Αποτελεσματικότητα της Συνδυαστικής Θεραπείας Εκχυλισμάτων Laminaria Japonica και Cistanche Tubulosa στην ανάπτυξη των μαλλιών

Επικοινωνία: emily.li@wecistanche.com

Kyungha Shin1# et al

Δεδομένου ότι η τριχόπτωση του τριχωτού της κεφαλής έχει αυξηθεί πρόσφατα ακόμη και σε νέους ανθρώπους, επηρεάζοντας σοβαρά την ποιότητα ζωής των ατόμων, ητριχοφυΐα-διεγερτικά αποτελέσματα του εκχυλίσματος Laminaria japonica (LJE) καιCistanche tubulosaαπόσπασμα (CTE) διερευνήθηκαν. Μετά την επιβεβαίωση της φάσης αναγέννησης των ωοθυλακίων υπό το ξύρισμα, τα αρσενικά ποντίκια C57BL/6 εφαρμόστηκαν δερματικά με 3 τοις εκατό Μινοξιδίλη ή χορηγήθηκαν από το στόμα με τους συνδυασμούς LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)για 21 ημέρες. Η μινοξιδίλη προήγαγε την αναγέννηση των μαλλιών και αύξησε τις δραστηριότητες της γλουταμυλοτρανπεπτιδάσης (-GTP) και της αλκαλικής φωσφατάσης (ALP). Επιπλέον, το Minoxidil ρυθμίζει προς τα πάνω τα επίπεδα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) και του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF). Συγχορήγηση LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)στα 54 mg/kg LJE συν 162 mg/kg, CTE (Cistanche tubulosaεκχύλισμα)άσκησε συνεργιστικά προαγωγικά αποτελέσματα στην αναγέννηση των μαλλιών, συγκρίσιμα με 3 τοις εκατό Μινοξιδίλη. Η LJE ενίσχυσε κατά προτίμηση τη δραστηριότητα ALP, ενώ η CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)αύξησαν τόσο τις δραστηριότητες -GTP και ALP όσο και τις εκφράσεις EGF και VEGF. Μοντέλο φλεγμονής θύλακα αέρα in vivo, αγγειακή εξίδρωση που προκαλείται από καραγενάνη και αυξημένες συγκεντρώσεις νιτρικού οξειδίου και προσταγλανδίνης Ε2 στα εκκρίματα καταστέλλονται συνεργικά με τη συγχορήγηση LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα). Επιπροσθέτως, η διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων παρεμποδίστηκε ουσιαστικά από τη συνδυαστική θεραπεία. Τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η συνδυαστική από του στόματος θεραπεία με LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)Οι ακατάλληλες δόσεις και αναλογίες αποτρέπουν την τριχόπτωση και βελτιώνουν την αλωπεκία, η οποία μπορεί εν μέρει να οφείλεται στις αντιφλεγμονώδεις δράσεις τους.

Λέξεις-κλειδιά Ανάπτυξη τρίχας, φλεγμονή, Laminaria japonica,Cistanche tubulosa, συνδυαστική θεραπεία

Cistanche tubulosaΤο εκχύλισμα έχει πολλές λειτουργίες

Πρόσφατα, η τριχόπτωση του τριχωτού της κεφαλής αυξάνεται ακόμη και σε νεαρά άτομα, επηρεάζοντας σοβαρά την ποιότητα ζωής ενός ατόμου. Αν και η φαλάκρα δεν είναι ένα από τα προβλήματα υγείας, μπορεί να προκαλέσει βαθύ ψυχολογικά-άβολο κοινωνικό στρες. Ως εκ τούτου, έχει μεγάλο ενδιαφέρον η ανάπτυξη νέων προληπτικών ή/και θεραπευτικών υλικών για την τριχόπτωση και την αναγέννηση. Παρά την αγορά δισεκατομμυρίων δολαρίων, υπάρχουν μερικά διαθέσιμα επί του παρόντος αποτελεσματικά προϊόντα [1].
Οι θύλακες της τρίχας αναδιαμορφώνονται κατά τη διάρκεια περιόδων κυκλικής ανάπτυξης (αναγέννηση), παλινδρόμησης (καταγονική), ηρεμίας (τελογόνο) και αποβολής (εξωογόνο) [2]. Κατά τη διάρκεια της καταγόνου, πολλά από τα ωοθυλακικά κύτταρα υφίστανται προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο (απόπτωση) [3], μειώνοντας το μέγεθος των ωοθυλακίων καθώς τα ωοθυλάκια εισέρχονται στο τελογόνο. Η ενεργοποίηση σπάνια κυκλοποιούμενων επιθηλιακών βλαστοκυττάρων που βρίσκονται στην περιοχή διόγκωσης των ωοθυλακίων καθιστά την αναγέννηση των ωοθυλακίων στην έναρξη της επόμενης φάσης αναγέννησης [4]. Οι απόγονοι των βλαστοκυττάρων σχηματίζουν μια νέα θυλακική μήτρα κατά την πρώιμη αναγέννηση και ο άξονας της τρίχας και η εσωτερική θήκη της ρίζας προέρχονται από αυτά τα σχετικά αδιαφοροποίητα κύτταρα θεμέλιας ουσίας [5]. Είναι ευρέως γνωστό ότι το μέγεθος του τριχοθυλακίου και η διάρκεια της αναγενούς φάσης διέπουν το μέγεθος (διάμετρος) και το μήκος του στελέχους της τρίχας, αντίστοιχα. Αυτή η κυκλική ανάπτυξη των μαλλιών ρυθμίζεται από διάφορους αυξητικούς παράγοντες.

Η μινοξιδίλη, η φιναστερίδη και το Propecia διατίθενται στο εμπόριο για να επιβραδύνουν την τριχόπτωση και να διευκολύνουν την αναγέννηση των μαλλιών. Η μινοξιδίλη είναι ένα αγγειοδιασταλτικό που άσκησε μια παρενέργεια για διευκόλυνσητριχοφυΐα[6] που μπορεί να οφείλεται στις δραστηριότητες παροχής θρεπτικών συστατικών και διάνοιξης διαύλων καλίου [7,8]. Η μινοξιδίλη είναι αποτελεσματική για την ανδρογενή αλωπεκία, μεταξύ άλλων θεραπειών φαλάκρας, αν και η αποτελεσματικότητά της εξαφανίζεται μέσα σε μήνες μετά τη διακοπή της θεραπείας. Συγκριτικά, η φιναστερίδη και το Propecia, θεραπευτικά φάρμακα της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη και του καρκίνου του προστάτη, έχουν καταγραφεί σε πολλές χώρες για ανδρογενετική αλωπεκία (ανδρική φαλάκρα). Το Finasteride και το Propecia είναι συνθετικά αντιανδρογόνα, που αναστέλλουν την αναγωγάση τύπου II 5-, ένα ένζυμο που μετατρέπει την τεστοστερόνη σε διυδροτεστοστερόνη (DHT) στα κύτταρα των θηλών στο κάτω μέρος των τριχοθυλακίων [9].

