Η διαγραφή του Alox15 βελτιώνει τη νεφρική δυσλειτουργία και αναστέλλει την ίνωση με αυξημένη PGD2 στο νεφρό
Mar 12, 2022
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗΝ ΝΕΦΡΙΚΗ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΛΟΙΜΩΞΗ
Εισαγωγή
Τα πολυακόρεστα λιπαρά οξέα (PUFA) και οι μεταβολίτες τους συνδέονται με τη φλεγμονή και την επίλυσή της σε πολλά όργανα [1]. Οι οξυλιπίνες, οι οποίες παράγονται από την οξείδωση των PUFA, είναι σημαντικές για τη βιολογική δραστηριότητα του PUFA ως λιπιδικοί μεσολαβητές [1, 2]. Η βιοσύνθεση των οξυλιπινών μεσολαβείται από διάφορα ένζυμα, όπως η λιποξυγενάση (LOX), η κυκλοοξυγενάση (COX) και το κυτόχρωμα P450 (CYP) [3]. Αυτά τα ένζυμα παράγουν αρκετούς λιπιδικούς μεταβολίτες, όπως προσταγλανδίνες, λευκοτριένια και λιποξίνες, οι οποίοι εμπλέκονται σε μεγάλο βαθμό στη ρύθμιση της φλεγμονής [1, 4]. Για παράδειγμα, το ALOX15, ένας κύριος υποτύπος του LOX, έχει διπλή όψη προφλεγμονωδών και αντιφλεγμονωδών ιδιοτήτων μέσω των μεταβολιτών του [5]: Το ALOX15 εκφράζεται σε μεγάλο βαθμό σε ηωσινόφιλα, βρογχοκυψελιδικά επιθηλιακά κύτταρα και κυψελιδικά μακροφάγα υπό μη παθολογικές συνθήκες [5,6. ], και προάγει τη σοβαρότητα του άσθματος [7], του τραυματισμού των πνευμόνων [8] και της καρδιακής ανεπάρκειας [9], ενώ εξουδετερώνει τη φλεγμονή στην αρθρίτιδα [10] και στον ισχαιμικό εγκέφαλο [11]. Επιπλέον, οι μεσολαβητές λιπιδίων και τα ένζυμα τους επηρεάζουν την ίνωση των οργάνων καθώς και τη φλεγμονή. Ειδικοί λιπιδικοί μεσολαβητές εμπλέκονται στην παθογένεση της ίνωσης του πνεύμονα [12], του ήπατος [13] και της καρδιάς [14]. Ομοίως, το προαναφερθέν ALOX15 συνδέεται επίσης με την παθογένεση της ίνωσης, όπως η δερματική ίνωση [15].
Μία από τις κοινές χρόνιες ασθένειες είναι η χρόνια Νεφρική Νόσος(ΧΝΝ), η οποία επηρεάζει περίπου το 8-16 τοις εκατό του γενικού πληθυσμού σε όλα τα στάδια μαζί [16]. Αν και η παθογένεση της ΧΝΝ είναι πολύπλοκη και ποικίλλει ανάλογα με την υποκείμενη νόσο, ηνεφρόΟ ιστός γενικά καθίσταται δυσλειτουργικός, οδηγώντας σε τελικό στάδιοΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑπροκαλείται από χρόνια φλεγμονή και επακόλουθη ίνωση [17]. Όπως αναφέρθηκε, οι λιπιδικοί μεσολαβητές που προέρχονται από PUFAs συνδέονται στενά με τη φλεγμονή και την προκύπτουσα ίνωση. Για παράδειγμα, οι λιποξίνες και οι ρεσολβίνες αναστέλλουν τη νεφρική ίνωση [18, 19], αλλά αυτές οι επιδράσεις δεν έχουν ακόμη εξεταστεί στο μοντέλο ΧΝΝ με μειωμένηνεφρική λειτουργία.