Παράμετροι εκχύλισης και μέθοδοι ξήρανσης του Cistanche Deserticola

Το Cistanche είναι το Cistanche deserticola YC Ma ήCistanche tubulosa (Schenk) Wightξερό σαρκώδες στέλεχος με φολιδωτά φύλλα του φυτού OrobanchiaceaeCistanche deserticola YC Ma[1]. Το κύριο δραστικό συστατικό του Cistanche deserticola είναι οι γλυκοσίδες φαινυλαιθανόλης [2-4]. Φαρμακολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι έχει τις λειτουργίες τουαφροδισιακό, βελτίωση της ανοσίας, καιενίσχυση της μνήμης[4-9].

Τα τελευταία χρόνια, η μεθοδολογία επιφάνειας απόκρισης έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στην εξαγωγή της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής [{{0}}]. Η μέθοδος επιφάνειας απόκρισης έχει τα εγγενή πλεονεκτήματα της υψηλής ακρίβειας ανίχνευσης, του λιγότερου αριθμού πειραμάτων που απαιτούνται, της ακριβούς πρόβλεψης των μοντέλων συναρτήσεων και της ικανότητας να αντικατοπτρίζει τη σχέση μεταξύ παραγόντων και προβλεπόμενων τιμών [15-17]. Ως εκ τούτου, αυτό το πείραμα χρησιμοποιεί τη συνολική βαθμολογία του περιεχομένου των πέντε γλυκοσιδίων φαινυλαιθανόλης ως τιμή απόκρισης και χρησιμοποιεί το λογισμικό Design-Expert 8.0.6.1 για να σχεδιάσει το πείραμα, να βελτιστοποιήσει τη διαδικασία εκχύλισης του Cistanche deserticola και να παρέχει πληροφορίες για την αναγνώριση και καθιέρωση προτύπων ποιότητας τουCistanche έρημος.

Επί του παρόντος, ο δείκτηςσυστατικά echinaceaside και verbascosideαποτελούν καυτά ερευνητικά θέματα στην τεχνολογία εξόρυξης και επεξεργασίας τουCistanche έρημος. Η έκδοση του 2015 της Κινεζικής Φαρμακοποιίας ορίζει ότι η μέθοδος επεξεργασίας του Cistanche deserticola είναι «αφαιρέστε τις ακαθαρσίες, πλύνετε, υγράνετε, κόβετε σε χοντρές φέτες και στεγνώνετε». [1], δεν υπάρχουν σαφείς κανονισμοί για τη μέθοδο ξήρανσης. Ως εκ τούτου, αυτό το πείραμα χρησιμοποίησε οκτώ διαφορετικές μεθόδους ξήρανσης, συμπεριλαμβανομένης της ξήρανσης στον ήλιο, της σκιάς, της ξήρανσης σε φούρνο (40, 60, 80, 100, 120 μοίρες) και της ξήρανσης με κατάψυξη, για την επεξεργασία του Cistanche deserticola [18], η οποία παρείχε θεωρητική βάση για την διαδικασία ξήρανσης του Cistanche deserticola.

Στην καθοδήγηση.

ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΚΙΣΤΑΝΧΗΣ ΜΕ 30% ΕΧΙΝΚΑΟΣΙΔΗ

1 Υλικά και όργανα

Το φρέσκο ​​Cistanche deserticola συγκομίστηκε τον Οκτώβριο του 2018. Ο τόπος προέλευσης είναι ο δήμος Mitan, στην κομητεία Minqin, στο Baiyin, στην επαρχία Gansu. Ο αναπληρωτής καθηγητής Guo Yehong του Γεωπονικού Πανεπιστημίου Gansu το αναγνώρισε ως Cistanche deserticola YC Ma, ένα σαρκώδες στέλεχος με φύλλα φολίδας. Ουσίες αναφοράς echinaceaside (αριθμός παρτίδας 82854-37-3, κλάσμα μάζας μεγαλύτερο από ή ίσο με 98%), cistancheaside A (αριθμός παρτίδας 93236-42-1, κλάσμα μάζας μεγαλύτερο ή ίσο με 95%), βερμπασκοσίδη (αριθμός παρτίδας { {5}}, κλάσμα μάζας μεγαλύτερο ή ίσο με 98%), ισομουραβασίνη (αριθμός παρτίδας 61303-13-7, κλάσμα μάζας μεγαλύτερο ή ίσο με 98%), 2'-ακετυλοβερβασκοσίδης (αριθμός παρτίδας 94492-24-7 , κλάσμα μάζας Μεγαλύτερο ή ίσο με 95%) αγοράστηκαν από το Chengdu Pu. Feide Biotechnology Co., Ltd.; Το μυρμηκικό οξύ και η μεθανόλη είναι βαθμού χρωματογραφίας, Merck Company of Germany. Το νερό είναι καθαρό νερό και άλλα αντιδραστήρια είναι αναλυτικής ποιότητας.

