Επίδραση των εκχυλισμάτων φλούδας μπανάνας Sucrier στην αναστολή της μελανογένεσης μέσω της οδού σηματοδότησης ERK
Apr 25, 2023
Αφηρημένη
Η υπερμελάγχρωση είναι ένας τύπος μελαγχρωστικής διαταραχής που προκαλείται από την υπερέκφραση της περιεκτικότητας σε μελανίνη που ενεργοποιεί σοβαρά αισθητικά προβλήματα όπως μέλασμα, φακίδες, εφελίδες, φακίδες και άλλες μορφές στο ανθρώπινο δέρμα. Αρκετοί λευκαντικοί παράγοντες έχουν περιορισμένη χρήση λόγω των παρενεργειών ή της σταθερότητάς τους όπως το κοτζικό οξύ, το ασκορβικό οξύ και η υδροκινόνη μπορούν να δράσουν ως κυτταροτοξικές ουσίες που σχετίζονται με δερματίτιδα και καρκίνο του δέρματος. Για να βρεθεί μια ασφαλής ουσία, αυτή η μελέτη είχε στόχο να βρει την ικανότητα πολλών συστατικών στα εκχυλίσματα μπανανόφλουδας Sucrier (SBP) να αναστέλλουν τη διαδικασία μελανογένεσης μέσω της οδού σηματοδότησης p38 σε κύτταρα μελανώματος ποντικού B16F10. Η δραστηριότητα της τυροσινάσης και η περιεκτικότητα σε κυτταρική μελανίνη μειώνονταν δοσοεξαρτώμενα μετά τη θεραπεία με SBP. Επιπλέον, η SBP μείωσε την έκφραση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη μελανογένεση ως παράγοντα μεταγραφής που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία (MITF) και πρωτεΐνη τυροσινάσης μετά από 24 ώρες επώασης με διεγερτικές ορμόνες μελανοκυττάρων (MSH). Τα ευρήματα έδειξαν ότι η SBP περιείχε έναν αποτελεσματικό παράγοντα για αναστολείς υπερμελάγχρωσης μέσω των μονοπατιών σηματοδότησης p38 χωρίς καμία επίδραση στην οδό ERK και στη συνέχεια ρυθμίζει προς τα κάτω την έκφραση του MITF και την παραγωγή της οικογένειας ενζύμων τυροσινάσης.
Σύμφωνα με σχετικές μελέτες,κιστανάκιείναι ένα κοινό βότανο που είναι γνωστό ως «το θαυματουργό βότανο που παρατείνει τη ζωή». Το κύριο συστατικό του είναισιστανοζίτη, που έχει διάφορα αποτελέσματα όπως π.χαντιοξειδωτικό, αντιφλεγμονώδη, καιπροαγωγή της ανοσοποιητικής λειτουργίας. Ο μηχανισμός μεταξύ του cistanche και της λεύκανσης του δέρματος έγκειται στην αντιοξειδωτική δράση των γλυκοσιδών του cistanche.Μελανίνηστο ανθρώπινο δέρμα παράγεται από την οξείδωση της τυροσίνης που καταλύεται από την τυροσινάση και η αντίδραση οξείδωσης απαιτεί τη συμμετοχή οξυγόνου, έτσι οι ρίζες ελεύθερες από οξυγόνο στο σώμα γίνονται ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την παραγωγή μελανίνης.Cistancheπεριέχει σιστανοσίδη, η οποία είναι ένα αντιοξειδωτικό και μπορεί να μειώσει τη δημιουργία ελεύθερων ριζών στο σώμα,αναστέλλοντας την παραγωγή μελανίνης.
