Πειραματική Μελέτη Προστατευτικής Επίδρασης Προαγωγής με Γλυκοζίτες Cistanche σε Τραυματισμό Νεφρικής Ισχαιμίας-Επαναιμάτωσης

για περισσότερες πληροφορίες:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Χειρουργικό Τμήμα, Περιφερειακό Νοσοκομείο Baoshan Ολοκληρωμένης Παραδοσιακής Κινεζικής και Δυτικής Ιατρικής, Σαγκάη 201900)

【Αφηρημένη】Στόχος Η δημιουργία ενός μοντέλου ανάνηψης του αιμορραγικού σοκ σε αρουραίους και η παρατήρηση της προστατευτικής δράσης τουCistancheολικές γλυκοσίδες (CTG) σε τραυματισμό νεφρικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης. Μέθοδοι Οι αρουραίοι SD χωρίστηκαν τυχαία σε 3 ομάδες: ομάδα εικονικής επέμβασης, πειραματική ομάδα (ομάδα αναζωογόνησης σοκ), ομάδα θεραπείας με CTG, 10 επίμυες σε κάθε ομάδα. Η πειραματική ομάδα και η ομάδα θεραπείας με CTG καθιέρωσαν μοντέλα νεφρικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης. Στους αρουραίους στην ομάδα θεραπείας εγχύθηκε CTG 400 mg/kg ενδοπεριτοναϊκώς, και η πειραματική ομάδα και η ομάδα εικονικής επέμβασης ενέθηκαν με φυσιολογικό ορό. Η περιεκτικότητα του μυοκαρδίου στο αίμα, η περιεκτικότητα σε άζωτο ουρίας και η κυστατίνη C κάθε ομάδας ανιχνεύθηκαν για τον προσδιορισμό της νεφρικής λειτουργίας, η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση του ρυθμού απόπτωσης των νεφρικών κυττάρων. χρησιμοποιήθηκε ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA) για την ανίχνευση σύνδεσης χρωμοσώματος Χ σε αρουραίουςνεφρόιστός Έκφραση του X-συνδεδεμένου αναστολέα της πρωτεΐνης απόπτωσης (XIAP). Αποτελέσματα Συγκρίνοντας την ομάδα CTG με την πειραματική ομάδα, το Cr, το BUN και η Κυστατίνη C αίματος μειώθηκαν σημαντικά (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">κιστανάκιέχουν προστατευτική επίδραση στη βλάβη της νεφρικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης σε αρουραίους, η οποία μπορεί να σχετίζεται με την προώθηση της έκφρασης του XIAP.

[Λέξεις-κλειδιά] νεφρό; τραυματισμός ισχαιμίας-επαναιμάτωσης; ολικές γλυκοσίδες του κιστάνιου· αναστολέας της πρωτεΐνης απόπτωσης που συνδέεται με το χρωμόσωμα. απόπτωση; αρουραίος

[Αριθμός ταξινόμησης κινεζικής βιβλιοθήκης] R692 [Document Marking Code] A [Article Number] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Κάντε κλικ στο Cistanche EXTRACT POWDER για νεφρό

Ο τραυματισμός ισχαιμίας-επαναιμάτωσης (I/R) είναι ένα κοινό παθοφυσιολογικό φαινόμενο νεφρικής βλάβης στη διαδικασία αιμορραγικού σοκ, σοβαρού τραύματος,νεφρόμεταμόσχευση καινεφρόχειρουργική επέμβαση όγκου. Μελέτες έχουν δείξει ότι η απόπτωση είναι ένα σημαντικό μέρος της βλάβης της νεφρικής λειτουργίας που προκαλείται από τραυματισμό I/R (1). Ο X-συνδεδεμένος αναστολέας της πρωτεΐνης απόπτωσης (XIAP) είναι ένας από τους ισχυρότερους ενδογενείς αναστολείς απόπτωσης που έχουν βρεθεί μέχρι στιγμής (2). Υπάρχουν λίγες μελέτες σχετικά με την αντι-αποπτωτική δράση του XIAP στον νεφρικό ιστό μετά από τραυματισμό I/R.CistancheΟι ολικές γλυκοσίδες (CTG) είναι μια ένωση φαινυλαιθανοειδών ολικών γλυκοσιδών που εξάγεται απόCistanche, το οποίο έχει ποικίλες βιολογικές λειτουργίες. Υπάρχουν λίγες μελέτες σχετικά με τη νεφρική του προστασία μετά από τραυματισμό στο ενδοφλέβιο. . Αυτή η μελέτη καθιέρωσε ένα μοντέλο αναζωογόνησης με αιμορραγικό σοκ σε αρουραίους και καθιέρωσε ένα μοντέλο συστηματικής βλάβης I/R για να διερευνήσει την προστατευτική επίδραση των ολικών γλυκοσιδών της κήλης κρέατος στηννεφρόαπό τραυματισμό I/R και εξερευνήστε τον πιθανό μηχανισμό του.

