Επίδραση των συνολικών γλυκοζιτών του Cistanche Deserticola στον ενεργειακό μεταβολισμό των ανθρώπινων κυττάρων HepG2

Για τη μελέτη του αντικαρκινικού αποτελέσματος του Cistanche deserticola Y. Ma, τα κύτταρα HepG2 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0, 3,5, 10,5, 21, 31,5 και 42 μg/ml ολικών γλυκοσιδών (TG) από Cistanche deserticola. Ο ρυθμός επιβίωσης των κυττάρων HepG2 και η συγκέντρωση αναστολής 50 τοις εκατό (IC50) ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο CCK-8 και το επίπεδο των αντιδραστικών ειδών οξυγόνου (ROS) ανιχνεύθηκε με τη χρήση ανιχνευτή φθορισμού DCFH-DA. Τέλος, χρησιμοποιήθηκε ένας αναλυτής ενέργειας Seahorse XFe24 (Agilent, Ηνωμένες Πολιτείες) για την ανίχνευση της μιτοχονδριακής πίεσης και της γλυκολυτικής πίεσης των κυττάρων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η TG θα μπορούσε να μειώσει το ποσοστό επιβίωσης των κυττάρων HepG2 και ότι το επίπεδο IC50 ήταν 35,28 μg/ml. Με την αύξηση της συγκέντρωσης TG, το επίπεδο του ROS παρουσίασε ανοδική τάση εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση. Ο ενεργειακός μεταβολισμός έδειξε ότι κάθε ομάδα δόσης TG θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά τις μιτοχονδριακές αναπνευστικές και γλυκολυτικές λειτουργίες των κυττάρων HepG2. Συμπερασματικά, η TG θα μπορούσε να αναστείλει σημαντικά τη μιτοχονδριακή αναπνοή και τις λειτουργίες γλυκόλυσης των κυττάρων HepG2, να αυξήσει το επίπεδο του ROS και να αναστείλει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό. Έτσι, αυτό το πείραμα επισήμανε ότι το Cistanche deserticola μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως πηγή αντικαρκινικών τροφών ή φαρμάκων στο μέλλον. Ωστόσο, απαιτούνται περαιτέρω μελέτες σχετικά με τους μηχανισμούς και τις κλινικές εφαρμογές του.

Κάντε κλικ στο Συμπλήρωμα Cistanche για την ενίσχυση του ανοσοποιητικού συστήματος

1. Εισαγωγή

σχετικά με το Cistanche deserticola Y. Ma είναι ομόλογο φάρμακο και τροφική ουσία. Είναι πολυετές παρασιτικό φυτό της οικογένειας Orobanchaceae και ονομάζεται «τζίνσενγκ της ερήμου» (1). Το πιο σημαντικό, θρεπτικά συστατικά όπως το λίπος και η πρωτεΐνη που παρέχονται από το Cistanche μπορούν να καλύψουν τις βασικές ανάγκες μεταβολισμού ενέργειας των φυσιολογικών ανθρώπινων ιστών και να μειώσουν την παροχή ενέργειας των καρκινικών κυττάρων και έτσι να επιτύχουν τον σκοπό της αναστολής της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων. Επιπλέον, το Cistanche έχει τις λειτουργίες της αντιοξείδωσης, της καταστολής της φλεγμονώδους απόκρισης και της ενίσχυσης της ανοσίας (1, 2). Δεδομένου ότι η Εθνική Επιτροπή Υγείας της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας και η Κρατική Διοίκηση για τον Κανονισμό της Αγοράς ανακοίνωσαν επίσημα την παραγωγή και λειτουργία του Cistanche deserticola. Το Y. Ma ως ομόλογη ουσία φαρμάκων και τροφίμων εφαρμόστηκε πιλοτικά το 2021 και έχει γίνει πιο εις βάθος έρευνα για την ανάπτυξή του

Ο καρκίνος του ήπατος είναι ένας κοινός κακοήθης όγκος του πεπτικού συστήματος και η θνησιμότητα του κατατάσσεται στην πρώτη γραμμή των κακοήθων όγκων (3, 4), οι οποίοι μπορούν να χωριστούν σε πρωτοπαθείς και δευτεροπαθείς. Στις μέρες μας, υπάρχει ακόμη έλλειψη ασφαλών και αποτελεσματικών θεραπευτικών φαρμάκων στην κλινική. Εάν το sorafenib και άλλα θεραπευτικά φάρμακα ληφθούν για μεγάλο χρονικό διάστημα, θα είναι επιρρεπή σε αντοχή στα φάρμακα και ανεπιθύμητες ενέργειες (5). Επειδή τα συμπτώματα του πρώιμου καρκίνου του ήπατος είναι μη ειδικά και τα περισσότερα από τα συμπτώματα είναι στα μεσαία και στα τελευταία στάδια, οι άνθρωποι είναι πιο ενεργοί στη θεραπεία του καρκίνου του ήπατος με την παραδοσιακή κινεζική ιατρική. Μεταξύ των ασθενών με όγκους και των ασθενών με μη ικανοποιητικά θεραπευτικά αποτελέσματα, όπως η χημειοακτινοθεραπεία, η παραδοσιακή κινεζική ιατρική αντικατοπτρίζει τα πλεονεκτήματά της, όπως ότι μπορεί να ενισχύσει την ανοσία και να είναι επικουρικό στην πρώιμη και μεσοπρόθεσμη θεραπεία του όγκου.

Τα τελευταία χρόνια, έχει αναφερθεί ότι το Cistanche έχει αντικαρκινικές επιδράσεις (6–11). Ye et al. (6) διαπίστωσε ότι η εχινακοσίδη που εκχυλίστηκε από το Cistanches herba (Cistanche salsa) θα μπορούσε να αναστείλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HepG2 μειώνοντας την έκφραση του TREM2 και μπλοκάροντας την οδό σήματος PI3K/Akt. Οι Li et al. (7) διαπίστωσε επίσης ότι η εχινακοσίδη άσκησε αντικαρκινική δράση μέσω του άξονα miR-503-3p/TGF- 1/Smad κατά του καρκίνου του ήπατος. Εν τω μεταξύ, η βερμπασκοσίδη θα μπορούσε να ρυθμίσει το οξειδωτικό στρες και την απόπτωση των κυττάρων HepG2 μέσω STAT{10}} και έχει τη δυνατότητα να αναπτυχθεί ως χημειοπροληπτικός παράγοντας (8–10). Επιπλέον, οι ερευνητές διαπίστωσαν ότι το φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο θα μπορούσε επίσης να αναστείλει την επίδραση πολλαπλασιασμού των κυττάρων HepG2 (11). Επιπλέον, η εχινακοσίδη ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του νεφρού 786-Ο και των καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου SW480 (12, 13). Σε άλλη μελέτη, οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από το Cistanche έχουν επίσης αποδειχθεί ότι μειώνουν την ηπατική βλάβη σε ποντίκια που φέρουν όγκο Η22 (14, 15) και βελτιώνουν την ανοσοποιητική λειτουργία μειώνοντας τα επίπεδα AFP, επηρεάζοντας έτσι δυσμενώς την ανάπτυξη του όγκου (16). Αξίζει να σημειωθεί ότι ο αλλοιωμένος ενεργειακός μεταβολισμός είναι ένα από τα χαρακτηριστικά των καρκινικών κυττάρων, το οποίο εκδηλώνεται ως το γεγονός ότι τα καρκινικά κύτταρα χρησιμοποιούν τη γλυκόλυση γλυκόζης ως τρόπο παροχής ενέργειας ανεξάρτητα από το αερόβιο ή αναερόβιο περιβάλλον, και αυτό το φαινόμενο είναι γνωστό ως «Φαινόμενο Warburg». Επομένως, είναι θεωρητικά δυνατό να λιμοκτονήσουμε επιλεκτικά τα καρκινικά κύτταρα για να περιορίσουμε την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων περιορίζοντας την πρόσληψη γλυκόζης (17).

