Τα ποντίκια Knockout Diamine Oxidase δεν είναι υπερευαίσθητα στην από του στόματος ή υποδόρια χορηγούμενη ισταμίνη

Αφηρημένη

1. Στόχος

Να αξιολογηθεί η συμβολή της ενδογενούς οξειδάσης της διαμίνης (DAO) στην αδρανοποίηση της εξωγενούς ισταμίνης, να βρεθεί ένα στέλεχος ποντικού με αυξημένη ευαισθησία στην ισταμίνη και να δοκιμαστεί η αποτελεσματικότητα του rhDAO σε ένα μοντέλο πρόκλησης ισταμίνης.

2. Μέθοδοι

Τα ποντίκια νοκ-άουτ της διαμινικής οξειδάσης (ΚΟ) προκλήθηκαν με από του στόματος και υποδόρια χορήγηση ισταμίνης σε συνδυασμό με τον -αδρενεργικό αναστολέα προπρανολόλη, με τους δύο αναστολείς της ισταμίνης-Ν-μεθυλτρανσφεράσης (HNMT) μεθοπρένιο και τακρίνη, με φολικό οξύ για τη θεραπεία της οξείας νεφρικής βλάβης και με ανασυνδυασμένο ανθρώπινο DAO. Η θερμοκρασία του πυρήνα του σώματος μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα υποδορίως εμφυτευμένο μικροτσίπ και τα επίπεδα ισταμίνης στο πλάσμα ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας μια ομοιογενή δοκιμασία φθορισμού με ανάλυση χρόνου.

3. Αποτελέσματα

Η θερμοκρασία του πυρήνα του σώματος και τα επίπεδα ισταμίνης στο πλάσμα δεν ήταν σημαντικά διαφορετικά μεταξύ ποντικών άγριου τύπου (WT) και DAO KO μετά από στοματική και υποδόρια πρόκληση ισταμίνης με και χωρίς οξεία νεφρική βλάβη ή χορήγηση αναστολέων HNMT. Η θεραπεία με ανασυνδυασμένο ανθρώπινο DAO μείωσε τη μέση περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) για απώλεια θερμοκρασίας του πυρήνα του σώματος κατά 63 τοις εκατό (p=0.002) και την κλινική βαθμολογία κατά 88 τοις εκατό (p<0.001). The AUC of the histamine concentration was reduced by 81%.

4. Συμπεράσματα

Η αδρανοποίηση της εξωγενούς ισταμίνης δεν προκαλείται από ενζυματική αποικοδόμηση και διήθηση των νεφρών. Η θεραπεία με ανασυνδυασμένο ανθρώπινο DAO μείωσε σημαντικά την απώλεια θερμοκρασίας του πυρήνα του σώματος που προκαλείται από την ισταμίνη και τις συγκεντρώσεις ισταμίνης και απέτρεψε την ανάπτυξη σοβαρών κλινικών συμπτωμάτων.

Λέξεις-κλειδιά

Αμινοοξειδάση (που περιέχει χαλκό) · Ν-μεθυλοτρανσφεράση ισταμίνης · Οξεία νεφρική βλάβη · Μεταβολισμός · Τακρίνη · Μετοπίνη · Θερμοκρασία σώματος

Κάντε κλικ εδώ για να αγοράσετε το συμπλήρωμα Cistanche

Εισαγωγή

Περισσότερο από το 95 τοις εκατό της συνολικής ισταμίνης στον άνθρωπο αποθηκεύεται σε μαστοκύτταρα και βασεόφιλα. Το ίδιο είναι πιθανό να ισχύει για πολλά θηλαστικά. Στον άνθρωπο, οι πυκνότητες των μαστοκυττάρων είναι υψηλότερες στο γαστρεντερικό σωλήνα, το δέρμα και τους πνεύμονες [1], και κατά συνέπεια, αυτά τα όργανα εμφανίζουν συμπτώματα που προκαλούνται από ισταμίνη σε ασθένειες με σαφή συμμετοχή της ενεργοποίησης των μαστοκυττάρων. Οι τοπικές ενδιάμεσες συγκεντρώσεις ισταμίνης μετά από οξεία αποκοκκίωση μπορεί να φτάσουν τα 10–1000 μMs [2, 3, βλέπε Διαδικτυακές πηγές]. Στους ανθρώπους, όπως στους σκύλους και τους χοίρους, οι φυσιολογικές συγκεντρώσεις ισταμίνης στο πλάσμα είναι κάτω από 1 ng/ml (9 nM) και τα συμπτώματα αρχίζουν να αναπτύσσονται με λίγα νανογραμμάρια ανά χιλιοστόλιτρο [4-7]. Σημαντική υπόταση με αυξημένο καρδιακό ρυθμό μπορεί να μετρηθεί από 5 ng/ml και όταν τα επίπεδα αυξάνονται πάνω από 10 ng/ml, η ανάπτυξη βρογχόσπασμου, καρδιακών αρρυθμιών, σοβαρής υπότασης και στεφανιαίου σπασμού μπορεί να οδηγήσει σε απειλητική για τη ζωή πολυσυστηματική δυσλειτουργία [8. 9]. Η ισταμίνη δεν εμπλέκεται μόνο στην αγγειοδιαστολή, την αύξηση της αγγειακής διαπερατότητας, την υποξία και την ανάπτυξη αγγειακού οιδήματος, αλλά επιδεικνύει επίσης προφλεγμονώδη συμμετοχή που επηρεάζει το προσαρμοστικό ανοσοποιητικό σύστημα μέσω στρατολόγησης, ωρίμανσης και ενεργοποίησης ανοσοενεργών κυττάρων. Επιπλέον, παίζει ρόλο στο έμφυτο ανοσοποιητικό σύστημα αλληλεπιδρώντας με τα δενδριτικά κύτταρα, τα φυσικά κύτταρα φονείς και τα κοκκιοκύτταρα [10, 11].

Οι βασικές συγκεντρώσεις ισταμίνης σε ποντίκια και αρουραίους είναι μεταξύ 20 και 100 ng/ml όταν μετρώνται με αξιόπιστες μεθόδους και επομένως είναι πολλές φορές υψηλότερες από αυτές που βρέθηκαν στους ανθρώπους [6, 7]. Δεν είναι σαφές εάν αυτά τα υψηλά επίπεδα ισταμίνης παίζουν κάποιο φυσιολογικό ρόλο. Τα τρωκτικά είναι εμφανώς ανθεκτικά στην ισταμίνη με θανατηφόρες δόσεις 50 τοις εκατό (LD50) σε διαφορετικά στελέχη ποντικών 3000–4000 και 400–500 mg/kg μετά από από του στόματος και ενδοφλέβια χορήγηση, αντίστοιχα [12, 13]. Η μέγιστη συγκέντρωση ισταμίνης στο πλάσμα μετά από χορήγηση βλωμού 400 mg/kg σε ποντικό 20 g θα ήταν περίπου 8 mg/ml υποθέτοντας όγκο πλάσματος 1 ml. Όταν προκλήθηκε αναφυλαξία σε ανθρώπους μέσω πρόκλησης ελεγχόμενου τσίμπημα σφήκας, συγκεντρώσεις ισταμίνης 140 ng/ml συσχετίστηκαν με σοβαρή απειλητική για τη ζωή υπόταση [14]. Πώς μεταβολίζεται και αδρανοποιείται η ισταμίνη;

Η ισταμίνη δείχνει 13 τοις εκατό μέση σύνδεση με τις πρωτεΐνες του πλάσματος και διηθείται ελεύθερα στους νεφρούς [15]. Ο ρυθμός σπειραματικής διήθησης (GFR) μπορεί θεωρητικά να συνεισφέρει περίπου 15-20 τοις εκατό στον χρόνο ημιζωής των 3-4 λεπτών που βρίσκεται σε υγιείς εθελοντές [5, βλ. Online Resources]. Σε κανονικό GFR 100 ml/min και όγκο πλάσματος 3000 ml, ο χρόνος ημιζωής της ισταμίνης θα ήταν 20 λεπτά. Σε ποντίκια, ένας κανονικός GFR 10 μl/min/g θα είχε ως αποτέλεσμα χρόνο ημιζωής ισταμίνης 3 λεπτών [16, βλ. Online Resources]. Ωστόσο, η ισταμίνη εμφανίζει υψηλό ρυθμό εκχύλισης στους νεφρούς, υπερβαίνοντας τους ρυθμούς με βάση το GFR, και αυτή η εκχύλιση αποδίδεται στην πρόσληψη και επαναρρόφηση στα εγγύς σωληναριακά κύτταρα μέσω του μεταφορέα οργανικών κατιόντων 2 (OCT2), ακολουθούμενη από ενζυματική αδρανοποίηση [17, βλ. παρακάτω]. Στους ανθρώπους, λιγότερο από το 1 τοις εκατό της εγχυόμενης ραδιενεργής ισταμίνης βρέθηκε στα ούρα μέσα στις πρώτες 6 ώρες [18]. Ο χαμηλός ρυθμός απέκκρισης ισταμίνης στον άνθρωπο, που παρατηρείται επίσης σε σκύλους και γάτες, έχει επιβεβαιωθεί από άλλους [19]. Σε ιστούς ποντικών και αρουραίων, περισσότερο από το 50 τοις εκατό της εγχυόμενης ραδιενέργειας βρίσκεται στα νεφρά και λιγότερο από το 2 τοις εκατό ως ισταμίνη 30 λεπτά μετά την ενδοφλέβια χορήγηση [20]. Οι νεφροί ήταν επίσης το όργανο με την υψηλότερη ραδιενέργεια μετά τη χορήγηση υψηλής δόσης ισταμίνης σε αρουραίους [21]. Ο μεταφορέας OCT2 εκφράζεται σε μεγάλο βαθμό στους νεφρούς ανθρώπων και τρωκτικών και μπορεί να είναι υπεύθυνος τόσο για την εξαγωγή ισταμίνης από το διαμέρισμα του πλάσματος όσο και για την επαναρρόφηση της ισταμίνης στο πρωτογενές διήθημα ούρων στα εγγύς σωληναριακά κύτταρα [22, βλέπε παρακάτω].

