Περίληψη

Το οξειδωτικό στρες που προκαλείται από υπερβολικές ελεύθερες ρίζες είναι ένας από τους βασικούς παράγοντες για την ανθρώπινη κυτταρική γήρανση, τη χρόνια φλεγμονή και τις πολλαπλές μεταβολικές εκφυλιστικές διαταραχές. Διατροφικά συστατικά φυτικής προέλευσης από ομόλογους πόρους τροφίμων-φαρμάκων έχουν κερδίσει εκτεταμένη παγκόσμια προσοχή ως φυσικά αντιοξειδωτικά εναλλακτικά των συνθετικών αντιοξειδωτικών πρόσθετων.Lycium ruthenicum, γνωστό και ως μαύρο goji berry, καιCistanche deserticola(Desert broomrape) είναι αντιπροσωπευτικοί ενδημικοί φαρμακευτικοί-βρώσιμα φυτά που προέρχονται από τον διάδρομο Hexi στη βορειοδυτική Κίνα. Περιέχουν άφθονα χαρακτηριστικά φυτοχημικά συστατικά όπως ανθοκυανίνες, πολυφαινόλες, βιοδραστικούς πολυσακχαρίτες καθώς και φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίτες. Παρόλο που μεμονωμένες βιολογικές δραστηριότητες αυτών των δύο πρώτων υλών έχουν τεκμηριωθεί σε πολλές υπάρχουσες μελέτες, περιορισμένη έρευνα έχει επικεντρωθεί στο πώς οι συνθήκες ανθρώπινης γαστρεντερικής πέψης αλλάζουν τη βιοπροσβασιμότητα και το πραγματικό αντιοξειδωτικό δυναμικό της αναμεμειγμένης σκόνης τους. Σε αυτή την έρευνα, σκόνη ενός συστατικού και τρεις ομάδες ανάμεικτης σκόνης με διαφορετικές αναλογίες μάζας (Lycium ruthenicum : Cistanche deserticola= 1:2, 1:1, 2:1) προετοιμάστηκαν. Εφαρμόστηκε ένα στατικό μοντέλο γαστρεντερικής πέψης δύο σταδίων in-vitro, το οποίο αποτελείται από προσομοίωση γαστρικής πέψης 2 ωρών κάτω από pH 2,0 με πεψίνη που ακολουθείται από προσομοίωση εντερικής πέψης 2 ωρών υπό pH 7,0 συμπληρωμένη με θρυψίνη. Η δυναμική δειγματοληψία διεξήχθη σε πολλαπλά χρονικά διαστήματα κατά τη διάρκεια της επώασης της πέψης. Προσδιορίσαμε ποσοτικά τις διαλυτές περιεκτικότητες σε ολικές πολυφαινόλες, πολυσακχαρίτες, ανθοκυανίνες και φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, παράλληλα με την ικανότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH και ABTS. Πραγματοποιήθηκε ανάλυση συσχέτισης Pearson για να αποκαλύψει τις εσωτερικές σχέσεις μεταξύ των συγκεντρώσεων βιοδραστικών ενώσεων και των αντιοξειδωτικών δεικτών. Πειραματικά αποτελέσματα έδειξαν ότι η γαστρική πέψη ενίσχυσε σημαντικά τη διαλυτότητα τεσσάρων κύριων λειτουργικών φυτοχημικών, τα οποία βελτίωσαν περαιτέρω την απόδοση σάρωσης ριζών DPPH και ABTS. Κατά τη διάρκεια της επακόλουθης φάσης της εντερικής πέψης, η διαλυτότητα των πολυφαινολών και των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων συνέχισε να αυξάνεται, ενώ οι μετρήσιμες περιεκτικότητες σε πολυσακχαρίτες και ανθοκυανίνες μειώθηκαν σημαντικά. Η εντερική πέψη άσκησε προαγωγικές επιδράσεις στη δραστηριότητα σάρωσης ριζών ABTS, αλλά δεν δημιούργησε θετική βελτίωση στον ρυθμό αποβολής ελεύθερων ριζών DPPH. Οι πολυφαινόλες, οι ανθοκυανίνες και οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες εμφάνισαν στατιστικά σημαντικές γραμμικές συσχετίσεις με παραμέτρους αντιοξειδωτικής ικανότητας (P < 0.05). Among all three blending formulations, the mixing ratio of 2:1 (Lycium ruthenicumναCistanche deserticola) παρουσίασε ανώτερη συνολική αντιοξειδωτική ικανότητα μετά από πλήρη προσομοίωση γαστρεντερικής πέψης. Αυτή η μελέτη διευκρίνισε κανόνες παραλλαγής βιοδραστικών ουσιών σε περιβάλλον προσομοίωσης γαστρεντερικού συστήματος για μεμονωμένο και συνδυασμένο μαύρο μούρο γκότζι και σκόνη σκουπόραμπης της ερήμου. Τα αποτελέσματά μας παρέχουν σταθερή πειραματική υποστήριξη για την ανάπτυξη νέων λειτουργικών συμπληρωμάτων διατροφής που χρησιμοποιούν φυτικά υλικά της ερήμου Hexi-Corridor.

Λέξεις-κλειδιά: Lycium ruthenicum; Cistanche deserticola; in-vitro γαστρεντερική πέψη. βιοπροσβασιμότητα· πολυφαινόλες; Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες; ανθοκυανίνες; αντιοξειδωτική δράση? ομολογία τροφίμων-φαρμάκων