Αν και πολλές μελέτες έχουν μελετήσει την αντικαρκινική δράση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων, όπως η Εχινακοζίδη και η Βερμπασκοσίδη, η αντικαρκινική δράση της TG (φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες και άλλες γλυκοσίδες) (18) δεν είναι κοινή. Υπάρχουν μόνο λίγες μελέτες για το εάν η TG επηρεάζει τον ενεργειακό μεταβολισμό των καρκινικών κυττάρων. Έτσι, αυτό το πείραμα ανέλυσε τη σχέση μεταξύ του ενεργειακού μεταβολισμού, της οξειδωτικής βλάβης και της κυτταρικής επιβίωσης μέσω της γλυκολυτικής ικανότητας και της μιτοχονδριακής πίεσης να διερευνήσει την ανασταλτική δραστηριότητα της TG στα κύτταρα HepG2.

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1. Κυτταρική καλλιέργεια και θεραπεία

Τα κύτταρα HepG2 αγοράστηκαν από το Κέντρο Κυττάρων του Ινστιτούτου Βασικής Ιατρικής, Ιατρικό Πανεπιστήμιο του Peking Union (Πεκίνο, Κίνα) και πλήρες μέσο DMEM που περιείχε 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό και 1 τοις εκατό αντίσωμα (πενικιλλίνη, στρεπτομυκίνη και γενταμυκίνη) χρησιμοποιήθηκε. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε επωαστήρα υγρασίας 37°C και 5 τοις εκατό με CO2 (19). Αφού τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε συρροή 80-90 τοις εκατό, υποβλήθηκαν σε πέψη με 0,25 τοις εκατό θρυψίνη χωρίς EDTA και υποκαλλιεργήθηκαν σε 1:3. Μετά από 2-3 ημέρες κυτταρικής ανάπτυξης, τα κύτταρα στο στάδιο της λογαριθμικής ανάπτυξης λήφθηκαν για υποκαλλιέργεια ή μεταγενέστερα πειράματα. Σε κάθε πείραμα, τα κύτταρα HepG2 εκτέθηκαν σε διαφορετικές συγκεντρώσεις TG.

Οι συνολικές γλυκοσίδες του Cistanche deserticola παρέχονται από την Inner Mongolia Sankou Technology Co., Ltd (Ordos, Inner Mongolia, Κίνα) (20). Το TG διαλύθηκε σε μέσο καλλιέργειας DMEM έως ότου οι τελικές συγκεντρώσεις ήταν 0, 3,5, 10,5, 21, 31,5 και 42 μg/ml.

2.2. Eect of TG επί μορφολογίας κυττάρων HepG2

Τα κύτταρα HepG2 στη φάση της λογαριθμικής ανάπτυξης εμβολιάστηκαν σε 24-πλάκες φρεατίου σε συγκέντρωση 5×104/φρεάτιο. Αφού τα κύτταρα προσκολλήθηκαν στο τοίχωμα, προστέθηκε TG έως ότου οι τελικές συγκεντρώσεις ήταν 0, 21 και 42 μg/ml και καλλιεργήθηκαν για 24 ώρες. Στη συνέχεια, η μορφολογία των κυττάρων κάθε ομάδας παρατηρήθηκε στο μικροσκόπιο φθορισμού

2.3. Eect of TG επί του πολλαπλασιασμού των HepG2 cel

Ο λογάριθμος της φάσης κυτταρικής ανάπτυξης των κυττάρων HepG2 λήφθηκε ως 1×104/φρεάτιο, εμβολιάστηκε σε τρυβλία 96-φρεατίου και κάθε φρεάτιο εμβολιάστηκε με 100 μΐ. Αφού τα κύτταρα προσκολλήθηκαν στο τοίχωμα, διαλύθηκαν σε ένα μέσο DMEM χωρίς ορό έτσι ώστε οι τελικές συγκεντρώσεις του φαρμάκου να ήταν 0, 3,5, 10,5, 21, 31,5 και 42 μg/ml. Σε κάθε συγκέντρωση κατανεμήθηκαν έξι πολλαπλά φρεάτια και στη συνέχεια επωάστηκαν στους 37°C υπό 5 τοις εκατό CO2 σε επωαστήρα για 24 ώρες. Τέλος, σε κάθε φρεάτιο, προστέθηκαν 100 μl μέσου καλλιέργειας DMEM που περιείχε 10 τοις εκατό διάλυμα CCK8, και στη συνέχεια, τα φρεάτια επωάστηκαν σε επωαστήρα για 30 λεπτά για να ανιχνευθεί η τιμή απορρόφησης (Α) στα 450 nm.

2.4. Μέτρηση ενδοκυτταρικού επιπέδου ROS

Το σύστημα των 2 ml ανά φρεάτιο που περιέχει 4 × 105 κύτταρα τοποθετήθηκε σε 6-πλάκα φρεατίου και τοποθετήθηκε σε επωαστήρα στους 37°C υπό 5 τοις εκατό CO2. Μετά από 24 ώρες θεραπείας, μετρήθηκε το ενδοκυτταρικό επίπεδο ROS. Στη συνέχεια, προστέθηκε 1 ml DCFH-DA (10 μΜ) και επωάστηκε στο σκοτάδι στους 37°C για 30 λεπτά. Στη συνέχεια, τα πλύναμε με PBS τρεις φορές και τελικά, η δραστηριότητα του ROS ανιχνεύθηκε με κυτταρομετρία ροής

2.5. Eect of TG στον ενεργειακό μεταβολισμό του HepG2 ce

s (A) Βελτιστοποίηση των συνθηκών δοκιμής: Τα κύτταρα HepG2 στη λογαριθμική περίοδο ανάπτυξης επιλέχθηκαν και εμβολιάστηκαν στην πλάκα κυτταροκαλλιέργειας ενός αναλυτή βιοενέργειας Seahorse XFe 24 στα 500 μl ανά φρεάτιο έτσι ώστε η Ο αριθμός των κυττάρων ήταν 1, 2, 4 και 8 (Χ104). Έγιναν πέντε αντίγραφα από κάθε ομάδα, από τα οποία προστέθηκαν μόνο τα Α1, Β3, C4 και D6 με μέσο καλλιέργειας. (Β) Ανίχνευση μιτοχονδριακής πίεσης: ελήφθη εκ των προτέρων ένα κιτ μιτοχονδριακής πίεσης, το οποίο περιελάμβανε ολιγομυκίνη, καρβονυλοκυανιδτριφθορομεθοξυφαινυλυδραζόνη (FCCP) και ροτενόνη/αντιμυκίνη Α (Rot/AA). Αραιώθηκαν με το μέσο ανίχνευσης για να γίνουν οι συγκεντρώσεις τους 1 μΜ, 0,5 μΜ και 0,5 μΜ, χωριστά.