Η ταχεία μεταφορά της εξωκυτταρικής ισταμίνης από το διάμεσο υγρό μετά την απελευθέρωση από τα μαστοκύτταρα ή το πλάσμα σε άλλα διαμερίσματα μακριά από τα ενδοθηλιακά κύτταρα θα ήταν μια άλλη δυνατότητα απενεργοποίησης της ισταμίνης. Αυτό μπορεί να αναστείλει την πρόκληση σοβαρής υπότασης και αγγειακής διαρροής που προκαλείται μέσω της σηματοδότησης της ενδοθηλιακής συνθάσης του μονοξειδίου του αζώτου (NOS) και της δέσμευσης με τους υποδοχείς ισταμίνης [23-25]. Ωστόσο, δεν υπάρχουν διαθέσιμα in vivo δεδομένα για ζώα που να μελετούν τους ρυθμούς μεταφοράς ισταμίνης από τη συστηματική κυκλοφορία σε ενδοθηλιακά ή παρεγχυματικά κύτταρα. Σε αρκετές in vitro μελέτες, η ισταμίνη μεταφέρεται αμφίδρομα χρησιμοποιώντας τα χαμηλής συγγένειας, υψηλής χωρητικότητας OCT2 και OCT3 [22, 26, 27]. Η ισταμίνη είναι ένα εξαιρετικό υπόστρωμα για τον μεταφορέα OCT2 και OCT3 αρουραίου, εμφανίζοντας υψηλότερη απόδοση μεταφοράς σε σύγκριση με τις ισοδύναμες ανθρώπινες πρωτεΐνες OCT [26].

Herba Cistanche

Όταν χρησιμοποιούνται χαμηλές συγκεντρώσεις ραδιενεργής ισταμίνης σε ποντίκια, η μεθυλίωση μέσω της ισταμίνης-Ν-μεθυλοτρανσφεράσης (HNMT) φαίνεται να είναι η κύρια οδός αδρανοποίησης. Ωστόσο, τα προκλητικά ποντίκια με υψηλότερες δόσεις ισταμίνης μετατοπίζουν το μεταβολισμό σε ιμιδαζολοξικό οξύ (IMAA) και συζυγή ριβοσίδη, με μόνο μια μικρή ποσότητα μεθυλιωμένων παραγώγων που ανιχνεύεται [28-30]. Οι πενταπλάσιες αυξημένες βασικές συγκεντρώσεις ισταμίνης στον ορό στα ποντίκια HNMT νοκ-άουτ υποστηρίζουν αυτά τα δεδομένα [31]. Το ιμιδαζολοοξικό οξύ παράγεται μέσω οξείδωσης ισταμίνης από την οξειδάση της διαμίνης (DAO) απελευθερώνοντας ιμιδαζολική ακεταλδεΰδη, η οποία μετατρέπεται σε IMAA και παράγωγα ριβοσίδης, κυρίως στο ήπαρ. Η οξείδωση της ισταμίνης μέσω του DAO φαίνεται να παίζει μεγαλύτερο ρόλο στον καταβολισμό της ισταμίνης μετά από από του στόματος πρόκληση σε ποντίκια, κάτι που δεν προκαλεί έκπληξη δεδομένου ότι στα ποντίκια η έκφραση του DAO είναι υψηλή μόνο στη γαστρεντερική οδό [30]. Όταν πραγματοποιείται μια από του στόματος πρόκληση ισταμίνης σε ανθρώπους, η οξειδωτική απαμίνωση μέσω DAO είναι η κυρίαρχη καταβολική οδός με το IMAA ως τον κύριο μεταβολίτη των ούρων [18].

Η διαμινοξειδάση είναι μια αμινοοξειδάση που περιέχει χαλκό και ένα από τα δύο ένζυμα ικανά να απενεργοποιούν την ισταμίνη [32]. Σε επιλεγμένους ιστούς, κυρίως στο λεπτό έντερο και στα εγγύς σωληναριακά κύτταρα του νεφρού, το DAO εντοπίζεται σε κακώς καθορισμένες ενδοκυτταρικές κοκκιώδεις δομές και συνδέεται εξωκυτταρικά με πρωτεογλυκάνες θειικής ηπαράνης, ενώ το HNMT υπάρχει μόνο στο κυτταρόπλασμα [33, 34]. Η έκφραση του HNMT είναι ευρέως διαδεδομένη σε όλο το σώμα, με υψηλότερα επίπεδα να βρίσκονται στο κεντρικό νευρικό σύστημα, στην ουροδόχο κύστη, στην καρδιά, στα νεφρά, στο ήπαρ, στους πνεύμονες και στον λιπώδη ιστό.

Μετά την αναστολή του DAO με χρήση αμινογουανιδίνης, τα πρόβατα εμφάνισαν εκτεταμένα κλινικά συμπτώματα τοξικότητας ισταμίνης μετά από από του στόματος πρόκληση ισταμίνης σε σύγκριση με μάρτυρες χωρίς προ-αγωγή με αμινογουανιδίνη [35]. Ένα παρόμοιο πείραμα σε χοίρους οδήγησε σε σοβαρή νοσηρότητα και θνησιμότητα σε ζώα που υποβλήθηκαν σε προηγούμενη θεραπεία με αμινογουανιδίνη και στη συνέχεια προκλήθηκαν με από του στόματος ισταμίνη [36]. Οι μέσες συγκεντρώσεις ισταμίνης στο πλάσμα αυξήθηκαν 20- φορές σε χοίρους με αναστολή DAO. Η θεραπεία αρουραίων με αμινογουανιδίνη ακολουθούμενη από από του στόματος πρόκληση ισταμίνης αύξησε το IMAA στα ούρα και μείωσε τη συγκέντρωση ισταμίνης κατά περίπου πέντε φορές [37]. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι το DAO παίζει κρίσιμο ρόλο στην αποικοδόμηση της εξωγενούς ισταμίνης που χορηγείται από το στόμα.

Σε ποντίκια, η θεραπεία με αμινογουανιδίνη αύξησε έντονα τις συγκεντρώσεις ισταμίνης στο έντερο μετά από ενδοφλέβια πρόκληση ισταμίνης [30]. Ωστόσο, η αμινογουανιδίνη δεν είναι ένας συγκεκριμένος αναστολέας DAO, αλλά μπλοκάρει επίσης και τα τρία ένζυμα NOS και φαίνεται να εμποδίζει τη μεταφορά της ισταμίνης του αίματος στους ιστούς [38, 39]. Η χορήγηση της πυρηναμίδης, ενός ανταγωνιστή του υποδοχέα ισταμίνης 2, έδειξε επιζήμια αποτελέσματα με αυξημένη θνησιμότητα σε ένα μοντέλο κυκλοφορικού σοκ σε αρουραίους. Ωστόσο, την ίδια στιγμή, δημοσιεύτηκε ότι η πηγήαμίδη είναι ένας ισχυρός αναστολέας DAO [40, 41]. Στους σκύλους, η πυρηναμίδη προκάλεσε 17-πλάσια αύξηση στη μέση συγκέντρωση ισταμίνης στο πλάσμα και έντονη μείωση της μέσης αρτηριακής πίεσης [42]. Το αποτέλεσμα πιστεύεται ότι οφείλεται σε πιθανή ενεργοποίηση μαστοκυττάρων.