Επιπλέον, ολοκληρωμένα λιπιδομικά προφίλ στη ΧΝΝνεφρόιστοί εξακολουθούν να μην αναφέρονται. Έτσι, ο ρόλος των μεταβολικών ενζύμων των λιπιδίων και των προϊόντων τους στην παθογένεση της ΧΝΝ έχει παραμείνει ελάχιστα κατανοητόςΑυτή η μελέτη είχε ως στόχο να αποσαφηνίσει τη συμμετοχή των ενζύμων μεταβολισμού λιπαρών οξέων και των προϊόντων τους στονεφρώνβλάβη σε 5/6 νεφρεκτομή (Nx) μοντέλο ποντικών ΧΝΝ. Αυτή η μελέτη αποκάλυψε ότι τόσο τα επίπεδα μεταγραφής όσο και πρωτεϊνικής έκφρασης του Alox15 ήταν αυξημένα στη ΧΝΝνεφράκαι τα ποντίκια Alox15−/− έδειξαν βελτιωμένανεφρόδυσλειτουργία και ίνωση στο μοντέλο ΧΝΝ. Επιπλέον, η PGD2, η οποία είναι ο αυξημένος λιπιδικός μεταβολίτης στη ΧΝΝνεφράτων ποντικών Alox15−/−, ανέστειλε την επιθηλιακή-μεσεγχυματική μετάβαση (EMT) σε εγγύς σωληναριακά καλλιεργημένα κύτταρα. Επομένως, η αναστολή του Alox15 και/ή η χορήγηση PGD2 θα μπορούσε να είναι ένας νέος θεραπευτικός στόχος της ΧΝΝ και της ίνωσης.
Λέξεις-κλειδιά:χρόνια νεφρική νόσος; Λιποοξυγενάση; ALOX15; Λιπιδομική μεσολαβητής; Πολυακόρεστα λιπαρά οξέα; νεφρών
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΩΝ ΝΕΦΡΩΝ/ΝΕΦΡΩΝ
Υλικά και μέθοδοι
Ζώα και πειράματαΑυτή η μελέτη χρησιμοποίησε 8-αρσενικά ποντίκια C57BL/6 J εβδομάδων (CLEA Japan), τα οποία εγκλιματίστηκαν για 1 εβδομάδα προτού πραγματοποιηθούν όλα τα πειράματα. Επιπλέον, ποντίκια Alox15−/− δημιουργήθηκαν στο υπόβαθρο C57BL/6 J (Jackson Laboratory) και το μοντέλο 5/6 Nx καθιερώθηκε σύμφωνα με μια προηγούμενη μελέτη [20]. Συλλέξαμε δείγματα αίματος για την αξιολόγηση τουνεφρική λειτουργίακαινεφρόδείγματα ιστού για ανοσοστύπωση και αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης στις 8 εβδομάδες μετά από 5/6 Nx και για ιστολογική ανάλυση στις 40 εβδομάδες μετά από 5/6 Nx. Όλα τα πειράματα συμμορφώθηκαν με τις οδηγίες για την έρευνα σε ζώα του TMDU και η Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του TMDU ενέκρινε το πρωτόκολλο της μελέτης μας (αριθμός έγκρισης: A2019-117C4).
Λιπιδομική μεσολαβητή με βάση LC–MS/MSΠραγματοποιήσαμε ανάλυση LC-MS/MS όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21, 22]. Λεπτομέρειες της διαδικασίας περιγράφονται στις Συμπληρωματικές Μέθοδοι,Άλλες πειραματικές μέθοδοιΠεριγράψαμε άλλες πειραματικές μεθόδους στις Συμπληρωματικές Μέθοδοι.
Αποτελέσματα
Το επίπεδο mRNA του Alox15 έχει αυξηθεί σε νεφρό 5/6 NxΟι ποσοτικές αλλαγές των ενζύμων οξυλιπίνης στη ΧΝΝνεφρόδιερευνήθηκαν εφαρμόζοντας ποντίκια C57BL/6 σε εικονική επέμβαση ή 5/6 Nx όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. Για να αναλύσουμε την έκφραση των κύριων ενζύμων οξυλιπίνης που εκφράζονται στο νεφρό (Alox15, Alox5, Ptgs1 (COX1), Ptgs2 (COX2), Cyp4a12 και Cyp2c44) [23, 24], εξάγαμενεφρόδείγματα. Μεταξύ των ενζύμων, το Alox15 σε 5/6 Nxνεφράείχε σημαντικά αυξημένο επίπεδο mRNA (P=0.0004) σε σύγκριση με αυτό στο εικονικόνεφρά(Εικ. 1). Αντίθετα, τα επίπεδα mRNA των άλλων κύριων ενζύμων δεν άλλαξαν σημαντικά σε αυτό το μοντέλο ΧΝΝ.