Στη συνέχεια, η ενυδατωμένη πλάκα ανιχνευτή αφαιρέθηκε και προστέθηκε στις θύρες Α, Β και C, αντίστοιχα, με όγκο 56 μΙ, 62 μΙ και 69 μΙ. Οι τιμές του ρυθμού κατανάλωσης οξυγόνου (OCR) σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα μετρήθηκαν για να αντικατοπτρίζουν το επίπεδο οξειδωτικής φωσφορυλίωσης. (Γ) Ανίχνευση πίεσης γλυκόλυσης: Γλυκόζη, ολιγομυκίνη και 2- δεοξυγλυκόζη (2-DG) αραιώθηκαν με το μέσο ανίχνευσης για να γίνουν οι συγκεντρώσεις 10 mM, 1 μΜ και 50 mM, αντίστοιχα. Στη συνέχεια, η ενυδατωμένη πλάκα ανιχνευτή αφαιρέθηκε και προστέθηκε στις θύρες Α, Β και C, αντίστοιχα, με τους προαναφερθέντες όγκους. Οι τιμές του ρυθμού εξωκυτταρικής οξίνισης (ECAR) σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα μετρήθηκαν για να αντικατοπτρίζουν τη γλυκολυτική λειτουργία των κυττάρων (21).

2.6. Western blot

Τα επεξεργασμένα κύτταρα επιστρώθηκαν με 80 μl ρυθμιστικού διαλύματος λύσης (RIPA: PMSF=100:1) που χρησιμοποιήθηκε για τη λύση των πρωτεϊνών και στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε ηλεκτροφόρηση γέλης δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) για να διαχωριστεί η δείγματα πρωτεΐνης (50 μg όγκος φόρτωσης ανά φρεάτιο). Αργότερα, η μεταφορά πρωτεΐνης στη μεμβράνη PVDF πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα λουτρό πάγου, οι πρωτεΐνες μπλοκαρίστηκαν με BSA για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και τα πρωτογενή αντισώματα (Bcl-2, Bax, κασπάση-3) προστέθηκαν αναλογικά και επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4◦C. Στη συνέχεια, οι μεμβράνες PVDF στη συνέχεια επωάστηκαν με αραιωμένα δευτερεύοντα αντισώματα για 1-2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. -Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερική πρωτεΐνη αναφοράς και οι μεμβράνες PVDF αναπτύχθηκαν και στερεώθηκαν για να παρατηρηθούν αλλαγές στην έκφραση της πρωτεΐνης στόχου (22, 23).

2.7. Στατιστική επεξεργασία

Τα δεδομένα της δοκιμής εκφράστηκαν ως χ ± SD (τυπική απόκλιση) και αναλύθηκαν με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) χρησιμοποιώντας SPSS 25.0 (SPSS, Ηνωμένες Πολιτείες). Το Flowjo10 και το Graphpad prism 8.0.2 ήταν το λογισμικό που χρησιμοποιήθηκε για τη σχεδίαση των σχημάτων. ∗P < 0.05 και ∗∗P <0.01.

3. Αποτελέσματα

3.1. Eect of TG επί μορφολογίας κυττάρων HepG2

Στη διαδικασία της απόπτωσης, πρώτα, ο όγκος των κυττάρων θα μειωθεί αργά και θα παραμορφωθεί και στη συνέχεια τα κύτταρα που αναπτύσσονται πιο κοντά στο τοίχωμα θα συρρικνωθούν αργά, θα γίνουν στρογγυλά, θα πέσουν και θα οδηγήσουν σε χρωμοσωμική πύκνωση. Μερικοί πυρήνες θα σπάσουν, θα περιθωριοποιηθούν και θα σχηματίσουν αποπτωτικά κυστίδια. Παρατηρήθηκε από το Σχήμα 1 ότι, όταν τα κύτταρα HepG2 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με TG, ο όγκος των κυττάρων σταδιακά μειώθηκε. Παρατηρήθηκε διαισθητικά ότι οι πυρήνες των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 21 μg/ml TG άρχισαν να συρρικνώνονται και ο όγκος έγινε μικρότερος. Με 42 μg/ml TG, τα κύτταρα συνοδεύτηκαν από αιώρηση και κυτταρικό κατακερματισμό. η κυτταρική μεμβράνη ήταν εντελώς σπασμένη, ραγισμένη, νεκρωτική, με ασαφή όρια και σε κατάσταση επικείμενης κατάρρευσης και θανάτου

3.2. Eect of TG επί του πολλαπλασιασμού των HepG2 cel

Για να επιβεβαιωθεί η αντικαρκινική επίδραση της TG in vitro, τα κύτταρα HepG2 υποβλήθηκαν σε αγωγή με μια σειρά συγκεντρώσεων TG (0, 3,5, 10,5, 21, 31,5 και 42 μg/ml) για 24 ώρες. Στη συνέχεια, χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος προσδιορισμού CCK8 για τη διερεύνηση της επίδρασης της TG στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HepG2

εξερευνήστε την επίδραση της TG στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HepG2. Το Σχήμα 2 δείχνει ότι ο πολλαπλασιασμός του HepG2 επηρεάστηκε σε διάφορους βαθμούς μετά από θεραπεία με διαφορετικές συγκεντρώσεις TG για 24 ώρες. Σε σύγκριση με το ποσοστό επιβίωσης κυττάρων της ομάδας ελέγχου, τα ποσοστά επιβίωσης κυττάρων της ομάδας θεραπείας ήταν 96,95 τοις εκατό , 92,59 τοις εκατό , 92,78 τοις εκατό , 77,28 τοις εκατό και 31.04 τοις εκατό, αντίστοιχα. Με την αύξηση της συγκέντρωσης, το ποσοστό επιβίωσης των κυττάρων παρουσίασε πτωτική τάση, αλλά δεν υπήρχε σημαντική διαφορά (P > {{0.05) στις συγκεντρώσεις των 3,5, 10,5 και 21 μg/ml και το εύρος αναστολής ήταν μικρό. Υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των συγκεντρώσεων 31,5 και 42 μg/ml (Ρ < 0,01) και ο ρυθμός αναστολής ήταν τόσο υψηλός όσο 68,96 τοις εκατό στα 42 μg/ml. Επομένως, αυτό το πείραμα έδειξε ότι η TG θα μπορούσε να αναστείλει σημαντικά την επιβίωση των κυττάρων HepG2 με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση και μπορεί να χρειαστούν περαιτέρω πειράματα για να επιβεβαιωθεί η κυτταροτοξικότητα της TG

3.3. Μέτρηση ενδοκυτταρικών επιπέδων ROS

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, με την αύξηση της συγκέντρωσης TG, ανιχνεύθηκαν υψηλότερα σχετικά περιεχόμενα ROS με τη μέθοδο ανιχνευτή φθορισμού DCFH-DA, δείχνοντας μια τάση κλίσης δόσης. Μετά από θεραπεία με TG για 24 ώρες, η σχετική ένταση φθορισμού του DCF αυξήθηκε κατά 0,91 τοις εκατό , 13,64 τοις εκατό , 24,61 τοις εκατό , 45,91 τοις εκατό και 105,33 τοις εκατό και υπήρχαν πολύ σημαντικές διαφορές στο 10,5, 21, 31,5 και 42 μg/ml (Ρ < 0,01). Όταν η συγκέντρωση TG ήταν 42 μg/ml, το μέγιστο επίπεδο συσσώρευσης ROS παρατηρήθηκε ότι ήταν περίπου δύο φορές υψηλότερο από αυτό στην ομάδα ελέγχου. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι η σταθερή και υψηλή ικανότητα παραγωγής ROS μπορεί να είναι ο λόγος για την καλύτερη κυτταροτοξικότητα του TG. Αυτά τα αποτελέσματα μπορεί επίσης να υποδεικνύουν μια στενή σχέση μεταξύ της ικανότητας παραγωγής ROS και της κυτταροτοξικότητας των κυττάρων

