Η διαιτητική χρήση των πηγών μεθειονίνης και του βάκιλου Amyloliquefaciens CECT 5940 επηρεάζει την απόδοση της ανάπτυξης, την ιστολογία του ήπατος, την πέψη, την ανοσία και το πεπτικό μικροβίωμα του Litopenaeus Vannamei Fed με μειωμένες δίαιτες με ιχθυάλευρα
Oct 30, 2023
Απλή Περίληψη: Η επιταχυνόμενη επέκταση της εκτροφής γαρίδας απαιτεί πηγές πρωτεΐνης με υψηλή θρεπτική αξία για τη σύνθεση τροφών που ικανοποιούν τις διατροφικές απαιτήσεις της γαρίδας. Τα ιχθυάλευρα (FM) είναι η κύρια πηγή πρωτεΐνης για τα σκευάσματα υδρόβιων ζωοτροφών. Ωστόσο, η περιορισμένη προσφορά και το υψηλό κόστος ενθαρρύνουν την έρευνα για εναλλακτικές πηγές πρωτεΐνης για τη διαμόρφωση πιο κερδοφόρων ζωοτροφών που συμβάλλουν στη βιωσιμότητα της υδατοκαλλιέργειας. Το σογιάλευρο (SBM) και το άλευρο υποπροϊόντων πουλερικών (PBM) έχουν χρησιμοποιηθεί ως πηγές πρωτεϊνών για την αντικατάσταση των ιχθυάλευρων, αλλά η ανισορροπία των βασικών αμινοξέων τους συμβάλλει στη χαμηλή απόδοση ανάπτυξης γαρίδας και επηρεάζει την υγεία των γαρίδων. Ως εκ τούτου, ο σκοπός της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η επίδραση της αντικατάστασης FM από SBM και PBM σε δίαιτες συμπληρωμένες με DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) και τους συνδυασμούς τους σε απόδοση ανάπτυξης και υγεία του νεαρού Litopenaeus vannamei. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το FM θα μπορούσε εν μέρει να αντικατασταθεί με SBM και PBM σε τροφές γαρίδας συμπληρωμένες με 0.19% MET-MET ή 0.06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 χωρίς επηρεάζοντας αρνητικά τις επιδόσεις ανάπτυξης και την ευημερία του Litopenaeus vannamei. Αυτά τα αποτελέσματα μπορεί να είναι ενδιαφέροντα για την ανάπτυξη τροφών με χαμηλά ιχθυάλευρα και τη συμβολή στη βιωσιμότητα της υδατοκαλλιέργειας.
Οφέλη συμπληρώματος cistanche-αύξηση της ανοσίας
Αφηρημένη:Μια δοκιμή σίτισης {{0}}εβδομάδας διερεύνησε την επίδραση της αντικατάστασης του ιχθυάλευρου (FM) από άλευρα σόγιας (SBM) και γεύμα υποπροϊόντων πουλερικών (PBM) σε δίαιτες συμπληρωμένες με DL-Met, MET-MET (AQUAVI ®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) και οι συνδυασμοί τους για την απόδοση ανάπτυξης και την υγεία του νεαρού Litopenaeus vannamei. Συνολικά έξι πειραματικές δίαιτες διαμορφώθηκαν σύμφωνα με τις διατροφικές απαιτήσεις του L. vannamei. Συνολικά 480 γαρίδες (0.30 ± 0.04 g) κατανεμήθηκαν τυχαία σε 24 δεξαμενές (4 επαναλήψεις/κάθε δίαιτα , 20 γαρίδες/δεξαμενή). Οι γαρίδες τρέφονταν με δίαιτα ελέγχου (CD; 200 g/Kg ιχθυάλευρα) και πέντε δίαιτες με 50% υποκατάστατο FM συμπληρωμένο με διαφορετικές πηγές μεθειονίνης, προβιοτικά (B. amyloliquefaciens CECT 5940) και τους συνδυασμούς τους: D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET-MET), D3 ({{{{{ 69}}.19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 και D5 (0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940). και γαρίδες D5 σημαντικά υψηλότερο τελικό, εβδομαδιαίο κέρδος βάρους και τελική βιομάζα σε σύγκριση με γαρίδες που τρέφονται με CD (p < 0,05). Οι γαρίδες που τρέφονται με D2 έως D5 αύξησαν το ύψος των επιθηλιακών κυττάρων του ηπατοπάγκρεας (p < 0,05). (p < 0,05). Εν τω μεταξύ, οι γαρίδες που τρέφονταν με D1 είχαν σημαντική μείωση των γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό (p < 0,05). Επιπλέον, οι γαρίδες που τρέφονταν με D3 και D5 αύξησαν την αφθονία των ωφέλιμων προκαρυωτικών μικροοργανισμών όπως το Pseudoalteromonas και το Demequina που σχετίζονται με τον μεταβολισμό των υδατανθράκων διέγερση. Επίσης, οι γαρίδες που τρέφονταν με D3 και D5 αύξησαν την αφθονία των ευεργετικών ευκαρυωτικών μικροοργανισμών καθώς το Aurantiochytrium και το Aplanochytrium σχετίζονταν με την παραγωγή εικοσαπεντανοϊκού οξέος (EPA) και εικοσιδυαεξανοϊκού οξέος (DHA), το οποίο παίζει ρόλο στην προώθηση της ανάπτυξης ή στην ενίσχυση του ανοσοποιητικού οργανισμού. Επομένως, τα ιχθυάλευρα θα μπορούσαν να αντικατασταθούν εν μέρει έως και 50% από SBM και PBM σε δίαιτες συμπληρωμένες με 0,19% MET-MET (AQUAVI®) ή 0,06% MET-MET (AQUAVI®) συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECTOBIOL® (EC) και βελτιώνουν την παραγωγική απόδοση, την υγεία και την ανοσία των λευκών γαρίδων. Απαιτείται περαιτέρω έρευνα για τη διερεύνηση των συνεργιστικών επιδράσεων των αμινοξέων και των προβιοτικών σε δίαιτες εκτροφής γαρίδων, καθώς και για την αξιολόγηση του τρόπου με τον οποίο το SBM και το PBM επηρεάζουν τη σύνθεση λιπαρών οξέων των μειωμένων δίαιτων ιχθυάλευρων και την ποιότητα των μυών της γαρίδας. Ωστόσο, αυτές οι πληροφορίες θα μπορούσαν να είναι ενδιαφέρουσες για την ανάπτυξη τροφών με χαμηλά ιχθυάλευρα για την υδατοκαλλιέργεια χωρίς να επηρεάζεται η ανάπτυξη και η ευημερία των υδρόβιων οργανισμών.
Οφέλη από το σωληνίσκο cistanche- ενίσχυση του ανοσοποιητικού συστήματος
Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Enhance Immunity
【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Λέξεις-κλειδιά: Litopenaeus vannamei; διατροφή γαρίδας? Αντικατάσταση ιχθυάλευρου? μεθειονίνη; προβιοτικά? εκτέλεση; υγεία; μικροχλωρίδα
1. Εισαγωγή
Η εκτροφή γαρίδας απέδωσε σχεδόν 11,2 εκατομμύρια τόνους το 2022 και η λευκή γαρίδα του Ειρηνικού (Litopenaeus vannamei) ήταν το πιο αντιπροσωπευτικό είδος με το 52% της συνολικής παραγωγής [1]. Η βιωσιμότητα και η κερδοφορία της παραγωγής υδατοκαλλιέργειας απαιτούν την προμήθεια πρώτων υλών με υψηλή θρεπτική αξία για τη σύνθεση ζωοτροφών που καλύπτει τις διατροφικές ανάγκες των εκτρεφόμενων γαρίδων [2,3]. Τα ιχθυάλευρα είναι το κύριο συστατικό των υδροτροφών λόγω της υψηλής θρεπτικής τους αξίας [4]. Ωστόσο, η περιορισμένη προσφορά και το υψηλό κόστος ιχθυαλεύρων απαιτούν έρευνα για εναλλακτικές πηγές για ζωοτροφές που είναι πιο κερδοφόρες και συμβάλλουν στη βιωσιμότητα της υδατοκαλλιέργειας [5,6]. Προηγούμενες μελέτες, που επικεντρώθηκαν κυρίως στην παραγωγική απόδοση της γαρίδας, ανέφεραν ότι τα ιχθυάλευρα μπορούν να αντικατασταθούν εν μέρει από διάφορες ζωικές και φυτικές πηγές [6]. Μεταξύ των πηγών φυτικής πρωτεΐνης, το σόγιαλευρο έχει υψηλή περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη. Ωστόσο, η παρουσία αντιθρεπτικών παραγόντων, η κακή πεπτικότητα και η ανισορροπία των βασικών αμινοξέων (EAA) που επηρεάζει το πεπτικό μικροβίωμα, προκαλεί φλεγμονώδη απόκριση στα πεπτικά όργανα, χαμηλή απόδοση παραγωγικότητας και επηρεάζει την ανοσολογική απόκριση του υδρόβιου οργανισμού [5,7, 8]. Το άλευρο υποπροϊόντων πουλερικών είναι μια ζωική πηγή υψηλής περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες με έλλειψη σε μεθειονίνη και λυσίνη, επομένως, η χρήση του σε μειωμένες τροφές ιχθυάλευρων θα μπορούσε να επηρεάσει την ανάπτυξη και την ευημερία των υδρόβιων οργανισμών [9]. Η μεθειονίνη είναι σπάνιος EAA σε υδροτροφές με χαμηλά ιχθυάλευρα και είναι απαραίτητη για την κανονική ανάπτυξη [10], τη σύνθεση πρωτεϊνών [11] και την ανοσολογική λειτουργία [12] των υδρόβιων οργανισμών. Ως εκ τούτου, απαιτείται συμπλήρωμα μεθειονίνης σε τροφές με χαμηλή περιεκτικότητα σε ιχθυάλευρα για την εξισορρόπηση των αμινοξέων και τη μείωση των αρνητικών επιπτώσεων στην ανάπτυξη και το μεταβολισμό των εκτρεφόμενων υδρόβιων οργανισμών [13]. Μια ποικιλία πόρων μεθειονίνης διατίθενται στο εμπόριο, όπως ένα ρακεμικό μείγμα ισομερών D-Met και L-Met που ονομάζεται DL-μεθειονίνη (DL-Met) και ένα μείγμα τεσσάρων διαφορετικών στερεοϊσομερών μεθειονίνης (LD-Met-Met, DL-Met -Met, LL-Met-Met και DD-Met-Met) που διατίθενται στο εμπόριο ως AQUAVI® (Met-Met) [10]. Ωστόσο, το AQUAVI® έχει καλύτερες φυσικοχημικές ιδιότητες, όπως πολύ χαμηλή υδατοδιαλυτότητα και υψηλότερη απορρόφηση από το DL-Met [10,14]. Από την άλλη πλευρά, έχει αναφερθεί ότι τα συμπληρώματα προβιοτικών (Bacillus subtilis) έχουν θετικά αποτελέσματα στην απόδοση ανάπτυξης και στην υγεία σε λευκές γαρίδες (L. vannamei) και ταυροβάτραχο (Lithobates catesbeianus) που τρέφονται με χαμηλή τροφή με ιχθυάλευρα [15,16]. Τα προβιοτικά είναι ζωντανοί μικροοργανισμοί που χρησιμοποιούνται στις υδροτροφές λόγω της ικανότητάς τους να βελτιώνουν τη χρήση των ζωοτροφών, την ενζυματική πέψη, την πρόληψη των παθογόνων, την ανοσοαπόκριση και την ανάπτυξη [15]. Επομένως, η συμπερίληψη των προβιοτικών σε μειωμένες τροφές με ιχθυάλευρα θα μπορούσε να βελτιώσει την υγεία και την ευημερία των υδρόβιων οργανισμών [16]. Τα βακτήρια Bacillus χρησιμοποιούνται ευρέως στην υδατοκαλλιέργεια ως προβιοτικά επειδή έχουν την ικανότητα να παράγουν αντιμικροβιακές ενώσεις και εξωένζυμα που βελτιώνουν την πέψη των θρεπτικών ουσιών, την αναστολή των παθογόνων, τη ρύθμιση της ανοσολογικής απόκρισης, τη διατήρηση της ακεραιότητας του εντέρου και κατά συνέπεια την απόδοση της ανάπτυξης [17]. Το B. amyloliquefaciens έχει αντιβακτηριακή δράση και παράγει πεπτικά ένζυμα που υποστηρίζουν την πέψη [18].
Λόγω των παραπάνω, εναλλακτικές πηγές αντί των ιχθυάλευρων, σε συνδυασμό με πολλά πρόσθετα έχουν χρησιμοποιηθεί σε υδροτροφές για να εγγυηθούν την παροχή βασικών θρεπτικών συστατικών, να βελτιώσουν την παραγωγική απόδοση, να διατηρήσουν τη φυσικοχημική σύνθεση της δίαιτας και να διατηρήσουν την ποιότητα του υδάτινου περιβάλλοντος [19]. Ως εκ τούτου, οι δίαιτες χαμηλής περιεκτικότητας σε ιχθυάλευρα συμπληρωμένες με διαφορετικές πηγές μεθειονίνης και B. amyloliquefaciens έχουν βελτιώσει την απόδοση ανάπτυξης και την αποτελεσματικότητα διατροφής των εκτρεφόμενων υδρόβιων οργανισμών [3,7,8,20,21]. Επίσης, το B. amyloliquefaciens CECT 5940 και οι επιδράσεις του έχουν αναφερθεί στην απόδοση ανάπτυξης και στην υγεία των κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής [22] και της τιλάπιας του Νείλου (Oreochromis niloticus) [21]. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν επικυρώσει τις επιδράσεις των δίαιτων με χαμηλά ιχθυάλευρα και πρόσθετα στην υγεία του πεπτικού συστήματος και στην ανοσολογική απόκριση των γαρίδων. Ως εκ τούτου, ο κύριος στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει την επίδραση της αντικατάστασης FM με SBM και PBM σε δίαιτες συμπληρωμένες με DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) και τους συνδυασμούς τους στην ανάπτυξη απόδοση, ηπατοπαγκρεατική ιστολογία, πεπτική ενζυματική δραστηριότητα, μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό και η μικροβιακή σύνθεση του πεπτικού συστήματος της νεανικής λευκής γαρίδας του Ειρηνικού (L. vannamei).