1. Εισαγωγή

Η γήρανση του πληθυσμού και η αυξανόμενη δημόσια επιδίωξη της παρέμβασης στον τομέα της υγείας έχουν καταστήσει τη διατροφική έρευνα κατά της γήρανσης ένα καυτό σημείο στις παγκόσμιες λειτουργικές βιομηχανίες τροφίμων και διατροφικών προϊόντων. Η υπόθεση της γήρανσης των ελεύθερων ριζών έχει γίνει ευρέως αποδεκτή για την ερμηνεία του μηχανισμού γήρανσης του οργανισμού. Η συνεχής συσσώρευση ενεργών ειδών οξυγόνου στο ανθρώπινο σώμα θα προκαλέσει υπεροξείδωση λιπιδίων, θα βλάψει τη δομή του DNA και τη λειτουργία των πρωτεϊνών, θα επιταχύνει τη γήρανση των κυττάρων και θα αυξήσει τον κίνδυνο νοσηρότητας για αθηροσκλήρωση, χρόνιες φλεγμονώδεις νόσους και εκφυλιστικά συμπτώματα που σχετίζονται με την ηλικία. Η διαιτητική πρόσληψη φυσικών φυτοχημικών αντιοξειδωτικών θεωρείται ως μια ήπια και ασφαλής διατροφική στρατηγική για τον μετριασμό του οξειδωτικού στρες σε σύγκριση με τις φαρμακευτικές παρεμβάσεις. Τα συνθετικά αντιοξειδωτικά όπως το BHT και το BHA αντιμετωπίζουν σταδιακά αυστηρότερο ρυθμιστικό έλεγχο σε πολλές περιφερειακές αγορές, γεγονός που τροφοδοτεί περαιτέρω τη ζήτηση της αγοράς για φυσικές αντιοξειδωτικές πρώτες ύλες φυτικής προέλευσης.

Οι παραδοσιακοί φυτικοί πόροι από το ομόλογο σύστημα τροφίμων-φαρμάκων της Ανατολικής Ασίας έχουν προσελκύσει αυξανόμενο ενδιαφέρον μεταξύ των δυτικών ερευνητών διατροφής και των κατασκευαστών συμπληρωμάτων.Lycium ruthenicumΤο Murr., ένα πολυετές είδος θάμνων της οικογένειας Solanaceae, εξαπλώνεται σε άνυδρες και ημίξηρες ζώνες της βορειοδυτικής Κίνας. Ο σκούρο μωβ καρπός του κερδίζει τη φήμη του «βασιλιά των ανθοκυανινών», λόγω της εξαιρετικά υψηλής συγκέντρωσης παραγώγων ακυλιωμένης ανθοκυανίνης που σπάνια εμφανίζονται στα κοινά φρούτα. Εκτός από ανθοκυανίνες, το μαύρο goji berry είναι επίσης πλούσιο σε σύνθετα μείγματα πολυφαινολών, υδατοδιαλυτούς πολυσακχαρίτες, φλαβονοειδείς ενώσεις και διάφορα ιχνοστοιχεία. Προηγούμενα πειράματα in-vitro και κυτταροκαλλιέργειας έχουν επικυρώσει τις ισχυρές βιοδραστηριότητές του για τον καθαρισμό ριζών, τις αντιφλεγμονώδεις και ανοσοτροποποιητικές του ιδιότητες. Οι περισσότερες υπάρχουσες δημοσιεύσεις σχετικά μεLycium ruthenicumεστίαση στην ταυτοποίηση συστατικών πρώτων υλών, στη βελτιστοποίηση της διαδικασίας εκχύλισης και στην αξιολόγηση αντιοξειδωτικών ακατέργαστων εκχυλισμάτων.

Cistanche deserticola, κοινώς ονομαζόμενη σκουπόρα της ερήμου, είναι ένα υποχρεωτικό ολοπαράσιτο φυτό που ανήκει στην οικογένεια Orobanchaceae. Για χιλιάδες χρόνια, αυτό το φυτό έχει χρησιμοποιηθεί ως τονωτικό φυτικό υλικό στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική πρακτική. Τα κύρια βιοενεργά συστατικά του είναι οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, συμπεριλαμβανομένων των εχινακοσίδης και ακτεοσίδης, μαζί με συγκεκριμένα υδατοδιαλυτά κλάσματα πολυσακχαρίτη. Σύγχρονες φαρμακολογικές έρευνες αποκαλύπτουν ότι οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες απόCistanche deserticolaέχει αντιοξειδωτικά, νευροπροστατευτικά και ανοσορρυθμιστικά αποτελέσματα, ενώ τα κλάσματα πολυσακχαρίτη του μπορούν να ρυθμίσουν την ανοσολογική απόκριση των μακροφάγων. Η πρώτη ύλη είναι γεωγραφικά συγκεντρωμένη σε ζώνες όασης ερήμου του διαδρόμου Gansu Hexi και της περιοχής της ερήμου της Εσωτερικής Μογγολίας.

Από τοπική βιομηχανική άποψη, και τα δύο είδη φυτών είναι χαρακτηριστικές οικονομικές καλλιέργειες στον διάδρομο Gansu Hexi. Οι τοπικές γεωργικές επιχειρήσεις εξερευνούν λειτουργικά τρόφιμα προστιθέμενης αξίας με βάση αυτά τα δύο φυτά της ερήμου. Η κλασική κινεζική θεωρία συμβατότητας βοτάνων προτείνει ότι ταίριασμαLycium ruthenicumκαιCistanche deserticolaμπορεί να παράγει συνεργιστικά τονωτικά αποτελέσματα. Προς το παρόν, οι περισσότερες δημοσιευμένες εργασίες αξιολογούν μόνο κάθε φυτό ξεχωριστά. Πολύ περιορισμένα πειραματικά δεδομένα είναι διαθέσιμα για τον τύπο της ένωσης τους.

Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η συνολική φυτοχημική περιεκτικότητα που ανιχνεύεται στην ακατέργαστη σκόνη δεν μπορεί να αντιπροσωπεύει άμεσα την πραγματική αντιοξειδωτική δράση στο εσωτερικό του ανθρώπινου γαστρεντερικού σωλήνα. Μόλις η φυτική σκόνη καταναλωθεί από το στόμα, τα βιοενεργά μόρια θα περάσουν από δραστικές περιβαλλοντικές αλλαγές: ισχυρή όξινη γαστρική κατάσταση με υδρόλυση πρωτεάσης, ακολουθούμενη από ουδέτερο-αλκαλικό περιβάλλον λεπτού εντέρου με κατάλυση παγκρεατικών ενζύμων. Πολλές φαινολικές ουσίες, ανθοκυανίνες και πολυσακχαρίτες είναι ευαίσθητα στο pH. μπορεί να διαλυθούν, να μετασχηματιστούν, να αποικοδομηθούν ή να συζευχθούν κατά τη διαδικασία της πέψης. Το πραγματικό βιοπροσβάσιμο κλάσμα, αντί για το αρχικό συνολικό περιεχόμενο, καθορίζει τη φυσιολογική λειτουργία.