Ομοίως, ο ρόλος του HNMT μελετήθηκε χρησιμοποιώντας μεθυλισταμίνη ως αναστολέα HNMT, αλλά η μεθυλ-ισταμίνη είναι επίσης ένα εξαιρετικό υπόστρωμα για το DAO [43]. Η αμοδιακίνη και η κινακρίνη είναι ισχυροί αναστολείς HNMT [44–46] αλλά αναστέλλουν επίσης την DAO με ανασταλτική συγκέντρωση 50 τοις εκατό (IC50) περίπου 500 nM [47, αδημοσίευτα δεδομένα]. Ως εκ τούτου, τα δεδομένα που προέρχονται από αναστολείς, οι οποίοι χρησιμοποιούνται συχνά σε υψηλές συγκεντρώσεις, πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή, επειδή γνωστές και άγνωστες επιδράσεις εκτός στόχου είναι πιθανές και μπορούν να παραμορφώσουν σημαντικά τη φυσιολογική συνάφεια των in vivo μελετών.

Οι μεταβολικές μελέτες μπορεί να παρέχουν κάποια ένδειξη της σημασίας των δύο ενζύμων στην αποικοδόμηση της ισταμίνης, αλλά ο καταβολισμός της ισταμίνης θα μπορούσε να αποσυνδεθεί από φυσιολογικές ή παθοφυσιολογικές επιδράσεις. Οι διαμερισματικές συγκεντρώσεις ισταμίνης μπορεί να είναι κρίσιμες και ο μεταβολισμός μπορεί να είναι κατάντη.

Ως εκ τούτου, αποφασίσαμε να χρησιμοποιήσουμε το ποντίκι DAO knock-out (KO) για να μελετήσουμε το ρόλο του DAO στην αποικοδόμηση της εξωγενούς ισταμίνης. Ένας δεύτερος βασικός στόχος ήταν η ανάπτυξη ενός μοντέλου ποντικού με αυξημένη ευαισθησία στην ισταμίνη για να μπορέσουμε να μελετήσουμε καλύτερα τον ρόλο της ισταμίνης σε διάφορα γενετικά μεταλλαγμένα στελέχη και να ελέγξουμε την αποτελεσματικότητα του ανασυνδυασμένου ανθρώπινου DAO σε ένα μοντέλο πρόκλησης ισταμίνης.

Κάψουλες Cistanche

Υλικό και μέθοδοι

Ζωικά μοντέλα

Τα πειράματα διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ποντίκια KO ηλικίας 10–{{{18- εβδομάδων C57BL6/J Aoc1tm1b(EUCOMM)Hmgu (DAO) και γέννες άγριου τύπου (WT). Τα ετερόζυγα έμβρυα παρασχέθηκαν από το European Mouse Mutant Archive, Μόναχο, Γερμανία, και εμφυτεύτηκαν σε ψευδοεγκύους ποντικούς C57BL6/N. Τα ετερόζυγα ποντίκια απόγονοι C57BL6/J επιβεβαιώθηκαν χρησιμοποιώντας PCR (βλ. Διαδικτυακές πηγές) και χρησιμοποιήθηκαν περαιτέρω για την αναπαραγωγή ποντικών DAO KO στο Τμήμα Βιοϊατρικής Έρευνας, Ιατρικό Πανεπιστήμιο της Βιέννης, με το ζωικό πρωτόκολλο GZ 66.009/{ {14}}WF/V/3b/2016. Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο GZ 66.009/0258- V/3b/2019. Τα πειραματικά πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από το Υπουργείο Παιδείας, Επιστήμης και Έρευνας της Αυστρίας. Τα ζώα διατηρήθηκαν σε κύκλο ημέρας-νύχτας 12:12 ωρών στους 22 βαθμούς με νερό και τροφή κατά βούληση. Για μη επεμβατικές μετρήσεις θερμοκρασίας, ένας αναμεταδότης (IPTT-300, BioMedic Data Systems Inc., ΗΠΑ) εμφυτεύτηκε υποδορίως 2 εβδομάδες πριν από το πείραμα χρησιμοποιώντας βραχεία αναισθησία με ισοφλουράνιο. Ο αναμεταδότης μετρά τη θερμοκρασία τρεις φορές μέσα σε ένα δευτερόλεπτο και ο μέσος όρος αυτών των μετρήσεων καταγράφεται από το εξωτερικό του κλωβού χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη. Αυτή η μέση τιμή χρησιμοποιείται στη συνέχεια για περαιτέρω υπολογισμούς. Αυτοί οι υποδόριοι αναμεταδότες χρησιμοποιούνται για την αποφυγή υπερβολικού χειρισμού των ζώων και για την πρόληψη τραυματισμού από την επανειλημμένη εισαγωγή ανιχνευτών θερμοκρασίας του ορθού [48]. Σε πολλά είδη ζώων, συμπεριλαμβανομένων των τρωκτικών, η χορήγηση ισταμίνης έχει αποδειχθεί ότι μειώνει τη θερμοκρασία του σώματος και θεωρείται η τελευταία λέξη της τεχνολογίας για τις επιδράσεις της ισταμίνης [49, 50]. Κατά τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης, τα κλινικά συμπτώματα αξιολογήθηκαν από έναν έμπειρο κτηνίατρο σύμφωνα με μια δημοσιευμένη βαθμολογία υπερευαισθησίας [51]. Η βαθμολογία κυμαινόταν από 0 (χωρίς συμπτώματα) έως 1 (τρίψιμο και ξύσιμο κεφαλιού και μύτης), 2 (μειωμένη δραστηριότητα με αυξημένο αναπνευστικό ρυθμό και/ή μειωμένη δραστηριότητα, πρήξιμο γύρω από το στόμα και τα μάτια), 3 (επιπόλαια αναπνοή, κυάνωση γύρω από την ουρά και στόμα, συριγμός) και 4 (καμία δραστηριότητα μετά από ώθηση ή τρόμο και σπασμούς). Η βαθμολογία 5 υποδηλώνει θάνατο. Όλα τα πειράματα πρόκλησης ξεκίνησαν μεταξύ 9:00 και 11:00 π.μ. για να αποφευχθούν οι παραλλαγές που εξαρτώνται από την ώρα της ημέρας [52].

Γενική πειραματική ρύθμιση

Όλες οι ουσίες εφαρμόστηκαν σε όγκο 5 ml/kg. Η προπρανολόλη (P0884, Sigma-Aldrich, Αυστρία) διαλύθηκε σε αλατούχο διάλυμα και εφαρμόστηκε ενδοπεριτοναϊκά (IP) σε συγκέντρωση 2 mg/kg 20 λεπτά πριν από την πρόκληση με ισταμίνη για να αυξηθεί η ευαισθησία στην ισταμίνη [53]. Διυδροχλωρική ισταμίνη (Η7250, Sigma-Aldrich, Αυστρία) διαλύθηκε σε διπλά αποσταγμένο (dd) Η2Ο και αραιώθηκε περαιτέρω σε αλατούχο διάλυμα. Όλες οι αναφερόμενες συγκεντρώσεις ισταμίνης αναφέρονται στη βάση ισταμίνης (111,15 Dalton).

1. Από του στόματος και υποδόρια χορήγηση ισταμίνης

Τα ποντίκια έμειναν νηστικά για 60 λεπτά συνολικά. Μετά από 40 λεπτά νηστείας, χορηγήθηκε προπρανολόλη και 20 λεπτά αργότερα εφαρμόστηκε ισταμίνη σε συγκέντρωση 30 mg/kg per os (po) χρησιμοποιώντας στοματικό καθετήρα. Για την υποδόρια πρόκληση (sc) ποντίκια μοντέλου είτε έλαβαν ισταμίνη σε συγκέντρωση 50 mg/kg χωρίς προπρανολόλη ή 5 mg/kg με προπρανολόλη. Για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων ισταμίνης στο πλάσμα ένα υποσύνολο ποντικών αναισθητοποιήθηκε σε διαφορετικά χρονικά σημεία μετά την πρόκληση ισταμίνης χρησιμοποιώντας 10 mg/kg ξυλαζίνης και 100 mg/kg κεταμίνης. Το κιτρικό πλάσμα συλλέχθηκε από αναισθητοποιημένους ποντικούς χρησιμοποιώντας καρδιακή παρακέντηση. Χρησιμοποιήθηκαν ένα έως πέντε ποντίκια ανά χρονικό σημείο και γονότυπο.

2. Ταυτόχρονη αναστολή της ισταμίνης-Ν-μεθυλοτρανσφεράσης (HNMT)

Η μετοπίνη (Μ338835, Toronto Research Chemicals, Καναδάς) διαλύθηκε σε γαλακτικό οξύ 10 τοις εκατό (L1875, Sigma-Aldrich, Αυστρία), αραιώθηκε περαιτέρω σε αλατούχο διάλυμα και χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκώς στα 3 mg/kg 1 ώρα πριν από την πρόκληση με 5 mg/kg ισταμίνης. Η τακρίνη (A79922, Sigma-Aldrich, Αυστρία) διαλύθηκε σε ddH2O, αραιώθηκε περαιτέρω σε αλατούχο διάλυμα και στη συνέχεια 10 mg/kg εφαρμόστηκαν ενδοπεριτοναϊκώς 1 ώρα πριν από 25 mg/kg ισταμίνης υποδ και 2 mg/kg προπρανολόλης. Μια συγκέντρωση 2 mg/kg Tacrine ip χρησιμοποιήθηκε σε συνδυασμό με 30 mg/kg ισταμίνης po σε συνδυασμό με 2 mg/kg προπρανολόλης.