2. Υλικά και μέθοδοι
2.1. Πειραματική Προετοιμασία Διατροφής
Συνολικά έξι πειραματικές δίαιτες διαμορφώθηκαν σύμφωνα με τις διατροφικές απαιτήσεις του L. vannamei [23] και τις συστάσεις του κατασκευαστή (ομάδα Έρευνας & Ανάπτυξης Aqua της Evonik). Η δίαιτα ελέγχου (CD) διαμορφώθηκε ώστε να περιέχει ένα μείγμα πρωτεΐνης FM (39%), πρωτεΐνης SBM (53%) και πρωτεΐνης PBM (8%) όπως μια τυπική εμπορική δίαιτα γαρίδας. Το SBM και το PBM ήταν οι κύριες εναλλακτικές πηγές πρωτεΐνης για την αντικατάσταση του FM, ενώ το αλεύρι σίτου χρησιμοποιήθηκε ως συνδετικό και πληρωτικό συστατικό. Το ιχθυέλαιο χρησιμοποιήθηκε ως η κύρια πηγή λιπιδίων για την ικανοποίηση των απαιτήσεων n-3 βασικών λιπαρών οξέων για τις γαρίδες. Το CD είχε 2{{10}}0 g/Kg ιχθυάλευρα χωρίς κανένα συμπλήρωμα. Οι άλλες πέντε δίαιτες (D1–D5) όπου το SBM και το PBM αντικατέστησαν το FM σε ποσοστό 50% συμπληρώθηκαν με διαφορετικές πηγές μεθειονίνης, B. amyloliquefaciens, και τους συνδυασμούς τους. D1: 0.13% DL-MET, D2: 0.06% MET-MET (AQUAVI®), D3: 0,19% MET-MET (AQUAVI®), D4 : 0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) και D5: 0,06% MET-MET (AQUAVI®) συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®). Επιπλέον, η αναλογία σταθερότητας στο νερό αξιολογήθηκε ως φυσικό χαρακτηριστικό μιας δίαιτας με μια μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Η σύνθεση, η εγγύς σύνθεση και οι τιμές σταθερότητας στο νερό των πειραματικών δίαιτων παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.
Πίνακας 1. Συστατικά και εγγύς σύνθεση των πειραματικών δίαιτων (g/kg ξηρού βάρους).
Πίνακας 1. Συνέχεια.
2.2. Γαρίδες, Δοκιμή διατροφής και συλλογή δειγμάτων
Το Juvenile L. vannamei ελήφθη από μια φάρμα γαρίδας στη Sonora του Μεξικού. Οι γαρίδες ήταν απαλλαγμένες από παθογόνα σύμφωνα με τις διαδικασίες που περιγράφονται στο Εγχειρίδιο Διαγνωστικών Δοκιμών για Υδρόβια Ζώα του Παγκόσμιου Οργανισμού για την Υγεία των Ζώων [25]. Πριν από τη δοκιμή σίτισης, όλες οι γαρίδες εγκλιματίστηκαν στο εργαστήριο υδατοκαλλιέργειας σε δεξαμενές 1500-L με θαλασσινό νερό υπό ελεγχόμενες συνθήκες (θερμοκρασία 30 ± 0.5 ◦C, διαλυμένο οξυγόνο μεγαλύτερη από ή ίσο με 4 mg/L, αλατότητα 37 g/L, pH μεγαλύτερο ή ίσο με 7 και φωτοπερίοδοι 12 ωρών φωτός) και τρέφονται με εμπορική τροφή για 7 ημέρες. Στην αρχή, 480 υγιείς γαρίδες με (0,30 ± 0,02 g) νηστεύτηκαν για 24 ώρες και κατανεμήθηκαν τυχαία σε 24 κυκλικές δεξαμενές (ο όγκος είναι 150 L) σε πυκνότητα 20 γαρίδες ανά δεξαμενή (ισοδύναμη με μια πυκνότητα από 133 γαρίδες/m3). Υπήρχαν τέσσερις επαναλαμβανόμενες δεξαμενές που κατανεμήθηκαν τυχαία για κάθε διαιτητική θεραπεία. Οι γαρίδες τρέφονταν μέχρι κορεσμού με αρχική μερίδα 12% της βιομάζας τους χωρισμένη σε τρεις μερίδες κατά τη διάρκεια της ημέρας (8:00, 13:{00 και 16:{00 h) για 56 ημέρες, προσαρμόζεται καθημερινά ανάλογα με την υπολειπόμενη παρουσία ή απουσία τροφής. Καταγράφηκαν η θερμοκρασία (27,84 έως 28,36 ◦C), η αλατότητα (36,98 έως 37,07 g/L), το διαλυμένο οξυγόνο (4,00 έως 5,17 mg/L) και το ρΗ (7,41 έως 7,84). Κάθε μέρα άλλαζαν το 30% του νερού. Οι μη φαγωμένες ζωοτροφές, τα περιττώματα, οι μύτες και οι νεκρές γαρίδες αφαιρούνταν καθημερινά. Μετά από μια δοκιμή σίτισης και μια περίοδο νηστείας 24 ωρών, δειγματολήφθηκαν τυχαία τρεις γαρίδες από κάθε αντίγραφο για να ληφθούν 400 μL αιμολέμφου για ανάλυση γονιδιακής έκφρασης [26]. Οι γαρίδες που είχαν προηγουμένως αιμορραγηθεί, τεμαχίστηκαν ασηπτικά για να ληφθούν ολόκληρα τα έντερα και το ηπατοπάγκρεά τους, και στη συνέχεια αποθηκεύτηκαν στους -80 ◦C μέχρι την πεπτική ενζυματική δραστηριότητα και την ανάλυση μικροβιώματος. Επιπλέον, δώδεκα (τρεις γαρίδες/αντίγραφα) ολόκληρες γαρίδες ελήφθησαν τυχαία από κάθε θεραπεία και σταθεροποιήθηκαν σε διάλυμα AFA Davidson για ιστολογική ανάλυση.
2.3. Επιδόσεις Ανάπτυξης
Όλες οι γαρίδες ζυγίστηκαν και μετρήθηκαν για να υπολογιστεί η απόδοση ανάπτυξης σύμφωνα με τις εξισώσεις που αναφέρθηκαν από προηγούμενες μελέτες [27-29].
Τελικό βάρος=(Σ Τελικό ατομικό βάρος)/Τελικός αριθμός γαρίδων. Εβδομαδιαία αύξηση βάρους=(Τελικό βάρος − Αρχικό βάρος)/Αριθμός εβδομάδων. Ειδικός ρυθμός ανάπτυξης=100 × (ln τελικό βάρος − ln αρχικό βάρος)/ημέρες του πειράματος. Ποσοστό επιβίωσης=100 × (Τελικός αριθμός γαρίδων/Αρχικός αριθμός γαρίδων). Τελική βιομάζα=Τελικό βάρος × Τελικός αριθμός γαρίδων. Πρόσληψη τροφοδοσίας=Εισαγωγή τροφοδοσίας (ξηρό βάρος) − Συλλογή ζωοτροφών (ξηρό βάρος). Ποσοστό μετατροπής τροφοδοσίας=Πρόσληψη τροφοδοσίας/Τελική βιομάζα.
2.4. Ιστολογία Ηπατοπάγκρεας
Τα δείγματα ηπατοπάγκρεας γαρίδας που στερεώθηκαν στο διάλυμα Davidson υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Bell και Lightner [30]. Ιστολογικές τομές με πάχος 4 μm, κόπηκαν χρησιμοποιώντας περιστροφικό μικροτόμο (LEICA RM2115RT). Η χρώση ιστού, η παρατήρηση της διαφάνειας και η ψηφιοποίηση των εικόνων πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον Casillas-Hernández [31]. Οι εικόνες των ιστών χρησιμοποιήθηκαν για τη μέτρηση του ύψους των κυττάρων του ηπατοπάγκρεας χρησιμοποιώντας το ψηφιακό σύστημα εικόνας λογισμικού Image-Pro Premier v9.0 (Media Cyvernetics Inc., Rockville, MD, USA).
cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος
2.5. Δραστηριότητα πεπτικών ενζύμων
Τα έντερα και το ηπατοπάγκρεας ομογενοποιήθηκαν χωριστά σε αναλογία 10% με αλατούχο διάλυμα 0,9% και φυγοκεντρήθηκαν στις 3500 rpm για 10 λεπτά στους 4 ◦C και το υπερκείμενο αναλύθηκε αμέσως για προσδιορισμούς πεπτικών ενζύμων με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας (Bio -Rad, Hercules, CA, USA). Οι δραστικότητες πρωτεάσης και λιπάσης προσδιορίστηκαν με ένα εμπορικό κιτ (Sigma-Aldrich®, Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Η δραστηριότητα αμυλάσης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας διαλυτό άμυλο ως υπόστρωμα [32]. Η συγκέντρωση της συνολικής διαλυτής πρωτεΐνης προσδιορίστηκε από την αρχή της δέσμευσης πρωτεΐνης-χρωστικής χρησιμοποιώντας αλβουμίνη βόειου ορού ως πρότυπο [33]. Όλες οι αναλύσεις διεξήχθησαν σε τρία επαναληπτικά δείγματα. Οι δραστηριότητες των πεπτικών ενζύμων εκφράζονται ως U/mg πρωτεΐνης.
2.6. Μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό
Η αιμολέμφος φυγοκεντρήθηκε στις 3500 rpm για 10 λεπτά στους 4 ◦C για να διαχωριστούν τα αιμοκύτταρα από το πλάσμα. Το συνολικό RNA από αιμοκύτταρα εκχυλίστηκε με αντιδραστήριο TRIZol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με DNase χωρίς RNA (Promega®, Madison, WI, USA). Το cDNA συντέθηκε με Ολικό RNA (500 ng) χρησιμοποιώντας το σύστημα αντίστροφης μεταγραφής ImProm-II™ (Promega®) και ολίγο d(T)20 (T4OLIGO). Η σύνθεση cDNA πραγματοποιήθηκε με αντίστροφη μεταγραφή στους 42 ◦C για 60 λεπτά. Στη συνέχεια η αντίστροφη μεταγραφάση απενεργοποιήθηκε στους 70 ◦C για 15 λεπτά για να σταματήσει η αντίδραση. Το cDNA αραιώθηκε με 80 μL υπερκαθαρού νερού και 5 μL χρησιμοποιήθηκαν ως πρότυπο για την αντίδραση ποσοτικής PCR (qPCR) σε πραγματικό χρόνο. Η μεταγραφική απόκριση αναλύθηκε από πέντε γονίδια που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό και η -ακτίνη ως γονίδιο αναφοράς (Πίνακας 2) [34]. Η qPCR διεξήχθη σε σύστημα StepOne Real-Time PCR (Thermo Fisher Scientific) χρησιμοποιώντας κιτ SensiFAST™ SYBR® Hi-ROX (Bioline™, Λονδίνο, UK). Οι συνθήκες qPCR ήταν αρχική μετουσίωση στους 95 ◦C για 10 λεπτά, ακολουθούμενοι από 40 κύκλους μετουσίωσης στους 95◦C για 15 δευτερόλεπτα και ανόπτηση/επέκταση στους 60 ◦C για 1 λεπτό. Πραγματοποιήθηκε ανάλυση της καμπύλης διάστασης (60–95 ◦C) με ρυθμό μετάπτωσης θερμοκρασίας 0,5 ◦C/s για κάθε ζεύγος εκκινητών. Η σχετική μέθοδος ποσοτικοποίησης χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση γονιδιακής έκφρασης σύμφωνα με τους Rodriguez-Anaya [35] και Casillas-Hernández [36].
Πίνακας 2. Ειδικοί εκκινητές που χρησιμοποιούνται για μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό του L. vannamei.
2.7. Εξαγωγή DNA και Ανάλυση Αλληλουχίας
Το γονιδιωματικό DNA από το ηπατοπάγκρεας και τα έντερα 12 γαρίδων ανά θεραπεία εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας το Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe (Zymo Research, Irvine, CA, USA), ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η συγκέντρωση DNA ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο NanoDrop 2000 (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, ΜΑ, ΗΠΑ) και η ποιότητα του DNA αξιολογήθηκε με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης (1%, β/ο). Στη συνέχεια, τα δείγματα γονιδιωματικού DNA ανατέθηκαν στο Microbial Genomics Laboratory (CIAD, Mexico) για προετοιμασία βιβλιοθήκης DNA και προσδιορισμό αλληλουχίας χρησιμοποιώντας τυπικά πρωτόκολλα Illumina για ενίσχυση [37]. Εν συντομία, η μεταβλητή περιοχή V4 των γονιδίων 16S rRNA και 18S rRNA ενισχύθηκε με PCR με τους ακόλουθους εκκινητές χρησιμοποιώντας προσαρμογείς Illumina: 16S-V4_515F (50 - GTG CCA GCM GCC GCG GTA A{{ 13}} ), 16S-V4_806R (50 -TAA TCT WTG GGV HCA TCA GG-30 ), 18S-V9_Euk_1391F ( 50 -GTA CAC ACC GCC CGT C-30 ), και 18S-V9_EukBr (50 -TGA TCC TTC TGC AGG TTC ACC TAC-30 ). Τέλος, τα αμπλικόνια ποσοτικοποιήθηκαν σε Qubit, αναμίχθηκαν σε μια ισομοριακή δεξαμενή και αναλύθηκαν η αλληλουχία τους στην πλατφόρμα Illumina Miniseq υπό τυπικές συνθήκες (300 κύκλοι, 2 × 150).