Η στατική in-vitro προσομοιωμένη δοκιμασία γαστρεντερικής πέψης είναι ένα τυποποιημένο εργαλείο προκαταρκτικής έρευνας που υιοθετείται ευρέως στην επιστήμη των τροφίμων. Αυτό το εργαστηριακό σύστημα προσομοίωσης μπορεί να μιμηθεί τη μεταβολή του pH και τις συνθήκες υδρόλυσης πρωτεάσης του ανθρώπινου στομάχου και του λεπτού εντέρου. Οι ερευνητές μπορούν να παρακολουθούν τις δυναμικές αλλαγές των βιοπροσπελάσιμων φυτοχημικών ουσιών χωρίς δοκιμές υψηλού κόστους για τη διατροφή των ζώων ή δοκιμές παρέμβασης εθελοντών ανθρώπων. Αυτή η μέθοδος εφαρμόζεται ευρέως για την αξιολόγηση φρούτων, λαχανικών, φυτικής σκόνης και θρεπτικών πρώτων υλών.

Μέχρι τώρα, καμία δημόσια έκθεση δεν έχει περιγράψει in-vitro χαρακτηριστικά γαστρεντερικής πέψης για μικτή σύνθετη σκόνηLycium ruthenicumσε συνδυασμό μεCistanche deserticola. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη πραγματοποίησε πειράματα στατικής προσομοίωσης γαστρεντερικής πέψης σε μεμονωμένη σκόνη πρώτης ύλης και τρεις ομάδες ανάμεικτης σκόνης με παραλλαγή αναλογίας. Παρακολουθούσαμε συνεχώς τις δυναμικές αλλαγές των διαλυτών πολυφαινολών, πολυσακχαριτών, ανθοκυανινών, φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών, καθώς και της ικανότητας σάρωσης ριζών DPPH και ABTS σε πολλαπλά χρονικά σημεία πέψης. Διεξήχθη στατιστική ανάλυση συσχέτισης μεταξύ της συγκέντρωσης βιοδραστικών συστατικών και των δεικτών αντιοξειδωτικών. Οι στόχοι μας περιλαμβάνουν: (1) διευκρίνιση του τρόπου με τον οποίο το περιβάλλον προσομοίωσης του στομάχου και του εντέρου επηρεάζει τη διαλυτότητα και τη σταθερότητα των κύριων λειτουργικών ουσιών από το μαύρο goji berry και το desert broomrape. (2) συγκρίνετε την αντιοξειδωτική απόδοση διαφορετικών αναλογιών ανάμειξης μετά την πέψη. (3) εξαλείφει τη βέλτιστη αναλογία ανάμειξης για σύνθετη λειτουργική σκόνη. Τα ευρήματα αυτής της εργασίας μπορούν να παρέχουν βασικά πειραματικά στοιχεία για την ανάπτυξη νέας γενιάς αντιοξειδωτικών λειτουργικών προϊόντων τροφής και συμπληρωμάτων διατροφής που προέρχονται από τοπικούς φυτικούς πόρους Hexi-Corridor.

2. Υλικά και Μέθοδοι

2.1 Φυτικές πρώτες ύλες

Ώριμοι καρποί τουLycium ruthenicumσυγκομίστηκαν από δάσος τεχνητών φυτειών στην πόλη Huahai, στην πόλη Yumen, στην επαρχία Gansu, στην Κίνα, το έτος 2022. Οι καρποί που συλλέγονταν στο χωράφι υποβλήθηκαν σε φυσική διαδικασία ξήρανσης με σκίαση σε αεριζόμενη θερμοκρασία περιβάλλοντος. Τα κατεστραμμένα φρούτα, οι φλοιοί φρούτων και τα υπολείμματα ακαθαρσιών αφαιρέθηκαν με το χέρι. Τα καθαρά αποξηραμένα φρούτα κονιοποιήθηκαν και κοσκινίστηκαν μέσω κόσκινου 50 mesh για να ληφθεί ομοιογενής σκόνη μαύρου μούρων goji για πειράματα πέψης.

Νωποί σαρκώδεις μίσχοιCistanche deserticolaσυλλέχθηκαν τον Μάιο του 2022 από τεχνητά εμβολιασμέναHaloxylon ammodendronαμμόλοφο δάσος που βρίσκεται στην κομητεία Gaotai, επαρχία Gansu. Τα φρέσκα χαρτομάντιλα πλύθηκαν καλά για να εξαλειφθεί η επιφανειακή μόλυνση από άμμο, κόπηκαν σε λεπτές φέτες και βυθίστηκαν αμέσως σε διάλυμα προστασίας χρώματος για να αποφευχθεί η αντίδραση φαινολικού μαυρίσματος. Οι προεπεξεργασμένες φέτες λυοφιλοποιήθηκαν υπό συνθήκες κενού. Το λυοφιλοποιημένο στερεό συνθλίβεται και περνά από κόσκινο 50 mesh για να παρασκευαστείCistanche deserticolaΔείγμα λυοφιλοποιημένης σκόνης.

Τρεις ομάδες μικτής σκόνης παρασκευάστηκαν με ανάμειξηLycium ruthenicumσκόνη καιCistanche deserticolaλυοφιλοποιημένη σκόνη σε διαφορετικές αναλογίες μάζας:

Ομάδα Α: λόγος μάζας 1 : 2 (Lycium ruthenicum : Cistanche deserticola)

Ομάδα Β: αναλογία μάζας 1 : 1 (Lycium ruthenicum : Cistanche deserticola)

Ομάδα Γ: λόγος μάζας 2 : 1 (Lycium ruthenicum : Cistanche deserticola)

Η συνολική μάζα του δείγματος για κάθε σύστημα αντίδρασης πέψης καθορίστηκε ως 0,75 g, η αναλογία στερεού-υγρού ελέγχθηκε στο 1:40 (w/v).