Τα Laminaria japonica, Undaria pinnatifida και Cladosiphon okamuranus, που διανέμονται ευρέως σε πολλές χώρες, έχουν χρησιμοποιηθεί ως θεραπευτικά στην Ανατολική ιατρική για μεγάλο χρονικό διάστημα. Σε προηγούμενες μελέτες, το fucoidan, ένα σύμπλοκο θειικού πολυσακχαρίτη, είχε εξαχθεί και ταυτοποιηθεί από τα φύκια και επιβεβαιώθηκε ότι διαθέτει αντιοξειδωτική, αντιπηκτική, αντικαρκινική και αντιφλεγμονώδη δράση [10,11]. Στη συνέχεια, έχουν αποδειχθεί ευεργετικές επιδράσεις του fucoidan σε φλεγμονώδεις ασθένειες, ισχαιμία, δυσλειτουργία του ανοσοποιητικού και όγκους [12,13]. Αφ 'ετέρου,Cistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE) έχει επίσης χρησιμοποιηθεί ευρέως για την παραδοσιακή φαρμακευτική αγωγή στην Κίνα. CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)βελτιώνει τη ροή του αίματος μειώνοντας τα επίπεδα χοληστερόλης στο αίμα [14]. Πρόσφατα, αναφέρθηκε ότι η CTE μείωσε την παραγωγή του παράγοντα νέκρωσης όγκου- (TNF-) και της ιντερλευκίνης-4 (IL-4) που είναι κύριοι παράγοντες για την παραγωγή μονοξειδίου του αζώτου (NO) στη φλεγμονώδη οδό [15]. Δείξαμε επίσης ότι το fucoidan από εκχύλισμα Laminaria japonica (LJE) και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)συνεργιστικά εξασθενημένη φλεγμονή in vitro και in vivo [16]. Συγκεκριμένα, έχει αποδειχθεί ότι υπήρχε στενή συσχέτιση της φλεγμονής του δέρματος (ιδιαίτερα του δακρυϊκού αδένα) με την αλωπεκία [17]. Έτσι, αναδεικνύονται αντιφλεγμονώδεις πτυχές της θεραπείας της αλωπεκίας [18].
Με βάση τις δραστηριότητες βελτίωσης της ροής του αίματος και της φλεγμονής, διερευνούμε τη συνδυαστική αποτελεσματικότητα των LJE και CTE（Cistanche tubulosa εκχύλισμα)επίτριχοφυΐακαι των υποκείμενων μηχανισμών, σε σύγκριση με 3 τοις εκατό Μινοξιδίλη (Hyundai Pharmaceutical, Σεούλ, Κορέα), ένα πολύ γνωστότριχοφυΐαενισχυτής.

Cistanche tubulosaτο εκχύλισμα είναι καλό γιαΑνάπτυξη τρίχας

Υλικά και μέθοδοι

Υλικά

LJE και CTE (Cistanche tubulosaεκχύλισμα)ελήφθησαν από τη Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Κορέα). Η ξηρή σκόνη Laminaria japonica εκχυλίστηκε σε καθαρό νερό στους 60oC για 24 ώρες, διηθήθηκε μέσω μεμβράνης 0,45 μm, απολυμάνθηκε και ξηράνθηκε με ψεκασμό.Cistanche tubulosaεκχυλίστηκε σε 80 τοις εκατό αιθανόλη, απολυμάνθηκε, συμπυκνώθηκε και ξηράνθηκε. LJE και CTE (Cistanche tubulosaεκχύλισμα)διατηρήθηκαν στους 4oC, αναμίχθηκαν (1:3) και διαλύθηκαν σε καθαρό νερό πριν από τη χρήση και χορηγήθηκαν από το στόμα σε όγκο 5 mL/kg.
Των ζώων
Αρσενικά ποντίκια C57BL/6 γιατριχοφυΐαη μελέτη και τα αρσενικά ποντίκια ICR για μελέτη φλεγμονής αγοράστηκαν από το Daehan Biolink (Eumseong, Κορέα) και στεγάστηκαν σε ένα δωμάτιο με σταθερές περιβαλλοντικές συνθήκες (23±2ºC, 45-65 τοις εκατό σχετική υγρασία, 12-ώρα φωτός -σκοτεινός κύκλος, 150-300 φωτεινότητα lux). Τροφοδοσία σφαιριδίων και καθαρισμένο νερό ήταν διαθέσιμα κατά βούληση. Όλα τα πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων (IACUC) του Εθνικού Πανεπιστημίου Chungbuk (CBNU), Κορέα, και διεξήχθησαν σύμφωνα με τις Πρότυπες Διαδικασίες Λειτουργίας (SOP) του Εργαστηριακού Κέντρου Έρευνας Ζώων, CBNU.

Θεραπεία για την ανάπτυξη των μαλλιών

Μετά την επιβεβαίωση της φάσης αναγέννησης με την παρατήρηση ομοιογενώς ροζ χρώματος δέρματος στο πίσω δέρμα ποντικών C57BL/6 (ηλικίας 6 εβδομάδων, n=8/ομάδα) μετά το κούρεμα στην τελογενή φάση, τα μαλλιά ξυρίστηκαν [1,19 ,20]. Από την επόμενη μέρα επιλέχθηκαν ποντίκια χωρίς ορατές γρατσουνιές και από το στόμα
έλαβαν θεραπεία με LJE (18 ή 54 mg/kg), CTE (54 ή 162 mg/kg) ή το μείγμα τους (18 συν 54 ή 54 συν 162 mg/kg) μία φορά την ημέρα για 21 ημέρες. Οι χαμηλές δόσεις LJE (18 mg/kg) και CTE (54 mg/kg) προήλθαν από εκτιμώμενες ανθρώπινες δόσεις των 100 mg/σώμα (70 kg) και 300 mg/σώμα μετά τη μετάφραση της επιφάνειας του σωματικού βάρους (Km{{14} } για τον άνθρωπο/Km=3 για το ποντίκι), αντίστοιχα. Υψηλές δόσεις LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)ορίστηκαν σε 3 φορές, μόνα τους ή σε συνδυασμό, για να εκτιμηθούν τα μέγιστα συνεργιστικά αποτελέσματα [16]. Η μινοξιδίλη (3 τοις εκατό, 0.2 mL) εφαρμόστηκε τοπικά μία φορά την ημέρα στο ξυρισμένο δέρμα στο ίδιο πρόγραμμα με τη θεραπεία LJE/CTE.