3.4. Eect of TG στη μιτοχονδριακή αερόβια αναπνοή Hep2 ce

3.4.1. Προσδιορισμός αριθμού κελιού

Στην ανίχνευση της μιτοχονδριακής πίεσης και της γλυκολυτικής πίεσης, ήταν πρώτα απαραίτητο να προσδιοριστεί η βέλτιστη πυκνότητα σποράς των κυττάρων (21). Σε αυτό το πείραμα, συνιστάται να χρησιμοποιείται η τιμή βασικού ρυθμού κατανάλωσης οξυγόνου (OCR) και ο ρυθμός εξωκυτταρικής οξίνισης (ECAR) για τον χαρακτηρισμό της κυτταρικής πυκνότητας. Πρώτον, χρησιμοποιήθηκε οπτική αξιολόγηση για την προσέγγιση της βέλτιστης κυτταρικής πυκνότητας: τα κύτταρα θα πρέπει να είναι ομοιόμορφα κατανεμημένα σε κάθε φρεάτιο με βαθμό σύντηξης 50-90 τοις εκατό. Από τη μία πλευρά, όταν χρησιμοποιείται 24-αναλυτής βιολογικής ενέργειας πηγαδιών για τον προσδιορισμό των τιμών OCR ή ECAR κυττάρων, η πυκνότητα ενοφθαλμισμού κυττάρων πρέπει να είναι 1×104 -8×104 κύτταρα/πηγάδι. Από την άλλη πλευρά, οι βασικές τιμές OCR και ECAR μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό της βέλτιστης πυκνότητας σποράς και τη διασφάλιση της ακρίβειας των δεδομένων. Σύμφωνα με την περιγραφή του προϊόντος ενός αναλυτή Seahorse XFe24, το OCR κυττάρου σε κανονική κατάσταση ανάπτυξης θα πρέπει να βρίσκεται στο. εύρος 50–400 pmol/min και το κανονικό βασικό εύρος ECAR θα πρέπει να κυμαίνεται από 20–120 mpH/min. Επομένως, ο συνδυασμός των δύο όψεων, η διατήρηση των κελιών στα 8×104 /πηγάδι θα είναι πιο κατάλληλη (Εικόνα 4)

3.4.2. Eect of TG στην οξειδωτική φωσφορυλίωση των κυττάρων HepG2

ls, Η αξιολόγηση της μιτοχονδριακής λειτουργίας είναι απαραίτητη για την κατανόηση των ασθενειών που σχετίζονται με τον μεταβολισμό της κυτταρικής ενέργειας και την ανάπτυξη αντίστοιχων φαρμάκων και η OCR είναι ένας από τους πιο σημαντικούς δείκτες αξιολόγησης. Για να μελετήσουμε την επίδραση της TG στη διαδικασία οξειδωτικής φωσφορυλίωσης των κυττάρων HepG2, χρησιμοποιήσαμε έναν αναλυτή Seahorse XFe24 για να ανιχνεύσουμε τα επίπεδα OCR των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με TG και αναλύσαμε τους σχετικούς δείκτες. Με την αύξηση της συγκέντρωσης TG, το επίπεδο OCR μειώθηκε σταδιακά (Εικόνες 5Α, Β) και ειδικά, μετά την προσθήκη FCCP, η διαφορά στις τιμές OCR μεταξύ της ομάδας δοσολογίας και της ομάδας ελέγχου έγινε μεγαλύτερη. Ταυτόχρονα, τα Σχήματα 5C–F και ο Πίνακας 1 δείχνουν ότι η βασική αναπνοή μειώθηκε σταδιακά. σε σύγκριση με 0μg/ml, μειώθηκε κατά 39,24 τοις εκατό , 41,43 τοις εκατό , 47,10 τοις εκατό , 78,22 τοις εκατό και 95,26 τοις εκατό, αντίστοιχα, για κάθε ομάδα δόσης. Ο μέγιστος ρυθμός αναπνοής μειώθηκε κατά 52,95 τοις εκατό , 65,06 τοις εκατό , 77,76 τοις εκατό , 94,48 τοις εκατό και 98,61 τοις εκατό, αντίστοιχα. Η κατανάλωση μη μιτοχονδριακού οξυγόνου μειώθηκε κατά 37,34 τοις εκατό , 37,45 τοις εκατό , 47,27 τοις εκατό , 76,10 τοις εκατό και 79,79 τοις εκατό, αντίστοιχα. Η παραγωγή ATP μειώθηκε κατά 42,49 τοις εκατό , 47,91 τοις εκατό , 57,83 τοις εκατό , 87,28 τοις εκατό και 98,16 τοις εκατό, αντίστοιχα.

Οι λόγοι για τη μείωση μπορεί να είναι ότι τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με TG ήταν σε κατάσταση απόπτωσης και το επίπεδο ROS αυξήθηκε, γεγονός που μπορεί να αυξήσει την οξειδωτική βλάβη των κυττάρων, να μειώσει τη δραστηριότητα του συμπλέγματος της μιτοχονδριακής αναπνευστικής αλυσίδας και να επηρεάσει την ικανότητα της μιτοχονδριακής σύνθεσης ATP. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η TG θα μπορούσε να αναστείλει σημαντικά το συνολικό επίπεδο αερόβιας αναπνοής των κυτταρικών μιτοχονδρίων και το ποσοστό επιβίωσης των κυττάρων μετά τη θεραπεία με TG μειώθηκε σημαντικά, γεγονός που μπορεί να σχετίζεται άμεσα με τη διαταραχή του μεταβολισμού της μιτοχονδριακής ενέργειας. Ωστόσο, υπάρχει ανάγκη για πιο εις βάθος μελέτες των μηχανισμών

3.4.3. Eect of TG στη γλυκολυτική ικανότητα του HepG2

Η διαδικασία της γλυκόλυσης πραγματοποιείται στη μήτρα του κυττάρου και το παραγόμενο γαλακτικό οξύ απελευθερώνει Η συν στο εξωτερικό του κυττάρου. Επιπλέον, χρησιμοποιήθηκε ένας αναλυτής Seahorse XFe24 για την ανάλυση της γλυκολυτικής λειτουργίας ανιχνεύοντας τις τιμές ECAR μετά από θεραπεία TG και τις σχετικές παραμέτρους ανάλυσης για τον προσδιορισμό της συγκεκριμένης μεθόδου με την οποία η TG επηρεάζει τη γλυκολυτική διαδικασία των κυττάρων HepG2. Με την πάροδο του χρόνου, με την προσθήκη γλυκόζης και ολιγομυκίνης, η τιμή ECAR αυξήθηκε σταδιακά και παρουσίασε πτωτική τάση με την προσθήκη 2- DG (Εικόνα 6Α). Με την αύξηση της συγκέντρωσης TG, το συνολικό επίπεδο ECAR μειώθηκε σταδιακά (Εικόνα 6Β), το οποίο αντικατοπτρίστηκε από τη σταδιακή μείωση της γλυκολυτικής ικανότητας και της γλυκολυτικής αποθεματικής τιμής (Εικόνες 6D, E, Πίνακας 2). Το επίπεδο μη γλυκοζυλίωσης ήταν κυρίως χαμηλότερο από αυτό της ομάδας ελέγχου, αλλά δεν υπήρχε εξάρτηση από τη συγκέντρωση (Εικόνα 6C). Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, η γλυκολυτική ικανότητα της ομάδας θεραπείας με TG μειώθηκε κατά 1,12 τοις εκατό , 9,29 τοις εκατό , 34,46 τοις εκατό , 92,15 τοις εκατό και 100,00 τοις εκατό, αντίστοιχα. η γλυκολυτική αποθεματική αξία μειώθηκε κατά 4,78 τοις εκατό , 34,17 τοις εκατό , 79,50 τοις εκατό , 93,39 τοις εκατό και 98,63 τοις εκατό, αντίστοιχα.