Υγρός χρωματογράφος Waters Acquity, ανιχνευτής PDA, σταθμός εργασίας χρωματογραφίας Empower και σύστημα διαχείρισης τεταρτοταγούς διαλύτη. KQ-100Ε καθαριστικό υπερήχων, Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.

Εταιρεία; AL104 αναλυτικό ισοζύγιο, Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.; Ψυγείο LyoQuest-85, Telstar, Ισπανία.

2 Μέθοδοι και αποτελέσματα

2.1 Παρασκευή διαλύματος αναφοράς

Ζυγίστε με ακρίβεια τις κατάλληλες ποσότητεςεχινακεασίδη, σισταντσεοσίδη A, βερμπασκοσίδη, ισορασκοσίδη, και πρότυπα αναφοράς 2'-ακετυλ βερμπασκοσίδη και προσθέστε 70% μεθανόλη για να κάνετε τις συγκεντρώσεις μάζας 1.04, 0.61, 0.63, 0,39 και 0,48 mg/mL μικτού διαλύματος αναφοράς.

2.2 Χρωματογραφικές συνθήκες του Cistanche deserticola

Waters Symmetry C18 (250 mm×4,6 mm, 5 μm); θερμοκρασία στήλης 30 βαθμοί, ροή όγκου 1,0 mL/min. Η κινητή φάση είναι μεθανόλη-0.1% υδατικό διάλυμα μυρμηκικού οξέος, βαθμίδωση έκλουσης: 0~12 min, 29%~34% Μεθανόλη; 12-40 min, 34%-40% μεθανόλη; 30-35 min, 40%-35% μεθανόλη; 35-40 min, 30% μεθανόλη;

1-εχινακοσίδης 2-cistanche A 3-βερμπασκοσίδης 4-ισοακτεοσίδης 5-2'-ακετυλακτεοσίδης

Εικ. 1 HPLC μικτού δείγματος αναφοράς (Α) και C. deserticola (Β)

2.3 Παρασκευή του διαλύματος δοκιμής

Ζυγίστε με ακρίβεια 1 g αποξηραμένης σκόνης Cistanche deserticola σε φιάλη Erlenmeyer (περασμένη από 65-πλέγμα), προσθέστε 50 mL μεθανόλης 50%, ζυγίστε τη μάζα, υπερήχων στα 40 kHz στα 150 W, ψύξτε σε θερμοκρασία δωματίου , και συμπληρώστε τη μάζα για να την πάρετε.

2.4 Διερεύνηση γραμμικής σχέσης

Πάρτε τα {{0}}.1, {{20}}.5, 1, 2, 4 και 8 mL του παραπάνω μικτού διαλύματος αναφοράς σε ένα 10 mL ογκομετρική φιάλη και προσθέστε 70% μεθανόλη στο σημάδι. Τραβήξτε με ακρίβεια 10 μL και μετρήστε σύμφωνα με τις χρωματογραφικές συνθήκες του "2.2". Η συγκέντρωση μάζας είναι η τετμημένη (Χ) και η περιοχή κορυφής είναι η τεταγμένη (Υ). Εκτελέστε γραμμική παλινδρόμηση και οι εξισώσεις παλινδρόμησης είναι: Echinacea Y{=128 049 X -830 189, r=0.999 5, γραμμικό εύρος 10,4~832,0 ug/mL. Cistancheside AY=87 980 -447 963, r＝0.999 8, γραμμικό εύρος 6.3-504.0 ug/mL; Ισομουραβασίνη Υ＝92 831 Γλυκοζίτης Υ=79 207 X{-304 428, r=0.999 4, γραμμικό εύρος 4,8~384,0 ug/mL.