Σκληρή παρατήρηση της τριχοφυΐας

Τις ημέρες σε μεσοδιαστήματα 3-ημέρας μετά το ξύρισμα και κατά τη διάρκεια της θεραπείας, τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν ελαφρά με διαιθυλαιθέρα και τραβήχτηκαν φωτογραφίες στο πίσω μέρος τους. Η αναλογία της αναγέννησης των μαλλιών (περιοχή αναγέννησης/ξυρισμένη περιοχή) στις φωτογραφίες αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ένα ηλεκτρονικό σύστημα ανάλυσης εικόνας (Imageinside, Daejeon, Κορέα).

Μικροσκοπική εξέταση τριχοθυλακίων

Τις ημέρες 14 και 21, τα ποντίκια θυσιάστηκαν με βαθιά αναισθησία με διαιθυλαιθέρα και το ραχιαίο δέρμα τους αφαιρέθηκε [1]. Το ραχιαίο δέρμα κόπηκε σε δύο μέρη. Τομές ιστού που έχουν στερεωθεί με φορμαλίνη, ενσωματωμένες σε παραφίνη (διαμέτρου 5 μm) ενός μέρους χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη-ηωσίνη για να εξεταστεί ο αριθμός των τριχοθυλακίων και τα ιστολογικά ευρήματα. Το άλλο μέρος του ιστού καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο για ενζυμική δοκιμασία και ανοσοδοκιμασία.

Δοκιμασία ενζυμικής δραστηριότητας

Ο ιστός του δέρματος ομογενοποιήθηκε σε 4 όγκους ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών (ρΗ 7,4). Το ομογενοποίημα φυγοκεντρήθηκε στις 3,000 σ.α.λ. για 20 λεπτά και το υπερκείμενο χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της δράσης της -γλουταμυλοτρανπεπτιδάσης (-GTP) και της αλκαλικής φωσφατάσης (ALP) χρησιμοποιώντας φωσφορικό ρ-νιτροφαινυλεστέρα (PNPP)-DEAV ως υπόστρωμα [1,21].

Cistanche tubulosa

Ποσοτικοποίηση αυξητικών παραγόντων

Ο επιδερμικός αυξητικός παράγοντας (EGF) και ο αγγειακός ενδοθηλιακός αυξητικός παράγοντας (VEGF) ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ανοσοπροσροφητικού προσδιορισμού (ELISA) συνδεδεμένου με ένζυμο (R&D Systems, Minneapolis, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή [1,22].

Θεραπεία για τη φλεγμονή

Ποντίκια ICR (ηλικίας 7 εβδομάδων, n=8/ομάδα) έλαβαν από του στόματος θεραπεία με LJE (18 ή 54 mg/kg), CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)(54 ή 162 mg/kg), ή το μείγμα τους (18 συν 54 ή 54 συν 162 mg/kg) μία φορά την ημέρα για 7 ημέρες [16]. Την 1η ημέρα του LJE και του CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)θεραπείας, τα ποντίκια εγχύθηκαν υποδορίως με 10 mL αποστειρωμένου αέρα στην πίσω πλευρά για να σχηματίσουν μια θήκη [16,23,24]. Μετά από 2 και 5 ημέρες, ο θύλακας εγχύθηκε ξανά με 5 mL αέρα. Μία ώρα μετά τον τελικό LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)αγωγή, 1 mL καραγενάνης (1 τοις εκατό σε αλατούχο διάλυμα, Sigma-Aldrich, St. Louis, ΗΠΑ) ή το όχημα της (αλατόνερο) εγχύθηκε στο σάκο.

Ανάλυση των εξιδρωμάτων

Ο ασκός αέρα πλύθηκε με 1 mL ψυχρού φυσιολογικού ορού 6 ώρες μετά την ένεση καρραγενάνης και καταγράφηκε ο καθαρός όγκος του υγρού πλύσης [16]. Ο συνολικός αριθμός των φλεγμονωδών κυττάρων συμπεριλαμβανομένων των ουδετερόφιλων, μονοκυττάρων και λεμφοκυττάρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μετρητή κολτερ.

Οι συγκεντρώσεις του ΝΟ και της προσταγλανδίνης Ε2 (PGE2) προσδιορίστηκαν με αντιδραστήριο Griess (Sigma-Aldrich) και ενζυμική ανοσοδοκιμασία (EIA) χρησιμοποιώντας κιτ Correlate-EIA (Assay Designs, Ann Arbor, ΗΠΑ), αντίστοιχα [16].

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος±τυπικό σφάλμα. Η στατιστική σπουδαιότητα προσδιορίστηκε με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης, ακολουθούμενη από τη δοκιμασία πολλαπλής σύγκρισης μετα-hoc Tukey. P-τιμές<0.05 were="" considered="" to="" be="" statistically="">

Αποτελέσματα

Η εφαρμογή του Minoxidil (3 τοις εκατό), ενός υλικού αναφοράς, διευκόλυνε σημαντικά τηντριχοφυΐαποντικών C57BL/6, που εμφανίζουν σχεδόν πλήρη κάλυψη (92,4 τοις εκατό ) της ξυρισμένης περιοχής (Εικόνες 1, 2Β) σε σύγκριση με το 29,2 τοις εκατό σε φυσιολογική ανάπτυξη (Εικόνες 1, 2Α) την ημέρα 21. Αν και λιγότερο αποτελεσματική από την εφαρμογή Minoxidil , η από του στόματος θεραπεία του LJE διευκόλυνε επίσης τηντριχοφυΐα, οδηγώντας σε κάλυψη 33,5 και 69,1 τοις εκατό στα 18 και 54 mg/kg, αντίστοιχα (Εικόνες 1, 2Γ, 2Δ). CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)ήταν επίσης αποτελεσματική στην ενίσχυσητριχοφυΐα, φτάνοντας σε κάλυψη 73,6 και 80,4 τοις εκατό στα 54 και 162 mg/kg, αντίστοιχα (Εικόνες 1, 2Ε, 2ΣΤ). Συγκεκριμένα, συνδυαστική θεραπεία με υψηλές δόσεις LJE (54 mg/kg) και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)(162 mg/kg) ενίσχυσε αξιοσημείωτα τηντριχοφυΐααπό την ημέρα 12, συγκρίσιμη με την επίδραση του Minoxidil (Εικόνες 1, 2Η), αν και χαμηλές δόσεις LJE (18 mg/kg) και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)(54 mg/kg) ασκούν συνεργική δράση μόνο στην πρώιμη φάση (Εικόνες 1, 2G).

Εικόνα 1. Χρονική πορεία αναγέννησης τριχών ποντικών που έλαβαν θεραπεία με Minoxidil ή εκχύλισμα Laminaria japonica (LJE) και/ήCistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE). ,

○ κανονικό; ●, Μινοξιδίλη (3 τοις εκατό) εφαρμογή. △, 18 mg/kg LJE; ▼, 54 mg/kg LJE; □, 54 mg/kg CTE; ■, 162 mg/kg CTE; ◇, 18 mg/kg LJE συν 54 mg/kg CTE; ◆, 54 mg/kg LJE συν 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα).

Σχήμα 2. Αντιπροσωπευτικά ακαθάριστα ευρήματα αναγέννησης τριχών σε ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με Minoxidil ή εκχύλισμα Laminaria japonica (LJE) και/ήCistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE) την ημέρα 21.

Α, κανονικό? Β, Μινοξιδίλη (3 τοις εκατό) εφαρμογή; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; Ε, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα); F, 162 mg/kg CTE; G, 18 mg/kg LJE συν 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE συν 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα).

Σε σύγκριση με τα κανονικά τριχοθυλάκια (Εικόνα 3Α), η εφαρμογή Minoxidil βελτίωσε την ακεραιότητα των τριχοθυλακίων, δείχνοντας μεγαλύτερα θυλάκια και παχύτερους άξονες τρίχας (Εικόνα 3Β). Τέτοια αποτελέσματα βρέθηκαν επίσης στα δέρματα ποντικών που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με LJE και/ή CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)(Εικόνες 3Γ-3Η). Ειδικά, η αποτελεσματικότητα ενδυνάμωσης των τριχοθυλακίων της συνδυαστικής θεραπείας LJE και CTE (Cistanche tubulosaεκχύλισμα)ήταν συγκρίσιμο με αυτό της μινοξιδίλης.

Εικόνα 3. Αντιπροσωπευτικά μικροσκοπικά ευρήματα αναγέννησης τριχών ποντικών που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με εκχύλισμα Minoxidil ή Laminaria japonica (LJE) και/ήCistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE) την ημέρα 21.

Α, κανονικό? Β, Μινοξιδίλη (3 τοις εκατό) εφαρμογή; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; Ε, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα); F, 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα); G, 18 mg/kg LJE συν 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE συν 162 mg/kg CTE

Η εφαρμογή μινοξιδίλης αύξησε τη δραστηριότητα του -GTP που επάγει τους θύλακες των τριχών στη φάση αναγέννησης κατά 90-120 τοις εκατό τις ημέρες 14 και 21, σε σύγκριση με το επίπεδο του κανονικού δέρματος (Εικόνα 4). Το LJE (54 mg/kg) ενίσχυσε επίσης την ενζυμική δραστηριότητα, αν και υπήρχαν υψηλές παραλλαγές. Το CTE άσκησε παρόμοια αποτελέσματα, ενισχύοντας σημαντικά τη δραστηριότητα -GTP την ημέρα 14. Είναι ενδιαφέρον ότι η συνδυαστική θεραπεία του LJE και του CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)αύξησε περαιτέρω τη δραστηριότητα του ενζύμου υψηλότερη από εκείνη όταν τα εκχυλίσματα χρησιμοποιήθηκαν μόνα τους.
Η δραστηριότητα της ALP, ένας δείκτης οστικής ανάπτυξης και αγγειογένεσης, αυξήθηκε σημαντικά στο δέρμα τις ημέρες 14 και 21 μετά την τοπική εφαρμογή του Minoxidil (Εικόνα 5). LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)αύξησε επίσης τη δραστηριότητα της ALP μετά από χορήγηση από το στόμα με δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Συγκεκριμένα, η ενζυμική δραστηριότητα ενισχύθηκε συνεργιστικά με συνδυαστική θεραπεία με LJE και CTE.

Εικόνα 4. Επιδράσεις του Minoxidil (MXD, 3%) ή του εκχυλίσματος Laminaria japonica (LJE) και/ήCistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE) (σε mg/kg) σε δραστικότητα -γλουταμυλοτρανπεπτιδάσης (-GTP) τις ημέρες 14 (Α) και 21 (Β) της θεραπείας.

*Σημαντικά διαφορετικό από τον κανονικό (Ούτε) έλεγχο (Π<>

Εικόνα 5. Επιδράσεις της Μινοξιδίλης (MXD, 3 τοις εκατό) ή του εκχυλίσματος Laminaria japonica (LJE) και/ήCistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE) (σε mg/kg) στη δραστηριότητα της αλκαλικής φωσφατάσης (ALP) τις ημέρες 14 (Α) και 21 (Β) της θεραπείας.

*Σημαντικά διαφορετικό από τον κανονικό (Ούτε) έλεγχο (Π<>

Στην ανάλυση του EGF, ένα γνωστότριχοφυΐαπαράγοντας, η εφαρμογή μινοξιδίλης αύξησε το επίπεδο του EGF 3,5 φορές του φυσιολογικού ελέγχου και τις δύο ημέρες 14 και 21 (Εικόνα 6). Το LJE (18 mg/kg) αύξησε το EGF μόνο την 21η ημέρα, ενώ το CTE (162 mg/kg) ρύθμισε σημαντικά την παραγωγή του τις ημέρες 14 και 21. Είναι ενδιαφέρον να σημειωθεί ότι η συνδυαστική θεραπεία LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)ακόμη και σε χαμηλές δόσεις εμφάνισαν αξιοσημείωτα συνεργιστικά αποτελέσματα.

Η θεραπεία με μινοξιδίλη αύξησε επίσης το επίπεδο του VEGF κατά 50-80 τοις εκατό πάνω από την τιμή ελέγχου (Εικόνα 7). Αν και το LJE ήταν αναποτελεσματικό, το CTE (Cistanche tubulosaεκχύλισμα)άσκησε αξιοσημείωτα ενισχυτικά αποτελέσματα. Επιπλέον, συνδυαστική θεραπεία LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)εμφάνισε μια συνεργιστική δραστηριότητα στην πρώιμη φάση την ημέρα 14.