Τυποποιημένο Cistanche

3. Επαγωγή οξείας νεφρικής βλάβης (ΑΚΙ) πριν από την πρόκληση ισταμίνης

Folic acid (F7876, Sigma-Aldrich, Austria) was reconstituted in ddH2O, further diluted in saline, and applied i.p. at a concentration of 100 mg/kg 48 h before challenge with 5 mg/kg s.c. histamine and 2 mg/kg propranolol. The degree of acute kidney injury was estimated using plasma creatinine values. As a cut-off for inclusion, a creatinine value of at least threefold above the mean baseline value was used as described [54]. Baseline plasma creatinine concentrations of 0.11 and 0.17 mg/dl were measured in two mice and therefore an inclusion cut-off of>Επιλέχθηκαν 42 mg/dl. Το κιτρικό πλάσμα που ελήφθη μέσω καρδιακής παρακέντησης χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της κρεατινίνης χρησιμοποιώντας έναν αναλυτή Cobas (αναλυτής Cobas C311, Roche, Ελβετία). Για να προσδιοριστούν οι συγκεντρώσεις ισταμίνης στο πλάσμα σε διαφορετικά χρονικά σημεία κατά τη διάρκεια της πρόκλησης υποδοριακής ισταμίνης με προπρανολόλη σε οξεία νεφρική βλάβη, δύο έως τέσσερα ποντίκια ανά χρονικό σημείο αναισθητοποιήθηκαν και το κιτρικό πλάσμα συλλέχθηκε με παρακέντηση καρδιάς.

4. Διάσωση DAO μετά από χορήγηση ισταμίνης

Ανασυνδυασμένο ανθρώπινο (rh)DAO με μεταλλαγμένο μοτίβο δέσμευσης ηπαρίνης (που περιγράφεται στο Gludovacz et al. [55]) εφαρμόστηκε ενδοφλεβίως (iv) σε συγκέντρωση 4 mg/kg 40 λεπτά πριν από την εφαρμογή 2 mg/kg προπρανολόλης και 60 λεπτά πριν από την πρόκληση με 5 mg/kg sc ισταμίνης.

Για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων ισταμίνης και DAO στο πλάσμα, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με 4 mg/kg DAO είτε με ρυθμιστικό διάλυμα iv 60 λεπτά πριν από την πρόκληση με 5 mg/kg ισταμίνης σε συνδυασμό με 2 mg/kg προπρανολόλης. Τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν σε διαφορετικά χρονικά σημεία. Το κιτρικό πλάσμα συλλέχθηκε χρησιμοποιώντας καρδιακή παρακέντηση από δύο έως τρία ποντίκια ανά χρονικό σημείο. Το αίμα συλλέχθηκε σε 3,8 τοις εκατό κιτρικό νάτριο και ένα μέρος αναμίχθηκε αμέσως με διμιναζένιο-οξικό (D7770, Sigma-Aldrich, Αυστρία) καταλήγοντας σε μια τελική συγκέντρωση 10 μΜ για την αναστολή της αποικοδόμησης της ισταμίνης από το rhDAO.

Ανάλυση γονιδιακής έκφρασης

Τα δείγματα ιστών καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο και λήφθηκε ολικό RNA χρησιμοποιώντας το κιτ FavorPrep Tissue Total RNA (FATRK001, Favorgen, Taiwan) μετά από ομογενοποίηση ιστού χρησιμοποιώντας σωλήνες λύσης (Lysing Matrix E, MP Biomedicals, Γερμανία) σε ένα Precellys 24 (Bertin Instruments, Γαλλία). Η αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ σύνθεσης cDNA του OneScript Plus (G236, ABM Good, Καναδάς). Για ποσοτική PCR χρησιμοποιήθηκε BrightGreen Express 2× Mastermix (MasterMix-EL, ABM Good, Canada). Οι εκκινητές που εκτείνονται σε εξόνια για DAO, HNMT και αποκαρβοξυλάση ιστιδίνης (HDC) σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό Primer3 (Πίνακας Πόρων Διαδικτύου 1). Το γονίδιο housekeeping RPLP0 χρησιμοποιήθηκε για κανονικοποίηση [56].

Western blot

Για ανάλυση western blot, τα κατεψυγμένα δείγματα ιστού λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού K 20 mM (pH 7,2) χρησιμοποιώντας σωλήνες λύσης (σωλήνες Lysing Matrix E, MP Biomedicals, Γερμανία) σε Precellys 24 (Bertin Instruments, Γαλλία) . Η συγκέντρωση ολικής πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ QuantiPro BCA Assay Kit (QPBCA-1KT, Sigma, Αυστρία). Για ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου, 40 μg ολικής πρωτεΐνης και 40 ng ανασυνδυασμένου DAO ποντικού (που παρέχεται από το EG, University of Natural Resources and Life Sciences, Βιέννη, Αυστρία, χρησιμοποιώντας μεθόδους που περιγράφονται στο [57]) διαχωρίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα πήκτωμα Tris-glycine 12 τοις εκατό ( 4561043, Bio-Rad, Η.Π.Α.). Ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ABP1 (sc-515908, Santa Cruz, ΗΠΑ) χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση DAO σε συγκέντρωση 0,4 μg/ml και ένα μονοκλωνικό αντίσωμα GAPDH (2118, Cell Signal Technology, USA) χρησιμοποιήθηκε ως φόρτωση έλεγχος σε αραίωση 1:2000. Το μονοκλωνικό αντίσωμα IgG-HRP ποντικού (Α2554, Sigma Aldrich, Αυστρία) και το αντίσωμα IgG-HRP κατά κουνελιού (Α0545, Sigma Aldrich, Αυστρία) χρησιμοποιήθηκαν ως αντισώματα ανίχνευσης σε αραίωση 1:40.000. Οι εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας το υπόστρωμα Clarity Max Western ECL (1705062, BioRad, USA) σε ένα σύστημα απεικόνισης ChemiDoc (17001401, Bio-Rad, USA).

Cistanche tubulosa

Μέτρηση δραστηριότητας DAO

Η δράση της διαμινοξειδάσης διαφορετικών ομογενοποιημένων ιστών και η αναστολή από το μεθοπρένιο και την τακρίνη μετρήθηκαν όπως περιγράφεται [58]. Τα κατεψυγμένα δείγματα ιστών λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού Κ 20 mM (ρΗ 7,2) χρησιμοποιώντας σωλήνες λύσης σε Precellys 24. Η συνολική συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ QuantiPro BCA Assay Kit και 500 μg ολικών πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων διαφορετικών ιστών επωάστηκαν για 120 λεπτά με ορθο-αμινοβενζαλδεΰδη (οΑΒΑ) και είτε ddH2O είτε 200 μΜ πτωματερίνη (CAD). Η δέλτα{11}}πιπεριδίνη, το προϊόν αυτοκυκλοποίησης του CAD μετά από απαμίνωση από DAO, συμπυκνώνεται με oABA σχηματίζοντας ένα φθοροφόρο, το οποίο μπορεί να μετρηθεί σε EX440/30 και EM620/40 nm. Για τον προσδιορισμό της αναστολής DAO, το rhDAO προεπωάστηκε με μεθοπρένιο και τακρίνη σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για 30 λεπτά και μετρήθηκε όπως περιγράφεται παραπάνω.

Για τον προσδιορισμό της δραστικότητας DAO, ομογενοποιήματα ιστού με συγκέντρωση πρωτεΐνης 200 μg/ml αναμίχθηκαν με HRP (τελική συγκέντρωση 1,2 μg/ml, P6782, Sigma-Aldrich, Αυστρία) και αμινογουανιδίνη (τελική συγκέντρωση 10 μΜ, 396494, Sigma-Aldrich , Αυστρία) ή ρυθμιστικό διάλυμα Κ-φωσφορικού (ρΗ 7,2) προστέθηκε και επωάστηκε για 15 λεπτά στους 37 βαθμούς. Προστέθηκε Amplex red™ (τελική συγκέντρωση 100 μΜ, Α12222, Thermo Scientific, USA) και ξεκίνησαν οι αντιδράσεις μέσω της προσθήκης 200 μΜ τελικής συγκέντρωσης πουτρεσκίνης (51799, Sigma-Aldrich, Αυστρία). Ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού καλίου (ρΗ 7,2) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Τα δείγματα επωάστηκαν στους 37 βαθμούς και μετρήθηκαν κάθε 10 λεπτά για 120 λεπτά χρησιμοποιώντας EX550 και EM590 nm. Το ειδικό σήμα DAO υπολογίστηκε αφαιρώντας δείγματα με αμινογουανιδίνη, έναν ισχυρό και μη αναστρέψιμο αναστολέα DAO, από δείγματα με ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού Κ.