Κάντε κλικ στο Πού μπορώ να αγοράσω το Cistanche
Για περισσότερες πληροφορίες:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
Λέξεις-κλειδιά:μπανανόφλουδα sucrier? φαινολικές ενώσεις; τυροσινάση; παράγοντας μεταγραφής που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία. μελανογένεση
Εισαγωγή
Η μελανίνη παράγεται μέσα στο μελανόσωμα που είναι ένα σημαντικό οργανίδιο μέσα στα μελανοκύτταρα. Τα μελανοκύτταρα βρίσκονται στο βασικό στρώμα της επιδερμίδας του δέρματος. Μετά τη διαδικασία παραγωγής, η μελανίνη είναι η χρωστική ουσία που είναι υπεύθυνη για το χρωματισμό του δέρματος, των μαλλιών και των ματιών, η οποία λειτουργεί ως φυσικοποιημένο αντιοξειδωτικό, παράγοντας αποτοξίνωσης και ισχυρό χηλικοποιητή κατιόντων και μπορεί επίσης να λειτουργήσει ως καθολική προστασία έναντι της βλάβης από την υπεριώδη ακτινοβολία [1]. Η μη φυσιολογική παραγωγή μελανίνης μπορεί να προκαλέσει μελαγχρωστικές διαταραχές όπως η υπομελάγχρωση και η υπερμελάγχρωση. Η υπομελάγχρωση προκαλεί λεύκη, αλμπινισμό και μη φυσιολογικά προβλήματα μαλλιών ενώ η υπερμελάγχρωση προκαλεί φακίδες, μέλασμα, κηλίδες ηλικίας και μεταφλεγμονώδη υπερμελάγχρωση. Η γενετική προδιάθεση, οι ορμονικές αλλαγές, ιδίως τα οιστρογόνα, καθώς και άλλα όπως ηπατική νόσο, όγκος, καρκίνος, υποσιτισμός ή ακανόνιστη λειτουργία της υπόφυσης είναι οι εγγενείς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των εξωγενών παραγόντων όπως η έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία, και οι τοξικές ουσίες είναι η κύρια αιτία υπερμελάγχρωσης [2] .
Η τυροσινάση είναι ένα ένζυμο σταδίου περιορισμού του ρυθμού που στοχεύει στη διαδικασία τόσο διέγερσης όσο και αναστολής της διαδικασίας παραγωγής μελανίνης. Η διέγερση μελανίνης χρησιμοποιείται ως παράγοντας μαυρίσματος ή θεραπεία αποχρωματισμού μαλλιών. Η έκφραση της τυροσινάσης ελέγχεται από τον παράγοντα μεταγραφής που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία (MITF), ο οποίος είναι ένας ειδικός για τα μελανοκύτταρα μεταγραφικός παράγοντας που έλεγχε τη διαφοροποίηση, τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση των μελανοκυττάρων [3, 4]. Η ευθύνη του MITF στη μελανογένεση είναι να αυξήσει την έκφραση τυροσινάσης δεσμεύοντας στο DNA στη δομή ομοδιμερούς ή ετεροδιμερούς με πρωτεΐνη MiT, αυτή η θέση δέσμευσης περιλαμβάνει νουκλεοτίδιο θυμιδίνης πλευρικά E-Box και M-Box που διεγείρει τα συνεχή βήματα για την παραγωγή μελανογόνου ενζύμου όπως η πρωτεΐνη 1 που σχετίζεται με την τυροσινάση (TRP-1), η πρωτεΐνη που σχετίζεται με την τυροσινάση-2 (TRP-2) και η ταυτομεράση της ντοπάχρωμης. Η ρύθμιση του MITF ξεκινά από τη μεταγωγή σήματος μετά τη δέσμευση του -MSH στον υποδοχέα MC1R που διεγείρει την ενεργοποιημένη από μιτογόνο πρωτεϊνική κινάση (MARKs) που είναι κινάση σερίνης/θρεονίνης και περιλαμβάνει επίσης εξωκυτταρική κινάση ρυθμιζόμενη με σηματοδότηση (ERK) και επίσης p38. Αρκετές μελέτες διαπίστωσαν ότι η σύνθεση μελανίνης ελέγχεται από διάφορα μονοπάτια σηματοδότησης, όπως η φωσφοτιδυλική ασιταλική{{18}κινάση (PI3K/AKT) μπορεί να κατασταλεί από φυσικές ουσίες που περιέχουν ομάδα πολυφαινόλης μέσω της οδού σηματοδότησης ERK των κυττάρων μελανώματος ποντικού B16F10 [5,6 ].
Αυτή η μελέτη είχε στόχο να βρει την επίδραση της αναστολής της μελανογένεσης από τα εκχυλίσματα μπανανόφλουδας Sucrier (SBP). Η SBP μπορεί να περιέχει διάφορους τύπους πολυφαινολικών ενώσεων που δρουν ως αναστολείς τυροσινάσης, όπως η κατεχίνη, η προκυανιδίνη, το φερουλικό οξύ και το γαλλικό οξύ που ανιχνεύονται από την έκφραση των οδών σηματοδότησης ERK που επηρεάζουν την παραγωγή μελανογόνων ενζύμων όπως το TRP-1 και TRP-2 [7-10].