2.8. Βιοπληροφορική Ανάλυση
Τα αρχεία FASTQ από αναγνώσεις ζευγοποιημένου τέλους αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το πακέτο DADA2 v1.24.0 [38]. Η ροή εργασιών ανάλυσης ακολουθίας περιελάμβανε φιλτράρισμα, αποδιπλασιασμό, συμπέρασμα δειγμάτων, αναγνώριση χίμαιρας και συγχώνευση αναγνώσεων ζευγαρωμένου άκρου (PE) για να ομαδοποιηθούν σε ASV (παραλλαγές ακολουθίας amplicon). Το DADA2 περιλαμβάνει τη μέθοδο "αφελής Bayesian" που χρησιμοποιεί τις βάσεις δεδομένων SILVA τόσο για την περιοχή 16S-V4 (silva_nr99_v138.1_train_set.fa) και την περιοχή 18S-V9 (silva_132.18s.99_rep_set.dada2.fa). Οι ταξινομικές πληροφορίες αναλύθηκαν με το Phyloseq V1.40.0 και το πακέτο microbiome v1.18.0 για να ληφθούν τιμές ποικιλομορφίας άλφα και βήτα και διαταγής [37]. Η βήτα ποικιλομορφία διεξήχθη με βάση τη μη σταθμισμένη απόσταση UniFrac και οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα PCoA κατασκευασμένο με ggplot στο R. Τέλος, οι πολυμεταβλητές διαφορές σε επίπεδο κοινότητας μεταξύ των ομάδων ποσοτικοποιήθηκαν με μεταβλητή πολυπαραγοντική ανάλυση διακύμανσης (PERMANOVA) [39]. Ο τελικός πίνακας ASVs από αλληλουχίες 16S χρησιμοποιήθηκε επίσης ως είσοδος για λειτουργική μεταγονιδιωματική πρόβλεψη χρησιμοποιώντας PICRUSt [40]. Το περιεχόμενο της οδού KEGG που ελήφθη από το PICRUSt κανονικοποιήθηκε και στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκε για να ληφθούν οι μεταγονιδιωματικές λειτουργικές προβλέψεις σε διαφορετικά ιεραρχικά επίπεδα KEGG (1, 2 και 3) [41]. Η αλληλουχία Illumina χρησιμοποιώντας εκκινητές για την υπερμεταβλητή περιοχή V4 στο γονίδιο 16S rRNA έδωσε 976.065 αναγνώσεις PE 150 bp που αντιστοιχούν στο έντερο και το ηπατοπάγκρεας του L. vannamei με μέσο όρο 81.338 αναγνώσεις ανά δείγμα. Μετά τη διαδικασία ποιοτικού φιλτραρίσματος και την εξάλειψη των χίμαιρων, διατηρήθηκαν κατά μέσο όρο 58.235 αλληλουχίες ανά δείγμα, που ισοδυναμούν με 71,6%, και εκχωρήθηκαν σε 709 ASV. Από την άλλη πλευρά, από την αλληλουχία V9-18S rDNA, ελήφθησαν 871.699 αναγνώσεις PE 150 bp με μέσο όρο 72.642 ανά δείγμα. Μετά τη ροή εργασιών της ανάλυσης ακολουθίας, οι αναγνώσεις μειώθηκαν κατά περίπου 12,7%. Ωστόσο, κατά την εκτέλεση της ταξινομικής ταυτοποίησης και της ομαδοποίησης ASV, οι περισσότερες από τις αλληλουχίες αντιστοιχούσαν στο DNA του ξενιστή (L. vannamei), εξαλείφοντας τα δείγματα από το ηπατοπάγκρεας. Επομένως, τα δεδομένα που παρουσιάζονται για τον χαρακτηρισμό της ευκαρυωτικής μικροχλωρίδας αντιστοιχούν στους μικροοργανισμούς που υπάρχουν στο έντερο. Το σύνολο δεδομένων που χρησιμοποιήθηκε ήταν 12.970 ακολουθίες που αντιστοιχίστηκαν σε 43 ASV.
2.9. Στατιστική ανάλυση
Τα αποτελέσματα της απόδοσης ανάπτυξης, το ύψος των κυττάρων του ηπατοπάγκρεατος, η πεπτική ενζυματική δραστηριότητα και η μεταγραφική απόκριση των γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό αξιολογήθηκαν με ανάλυση διακύμανσης μονής κατεύθυνσης (ANOVA). Εάν παρατηρήθηκε κάποια σημασία, πραγματοποιήθηκε η δοκιμή Tukey για σύγκριση μέσων. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με Statgraphics Centurion XVI. Η σημασία ορίστηκε σε επίπεδα πιθανότητας 95%.
3. Αποτελέσματα
3.1. Επιδόσεις Ανάπτυξης
Οι τιμές της αυξητικής απόδοσης παρουσιάζονται στον Πίνακα 3. Σε σύγκριση με το CD, οι υψηλότερες τιμές απόδοσης ανάπτυξης (τελικό βάρος, αύξηση βάρους και τελική βιομάζα) παρατηρήθηκαν με γαρίδες που τρέφονται με D3 και D5, οι οποίες ήταν σημαντικά υψηλότερες από τις γαρίδες με D1 (p < 0.05), αλλά χωρίς στατιστική διαφορά με γαρίδες που τρέφονται με D2 και D4 και (p > 0.05). Η χαμηλότερη τιμή του ποσοστού μετατροπής της τροφής παρατηρήθηκε με γαρίδες που τρέφονταν με D3, αλλά δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά στο FCR μεταξύ όλων των θεραπειών διατροφής (p > 0.05). Ενώ η πρόσληψη τροφής μειώθηκε σημαντικά (p < 0,05) στις γαρίδες που τρέφονταν με D1 και αυξήθηκε σημαντικά (p < 0,05) στις γαρίδες που τρέφονταν με D5. Δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά στο ποσοστό επιβίωσης μεταξύ όλων των θεραπειών δίαιτας (p > 0,05).
Πίνακας 3. Επίδραση πειραματικών δίαιτων στην αυξητική απόδοση του Litopenaeus vannamei.
3.2. Ηπατοπαγκρεατική Ιστολογία
Το ηπατοπάγκρεας γαρίδας είχε μια καλά οργανωμένη δομή (Εικόνα 1Α). Εκτός από τις γαρίδες που τρέφονταν με D1, όλες οι γαρίδες που τρέφονταν με μειωμένα ιχθυάλευρα είχαν υψηλότερο (p < 0.05) ύψος των επιθηλιακών κυττάρων του ηπατοπάγκρεας από τις γαρίδες που τρέφονταν με CD (Εικόνα 1Β).
Εικόνα 1. Ιστολογία ηπατοπάγκρεας γαρίδας L. vannamei που τρέφονται με δίαιτα ελέγχου και 50% δίαιτες αντικατάστασης ιχθυάλευρων. (Α) Ελαφριά μικρογραφίες διαμήκων τομών (4 μm) ηπατοπαγκρέατος που έχουν χρωματιστεί με αιματοξυλίνη και ηωσίνη, δείχνουν μια καλά οργανωμένη δομή. Τα βέλη υποδεικνύουν φυσιολογικές δομές των επιθηλιακών κυττάρων των σωληναρίων συμπεριλαμβανομένων των εκκριτικών κυττάρων (Β-κύτταρα). Γραμμή κλίμακας: 100 μm. (Β) Κύτταρα επιθηλίου ύψους ηπατοπάγκρεας γαρίδας. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SE, οι τιμές με διαφορετικά γράμματα είναι σημαντικά διαφορετικές (p < 0.05). Συντομογραφίες: Σωληνάρια (Tb), επιθηλιακά κύτταρα (EC) και Β-κύτταρα (HpB). CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13% DL-MET), D2 (0,06% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET) , D4 (0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) και D5 (0,06% MET-MET συν 0,10% Β. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.3. Δραστηριότητα πεπτικών ενζύμων
Η επίδραση των διαφορετικών διατροφικών πηγών μεθειονίνης και του Bacillus amyloliquefaciens στις δραστηριότητες πεπτικών ενζύμων του εντέρου και του ηπατοπάγκρεας από δίαιτες μειωμένων ιχθυάλευρων που τρέφονται με L. vannamei παρουσιάζονται στον Πίνακα 4. Οι δραστηριότητες αμυλάσης, πρωτεάσης και λιπάσης του ηπατοπάγκρεας από γαρίδες που ταΐστηκαν με D3 ήταν σημαντικά υψηλότερο (p < 0.05) από το CD που τρέφονται με γαρίδες, ενώ οι δραστηριότητες των πεπτικών ενζύμων του εντέρου δεν επηρεάστηκαν (p > 0.05). Στο ηπατοπάγκρεας από γαρίδες που τρέφονταν με D1 παρατηρήθηκε η χαμηλότερη τιμή αμυλάσης και λιπάσης, ενώ στο έντερο οι δραστηριότητες των πεπτικών ενζύμων είχαν τις χαμηλότερες τιμές αλλά δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές (p > 0,05) σε σύγκριση με τις γαρίδες που τρέφονταν με CD.
Πίνακας 4. Επίδραση πειραματικών δίαιτων στη δραστηριότητα των πεπτικών ενζύμων του Litopenaeus vannamei.
3.4. Μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό
Η μεταγραφική απόκριση των γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό σε λευκές γαρίδες που τρέφονταν με μειωμένες δίαιτες ιχθυάλευρων με πρόσθετα προσδιορίστηκε και συγκρίθηκε με τις γαρίδες που τρέφονται με CD (Εικόνα 2). Εκτός από τις γαρίδες που τρέφονται με D1, όλα τα γονίδια που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό που αναλύθηκαν σε αυτή τη μελέτη είχαν υψηλότερη έκφραση από τις γαρίδες που τρέφονται με CD. Η Hc και η pPO ήταν σημαντικά (p < 0.05) αυξημένη ρύθμιση στις γαρίδες που τρέφονταν με D3 και D5. Το LGBP ήταν σημαντικά (p < 0.05) αυξημένη ρύθμιση στις γαρίδες που τρέφονταν με D2 και D3. Το MnSOD ρυθμίστηκε σημαντικά (p < 0,05) στις γαρίδες που τρέφονταν με D2, D3 και D5. Το HSP60 ρυθμίστηκε σημαντικά (p < 0,05) στις γαρίδες που τρέφονταν με D5. Οι χαμηλότερες τιμές μεταγραφικής απόκρισης γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό παρατηρήθηκαν σε γαρίδες που τρέφονταν με D1 σε σύγκριση με όλες τις διαιτητικές θεραπείες.
Εικόνα 2. Μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό δίαιτα ελέγχου που τρέφονται με γαρίδες και δίαιτες αντικατάστασης ιχθυάλευρων 50%. (Α) αιμοκυανίνη (Hc), (Β) προφαινολοοξειδάση (pPO), (C) λιποπολυσακχαρίτης και πρωτεΐνη δέσμευσης -γλυκάνης (LGBP), (D) κυτοσολικό υπεροξείδιο μαγγανίου δισμουτάση (MnSOD) και (Ε) πρωτεΐνη θερμικού σοκ 6{ {11}} (HSP60). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SE, οι τιμές με διαφορετικά γράμματα είναι σημαντικά διαφορετικές (p < 0.05). Συντομογραφίες: CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13% DL-MET), D2 (0,06% MET-MET), D3 (0,19% MET- MET), D4 (0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) και D5 (0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.5. Ανάλυση πεπτικής μικροχλωρίδας και λειτουργική πρόβλεψη
Η ανάλυση της καμπύλης αραίωσης έδειξε ότι τα παρατηρούμενα είδη ανά δείγμα ήταν επαρκή και για τις αλληλουχίες 16S-V4 (Εικόνα 3Α) και 18S-V9 (Εικόνα 4Α). Όσον αφορά την άλφα ποικιλομορφία, τα αποτελέσματα του 16S έδειξαν ότι οι δείκτες Chao1, Shannon και Simpsons του ηπατοπάγκρεας ήταν υψηλότεροι από τα έντερα (Εικόνα 3Β). Από την άλλη πλευρά, τα αποτελέσματα του 18S έδειξαν ότι όλοι οι δείκτες άλφα ποικιλομορφίας μειώθηκαν στα έντερα των γαρίδων που τρέφονταν με δίαιτες με χαμηλά ιχθυάλευρα σε σύγκριση με τον έλεγχο (Εικόνα 4Β). Ωστόσο, δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των διατροφικών θεραπειών στα αποτελέσματα τόσο του 16S όσο και του 18S.