2.2 Χημικά αντιδραστήρια

Πεψίνη (δραστηριότητα 3 000 U/g), θρυψίνη (δραστηριότητα 250 U/mg), τυπική ουσία γαλλικού οξέος, αντιδραστήριο Folin-Ciocalteu, DPPH (1,1-διφαινυλ-2-πικρυλυδραζύλιο), ABTS (2,2′‑αζινο‑δις‑(3‑αιθυλβενζοθειαζολίνη‑6‑σουλφονικό οξύ)) αγοράστηκαν από τη Macklin Biochemical Co., Ltd., Σαγκάη, Κίνα. Το υδροχλωρικό οξύ, το διττανθρακικό νάτριο, το ανθρακικό νάτριο, η φαινόλη, το πυκνό θειικό οξύ και άλλοι ανόργανοι χημικοί παράγοντες ήταν οικιακά εμπορικά αντιδραστήρια αναλυτικής ποιότητας.

2.3 Εργαστηριακός εξοπλισμός και όργανα

DK‑98‑Ⅱ ψηφιακό λουτρό νερού σταθερής θερμοκρασίας (Taist Instrument Co., Ltd., Tianjin, Κίνα). QUINTIX‑224 ηλεκτρονικό αναλυτικό ισοζύγιο (Sartorius, Γερμανία). Επιτραπέζιος φυγόκεντρος υψηλής ταχύτητας GL‑12B (Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd., Κίνα). DR6000 υπεριώδες-ορατό φασματοφωτόμετρο (Hach Company, ΗΠΑ). Θερμοστατική θερμοστατική ανακίνηση σειράς SPH‑110X θερμοκοιτίδα λουτρού νερού (Shanghai Shiping Instrument Co., Ltd., Κίνα).

2.4 Πρωτόκολλο στατικής in-vitro γαστρεντερικής πέψης

Η διαδικασία πέψης σε δύο φάσεις τροποποιήθηκε και βελτιστοποιήθηκε με αναφορά σε προηγούμενα δημοσιευμένα πρωτόκολλα στατικής γαστρεντερικής πέψης για τη μήτρα φυτικών τροφίμων. Κάθε δοκιμή πέψης πραγματοποιήθηκε με τρία βιολογικά παράλληλα αντίγραφα.

Φάση γαστρικής πέψης (GD, συνολικός χρόνος επώασης=2 h):Ζυγίσαμε με ακρίβεια 0,75 g δείγματος σκόνης και το μεταφέραμε σε σωλήνα φυγοκέντρησης πολυπροπυλενίου 50 mL. Προστέθηκε κατάλληλος όγκος απιονισμένου νερού για να υγρανθεί πλήρως η μήτρα στερεάς σκόνης. Η τιμή του ρΗ του εναιωρήματος δείγματος ρυθμίστηκε προσεκτικά σε ρΗ 2,0 χρησιμοποιώντας υδατικό διάλυμα υδροχλωρικού οξέος 1 mol/L. Στη συνέχεια, συμπληρώθηκαν 4 mL προπαρασκευασμένου προσομοιωμένου γαστρικού υγρού. Το προσομοιωμένο γαστρικό υγρό περιείχε 3 g πεψίνης διαλυμένα σε 50 mL διαλύματος HCl 0,01 mol/L. Οι σωλήνες φυγοκέντρησης τοποθετήθηκαν σε θερμοστατική θερμοστατική ανακίνηση, η θερμοκρασία επώασης διατηρήθηκε στους 37 βαθμούς για να μιμείται τη θερμοκρασία του ανθρώπινου φυσιολογικού σώματος, η ταχύτητα περιστροφής ανακίνησης ορίστηκε στα 100 r/min. Σε προγραμματισμένα χρονικά σημεία δειγματοληψίας (0 h, 0,5 h, 1,0 h, 1,5 h, 2,0 h), το μίγμα μερικής αντίδρασης αφαιρέθηκε. Η ενζυμική δραστηριότητα τερματίστηκε με θέρμανση σε λουτρό ζέοντος νερού για 10 λεπτά. Το επεξεργασμένο μίγμα φυγοκεντρήθηκε κάτω από 4 βαθμούς, ταχύτητα περιστροφής 6 000 r/min για 15 λεπτά. Συλλέχθηκε διαυγές υπερκείμενο υγρό και συντηρήθηκε για επακόλουθο φυτοχημικό ποσοτικό προσδιορισμό και αντιοξειδωτική δράση.

Φάση εντερικής πέψης (ID, συνολικός χρόνος επώασης=2 h):Μετά την ολοκλήρωση της 2ωρης επώασης της γαστρικής πέψης, η τιμή του pH της πέψης ρυθμίστηκε από pH 2,0 σε ουδέτερο pH 7,0 προσθέτοντας στάγδην διάλυμα διττανθρακικού νατρίου 1,0 mol/L. Το διάλυμα εργασίας θρυψίνης στη συνέχεια προστέθηκε στο σύστημα πέψης. Αυτό το διάλυμα εργασίας παρασκευάστηκε με διάλυση 0,3 g σκόνης θρυψίνης σε 50 mL 0,01 mol/L διαλύματος ανθρακικού νατρίου. Η κατάσταση επώασης της εντερικής φάσης διατηρήθηκε σταθερή: θερμοκρασία 37 μοίρες, ταχύτητα ανακίνησης 100 r/min. Τα χρονικά σημεία δειγματοληψίας για την εντερική πέψη ορίστηκαν ως 0 h, 0,5 h, 1,0 h, 1,5 h και 2,0 h. Μετά τη δειγματοληψία, τα βήματα απενεργοποίησης ενζύμου, φυγοκέντρησης υπό ψύξη και συλλογής υπερκειμένου ήταν πανομοιότυπα με τις επεμβάσεις γαστρικής φάσης.

2.5 Προσδιορισμός βιοδραστικών λειτουργικών συστατικών

Η συνολική περιεκτικότητα σε διαλυτή πολυφαινόλη προσδιορίστηκε με τη χρωματομετρική μέθοδο Folin-Ciocalteu, τα αποτελέσματα υπολογισμού εκφράστηκαν ως χιλιοστόγραμμα ισοδύναμου γαλλικού οξέος ανά γραμμάριο δείγματος (mg GAE/g). Η ολική περιεκτικότητα σε διαλυτούς πολυσακχαρίτες μετρήθηκε με τη χρήση χρωματομετρικής ποσοτικής μεθόδου φαινόλης-θειικού οξέος. Η ολική περιεκτικότητα σε ανθοκυανίνη ανιχνεύθηκε με φασματοφωτομετρία διαφορικού pH. Η ολική περιεκτικότητα σε φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδη προσδιορίστηκε ποσοτικά με τη μέθοδο υπεριώδους φασματοφωτομετρικού προσδιορισμού. Κάθε δείγμα υπερκείμενου μετρήθηκε τεχνικά εις τριπλούν για να μειωθεί η απόκλιση της δοκιμής.