Υλικά και μέθοδοι
Χημικά και Υλικά
Σχισμένες (7 ημέρες μετά τη συγκομιδή) φλούδες μπανάνας Sucrier (Musa spp.) από την επαρχία Kampangpetch, Ταϊλάνδη. Πλένονται οι φλούδες μπανάνας με νερό και στη συνέχεια ψήνονται στον ήλιο μέχρι να στεγνώσουν τελείως, αλέθονται με μπλέντερ και εκχυλίζονται με εμποτισμό με 60 τοις εκατό μεθανόλη για 24 ώρες (MW24), φυγοκεντρούνται με 95 τοις εκατό αιθανόλη για 10 λεπτά στους 4 βαθμούς (Ε4), βράζοντας σε DI νερό στους 60 βαθμούς για 20 λεπτά (W60) και βρασμό σε μεθανόλη 95 τοις εκατό στους 60 βαθμούς για 20 λεπτά (Μ60). Το επόμενο βήμα ήταν να μειώσετε την ένταση του ήχου με περιστροφικό εξατμιστή στις 40 μοίρες και να στεγνώσετε με κρύο στεγνωτήριο Christ Alpha- 4 LD plus.
Κυτταρικής καλλιέργειας
Κύτταρα μελανώματος ποντικού B16F10 καλλιεργήθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Eagle's Dulbecco (DMEM) συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό στους 37 βαθμούς σε ένα επωασμένο με 5 τοις εκατό CO2. Μετά από 24 ώρες επώασης, στη συνέχεια άλλαξε το μέσο σε μέσο χωρίς ορό με διαφορετικές συγκεντρώσεις εκχυλισμάτων μπανανόφλουδας Sucrier (SBP) με διέγερση -MSH. Στη συνέχεια τα κύτταρα συλλέχθηκαν με θρυψινοποίηση για τα επόμενα πειράματα.
Δοκιμασία βιωσιμότητας κυττάρων
Η κυτταροτοξικότητα των εκχυλισμάτων SBP μετρήθηκε με δοκιμασία ΜΤΤ. Τα κύτταρα (5 ×10 3) σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων και καλλιεργήθηκαν σε DMEM για 24 ώρες στους 37 βαθμούς σε επώαση με 5 τοις εκατό CO2 και στη συνέχεια άλλαξαν το μέσο σε μέσο χωρίς ορό με διαφορετικές συγκεντρώσεις εκχυλισμάτων SBP για 48 ώρες. Μετά την επεξεργασία, απορρίφθηκε το μέσο και πλύθηκε δύο φορές με ψυχρό PBS, 100 μΙ διαλύματος ΜΤΤ (5 mg/ml) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο, επωάστηκαν στους 37 βαθμούς για 4 ώρες και στη συνέχεια μετρήθηκαν με τον αναγνώστη ELISA στα 420 nm.
Δοκιμασία περιεχομένου μελανίνης
Τα συλλεχθέντα κύτταρα υπέστησαν λύση σε ψυχρό ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (20 mM φωσφορικό νάτριο pH 6,8, 1 τοις εκατό tritonX-100, 1 mM PMSF και 1 mM EDTA) και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν 1.200 rpm στους 4 βαθμούς για 10 λεπτά για να διαχωριστούν τα υπερκείμενα ενώ η μελανίνη διαλύθηκαν σε 200 μΙ 1Ν NaOH για 60 λεπτά στους 80 βαθμούς. Η συσκευή ανάγνωσης ELISA χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της απορρόφησης στα 415 nm. και υπολογίστηκε σε σύγκριση με την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη από τη δοκιμασία περιεκτικότητας πρωτεΐνης σε δικινχονικό οξύ (BCA) (Pierce Biotechnology, Packford, IL, USA).
Ανάλυση Western blot
Το υπερκείμενο που διαχωρίστηκε κατά τη διάρκεια της προόδου της κυτταρικής λύσης λήφθηκε για κλασματοποίηση σε SDS-PAGE και στη συνέχεια μεταφέρθηκε σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης ενισχυμένης χημειοφωταύγειας Hybond (Amersham, Little Chalfont, UK) και ανιχνευτή με πρωτογενές αντίσωμα κατά της τυροσινάσης (Santa Cruz, Biotechnology, , CA, USA), MITF ( Merck Millipore Darmstadt, Γερμανία), ERK (Merck Millipore Darmstadt, Γερμανία), P38 ( Merck Darmstadt Millipore, Γερμανία) και μονοκλωνικά αντισώματα κατά της Β-Ακτίνης (AC-15), Sigma Aldrich ). Από εκεί και πέρα, επωάστε τη μεμβράνη με οπτικοποίηση δευτερογενούς συμπλέγματος αντισωμάτων συζευγμένη με υπεροξειδάση χρένου και ποσοτικοποιήστε τα σήματα με το λογισμικό ImageJ.