Εικόνα 3. Αλληλουχία γονιδίου 16S rRNA των εντέρων και του ηπατοπάγκρεας από δίαιτα ελέγχου που τρέφονται με γαρίδες και δίαιτες αντικατάστασης ιχθυάλευρων 50%. (Α) Καμπύλη αραίωσης, (Β) Ποικιλότητα Άλφα και (Γ) Η δομή της μικροβιακής χλωρίδας οπτικοποιήθηκε με τη χρήση διαγραμμάτων ανάλυσης κύριων συντεταγμένων (PCoA). Συντομογραφίες: Έντερο (Ι) και ηπατοπάγκρεας (Η). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27} }}6% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) και D5 (0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens 5940CT CE ).
Τα αποτελέσματα της πειραματικής δίαιτας στη δομή της μικροχλωρίδας προσδιορίστηκαν με χρήση της απόστασης UniFrac και απεικονίστηκαν χρησιμοποιώντας διαγράμματα PcoA. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν σαφή διαχωρισμό μεταξύ των πειραματικών δίαιτων, αλλά χωρίς σημαντικές διαφορές στις προκαρυωτικές κοινότητες από το έντερο ή το ηπατοπάγκρεας (Εικόνα 3C) καθώς και το ευκαρυωτικό μικρόβιο από το έντερο (Εικόνα 4Γ). Ωστόσο, η ανάλυση βήτα ποικιλότητας έδειξε έναν σαφή διαχωρισμό μεταξύ των προκαρυωτικών κοινοτήτων από το έντερο και το ηπατοπάγκρεας (Εικόνα 3C).
Εικόνα 4. Αλληλουχία γονιδίου 18S rRNA των εντέρων από δίαιτα ελέγχου που τρέφονται με γαρίδες και δίαιτες αντικατάστασης ιχθυάλευρων 50%. (Α) Καμπύλη αραίωσης, (Β) Ποικιλότητα Άλφα και (Γ) Η δομή της μικροβιακής χλωρίδας οπτικοποιήθηκε με τη χρήση διαγραμμάτων ανάλυσης κύριων συντεταγμένων (PCoA). Συντομογραφία: Έντερο (Ι). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27} }}6% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) και D5 (0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens 5940CT CE ).
Με βάση τα αποτελέσματα της προκαρυωτικής μικροχλωρίδας, ταυτοποιήθηκαν συνολικά 19 διαφορετικά βακτηριακά φύλα. Τα πρωτεοβακτήρια ήταν η κυρίαρχη ομάδα στο έντερο της γαρίδας, ενώ τα Pro teobacteria και τα Actinobacteria ήταν η κυρίαρχη φυλή στο ηπατοπάγκρεας γαρίδας. Στα έντερα γαρίδας που τρέφονταν με D3 και D5, παρατηρήθηκε αύξηση της σχετικής αφθονίας των Actinobacteria ενώ η σχετική αφθονία του Bacteroidota ήταν ελαφρώς μειωμένη. Σε γαρίδες ηπατοπάγκρεας που τρέφονται με D1, D2 και D4, παρατηρήθηκε μια ελαφρά αύξηση στη σχετική αφθονία Bacteroidota, ενώ σε γαρίδες με ηπατοπάγκρεας που τρέφονταν με D3 και D5, η σχετική αφθονία των Actinobacteria ήταν αυξημένη (Εικόνα 5Α). Σε επίπεδο γένους, το Pseudoalteromonas ήταν το πιο διαδεδομένο στο έντερο της γαρίδας ενώ το Demequina ήταν το πιο διαδεδομένο στο ηπατοπάγκρεας γαρίδας. Η Demequina είχε χαμηλή αύξηση στο έντερο γαρίδας που τρέφονταν με D3 και D5, ενώ το Lysinimicrobium και το Ruegeria αυξήθηκαν στο ηπατοπάγκρεας γαρίδας που τρέφονταν με D3 και D5 (Εικόνα 5Β). Τα αποτελέσματα των λειτουργικών κατηγοριών (KEGG επίπεδο 2) έδειξαν ότι οι βακτηριακές αλληλουχίες συσχετίστηκαν με κυτταρικές διεργασίες και μονοπάτια μεταβολισμού (Εικόνα 5Γ και Συμπληρωματικός Πίνακας S1). Ο μεταβολισμός των αμινοξέων, ο μεταβολισμός των υδατανθράκων, οι συμπαράγοντες και ο μεταβολισμός των βιταμινών ήταν πιο άφθονοι στα μονοπάτια του μεταβολισμού, ενώ η κινητικότητα των κυττάρων ήταν πιο άφθονη στις κυτταρικές διεργασίες. Μετά την αφαίρεση των αναγνώσεων αλληλουχίας από το DNA του ξενιστή, παρατηρήθηκαν τρεις φυλές σε ευκαρυωτικό μικροβίωμα. Η ομάδα SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria) ήταν η πιο διαδεδομένη σε όλα τα έντερα των γαρίδων, ωστόσο παρατηρήθηκε αύξηση της φυλής Opisthokonta σε έντερα γαρίδας που τρέφονταν με D5 (Εικόνα 6Α). Σε επίπεδο γένους, το Aplanochytrium ήταν το πιο άφθονο στο έντερο γαρίδας που τροφοδοτήθηκε από D2 έως D5, αλλά η αφθονία ήταν σημαντικά υψηλότερη στο D5. Το μη καλλιεργημένο κυψελιδικό άλας εμπλουτίστηκε σε CD με τροφή με έντερο γαρίδας. Το Auranti Ochytrium ήταν πιο διαδεδομένο στο D2 έως D4 με υψηλότερη αφθονία στο D3. Τέλος, το Ebria ήταν πιο άφθονο στα έντερα γαρίδας που τρέφονταν με D1 (Εικόνα 6Β).
Εικόνα 5. Προκαρυωτική μικροχλωρίδα εντέρων και ηπατοπάγκρεας από δίαιτα ελέγχου που τρέφονται με γαρίδες και δίαιτες αντικατάστασης ιχθυάλευρων 50%. (Α) Το top ten of phyla abundance. (Β) Ανάλυση Heatmap των κορυφαίων 40 γενών και (C) Ανάλυση Heatmap πρόβλεψης συναρτήσεων με βάση την ανάλυση μονοπατιών KEGG. Συντομογραφίες: έντερο (Ι) και ηπατοπάγκρεας (Η). CD (200 g/Kg FM), D1 ({{20}}.13% DL-MET), D2 (0}.06% MET -MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) και D5 (0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
Εικόνα 6. Ευκαρυωτική μικροχλωρίδα εντέρων από δίαιτα ελέγχου που τρέφονται με γαρίδες και δίαιτες αντικατάστασης ιχθυάλευρων 50%. (Α) αφθονία Phyla. (Β) Ανάλυση Heatmap της αφθονίας των γενών. Συντομογραφία: έντερο (Ι). SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 (0).06% MET. -MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) και D5 (0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
4. Συζήτηση
4.1. Επιδόσεις Ανάπτυξης
Προηγούμενες μελέτες έχουν αξιολογήσει τις επιδράσεις μειωμένων διατροφών με ιχθυάλευρα συμπληρωμένες με διαφορετικές διατροφικές πηγές μεθειονίνης στην αναπτυξιακή απόδοση του L. vannamei, όπως η τροφή γαρίδας με 5% έως 1{2}}% ιχθυάλευρα και συμπληρωμένη με ένα επίπεδο μεταξύ {{15 }},15% και 1,7% του MET-MET (AQUAVI®) ή 3% του DL-MET [2,3,8,20,42,43]. Ωστόσο, μια μελέτη με παρόμοιες συνθήκες καλλιέργειας που χρησιμοποίησε νεαρές γαρίδες (L. vannamei) με αρχικό βάρος 0,98 ± 0.02 g, πρότεινε 0 .20% MET-MET (AQUAVI®) για καλύτερη απόδοση ανάπτυξης όταν ταΐζονταν οι γαρίδες μειωμένη τροφή με ιχθυάλευρα [20]. Το DL-MET έχει αποδειχθεί σε νεαρές γαρίδες με αρχικό βάρος 3,0 g υποδηλώνοντας επίπεδα μεταξύ 0.{{50}}6–{{0. 0% για καλή παραγωγική απόκριση όταν οι γαρίδες τρέφονταν με μειωμένη τροφή με ιχθυάλευρα [2]. Από την άλλη πλευρά, τα αποτελέσματα του B. amyloliquefaciens (104 και 1{{90}}3 UFC/mL) διαλυμένα στο νερό ενός συστήματος βιολογικών κροκίδων για το εκτρεφόμενο L. vannamei ήταν αναφέρθηκαν [44,45], αλλά δεν υπάρχουν αναφορές σχετικά με τις επιδράσεις αυτού του προβιοτικού συμπληρωμένου σε μειωμένη τροφή με ιχθυάλευρα στην απόδοση ανάπτυξης του L. vannamei. Επομένως, αυτή η μελέτη αξιολόγησε την επίδραση της αντικατάστασης FM από SBM και PBM σε δίαιτες γαρίδας συμπληρωμένες με 0,13% DL-MET (D1), 0,06% MET-MET (D2), 0,19% MET-MET (D3) και σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή χρησιμοποιήσαμε συνδυασμούς 0,13% DL-MET συν 0,1% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (που ισοδυναμεί με 109 UFC/g) (D4) και 0,06% MET-MET συν 0,1% B. amyloliquefaciens 5940CE (Δ5). Όλες οι δίαιτες μειωμένων ιχθυάλευρων συμπληρωμένες με πηγές μεθειονίνης και προβιοτικά έδειξαν καλές τιμές σταθερότητας στο νερό. Επομένως, οι δίαιτες με μειωμένο ιχθυάλευρα που αξιολογήθηκαν σε αυτή τη μελέτη είναι σύμφωνες με προηγούμενες αναφορές και όλες οι διαιτητικές θεραπείες έδειξαν καλή ανταπόκριση στην απόδοση ανάπτυξης γαρίδας. Παρόλα αυτά, οι γαρίδες που τρέφονταν με D1 είχαν χαμηλότερες παραμέτρους απόδοσης, ενώ οι γαρίδες που τρέφονταν με D3 και D5 είχαν υψηλότερες παραμέτρους απόδοσης. Η σημαντική χαμηλή απόδοση ανάπτυξης σε γαρίδες που τρέφονται με D1 μπορεί να σχετίζεται με την κακή πρόσληψη τροφής λόγω ανεπάρκειας μεθειονίνης που προκαλεί μείωση της γευστικότητας στις μειωμένες υδροτροφές ιχθυάλευρων [20]. Η υψηλή απόδοση ανάπτυξης στις γαρίδες D3 σε σύγκριση με τις γαρίδες που τρέφονται με D1 και D2 θα μπορούσε να οφείλεται στην ανεπάρκεια μεθειονίνης και στην πηγή. Τα παραπάνω μπορεί να οφείλονται στο ότι έχει αναφερθεί ότι το διπεπτίδιο MET MET έχει χαμηλή υδατοδιαλυτότητα και υψηλή βιοδιαθεσιμότητα, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί αποτελεσματικά από τις γαρίδες προάγοντας καλύτερες τιμές απόδοσης ανάπτυξης [2,10,14]. Οι γαρίδες που τρέφονταν με D5 είχαν επίσης υψηλή απόδοση ανάπτυξης ακόμη και με το ίδιο επίπεδο μεθειονίνης και πηγή στο D2, αλλά με την προσθήκη 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940. Η υψηλή απόδοση ανάπτυξης θα μπορούσε να οφείλεται στις ευεργετικές ιδιότητες του προβιοτικού, οι οποίες περιλαμβάνουν αντιμικροβιακή δράση και παραγωγή -αμυλάσης, κυτταρινάσης και πρωτεάσης που αυξάνουν την πεπτικότητα και την απορρόφηση της θρεπτικής ουσίας [46]. Επίσης, μια προηγούμενη μελέτη ανέφερε ότι το B. amyloliquefaciens είναι παραγωγός μεθειονίνης [47] και αυτό θα μπορούσε να συμβάλει στη διατήρηση της ισορροπίας αυτού του EAA στο D5. Επιπλέον, έχει αναφερθεί ότι ένα μείγμα προσθέτων ζωοτροφών θα μπορούσε να ενισχύσει την αποτελεσματικότητα της απόδοσης ανάπτυξης των υδρόβιων οργανισμών [48-50] και των κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής [51]. Επομένως, η αντικατάσταση 50% FM από SBM και PBM σε δίαιτες συμπληρωμένες με 0,19% MET-MET και 0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 θα μπορούσε να βελτιώσει τη χρήση θρεπτικών συστατικών και κατά συνέπεια την απόδοση ανάπτυξης της γαρίδας. Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι το SBM και το PBM έχουν υψηλά επίπεδα λιπαρών οξέων, αλλά n-3 πολυακόρεστα λιπαρά οξέα μακράς αλυσίδας είναι ανεπαρκή σε αυτές τις πηγές πρωτεΐνης [52]. Σε αυτό το πλαίσιο, απαιτείται περαιτέρω έρευνα για να προσδιοριστεί πώς η χρήση των SBM και PBM επηρεάζει τη σύνθεση λιπαρών οξέων των μειωμένων δίαιτων με ιχθυάλευρα και την ποιότητα των μυών της γαρίδας.
