικ. 2C).

Παράμετροι λαβύρινθου νερού Morris μεταξύ νεαρών SHR και παλαιών SHR

Για τον προσδιορισμό της εξαρτώμενης από τον ιππόκαμπο μάθησης και μνήμης, πραγματοποιήθηκε το πείραμα με τον υδάτινο λαβύρινθο Morris. Το παλιό SHR έδειξε μεγαλύτερο λανθάνοντα χρόνο διαφυγής τις πρώτες τέσσερις ημέρες σε σύγκριση με το νεαρό SHR (Εικ. 3Α).

Οι χρόνοι διέλευσης του τεταρτημορίου στόχου ήταν μικρότεροι στο παλιό SHR παρά στο νεαρό SHR (Εικ. 3Β).

Το ποσοστό χρόνου στο τεταρτημόριο της πλατφόρμας στόχου ήταν μικρότερο στο παλιό SHR σε σύγκριση με το νεαρό SHR (Εικ. 3C). Το ποσοστό του μήκους διαδρομής στο τεταρτημόριο ήταν επίσης μικρότερο στο παλιό SHR σε σύγκριση με το παλιό SHR (Εικ. 3D). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το παλιό SHR έχει έκπτωση στη γνωστική λειτουργία.

Αριθμός νευρώνων στον ιππόκαμπο μεταξύ νεαρού SHR και παλαιού SHR

Ο αριθμός των νευρώνων σε διαφορετικές περιοχές του ιππόκαμπου μετρήθηκε με χρώση Nissl. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι υπάρχει μικρότερος αριθμός νευρώνων στις CA1, CA2 και DGregions του παλιού SHR σε σύγκριση με το νεαρό SHR (Εικ. 4).

Εκφράσεις πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη μάθηση και τη μνήμη βρίσκονται στον ιππόκαμπο μεταξύ νεαρών SHR και ηλικιωμένων SHR

Τα αποτελέσματα Western blot έδειξαν ότι η έκφραση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη μάθηση και τη μνήμη (GluR1, NMDAR 2B, φωσφορυλιωμένη-CaMK II και φωσφορυλιωμένη-CREB) στον παλιό ιππόκαμπο SHR ήταν χαμηλότερη από αυτή στον νεαρό ιππόκαμπο SHR (Εικ. 5).

Επίδραση του Gao-Zi-Yao στην SBP, τον καρδιακό ρυθμό και το σωματικό βάρος στο παλιό SHR

Η επίδραση του Gao-Zi-Yao στην SBP αναλύθηκε. Θεραπεία με χαμηλή δόση Gao-Zi-Yao μειώθηκε σημαντικά η SBP στην παλιά SHR από τη δεύτερη εβδομάδα έως την τέταρτη εβδομάδα σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου της παλιάς SHR, οι μεσαίες και υψηλές δόσεις Gao-Zi-Yao μείωσαν σημαντικά την SBP στην παλιά SHR από την πρώτη εβδομάδα έως την τέταρτη εβδομάδα σε σύγκριση με το παλιό SHR ελέγχου (Εικ. 6Α). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το Gao-Zi-Yao ασκεί αντιυπερτασική δράση στο παλιό SHR.

Συγκρίναμε επίσης τα δεδομένα σχετικά με τις επιπτώσεις του καρδιακού ρυθμού Gao-Zi-Yaoon και του σωματικού βάρους. Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στον καρδιακό ρυθμό και το σωματικό βάρος μεταξύ όλων των ομάδων κατά τη διάρκεια ολόκληρης της περιόδου παρατήρησης (Εικ. 6Β, Γ).

Επίδραση του Gao-Zi-Yao στα επίπεδα ορού NO, IL-1, IL-2 και TNF- σε παλιό SHR

Η θεραπεία με μεσαίες και υψηλές δόσεις GAO-ZIYAO αύξησε τα επίπεδα ΝΟ στον ορό σε σύγκριση με τα επίπεδα στην ομάδα ελέγχου SHR (Εικ. 7Α). Η θεραπεία με όλες τις δοκιμασμένες δόσεις GAO-ZI-YAO μείωσε τα επίπεδα ορού των IL-1, IL-2 σε σύγκριση με τα επίπεδα στην ομάδα ελέγχου SHR (Εικ. 7B, C). Ωστόσο, μόνο η υψηλή δόση του GAO-ZI-YAO κατέστειλε τα επίπεδα του TNF- στον ορό (Εικ. 7D).

Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το GAO-ZI-YAO θα μπορούσε να ρυθμίσει το οξειδωτικό στρες και τη φλεγμονή.

For more information:1950477648nn@gmail.com