Στατιστική ανάλυση Όλες οι πληροφορίες αναλύθηκαν με μέσο όρο ± τυπική απόκλιση (SD). Η δοκιμή ANOVA μονής κατεύθυνσης χρησιμοποιείται για τη μέτρηση των διαφορών μεταξύ κάθε συνόλου πληροφοριών. Μια τιμή P μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.
Αποτελέσματα
Φαινολική ένωση
Ο στόχος αυτού του πειράματος ήταν να μετρηθεί η αποτελεσματικότητα των διαλυτών που χρησιμοποιούνται για την εκχύλιση και επίσης μια μέθοδος που μπορεί να εκχυλίσει όσο το δυνατόν περισσότερο τις φαινολικές ενώσεις. Οι περισσότερες φαινολικές ενώσεις διαλύονται πολύ καλά όταν εκχυλίζονται με διαλύματα υψηλής πολικότητας όπως νερό, μεθανόλη (MeOH), αιθανόλη (EtOH), ακετόνη, οξικός αιθυλεστέρας, προπανόλη, οξικό οξύ ή το μείγμα τους σε διάφορες δόσεις [11]. Το Σχήμα 1Α δείχνει ότι το W60 μπορεί να εκχυλίσει φαινολικές ενώσεις έως και 16,24 μg/ml ακολουθούμενα από M60, E4 και MW24 με ολική φαινόλη 13,89, 9,21 και 8,38 μg/ml αντίστοιχα. Η κυτταροτοξικότητα της SBP πειραματίστηκε με τη δοκιμασία μείωσης ΜΤΤ που μέτρησε το περιβάλλον αναγωγής από τη μιτοχονδριακή λειτουργία των ζωντανών κυττάρων μετρώντας τον σχηματισμό φορμαζάνης για πρόσβαση στα κυτταροτοξικά αποτελέσματα. Το αποτέλεσμα βρήκε ότι η SBP σε ενδεικνυόμενες συγκεντρώσεις (έως 500 μg/ml) με επώαση 48 ωρών. Η κυτταροτοξικότητα δεν δείχνει σημαντική επίδραση μετά τη θεραπεία με SBP (Εικ. 1Β).
Οι επιδράσεις της SBP στην ενζυμική δραστηριότητα και την περιεκτικότητα σε μελανίνη στα κύτταρα B16F10
Για να δοκιμαστεί η καταστολή της μελανογένεσης της SBP, το πρώτο βήμα ήταν να δοκιμαστεί η ικανότητα αναστολής του ενζύμου της τυροσινάσης μανιταριών σε σύγκριση με το κοτζικό οξύ που είναι ένας εμπορικός λευκαντικός παράγοντας. Το SBP (MW24) έχει υψηλότερη αποτελεσματικότητα από το Kojic acid και άλλες εκχυλίσεις στην ίδια συγκέντρωση (100-500 μg/ml). Το MW24 έχει το υψηλότερο ποσοστό αναστολής τυροσινάσης (66.39-77.05 τοις εκατό) ενώ το κοτζικό οξύ έχει μόνο ένα ποσοστό αναστολής τυροσινάσης στο 44.68-59.93 τοις εκατό όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Γ. Από εκεί και πέρα, το MW24 με το υψηλότερο ποσοστό αναστολής της τυροσινάσης επιλέχθηκε για μέτρηση κατά της μελανογένεσης με παραγωγή μελανίνης από κύτταρα B16F10. Η περιεκτικότητα σε μελανίνη των κυττάρων B16F10 μειώθηκε μετά την επεξεργασία SBP (MW24) (Εικ. 2Α). Η ποσότητα της περιεκτικότητας σε μελανίνη των κυττάρων B16F10 μειώνεται σημαντικά μετά από διέγερση με -MSH και επεξεργασία με SBP (MW24) για 24 ώρες με δοσοεξαρτώμενο τρόπο όπως φαίνεται στο Σχ. 2Β.