Εικόνα 6. Επιδράσεις του Minoxidil (MXD, 3%) ή του εκχυλίσματος Laminaria japonica (LJE) και/ήCistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE) (σε mg/kg) σε περιεκτικότητα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) τις ημέρες 14 (Α) και 21 (Β) της θεραπείας.

*Σημαντικά διαφορετικό από τον κανονικό (Ούτε) έλεγχο (Π<>

Εικόνα 7. Επιδράσεις του Minoxidil (MXD, 3%) ή του εκχυλίσματος Laminaria japonica (LJE) και/ήCistanche tubulosaεκχύλισμα (CTE) (σε mg/kg) σε περιεχόμενο αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) τις ημέρες 14 (Α) και 21 (Β) της θεραπείας.

*Σημαντικά διαφορετικό από τον κανονικό (Ούτε) έλεγχο (Π<>

Η έγχυση καραγενάνης στον θύλακα αέρα ποντικού ICR αύξησε τον όγκο του εκκρινόμενου εντός του θύλακα 6 φορές το επίπεδο ελέγχου (Πίνακας 1). Αυτή η αυξημένη εξίδρωση μετριάστηκε σημαντικά με θεραπεία με LJE (18 και 54 mg/kg) ή CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)(54 και 162 mg/kg). Συγκεκριμένα, η συνδυαστική θεραπεία με LJE και CTE μείωσε περαιτέρω τον όγκο του εξιδρώματος, σε σύγκριση με τις επιμέρους επιδράσεις. Ο αριθμός των φλεγμονωδών κυττάρων αυξήθηκε δραστικά με την ένεση καρραγενάνης: 34,6, 4,2 και 24,9 φορές τα επίπεδα ελέγχου για τα ουδετερόφιλα, τα μονοκύτταρα και τα λεμφοκύτταρα, αντίστοιχα (Πίνακας 1). Ωστόσο, η LJE και η CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)μείωσε σημαντικά τα φλεγμονώδη κύτταρα με δοσοεξαρτώμενους τρόπους, στους οποίους το LJE ήταν κάπως ανώτερο από το CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα). Αναμενόμενα, τα συνεργιστικά αποτελέσματα στη διήθηση των φλεγμονωδών κυττάρων επιτεύχθηκαν με τη συγχορήγηση LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα).
Παράλληλα με τη διήθηση των φλεγμονωδών κυττάρων στον θύλακα, τα περιεχόμενα ΝΟ και PGE2 στο σάκο επίσης αυξήθηκαν δραστικά μετά την ένεση καρραγενάνης (Πίνακας 1). Σε σύγκριση με την ήπια επίδραση του LJE, CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)μείωσε σημαντικά τη συγκέντρωση ΝΟ. Συνδυαστική θεραπεία LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)μείωσε περαιτέρω το επίπεδο ΝΟ με δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Με παρόμοιο τρόπο, το αυξημένο επίπεδο PGE2 καταστέλλεται συνεργιστικά από τη συνδυαστική θεραπεία LJE και CTE (Πίνακας 1).

Συζήτηση

Το ανθρώπινο κεφάλι έχει κατά μέσο όρο 100,000 τριχοθυλάκια. Κατά τη διάρκεια μιας ζωής, κάθε ωοθυλάκιο μεγαλώνει και πέφτει περίπου 20 φορές, παρουσιάζοντας καθημερινή απώλεια μαλλιών 100 κλώνων [25]. Η τριχόπτωση, συμπεριλαμβανομένης της αλωπεκίας και της φαλάκρας, είναι μια οδυνηρή κατάσταση για άνδρες και γυναίκες, ειδικά στη σύγχρονη κοινωνία. Ως εκ τούτου, είναι πολύ σημαντικό να αναπτυχθούν νέες θεραπείες που αποτρέπουν την τριχόπτωση και ενισχύουν την αναγέννηση των μαλλιών. Από αυτή την άποψη, η εναλλακτική ιατρική έχει προσελκύσει το ενδιαφέρον των ερευνητών.