Το επίπεδο πρωτεΐνης του Alox15 αυξήθηκε στα εγγύς νεφρικά σωληναριακά κύτταραΣε 5/6 Nxνεφρά, τα επίπεδα πρωτεΐνης ALOX15 ήταν επίσης αυξημένα (Ρ=0.0078), όπως αναμενόταν από τα αυξημένα μεταγραφικά επίπεδα (Εικ. 2α). Για να προσδιοριστεί ποιοι τύποι κυττάρων είχαν αυξημένο επίπεδο πρωτεΐνης Alox15 στη ΧΝΝνεφρό,εξετάσαμε τον εντοπισμό του Alox15 mRNA με in situ υβριδισμό. Η in situ υβριδοποίηση με mRNA αποκάλυψε ότι το υψηλό επίπεδο έκφρασης του Alox15 εντοπίστηκε στονεφρώνσωληνοειδή κύτταρα στο μοντέλο 5/6 Nx, αλλά όχι στα σπειράματα (Εικ. 2β). Τα ιστολογικά χαρακτηριστικά υποδηλώνουν ότι το mRNA του Alox15 εκφραζόταν έντονα στα εγγύς σωληνάρια.
Τα ποντίκια Alox15−/− ήταν ανθεκτικά σε νεφρική βλάβη και ίνωση στο μοντέλο 5/6 NxΣε 5/6 Nx ΧΝΝνεφρά, τα επίπεδα μεταγραφικής έκφρασης και πρωτεϊνικής έκφρασης του ALOX15 ήταν αυξημένα. Ως εκ τούτου, διερευνήσαμε εάν και πώς το ALOX15 παίζει ρόλο στη ΧΝΝ από την άποψη τηςνεφρόδυσλειτουργία και νεφρική ίνωση. Για το σκοπό αυτό, ποντίκια Alox15−/− εφαρμόστηκαν στο μοντέλο 5/6 Nx CKD. Είναι ενδιαφέρον ότι τα επίπεδα Cre ορού και αζώτου ουρίας αίματος (BUN) ήταν χαμηλότερα σε ποντίκια Alox15−/− 5/6 Nx
από εκείνα σε ποντίκια άγριου τύπου (WT) (Εικ. 3a), υποδεικνύοντας ότι η εξάντληση του Alox15 έδειξε προστατευτική επίδραση στην παθογένεση της ΧΝΝ. Αντίστοιχα, η NGAL (ανεφρική βλάβηδείκτης) η έκφραση πρωτεΐνης κατεστάλη σε ποντικούς Alox15−/− σε σύγκριση με εκείνη σε ποντίκια WT (Εικ. 3β). Επιπλέον, Alox15−/− ποντίκινεφράέδειξε μειωμένα επίπεδα mRNA Col1a1, Fn και Acta2 (SMA) (Εικ. 3c), και επίσης έδειξε μειωμένη έκφραση ινωδονεκτίνης και πρωτεΐνης SMA (Εικ. 3d). Επιπλέον, ποντίκι Alox15−/−νεφράπαρουσίασε σαφώς κατασταλμένες διάμεσες ινωτικές αλλαγές που φαίνονται στη χρώση τριχρωμίου του Masson (Εικ. 3e). Επομένως, η διαγραφή Alox15 βελτιώνεταινεφρόδυσλειτουργία και ίνωση στο ζωικό μοντέλο ΧΝΝ.