Επιδράσεις της SBP (M24) στα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης της τυροσινάσης και του MITF
Η ανάλυση Western blot χρησιμοποιήθηκε για τη δραστηριότητα τυροσινάσης και MITF με μέτρηση των επιπέδων έκφρασης πρωτεΐνης μετά από επεξεργασία με SBP (MW24) για 24 ώρες. Η ρύθμιση των μελανογόνων ενζύμων όπως το TRP-1 και το TRP-2 προέκυψε από τη μεταγραφική επίδραση του MITF και του επιπέδου πρωτεΐνης τυροσινάσης. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η SBP (MW24) ήταν ικανή να ρυθμίζει προς τα κάτω την έκφραση τόσο της τυροσινάσης όσο και της πρωτεΐνης MITF, όπως φαίνεται στο Σχήμα 3.
Επίδραση της SBP (M24) στην αναστολή της μελανογένεσης μέσω της οδού σηματοδότησης της ενεργοποιημένης από μιτογόνο πρωτεΐνη κινάσης (MAPKs)
Στη μελανογένεση, η οικογένεια κινασών MAPKs, ειδικά τα ERK και p38 σχετίζονται άμεσα με αυτή τη διαδικασία [12]. Η σηματοδότηση ERK θα μειωθεί, ενώ η σηματοδότηση p38 θα ρυθμιστεί προς τα πάνω κατά την εμφάνιση παραγωγής μελανίνης. Ωστόσο, η φωσφορυλίωση του ERK και της ρ38 θα έχει μια αντίστροφη διαδικασία παραγωγής μελανίνης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ένα σαφές αποτέλεσμα μετά τη θεραπεία με SBP (MW24) με -MSH που ενεργοποιήθηκε με ανοσοστύπωση στη οδό σηματοδότησης MAPK. Η SBP (MW24) μείωσε ελαφρώς την έκφραση της πρωτεΐνης p38 και ρυθμίζει προς τα πάνω τη φωσφορυλίωση της p38. Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε τον τρόπο αναστολής της διαδικασίας μελανογένεσης μέσω της οδού p38 χωρίς καμία επίδραση στο ERK, αλλά η φωσφορυλίωση του επιπέδου πρωτεΐνης ERK μειώθηκε ελαφρώς μετά τη θεραπεία με -MSH και SBP (MW24), όπως φαίνεται στο Σχ. 4.
Συζήτηση
Οι μπανανόφλουδες Sucrier είναι γεωργικά απόβλητα που έχουν αφθονία πολλών δραστικών ουσιών, ειδικά στην ομάδα των φαινολικών ενώσεων και των καροτενοειδών που είναι ο δευτερογενής μεταβολίτης που δημιουργούν τα φυτά για μηχανισμούς αυτοάμυνας [7]. Αυτές οι ουσίες μπορούν να βρεθούν σε φύλλα, φλοιό, φρούτα, φλούδες και σπόρους σχεδόν όλων των φυτών. Οι φαινολικές ενώσεις και τα καροτενοειδή είναι φυτοχημικές ουσίες που έχουν καλές ιδιότητες για την ανθρώπινη υγεία. Οι ουσίες περιλαμβάνουν αντιφλεγμονώδη, αντι-ιικά, αναλγητικά, αντιοξειδωτικά, αντικαρκινογόνα, κ.λπ. [13]. Γενικά, οι φαινολικές ενώσεις μπορούν να διαλυθούν καλά σε υψηλού πολικούς διαλύτες. Για το πείραμα, η εκχύλιση του MW24 θα πρέπει να μπορεί να εκχυλίσει περισσότερο τις φαινολικές ενώσεις λόγω της διαδικασίας εκχύλισης από τον προσδιορισμό Folin-Cicualteu. Οι ενώσεις χαμηλής πολικότητας εκχυλίστηκαν πρώτα και στη συνέχεια ακολούθησαν ουσίες υψηλής πολικότητας ανάλογα με την τελική αναλογία ανάμιξης του διαλύτη στη διαδικασία. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το W60 μπορεί να εκχυλίσει περισσότερο τις φαινολικές ενώσεις, πιθανώς λόγω της θερμοκρασίας 60 βαθμών Κελσίου που θα μπορούσε να είναι η κατάλληλη θερμοκρασία για την εξαγωγή φαινολικών ενώσεων [11]. Μπορεί επίσης να υποτεθεί ότι το SBP μπορεί να περιέχει ουσίες υψηλής πολικότητας που διαλύονται καλά στο νερό. Κατά τη σύγκριση της ποσότητας των συνολικών φαινολικών ενώσεων όπως φαίνεται στο Σχ. 1Α, τα W60, M60, E4 και MW24 απέδειξαν σημαντικά τη δυνατότητα διαλυτότητας της ουσίας.