Για μετρήσεις δραστικότητας DAO στο πλάσμα σε ποντικούς που έλαβαν ενδοφλέβια Rhoda χρησιμοποιήθηκε ένας υβριδικός προσδιορισμός χρησιμοποιώντας ένα μονοκλωνικό αντίσωμα από τον κλώνο κυτταρικής σειράς υβριδώματος anti-DAO 8/119 που παρέχεται από τον καθηγητή Quaroni (Πανεπιστήμιο Cornell, Ιθάκη, Νέα Υόρκη) και Amplex red™. Μαύρες πλάκες φθορισμού υψηλής δέσμευσης πρωτεΐνης (475.515, Thermo Scientific Nunc, Δανία) επικαλύφθηκαν με 100 μl 5 μg/ml αντι-DAO 8/119 σε ρυθμιστικό διάλυμα ανθρακικού-διττανθρακικού 50 mM ( C3041, Sigma-Aldrich, Αυστρία), επωάστηκε όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς και στη συνέχεια μπλοκαρίστηκε με 120 μl 1 τοις εκατό BSA (Α4503, Sigma-Aldrich, Αυστρία) για 50 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά τον αποκλεισμό 100 μl δειγμάτων πλάσματος και προτύπων, προηγουμένως αραιωμένα 1:10 σε PBS προστέθηκαν και επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Στη συνέχεια προστέθηκαν 90 μl υπεροξειδάσης χρένου (τελική συγκέντρωση 1,2 μg/ml) και Amplex red™ (τελική συγκέντρωση 100 μΜ) σε PBS με 0,1 τοις εκατό BSA και οι αντιδράσεις ξεκίνησαν με προσθήκη 10 μΙ πουτρεσκίνης (τελική συγκέντρωση 200 μΜ) ή PBS. Ο φθορισμός μετρήθηκε στους 37 βαθμούς κάθε 5 λεπτά για 120 λεπτά χρησιμοποιώντας EX550 και EM590 nm. Το διάλυμα πλύσης ήταν 0,1 τοις εκατό Tween-20 (Ρ1379, Sigma-Aldrich, Αυστρία) σε PBS. Μια τυπική καμπύλη 3–30 ng/ml rhDAO παρασκευάστηκε σε πλάσμα ποντικού. Όλες οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν.

Μετρήσεις ισταμίνης

Το κιτρικό πλάσμα που περιείχε 10 μΜ διμιναζένιο-οξικό (D7770, Sigma-Aldrich, Αυστρία) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση των συγκεντρώσεων ισταμίνης χρησιμοποιώντας το δυναμικό κιτ ομογενούς φθορισμού με χρόνο ανάλυσης ισταμίνης (HTRF) (62HTMDPET, Cisbio, France). Το κιτ χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες που παρέχονται από τον κατασκευαστή. Μια πρότυπη καμπύλη ισταμίνης σε συνενωμένο πλάσμα ποντικών C57Bl/6J χρησιμοποιήθηκε για ποσοτικοποίηση. Όλες οι συγκεντρώσεις ισταμίνης αναφέρονται στη βάση ισταμίνης και όλες οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν.

Στατιστική ανάλυση

Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας GraphPad Prism Έκδοση 8.4.0. (GraphPad Software Inc. Σαν Ντιέγκο). Η στατιστική σημασία για τις διαφορές στη δραστηριότητα DAO σε ομογενοποιήματα ιστού υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας μια ANOVA επαναλαμβανόμενων μετρήσεων με διόρθωση Geisser-Greenhouse. Η περιοχή κάτω από τις καμπύλες (AUC) από τις μεμονωμένες μετρήσεις της θερμοκρασίας του σώματος του πυρήνα και τις κλινικές βαθμολογίες κατά τη διάρκεια ενός πειράματος συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίπλευρες, μη ζευγαρωμένες δοκιμές t χωρίς διόρθωση Welch. Οι συγκεντρώσεις ισταμίνης στο πλάσμα μεταξύ των ομάδων συγκρίθηκαν με αμφίδρομη ANOVA. Για σύγκριση των συγκεντρώσεων ισταμίνης στο πλάσμα μετά την πρόκληση sc μεταξύ ποντικών με διαφορετικούς γονότυπους, με ή χωρίς οξεία νεφρική βλάβη και που έλαβαν είτε DAO είτε ρυθμιστικό, τα δεδομένα ομαδοποιήθηκαν σε διαστήματα για να ληφθούν υπόψη οι τιμές που λείπουν σε μεμονωμένες υποομάδες (γονότυποι: 5, 1{{{ 14}}, 20, 30, 40, 45, 60 λεπτά· οξεία νεφρική βλάβη: 0, 10–15, 20–30, 40–45 και 60 λεπτά, DAO: 0, 10, 30 και 45 min). Μια διπλής όψης, μη ζευγαρωμένη t-test χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο των διαφορών στις συγκεντρώσεις κρεατινίνης πλάσματος από ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με και χωρίς 100 mg/kg φυλλικού οξέος. Η στατιστική σημασία ορίστηκε ως p<0.05 in all tests.

Εκχύλισμα Cistanche

συμπέρασμα

Τα ποντίκια DAO KO ουσιαστικά δεν μπορούσαν να διακριθούν από τα ποντίκια WT χρησιμοποιώντας εξωγενείς στοματικές και υποδόρια προκλήσεις ισταμίνης. Η εμπλοκή του HNMT στην απενεργοποίηση της ισταμίνης που οδηγεί σε μειωμένη τοπολογία συμπτωμάτων είναι στην καλύτερη περίπτωση μέτρια, αλλά τα αποτελέσματα από τη φαρμακολογική αναστολή μπορεί να θεωρηθούν προκαταρκτικά. Τα δεδομένα που χρησιμοποιούν την αναστολή του HNMT με το μεθοπρένιο έδειξαν μια τάση προς τη συμμετοχή του ενδογενούς DAO στην απενεργοποίηση της ισταμίνης. Οι νεφροί εμπλέκονται στην ταχεία εξαγωγή της ισταμίνης από την κυκλοφορία, αλλά τα επταπλάσια αυξημένα ποντίκια 509 οξειδάσης διαμίνης νοκ-άουτ δεν είναι υπερευαίσθητα στην από του στόματος ή υποδόρια χορήγηση… 1 3 οι συγκεντρώσεις ισταμίνης δεν μεταφράστηκαν σε υπερβολικό φαινότυπο που μετρήθηκε με τη χρήση κεντρικής θερμοκρασίας απώλεια ως φαινοτυπική ανάγνωση. Η χρήση ανασυνδυασμένου ανθρώπινου ή ποντικού DAO μπορεί να υποστηρίξει ή να βοηθήσει στην απόρριψη της εμπλοκής της ισταμίνης σε διάφορα ζωικά μοντέλα με υποψία αποκοκκίωσης μαστοκυττάρων που συνοδεύεται από ταχεία και μαζική απελευθέρωση ισταμίνης ή με ενισχυμένη επαγωγή του ενζύμου αποκαρβοξυλάση ιστιδίνης που ακολουθείται από την απελευθέρωση πρόσφατα συντεθειμένου ισταμίνη για ώρες. Η αναπαραγωγή ενός πραγματικού διπλού ποντικιού KO με ανενεργά αντίγραφα τόσο του γονιδίου DAO όσο και του γονιδίου HNMT, εάν είναι βιώσιμο, ίσως αξίζει να μελετηθεί. Τα μεμονωμένα ποντίκια KO είτε DAO είτε HNMT δεν εμφανίζουν εμφανείς φαινότυπους. [αδημοσίευτα δεδομένα, 31] Ομοίως, η δοκιμή της συμμετοχής των δύο κύριων μεταφορέων ισταμίνης, OCT2 και OCT3, σε φαινοτυπικές αλλοιώσεις που προκαλούνται από ισταμίνη μπορεί να μας επιτρέψει να κατανοήσουμε καλύτερα τους μηχανισμούς πίσω από την ανάπτυξη συμπτωμάτων που προκαλούνται από ισταμίνη σε τρωκτικά και κατά συνέπεια δυνητικά και στον άνθρωπο. Παρά τις σημαντικές ερευνητικές προσπάθειες για περισσότερα από 100 χρόνια από την ανακάλυψή του, έχουμε ακόμη δρόμο να διανύσουμε προτού κατανοήσουμε αληθινά τον καταβολισμό της ισταμίνης.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Boehm T, Ristl R, Joseph S, et al. Διαταραχές του μεταβολισμού και του λιπιδίου κατά τη διάρκεια ενός σοβαρού συμβάντος ενεργοποίησης των μαστοκυττάρων σε ασθενή με άτονη συστηματική μαστοκυττάρωση. J Allergy Clin Immunol. 2021. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2021.03.043. 2. Packard KA, Khan MM. Επιδράσεις της ισταμίνης στο Th1/Th

2 ισορροπία κυτοκινών. Int Immunopharmacol. 2003; 3:909-20. https://doi.org/ 10.1016/S1567-5769(02)00235-7.