Μορφολογικές, ιστοχημικές και βιοχημικές πτυχές της ανδρικής φαλάκρας που σχετίζονται με τη γήρανση έχουν αποκαλυφθεί από μια σειρά μελετών σε μακάκους με κούτσουρα. Στην ανδρική φαλάκρα, η τελογενής φάση παρατάθηκε, ενώ η φάση αναγέννησης συντομεύτηκε. Έτσι, θεωρείται ότι για τη βελτίωση της τριχόπτωσης, η διατήρηση της επιμήκυνσης των τριχοθυλακίων που συμβαίνει από την πρώιμη αναγέννηση έως τη μέση αναγέννηση είναι πολύ σημαντική [26]. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε τοτριχοφυΐα-διευκολυντική δράση μιας συνδυαστικής θεραπείας LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα). Το πιο σημαντικό, η συνδυαστική συνταγογράφηση LJE (54 mg/kg) και CTE (162 mg/kg) επέδειξε εξαιρετική δράση αναγέννησης μαλλιών, παρά την από του στόματος χορήγηση των εκχυλισμάτων. Συγκεκριμένα, το αποτέλεσμα της συνδυαστικής θεραπείας ήταν συγκρίσιμο με αυτό της δερματικής εφαρμογής υψηλής συγκέντρωσης (3 τοις εκατό) μιας καθαρής ένωσης Μινοξιδίλη, αν και οι συγκεντρώσεις των δραστικών συστατικών των LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)στο δέρμα μετά την από του στόματος χορήγηση δεν επιβεβαιώθηκε.
Στο κυκλικό δέρμα ποντικιού, η δραστηριότητα -GTP είναι έντονη κατά τη διάρκεια της αναγέννησης, αλλά μειώνεται σημαντικά κατά τη διάρκεια του τελογόνου [27]. Στο δέρμα, το ένζυμο υπάρχει αποκλειστικά στο εξωτερικό και το εσωτερικό έλυτρο της ρίζας των τριχοθυλακίων κάτω από το επίπεδο των σμηγματογόνων αδένων στους οποίους απουσιάζει το -GTP [27]. Συγκριτικά, η ALP εκφράζεται ευδιάκριτα στις πιλοβακτικές μονάδες και η δραστηριότητα αυξάνεται στην περιοχή της αναγέννησης της τρίχας. Η ALP ως αγγειογενετικός παράγοντας βελτιώνει τη διατροφική παροχή των δερματικών θηλών και ως εκ τούτου προκαλεί πάχος κατά την αναγέννηση [28]. Ωστόσο, επιβεβαιώθηκε ότι η δραστηριότητα της ALP μειώθηκε στο αλωπεκικό δέρμα [21]. Στη μηχανιστική μελέτη, η ένωση αναφοράς Minoxidil ενίσχυσε σημαντικά τη δράση των -GTP και ALP, υπονοώντας ότι η Minoxidil διευκολύνειτριχοφυΐαόχι μόνο με την πρόκληση τριχοθυλακίων
στη φάση αναγέννησης αλλά και με τη βελτίωση της ροής του αίματος μέσω της αγγειογένεσης. Δεδομένου ότι το LJE αύξησε τη δραστηριότητα ALP, προτείνεται το LJE να έχει ευεργετική επίδραση στοτριχοφυΐαμέσω της αγγειογενετικής του ικανότητας, όπως συνάγεται από προηγούμενη μελέτη ότι το fucoidan, ένα δραστικό συστατικό του LJE, έχει δράση βελτίωσης της ροής του αίματος [29]. Συγκριτικά, CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)ενίσχυσε τόσο τις δραστηριότητες -GTP όσο και ALP, υποδηλώνοντας τις επιδράσεις της στην επαγωγή της φάσης αναγέννησης καθώς και τη βελτίωση της ροής του αίματος. Σύμφωνα με τις συνεργιστικές δράσεις στα ένζυμα -GTP και ALP, πιστεύεται ότι μπορεί να επιτευχθεί υψηλότερη αναγέννηση της τρίχας με τη συγχορήγηση LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα).
Είναι ευρέως γνωστό ότι διάφορες κυτοκίνες και αυξητικοί παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των EGF και VEGF, εμπλέκονται στη ρύθμιση της μορφογένεσης και της ανάπτυξης των μαλλιών [30,31]. Είναι ενδιαφέρον να σημειωθεί ότι οι παράγοντες που προέρχονται από κύτταρα δερματικών θηλωμάτων έχουν χημειοτακτικές δράσεις στα γύρω κύτταρα, οι οποίες οδηγούν, με τη σειρά τους, στην προαγωγή τηςτριχοφυΐα[32]. Το EGF εκφράζεται σε συνδυασμό με την ανάπτυξη των τριχοθυλακίων [33,34]. Αν και η έκφραση τόσο του EGF όσο και του υποδοχέα του (EGFR) στο εξωτερικό περίβλημα της ρίζας ρυθμίζεται προς τα κάτω με την ολοκλήρωση της ωοθυλακικής ανάπτυξης, η έκφρασή τους ανακάμπτει όταν τα ωοθυλακικά κύτταρα εισέρχονται στη φάση αναγέννησης. Ο VEGF παίζει σημαντικό ρόλο που εμπλέκεται στην αγγειογένεση κατά τη διάρκεια της φλεγμονώδους αντίδρασης και της ανάπτυξης του όγκου [35]. Ειδικά, το αγγειακό δίκτυο συνδέεται στενά με τον κύκλο ανάπτυξης της τρίχας [36-38]. Ως εκ τούτου, επιβεβαιώθηκε ότι η γονιδιακή έκφραση του VEGF ποικίλλει ανάλογα με τον κύκλο της ανθρώπινης τρίχας [39].

Από τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης, εξηγείται ότι ητριχοφυΐα-Η προαγωγική δράση της Μινοξιδίλης μπορεί να οφείλεται στο πιθανό ρυθμιστικό της EGF και VEGF που διευκολύνει την ανάπτυξη των ωοθυλακίων καθώς και την αγγειογένεση. Αν και το LJE δεν επηρέασε την έκφραση του VEGF, αύξησε την περιεκτικότητα σε EGF στο δέρμα μετά από χορήγηση από το στόμα. Συγκριτικά, CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)ήταν αποτελεσματική στην έκφραση τόσο του EGF όσο και του VEGF. Συγκεκριμένα, LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)άσκησε αθροιστική επίδραση στην έκφραση των αυξητικών παραγόντων.

Εκτός από την επιμήκυνση των τριχών, η ακεραιότητα των τριχοθυλακίων βελτιώθηκε σημαντικά μετά από θεραπεία με Minoxidil, LJE και/ή CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)στη μικροσκοπική εξέταση. Στην πρώιμη φάση της τριχόπτωσης και της φαλάκρας σε ανθρώπους ασθενείς και ζωικά μοντέλα, η ακεραιότητα των ωοθυλακίων μειώθηκε και το πάχος του στελέχους της τρίχας μειώθηκε, ενώ η ακεραιότητα του ωοθυλακίου και το πάχος του άξονα ανακτήθηκαν στις αναγεννούμενες τρίχες. Είναι ενδιαφέρον ότι τέτοιες θετικές επιδράσεις στην ακεραιότητα και την εκ νέου ανάπτυξη των συστατικών της τρίχας επιτεύχθηκαν με την από του στόματος χορήγηση LJE συν CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα), στο οποίο το αποτέλεσμα ήταν συγκρίσιμο με αυτό της τοπικής εφαρμογής υψηλής συγκέντρωσης Μινοξιδίλης. Ως εκ τούτου, αναμένεται ότι ο συνδυασμός για από του στόματος λήψη LJE συν CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)θα μπορούσε να είναι μια συνταγή σχετικά βολική σε σύγκριση με τη χρήση του Minoxidil για το δέρμα.
Στο μοντέλο αλωπεκίας ποντικού, η διείσδυση ευαίσθητων σε στεροειδή λεμφοκυττάρων γύρω από τους θύλακες των τριχών είναι συχνή, παρουσιάζοντας ένα πρότυπο παρόμοιο με την ανοσοθεραπεία της ανθρώπινης αλωπεκίας με φλεγμονή του δακρυϊκού αδένα [17,40]. Στην παρούσα μελέτη, η προκαλούμενη από την καραγενάνη φλεγμονή του δέρματος μετριάστηκε σημαντικά από το LJE και το CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)θεραπευτική αγωγή; δηλ. η αγγειακή εξίδρωση και η φλεγμονώδης κυτταρική διήθηση κατεστάλησαν συνεργιστικά. Στην ποσοτική ανάλυση, οι κύριοι φλεγμονώδεις μεσολαβητές NO και PGE 2 ελέγχονταν ουσιαστικά μετά από από του στόματος συγχορήγηση LJE και CTE (Cistanche tubulosaεκχύλισμα). Είναι ενδιαφέρον ότι, δεδομένου ότι το LJE εμφάνισε αντιφλεγμονώδη δράση υψηλότερη από αυτή του ημι-καθαρισμένου φουκοϊδάνης [16], θεωρείται ότι μπορεί να υπάρχει ένα επιπλέον δραστικό συστατικό, εκτός από το fucoidan, στο LJE.