2.6 Μέτρηση αντιοξειδωτικής ικανότητας

2.6.1 Δοκιμασία σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH

Το ποσοστό δέσμευσης ριζών DPPH υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο (1): \\(\\text{ποσοστό καθαρισμού DPPH (\\%)}= \\left(1-\\frac{A_1-A_2}{A_0}\\right)\\times 100 \\tag{1}\\) Πού:A₁αντιπροσωπεύει την ένδειξη απορρόφησης μικτού διαλύματος που περιέχει υπερκείμενο δείγμα και διάλυμα εργασίας DPPH.A₂αντιπροσωπεύει την απορρόφηση του υπερκειμένου δείγματος αναμεμειγμένο με τυφλό δείγματος απιονισμένου νερού·A₀αντιπροσωπεύει την απορρόφηση του διαλύματος εργασίας DPPH αναμεμειγμένο με ομάδα ελέγχου καθαρού απιονισμένου νερού.

2.6.2 Δοκιμασία δέσμευσης κατιόντων ελεύθερων ριζών ABTS

Ο ρυθμός δέσμευσης κατιόντων ριζών ABTS υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο (2): \\(\\text{Ρυθμός σάρωσης ABTS (\\%)}= \\left(1-\\frac{A_1-A_2}{A_0}\\right)\\times 100 \\tag{2}\\) Παράμετροι απορρόφησηςA₁, A₂, A₀διατηρούν συνεπή λογική ως υπολογισμό DPPH.

2.7 Επεξεργασία στατιστικών δεδομένων

Όλα τα πειράματα πέψης επαναλήφθηκαν για τρία ανεξάρτητα βιολογικά αντίγραφα. Το στατιστικό πακέτο λογισμικού SPSS 22.0 υιοθετήθηκε για μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA), δοκιμή σημαντικότητας και υπολογισμό του συντελεστή συσχέτισης Pearson. Το λογισμικό Origin 2018 εφαρμόστηκε για τη γραφική παράσταση πειραματικών σχημάτων. Ο ουδός στατιστικής σημαντικότητας ορίστηκε ωςP < 0.05; P < 0.01 was judged as extremely significant difference. Different lowercase letters marked on chart bars indicate significant statistical difference between different treatment groups.

3. Αποτελέσματα

3.1 Αλλαγές βιοδραστικών ουσιών και αντιοξειδωτική ικανότητα για μεμονωμένα άτομαLycium ruthenicumσκόνη

Μέσα σε περιβάλλον προσομοίωσης γαστρικής πέψης, η περιεκτικότητα σε διαλυτή πολυφαινόλη της σκόνης μαύρου μούρου goji αυξήθηκε αξιοσημείωτα την πρώτη 1,5 ώρα της επώασης και παρουσίασε ελαφρά μείωση στο μεταγενέστερο στάδιο της γαστρικής πέψης. Η όξινη κατάσταση του στομάχου προώθησε σημαντικά τη διάλυση των μορίων πολυσακχαρίτη και των συστατικών της ανθοκυανίνης (P < 0.05). Once the digesta transferred to intestinal digestion alkaline environment, detected soluble polysaccharide and anthocyanin contents showed obvious decreasing tendency. Experimental observation confirmed that alkaline pH value of simulated intestinal fluid constituted the primary driving factor for anthocyanin molecular degradation.

Από την άποψη της αντιοξειδωτικής δραστηριότητας, τόσο τα ποσοστά σάρωσης ριζών DPPH όσο και ABTS αυξάνονταν συνεχώς κατά τη διάρκεια της επώασης της γαστρικής πέψης. Όταν η πέψη εισήλθε στην εντερική φάση, η ικανότητα σάρωσης ριζών DPPH μειώθηκε απότομα.

Τα αποτελέσματα υπολογισμού συσχέτισης Pearson έδειξαν ότι υπό συνθήκες γαστρικής πέψης, η περιεκτικότητα σε πολυφαινόλη κατείχε σημαντική θετική συσχέτιση με το ρυθμό σάρωσης DPPH. Η πολυφαινόλη και η ανθοκυανίνη εμφάνισαν εξαιρετικά σημαντική θετική συσχέτιση με την απόδοση σάρωσης ριζών ABTS (P < 0.01). In intestinal digestion environment, polyphenol concentration presented significant negative correlation with antioxidant indexes. This phenomenon suggested partial degradation and structural transformation of phenolic compounds under intestinal‑simulated condition. Meanwhile, polysaccharide and anthocyanin still maintained positive correlation with radical‑scavenging capability throughout intestinal digestion process.

3.2 Αλλαγές βιοδραστικών ουσιών και αντιοξειδωτική ικανότητα για μεμονωμένα άτομαCistanche deserticolaσκόνη

Για λυοφιλοποίησηCistanche deserticolaσκόνη, η συγκέντρωση διαλυτής πολυφαινόλης έφτασε στη μέγιστη τιμή σε 1,5 ώρα υπό επώαση στη γαστρική φάση, ακολουθούμενη από φθίνουσα τάση. Κατά τη διάρκεια της εντερικής πέψης, η περιεκτικότητα σε πολυφαινόλη αυξήθηκε γρήγορα εντός της αρχικής 0,5 ώρας, έπεσε στη συνέχεια και αυξήθηκε ξανά κοντά στο τέλος της εντερικής επώασης 2 ωρών. Η περιεκτικότητα σε διαλυτούς πολυσακχαρίτες εμφάνισε συνολική πτωτική τάση τόσο στο γαστρικό όσο και στο εντερικό στάδιο πέψης. Η συγκέντρωση του διαλυτού γλυκοσιδίου φαινυλαιθανοειδούς διατήρησε τη συνεχή ανάπτυξη καθ' όλη τη διάρκεια της διαδικασίας γαστρικής πέψης διάρκειας 2 ωρών.