1 Υλικά και μέθοδοι

1.1 Ζώα και ομαδοποίηση

Υπάρχουν 30 καθαροί και υγιείς αρσενικοί αρουραίοι που παρέχονται από το Πειραματικό Κέντρο του Πανεπιστημίου Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής της Σαγκάης, με βάρος (320 ± 30) g. Τυχαία χωρίστηκε σε 3 ομάδες: ομάδα εικονικής επέμβασης, πειραματική ομάδα (ομάδα ανάνηψης με σοκ), ομάδα CTG, η καθεμία με 10 αρουραίους.

1.2 Κύρια αντιδραστήρια και όργανα

Οι συνολικοί γλυκοσίδες του κολλώδους ρυζιού (αριθμός παρτίδας: 20081516) αγοράστηκαν από την Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; πεντοβαρβιτάλη νατρίου, Hoechst 33258, και ιωδιούχο προπιονύλιο αγοράστηκαν από τη Sigma, Η.Π.Α. Το κιτ πρωτεϊνικής δοκιμασίας αναστολέα απόπτωσης συνδεδεμένο με χρωμόσωμα Χ ποντικού (XIAP) και το κιτ ELISA αγοράστηκαν από την Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; Η συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας αγοράστηκε από την Thermo Company, ΗΠΑ. Ο πολυπαραμετρικός φυσιολογικός ανιχνευτής αγοράστηκε από την Nihon Kohden Company, Ιαπωνία. Το κυτταρόμετρο ροής BDFACSAria αγοράστηκε από την Becton, ΗΠΑ - Dickinson Company. Το 24G trocar αγοράστηκε από την Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Πειραματική μέθοδος

1.3.1 Παρασκευή ζωικού μοντέλου Αρουραίοι SD νήστεψαν 12 ώρες πριν από το πείραμα και αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση πεντοβαρβιτάλης νατρίου (50 mg/kg).

Ο αρουραίος στερεώθηκε σε ύπτια θέση, έγινε τομή 3 cm στην αριστερή κάτω κοιλιακή χώρα, διαχωρίστηκε η μηριαία αρτηρία, εισήχθη trocar 24G και συνδέθηκε ένας πολυπαραμετρικός φυσιολογικός ανιχνευτής. Η μέση αρτηριακή πίεση του αρουραίου μετρήθηκε ως (113 ± 15) mmHg, 20 ml ηπαρίνης σύριγγας. Το σοκ θεωρήθηκε ότι ξεκίνησε και η αρτηριακή πίεση διατηρήθηκε για 90 λεπτά. Ο όγκος αιμορραγίας ήταν (13 ± 3) ml και στη συνέχεια το αυτόλογο αίμα στη σύριγγα Η αργή επανέγχυση διαρκεί περίπου 30 λεπτά και η αρτηριακή πίεση επιστρέφει σε περισσότερο από το 90 τοις εκατό της βασικής τιμής και η ανάνηψη θεωρείται επιτυχής (3). . Το τροκάρ αφαιρέθηκε, η μηριαία αρτηρία απολινώθηκε και η τομή ράφτηκε. Αφού οι αρουραίοι ξύπνησαν, τους επέστρεψαν στο κλουβί για παρατήρηση και ήταν ελεύθεροι να φάνε και να πιουν. 24 ώρες μετά την αναζωογόνηση, χρησιμοποιήθηκε ενδοπεριτοναϊκή ένεση πεντοβαρβιτάλης νατρίου (50 mg/kg) για αναισθησία, λαπαροτομία, συλλέχθηκαν 5 ml αίματος από την κάτω κοίλη φλέβα, οι αρουραίοι θυσιάστηκαν αμέσως και ο αριστερός και ο δεξιός νεφρός αφαιρέθηκαν για χρήση.