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το TG θα μπορούσε να αναστείλει τον πολλαπλασιασμό και την ανάπτυξη των κυττάρων HepG2 μειώνοντας τη γλυκολυτική λειτουργία του HepG2 και παράγοντας κυτταροτοξικότητα. Αξίζει να σημειωθεί ότι ο βαθμός βλάβης της γλυκολυτικής λειτουργίας σε χαμηλές δόσεις ήταν χαμηλότερος από τον βαθμό πτώσης διαφόρων παραμέτρων της οξειδωτικής φωσφορυλίωσης των κυττάρων, ενώ η γλυκολυτική λειτουργία και η οξειδωτική φωσφορυλίωση των κυττάρων μειώθηκαν σημαντικά σε υψηλές δόσεις. Ως εκ τούτου, προτάθηκε ότι η TG καταστρέφει κυρίως τη μιτοχονδριακή λειτουργία σε χαμηλές δόσεις, ενώ σε υψηλές δόσεις βλάπτει τη μιτοχονδριακή και τη γλυκολυτική λειτουργία ταυτόχρονα, για να επιταχύνει τον βαθμό απόπτωσης και νέκρωσης των καρκινικών κυττάρων και να αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

3.5. Έκφραση πρωτεϊνών κυττάρων HepG2 μετά από θεραπεία TG

Το Σχήμα 7 δείχνει ότι, μετά από θεραπεία με διαφορετικές συγκεντρώσεις TG για 24 ώρες, τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης του HepG2 ήταν 0.01. αλλάζουν ταυτόχρονα. Καθώς η συγκέντρωση της TG αυξήθηκε, τα επίπεδα έκφρασης των προαποπτωτικών παραγόντων Bax και Caspase-3 αυξήθηκαν και η σχετική έκφραση πρωτεΐνης ήταν η υψηλότερη όταν οι συγκεντρώσεις ήταν 31,5 μg/ml και 10,5 μg/ml, αντίστοιχα. Επιπλέον, όταν η συγκέντρωση ήταν χαμηλή (0, 3,5, 10,5 και 21 μg/ml TG), η σχετική έκφραση του αντιαποπτωτικού παράγοντα Bcl-2 αυξήθηκε. Όταν η συγκέντρωση TG ήταν 31,5 μg/ml και 42 μg/ml, έδειξε σημαντική πτωτική τάση. Επομένως, συμπεράνουμε ότι η TG μπορεί να προάγει την απόπτωση του HepG2

4. Συζήτηση και συμπέρασμα

Μελέτες απέδειξαν ότι το Cistanche deserticola και τα αποτελεσματικά συστατικά του έχουν αντιοξειδωτικές, αντι-κουραστικές, αντιγηραντικές, αντικαρκινικές, ογκώδεις ιδιότητες και ιδιότητες βελτίωσης της μνήμης και προάγουν τον σχηματισμό οστών (11, 12). Επί του παρόντος, η θεραπεία για τον καρκίνο του ήπατος εξακολουθεί να στερείται αποτελεσματικών μέσων. Συχνά βασίζεται σε ολοκληρωμένη θεραπεία όπως χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία και χημειοθεραπεία. Η χημειοθεραπεία έχει μεγάλες τοξικές και παρενέργειες και είναι εύκολο να αναπτυχθεί ανθεκτικότητα στα φάρμακα. Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική έχει λιγότερο αποτελεσματική αντικαρκινική τοξικότητα και παρενέργειες. Ταυτόχρονα, μπορεί να ενισχύσει την οργανική ανοσία και να αποτρέψει τον καρκίνο(24)

.01. των κυττάρων HepG2 με δοσοεξαρτώμενο τρόπο με την αύξηση της συγκέντρωσης Ο καρκίνος ικανοποιεί τις ανάγκες βιοσύνθεσης και οξειδοαναγωγής των καρκινικών κυττάρων αλλάζοντας τον μεταβολισμό, τον επαναπρογραμματισμό των κυττάρων όγκου, την απόκτηση θρεπτικών ουσιών και τις μεταβολικές οδούς που καθιστούν δυνατό τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων χωρίς περιορισμό (25 ). Επομένως, ο περιορισμός του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων μέσω των παραπάνω τρόπων ήταν το επίκεντρο των μεταγενέστερων πειραμάτων μας. Μια ορισμένη συγκέντρωση TG βρέθηκε ότι αναστέλλει σημαντικά την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό 0,01. των κυττάρων HepG2 με δοσοεξαρτώμενο τρόπο με την αύξηση του συμπυκνώματος

ιόν. Υπό κανονικές συνθήκες, μια ελαφρά αύξηση του επιπέδου ROS μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των φυσιολογικών κυττάρων. Ωστόσο, μια σημαντική αύξηση του επιπέδου ROS στα καρκινικά κύτταρα μπορεί να προκαλέσει κυτταρικό θάνατο (26). Υψηλές δόσεις ROS θα μπορούσαν να προκαλέσουν αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης, τραυματισμό, απόπτωση, ακόμη και θάνατο, κάτι που ήταν σύμφωνο με την ανασταλτική επίδραση της TG στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HepG2. Υπάρχουν επίσης στοιχεία ότι η παραγωγή ROS συνήθως αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων (27). Η επιβίωση ή ο θάνατος των κυττάρων εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τη λειτουργική κατάσταση των μιτοχονδρίων (28). Το ROS είναι ένα αναπόφευκτο προϊόν στη διαδικασία του μεταβολισμού των κυττάρων καθώς δρα στα μιτοχόνδρια και είναι ένας από τους κύριους τρόπους πρόκλησης μιτοχονδριακής βλάβης. Η κύρια λειτουργία των μιτοχονδρίων στα κύτταρα είναι να παρέχουν ενέργεια για τον μεταβολισμό και τη βιοσύνθεση των κυττάρων με την παραγωγήATP, το οποίο είναι πολύ σημαντικό για την επιβίωση των φυσιολογικών κυττάρων και των κυττάρων όγκου (29). Εάν το επίπεδο ROS αυξάνεται στο σώμα και δεν αποσυντίθεται από τα κύτταρα, το ROS θα επηρεάσει τη δραστηριότητα του συμπλέγματος της μιτοχονδριακής αναπνευστικής αλυσίδας (30) και, επομένως, θα επηρεάσει την οξειδωτική φωσφορυλίωση των μιτοχονδρίων και θα μειώσει τη σύνθεση ATP στα κύτταρα (31), με αποτέλεσμα στην ανισορροπία του ενδοκυτταρικού οξειδοαναγωγικού συστήματος και στην αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων (32). Πράγματι, οι χημειοπροληπτικοί παράγοντες θα μπορούσαν να ενισχύσουν το επίπεδο του ROS για να φτάσει το όριο τοξικότητας και να προάγουν την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων με τη μικρότερη τοξικότητα στα φυσιολογικά κύτταρα (33). Τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν επίσης ότι η αύξηση της σχετικής περιεκτικότητας σε ROS θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά το ποσοστό επιβίωσης των κυττάρων HepG2.