Όσον αφορά την αντιοξειδωτική απόδοση, η γαστρική πέψη βελτίωσε τον ρυθμό σάρωσης των ριζών DPPH μέσα σε πρώτη 1,5 ώρα και στη συνέχεια η αντιοξειδωτική αξία μειώθηκε. Μετά τη μετάβαση σε περιβάλλον εντερικής πέψης, ο ρυθμός σάρωσης DPPH αρχικά μειώθηκε και στη συνέχεια ανέκαμψε σταδιακά. Ο ρυθμός δέσμευσης ριζών ABTS έδειξε το μοτίβο της αρχικής μείωσης και της επακόλουθης ανύψωσης κατά τη διάρκεια της πλήρους χρονικής πορείας της πέψης.

Τα στατιστικά αποτελέσματα συσχέτισης έδειξαν ότι οι πολυφαινόλες και οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες είχαν εξαιρετικά σημαντική θετική συσχέτιση με την ικανότητα σάρωσης ριζών DPPH υπό γαστρική πέψη (P < 0.01). In intestinal digestion environment, phenylethanoid glycoside concentration showed significant correlation with both DPPH and ABTS scavenging indicators. This result strongly proved phenylethanoid glycosides act as the dominant antioxidant‑active constituents for Cistanche deserticolaπρώτη ύλη.

3.3 Βιοδραστικές ενώσεις και αντιοξειδωτική απόδοση μικτής σκόνης υπό προσομοίωση γαστρικής πέψης

Τρία σκευάσματα μικτής σκόνης (Ομάδα Α 1:2, Ομάδα Β 1:1, Ομάδα Γ 2:1) παρουσίασαν διακριτά μοτίβα διακύμανσης συστατικών υπό την προσομοίωση γαστρικής πέψης. Για διαλυτή πολυφαινόλη: Η ομάδα Α και η ομάδα Β παρουσίασαν μια αρχική μείωση που ακολουθήθηκε από αύξηση της περιεκτικότητας καθώς παρατάθηκε ο χρόνος πέψης. Η ομάδα Γ εμφάνισε σταθερή φθίνουσα τάση της διαλυτής πολυφαινόλης κατά τη διάρκεια της γαστρικής επώασης. Οι περιεκτικότητες σε διαλυτούς πολυσακχαρίτες, ανθοκυανίνες και φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδια παρουσίασαν χαρακτηριστικά διακύμανσης που εξαρτώνται από την αναλογία. Σε γενικές γραμμές, το όξινο γαστρικό περιβάλλον διευκόλυνε τη διάλυση αυτών των τεσσάρων τάξεων βιοδραστικών φυτοχημικών από τη μήτρα φυτών ανάμεικτης σκόνης.

Τα αποτελέσματα των δοκιμών αντιοξειδωτικών αποκάλυψαν ότι τα ποσοστά σάρωσης ριζών DPPH και ABTS και των τριών μικτών ομάδων αυξήθηκαν σημαντικά με τον παρατεταμένο χρόνο γαστρικής πέψης (P < 0.05). Comparative analysis among three formula groups demonstrated that Group C (2:1 ratio, higher proportion of Lycium ruthenicum) πέτυχε σχετικά υψηλότερες τιμές δέσμευσης ριζών μετά την πέψη στη γαστρική φάση.

3.4 Βιοδραστικές ενώσεις και αντιοξειδωτική απόδοση μικτής σκόνης υπό προσομοίωση εντερικής πέψης

Μετά την είσοδο στο στάδιο της εντερικής πέψης, η διαλυτότητα των γλυκοσιδίων πολυφαινόλης και φαινυλαιθανοειδών της μεικτής σκόνης θα μπορούσε να διατηρήσει περαιτέρω αυξητική τάση. Ωστόσο, οι ανιχνεύσιμοι διαλυτοί πολυσακχαρίτες και τα περιεχόμενα ανθοκυανίνης υπέστησαν γενικά απώλεια ουσίας. Ο ρυθμός σάρωσης ριζών DPPH μειώθηκε στο πρώιμο χρονικό σημείο της εντερικής πέψης και επανήλθε σε μεταγενέστερη περίοδο επώασης. Ο ρυθμός σάρωσης ριζών ABTS παρουσίασε στατιστικά σημαντική φθίνουσα τάση και για τις τρεις μικτές ομάδες σε ολόκληρη την επώαση της εντερικής πέψης (P < 0.05).

Η ολοκληρωμένη σύγκριση λαμβάνοντας υπόψη το επίπεδο κατακράτησης βιοδραστικών ουσιών καθώς και την ενσωματωμένη αντιοξειδωτική ικανότητα μετά από πλήρη διαδοχική πέψη στομάχου και εντέρου απέδειξε ότι η ομάδα C με αναλογία ανάμειξης 2:1 (Lycium ruthenicum : Cistanche deserticola) παρείχε ανώτερη συνολική αντιοξειδωτική απόδοση, σε σύγκριση με την Ομάδα Α και την Ομάδα Β.

4. Συζήτηση

Τα πειραματικά αποτελέσματα της πέψης in-vitro δείχνουν ξεκάθαρα ότι το όξινο γαστρικό περιβάλλον είναι ευνοϊκό για την απελευθέρωση διαλυτών πολυφαινολών, πολυσακχαριτών, ανθοκυανινών και φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και από τα δύοLycium ruthenicumκαιCistanche deserticolaμήτρα φυτικής σκόνης. Οι συνδυασμένες επιδράσεις όξινης υδρόλυσης χαμηλού pH, επώασης μηχανικής ανακίνησης και πρωτεάσης πεψίνης μπορούν να διαταράξουν τη μερική δομή του κυτταρικού τοιχώματος των φυτών, γεγονός που επιταχύνει την ενδοκυτταρική φυτοχημική διάλυση σε υδατικό υπερκείμενο χώνευσης. Αυτή η ενίσχυση της διάλυσης βελτιώνει άμεσα τη συγκέντρωση βιοπροσπελάσιμης αντιοξειδωτικής ουσίας και την ικανότητα δέσμευσης ριζών.