1.3.2 Μέθοδοι φαρμακευτικής αγωγής Στην ομάδα θεραπείας με CTG χορηγήθηκε CTG 2 ώρες πριν από την αιμορραγία των αρουραίων και εγχύθηκε στην κοιλιακή κοιλότητα σε δόση 400 mg/kg. Στην πειραματική ομάδα χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκή ένεση με 3 ml φυσιολογικού ορού 2 ώρες πριν από την αιμορραγία. η ομάδα εικονικής επέμβασης υποβλήθηκε μόνο σε αναισθησία, λαπαροτομή και διαχωρισμό της μηριαίας αρτηρίας, τοποθέτηση τροκάρ και ράμμα της τομής, αλλά όχι αιμορραγία ή ανάνηψη. Τα υπόλοιπα ήταν ίδια με την πειραματική ομάδα.

1. 4 δείκτες και μέθοδοι ανίχνευσης

1.4.1 Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε BUN, Cr και κυστατίνη C στο αίμα Η κυστατίνη C είναι ένας ενδογενής δείκτης αλλαγών στον ρυθμό σπειραματικής διήθησης. Όταν η νεφρική λειτουργία είναι μειωμένη, ο ρυθμός σπειραματικής διήθησης μειώνεται, η συγκέντρωση της κυστατίνης C στο αίμα μπορεί να αυξηθεί 10 φορές και η διαγνωστική ακρίβεια της κυστατίνης C είναι σημαντικά καλύτερη από αυτή της δηλητηρίασης των μυών στον ορό. Η περιεκτικότητα αίματος BUN, Cr και κυστατίνης C υποβλήθηκε στο εργαστήριο του νοσοκομείου μας για προσδιορισμό.

1.4.2 Προσδιορισμός του ρυθμού απόπτωσης των κυττάρων Η κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση του ρυθμού απόπτωσης των νεφρικών κυττάρων. Παίρνετε το νεφρό και το ψιλοκόβετε με μια λεπίδα, προσθέτετε λίγο PBS και το μεταφέρετε σε δοκιμαστικό σωλήνα. Προσθέστε 0.3 τοις εκατό θρυψίνη για πέψη σε λουτρό νερού 37 P, επωάστε για 20 λεπτά, όταν το περιεχόμενο στον δοκιμαστικό σωλήνα γίνει θολό, προσθέστε 2 φορές PBS για να σταματήσει η πέψη, διηθήστε με ένα νάιλον πλέγμα 300 mesh, πετάξτε τις ακαθαρσίες και φυγοκεντρήστε σε φυγόκεντρο χαμηλής θερμοκρασίας. Ακτίνα φυγοκέντρησης 8 cm, 12,000 r/min, φυγοκεντρήστε για 5 λεπτά, απορρίψτε το υπερκείμενο, ρυθμίστε τη συγκέντρωση των κυττάρων σε 1 ~ 1,5 x 106/ml, πάρτε 0,4 ml από το παραπάνω κυτταρικό εναιώρημα και προσθέστε 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), σκούρο 37 t: επώαση σε λουτρό νερού, πώμα του δοκιμαστικού σωλήνα, ξεπλύνετε με PBS μετά από 5 λεπτά, ακτίνα φυγοκέντρησης 8 cm, 12 000 r/min, φυγοκέντρηση για 5 λεπτά , πετάξτε το υπερκείμενο, Ξεπλύνετε ξανά με τον ίδιο τρόπο. Προσθέστε 0,4 ml PI, χρωματισμένο για 5 λεπτά, και ανιχνεύστε το ποσοστό των φυσιολογικών, νεκρωτικών και αποπτωτικών κυττάρων στο νεφρό. Σύμφωνα με τη συγγένεια των δύο χρωστικών διαφόρων τύπων κυττάρων, είναι γνωστό ότι μόνο τα κύτταρα χρώματος PI είναι νεκρά κύτταρα, μόνο τα έγχρωμα κύτταρα Hoechst 33258 είναι αποπτωτικά κύτταρα και κανένα από αυτά δεν είναι έγχρωμα φυσιολογικά ζωντανά κύτταρα.