Συνολικά, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η συνδυαστική από του στόματος θεραπεία με LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)βελτιώνει την τριχόπτωση ρυθμίζοντας προς τα πάνω τους αυξητικούς παράγοντες και τις σχετικές ενζυμικές δραστηριότητες και εν μέρει μέσω του αντιφλεγμονώδους δυναμικού. Ως εκ τούτου, προτείνεται ένας συνδυασμός που περιλαμβάνει LJE και CTE（Cistanche tubulosaεκχύλισμα)Οι ακατάλληλες κλινικές δόσεις και αναλογίες θα μπορούσαν να είναι υποψήφια συνταγή για ασθενείς με τριχόπτωση.

Cistanche tubulosaεκχυλίσματα προϊόντων

Ευχαριστίες

Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε οικονομικά από το Leading Industry Development for Economic Region του Chungcheong Leading Industry Office, το Korea Institute for Advancement of Technology (KIAT) και το Υπουργείο Οικονομίας της Γνώσης (MKE), και εν μέρει από το Πρόγραμμα Ανάπτυξης Τεχνολογίας Τροφίμων υψηλής προστιθέμενης αξίας , Υπουργείο Γεωργίας, Τροφίμων και Αγροτικών Υποθέσεων (MAFRA, αριθμός επιχορήγησης 113034-3).

Σύγκρουση συμφερόντων

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει οικονομική σύγκρουση συμφερόντων για τη δημοσίευση αυτών των αποτελεσμάτων.

Από: «Αποτελεσματικότητα της συνδυαστικής θεραπείας των εκχυλισμάτων Laminaria japonica και Cistanche tubulosa στην ανάπτυξη των μαλλιών» απόKyungha Shin1# et al

--- Lab Anim Res 2015: 31(1), 24-32http://dx.doi.org/10.5625/lar.2015.31.1.24

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1. Kim JS, Kang BS, Park HJ, Kim DY, Hwang SY, Nam SY, Yun YW, Lee BJ. Προωθώντας την επίδραση των μιγμάτων εκχυλισμάτων βοτάνων στην αναγέννηση των μαλλιών σε ποντίκια C3H/HeJ. J Biomed Res 2009; 10(3): 99-108.
2. Paus R, Cotsarelis G. The biology of hair follicles. N Engl J Med 1999; 341(7); 491-497.
3. Κοτσαρέλης Γ. Ο θύλακας της τρίχας: πεθαίνει για προσοχή. Am J Pathol 1997; 151(6): 1505-1509.
4. Cotsarelis G, Sun TT, Lavker RM. Κύτταρα που διατηρούν ετικέτα βρίσκονται στην περιοχή διόγκωσης της πιλοβακτικής μονάδας: επιπτώσεις για τα θυλακιώδη βλαστοκύτταρα, τον κύκλο της τρίχας και την καρκινογένεση του δέρματος. Cell 1990; 61(7): 1329-1337.
5. Oshima H, Rochat A, Kedzia C, Kobayashi K, Barrandon Y. Μορφογένεση και ανανέωση τριχοθυλακίων από ενήλικα πολυδύναμα βλαστοκύτταρα. Cell 2001; 104(2): 233-245.
6. Burton JL, Marshall A. Υπερτρίχωση λόγω μινοξιδίλης. Br J Dermatol 1979; 101(5): 593-595.
7. Meisheri KD, Cipkus LA, Taylor CJ. Μηχανισμός δράσης αγγειοδιαστολής που προκαλείται από θειική μινοξιδίλη: ρόλος για αυξημένη διαπερατότητα K συν. J Pharmacol Εχρ Ther 1988; 245(3): 751-760.
8. Buhl AE, Waldon DJ, Baker CA, Johnson GA. Η θειική μινοξιδίλη είναι ο ενεργός μεταβολίτης που διεγείρει τους θύλακες των τριχών. J Invest Dermatol 1990; 95(5): 553-557.
9. Kaufman KD, Dawber RP. Η φιναστερίδη, ένας αναστολέας της άλφα-αναγωγάσης τύπου 2 5, στη θεραπεία ανδρών με ανδρογενετική αλωπεκία. Expert Opin Investig Drugs 1999; 8(4): 403-415.
10. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Αντιιικές ιδιότητες κλασμάτων φουκοϊδάνης από Leathesia difformis. Phytomedicine 1999; 6(5): 335-340.
11. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Πιθανή αντιοξειδωτική και αντιπηκτική ικανότητα κλασμάτων fucoidan χαμηλού μοριακού βάρους που εξάγονται από Laminaria japonica. Int J Biol Macromol 2010; 46(1): 6-12.
12. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Το Fucoidan βελτιώνει τη νεφρική ροή αίματος στο πρώιμο στάδιο της βλάβης νεφρικής ισχαιμίας/επαναιμάτωσης στον αρουραίο. J Physiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
13. Li N, Zhang Q, Song J. Τοξικολογική αξιολόγηση του fucoidan που εξάγεται από Laminaria japonica σε αρουραίους Wistar. Food Chem Toxicol 2005; 43(3): 421-426.
14. Shimoda Η, Tanaka J, Takahara Υ, Takemoto Κ, Shan SJ, Su MH. Οι υποχοληστερολαιμικές επιδράσεις του εκχυλίσματος Cistanche tubulosa, ενός κινεζικού παραδοσιακού ακατέργαστου φαρμάκου, σε ποντίκια. Am J Chin Med 2009; 37(6): 1125-1138.
15. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda Η. Ανασταλτική επίδραση ακτεοσιδίου που απομονώθηκε από Cistanche tubulosa στην απελευθέρωση χημικού μεσολαβητή και στην παραγωγή φλεγμονωδών κυτοκίνης από κύτταρα RBL-2H3 και KU812. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
16. Kyung J, Kim D, Park D, Yang YH, Choi EK, Lee SP, Kim TS, Lee YB, Kim YB. Συνεργικές αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις του Laminaria japonica fucoidan και του εκχυλίσματος Cistanche tubulosa. Lab Anim Res 2012; 28(2): 91-97.
17. Chee E, Fong KS, Al Jajeh I, Nassiri N, Rootman J. Η συσχέτιση της φλεγμονής του δακρυϊκού αδένα με την γυροειδή αλωπεκία. Orbit 2015; 34(1): 45-50.
18. Brzezinska-Wcislo L, Bergler-Czop B, Wcislo-Dziadecka D, LisSwiety A. New aspects of the treatment of alopecia areata. Postepy Dermatol Alergol 2014; 31(4): 262-265.
19. Hattori Μ, Ogawa Η. Biochemical analysis ofτριχοφυΐααπό τις πτυχές της γήρανσης και τις ενζυμικές δραστηριότητες. J Dermatol 1983; 10(1): 45-54.
20. Lee SH, Lee HJ, Baek IJ, Yon JM, Nam SY, Lee BJ, Yun YW, Kim YB, Hwang SY, Hong JT. Επίδραση της λοσιόν DREAMMO® για το τριχωτό της κεφαλήςτριχοφυΐαπροώθηση σε μοντέλο αλωπεκίας ποντικών C57BL/ 6. Lab Anim Res 2006; 22(1): 91-96.
21. Handjiski BK, Eichmüller S, Hofmann U, Czarnetzki BM, Paus R. Δραστηριότητα και εντοπισμός αλκαλικής φωσφατάσης κατά τη διάρκεια του κύκλου της τρίχας ποντικού. Br J Dermatol 1994; 131(3): 303-310.
22. Cross MJ, Dixelius J, Matsumoto T, Claesson-Welsh L. VEGF receptor signal transduction. Trends Biochem Sci 2003; 28(9): 488-494.
23. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB. Αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα ενός εκχυλίσματος αιθανόλης Angelica gigas σε μοντέλο φλεγμονής θήκης αέρα Carrageenan. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
24. Kim D, Park D, Kyung J, Yang YH, Choi EK, Lee YB, Kim HK, Hwang BY, Kim YB. Αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα του υπερκρίσιμου εκχυλίσματος Houttuynia cordata σε μοντέλο φλεγμονής θύλακα αέρα καραγενάνης. Lab Anim Res 2012; 28(2): 137-140.
25. Rebora A. Παθογένεση της ανδρογενετικής αλωπεκίας. J Am Acad Dermatol 2004; 50(5): 777-779.
26. Shirai A, Ikeda J, Kawashima S, Tamaoki T, Kamiya T. KF19418, μια νέα ένωση γιατριχοφυΐαπροώθηση μοντέλων ποντικιών in vitro και in vivo. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 213-218.
27. Kawabe TT, Kubicek MF, Johnson GA, Buhl AE. Χρήση δραστικότητας γάμμα-γλουταμυλ τρανπεπτιδάσης ως δείκτης του κύκλου της τρίχας και της επαγωγής αναγόνου σε τριχοθυλάκια ποντικών. J Invest Dermatol 1994; 103(1): 122-126.
28. Hamada K, Suzuki K. Αξιολόγηση βιοχημικών δεικτών ως δείκτης κύκλου τρίχας σε ποντικούς C3H. Exp Anim 1996; 45(3): 251-256.
29. Park SJ, Lee KW, Lim DS, Lee S. Ο θειικός πολυσακχαρίτης fucoidan διεγείρει την οστεογονική διαφοροποίηση ανθρώπινων βλαστοκυττάρων που προέρχονται από λιπώδη ιστό. Stem Cells Dev 2012; 21(12): 2204-2211.