Μόλις το σύστημα πέψης μεταφερθεί σε ουδέτερο-αλκαλικό εντερικό περιβάλλον, διαφορετικές φυτοχημικές κατηγορίες έχουν διακριτά χαρακτηριστικά σταθερότητας. Οι ανθοκυανίνες που προέρχονται από το μαύρο goji berry είναι πολύ γνωστά μόρια ευαίσθητα στο pH. Η αλκαλική κατάσταση του εντέρου επιταχύνει την αποικοδόμηση της δομής του δακτυλίου της ανθοκυανίνης, οδηγώντας σε μετρήσιμη μείωση της περιεκτικότητας στο υπερκείμενο. Αυτή η παρατήρηση είναι συνεπής με προηγούμενα ερευνητικά συμπεράσματα που προέκυψαν από άλλα υλικά μούρων πλούσια σε ανθοκυανίνες. Μερικά μόρια πολυσακχαρίτη μπορεί να υποστούν υδρολυτική διάσπαση υπό συνδυασμένη επίδραση του εντερικού pH και της καταλυτικής δράσης της θρυψίνης, προκαλώντας μείωση της ανιχνευόμενης συγκέντρωσης διαλυτού πολυσακχαρίτη. Αντίθετα, μέρη των ενώσεων πολυφαινόλης και των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών μπορούν να συνεχίσουν να διαλύονται από την υπολειμματική μήτρα των φυτών ακόμη και υπό εντερική προσομοίωση επώασης.

Υπάρχει αξιοσημείωτη διαφορά μεταξύ των αποτελεσμάτων της ανάλυσης DPPH και της ανάλυσης ABTS. Το σύστημα αντίδρασης DPPH λειτουργεί σε μερική κατάσταση οργανικού-υδατικού μικτού διαλύτη και παρουσιάζει υψηλότερη ευαισθησία στα λιπόφιλα φαινολικά μόρια. Το σύστημα ανάλυσης ABTS μπορεί να ανιχνεύσει τόσο υδρόφιλες όσο και λιπόφιλες αντιοξειδωτικές ενώσεις ταυτόχρονα. Αυτή η μεθοδολογική διαφορά παρέχει μερική εξήγηση για το φαινόμενο μας: η εντερική πέψη βελτίωσε την απόδοση σάρωσης ριζών ABTS, αλλά απέτυχε να προωθήσει τον ρυθμό αποβολής της DPPH. Ορισμένα αρχικά φυτοχημικά μόρια αποικοδομούνται κατά τη διάρκεια της εντερικής προσομοίωσης επώασης και παράγουν δευτερογενείς μεταβολίτες με αλλοιωμένη αντιοξειδωτική ισχύ. Αυτά τα πρόσφατα παραγόμενα προϊόντα αποσύνθεσης θα αναδιαμορφώσουν τα τελικά αποτελέσματα των δοκιμών σάρωσης ριζών.

Η στατιστική ανάλυση συσχέτισης επιβεβαιώνει ότι οι ανθοκυανίνες χρησιμεύουν ως κύριοι αντιοξειδωτικοί παράγοντεςLycium ruthenicum, ενώ οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες κυριαρχούν στην αντιοξειδωτική δράση τουCistanche deserticola. Μετά τη φυσική ανάμειξη αυτών των δύο σκονών πρώτης ύλης, αυτά τα δύο σετ βιοδραστικών συστατικών συνυπάρχουν στο υπερκείμενο υγρό πέψης και προσδιορίζουν συνεργατικά τη συνολική αντιοξειδωτική ικανότητα της σύνθετης ανάμεικτης σκόνης. Συγκριτικός έλεγχος μεταξύ τριών αναλογιών ανάμειξης προσδιορίζει 2 : 1 (Lycium ruthenicum : Cistanche deserticola) ως βέλτιστη φόρμουλα για τη μεγιστοποίηση in-vitro αντιοξειδωτικής ικανότητας μετά από πλήρη προσομοίωση γαστρεντερικής πέψης.

Είναι σημαντικό να συζητηθούν οι εγγενείς περιορισμοί που ανήκουν σε αυτό το μοντέλο in-vitro πέψης σε λειτουργία στατικής παρτίδας. Αυτή η εργαστηριακή προσομοίωση δεν μπορεί να αναπαράγει πλήρως περίπλοκες δυναμικές φυσιολογικές διεργασίες της πραγματικής ανθρώπινης γαστρεντερικής οδού. Παράγοντες όπως η κίνηση του γαστρεντερικού περισταλτισμού, η συνεχής έκκριση του πεπτικού χυμού, η συμμετοχή χολικού άλατος και η διαδικασία ζύμωσης της μικροχλωρίδας του εντέρου δεν περιλαμβάνονται στην τρέχουσα πειραματική διάταξη. Επιπλέον, το βήμα απενεργοποίησης του ενζύμου βραστό νερό-λουτρού που εφαρμόζεται στο πρωτόκολλό μας μπορεί να προκαλέσει μικρή απώλεια θερμοαστάθμων φυτοχημικών συστατικών. Ακατέργαστη χονδροειδής σκόνη αντί για καθαρισμένα εκχυλίσματα υιοθετήθηκε ως δείγμα δοκιμής σε αυτή τη μελέτη. Επομένως, τα πειραματικά μας αποτελέσματα μπορούν να λειτουργήσουν ως προκαταρκτικά δεδομένα αναφοράς, αλλά δεν μπορούν να εξισωθούν πλήρως με την πραγματική βιοδιαθεσιμότητα της ουσίας στο ανθρώπινο σώμα. Απαιτούνται επακόλουθες δοκιμές διατροφής με ζώα ή μελέτες διατροφικής παρέμβασης σε ανθρώπους για την περαιτέρω επικύρωση των πρακτικών φυσιολογικών επιδράσεων αυτής της σύνθετης φόρμουλας σε σκόνη.