1.4.3 Ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA) για την ανίχνευση της έκφρασης XIAP σε ιστούς νεφρών αρουραίου Πάρτε κάθε ομάδα νεφρών και επεξεργαστείτε φρέσκους ιστούς νεφρών με κυτταρόλυμα. Φυγοκεντρήστε σε φυγόκεντρο χαμηλής θερμοκρασίας με ταχύτητα 12 000 r/min για 5 λεπτά. Πάρτε το υπερκείμενο και λειτουργήστε σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ XIAP ELISA Kit. Η Shanghai Jiaotong University Fenghe Technology Co., Ltd. είναι υπεύθυνη για τις δοκιμές.

1.5 Στατιστική επεξεργασία

Τα πειραματικά δεδομένα κάθε ομάδας αντιπροσωπεύονται από εδάφη Yuan και SPSS 17. Το λογισμικό 0 χρησιμοποιείται για στατιστική ανάλυση. Π<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Το Cistanche μπορεί να βελτιώσει τη σεξουαλική λειτουργία

2 αποτελέσματα

Οι δείκτες νεφρικής λειτουργίας Οι τιμές Cr, BUN και κυστατίνης C ήταν στατιστικά σημαντικές (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Πίνακας 1 Δείκτες νεφρικής λειτουργίας οι τιμές Cr, BUN και κυστατίνης-C των αρουραίων σε κάθε ομάδα Tab. 1 Δείκτες νεφρικής λειτουργίας σε τρεις ομάδες

Σε σύγκριση με την ομάδα εικονικής λειτουργίας, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Ο μηχανισμός της νεφρικής βλάβης ισχαιμίας-επαναιμάτωσης είναι πολύ περίπλοκος. Είναι μια παθολογική διαδικασία που εμφανίζεται με πολλούς τρόπους υπό την επίδραση διαφόρων παραγόντων, όπως υπερφόρτωση ιόντων ασβεστίου, βλάβη υπεροξείδωσης λιπιδίων, απόπτωση και νέκρωση κυττάρων, μεταξύ των οποίων η εξαρτώμενη από κασπάση κυτταρική απόπτωση είναι μία από τις κύριες μορφές επιθηλιακών κυττάρων νεφρικών σωληναριών. βλάβη που προκαλείται από βλάβη του νεφρού I/R (4). Ο αναστολέας της οικογένειας της πρωτεΐνης απόπτωσης (IAP) είναι ο μόνος ενδογενής αναστολέας κασπάσης που έχει βρεθεί σε κύτταρα θηλαστικών μέχρι στιγμής, ο οποίος μπορεί να αποτρέψει αποτελεσματικά την εμφάνιση κυτταρικής απόπτωσης. Το XIAP είναι το μέλος με την ισχυρότερη ανασταλτική δράση στην κασπάση στην οικογένεια IAP. Μπορεί να αναστείλει την απόπτωση των κυττάρων που προκαλείται από μια ποικιλία παθολογικών ερεθισμάτων και να έχει προστατευτική επίδραση στα κατεστραμμένα όργανα (5).

Επί του παρόντος, οι περισσότερες από τις μεθόδους για την καθιέρωση ζωικών μοντέλων νεφρικής βλάβης I/R είναι η αφαίρεση ενός νεφρού και η σύσφιξη της άλλης πλευράς του νεφρικού μίσχου ή της νεφρικής αρτηρίας ⑹ για προσομοίωση της κατάστασης μεταμόσχευσης νεφρού. Αυτή η μελέτη χρησιμοποιεί ένα μοντέλο αιμορραγικού σοκ/αναζωογόνησης, το οποίο είναι πιο κοντά στην παθοφυσιολογική διαδικασία συστηματικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης που εμφανίζεται στο κλινικό τραυματικό σοκ. Σε αυτό το πείραμα, τα επίπεδα BUN, Cr και κυστατίνης C στο αίμα των αρουραίων SD Η σημαντική βελτίωση, η σοβαρή νεφρική βλάβη είναι ένα ιδανικό ζωικό μοντέλο για τη μελέτη της νεφρικής βλάβης I/R.