30. Danilenko DM, Ring BD, Pierce GF. Αυξητικοί παράγοντες και κυτοκίνες στην ανάπτυξη και τον κύκλο των τριχοθυλακίων: πρόσφατες γνώσεις από ζωικά μοντέλα και οι δυνατότητες για κλινική θεραπεία. Mol Med Today 1996; 2(11): 460-467.
31. Ozeki Μ, Tabata Υ. Ιη νίνο προώθησε την ανάπτυξη τριχοθυλακίων ποντικών με την ελεγχόμενη απελευθέρωση αυξητικών παραγόντων. Biomaterials 2003; 24(13): 2387-2394.
32. Fujie T, Katoh S, Oura H, Urano Y, Arase S. The chemotactic effect of a dermal papilla cell-derived factor on outer root sheath κύτταρα. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 206-212.
33. Stenn KS, Paus R. Controls of hair follicle cycling. Physiol Rev 2001; 81(1): 449-494.
34. Chapman RE, Hardy MH Effects of intradermally injected and τοπικά εφαρμοζόμενου επιδερμικού αυξητικού παράγοντα ποντικού στην ανάπτυξη του μαλλιού, στο δέρμα και στα ωοθυλάκια του μαλλιού των προβάτων merino. Aust J Biol Sci 1988; 41(2): 261-268.
35. Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, Dvorak AM. Παράγοντας αγγειακής διαπερατότητας/αγγειακό ενδοθηλιακό αυξητικό παράγοντα, μικροαγγειακή υπερδιαπερατότητα και αγγειογένεση. Am J Pathol 1995; 146(5): 1029-1039.
36. Ellis RA, Moretti G. Αγγειακά μοτίβα που σχετίζονται με θυλάκια τρίχας καταγόνων στο ανθρώπινο τριχωτό της κεφαλής. Ann NY Acad Sci 1959; 83: 448-457.
37. Stenn KS, Fernandez LA, Tirrell SJ. Οι αγγειογενετικές ιδιότητες του θύλακα της τρίχας vibrissa αρουραίου συνδέονται με τον βολβό. J Invest Dermatol 1988; 90(3): 409-411.
38. Yano K, Brown LF, Detmar M. Control ofτριχοφυΐακαι μέγεθος ωοθυλακίου με αγγειογένεση με τη μεσολάβηση VEGF. J Clin Invest 2001; 107(4): 409-417.
39. Lachgar S, Charveron M, Ceruti I. Κατανομή σταδίων αδιάφορου τριχοθυλακίου mRNA του VEGF με υβριδισμό in situ φθορισμού σε συνδυασμό με ομοεστιακή μικροσκοπία λέιζερ. Στο: Hair Research for the Next Millennium (Van Neste DJJ, ed), Elsevier, Άμστερνταμ, 1996; σελ 407-12.
40. Freyschmidt-Paul P, Sundberg JP, Haple R, McElwee KJ, Metz S, Boggess D, Hoffmann R. Επιτυχής αντιμετώπιση της τριχόπτωσης που μοιάζει με γυροειδή αλωπεκία με τον ευαισθητοποιητή επαφής squaric acid dibutyl ester (SADBE) σε ποντίκια C3H/HeJ . J Invest Dermatol 1999; 113(1): 61-68.