Για να προσαρμοστεί στο μεταβαλλόμενο εξωτερικό περιβάλλον, ένας οργανισμός πρέπει να προσαρμόσει τις βιολογικές δραστηριότητες των κυττάρων ανά πάσα στιγμή. Αντίστοιχα, η ρύθμιση των βιολογικών δραστηριοτήτων των κυττάρων από τον οργανισμό βασίζεται στη ρύθμιση των κυτταρικών μεταβολικών δικτύων του. Επομένως, η ενεργειακή κατάσταση των κυττάρων ρυθμίζεται πάντα και διατηρείται σε ένα ορισμένο εύρος δυναμικής ισορροπίας υπό κανονικές φυσιολογικές συνθήκες, που είναι η σταθερή κατάσταση του μεταβολισμού της ενέργειας των κυττάρων (34). Επιπλέον, τα μιτοχόνδρια θεωρούνται ένας από τους κύριους στόχους της ηπατοκυτταρικής βλάβης που προκαλείται από φάρμακα (35). Παράλληλα, οι ερευνητές πιστεύουν ότι οι ενεργειακές ανάγκες των κυττάρων μπορούν να καλυφθούν μέσω της γλυκόλυσης και της οξειδωτικής φωσφορυλίωσης (OXPHOS). Όταν το OXPHOS δεν είναι πλέον διαθέσιμο, για παράδειγμα, λόγω υποξικών επιδράσεων ή μιτοχονδριακής βλάβης, αυτές οι κυτταρικές σειρές μπορούν να στραφούν σε γλυκόλυση για να παράγουν επαρκή ATP για συνεχή επιβίωση (36)

Ο Otto Warburg (37, 38) παρατήρησε ότι, παρουσία οξυγόνου, τα καρκινικά κύτταρα παρουσίαζαν ασυνήθιστα χαρακτηριστικά απορρόφησης γλυκόζης και ζύμωσης της σε γαλακτικό οξύ. Αυτή η χαρακτηριστική, αερόβια γλυκόλυση δείχνει ότι, με επαρκές οξυγόνο, τα καρκινικά κύτταρα προτιμούσαν να χρησιμοποιούν γλυκόλυση για το μεταβολισμό της γλυκόζης αντί για μιτοχονδριακή οξειδωτική φωσφορυλίωση για να παράγουν περισσότερο ATP. Αυτό θα βοηθήσει τα καρκινικά κύτταρα να παράγουν γρήγορα αρκετή ενέργεια για την ταχεία ανάπτυξή τους, να απελευθερώσουν περισσότερο γαλακτικό οξύ, να διατηρήσουν το όξινο μικροπεριβάλλον τους, να ξεφύγουν από την ανοσολογική επιτήρηση και να κάνουν εύκολα μεταστάσεις (39, 40). Ως εκ τούτου, ο Warburg πρότεινε ότι τα μιτοχονδριακά αναπνευστικά ελαττώματα αποτελούν πιθανή βάση για αερόβια γλυκόλυση και καρκίνο (37, 38). Σε αυτή τη μελέτη, όλες οι συγκεντρώσεις TG ανέστειλαν σημαντικά το συνολικό επίπεδο αερόβιας αναπνοής των μιτοχονδρίων και περιόρισαν τη γλυκολυτική λειτουργία, η οποία μπορεί να σχετίζεται άμεσα με τη διαταραχή του μεταβολισμού της μιτοχονδριακής ενέργειας. Ωστόσο, υπάρχει ανάγκη για πιο εις βάθος μελέτες των μηχανισμών

Το Bax είναι ο κύριος ρυθμιστής της δραστηριότητας του Bcl-2 και τα επίπεδα έκφρασής του σχετίζονται άμεσα με τη ρύθμιση της απόπτωσης, με την αυξημένη έκφραση Bax να υποδηλώνει την προώθηση της απόπτωσης από φάρμακα και την αυξημένη Bcl-2 που υποδηλώνει την αναστολή της απόπτωσης (41 ). Επιπλέον, η πρωτεάση κασπάσης επηρεάζει σε μεγάλο βαθμό την απόπτωση και η ενεργοποίησή της αντιπροσωπεύει την εξέλιξη των κυττάρων στη φάση της μη αναστρέψιμης απόπτωσης (42). Έτσι, σε κύτταρα HepG2 που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με TG, η έκταση της ενεργοποίησης της κασπάσης-3 αυξήθηκε, υποδεικνύοντας ότι η TG θα μπορούσε να προκαλέσει μη αναστρέψιμη απόπτωση και να αποτρέψει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό

Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη έχει σημαντική αναφορά σε εις βάθος έρευνα για τον αντικαρκινικό μηχανισμό του Cistanche deserticola. Έχει τη δυνατότητα να αποτελέσει πρώτη ύλη φαρμάκων για την κλινική θεραπεία του καρκίνου του ήπατος και να αποτρέψει αποτελεσματικά τους όγκους με κατανάλωση στην καθημερινή διατροφή.

Δήλωση διαθεσιμότητας δεδομένων

Τα σύνολα δεδομένων που παρουσιάζονται σε αυτή τη μελέτη μπορούν να βρεθούν σε διαδικτυακά αποθετήρια. Τα ονόματα του αποθετηρίου/των αποθετηρίων και οι αριθμοί πρόσβασης βρίσκονται στο άρθρο/Συμπληρωματικό υλικό

Συνεισφορά συγγραφέα

DF: έρευνα, σύνταξη πρωτότυπου σχεδίου και αναλύσεις πλοκής. S-qZ και Y-xZ: επίσημη ανάλυση και οπτικοποίηση. Y-jJ: έρευνα. Q-dS, WS και Q-qC: πόροι και υλική υποστήριξη. W-jY: συγγραφή κριτικής και επεξεργασίας, επίβλεψη έργου και απόκτηση χρηματοδότησης. JW: σύνταξη κριτικής και επεξεργασία και επικύρωση. Όλοι οι συγγραφείς ενέκριναν την τελική έκδοση του χειρογράφου

Χρηματοδότηση

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (32172244) και τα Ακαδημαϊκά Ερευνητικά Προγράμματα του Πανεπιστημίου του Πεκίνου (JB202101)

Σύγκρουση συμφερόντων

Ο Y-jJ απασχολήθηκε από την Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.

Οι υπόλοιποι συγγραφείς δηλώνουν ότι η έρευνα διεξήχθη απουσία εμπορικών ή οικονομικών σχέσεων που θα μπορούσαν να ερμηνευθούν ως πιθανή σύγκρουση συμφερόντων.

Σημείωση εκδότη

Όλοι οι ισχυρισμοί που εκφράζονται σε αυτό το άρθρο είναι αποκλειστικά εκείνοι των συγγραφέων και δεν αντιπροσωπεύουν απαραιτήτως αυτούς των συνδεδεμένων οργανισμών τους ή του εκδότη, των εκδοτών και των κριτικών.