Αφού έγινε γνωστή η συνολική ποσότητα της φαινολικής ένωσης, μπορούμε να προχωρήσουμε στον εντοπισμό του τύπου και της ποσότητας των φλαβονοειδών και καροτενοειδών ουσιών. Βρήκαμε ότι τα εκχυλίσματα SBP (MW24) περιέχουν φερουλικό οξύ έως και 906,62 mg/100g και επίσης βρήκαμε μια μικρή ποσότητα λουτεΐνης και -καροτίνης που ταξινομήθηκαν στην ομάδα των καροτενοειδών σε 1,23 και 2,37 mg/100g αντίστοιχα. Το SBD (MW24) εξακολουθεί να έχει υψηλό ποσοστό αναστολής της τυροσινάσης. Ως εκ τούτου, το SBP (MW 24) επιλέχθηκε για περαιτέρω μελέτη.
Από τη δοκιμή κυτταροτοξικότητας, δεν βρέθηκε σημαντική κυτταροτοξική από το SBP, αν και η ποσότητα της συγκέντρωσης χρήσης ήταν μέχρι 500 μg/ml. πιθανώς επειδή η μικρή ποσότητα καροτενοειδούς εντός της εκχύλισης έχει την ικανότητα να προστατεύει τα κύτταρα. Ουσίες αυτής της ομάδας έχουν αντιοξειδωτικές ιδιότητες που μπορούν να τερματίσουν το δηλητήριο μέσω του κυτοχρώματος P-450, ιδιαίτερα της καροτίνης που έχει διεγερτικό ρόλο στις λειτουργίες του ανοσοποιητικού αλληλεπιδρώντας με τα είδη οξυγόνου αντίδρασης (ROS). Αυτό θα υποστηρίξει την αποτελεσματικότητα μιας φαινολικής ένωσης που έχει την ιδιότητα του αποτελέσματος σάρωσης ROS να μειώνει την φλεγμονώδη κυτοκίνη [14]. Άρα, το SBD (MW24) όχι μόνο δεν έχει τοξική δράση, έχει και τον ρόλο της προστασίας των κυττάρων.
Η μελέτη μας διαπίστωσε επίσης ότι η SBP (MW24) έχει την ικανότητα να αναστέλλει τη μελανογένεση των κυττάρων B16F10. Η έκφραση της τυροσινάσης και του MITF μειώθηκε μετά τη θεραπεία με SBP (MW24) και στα δύο που αξιολογήθηκαν με τυροσινάση μανιταριού και ανάλυση Western blot με δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Αυτό το τεστ έδειξε ότι το SBP (MW24) μπορεί να καταστείλει τη δημιουργία μελανίνης ρυθμίζοντας προς τα κάτω το μονοπάτι σηματοδότησης p38 και ρυθμίζοντας προς τα πάνω τη φωσφορυλίωση του p38 που ενεργοποιεί την αποικοδόμηση της πρωτεΐνης MITF και στη συνέχεια επηρεάζει τη μείωση της έκφρασης της οικογένειας μελανογόνου ενζύμου όπως η τυροσινάση. Η καταστολή του p38 μειώνει τις λειτουργίες της πρωτεΐνης δέσμευσης απόκρισης cAMP (CREB) που είναι ένας σημαντικός μεταγραφικός παράγοντας που λειτουργεί με PAX3 και SOX10 που προσκολλάται στο M-BOX του γονιδίου MITF για να ενεργοποιήσει την έκφραση πρωτεΐνης MITF που επηρεάζει τη διαδικασία παραγωγής μελανίνης και τη δραστηριότητα επιβίωσης των κυττάρων [15 ]. Γενικά, η ενεργοποίηση του ERK οδηγεί σε φωσφορυλίωση του MITF στη σερίνη 73 που προκαλεί ουβικουϊτινοποίηση και τελικά αποικοδόμηση. Οι περισσότερες φυσικές ενώσεις μπορούν να αναστείλουν τη μελανογένεση μέσω της διαδικασίας διέγερσης της οδού σηματοδότησης ERK, αλλά η SBP (MW24) δεν επηρεάστηκε σημαντικά την οδό σηματοδότησης ERK [16].