3. Hesterberg R, Sattler J, Lorenz W, et αϊ. Περιεκτικότητα σε ισταμίνη, δραστηριότητα οξειδάσης διαμίνης και δραστηριότητα μεθυλτρανσφεράσης ισταμίνης σε ανθρώπινους ιστούς: γεγονός ή φαντασία; Ενέργειες πρακτόρων. 1984; 14:325– 34. https://doi.org/10.1007/BF01973821.

4. Dyer J, Warren Κ, Merlin S, et αϊ. Μέτρηση ισταμίνης πλάσματος: περιγραφή βελτιωμένης μεθόδου και φυσιολογικές τιμές. J Allergy Clin Immunol. 1982; 70:82-7. https://doi.org/10.1016/ 0091-6749(82)90233-0.

5. Pollock I, Murdoch RD, Lessof MH. Ισταμίνη πλάσματος και κλινική ανοχή στην εγχυόμενη ισταμίνη σε φυσιολογικά, ατοπικά και κνιδωτικά άτομα. Ενέργειες πρακτόρων. 1991; 32:359-65. https://doi.org/10. 1007/BF01980899.

6. Liu J, Wang L, Hu W, et αϊ. Ανάπτυξη μιας μεθόδου UHPLC–MS/MS για τον προσδιορισμό της ισταμίνης του πλάσματος σε διάφορα είδη θηλαστικών. J Chromatogr B. 2014;971:35–42. https:// doi.org/10.1016/j.jchromb.2014.08.043.

7. Xu Y, Kang Τ, Dou D, et al. Η αξιολόγηση και η βελτιστοποίηση του ζωικού μοντέλου για αναφυλακτοειδή αντίδραση που προκαλείται από ενέσεις. Asian Pac J Allergy Immunol. 2015; 33:330–8. https://doi.org/ 10.12932/AP0619.33.4.2015.

8. Maintz L, Novak N. Ισταμίνη και δυσανεξία στην ισταμίνη. Am J Clin Nutr. 2007;85:1185–96. https://doi.org/10.1093/ajcn/85.5. 1185.

9. Ginsburg R, Bristow MR, Kantrowitz Ν, et αϊ. Πρόκληση ισταμίνης κλινικού σπασμού της στεφανιαίας αρτηρίας: επιπτώσεις σχετικά με την παθογένεση της παραλλαγής στηθάγχης. Am Heart J. 1981; 102:819–22. https://doi.org/10.1016/0002-8703(81) 90030-2.

10. O'Mahony L, Akdis M, Akdis CA. Ρύθμιση της ανοσοαπόκρισης και φλεγμονής από υποδοχείς ισταμίνης και ισταμίνης. J Allergy Clin Immunol. 2011; 128:1153–62. https://doi. org/10.1016/j.jaci.2011.06.051.

11. Thurmond RL, Gelfand EW, Dunford PJ. Ο ρόλος των υποδοχέων ισταμίνης Η1 και Η4 στην αλλεργική φλεγμονή: η αναζήτηση νέων αντιισταμινικών. Nat Rev Drug Discov. 2008; 7:41–53. https://doi.org/10.1038/nrd2465.

12. Pericin C, Thomann P. Σύγκριση της οξείας τοξικότητας της κλιοκινόλης, της ισταμίνης και του χλωροφορμίου σε διαφορετικά στελέχη ποντικών. Στο: Chambers PL, Günzel P, συντάκτες. Μηχανισμός τοξικής δράσης σε ορισμένα όργανα στόχους. Βερολίνο: Springer; 1979. Σελ. 371–3.

13. Lamanna C, Ross HE. Σχέση θανατηφόρου τοξικής δόσης με το σωματικό βάρος του ποντικιού. Toxicol Appl Pharmacol. 1968, 13:307-15. https://doi.org/10.1016/0041-008X(68)90104-Χ.

14. Van der Linden P, Hack C, Poortman J, et al. Η πρόκληση με τσίμπημα εντόμου σε 138 ασθενείς: σχέση μεταξύ της κλινικής σοβαρότητας της αναφυλαξίας και της ενεργοποίησης των μαστοκυττάρων. J Allergy Clin Immunol. 1992; 90:110-8. https://doi.org/10.1016/S0091-6749(06) 80017-5.

15. Williams WR, Shale DJ. In vitro μετατόπιση αγγειοδραστικών μεσολαβητών από πρωτεΐνες πλάσματος: ένας πιθανός μηχανισμός για ψευδο-αλλεργικές αντιδράσεις σε φάρμακα νευρομυϊκού αποκλεισμού. Br J Anaesth. 1992; 69:508-10. https://doi.org/10.1093/bja/69.5.508.

16. Sasaki Υ, Iwama R, Sato Τ, et αϊ. Εκτίμηση του ρυθμού σπειραματικής διήθησης σε ποντίκια με τις αισθήσεις τους χρησιμοποιώντας μια απλοποιημένη εξίσωση. Physiol Rep. 2014;2:e12135. https://doi.org/10.14814/phy2.12135.

17. Helander CG, Lindell SE, Westling H. Η νεφρική αφαίρεση της C14-επισημασμένης ισταμίνης από το αίμα στον άνθρωπο. Scand J Clin Lab Investig. 1965. https://doi.org/10.1080/00365516509083360.

18. Sjaastad O, Sjaastad ÖV. Καταβολισμός της από του στόματος χορηγούμενης l4C-ισταμίνης στον άνθρωπο. Acta Pharmacol Toxicol. 1974; 34:33-45. https://doi.org/10.1111/j.1600-0773.1974.tb02011.x.

19. Schayer RW. Ο μεταβολισμός της ισταμίνης σε διάφορα είδη. Br J Pharm Chemoth. 1956, 11:472-3. https://doi.org/10.1111/j. 1476-5381.1956.tb00020.χ.

20. Snyder SH, Axelord J, Bauer H. Η μοίρα της C14-Ισταμίνης σε ζωικούς ιστούς. J Pharmacol Exp Ther. 1964; 144:373-9.

21. Rose B, Browne JSL. Η κατανομή και ο ρυθμός εξαφάνισης της ενδοφλέβιας ένεσης ισταμίνης στον αρουραίο. Am J Physiol. 1938; 124:412-20. https://doi.org/10.1152/ajplegacy.1938.124.2. 412.

22. Koepsell H, Lips K, Volk C. Polyspecifc οργανικοί μεταφορείς κατιόντων: δομή, λειτουργία, φυσιολογικοί ρόλοι και βιοφαρμακευτικές επιπτώσεις. Pharm Res. 2007; 24:1227–51. https://doi.org/ 10.1007/s11095-007-9254-z.

23. Lantoine F, Iouzalen L, Devynck ΜΑ, et αϊ. Η παραγωγή νιτρικού οξειδίου σε ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα που διεγείρονται από ισταμίνη απαιτεί εισροή Ca2 συν. Biochem. 1998; 330:695-9. https://doi.org/10.1042/ bj3300695.

24. Mikelis CM, Simaan M, Ando K, et al. Το RhoA και το ROCK μεσολαβούν σε αγγειακή διαρροή που προκαλείται από ισταμίνη και αναφυλακτικό σοκ. Nat Commun. 2015; 6:6725. https://doi.org/10.1038/ncomms7725.

25. Ashina Κ, Tsubosaka Υ, Nakamura Τ, et αϊ. Η ισταμίνη επάγει την αγγειακή υπερδιαπερατότητα αυξάνοντας τη ροή του αίματος και τη διαταραχή του ενδοθηλιακού φραγμού in vivo. PLoS ONE. 2015; 10: e0132367. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132367.

26. Schömig E, Lazar A, Gründemann D. Extraneuronal monoamine transporter and organic cation transporters 1 and 2: a review of transport efficiency. Στο: Sitte HH, Freissmuth M, συντάκτες. Μεταφορείς νευροδιαβιβαστών. Βερολίνο: Springer; 2006. Σελ. 151–80.

27. Ohtsu H. Πρόοδος στην έρευνα σημάτων αλλεργίας στα μαστοκύτταρα: ο ρόλος της ισταμίνης σε ανοσολογικές και καρδιαγγειακές παθήσεις και το σύστημα μεταφοράς της ισταμίνης στο κύτταρο. J Pharmacol Sci. 2008; 106:347-53. https://doi.org/10.1254/jphs.FM0070294.