Από την προοπτική της ανάπτυξης βιομηχανικού προϊόντος, αυτή η έρευνα προσφέρει θεωρητική αναφορά για την παραγωγή συμπληρωμάτων σύνθετης λειτουργικής σκόνης τροφίμων με χρήση πρώτων υλών μαύρου μούρου γκότζι και σκουπόκρεμας της ερήμου που προέρχονται από περιοχές παραγωγής Hexi-Corridor. Κατά τη διάρκεια του σχεδιασμού της σύνθεσης του προϊόντος και της αξιολόγησης της διάρκειας αποθήκευσης, οι κατασκευαστές θα πρέπει να δίνουν μεγάλη προσοχή στην εξαρτώμενη από το pH ιδιότητες χημικής σταθερότητας των συστατικών της ανθοκυανίνης και των φαινυλαιθανοειδών-γλυκοσιδών. Θα πρέπει να υιοθετηθούν εύλογες ρυθμίσεις της σύνθεσης και έλεγχος των συνθηκών αποθήκευσης για την ελαχιστοποίηση της αποικοδόμησης των βιοδραστικών συστατικών κατά τη διάρκεια ζωής του εμπορικού προϊόντος.

5. Συμπεράσματα

Η προσομοίωση της γαστρικής πέψης βελτιώνει σημαντικά τη διαλυτότητα των πολυφαινολών, πολυσακχαριτών, ανθοκυανινών και φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και για τα δύοLycium ruthenicumσκόνη καιCistanche deserticolaσκόνη, και ταυτόχρονα ενισχύει την DPPH καθώς και τη δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών ABTS.

Σε περιβάλλον προσομοίωσης εντερικής πέψης, η διαλυτότητα των πολυφαινολών και των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών συνεχίζει να αυξάνεται, ενώ τα ανιχνεύσιμα περιεχόμενα πολυσακχαριτών και ανθοκυανινών μειώνονται. Η εντερική πέψη προάγει την ικανότητα σάρωσης ριζών ABTS, αλλά δεν δείχνει θετική προαγωγική επίδραση για τον ρυθμό σάρωσης ριζών DPPH. Οι πολυφαινόλες, οι ανθοκυανίνες και οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες παρουσιάζουν σημαντική γραμμική συσχέτιση με τους αντιοξειδωτικούς δείκτες. Οι ανθοκυανίνες και οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες συμβάλλουν κυρίαρχα στην αντιοξειδωτική απόδοση αυτών των δύο φυτικών υλικών της ερήμου.

Μεταξύ τριών δοκιμασμένων αναλογιών ανάμειξης, η αναλογία ανάμειξης2 : 1 (Lycium ruthenicum : Cistanche deserticola) επιτυγχάνει την υψηλότερη συνολική αντιοξειδωτική ικανότητα μετά από πλήρη διαδικασία προσομοίωσης γαστρεντερικής πέψης.

Αυτή η έρευνα παρέχει θεμελιώδη πειραματική βάση για την ανάπτυξη καινοτόμων λειτουργικών προϊόντων διατροφής χρησιμοποιώντας χαρακτηριστικάLycium ruthenicumκαιCistanche deserticolaφυτικών πόρων στη βορειοδυτική Κίνα.

Ευχαριστίες

Αυτή η εργασία έλαβε οικονομική υποστήριξη από το Πρόγραμμα Υποστήριξης Βιομηχανίας του Επαρχιακού Πανεπιστημίου του Gansu (Αριθμός επιχορήγησης. 2021CYZC-56).

Συγκρούσεις συμφερόντων

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

Αναφορές

[1] Sun XK, Zhang YY, Zhang XY. Πρόοδος της έρευνας σχετικά με τον μηχανισμό γήρανσης και τη θεραπεία αντιγήρανσης. Τρόφιμα και φάρμακα. 2022;24(1):74-80.

[2] Yan YM, Dai GL, Ran LW. Ανάλυση σύνθεσης πολυφαινόλης τουLycium ruthenicumφρούτα από διαφορετικούς άγριους βιότοπους. Scientia Agricultura Sinica. 2014;47(12):2450-2460.

[3] Gao Y, Tao P, Wang YJ. Μελέτη μοριακού μηχανισμού για την αντιοξειδωτική δράση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών απόCistanche deserticolaμε βάση τη φαρμακολογία του δικτύου. Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy. 2022;39(17):2204-2215.

[4] Bouayed J, Hoffmann L, Bohn T. Ολικές φαινολικές ουσίες, φλαβονοειδή, ανθοκυανίνες και αντιοξειδωτική δράση μετά από προσομοίωση γαστρεντερικής πέψης και αιμοκάθαρσης ποικιλιών μήλων: βιοπροσβασιμότητα και πιθανή πρόσληψη. Χημεία Τροφίμων. 2011;128(1):14-21.

[5] Mihailović V, Kreft S, Benković ET. Χημικό προφίλ, αντιοξειδωτική δράση και σταθερότητα σε διεγερμένο γαστρεντερικό σύστημα μοντέλου τριώνΒερμπάσκοείδος. Βιομηχανικές καλλιέργειες και προϊόντα. 2016;89:141-151.

[6] Liu YX, Wu YP, Ji BP. Αλλαγές συστατικών και αντιοξειδωτική δράση των πολυφαινολών βατόμουρου κατά την προσομοίωση της γαστρεντερικής πέψης. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology. 2016;16 (10):87-95.

[7] Ryan L, Prescott SL. Σταθερότητα της αντιοξειδωτικής ικανότητας είκοσι πέντε εμπορικά διαθέσιμων χυμών φρούτων που υποβάλλονται σε πέψη in-vitro. International Journal of Food Science & Technology. 2010;45 (6):1191-1197.

[8] 那吉 N, Zhang HF, Yang FY. Η in-vitro προσομοίωση της γαστρεντερικής πέψης επηρεάζει τα αντιοξειδωτικά συστατικά και τη δραστηριότητα του τρυγικού μαγειρεμένου ρυζιού από φαγόπυρο. Μοντέρνο φαγητό. 2022;28 (2):219-223.

[9] Bermúdez-Soto MJ, Tomás-Barberán FA, García-Conesa MT. Σταθερότητα πολυφαινολών στο chokeberry που υποβάλλεται σε in-vitro γαστρική και παγκρεατική πέψη. Χημεία Τροφίμων. 2007;102 (3):865-874.

[10] O Sánchez-Velázquez, Mulero M, Cuevas-Rodríguez EO. In-vitro η γαστρεντερική πέψη επηρεάζει τη σταθερότητα, τη βιοπροσβασιμότητα και την αντιοξειδωτική δράση των πολυφαινολών από άγρια ​​και εμπορικά βατόμουρα. Τρόφιμα και λειτουργία. 2021;12 (4):1-21.