Οποιοδήποτε προϊόν μπορεί να αξιολογηθεί σε αυτό το άρθρο ή ισχυρισμός που μπορεί να προβληθεί από τον κατασκευαστή του, δεν είναι εγγυημένο ούτε εγκρίνεται από τον εκδότη.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Feng D, He Y, Jiang YJ, Wang YJ, Yan WJ. Πρόοδος της έρευνας σχετικά με την αντιγηραντική λειτουργία των Cistanches. J Food Saf Qual. (2021) 12:4429–37. doi: 10.19812/j.cnki.jfsq11- 5956/ts.2021.11.018

2. Feng D, Duan H, Lv YN, Jiang YJ, Wang YJ, Yan WJ. Εφαρμογή του Cistanche deserticola Ma σε λειτουργικά τρόφιμα στην Κίνα. Food Sci Technol. (2021) 46:76– 81. doi: 10.13684/j.cnki.spkj.2021.12.012

3. Ma GZ, Chen JR, Wei TT, Wang J, Chen WS. Ανασταλτικός ρόλος του FOXA2 στη μετανάστευση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων του ήπατος μέσω μεταγραφικής καταστολής του microRNA103a3p και ενεργοποίησης του άξονα GREM2/LATS2/YAP. Κυτταροτεχνολογία. (2021) 73:523– 37. doi: 10.1007/s10616-021-00475-2

4. Zheng RS, Zhang SW, Zeng HM, Wang SM, Sun KX, Chen R, et al. Επίπτωση καρκίνου και θνησιμότητα στην Κίνα, 2016. J Natl Cancer Center. (2022) 2:1– 9. doi: 10.1016/j.jncc.2022.02.002

5. Sun Y, Song YY, Zhang C, Lu YZ, Zheng GH, Tian XX, et al. Επιδράσεις και μηχανισμός της σελαστρόλης στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος HepG2 μέσω της ενεργοποίησης της οδού σήματος AMPK. Φαρμακοποιός Κίνας. (2021). 24:1961– 6. doi: 10.19962/j.cnki.issn1008-049X.2021.11.001

6. Ye Y, Song Y, Zhuang J, Wang G, Ni J, Xia W. Αντικαρκινικές επιδράσεις της εχινακοσίδης σε ένα μοντέλο ποντικού ηπατοκυτταρικού καρκινώματος και κύτταρα HepG2. J Cell Physiol. (2019) 234:1880– 8. doi: 10.1002/jcp.27063

7. Li W, Zhou J, Zhang Y, Zhang J, Li X, Yan Q, et al. Η εχινακοσίδη ασκεί αντικαρκινική δράση μέσω του άξονα miR-503-3p/TGF- 1/Smad στον καρκίνο του ήπατος. Cancer Cell Int. (2021) 21:304. doi: 10,1186/s12935-021-01890-3

8. Zhang Y, Zhu BL, Yang XJ, Hui J, Ma Q, Yu XH. Πρόοδος της έρευνας για την αναστολή κακοήθων όγκων της βερμπασκοσίδης. Res Pract Chin Med. (2019) 33:78– 82. doi: 10.13728/j.1673-6427.2019.06.018

9. Alipieva K, Korkina L, Orhan IE, Georgiev MI. Βερμπασκοσίδη - μια ανασκόπηση της εμφάνισης, της (βιο)σύνθεσης και της φαρμακολογικής σημασίας της. Biotechnol Adv. (2014) 32:1065–76. doi: 10.1016/j.biotechadv.2014.07.001

10. Peerzada KJ, Faridi AH, Sharma L, Bhardwaj SC, Satti NK, Shashi Β, et αϊ. Η ακτεοσίδη μεσολαβεί στη χημειοπρόληψη της πειραματικής καρκινογένεσης του ήπατος μέσω του ρυθμιζόμενου με STAT-3 οξειδωτικού στρες και της απόπτωσης. Environ Toxicol. (2016) 31:782– 98. doi: 10.1002/tox.22089

11. Qi XX, You SP, He ZX, Zhao J, Liu T. Επίδραση του φαινυλαιθανοειδούς γλυκοσιδίου Cistanche deserticola στον πολλαπλασιασμό και την απόπτωση των κυττάρων HepG2 in vitro. J Xinjiang Med Univ. (2021) 44:1041-7.

12. Xie YT. Επιδράσεις της εχινακοσίδης στην απόπτωση των κυττάρων Ο και στους επαγωγικούς μηχανισμούς in vitro. Νέα Υόρκη: Baotou Teachers' College (2020).

13. Han YM, Jin WM, Zeng Η, Wang C, Zhang Η. Επιδράσεις της εχινακοσίδης στον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση κυττάρων καρκίνου του παχέος εντέρου SW480 in vitro και in vivo. J Guangzhou Univ Trad Chin Med. (2020) 37:1542– 9. doi: 10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2020.08.024
14. Hou XT, Liu T, Su DQ. Αντικαρκινική επίδραση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από το Cistanche deserticola σε ποντικούς που φέρουν όγκο Η22. J Toxicol. (2021) 35:231– 40. doi: 10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010

15. Hou XT, Su DQ, Qi XX, Liu T. Επίδραση φαινυλαιθανοειδών γλυκοζιτών από Cistanche deserticola στην αυτοφαγία κυττάρων όγκου σε ποντικούς που φέρουν όγκο Η22. J Toxicol. (2022) 36:137–41. doi: 10.1155/2022/3993445

16. Hu Q, You SP, Liu T, Wang B, Liu X, Jiang YD. Μια έρευνα για την αντικαρκινική δράση του ήπατος του Cistanche. Carcinog Teratog Mutag. (2018) 30:194–9.

17. Kamalian L, Douglas O, Jolly CE, Snoeys J, Simic D, Monshouwer Μ, et al. Η χρησιμότητα των κυττάρων HepaRG για βιοενεργειακή διερεύνηση και ανίχνευση μιτοχονδριακής τοξικότητας που προκαλείται από φάρμακα. Toxicol In Vitro. (2018) 53:136–47. doi: 10.1016/j.tiv.2018. 08.001

18. Wang FJ, Li RY, Tu PF, Chen JP, Zeng KW, Jiang Y. Οι συνολικές γλυκοσίδες του Cistanche deserticola προάγουν την αποκατάσταση της νευρολογικής λειτουργίας προκαλώντας νευροαγγειακή αναγέννηση μέσω της οδού Nrf-2/Keap-1 στο MCAO /R αρουραίοι. (2020) 11:236. doi: 10.3389/fphar.2020.00236

19. Wang J, Zhang XX, Ni ZJ, Elam Ε. Thakur Kiran, Li KX, et αϊ. Ο αντικαρκινικός μηχανισμός της Licochalcone A σε ανθρώπινο κύτταρο ηπατώματος HepG2 με βάση τα omics miRNA. Food Sci Hum Well. (2023) 12:1136–48. doi: 10.1016/j.fshw.2022.10.039

20. Feng D, Chang X, Jiang YJ, Guo Y, Zhao J, Zhao JY, et αϊ. Βελτιστοποίηση της τεχνολογίας παρασκευής υδατικής εκχύλισης του Cistanche deserticola με μεθοδολογία επιφάνειας απόκρισης και έρευνα δραστηριότητας. Sci Technol Food Ind. (2023) 5:1– 16. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022050033