28. Karjala SA, Turnquest B, Schayer RW. Μεταβολίτες στα ούρα της ραδιενεργής ισταμίνης. J Biol Chem. 1956; 219:9-12. https://doi. org/10.1016/S0021-9258(18)65762-Χ.

29. Schayer RW. Καταβολισμός φυσιολογικών ποσοτήτων ισταμίνης in vivo. Physiol Rev. 1959; 39:116–26. https://doi.org/10.1152/ physrev.1959.39.1.116.

30. Reilly MA, Schayer RW. Μελέτες in vivo για τον καταβολισμό της ισταμίνης και την αναστολή του. Br J Pharmacol. 1970; 38:478-89. https://doi. org/10.1111/j.1476-5381.1970.tb10590.x.

31. Naganuma F, Nakamura Τ, Yoshikawa Τ, et al. Η ισταμίνη Ν-μεθυλοτρανσφεράση ρυθμίζει την επιθετικότητα και τον κύκλο ύπνου-εγρήγορσης. Sci Rep. 2017; 7:15899. https://doi.org/10.1038/s41598-017-16019-8.

32. McGrath AP, Hilmer KM, Collyer CA, et αϊ. Δομή και αναστολή της ανθρώπινης διαμινοξειδάσης. Βιοχημεία. 2009; 48:9810-22. https://doi.org/10.1021/bi9014192.

33. Schwelberger HG. Ανάλυση ιστού και υποκυτταρικού εντοπισμού της οξειδάσης διαμίνης θηλαστικών με ομοεστιακή μικροσκοπία φθορισμού σάρωσης λέιζερ. Infamm Res. 1998; 47:60-1. https://doi.org/ 10.1007/s000110050273.

34. Nishibori Μ, Tahara Α, Sawada Κ, et αϊ. Νευρωνικός και αγγειακός εντοπισμός της Ν-μεθυλοτρανσφεράσης της ισταμίνης στο κεντρικό νευρικό σύστημα των βοοειδών. Eur J Neurosci. 2000; 12:415-24. https://doi.org/ 10.1046/j.1460-9568.2000.00914.x.

35. Sjaastad ÖV. Ενίσχυση από την αμινογουανιδίνη της ευαισθησίας των προβάτων στην ισταμίνη που χορηγείται από το στόμα. Επίδραση της αμινο-γουανιδίνης στην ουρική απέκκριση της ενδογενούς ισταμίνης. Exp Physiol. 1967; 52:319-30. https://doi.org/10.1113/expphysiol.1967.sp001 918.

36. Sattler J, Häfner D, Klotter HJ, et αϊ. Οι ισταμίνες που προκαλούνται από τα τρόφιμα ως επιδημιολογικό πρόβλημα: Αύξηση ισταμίνης στο πλάσμα και αιμοδυναμικές αλλοιώσεις μετά από χορήγηση ισταμίνης από το στόμα και αποκλεισμός της οξειδάσης της διαμίνης (DAO). Ενέργειες πρακτόρων. 1988; 23:361-5. https://doi.org/10.1007/BF02142588.

37. Bowman ΜΑ, Simell OG, Peck ΑΒ, et αϊ. Φαρμακοκινητική της χορήγησης αμινογουανιδίνης και επιδράσεις στη συχνότητα του διαβήτη σε μη παχύσαρκα διαβητικά ποντίκια. J Pharmacol Exp Ther. 1996; 279:790-4.

38. Matejovic M, Krouzecky Α, Martinkova V, et al. Επιλεκτική επαγώγιμη αναστολή συνθάσης νιτρικού οξειδίου κατά τη διάρκεια μακροχρόνιας υπερδυναμικής βακτηριαιμίας χοίρων. Αποπληξία. 2004; 21:458-65. https://doi. org/10.1097/00024382-200405000-00010.

39. Alderton WK, Cooper CE, Knowles RG. Συνθάσες μονοξειδίου του αζώτου: δομή, λειτουργία και αναστολή. Biochem J. 2001; 357:593-615. https://doi.org/10.1042/bj3570593.

40. Altura BM, Halevy S. Ευεργετικές και επιβλαβείς δράσεις των ανταγωνιστών των υποδοχέων ισταμίνης Η{1- και Η2-στο κυκλοφορικό σοκ. PNAS. 1978, 75:2941-4. https://doi.org/10.1073/pnas.75.6.2941.

41. Thomas LL, Bochner BS, Lichtenstein LM. Αναστολή της δραστικότητας της ισταμινάσης που προέρχεται από ανθρώπινα πολυμορφοπυρηνικά λευκοκύτταρα από ανταγωνιστές Η-2. Biochem Pharmacol. 1978; 27:2562-5. https:// doi.org/10.1016/0006-2952(78)90327-1.

42. Thermann Μ, Lorenz W, Schmal Α, et αϊ. Επίδραση των ανταγωνιστών των Η1-και των Η2-υποδοχέων στο κυκλοφορικό σύστημα και στις ενδογενείς συγκεντρώσεις ισταμίνης στο πλάσμα σε σκύλους. Ενέργειες πρακτόρων. 1977; 7:97-101. https://doi.org/10.1007/BF01964888.

43. Elmore BO, Bollinger JA, Dooley DM. Οξειδάση διαμίνης ανθρώπινου νεφρού: ετερόλογη έκφραση, καθαρισμός και χαρακτηρισμός. J Biol Inorg Chem. 2002; 7:565-79. https://doi.org/10. 1007/s00775-001-0331-1.

44. Duch DS, Bowers SW, Nichol CA. Αύξηση των επιπέδων ισταμίνης του εγκεφάλου από αναστολείς διαμινοπυριμιδίνης της Ν-μεθυλ τρανσφεράσης της ισταμίνης. Biochem Pharmacol. 1978, 27:1507–9. https://doi. org/10.1016/0006-2952(78){10}}.

45. Horton JR, Sawada Κ, Nishibori Μ, et αϊ. Δομική βάση για την αναστολή της Ν-μεθυλοτρανσφεράσης της ισταμίνης από διάφορα φάρμακα. J ΜοΙ ΒίοΙ. 2005; 353:334-44. https://doi.org/10.1016/j.jmb.2005. 08.040.

46. ​​Horton JR, Sawada Κ, Nishibori Μ, et αϊ. Δύο πολυμορφικές μορφές ανθρώπινης μεθυλοτρανσφεράσης ισταμίνης: δομικές, θερμικές και κινητικές συγκρίσεις. Δομή. 2001; 9:837-49. https:// doi.org/10.1016/S0969-2126(01)00643-8.

47. Duch DS, Bacchi CJ, Edelstein MP, et al. Αναστολείς του μεταβολισμού της ισταμίνης in vitro και in vivo: συσχετίσεις με την αντιτριπανοσωματική δραστηριότητα. Biochem Pharmacol. 1984; 33: 1547-53. https:// doi.org/10.1016/0006-2952(84)90426-Χ.

48. Hox V, Desai Α, Bandara G, et al. Τα οιστρογόνα αυξάνουν τη σοβαρότητα της αναφυλαξίας σε θηλυκά ποντίκια μέσω της ενισχυμένης έκφρασης της συνθάσης του ενδοθηλιακού μονοξειδίου του αζώτου και της παραγωγής νιτρικού οξειδίου. J Allergy Clin Immunol. 2015;135:729-736.e5. https://doi.org/ 10.1016/j.jaci.2014.11.003.

49. Packman EW, Rossi GV, Harrisson JWE. Η επίδραση της ισταμίνης και των αντιισταμινικών στη θερμοκρασία του σώματος. J Pharm Pharmacol. 1953; 5:301-10. https://doi.org/10.1111/j.2042-7158.1953.tb139 90.χ.

50. Morris SC, Perkins C, Potter C, et al. Βελτιστοποίηση της φαρμακευτικής αναστολής της αναφυλαξίας που προκαλείται από IgE σε ποντίκια. J Allergy Clin Immunol. 2021; 149:671-84. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2021.06.022.

51. Li XM, Serebrisky D, Lee SY, et al. Ένα μοντέλο αναφυλαξίας από ποντίκια: Οι αποκρίσεις Τ- και Β-κυττάρων σε ένα κύριο αλλεργιογόνο φιστικιών μιμούνται τις ανθρώπινες αποκρίσεις. J Allergy Clin Immunol. 2000; 106:150-8. https://doi.org/10.1067/mai.2000.107395.

52. Hasegawa Α, Watanabe Μ, Osada Η, et αϊ. Επίδραση των γλυκοκορτικοειδών σε παραλλαγές που εξαρτώνται από την ώρα της ημέρας στη συστηματική αναφυλαξία που προκαλείται από παράγοντα ενεργοποίησης IgE, ισταμίνης και αιμοπεταλίων σε διαφορετικά στελέχη ποντικών. Biochem Biophys Res Commun. 2018; 495:2184–8. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2017.12.099.