Πολλές έρευνες διαπίστωσαν ότι οι φαινολικές ενώσεις και τα καροτενοειδή μπορούν να αναστείλουν την παραγωγή χρωστικών μελανίνης, επειδή η βήτα-καροτίνη έχει την ικανότητα να απορροφά φωτόνια UVB, ενώ έχει επίσης την ιδιότητα του λιποδιαλυτού αντιοξειδωτικού και η φαινολική ένωση μπορεί να ενεργοποιήσει το Nrf2, να μπλοκάρει τους υποδοχείς ROS, να μειώσει τη φλεγμονή. παραγωγή κυτοκίνης και επάγουν έκφραση y-GSC που υποστηρίζουν τη μελέτη μας αλλά με τον διαφορετικό τρόπο αναστολής της μελανογένεσης [17]. Εκτός από αυτό το φερουλικό οξύ που βρέθηκε στο SBP (MW24) ήταν η κύρια ουσία στην ομάδα των φαινολικών ενώσεων που επιβεβαιώθηκε από αρκετές μελέτες ότι έχει την ιδιότητα της αντιμελανογένεσης επειδή μπορεί να ρυθμίσει την έκφραση του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), διεγείρει νιτρικό οξείδιο συνθάσης, δρουν ως ογκοκατασταλτικό γονίδιο και επίσης σχετίζονται με τη διαδικασία παραγωγής χρωστικών μελανίνης. Στο διάλυμα SBP (MW24), το φερουλικό οξύ μπορεί να αυξήσει την αποτελεσματικότητα όταν αναμιγνύεται με καροτενοειδή ή άλλα φωσφολιπίδια, επειδή η υδατοδιαλυτότητα, η λιποδιαλυτότητα και η βιοδιαθεσιμότητα θα αυξηθούν με αποτέλεσμα τη βελτίωση της αναστολής της μελανογένεσης των κυττάρων B16F10 [18]. Η επίπτωση όλων των αποτελεσμάτων καταλήγει στο συμπέρασμα ότι η SBP (MW24) θα μπορούσε να μειώσει αποτελεσματικά τη μελανογένεση.
Συντομογραφίες
MITF: μεταγραφικός παράγοντας που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία. -MSH: -μελανοκύτταρα διεγερτική ορμόνη. MC1R: υποδοχέας μελανοκορτίνης-1. TRP1: πρωτεΐνη 1 που σχετίζεται με τυροσινάση; TRP2: πρωτεΐνη 2 που σχετίζεται με τυροσινάση; MAPK: ενεργοποιημένη από μιτογόνο πρωτεϊνική κινάση.
Ευχαριστίες
Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Royal Golden Jubilee Ph.D.: RGJPHD. Ταϊλάνδη. (Φ.Δ./0017/2558).
Συνεισφορές Συγγραφέων
Οι RH, KT, KS και UP συνέλαβαν και σχεδίασαν τα πειράματα. Οι RHCHL και MC πραγματοποίησαν τα πειράματα. Οι RH και MC και CHL ανέλυσαν τα δεδομένα. Αντιδραστήρια/υλικά/εργαλεία ανάλυσης με συνεισφορά RH. Οι RH και CHL έγραψαν το χαρτί.
Ανταγωνιστικά Συμφέροντα
Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχει ανταγωνιστικό ενδιαφέρον.
βιβλιογραφικές αναφορές
1.Regnault MR, Gadaud N, Boulinguez S, Tournier E, Lamant L, Gladieff L, et al. Δικτυωτή υπερμελάγχρωση που σχετίζεται με τη χημειοθεραπεία: μια σειρά περιπτώσεων και ανασκόπηση της βιβλιογραφίας. Δερματολογία 2015; 231: 312-8.
2. Ali A. Dermatology A Pictorial Review. McGraw Hill Education 2010. ISBN978-0-07-179323-0.
3. Garraway LA, Widlund R, Rubin ΜΑ, Getz G, Berger AJ, Ramaswamy S, Beroukhim R, et αϊ. Οι ολοκληρωμένες γονιδιωματικές αναλύσεις προσδιορίζουν το MITF ως ογκογονίδιο επιβίωσης γενεαλογίας που ενισχύεται σε κακοήθη μελάνωμα. Nature 2005; 436: 117–22.
4. Busca R, Ballotti R. Cyclic AMP ένας βασικός αγγελιοφόρος στη ρύθμιση της μελάγχρωσης του δέρματος. Pigment Cell and Melanoma Research 2000; 13: 60-9.
5. Zhou J, Ren Τ, Li Y, Cheng Α, Xie W, Xu L, et al. Η ελαιολαιθανολαμίδη αναστέλλει τη μελανογένεση που διεγείρεται από την ορμόνη διέγερσης των μελανοκυττάρων μέσω των σηματοδοτικών οδών ERK, Akt και CREB στα κύτταρα μελανώματος Β16. Oncotarget 2017; 8: 56868-79.