21. Ji XJ, Wang J, Ma AJ, Feng D, He Y, Yan WJ. Επιδράσεις της πρωτεΐνης νύμφης μεταξοσκώληκα στην απόπτωση και τον ενεργειακό μεταβολισμό σε κύτταρα DLD-1 του ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. Food Sci Hum Well. (2022). 2022:1171–6. doi: 10.1016/j.fshw.2022.04.011

22. Zhang ZG, Wang ML, Xing S, Zhang C. Τα φλαβονοειδή της Rosa rugosa Thunbininbinbed τον πολλαπλασιασμό και τη μετάσταση όγκου σε κύτταρα ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος HepG2 Food Sci Hum Well. (2022) 11:374–82. doi: 10.1016/j.fshw.2021.11.016

23. Liu X, Jiang Ν, Xu X, Liu C, Liu Z, Zhang Y, et αϊ. Προσδιορισμός της ένωσης κατά του ηπατώματος με τη μέθοδο της σχέσης επίδρασης φάσματος, εξουδετέρωσης συστατικού και UPLC-MS2 στο Scheflera heptaphylla (L) από βλάβες και τον μηχανισμό του. Front Pharmacol. (2020) 11:1342. doi: 10.3389/fphar.2020.01342

24. Liu XQ, Wang SY, Cui LL, Zhou HH, Liu YH, Meng LJ, et al. Λουλούδια: πολύτιμοι πόροι τροφίμων και φαρμάκων. Food Sci Hum Well. (2023) 12:1020– 52. doi: 10.1016/j.fshw.2022.10.022

25. Yin XZ, Liu ZJ, Guo Y. Αξιολόγηση επιδράσεων στην τετραϋδροπαλματίνη σε κύτταρα ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος με ανάλυση κυτταρικού ενεργειακού μεταβολισμού. Chin J Immunol. (2021) 37:426–30.

26. Liu GY, Sun YZ, Zhou N, Du XM, Yang J, Guo SJ. Η κουρκουμίνη 3,3'-ΟΗ προκαλεί απόπτωση στα κύτταρα HepG2 μέσω οδών που διαμεσολαβούνται από το ROS. Eur J Med Chem. (2016) 112:157–63. doi: 10.1016/j.ejmech.2016.02.019

27. Pal LC, Prateeksha, Singh BN, Pande V, Rao CV. Φαινολικά εμπλουτισμένο κλάσμα Pterospermum lanceifolium Roxb. αναστρέφει αποτελεσματικά το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα σε αρουραίους HCC που προκαλούνται από NDEA. Διατροφή Καρκίνος. (2022) 74:1106–21. doi: 10.1080/01635581.2021.1922716

28. Bras M, Queenan B, Susin SA. Προγραμματισμένος κυτταρικός θάνατος μέσω μιτοχονδρίων: διαφορετικοί τρόποι θανάτου. Βιοχημεία (Mosc). (2005). 70:231–9. doi: 10.1007/s10541-005-0105-4

29. Galber C, Acosta MJ, Minervini G, Giorgio V. Ο ρόλος της μιτοχονδριακής συνθάσης ATP στον καρκίνο. Biol Chem. (2020) 401:1199–214. doi: 10,1515/hsz-2020-0157

30. Piantadosi CA, Zhang J. Μιτοχονδριακή δημιουργία δραστικών ειδών οξυγόνου μετά από ισχαιμία εγκεφάλου στον αρουραίο. Εγκεφαλικό. (1996) 27:327-31. doi: 10.1161/01.STR.27.2.327

31. Avery SV. Μοριακοί στόχοι οξειδωτικού στρες. Biochem J. (2011) 434:201– 10. doi: 10.1042/BJ20101695

32. Cui Ζ, Li S, Wang HJ, Ma J, Qin ΤΤ, Shi Η, et αϊ. Επίδραση της διυδροαρτεμισινίνης στην οξειδωτική βλάβη και στον ενεργειακό μεταβολισμό των κυττάρων HepG2 και η συνεργιστική της δράση με το Sorafenib. Chin J Exp Trad Med Formul. (2021) 27:24–32. doi: 10.13422/j.cnki.syfjx.20211202

33. Hail N Jr, Cortes M, Drake EN, Spallholz JE. Χημειοπρόληψη του καρκίνου: μια ριζική προοπτική. Free Radic Biol Med. (2008) 45:97-110. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2008.04.004

34. Jiang B, Zhao WT, Ouyang C, Wang HH, Zhang FQ, Zhao GH, et al. Δίκτυο ρύθμισης του κυτταρικού μεταβολισμού. J Xiamen Univ (Nat Sci). (2022) 61:346-64.

35. Dragovic S, Vermeulen NP, Gerets HH, Hewitt PG, Ingelman-Sundberg Μ, Park BK, et al. Επιλογή προπονητικών ενώσεων βάσει στοιχείων για χρήση στην ολοκληρωμένη πρόβλεψη με βάση τον μηχανισμό της ηπατικής βλάβης που προκαλείται από φάρμακα στον άνθρωπο. Arch Toxicol. (2016) 90:2979–3003. doi: 10.1007/s00204-016-1845-1

36. Diaz-Ruiz R, Rigoulet M, Devin A. The Warburg and Crabtree effect: στην προέλευση του ενεργειακού μεταβολισμού των καρκινικών κυττάρων και της καταστολής της γλυκόζης ζυμομύκητα. Biochim Biophys Acta. (2011) 1807:568–76. doi: 10.1016/j.bbabio.2010.08.010

37. Warburg O. Σχετικά με την αναπνευστική δυσλειτουργία στα καρκινικά κύτταρα. Επιστήμη. (1956) 124:269– 70. doi: 10.1126/science.124.3215.269

38. Warburg O. Για την προέλευση των καρκινικών κυττάρων. Επιστήμη. (1956) 123:309– 14. doi: 10.1126/science.123.3191.309

39. Zhang X, Fryknäs Μ, Hernlund Ε, Fayad W, De Milito Α, Olofsson ΜΗ, et αϊ. Επαγωγή μιτοχονδριακής δυσλειτουργίας ως στρατηγική για τη στόχευση καρκινικών κυττάρων σε μικροπεριβάλλοντα μεταβολικά. Nat Commun. (2014) 5:3295. doi: 10.1038/comms 4295

40. Rios Garcia M, Steinbauer B, Srivastava K, Singhal M, Mattijssen F, Maida Α, et al. Η εξαρτώμενη από 1-ακετυλίωση πρωτεΐνης από ακετυλο-CoA καρβοξυλάση ελέγχει τη μετάσταση και την υποτροπή του καρκίνου του μαστού. Cell Metab. (2017) 26:842–55.e5. doi: 10.1016/j.cmet.2017.09.018

41. Yang Ε, Zha J, Jocker J, Boise LH, Thompson CB, Korsmeyer SJ. Το Bad, ένα ετεροδιμερές πατρικό Bcl-XL και Bcl-2, εκτοπίζει το Bax και προάγει τον κυτταρικό θάνατο. Κύτταρο. (1995) 80:285-91. doi: 10.1016/0092-8674(95)90411-5

42. Liang K, Cao BZ. Πρόοδος στην κυτταρική απόπτωση της μιτοχονδριακής ρύθμισης. Biomed Eng Clin Med. (2014) 18:501–5. doi: 10.13339/j.cnki. σκ.2014.05.049

For more information:1950477648nn@gmail.com