2.5 Μεθοδολογική επισκόπηση

2.5.1 Επιθεώρηση ακριβείας

Πάρτε 20 μL του μικτού διαλύματος αναφοράς στο στοιχείο "2.1" και εγχύστε 6 φορές συνεχόμενα για να μετρήσετε τις περιοχές κορυφής της εχινακεσίδης, της κισταγχεσίδης Α, της βερμπασκοσίδης, της ισορεβασκοσίδης και της 2'-ακετυλοβερβασκοσίδης. Τα RSD είναι 0,23% αντίστοιχα. , {{10}}.71%, 0.59%, 0.41%, 0.29%, υποδεικνύοντας ότι το όργανο έχει καλή ακρίβεια.

2.5.2 Δοκιμή επαναληψιμότητας

Πάρτε 6 δόσεις του ίδιου δείγματος Cistanche deserticola, παρασκευάστε το διάλυμα δοκιμής σύμφωνα με το σημείο "2.3", εγχύστε το δείγμα υπό τις χρωματογραφικές συνθήκες του στοιχείου "2.2" και μετρήστε την περιοχή κορυφής. Αποτελέσματα Τα μέσα κλάσματα μάζας εχινακεσίδης, κιστανχεοσίδης Α, βερμπασκοσίδης, ισορεβασκοσίδης και 2'-ακετυλοβερβασκοσίδης ήταν 1,83%, 0,21%, 2,34%, 0,13% και {{15 }},68% αντίστοιχα, και τα RSD ήταν 1,32 αντίστοιχα. %, 0,83%, 1,24%, 2,19%,

0.78%, υποδεικνύοντας ότι η μέθοδος έχει καλή επαναληψιμότητα.

2.5.3 Δοκιμή σταθερότητας

Προσδιορίστε τη σταθερότητα του ίδιου δοκιμαστικού διαλύματος (που παρασκευάστηκε σύμφωνα με το "2.3") στις 0, 2, 4, 8, 12, 24 και 48 ώρες για να λάβετε εχινακεσίδη, κιστανχεοσίδη Α, βερμπασκοσίδη και ισολεβασκοζίτη. , το εμβαδόν κορυφής του 2'-ακετυλοβερμπασκοσιδίου, το RSD ήταν 0,58%, 0,21%, 1,58%, 1,46%, 2,19% αντίστοιχα, υποδεικνύοντας ότι το διάλυμα δοκιμής ήταν σταθερό εντός 48 ωρών.

2.5.4 Δοκιμή ανάκτησης δειγμάτων

Πάρτε 1 g από 6 δείγματα Cistanche deserticola με γνωστή περιεκτικότητα και προσθέστε με ακρίβεια μια ορισμένη ποσότητα μικτού διαλύματος αναφοράς (Echinaceaside 1.06 mg/mL, Cistancheoside A 0.86 mg. /mL, Verbascoside 2,17 mg/mL, Isolebascoside 0,79 mg /mL, 2'-acetyl verbascoside 0,91 mg/mL), προσθέστε 70% μεθανόλη για να συμπληρώσετε τα 50 mL και εγχύστε δείγματα σύμφωνα με τις χρωματογραφικές συνθήκες του "2.2". Οι μέσες ανακτήσεις που μετρήθηκαν είναι 101,52%, 99,21% και 102,62% αντίστοιχα. , 98,62%, 97,36%, RSD είναι 1,64%, 1,95%, 0,87%, 1,59%, 1,13% αντίστοιχα, και το ποσοστό ανάκτησης του δείγματος είναι καλό.

Το Cistanche είναι ένα πολύ γνωστό τονωτικό βότανο που μπορεί να θρέψει και να προστατεύσει τα νεφρά. Στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική θεωρία, το Cistanche είναι το καλύτερο βότανο για τα νεφρά. Το Cistanche είναι πλούσιο σε εχινακοσίδη, ακτεοσίδη και φλαβονοειδή. Αυτά τα αποτελεσματικά συστατικά του Cistanche μπορούν να μειώσουν την απόπτωση των νεφρικών κυττάρων και να αυξήσουν τον πολλαπλασιασμό των νεφρικών κυττάρων. Επομένως, το Cistanche είναι ένα φυσικό συμπλήρωμα νεφρών.