6. Onkoksoong T, Jeayeng S, Poungvarin N, Limsaengurai S, Thamsermsang O, Tripatara P, Akarasereenont P, Panich U. Ταϊλανδέζικη φυτική αντιπυρετική φόρμουλα 22 (APF22) αναστέλλει τη μελανογένεση που προκαλείται από την UVA μέσω της ενεργοποίησης του αντιοξειδωτικού Nrf{4} άμυνα. Έρευνα φυτοθεραπείας 2018; 32: 1546-54.
7. Singh B, Singh JP, Kaur A, Singh N. Βιοδραστικές ενώσεις στην μπανάνα και τα σχετικά οφέλη για την υγεία - Μια ανασκόπηση. Χημεία Τροφίμων 2015; 1: 1-11.
8. Leerach N, Yakaew S, Phimnuan P, Soimee W, Nakyai W, Luangbudnark W, Viyoch J. Επίδραση της μπανάνας της Ταϊλάνδης (ομάδα Musa AA) στη μείωση της συσσώρευσης τελικών προϊόντων οξείδωσης σε δέρμα ποντικού ακτινοβολημένο με UVB. Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biology 2017; 168: 50-58.
9. Hung BY, Kim SY, Jung JM, Won CH, Choi JH, Lee MW. Ο αντιμυκητιακός παράγοντας κλοτριμαζόλη αναστέλλει τη μελανογένεση επιταχύνοντας την αποικοδόμηση της τυροσινάσης που προκαλείται από ERK και PI3K-/Akt. Πειραματική Δερματολογία 2015; 24: 381-400.
10. Shen T, Heo SI, Wang MH. Συμμετοχή του μονοπατιού σηματοδότησης p38 MAPK και ERK στην αντιμελανογόνο δράση του 3,{4}} καφεοϋλοκινικού μεθυλεστέρα σε κύτταρο μελανώματος ποντικού B16F10. Χημικο-Βιολογική Αλληλεπίδραση 2012; 199: 106-11.
11. Ruesgas-Ramón M, Figueroa-Espinoza MC, Durand E. Application of Deep Eutectic Solvents (DES) for Phenolic Compounds Extraction: Overview, Challenges, and Opportunities. Journal of Agricultural and Food Chemistry 2017; 10: 3591-3601.
12. Tsao YT, Kuo CY, Kuan YD, Lin HC, Wu LH, Lee CH. Τα εκχυλίσματα του Astragalus membranaceus αναστέλλουν τη μελανογένεση μέσω της οδού σηματοδότησης ERK. International Journal of Medical Sciences 2017; 3: 1049-53.
13. Τσανγκ ΤΣ. Μια ενημερωμένη ανασκόπηση των αναστολέων τυροσινάσης. International Journal of Molecular Sciences 2009; 26: 2440-75.
14. Juturu V, Bowman JP, Deshpande J. Συνολικά αποτελέσματα για τον τόνο του δέρματος και τη βελτίωση της λεύκανσης του δέρματος με από του στόματος συμπλήρωμα ισομερών λουτεΐνης και ζεαξανθίνης: μια διπλή-τυφλή, ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο κλινική δοκιμή. Κλινική, Αισθητική και Διερευνητική Δερματολογία 2016; 7: 325-332.
15. Bell RE, Levy C. Τα τρία m: μελάνωμα, παράγοντας μεταγραφής που σχετίζεται με τη μικρο-οφθαλμία και microRNA. Έρευνα μελανώματος με χρωστικά κύτταρα 2011; 24: 1088–106.
16. Zhou J, Ren T, Li Y, Cheng A, Xie W, Xu L, Peng L. Η ελαιολαιθανολαμίδη αναστέλλει τη μελανογένεση που διεγείρεται από ορμόνες μελανοκυττάρων μέσω οδών σηματοδότησης ERK, Akt και CREB σε κύτταρα μελανώματος Β16. Oncotarget 2017; 23: 56868-79.
17. Toews DPL, Hofmeister NR, Taylor SA. Η εξέλιξη και η γενετική της επεξεργασίας καροτενοειδών στα ζώα. Τάσεις στη Γενετική 2017; 33: 171-182.
18. Li L, Liu Y, Xue Y, Zhu J, Wang X, Dong Y. Παρασκευή ενός συμπλόκου φερουλικού οξέος-φωσφολιπιδίου για τη βελτίωση της διαλυτότητας, της διάλυσης και της δραστηριότητας αναστολής της κυτταρικής μελανογένεσης B16F10. Chemistry Central Journal 2017; 22: 11-26.
Για περισσότερες πληροφορίες: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