Το CTG είναι ένα σημαντικό φαρμακευτικό συστατικό της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής πάστας κοριτσιών κρέατος. Η πάστα μελιτζάνας, η οποία είναι ζεστή στη φύση, γλυκιά και αλμυρή, επιστρέφει στα νεφρά και το παχύ έντερο και αρχικά περιείχε το Materia Medica του Shennong. "Μπεν Σούτρα": Κύριοι πέντε τοκετοί και επτά τραυματισμοί, θρέφουν τη μέση, θρέφουν τα πέντε εσωτερικά όργανα, ενισχύουν το γιν, θρέφουν την ουσία και το τσι.Cistancheέχει χρησιμοποιηθεί στη χώρα μου εδώ και δύο χιλιάδες χρόνια. Κατατάσσεται στο Νο. 1 στις φόρμουλες που αυξάνουν τη δύναμη στο παρελθόν και στο Νο. 2 στις θρεπτικές φόρμουλες μετά το ginseng. Μελέτες έχουν δείξει ότιCistancheμπορώβελτίωση της σεξουαλικής λειτουργίας, ρυθμίζουν το νευροενδοκρινικό, καιβελτίωση της λειτουργίας του ανοσοποιητικού. , Αντιοξειδωτικά, προάγουν τον μεταβολισμό των υλικών, προστατεύουν το ισχαιμικό μυοκάρδιο και άλλες λειτουργίες. Ως το κύριο φαρμακευτικό συστατικό του πουρέ της οικογένειας κρέατος, το CTG έχει πολλές λειτουργίες. Έρευνα σε μοντέλα εγκεφαλικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης διαπίστωσε ότι το CTG μπορεί να μειώσει τα διεγερτικά αμινοξέα στον εγκεφαλικό ιστό μετά την ισχαιμία-επαναδιάχυση και να προστατεύσει τον εγκεφαλικό ιστό των αρουραίων SD (7). Το CTG έχει ένααντιοξειδωτική δράσηστους ιστούς του ποντικού και έχει κάποια προστατευτική επίδραση στην οξεία εγκεφαλική υποξία σε ποντίκια και στη βλάβη του καρδιακού μυός σε ποντίκια (9). Το CTG μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη νευροσυμπεριφορά τουΠάρκινσονμοντέλα ποντικών και αναστέλλουν τη μείωση του αριθμού των νευρώνων ντοπαμίνης στη μέλαινα ουσία (9). Ενισχύοντας τη δραστηριότητα των ενζύμων δέσμευσης ελεύθερων ριζών, αποτρέποντας την υπεροξείδωση των λιπιδίων, αναστέλλοντας την εναπόθεση πεπτιδίου Β-αμυλοειδούς στον εγκέφαλο και αναστέλλοντας την απόπτωση των εγκεφαλικών κυττάρων, το CTG βελτιώνει σημαντικά τη μάθησηΗ ασθένεια Αλτσχάϊμερποντίκια που προκαλούνται από πεπτίδιο Β-αμυλοειδούς Ικανότητα μνήμης w. Αυτή η μελέτη έδειξε ότι μετά την εφαρμογή της προκαταρκτικής θεραπείας με CTG, οι περιεκτικότητες σε BUN, Cr και κυστατίνη C στο αίμα των αρουραίων μειώθηκαν σημαντικά και η νεφρική βλάβη μειώθηκε. Το CTG αύξησε την ανασταλτική της απόπτωσης πρωτεΐνη XIAP στον τραυματισμένο νεφρικό ιστό I/R και εμπόδισε την κυτταρική απόπτωση. Η εμφάνιση θανάτου έχει προστατευτική επίδραση στη βλάβη του νεφρού.