Η μεσολαβητική λιπιδομική αποκάλυψε αλλοιωμένο μεταβολισμό PUFA στους νεφρούς Alox15-/- ΧΝΝΌπως αναφέρθηκε στην Εισαγωγική ενότητα αυτής της εργασίας, οι βιολογικές επιδράσεις του Alox15 σχετίζονται με τους μεσολαβητές λιπιδίων που παράγονται από το Alox15. Για να αποσαφηνιστεί το προφίλ των λιπιδικών μεταβολιτών που παράγονται από το Alox15 στη ΧΝΝνεφρό,εξετάσαμε και συγκρίναμε το εικονικό και το 5/6 Nxνεφρόδείγματα από λιπιδομικά διαμεσολαβητών που βασίζονται σε LC-MS/MS για τον προσδιορισμό των προφίλ λιπιδικού μεσολαβητή μεταξύ ποντικών WT και ποντικών Alox15−/− CKD (Συμπληρωματικός Πίνακας 1). Ο Πίνακας 1 δείχνει λιπιδικούς μεταβολίτες που ήταν σημαντικά διαφορετικοί μεταξύ των ποντικών Alox15 plus / plus και Alox15−/− υπό συνθήκες 5/6 Nx. Επιπλέον, φτιάξαμε χάρτες μονοπατιών των λιπιδικών μεσολαβητών με ταξινόμηση με βάση τα υποστρώματά τους και τα ένζυμα μεταβολισμού τους (Εικ. 4). Μια σειρά από μεταβολίτες PUFA που προέρχονται από Alox, όπως 14-HDoHE, 17-HDoHE και 15-HEPA [5, 25–27] αυξήθηκε σημαντικά σε μοντέλα ΚΝΠ που συσχετίστηκαν καλά στο αυξημένο επίπεδο έκφρασης ALOX15 στονεφρά (P=0.0018, 0.0008,<0.0001, respectively),="" and="" their="" elevations="" under="" ckd="" conditions="" were="" completely="" suppressed="" in="" alox15−/−="" mice="" (fig. 5).="" besides="" 14-hdohe,="" 17-hdohe,="" and="" 15-hepa,="" the="" levels="" of="" 18-hepa,="" 10-hdohe,="" 11-hdohe,="" 13-hdohe,="" 16-hdohe,="" and="" dgla="" were="" also="" significantly="" decreased="" in="" alox15−/−="" ckd="">νεφράσε σύγκριση με εκείνα στους νεφρούς WT CKD, ενώ μόνο η PGD2 αυξήθηκε σημαντικά στους νεφρούς Alox15−/− CKD (Εικ. 6).
Η PGD2 κατέστειλε την EMT σε καλλιεργημένα νεφρικά κύτταραΤα αποτελέσματα των μεταβολιτών λιπιδίων που ήταν σημαντικά διαφορετικά μεταξύ Alox15 plus / plus και Alox15−/− ποντικών υπό συνθήκες 5/6 Nx εξετάστηκαν με τη χορήγηση αυτών των λιπιδίων σε κύτταρα NRK-52Ε που ενεργοποιήθηκαν από προ-ινωτική κυτοκίνη TGF - 1. Αξιολογήσαμε την έκφραση mRNA των Cola1a και Acta2 (SMA) σε απόκριση στον TGF- 1 για να προσδιορίσουμε τις επιδράσεις αυτών των λιπιδίων σε καλλιέργεια (Εικ. 7a). Μεταξύ αυτών, το PGD2 προσέφερε ισχυρό αντιινωτικό αποτέλεσμα στα κύτταρα NRK-52Ε σε απόκριση στον TGF- 1. Η κατασταλτική επίδραση της PGD2 στην έκφραση των COL1A1 και SMA ήταν δοσοεξαρτώμενη με την EC50 των 7,12 μΜ και 6,48 μΜ, αντίστοιχα (Εικ. 7β). Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε τα ίδια πειράματα σε κύτταρα HK-2, τα οποία είναι απαθανατισμένα επιθηλιακά κύτταρα εγγύς σωληναρίου από φυσιολογικό ενήλικο άνθρωπονεφρά,και βρήκε ένα παρόμοιο αποτέλεσμα, δηλαδή, αναστολή COL1A1 και SMA με δοσοεξαρτώμενο τρόπο, σε απόκριση στη θεραπεία με PGD2 (Εικ. 7γ). Επομένως, αυξήθηκαν τα επίπεδα PGD2 στο Alox15−/− CKDνεφράμπορεί να συμβάλει στα αντιϊνωτικά αποτελέσματα στη ΧΝΝ.