53. Fishel CW, Szentivanyi A, Talmage DW. Ευαισθητοποίηση και απευαισθητοποίηση ποντικών στην ισταμίνη και τη σεροτονίνη από νευροχυμούς. J Immunol. 1962, 89:8–18.

54. Stallons LJ, Whitaker RM, Schnellmann RG. Καταστολή της μιτοχονδριακής βιογένεσης σε οξεία νεφρική βλάβη που προκαλείται από φολικό οξύ και πρώιμη ίνωση. Toxicol Lett. 2014; 224:326–32. https://doi. org/10.1016/j.toxlet.2013.11.014.

55. Gludovacz Ε, Schuetzenberger Κ, Resch Μ, et αϊ. Οι μεταλλάξεις του μοτίβου δέσμευσης ηπαρίνης της ανθρώπινης οξειδάσης της διαμίνης επιτρέπουν την ανάπτυξη ενός πρώτης κατηγορίας βιοφαρμακευτικού που αποικοδομεί την ισταμίνη. Elife. 2021; 10: e68542. https://doi.org/10.7554/eLife. 68542.

56. Eissa Ν, Kermarrec L, Hussein Η, et αϊ. Καταλληλότητα γονιδίων αναφοράς για την ομαλοποίηση του αγγελιαφόρου RNA σε κολίτιδα που προκαλείται από 2,4-δινιτροβενζολοσουλφονικό οξύ (DNBS) ποντικού με χρήση ποσοτικής PCR σε πραγματικό χρόνο. Sci Rep. 2017; 7:42427. https://doi.org/10. 1038/srep42427.

57. Gludovacz Ε, Maresch D, Bonta Μ, et αϊ. Χαρακτηρισμός της ανασυνδυασμένης ανθρώπινης διαμινοξειδάσης (rhDAO) που παράγεται σε κύτταρα ωοθηκών κινέζικου χάμστερ (CHO). J Biotechnol. 2016; 227:120–30. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.04.002.

58. Boehm Τ, Karer Μ, Gludovacz Ε, et αϊ. Απλή, ευαίσθητη και ειδική ποσοτικοποίηση της δραστικότητας της οξειδάσης της διαμίνης σε σύνθετες μήτρες χρησιμοποιώντας πρόσφατα ανακαλυφθέντα φθοροφόρα που προέρχονται από φυσικά υποστρώματα. Infamm Res. 2020; 69:937–50. https://doi.org/10. 1007/s00011-020-01359-5.

59. Matsumura Y, Tan ΕΜ, Vaughan JH. Υπερευαισθησία στην ισταμίνη και συστηματική αναφυλαξία σε ποντίκια με φαρμακολογικό βήτα-αδρενεργικό αποκλεισμό: προστασία από νουκλεοτίδια. J Allergy Clin Immunol. 1976, 58:387-94. https://doi.org/10.1016/0091- 6749(76)90119-6.

60. Hunter AJ, Murray TK, Jones JA, et al. Η χολινεργική φαρμακολογία της τετραϋδροαμινοακριδίνης in vivo και in vitro. Br J Pharmacol. 1989; 98:79-86. https://doi.org/10.1111/j.1476-5381. 1989.tb16865.χ.

61. Rabe M, Schaefer F. Μη διαγονιδιακά μοντέλα νεφρικής νόσου σε ποντίκια. Νέφρων. 2016; 133:53–61. https://doi.org/10.1159/00044 5171.

62. Miyamoto Y, Nakano S, Kaneko M, et al. Κλινική αξιολόγηση ενός νέου συνθετικού αναστολέα πρωτεάσης σε χειρουργική ανοιχτής καρδιάς. Επίδραση στην απελευθέρωση σεροτονίνης και ισταμίνης στο πλάσμα και στη διατήρηση του αίματος. ASAIO. 1992;38:M395-8. https://doi.org/10.1097/00002480- 199207000-00063.

63. Ογκολογία φυλής—ογκολογία ακριβείας. https://www.raceoncology. com/. Πρόσβαση στις 23 Νοεμβρίου 2021

64. Myers JW, Von Hof DD, Kuhn JG, et al. Αναφυλακτοειδείς αντιδράσεις που σχετίζονται με εγχύσεις bisantrene. Ερευνητικά Νέα Ναρκωτικά. 1983; 1:85-8. https://doi.org/10.1007/BF00180195.

65. Reilly MA, Schayer RW. Περαιτέρω μελέτες για τον καταβολισμό της ισταμίνης in vivo. Br J Pharmacol. 1971, 43:349-58.

66. Malinski Τ, Taha Ζ, Grunfeld S, et αϊ. Η διάχυση του μονοξειδίου του αζώτου στο τοίχωμα της αορτής παρακολουθείται in situ από πορφυρινικούς μικροαισθητήρες. Biochem Biophys Res Commun. 1993; 193:1076-82. https://doi. org/10.1006/bbrc.1993.1735.

67. Ginsburg Μ, Wajda Ι, Waelsch Η. Transglutaminase and histamine in vivo. Biochem Pharmacol. 1963, 12:251-64. https://doi.org/10.1016/0006-2952(63)90148-5.

68. Vowinckel J, Stahlberg S, Paulmann Ν, et αϊ. Η ισταμινυλίωση των υπολειμμάτων γλουταμίνης είναι μια νέα μεταμεταφραστική τροποποίηση που εμπλέκεται στη σηματοδότηση της πρωτεΐνης G. FEBS Lett. 2012; 586:3819-24. https://doi.org/10.1016/j.febslet.2012.09.027.

69. McNally W, Roth M, Young R, et al. Ποσοτικός αυτοραδιογραφικός προσδιορισμός της κατανομής τακρινικού ιστού σε επίμυες σε ολόκληρο το σώμα μετά από ενδοφλέβια ή από του στόματος δόση. Pharm Res. 1989; 6:924– 32. https://doi.org/10.1023/A:1015933210803.

70. Cumming P, Reiner PB, Vincent SR. Αναστολή της ισταμίνης-Ν-μεθυλοτρανσφεράσης εγκεφάλου αρουραίου από 9-αμινο-1,2,3,4-τετραϋδροακριδίνη (THA). Biochem Pharmacol. 1990;40:1345-50. https://doi.org/10. 1016/0006-2952(90)90402-7.

71. Cavallito JC, Nichol CA, Brenckman WD, et al. Λιπιδοδιαλυτοί αναστολείς της διυδροφολικής αναγωγάσης. I. Κινητική, κατανομή στους ιστούς και έκταση του μεταβολισμού της πυριμεθαμίνης, της μεθοπρενίου και της ετορφίνης στον αρουραίο, τον σκύλο και τον άνθρωπο. Drug Metab Dispos. 1978; 6:329-37.

72. Nishibori Μ, Oishi R, Itoh Υ, et αϊ. 9-Αμινο-1, 2, 3, 4-Η τετραϋδροακριδίνη είναι ένας ισχυρός αναστολέας της Ν-μεθυλοτρανσφεράσης της ισταμίνης. Jpn J Pharmacol. 1991, 55:539-46. https://doi.org/10.1254/jjp.55. 539.

73. Hough LB, Khandelwal JK, Green JP. Αναστολή του μεταβολισμού της εγκεφαλικής ισταμίνης από το μεθοπρένιο. Biochem Pharmacol. 1986;35:307–10. https://doi.org/10.1016/0006-2952(86)90530-7.

74. Kaneko Η, Koshi S, Hiraoka Τ, et αϊ. Αναστολή μετα-ισχαιμικής βλάβης επαναιμάτωσης του νεφρού από οξειδάση διαμίνης. Biochim Biophys Acta. 1998, 1407:193–9. https://doi.org/10.1016/S0925- 4439(98)00039-8.

75. Koshi S, Inoue Μ, Obayashi Η, et αϊ. Αναστολή μετα-ισχαιμικού τραυματισμού επαναιμάτωσης του λεπτού εντέρου από οξειδάση διαμίνης. Biochim Biophys Acta. 1991; 1075:231-6. https://doi.org/10.1016/ 0304-4165(91)90271-Η.

Matthias Karer1 · Marlene Rager‑Resch1 · Teresa Haider2 · Karin Petroczi1 · Elisabeth Gludovacz3 · Nicole Borth3 · Bernd Jilma1 · Thomas Boehm1

1 Τμήμα Κλινικής Φαρμακολογίας, Ιατρικό Πανεπιστήμιο Βιέννης, Waehringer Guertel 18-20, 1090 Βιέννη, Αυστρία

2 Τμήμα Νευροφυσιολογίας, Κέντρο Έρευνας Εγκεφάλου, Ιατρικό Πανεπιστήμιο Βιέννης, Βιέννη, Αυστρία

3 Τμήμα Βιοτεχνολογίας, Πανεπιστήμιο Φυσικών Πόρων και Επιστημών της Ζωής, Βιέννη, Αυστρία