Οφέλη από το cistanche για τους άνδρες-ενισχύουν το ανοσοποιητικό σύστημα
4.2. Ηπατοπαγκρεατική Ιστολογία
Το ηπατοπάγκρεας της γαρίδας είναι ένα πεπτικό όργανο και παίζει σημαντικό ρόλο στην έκκριση πεπτικών ενζύμων, τη μεταφορά θρεπτικών ουσιών, την αποθήκευση και την απορρόφηση, επομένως, η λειτουργία του είναι το κλειδί για την απόδοση ανάπτυξης και την υγεία των γαρίδων [30,53]. Ωστόσο, έχει αναφερθεί ότι η μειωμένη δίαιτα με ιχθυάλευρα μπορεί να αλλάξει τη δομική μορφολογία των πεπτικών οργάνων και να βλάψει τις φυσιολογικές συνθήκες στους υδρόβιους οργανισμούς με αποτέλεσμα την καθυστέρηση της ανάπτυξης [54]. Η ηπατοπαγκρεατική ιστολογία αναλύθηκε ως δείκτης της απόδοσης ανάπτυξης γαρίδας, της υγείας και της διατροφικής κατάστασης. Δεν παρατηρήθηκε βλάβη στη δομή του ηπατοπάγκρεας, τα Β κύτταρα ήταν τα πιο διαδεδομένα ηπατοπαγκρεατικά κύτταρα και το επιθηλιακό τους ύψος αυξήθηκε σημαντικά σε όλες τις διατροφικές θεραπείες με εξαίρεση τις γαρίδες που τρέφονταν με D1, οι οποίες είχαν παρόμοια απόκριση με αυτή της δίαιτας ελέγχου. Τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το ηπατοπάγκρεας είναι ευαίσθητο στη συμπερίληψη διαφορετικών διατροφικών πηγών μεθειονίνης και του B. amyloliquefaciens σε μειωμένες δίαιτες με ιχθυάλευρα, αυξάνοντας τα Β κύτταρα, επηρεάζοντας την έκκριση πεπτικών ενζύμων, την απορρόφηση και την αφομοίωση των θρεπτικών συστατικών και τη χρήση της τροφής, όπως αναφέρεται σε άλλες μελέτες όταν χρησιμοποιείται. εναλλακτικές πηγές και πρόσθετα ιχθυάλευρων [53,55-58]. Επιπλέον, έχει αναφερθεί ότι η λήψη συμπληρωμάτων μεθειονίνης θα μπορούσε να μειώσει τις αλλοιώσεις του ηπατοπάγκρεατος λόγω της ανεπάρκειάς της σε δίαιτες με χαμηλή περιεκτικότητα σε ιχθυάλευρα [8]. Επομένως, σύμφωνα με την ιστολογική ανάλυση, δεν υπάρχουν ενδείξεις τοξικότητας που προκαλείται από μειωμένες δίαιτες με ιχθυάλευρα συμπληρωμένες με διαφορετικές διατροφικές πηγές μεθειονίνης και B. amyloliquefaciens στο L. vannamei hepatopancreas.
4.3. Ανάλυση πεπτικών ενζύμων
Η πεπτική δραστηριότητα του ενζύμου είναι μια φυσιολογική διαδικασία που βελτιώνει την πέψη και την απορρόφηση των θρεπτικών συστατικών, και ως εκ τούτου, είναι ένας βασικός παράγοντας για την προώθηση της απόδοσης ανάπτυξης γαρίδας [59]. Ωστόσο, προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η δραστηριότητα των πεπτικών ενζύμων μειώθηκε σημαντικά με μειωμένες δίαιτες με ιχθυάλευρα χωρίς συμπληρώματα πρόσθετων [60,61]. Οι δραστηριότητες των πεπτικών ενζύμων χρησιμοποιήθηκαν ως δείκτης της πεπτικής λειτουργίας της γαρίδας. Στην παρούσα μελέτη, οι γαρίδες που τρέφονταν με D3 βελτίωσαν (p < 0,05) στη δραστηριότητα του ηπατοπαγκρεατικού πεπτικού ενζύμου σε σύγκριση μεταξύ όλων των ομάδων και δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές στη δραστηριότητα του πεπτικού ενζύμου του εντέρου. Συνολικά, χαμηλές δραστηριότητες πεπτικών ενζύμων παρατηρήθηκαν και στα δύο όργανα των γαρίδων που τρέφονται με D1. Σε συμφωνία με αυτά τα αποτελέσματα, η συμπλήρωση μεθειονίνης αύξησε τις δραστηριότητες των πεπτικών ενζύμων σε τσιπούρα (Pagrus major) [62], κυπρίνο (Ctenopharyngodon idella) [63], λευκές γαρίδες (L. vannamei) [2,3,20] και ψάρι rohu (Labeo rohita) [59]. Τα αποτελέσματα της τροφής συμπληρωμένης με B. amyloliquefaciens στη δραστηριότητα του πεπτικού ενζύμου της γαρίδας δεν έχουν αναφερθεί στο L. vannamei, αλλά είναι γνωστό ότι τα προβιοτικά αυξάνουν τη δραστηριότητα των πεπτικών ενζύμων και βελτιώνουν τη χρήση της τροφής και την πέψη [64]. Επιπλέον, αρκετές εργασίες αξιολόγησαν διαφορετικές τροφές υδατοκαλλιέργειας συμπληρωμένες με πρόσθετα σε συνδυασμό με προβιοτικά και έδειξαν αύξηση στη διαδικασία της πέψης. [48,50]. Παρόλα αυτά, ασυνέπειες στις δραστηριότητες των πεπτικών ενζύμων αποδείχθηκαν όταν τα κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής με οργανικά οξέα, προβιοτικά και συνδυασμούς, πιθανώς λόγω του επιπέδου επαγωγής των προσθέτων και των συνδυασμών ζωοτροφών που ήταν σε κατώτερα επίπεδα [51]. Αυτή η μελέτη ανέφερε επίσης ασυνέπειες στη δραστηριότητα του ηπατοπαγκρεατικού πεπτικού ενζύμου σε γαρίδες που τρέφονταν με D3, D4 και D5. Ωστόσο, τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το συμπλήρωμα που αναφέρθηκε προηγουμένως δεν επηρεάζει την πεπτική λειτουργία της γαρίδας.
4.4. Μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό
Η μεταγραφική απόκριση των γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό είναι πολύ σημαντική για τη λήψη δεδομένων σχετικά με την κατάσταση της υγείας των γαρίδων [35]. Ωστόσο, έχει αναφερθεί ότι οι δίαιτες με χαμηλά ιχθυάλευρα βλάπτουν την ανοσολογική και αντιοξειδωτική απόκριση των γαρίδων λόγω μη ισορροπημένων θρεπτικών συστατικών, υψηλών αντιθρεπτικών παραγόντων και περιεκτικότητας σε φυτικές ίνες που επηρεάζουν την πρόσληψη τροφής, τη γευστικότητα και την πεπτικότητα [56,65-67]. Προηγουμένως, ερευνήσαμε τις επιδράσεις της πηγής και του επιπέδου πρωτεΐνης σε γονίδια που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό (Hc, pPO, LGBP), την αντιοξειδωτική ικανότητα (MnSOD) και την ανοχή στο στρες (HSP60) και προτείναμε ότι οι αμυντικοί μηχανισμοί δεν επηρεάστηκαν όταν οι γαρίδες τρέφονταν με δίαιτες που περιείχαν φυτική πρωτεΐνη (30-35%) σε μεσαία επίπεδα [35]. Από την άλλη πλευρά, έχει αναφερθεί ότι οι δίαιτες με χαμηλά ιχθυάλευρα έχουν δυσμενείς επιπτώσεις στην ανοσολογική απόκριση των γαρίδων όταν το ιχθυάλευρο μειώνεται από 250 g/kg σε 100 g/kg [68]. Ωστόσο, η αντιοξειδωτική απόκριση διαμορφώθηκε χωρίς να επηρεαστεί η οξειδωτική κατάσταση του ήπατος και του εντέρου όταν το λαβράκι (Dicentrarchus labrax) τρέφονταν με χαμηλά ιχθυάλευρα συμπληρωμένα με επίπεδο DL-Met 12% κάτω από τις καθιερωμένες ανάγκες τους [69]. Επίσης, η ανοσοαπόκριση και η αντιοξειδωτική ικανότητα βελτιώθηκαν όταν οι λευκές γαρίδες (L. vannamei) [8] και η τιλάπια του Νείλου (O. niloticus) [14] έλαβαν διατροφή χαμηλή σε ιχθυάλευρα με 0,15% MET-MET. Επιπλέον, μια μελέτη έδειξε ότι η τιλάπια του Νείλου (O. niloticus) τρέφονταν με δίαιτες με χαμηλά ιχθυάλευρα συμπληρωμένες με Spirulina platensis και B. amyloliquefaciens είχαν ενισχυμένη ανοσοαπόκριση και αντιοξειδωτική ικανότητα, αλλά μείωσαν την ανοχή στο στρες [21]. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης διαπίστωσαν ότι οι μεταγραφικές αποκρίσεις των γονιδίων που σχετίζονται με την ανοσία, την αντιοξειδωτική ικανότητα και την ανοχή στο στρες βελτιώθηκαν όταν οι γαρίδες τρέφονταν με D2, D3, D4 και D5, κάτι που είναι ενδιαφέρον γιατί αυτό δείχνει ότι τα συμπληρώματα μεθειονίνης και προβιοτικών μπορούν να ρυθμίσουν θετικά τους αμυντικούς μηχανισμούς, μειώνοντας τις επιδράσεις που προκαλούνται από τις χαμηλές τροφές με ιχθυάλευρα. Αντίθετα, η χαμηλή μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό που παρατηρείται σε γαρίδες που τρέφονται με D1 θα μπορούσε να οφείλεται σε έλλειμμα μεθειονίνης. Ωστόσο, λαμβάνοντας υπόψη την παραγωγική απόδοση, οι καλύτερες διατροφικές θεραπείες θα μπορούσαν να είναι οι D3 και D5 χωρίς να επηρεάζεται η ανάπτυξη και η υγεία των γαρίδων.
4.5. Ανάλυση πεπτικής μικροχλωρίδας και λειτουργική πρόβλεψη
Το πεπτικό σύστημα της γαρίδας φιλοξενεί κοινότητες μικροοργανισμών που κυριαρχούνται από βακτήρια, αλλά μπορεί επίσης να υπάρχουν ευκαρυωτικοί μικροοργανισμοί, δημιουργώντας ένα μεγάλο μικροβιακό οικοσύστημα που ονομάζεται microbiota [70]. Η μικροχλωρίδα του πεπτικού συστήματος της γαρίδας επηρεάζει την ανοσία ή την αντίσταση, την παραγωγή ωφέλιμων μεταβολιτών και την πέψη και την αφομοίωση των θρεπτικών συστατικών [71,72]. Η διατροφή είναι ένας από τους κύριους περιβαλλοντικούς παράγοντες που επηρεάζουν τη μικροχλωρίδα του πεπτικού συστήματος της γαρίδας [73]. Αυτή η μελέτη αξιολόγησε τις επιδράσεις της δίαιτας με χαμηλά ιχθυάλευρα στην ποικιλομορφία, τη δομή και τη σχετική αφθονία προκαρυωτικών και ευκαρυωτικών μικροοργανισμών από το έντερο και το ηπατοπάγκρεας του L. vannamei χρησιμοποιώντας αλληλουχία 16S και 18S. Τα αποτελέσματα της μελέτης πρότειναν ότι η ποικιλομορφία και η δομή της μικροχλωρίδας (προκαρυωτική και ευκαρυωτική) δεν ήταν διαφορετική μεταξύ των διατροφικών θεραπειών. Ωστόσο, η σύγκριση βήτα ποικιλότητας προσδιόρισε ότι η εντερική προκαρυωτική μικροχλωρίδα συγκεντρώθηκε χωριστά από την ηπατοπαγκρεατική προκαρυωτική μικροχλωρίδα, υποδηλώνοντας μια μοναδική οικολογική θέση σύμφωνα με το πεπτικό όργανο της γαρίδας [74]. Ως εκ τούτου, εξειδικευμένοι μικροοργανισμοί τόσο στο έντερο όσο και στο ηπατοπάγκρεας βοηθούν στη βελτίωση της ενέργειας που λαμβάνει αποτελεσματικά ο ξενιστής και των μεταβολικών διεργασιών που είναι απαραίτητες για την ανάπτυξη, την ανοσοαπόκριση, την πέψη των θρεπτικών ουσιών και την αφομοίωση [75]. Όπως θα εξηγηθεί παρακάτω, τα αποτελέσματα της μελέτης υποδηλώνουν ότι η αφθονία τόσο των προκαρυωτικών όσο και των ευκαρυωτικών μικροοργανισμών θα μπορούσε να αυξηθεί και να βοηθήσει τις γαρίδες να χρησιμοποιήσουν αποτελεσματικά θρεπτικά συστατικά από δίαιτες με χαμηλή περιεκτικότητα σε ιχθυάλευρα για μεταβολικές διεργασίες απαραίτητες για την απόκτηση ενέργειας, ανάπτυξης, ανοσίας, πέψης και διατροφής. Σύμφωνα με την αφθονία των προκαρυωτών σε όλα τα έντερα και τα δείγματα ηπατοπάγκρεας, η πιο διαδεδομένη ομάδα ήταν τα Proteobacteria ενώ η ομάδα Actinobacteria είχε μεγαλύτερη παρουσία σε δείγματα ηπατοπάγκρεας. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με μια προηγούμενη μελέτη [36], και έχει επίσης περιγραφεί ότι αυτά τα φυτά ήταν κυρίαρχα σε νεαρές και ενήλικες γαρίδες (Penaeus monodon) [76]. Το Pseudoalteromonas που ανήκει στη φυλή Proteobacteria είναι ένα πεπτικό ένζυμο (πρωτεάσες, αμυλάσες, -γαλακτοσιδάσες και φωσφολιπάσες) που παράγει μικροοργανισμό που συμβάλλει στην πέψη των θρεπτικών συστατικών των γαρίδων [77-79]. Έχει επίσης αναφερθεί ότι συμβάλλει στη σύνθεση πολυακόρεστων λιπαρών οξέων (PUFA) και λιπαρών οξέων βραχείας αλυσίδας (SCF) [80,81]. Η Ruegeria, που ανήκει στο γένος Proteobacteria, παράγει δραστηριότητα τριεστεράσης, συμβάλλοντας στις πεπτικές διεργασίες του ξενιστή καθώς και στην αντιβακτηριακή δράση κατά του Vibrio anguillarum [82]. Οι ντεμεκίνες που ανήκουν στο γένος Actinobacteria μπορούν να παράγουν -αμυλάση, ξυλανάση και κυτταράση, οι οποίες εμπλέκονται στην απορρόφηση και τη χρήση υδατανθράκων [83–86]. Σύμφωνα με τα χημειοταξονομικά και γονιδιωματικά προφίλ, το Lysinimicrobium μπορεί να θεωρηθεί υποκειμενικό συνώνυμο του Demequina [87] και κατά συνέπεια θα μπορούσε να έχει την ίδια συμβολή στη δραστηριότητα των πεπτικών ενζύμων και στην πέψη των υδατανθράκων. Ο ρόλος των προκαρυωτικών μικροοργανισμών στο πεπτικό σύστημα της γαρίδας σχετίζεται στενά με τις προβλέψεις λειτουργίας στη βάση δεδομένων KEGG, οι οποίες ήταν αμινοξέα, υδατάνθρακες, συμπαράγοντες και ο μεταβολισμός βιταμινών καθώς και η κινητικότητα των κυττάρων. Η πεπτική παραγωγή ενζύμου και η σύνθεση των απαραίτητων λιπαρών οξέων υποδεικνύουν τον ευεργετικό ρόλο της μικροχλωρίδας στην υγεία και την ανοσολογική διέγερση του πεπτικού συστήματος της γαρίδας. Επιπλέον, διαδικασίες κινητικότητας των κυττάρων, όπως η βακτηριακή χημειοταξία και η συναρμολόγηση των μαστιγίων, θα μπορούσαν να υποστηρίξουν τους προκαρυωτικούς μικροοργανισμούς στην προσαρμογή τους στο πεπτικό περιβάλλον του ξενιστή [88]. Επομένως, δίαιτες με χαμηλή περιεκτικότητα σε ιχθυάλευρα, συμπληρωμένες με 0,19% MET-MET ή 0,06% MET-MET συν προβιοτικά (B. amyloliquefaciens) θα βοηθούσαν τους ευεργετικούς ρόλους των προκαρυωτικών κοινοτήτων στο πεπτικό σύστημα των γαρίδων.
Ήταν δύσκολο να χαρακτηριστεί η αφθονία των ευκαρυωτικών μικροοργανισμών με τον προσδιορισμό της αλληλουχίας του γονιδίου 18S επειδή ανιχνεύθηκε μεγάλη ποσότητα DNA του L. vannamei σε αυτή τη μελέτη. Επιπλέον, είναι σύνηθες στη μεταγραμμική κωδικοποίηση του DNA των κοπράνων ότι το DNA των μικροευκαρυωτών στα κόπρανα αποικοδομείται πιο γρήγορα από το DNA του ξενιστή και πρόσθετα βήματα όπως η διάσπαση ή ο αποκλεισμός του DNA του ξενιστή με χρήση περιοριστικών ενζύμων ή εκκινητών αποκλεισμού είναι απαραίτητα πριν ή μετά την ενίσχυση [89. ]. Ωστόσο, τα αποτελέσματα της μελέτης παρέχουν πληροφορίες για τις μικροευκαρυωτικές κοινότητες του πεπτικού συστήματος της γαρίδας. Το γένος SAR ήταν το πιο άφθονο στα έντερα των γαρίδων που τρέφονταν με δίαιτες με χαμηλά ιχθυάλευρα. Το Aurantiochytrium είχε μεγαλύτερη αφθονία στα έντερα γαρίδας που τρέφονταν με D3 ενώ το Aplanochytrium ήταν πιο άφθονο στα έντερα γαρίδας που τρέφονταν με D5. Επιπλέον, το Ebria ήταν το πιο διαδεδομένο στο έντερο γαρίδας που τρέφονταν με D1. Το Aurantiochytrium είναι παραγωγός εικοσαπεντανοϊκού οξέος (EPA) [90] ενώ το Aplanochytrium παράγει εικοσιδυαεξανοϊκό οξύ (DHA) [91]. Αυτά τα λιπαρά οξέα παίζουν ουσιαστικό ρόλο στην προώθηση της ανάπτυξης ή την ενίσχυση της ανοσίας των υδρόβιων οργανισμών. Επίσης, το EPA και το DHA βοηθούν τους υδρόβιους οργανισμούς να μειώσουν τους φλεγμονώδεις παράγοντες και να μειώσουν τη φλεγμονή [90]. Από την άλλη πλευρά, η Ebria έχει έναν εσωτερικό στερεό πυριτικό σκελετό, ο οποίος θα μπορούσε να οδηγήσει σε κακή πέψη από τους υδρόβιους οργανισμούς [92], γεγονός που θα μπορούσε να μειώσει την απόδοση ανάπτυξης των γαρίδων που τρέφονται με D1. Οι ευκαρυωτικοί μικροοργανισμοί ζουν ως συμπαραστάτες ή αμοιβαίοι στο πεπτικό σύστημα και στους ιστούς των θαλάσσιων ασπόνδυλων, αλλά είναι πιθανό ότι προήλθαν από παράκτιο νερό που χρησιμοποιήθηκε για την άρδευση της λίμνης με γαρίδες, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [93]. Ωστόσο, η χρήση δίαιτων που είναι φιλικές προς το περιβάλλον και συμπληρώνονται με πρόσθετα και προβιοτικά θα μπορούσε να ελέγξει την επιβλαβή ανάπτυξη μικροφυκών στο πεπτικό σύστημα της γαρίδας και στο περιβάλλον του [94]. Αυτό συμφωνεί με τα αποτελέσματα της μελέτης, τα οποία υποδεικνύουν ότι μια δίαιτα χαμηλή σε ιχθυάλευρα συμπληρωμένη με 0.13% DL-MET αύξησε την αφθονία Ebria επηρεάζοντας την παραγωγική απόδοση και την υγεία των γαρίδων, ενώ οι δίαιτες συμπληρωμένες με 0.19% Το METMET ή 0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens θα βοηθούσε τους ευεργετικούς ρόλους των ευκαρυωτικών κοινοτήτων στο πεπτικό σύστημα της γαρίδας.
Οφέλη από το cistanche για τους άνδρες-ενισχύουν το ανοσοποιητικό σύστημα
5. Συμπεράσματα
Τα ιχθυάλευρα θα μπορούσαν να αντικατασταθούν μερικώς έως και 50% από SBM και PBM σε τροφές γαρίδων συμπληρωμένες με MET-MET ή/και B. amyloliquefaciens CECT 5940 χωρίς δυσμενείς επιπτώσεις στην απόδοση ανάπτυξης. Σε σύγκριση με τη δίαιτα ελέγχου, οι γαρίδες που τρέφονταν με μειωμένες δίαιτες με ιχθυάλευρα με 0,19% MTE-MET και 0,06% MET-MET συν 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 είχαν 43% και 40% περισσότερη τελική βιομάζα, αντίστοιχα. Επιπλέον, οι γαρίδες που τρέφονταν με μειωμένες δίαιτες με ιχθυάλευρα συμπληρωμένες με MET-MET και/ή B. amyloliquefaciens CECT 5940 είχαν καλύτερο ύψος επιθηλιακών κυττάρων στο ηπατοπάγκρεας, δραστηριότητα πεπτικών ενζύμων, μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό σύστημα και ευεργετική μικροχλωρίδα για το πεπτικό σύστημα. Απαιτείται περαιτέρω έρευνα για τη διερεύνηση κλιμακωτών επιπέδων πηγών μεθειονίνης και των συνεργιστικών επιδράσεων αμινοξέων και προβιοτικών σε μειωμένες δίαιτες ιχθυάλευρων για γαρίδες εκτροφής. Επίσης, θα ήταν ενδιαφέρον να αξιολογήσουμε πώς το SBM και το PBM επηρεάζουν τη σύνθεση λιπαρών οξέων των μειωμένων δίαιτων με ιχθυάλευρα και την ποιότητα των μυών της γαρίδας. Ωστόσο, αυτές οι πληροφορίες θα μπορούσαν να είναι ενδιαφέρουσες για την ανάπτυξη τροφών με χαμηλά ιχθυάλευρα για την υδατοκαλλιέργεια χωρίς να επηρεάζεται η ανάπτυξη και η ευημερία των υδρόβιων οργανισμών.
βιβλιογραφικές αναφορές
1. FAO. Η κατάσταση της παγκόσμιας αλιείας και υδατοκαλλιέργειας 2022. Towards Blue Transformation; FAO: Ρώμη, Ιταλία. [CrossRef]
2. Xie, J.-J.; Lemme, Α.; He, J.-Y.; Γιν, Ρ.; Figueiredo-Silva, C.; Liu, Υ.-J.; Xie, S.-W.; Niu, J.; Tian, L.-X. Τα επίπεδα ιχθυάλευρων μπορούν να μειωθούν επιτυχώς στις λευκές γαρίδες (Litopenaeus vannamei) εάν συμπληρωθούν με DL-Methionine (DL-Met) ή DL-MethionylDL-Methionine (Met-Met). Aquac. Nutr. 2017, 24, 1144–1152. [CrossRef]
3. Lu, J.; Zhang, Χ.; Zhou, Q.; Cheng, Υ.; Luo, J.; Masagounder, Κ.; Αυτός είναι.; Zhu, Τ.; Yuan, Υ.; Shi, Β.; et al. Το διαιτητικό συμπλήρωμα DL-μεθειονυλο-DLμεθειονίνης θα μπορούσε να βελτιώσει την απόδοση ανάπτυξης κάτω από στρατηγικές χαμηλών ιχθυάλευρων διαμορφώνοντας την οδό σηματοδότησης TOR του Litopenaeus vannamei. Aquac. Nutr. 2021, 27, 1921–1933. [CrossRef]
4. Cho, JH; Kim, IH Ψαράλευρο-θρεπτική αξία. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2011, 95, 685–692. [CrossRef] [PubMed]
5. Τραγούδι, Χ.; Ye, H.; Jin, F.; Li, Η.; Kim, Y.-S.; Xiao, J.; Guo, Z. Επιδράσεις του αλεύρου σόγιας που έχει υποστεί ζύμωση και της μονοφωσφορικής 50 -γουανοσίνης στην ανάπτυξη, την εντερική υγεία και την ικανότητα κατά του στρες του Penaeus vannamei σε δίαιτα χαμηλής περιεκτικότητας σε ιχθυάλευρα. Aquaculture 2022, 548, 737591. [CrossRef]
6. Yao, W.; Yang, Ρ.; Zhang, Χ.; Xu, Χ.; Zhang, C.; Li, Χ.; Leng, X. Επιδράσεις αντικατάστασης διαιτητικών ιχθυάλευρων με πρωτεΐνη Clostridium autoethanogenum στην ανάπτυξη και την ποιότητα της σάρκας της λευκής γαρίδας Ειρηνικού (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 2022, 549, 737770. [CrossRef]
7. Zhang, J.; Yang, Η.; Yan, Υ.; Zhang, C.; Ye, J.; Sun, Y. Επιδράσεις των προβιοτικών ιχθυοπροέλευσης στην απόδοση της ανάπτυξης, την ανοσοαπόκριση και την εντερική υγεία των γαρίδων (Litopenaeus vannamei) που τρέφονται με δίαιτες με ιχθυάλευρο που έχει εν μέρει αντικατασταθεί από άλευρο σόγιας. Aquac. Nutr. 2020, 26, 1255–1265. [CrossRef]
8. Ji, R.; Wang, Ζ.; He, J.; Masagounder, Κ.; Xu, W.; Mai, Κ.; Ai, Q. Επιδράσεις του συμπληρώματος DL-μεθειονυλο-DL-μεθειονίνης στην απόδοση ανάπτυξης, τις ανοσολογικές και αντιοξειδωτικές αποκρίσεις λευκών γαρίδων (Litopenaeus vannamei) που τρέφονται με χαμηλή διατροφή ιχθυάλευρων. Aquac. Rep. 2021, 21, 100785. [CrossRef]
9. Chaklader, R.; Siddik, MAB; Fotedar, R. Η ολική αντικατάσταση του ιχθυάλευρου με γεύμα υποπροϊόντος πουλερικών επηρέασε την ανάπτυξη, την ποιότητα των μυών, την ιστολογική δομή, την αντιοξειδωτική ικανότητα και την ανοσοαπόκριση του νεαρού barramundi, Lates calcarifer. PLoS ONE 2020, 15, e0242079. [CrossRef]
10. Niu, J.; Lemme, Α.; He, J.-Y.; Li, Η.-Υ.; Xie, S.-W.; Liu, Υ.-J.; Yang, Η.-J.; Figueiredo-Silva, C.; Tian, L.-X. Αξιολόγηση της βιοδιαθεσιμότητας του προϊόντος Novel Met-Met (AQUAVI®Met-Met) σε σύγκριση με την dl-μεθειονίνη (dl-Met) σε λευκές γαρίδες (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 2018, 484, 322–332. [CrossRef]
11. Skiba-Cassy, S.; Geurden, Ι.; Panserat, S.; Seiliez, I. Η διαιτητική ανισορροπία της μεθειονίνης μεταβάλλει τη μεταγραφική ρύθμιση των γονιδίων που εμπλέκονται στο μεταβολισμό της γλυκόζης, των λιπιδίων και των αμινοξέων στο ήπαρ της ιριδίζουσας πέστροφας (Oncorhynchus mykiss). Υδατοκαλλιέργεια 2016, 454, 56–65. [CrossRef]
12. Machado, Μ.; Serra, CR; Oliva-Teles, Α.; Κώστας, Β. Η μεθειονίνη και η τρυπτοφάνη Παίζουν διαφορετικούς ρυθμιστικούς ρόλους στο ευρωπαϊκό λαβράκι (Dicentrarchus labrax) Έμφυτη ανοσοαπόκριση και σηματοδότηση απόπτωσης — Μια μελέτη in vitro. Εμπρός. Immunol. 2021, 12, 660448. [CrossRef]
13. Zhou, Υ.; He, J.; Su, Ν.; Masagounder, Κ.; Xu, Μ.; Chen, L.; Liu, Q.; Ye, H.; Sun, Ζ.; Ye, C. Επιδράσεις της DL-μεθειονίνης και ενός υδροξυ αναλόγου μεθειονίνης (MHA-Ca) στην ανάπτυξη, τα προφίλ αμινοξέων και την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με τη σύνθεση ταυρίνης και πρωτεΐνης στον κοινό κυπρίνο (Cyprinus carpio). Aquaculture 2021, 532, 735962. [CrossRef]
14. Guo, Τ.-Υ.; Zhao, W.; He, J.-Y.; Liao, S.-Y.; Xie, J.-J.; Xie, S.-W.; Masagounder, Κ.; Liu, Υ.-J.; Tian, L.-X.; Niu, J. Τα συμπληρώματα διατροφής dl-μεθειονυλ dl-μεθειονίνης αύξησαν την απόδοση ανάπτυξης, την αντιοξειδωτική ικανότητα, την περιεκτικότητα σε βασικά αμινοξέα και βελτίωσαν την ποικιλομορφία της εντερικής μικροχλωρίδας στην τιλάπια του Νείλου (Oreochromis niloticus). Br. J. Nutr. 2020, 123, 72–83. [CrossRef]
15. Lin, J.; Zeng, Q.; Zhang, C.; Τραγούδι, Κ.; Lu, Κ.; Wang, L.; Rahimnejad, S. Επιδράσεις του συμπληρώματος Bacillus subtilis σε δίαιτες με βάση σόγιαλευρο στην απόδοση ανάπτυξης, την πεπτικότητα της δίαιτας και την υγεία του εντέρου στον ταυροβάτραχο Lithobates catesbeianus. Aquac. Rep. 2020, 16, 100273. [CrossRef]
16. Tao, Χ.; He, J.; Lu, J.; Chen, Ζ.; Jin, Μ.; Jiao, L.; Masagounder, Κ.; Liu, W.; Zhou, Q. Επιδράσεις του Bacillus subtilis DSM 32315 (Gutcare®) στην απόδοση ανάπτυξης, την αντιοξειδωτική κατάσταση, την ανοσοποιητική ικανότητα και την εντερική λειτουργία για νεαρό Litopenaeus vannamei που τρέφονται με δίαιτες υψηλής/χαμηλής περιεκτικότητας σε ιχθυάλευρα. Aquac. Rep. 2022, 26, 101282. [CrossRef]
17. De Oliveira, MJK; Sakomura, NK; Dorigam, JCDP; Doranalli, Κ.; Soares, L.; Το Viana, G. Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 μόνο του ή σε συνδυασμό με αντιβιοτικούς αυξητικούς προαγωγείς βελτιώνει την απόδοση σε κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής υπό πρόκληση εντερικού παθογόνου. Poult. Sci. 2019, 98, 4391–4400. [CrossRef]
18. Silva, TFA; Petrillo, TR; Yunis-Aguinaga, J.; Marcusso, Ρ.; Claudiano, GDS; de Moraes, FR; de Moraes, JRE Επιδράσεις του προβιοτικού Bacillus amyloliquefaciens στην απόδοση ανάπτυξης, την αιματολογία και τη μορφομετρία του εντέρου σε τιλάπια του Νείλου που εκτρέφεται σε κλουβί. Lat. Είμαι. J. Aquat. Res. 2015, 43, 963–971. [CrossRef]
19. Bai, S.; Katya, Κ.; Yun, Η. Additives in aquafeed. Στις πρακτικές ζωοτροφών και διατροφής στην υδατοκαλλιέργεια. Woodhead Publishing: Sawston, UK, 2015; σελ. 171–202. [CrossRef]
20. Wang, L.; Ye, L.; Hua, Υ.; Zhang, G.; Li, Υ.; Zhang, J.; He, J.; Liu, Μ.; Shao, Q. Επιδράσεις της dietarydl-methionyl-dl-methionine (Met-Met) στην απόδοση ανάπτυξης, τη σύσταση του σώματος και τις αιματολογικές παραμέτρους λευκών γαρίδων (Litopenaeus vannamei) που τρέφονται με δίαιτες βασισμένες σε φυτικές πρωτεΐνες. Aquac. Res. 2019, 50, 1718–1730. [CrossRef]
21. Al-Deriny, SH; Dawood, MA; Zaid, ΑΑΑ; El-Tras, WF; Paray, BA; Van Doan, Η.; Mohamed, RA Οι συνεργιστικές επιδράσεις της Spirulina platensis και του Bacillus amyloliquefaciens στην απόδοση ανάπτυξης, την εντερική ιστομορφολογία και την ανοσοαπόκριση της τιλάπιας του Νείλου (Oreochromis niloticus). Aquac. Rep. 2020, 17, 100390. [CrossRef]
22. Sun, Υ.; Zhang, Υ.; Liu, Μ.; Li, J.; Lai, W.; Geng, S.; Yuan, Τ.; Liu, Υ.; Di, Υ.; Zhang, W.; et al. Επιδράσεις του διατροφικού συμπληρώματος Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 στην απόδοση ανάπτυξης, την αντιοξειδωτική κατάσταση, την ανοσία και τη δραστηριότητα των πεπτικών ενζύμων των κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής που τρέφονται με δίαιτα καλαμποκιού-σίτου-σόγιας. Poult. Sci. 2022, 101, 101585. [CrossRef]
23. NRC (Εθνικό Συμβούλιο Έρευνας). Διατροφικές Απαιτήσεις Ψαριών και Γαρίδων. National Academic Press: Washington, DC, USA, 2011. [CrossRef]
24. Guo, J.; Davis, R.; Starkey, C.; Davis, DA Αποτελεσματικότητα διαφόρων επικαλυμμένων υλικών για την πρόληψη της έκπλυσης θρεπτικών συστατικών για εμπορικές δίαιτες για λευκές γαρίδες Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 52, 195–203. [CrossRef]
25. Διεθνές Γραφείο Επιζωοτιών. Επιτροπή Προτύπων Υγιεινής Υδάτινων Ζώων. Εγχειρίδιο διαγνωστικών δοκιμών για υδρόβια ζώα. International Office des épizooties. 2022. Διαθέσιμο στο διαδίκτυο: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-andmanuals/aquatic-manual-online-access/ (πρόσβαση την 1η Σεπτεμβρίου 2022).
26. Martinez-Porchas, M.; Ezquerra-Brauer, Μ.; Mendoza-Cano, F.; Higuera, JEC; Vargas-Albores, F.; Martinez-Cordova, LR Επίδραση της συμπλήρωσης ετερότροφης και φωτοαυτοτροφικής βιολογικής κροκίδος, στην απόκριση παραγωγής, τη φυσιολογική κατάσταση και την ποιότητα μετά τη συγκομιδή της γαρίδας λευκού ποδιού, Litopenaeus vannamei. Aquac. Απ. 2020, 16, 100257. [CrossRef]
27. Peña-Rodríguez, A.; Elizondo-González, R.; Nieto-López, MG; Ricque-Marie, D.; Cruz-Suárez, LE Πρακτικές δίαιτες για τη βιώσιμη παραγωγή καστανών γαρίδων, Farfantepenaeus californiensis, νεαρών με την παρουσία του πράσινου μακροφύκους Ulva clathrata ως φυσική τροφή. J. Appl. Phycol. 2017, 29, 413–421. [CrossRef]
28. Piérri, V.; Valter-Severino, D.; Goulart-De-Oliveira, Κ.; Manoel-Do-Espírito-Santo, C.; Nascimento-Vieira, F.; Quadros-Seiffert, W. Καλλιέργεια θαλάσσιας γαρίδας σε σύστημα τεχνολογίας biofloc (BFT) κάτω από διαφορετικές αλκαλικότητες νερού. Μπραζ. J. Biol. 2015, 75, 558–564. [CrossRef] [PubMed]
29. Gonzalez-Galaviz, JR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Perez, MB; Lares-Villa, F.; Bórquez-López, RA; Gil-Núñez, JC Επίδραση του γονότυπου και της πηγής πρωτεΐνης στην απόδοση της λευκής γαρίδας του Ειρηνικού (Litopenaeus vannamei). Ιταλ. J. Anim. Sci. 2020, 19, 289–294. [CrossRef]
30. Bell, TA; Lightner, DV A Handbook of Normal Penaeid Shrimp Histology; Οργανισμός Τροφίμων και Γεωργίας των Ηνωμένων Εθνών: Ρώμη, Ιταλία, 1988.
31. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Gonzalez-Galaviz, JR; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Bórquez-López, RA; Gil Núñez, JC; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Ibarra-Gámez, JC; Barrios, RMM Οι επιδράσεις της υψηλής συγκέντρωσης διοξειδίου του άνθρακα στην απόδοση και την ιστολογία των ιστών της γαρίδας Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2021, 52, 3991–3996. [CrossRef]
32. Xiao, Ζ.; Storms, R.; Tsang, A. Μια ποσοτική μέθοδος αμύλου-ιωδίου για τη μέτρηση των δραστηριοτήτων άλφα-αμυλάσης και γλυκοαμυλάσης. Πρωκτικός. Biochem. 2006, 351, 146–148. [CrossRef]
33. Bradford, MM Μια ταχεία και ευαίσθητη μέθοδος για τον ποσοτικό προσδιορισμό ποσοτήτων μικρογραμμαρίων πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας την αρχή της δέσμευσης πρωτεΐνης-χρωστικής. Πρωκτικός. Biochem. 1976, 72, 248-254. [CrossRef]
34. Zhang, S.-P.; Li, J.-F.; Wu, X.-C.; Zhong, W.-J.; Xian, J.-A.; Liao, S.-A.; Miao, Υ.-Τ.; Wang, A.-L. Επιδράσεις διαφορετικών διαιτητικών επιπέδων λιπιδίων στην ανάπτυξη, την επιβίωση και την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό σε λευκές γαρίδες Ειρηνικού, Litopenaeus vannamei. Ψάρια Οστρακόδερμα. Immunol. 2013, 34, 1131–1138. [CrossRef]
35. Anaya, LR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Lares-Jiménez, LF; Luna-Nevarez, Ρ.; Gonzalez-Galaviz, JR Επίδραση γενετικής γραμμής, πηγής πρωτεΐνης και επιπέδου πρωτεΐνης στην ανάπτυξη, την επιβίωση και τη σχετιζόμενη με το ανοσοποιητικό γονιδιακό έκφραση του Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 51, 1161–1174. [CrossRef]
36. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Flores-Pérez, MB; Garcia-Clark, JG; Rodriguez-Anaya, LZ; Lares-Villa, F.; BórquezLópez, RA; Gil-Núñez, JC; Gonzalez-Galaviz, JR Μεταγραφική απόκριση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό σε Litopenaeus vannamei καλλιεργημένα σε συστήματα υδατοκαλλιέργειας ανακυκλοφορίας με αυξημένο CO2. Ανθ. Σουτιέν. de Zootec. 2021, 50, 20200197. [CrossRef]
37. Guzmán-Villanueva, LT; Escobedo-Fregoso, C.; Barajas-Sandoval, DR; Gomez-Gil, Β.; Peña-Rodríguez, A.; Martínez-Diaz, SF; Balcazar, JL; Quiroz-Guzmán, E. Αξιολόγηση της μικροβιακής δυναμικής και της έκφρασης γονιδίου αντιοξειδωτικού ενζύμου μετά από χορήγηση προβιοτικών σε εκτρεφόμενες λευκές γαρίδες του Ειρηνικού (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 2020, 519, 734907. [CrossRef]
38. Callahan, BJ; Mcmurdie, PJ; Rosen, MJ; Han, AW; Johnson, AJA; Holmes, SP DADA2: Συμπεράσματα δείγματος υψηλής ανάλυσης από δεδομένα ενισχυτή Illumina. Nat. Methods 2016, 13, 581–583. [CrossRef]
39. Lahti, L.; Shetty, S. Microbiome R συσκευασία; Release (3.16); Bioconductor: Boston, MA, ΗΠΑ, 2017. [CrossRef]
40. Langille, MGI; Zaneveld, J.; Caporaso, JG; McDonald, D.; Knights, D.; Reyes, JA; Clemente, JC; Burkepile, DE; Vega Thurber, RL; Knight, R.; et al. Προγνωστικό λειτουργικό προφίλ μικροβιακών κοινοτήτων χρησιμοποιώντας αλληλουχίες γονιδίου δείκτη 16S rRNA. Nat. Biotechnol. 2013, 31, 814–821. [CrossRef]
41. Cornejo-Granados, F.; Lopez-Zavala, AA; Gallardo-Becerra, L.; Mendoza-Vargas, A.; Sánchez, F.; Vichido, R.; Brieba, LG; Viana, MT; Sotelo-Mundo, RR; Το Ochoa-Leyva, A. Μικροβιόλιο της γαρίδας με λευκά πόδια του Ειρηνικού αποκαλύπτει τη διαφορική σύνθεση βακτηριακής κοινότητας μεταξύ των συνθηκών έξαρσης άγριων, υδατοκαλλιεργητών και AHPND/EMS. Sci. Απ. 2017, 7, 1–15. [CrossRef]
42. Façanha, FN; Oliveira-Neto, AR; Figueiredo-Silva, C.; Nunes, AJ Επίδραση της πυκνότητας εκτροφής γαρίδας και των διαβαθμισμένων επιπέδων διατροφικής μεθειονίνης στην απόδοση ανάπτυξης του Litopenaeus vannamei που εκτρέφεται σε σύστημα πράσινου νερού. Υδατοκαλλιέργεια 2016, 463, 16–21. [CrossRef]
43. Nunes, AJP; Sabry-Neto, Η.; Masagounder, K. Η ακατέργαστη πρωτεΐνη σε δίαιτες με χαμηλή περιεκτικότητα σε ιχθυάλευρα για νεαρό Litopenaeus vannamei μπορεί να μειωθεί μέσω μιας καλά ισορροπημένης συμπλήρωσης βασικών αμινοξέων. J. World Aquac. Soc. 2019, 50, 1093–1107. [CrossRef]
44. Llario, F.; Falco, S.; Sebastiá-Frasquet, M.-T.; Escrivá, J.; Rodilla, Μ.; Poersch, LH Ο ρόλος του Bacillus amyloliquefaciens στον Litopenaeus vannamei κατά την ωρίμανση ενός συστήματος Biofloc. J. Mar. Sci. Eng. 2019, 7, 228. [CrossRef]
45. Llario, F.; Romano, LA; Rodilla, Μ.; Sebastiá-Frasquet, MT; Poersch, LH Εφαρμογή του Bacillus amyloliquefaciens ως προβιοτικού για το Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) που καλλιεργείται σε σύστημα βιοφλοκών. Ιράν. J. Fish. Sci. 2020, 19, 904–920.