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΟΝ ΝΕΦΡΟ/ΝΕΦΡΟ ΠΟΝΟ
Η 15-PGDH, ένα κύριο ένζυμο που μεταβολίζει την PGD2, μειώθηκε στους νεφρούς Alox15-/- ΧΝΝΓια να αποσαφηνιστεί ο μηχανισμός της αύξησης του PGD2 στονεφράτων ποντικών μοντέλου Alox15−/− CKD, μετρήσαμε το επίπεδο mRNA της συνθάσης PGD2. Η συνθάση PGD2 (PGDS) έχει δύο ισομορφές: λιποκαλίνη PGDS (L-PGDS) και αιμοποιητικό PGDS (H-PGDS) [28]. Και τα δύο επίπεδα L-PGDS και H-PGDS αυξήθηκαν σημαντικά υπό συνθήκες 5/6 Nx σε σύγκριση με εκείνα υπό ψευδείς συνθήκες στονεφράποντικών WT (Εικ. 8α, και τα δύο P<0.0001) indicating="" that="" increased="" pgd2="" in="" ckd="" is="" due="" to="" increased="" pgd2="" synthases.="" conversely,="" the="" increase="" in="" l-pgds="" and="" h-pgds="" under="" 5/6="" nx="" conditions="" was="" significantly="" inhibited="" in="" alox15−/−="" mice="" (fig. 8a)="" indicating="" that="" the="" increase="" in="" pgd2="" in="" alox15−/−="" ckd="" model="" mice="" was="" not="" due="" to="" increased="" production="" by="" pgds.="" then,="" we="" examined="" mrna="" levels="" of="" cox-1="" and="" cox-2="" as="" more="" upstream="" synthases="" of="" the="" prostaglandin-producing="" pathway.="" we="" also="" measured="" mrna="" levels="" of="" 15-pgdh="" and="">1C18, τα οποία είναι γνωστό ότι είναι κύρια ένζυμα που μεταβολίζουν την PGD [29, 30]. Ενώ τα επίπεδα mRNA των COX-1, COX-2 και AKR1C18 παρέμειναν αμετάβλητα, το επίπεδο mRNA του 15-PGDH μειώθηκε σημαντικά στη ΧΝΝνεφράτων ποντικών Alox15−/− σε σύγκριση με εκείνα των ποντικών WT (Εικ. 8b, P=0.0325), τα οποία δυνητικά οδηγούν στην αύξηση της PGD2 στη ΧΝΝνεφράτων ποντικών Alox15−/−.
Συζήτηση
Αυτή η μελέτη έδειξε ότι στη ΧΝΝνεφρόδείγματα, τόσο τα επίπεδα μεταγραφής όσο και πρωτεϊνών του Alox15 αυξήθηκαν καινεφρόη δυσλειτουργία και η ίνωση βελτιώθηκαν σε ποντίκια Alox15−/−. Επιπλέον, η λιπιδομική μεσολαβητή που βασίζεται σε LC-MS/MS αποκάλυψε ότι ποντίκι Alox15−/− CKDνεφράείχαν σημαντικά αυξημένα επίπεδα PGD 2 σε σύγκριση με τα ποντίκια WT. Το PGD2 ανέστειλε το EMT των κυττάρων NRK-52E και HK-2. Ως εκ τούτου, η αύξηση της PGD2 μπορεί να συμβάλει στην αντίσταση των ποντικών Alox15−/− σενεφρική βλάβηκαι ίνωση. Η σχέση μεταξύνεφρική νόσοκαι τα προφίλ λιπιδίων που χρησιμοποιούν λιπιδομικά σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα έχουν διερευνηθεί εκτενώς [31-33], αλλά όχι σενεφρόιστός. Παρομοίως, αν και οι αναφορές για λιπιδιωμικά που χρησιμοποιούν ζωικά μοντέλα ΧΝΝ είναι λίγες [34-36], όλες αυτές οι μελέτες πραγματοποίησαν λιπιδομικές μελέτες σε δείγματα πλάσματος από ένα ζωικό μοντέλο ΧΝΝ. ωστόσο, καμία ολοκληρωμένη λιπιδομική γιανεφρόιστοί από το μοντέλο ΧΝΝ έχουν ακόμη αναφερθεί. Η άμεση λιπιδομική στους ιστούς είναι επίσης αποτελεσματική, καθώς και τα δείγματα πλάσματος, στον εντοπισμό λειτουργικών μεταβολιτών. Επιπλέον, οι μεταβολές των μεταβολιτών στους ιστούς, καθώς και τα δείγματα αίματος, διαφέρουν σημαντικά ανά όργανο [20]. Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε διεξοδικά το προφίλ των λιπιδικών μεσολαβητών που προέρχονται από PUFA στονεφρόιστούς ενός ζωικού μοντέλου ΧΝΝ.