46. Gharib-Naseri, K.; Dorigam, JCDP; Doranalli, Κ.; Kheravii, S.; Swick, RA; Choct, Μ.; Wu, S.-B. Οι τροποποιήσεις γονιδίων που σχετίζονται με την ακεραιότητα του εντέρου, την απόπτωση και την ανοσία αποτελούν τη βάση των ευεργετικών επιδράσεων του Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 σε κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής που τρέφονται με δίαιτα με διαφορετικά επίπεδα πρωτεΐνης σε ένα μοντέλο πρόκλησης νεκρωτικής εντερίτιδας. J. Anim. Sci. Biotechnol. 2020, 11, 104. [CrossRef]
47. Ajogwu, TMC; Ekwealor, CC; Mbah, ΑΝ; Madukwe, EJ; Ekwealor, IA Έλεγχος ειδών βάκιλλων που παράγουν μεθειονίνη από καρυκεύματα τροφίμων που έχουν υποστεί ζύμωση στη Νιγηρία και επιδράσεις ορισμένων πολιτισμικών παραμέτρων στη συσσώρευση μεθειονίνης. Είμαι. J. Food Nutr. 2020, 9, 16–22. [CrossRef]
48. Yu, M.-C.; Li, Z.-J.; Lin, Η.-Ζ.; Wen, G.-L.; Ma, S. Επιδράσεις του διαιτητικού βάκιλλου και των φαρμακευτικών βοτάνων στην ανάπτυξη, τη δραστηριότητα των πεπτικών ενζύμων και τις βιοχημικές παραμέτρους ορού της γαρίδας Litopenaeus vannamei. Aquac. Int. 2008, 16, 471-480. [CrossRef]
49. Yılmaz, S.; Ergun, S.; Yigit, Μ.; Çelik, E. Επίδραση συνδυασμού διαιτητικού Bacillus subtilis και τρανς-κινναμωμικού οξέος στις έμφυτες ανοσολογικές αποκρίσεις και αντίσταση της ιριδίζουσας πέστροφας, Oncorhynchus mykiss σε Yersinia ruckeri. Aquac. Res. 2020, 51, 441–454. [CrossRef]
50. Zare, R.; Kenari, AA; Sadati, MY Η επίδραση του διαιτητικού οξικού οξέος, πρωτεΐνης (προβιοτικό) και ο συνδυασμός τους στην απόδοση ανάπτυξης, εντερική μικροχλωρίδα, πεπτικά ένζυμα, ανοσολογικές παραμέτρους και σύνθεση λιπαρών οξέων στον οξύρρυγχο Σιβηρίας (Acipenser baerii, Brandt, 1869). Aquac. Int. 2021, 29, 891–910. [CrossRef]
51. Rodjan, Ρ.; Soisuwan, Κ.; Thongprajukaew, Κ.; Theapparat, Υ.; Khongthong, S.; Jeenkeawpieam, J.; Salaeharae, T. Επίδραση οργανικών οξέων ή προβιοτικών μόνα τους ή σε συνδυασμό στην απόδοση ανάπτυξης, την πεπτικότητα των θρεπτικών ουσιών, τις ενζυμικές δραστηριότητες, τη μορφολογία του εντέρου και τη μικροχλωρίδα του εντέρου σε κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2018, 102, e931–e940. [CrossRef] [PubMed]
52. Hong, Υ.; Chu, J.; Kirby, R.; Sheen, S.; Chien, A. Τα αποτελέσματα της αντικατάστασης της πρωτεΐνης ιχθυάλευρου με ένα μείγμα υποπροϊόντος αλεύρου πουλερικών και αλεύρου σόγιας που έχει υποστεί ζύμωση στην απόδοση ανάπτυξης και στη θρεπτική σύνθεση των ιστών του ασιατικού λαβράκι (Lates calcarifer). Aquac. Res. 2021, 52, 4105–4115. [CrossRef]
53. Burri, L.; Berge, Κ.; Chumkam, S.; Jintasataporn, O. Επιδράσεις διαφορετικών επιπέδων συμπερίληψης ζωοτροφών αλεύρου κριλ στην ανάπτυξη και τη μορφολογία του ηπατοπάγκρεας του Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2020, 51, 4819–4823. [CrossRef]
54. Murashita, Κ.; Matsunari, Η.; Fukada, Η.; Suzuki, Ν.; Furuita, Η.; Oku, Η.; Rønnestad, Ι.; Yoshinaga, Η.; Yamamoto, T. Επίδραση μιας φυτικής διατροφής με χαμηλή περιεκτικότητα σε ιχθυάλευρα στη φυσιολογία του πεπτικού συστήματος σε κιτρινοουρά Seriola quinqueradiata. Aquaculture 2019, 506, 168–180. [CrossRef]
55. Rahimnejad, S.; Yuan, Χ.; Wang, L.; Lu, Κ.; Τραγούδι, Κ.; Zhang, C. Συμπλήρωμα χιτοολιγοσακχαρίτη σε δίαιτες χαμηλής περιεκτικότητας σε ιχθυάλευρα για λευκές γαρίδες Ειρηνικού (Litopenaeus vannamei): Επιδράσεις στην ανάπτυξη, την έμφυτη ανοσία, την ιστολογία του εντέρου και την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό. Ψάρια Οστρακόδερμα. Immunol. 2018, 80, 405–415. [CrossRef]
56. Peña-Rodríguez, A.; Pelletier-Morreeuw, Z.; García-Luján, J.; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Guzmán-Villanueva, L.; Escobedo regoso, C.; Tovar-Ramírez, D.; Reyes, AG Evaluation ofAgave lechuguillaby-product ακατέργαστο εκχύλισμα ως πρόσθετο ζωοτροφών για νεαρές γαρίδεςLitopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2019, 51, 1336–1345. [CrossRef]
57. Ray, GW; Liang, D.; Yang, Q.; Tan, Β.; Dong, Χ.; Chi, S.; Liu, Η.; Zhang, S.; Rimei, L. Επιδράσεις αντικατάστασης ιχθυάλευρου με συμπυκνωμένο πρωτεϊνικό φασόλι σόγιας (SPC) στην ανάπτυξη, στους βιοχημικούς δείκτες ορού και στις αντιοξειδωτικές λειτουργίες για νεαρές γαρίδες Litopenaeus vannamei. Aquaculture 2020, 516, 734630. [CrossRef]
58. Ambasankar, Κ.; Dayal, JS; Vasagam, KK; Sivaramakrishnan, Τ.; Sandeep, KP; Panigrahi, Α.; Ananda Raja, R.; Burri, L.; Vijayan, KK Growth, σύσταση λιπαρών οξέων, γονιδιακή έκφραση που σχετίζεται με το ανοσοποιητικό, ιστολογικοί και αιματολογικοί δείκτες του Penaeus vannamei που τροφοδοτούνται με διαβαθμισμένα επίπεδα αλεύρου κριλ της Ανταρκτικής σε δύο διαφορετικές συγκεντρώσεις ιχθυάλευρου. Aquaculture 2022, 553, 738069. [CrossRef]
59. Noor, Z.; Noor, Μ.; Khan, SA; Younas, W.; Ualiyeva, D.; Hassan, Ζ.; Yousafzai, AM Τα συμπληρώματα διατροφής μεθειονίνης βελτιώνουν τις επιδόσεις ανάπτυξης, την έμφυτη ανοσία, τα πεπτικά ένζυμα και τις αντιοξειδωτικές δραστηριότητες του rohu (Labeo rohita). Fish Physiol. Biochem. 2021, 47, 451–464. [CrossRef]
60. Yun, Η.; Shahkar, Ε.; Hamidoghli, Α.; Lee, S.; Win, S.; Bai, SC Αξιολόγηση διαιτητικού αλεύρου σόγιας ως υποκατάστατο ιχθυάλευρου για νεαρές γαρίδες λευκού ποδιού, Litopenaeus vannamei που εκτρέφονται σε σύστημα biofloc. Int. Aquat. Res. 2017, 9, 11–24. [CrossRef]
61. Hu, Χ.; Yang, Η.-L.; Yan, Υ.-Υ.; Zhang, C.-X.; Ye, J.-D.; Lu, K.-L.; Hu, L.-H.; Zhang, J.-J.; Ruan, L.; Κυρ, Υ.-Ζ. Επιδράσεις του φρουκτοολιγοσακχαρίτη στην ανάπτυξη, την ανοσία και την εντερική μικροχλωρίδα των γαρίδων (Litopenaeus vannamei) που τρέφονται με δίαιτες με ιχθυάλευρο που έχει εν μέρει αντικατασταθεί από άλευρο σόγιας. Aquac. Nutr. 2019, 25, 194–204. [CrossRef]
62. Mamauag, REP; Gao, J.; Nguyen, BT; Ragaza, JA; Koshio, S.; Ishikawa, Μ.; Yokoyama, S. Συμπληρώματα dl-μεθειονίνης και διπεπτιδίου μεθειονίνης σε δίαιτες είναι αποτελεσματικά για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη των προνυμφών και της νεαρής τσιπούρας της Ερυθράς Θάλασσας, Pagrus major. J. World Aquac. Soc. 2012, 43, 362–374. [CrossRef]
63. Wu, Ρ.; Tang, L.; Jiang, W.; Hu, Κ.; Liu, Υ.; Jiang, J.; Kuang, S.; Tang, W.; Zhang, Υ.; Zhou, Χ.; et al. Η σχέση μεταξύ της διατροφικής μεθειονίνης και της ανάπτυξης, της πέψης, της απορρόφησης και της αντιοξειδωτικής κατάστασης σε εντερικούς και ηπατοπαγκρεατικούς ιστούς του υπο-ενήλικου κυπρίνου χόρτου (Ctenopharyngodon idella). J. Anim. Sci. Biotechnol. 2017, 8, 1–14. [CrossRef]
64. Encarnação, P. Functional Feed Additives in Aquaculture Feeds. Στο Aquafeed Formulation; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2016; σελ. 217–237. [CrossRef]
65. Xie, S.; Wei, D.; Γιν, Ρ.; Zheng, L.; Guo, Τ.; Liu, Υ.; Tian, L.; Niu, J. Διαιτητική αντικατάσταση ιχθυάλευρου με μειωμένη πρωτεϊνοσύνθεση και ανοσοαπόκριση νεαρής λευκής γαρίδας Ειρηνικού, Litopenaeus vannamei σε χαμηλή αλατότητα. Comp. Biochem. Physiol. Μέρος Β Biochem. ΜοΙ. Biol. 2018, 228, 26–33. [CrossRef]
66. Ayiku, S.; Shen, J.; Tan, Β.-Ρ.; Dong, Χ.-Η.; Liu, Η.-Υ. Επιδράσεις της μείωσης των διαιτητικών ιχθυάλευρων με συμπληρώματα ζύμης στην ανάπτυξη του Litopenaeus vannamei, την ανοσοαπόκριση και την αντίσταση στη νόσο έναντι του Vibrio harveyi. Microbiol. Res. 2020, 239, 126554. [CrossRef]