Αυτή η μελέτη επικεντρώθηκε στο ALOX15, το οποίο είναι ένα από τα κύρια ένζυμα που μεταβολίζουν τα PUFAs. Σε αυτή τη μελέτη, τόσο τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης όσο και mRNA του ALOX15 ήταν σαφώς αυξημένα στη ΧΝΝνεφρά. Εξετάσαμε τους τύπους κυττάρων που είναι υπεύθυνοι για την έκφραση ALOX15 στη ΧΝΝνεφρά,και με in situ υβριδισμό, βρήκαμε αυξημένη έκφραση του ALOX15 mRNA στονεφρώνσωληνοειδή κύτταρα στο μοντέλο 5/6 Nx.
Το ALOX15 εμπλέκεται σε χρόνιες ασθένειες, όπως η αθηροσκλήρωση, και η διαγραφή του σε μοντέλα ζωικών ασθενειών βελτιώνει αυτές τις ασθένειες [5]. Σχετικά με τη συσχέτιση του ALOX15 μενεφρική νόσο, η πρωτεϊνουρία μειώνεται σε ποντίκια Alox15−/− με σπειραματική βλάβη από ένα μοντέλο διαβητικής νεφροπάθειας που προκαλείται από στρεπτοζοτοκίνη [37]. Ωστόσο, αυτό το μοντέλο ποντικιού με σακχαρώδη διαβήτη δεν παρουσιάζει καμία μείωσηνεφρική λειτουργία; Έτσι, ο μηχανισμός για το πώς το ALOX15 σχετίζεται με εξασθενημένονεφρική λειτουργίαστα μοντέλα ΧΝΝ παρέμεινε ασαφές. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιώντας το μοντέλο ποντικιού 5/6 Nx, βρήκαμε ότι η διαγραφή ALOX15 βελτιώθηκενεφρόδυσλειτουργία καινεφρώνίνωση σε μοντέλο ΧΝΝ. Μέχρι σήμερα, μόνο η IL-4 και η IL-13 στα μονοκύτταρα είναι γνωστό ότι είναι ρυθμιστικοί παράγοντες που αυξάνουν άμεσα την έκφραση του ALOX15 [5]. Ωστόσο, παραμένει ασαφές τι αυξάνει το ALOX15 σενεφρώνσωληνοειδή κύτταρα. Μια ποικιλία κυτοκινών και ουραιμικών τοξινών είναι γνωστό ότι αυξάνονται στο πλάσμα και στους νεφρούς στη ΧΝΝ [38, 39]. Μεταξύ αυτών, μπορεί να υπάρχουν νέοι ρυθμιστές του ALOX15. Απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για την αποσαφήνιση των κύριων ρυθμιστικών παραγόντων του ALOX15 στη ΧΝΝ. Στις μελέτες μας για τον εντοπισμό συγκεκριμένων παρεμβατικών οξυλιπινών που συνδέουν τη διαγραφή του Alox15 με την επαναπροστατευτική του δράση στο μοντέλο 5/6 Nx, διαπιστώσαμε ότι η PGD2 μπορεί να εμπλέκεται στην αντοχή σενεφρική βλάβηπου προκαλείται από διαγραφή ALOX15. Ως γενική κατανόηση, για τη δημιουργία PGD2, COX-1 και
Το CCOX-2 παράγει PGG2 από αραχιδονικά οξέα, το οποίο στη συνέχεια μετατρέπεται σε PGH2. Όταν η PGH2 μεταβολίζεται από τη συνθάση της PGD2 (PGDS), παράγεται η PGD2 [28]. Το PGDS έχει δύο γενετικά διακριτές ισόμορφες, συγκεκριμένα, λιποκαλίνιο PGDS (L-PGDS) και PGDS αιμοποιητικού τύπου (H-PGDS) [28]. Αν και η PGD2 αυξήθηκε στο ποντίκι Alox15−/− CKDνεφρά, ούτε το L-PGDS ούτε το H-PGDS αυξήθηκαν στο ποντίκι Alox15−/− CKDνεφρά, παρά τη μεγάλη αύξηση του PGDS στο ποντίκι WT CKDνεφρά(Εικ. 8α). Επιπλέον, αποκαλύψαμε επίσης ότι ούτε η COX-1 ούτε η COX-2 αυξήθηκαν στους νεφρούς ποντικού Alox15−/− CKD (Εικ. 8β). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η αύξηση της PGD 2 στους νεφρούς ποντικιού Alox15−/− ΧΝΝ δεν οφειλόταν σε αύξηση των συνθασών αλλά λόγω της αυξημένης διαθεσιμότητας υποστρώματος ή της αναστολής της αποικοδόμησης, και στην πραγματικότητα, έχουμε αποκαλύψει μείωση του {{ 7}}PGDH, ένα από τα κύρια ένζυμα μεταβολισμού της PGD2 [29], στους νεφρούς ποντικού Alox15−/− CKD (Εικ. 8β). Απαιτείται περαιτέρω έρευνα για να αποσαφηνιστεί ο λόγος για τον οποίο η διαγραφή του Alox15 οδηγεί σε μείωση της 15-PGDH.
Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, το PGD2 θα μπορούσε να εμπλέκεται στην αντίσταση σενεφρική βλάβηπου προκαλείται από απώλεια ALOX15. Σε αυτή τη μελέτη, το PGD2 ανέστειλε την EMT από το TGF- 1 σε κύτταρα NRK-52E και HK-2, που αντιπροσωπεύουν τα εγγύς σωληναριακά κύτταρα. Το PGD2 δεσμεύεται σε δύο διαφορετικούς υποδοχείς συζευγμένους με πρωτεΐνη G, συγκεκριμένα, DP1 και DP2, των οποίων οι λειτουργίες είναι διαφορετικές [28]. Ωστόσο, στα in vitro πειράματά μας, η PGD2 ήταν αποτελεσματική σε συγκεντρώσεις που κυμαίνονται από 4 έως 32 μΜ, οι οποίες είναι σχετικά υψηλές, λαμβάνοντας υπόψη ότι οι τιμές Ki των DP1 και DP2 είναι 1,7 nM και 2,4 nM, αντίστοιχα [28]. Αυτό το αποτέλεσμα υποδεικνύει ότι η PGD2 μπορεί να ασκήσει αντιϊνωτικά αποτελέσματα όχι μέσω των συζευγμένων με πρωτεΐνη G υποδοχέων αλλά μέσω άλλων οδών όπως το PPAR, μέσω των οποίων το 15-d-PGJ2, ένας μεταγενέστερος μεταβολίτης PGD2, είναι γνωστό ότι ασκεί τα αποτελέσματά του [28]. Σε αυτή τη μελέτη, η οποία επικεντρώνεται στα μεταβολικά ένζυμα των λιπιδίων και στους μεταβολίτες τους, η αναστολή του ALOX15 και/ή η χορήγηση PGD2 θα μπορούσε να είναι ένας πολλά υποσχόμενος θεραπευτικός στόχος για τη ΧΝΝ. Δυστυχώς, δεν έχει αναπτυχθεί κανένας ειδικός αναστολέας ALOX15 που να μπορεί να χρησιμοποιηθεί στην κλινική πράξη [40, 41]. Η θεραπευτική στόχευση των κατάντη λειτουργικών μεταβολιτών, όπως η PGD2, αντί της αναστολής των ενζύμων μεταβολισμού των λιπαρών οξέων, τα οποία επηρεάζουν διάφορους μεταβολίτες, θα μπορούσε να είναι μια νέα ιδανική θεραπεία για ΧΝΝ.
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗΝ ΝΕΦΡΟ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΚΑΘΑΡΡΥΣΗ
