Το Cistanches Herba μειώνει την αύξηση βάρους σε παχύσαρκα ποντίκια που προκαλούνται από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά, πιθανώς μέσω μιτοχονδριακής αποσύνδεσης

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Hoi Shan Wong, Jihang Chen, Pou Kuan Leong, Hoi Yan Leung, Wing Man Chan, Kam Ming Ko

* Division of Life Science, Hong Kong University of Science and Technology, Hong Kong, China.

Αφηρημένη:

Ένα ημι-καθαρισμένο κλάσμα που απομονώθηκε απόΚιστανάκιαHerba(HCF1), είχε προηγουμένως βρεθεί ότι επάγει μιτοχονδριακή αποσύνδεση σε κύτταρα H9c2 και σε καρδιές αρουραίου. Επομένως, υποθέσαμε ότι το HCF1 θα είχε αποτέλεσμα απώλειας βάρους έναντι της παχυσαρκίας που προκαλείται από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά (HFD). Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, καθιερώθηκε ένα μοντέλο ποντικιού επαγόμενης από HFD παχυσαρκίας και εξετάστηκαν οι επιδράσεις του HCF1 σε ποντίκια που τρέφονταν με κανονική δίαιτα (ND) και τρέφονταν με HFD. Στη μελέτη, η μακροχρόνια θεραπεία με HCF1 είχε αποτέλεσμα μείωσης βάρους έναντι της επαγόμενης από HFD παχυσαρκίας σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια. Η απώλεια βάρους που προκαλείται από HCF{13}}σχετίστηκε με βελτιωμένη ευαισθησία στην ινσουλίνη σε ζώα που τρέφονταν με HFD. Για να κατανοηθεί ο μηχανισμός δράσης στον οποίο βασίζεται το αποτέλεσμα μείωσης βάρους που παρέχεται από το HCF1, εξετάστηκαν τα αποτελέσματά του στην αποσύνδεση των μιτοχονδρίων. Διεξήχθη επίσης μια συγκριτική μελέτη με τη χολεστυραμίνη (CT), έναν παράγοντα δέσμευσης χολικών οξέων. Τα ευρήματα έδειξαν ότι η απώλεια βάρους που προκαλείται από το HCF1- πιθανώς μεσολαβήθηκε από την αύξηση της κατανάλωσης ενέργειας, πιθανώς μέσω της πρόκλησης μιτοχονδριακής αποσύνδεσης στους σκελετικούς μυς του ποντικού. Έτσι, τα ευρήματά μας προτείνουν την πιθανή χρήση του HCF1 για την πρόληψη της παχυσαρκίας και των συναφών συνεπειών στην υγεία, όπως ο διαβήτης, οι καρδιαγγειακές παθήσεις και το μεταβολικό σύνδρομο.

Λέξεις-κλειδιά: Cistanches Herba, Ελεγχος βάρους,Μιτοχονδριακή αποσύνδεση,Μιτοχονδριακή πρωτεΐνη αποσύνδεσης 3

οφέλη για την υγεία του cistanche tubolosa

Η Chengdu Wecistanche παράγει κυρίως Προϊόντα Cistanche για μια υγιή ζωή.

Εισαγωγή

Η παχυσαρκία χαρακτηρίζεται από την ανώμαλη συσσώρευση λίπους στον λιπώδη ιστό και σε άλλα όργανα που παράγει δυσμενείς επιπτώσεις στην υγεία. Τα τρέχοντα ευρήματα έδειξαν ότι η καθιστική ζωή και οι αλλαγές στη διατροφική σύνθεση σε εύπορες κοινωνίες προκάλεσαν επιδημία παχυσαρκίας, με ταυτόχρονη αύξηση των περιπτώσεων διαφόρων μη μεταδοτικών χρόνιων ασθενειών που σχετίζονται με την παχυσαρκία, όπως το μεταβολικό σύνδρομο (Shi et al., 2012). . Η Εθνική Έρευνα Εξέτασης Υγείας και Διατροφής (NHANES) που διεξήχθη το 2007 έδειξε ότι ο παγκόσμιος επιπολασμός της παχυσαρκίας ήταν πάνω από 30 τοις εκατό και αναμενόταν να αυξηθεί κατά περαιτέρω 33 τοις εκατό τις επόμενες δύο δεκαετίες (Finkelstein et al., 2012). Η εμφάνιση της παχυσαρκίας θα μετατοπιστεί επίσης στους νέους πληθυσμούς, όπως αντικατοπτρίζεται από τις τάσεις στο υπέρβαρο και στην παχυσαρκία σε παιδιά και εφήβους (McTigue, Garrett, & Popkin, 2002). Αυτά τα ευρήματα προβλέπουν την πιθανή επιβάρυνση για την ιατρική περίθαλψη για την παχυσαρκία και τις σχετικές συνέπειες για την υγεία, υπονοώντας την άμεση ανάγκη ελέγχου του μεγέθους του παχύσαρκου πληθυσμού.

Η διαχείριση της παχυσαρκίας απαιτεί μια μακροπρόθεσμη παρέμβαση και μια διεπιστημονική προσέγγιση. Δεδομένης της επιδημίας της παχυσαρκίας, η αναζήτηση για εφικτές μη θεραπευτικές ή/και θεραπευτικές παρεμβάσεις αποτέλεσε πεδίο εντατικής έρευνας. Η στρατηγική επικεντρώνεται κυρίως στη δημιουργία ενεργειακού ισοζυγίου με την αύξηση της ενεργειακής δαπάνης ή τη μείωση της ενεργειακής πρόσληψης. Μεταξύ των διαφόρων προσεγγίσεων που περιλαμβάνουν την αντικατάσταση της διατροφής, την άσκηση, την αναστολή της εντερικής απορρόφησης και την ενεργοποίηση του συμπαθητικού νευρικού συστήματος, την πρόκληση μιτοχονδριακής αποσύνδεσης, είτε με τη χρήση χημικού αποζεύκτη είτε με την επαγωγή μιτοχονδριακών πρωτεϊνών αποσύνδεσης (Cerqueira, Laurindo, Kowaltowski, 2011; Clapham et al., 2000), έχει αποδειχθεί ότι είναι ένα αποτελεσματικό μέσο για την απώλεια βάρους (Clapham et al., 2000; Diehl & Hoek, 1999; Harper, Dickinson, & Brand, 2001; Li et al., 2000). Η μιτοχονδριακή αποσύνδεση αναφέρεται σε μια διαδικασία που προκαλεί την αποσύνδεση μεταξύ των διεργασιών μεταφοράς ηλεκτρονίων που παράγουν ενέργεια και της φωσφορυλίωσης του ADP στο μιτοχόνδριο. Προσφέροντας μια εναλλακτική οδό αγωγιμότητας πρωτονίων, η μιτοχονδριακή αποσύνδεση προκαλεί τη διάχυση της βαθμίδας πρωτονίων και έναν ταχύτερο ρυθμό κατανάλωσης οξυγόνου (Brand et al., 2005). Υπό τις συνθήκες αποσύνδεσης, η μείωση της σύνθεσης ATP σχετίζεται με μείωση του δυναμικού της μιτοχονδριακής μεμβράνης, με τη δυναμική ενέργεια που αποθηκεύεται στη βαθμίδα πρωτονίων να διαχέεται ως θερμότητα. Αυτός ο μάταιος κύκλος μεταφοράς πρωτονίων καταναλώνει μεγάλο ποσοστό μεταβολικής ενέργειας σε διάφορους ιστούς, ειδικά στους σκελετικούς μυς που καταναλώνουν περίπου το 20 τοις εκατό της συνολικής ενέργειας που παράγεται στο μεταβολισμό (Chan, Wei, Chigurupati, & Tu, 2010; Korshunov, Skulachev, & Starkoc , 1997). Η ρύθμιση της διαρροής μιτοχονδριακών πρωτονίων αυξάνει τον βασικό μεταβολικό ρυθμό, ο οποίος συμβάλλει σε σημαντικό μέρος της ημερήσιας ενεργειακής δαπάνης, με επακόλουθη αύξηση στη χρήση μορίων καυσίμου (όπως λιπαρά οξέα) και ως εκ τούτου προκαλεί απώλεια βάρους (Ricquier & Bouillaud, 2000 ).

Το Cistanches Herba, ένα αποξηραμένο ολόκληρο φυτό του Cistanche deserticola YC Ma, είναι ένα τονωτικό βότανο «Γιανγκ-αναζωογονητικό» στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική. Το βότανο χρησιμοποιείται επίσης ως υγιεινή τροφή για τη θεραπεία της νεφρικής ανεπάρκειας εδώ και εκατοντάδες χρόνια στην Κίνα. Τα πρόσφατα ευρήματά μας έδειξαν ότι ένα ημικαθαρισμένο κλάσμα του Cistanches Herba (HCF1) προκάλεσε μιτοχονδριακή αποσύνδεση σε κύτταρα H9c2 και σε καρδιές αρουραίου (Wong & Ko, 2013). Αποδείχθηκε επίσης ότι η μακροχρόνια θεραπεία με HCF1 (σε ημερήσιες δόσεις 1,14 και 11,4 mg/kg, 14 διαδοχικές ημέρες) παρήγαγε μια επίδραση αποσύνδεσης στα μιτοχόνδρια που απομονώθηκαν από νεφρούς και ήπαρ σε αρουραίους, όπως έμμεσα αποδεικνύεται από τη μείωση των επιπέδων ATP σε αυτούς τους ιστούς (μη δημοσιευμένα στοιχεία). Δεδομένου ότι η επαγωγή της μιτοχονδριακής αποσύνδεσης είναι ένα αποτελεσματικό μέσο για την απώλεια βάρους (Clapham et al., 2000; Diehl & Hoek, 1999; Harper et al., 2001; Li et al., 2000), υποθέσαμε ότι ο HCF1 θα παράγει επίσης μιτοχονδριακή αποσύνδεση στους σκελετικούς μυς, με επακόλουθη μείωση βάρους. Για να ελεγχθεί η υπόθεση, καθιερώθηκε ένα μοντέλο ποντικιού επαγόμενης από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά (HFD) παχυσαρκίας και διερευνήθηκαν τα αποτελέσματα του HCF1 σε ποντίκια που τρέφονταν με κανονική δίαιτα (ND) και τρέφονταν με HFD. Επιπλέον, διεξήχθη επίσης μια συγκριτική μελέτη μεταξύ των επιδράσεων του HCF1 και μιας χολεστυραμίνης (CT) που δεσμεύει χολικά οξέα (Chen et al., 2010· Yamato et al., 2012) για να χαρακτηριστεί το αποτέλεσμα μείωσης βάρους που παρέχεται από το HCF1.

στέλεχος κιστάνι

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1. Εκχύλιση βοτάνων

Το Cistanches Herba, το αποξηραμένο ολόκληρο φυτό του Cistanches deserticola YC Ma (Orobanchaceae), αγοράστηκε από έναν τοπικό έμπορο βοτάνων (Lee Hoong Kee). Το βότανο επικυρώθηκε από τον προμηθευτή και ένα δείγμα κουπονιού (HKUST00301) κατατέθηκε στο Τμήμα Επιστήμης της Ζωής, στο Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας του Χονγκ Κονγκ (HKUST). Το αιθανολικό εκχύλισμα Cistanches Herba ελήφθη με εκχύλιση με αιθανόλη αλεσμένου φυτικού υλικού με θέρμανση υπό αναρροή στους 78 βαθμούς για 2 ώρες, όπως περιγράφηκε προηγουμένως (Leung & Ko, 2008), με την απόδοση να είναι 14 τοις εκατό (w/w). Το εκχύλισμα κλασματοποιήθηκε περαιτέρω χρησιμοποιώντας χρωματογραφία πυριτικής πηκτής (Wong & Ko, 2013). Ελήφθη HCF1, με την απόδοση εκχύλισης να είναι 1,14 τοις εκατό. Το εκχύλισμα ξηράνθηκε με εξάτμιση του διαλύτη υπό μειωμένη πίεση στους 50 βαθμούς και το ξηρό εκχύλισμα αποθηκεύτηκε στους -20 βαθμούς μέχρι τη χρήση.

2.2. Χημικά

Το αντιδραστήριο προσδιορισμού Bio-Rad αγοράστηκε από την Bio-Rad Laboratories (Richmond, CA, USA). Τα τριγλυκερίδια LabAssay™ (290-63701), η χοληστερόλη LabAssay™ (294-65801) και το κιτ δοκιμής HDL-χοληστερόλης Ε (431-52501) αγοράστηκαν από την Wako (Οσάκα, Ιαπωνία). Το αντίσωμα κατά του UCP3 (E-18) (κατάλογος # sc-31387) ​​αγοράστηκε από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Όλα τα άλλα χημικά αγοράστηκαν από τη Sigma (St. Louis, MO, ΗΠΑ).

2.3. Φροντίδα ζώων

Τα ποντίκια ICR (8 εβδομάδες, 30-35 g για τα αρσενικά και 25-30 g για τα θηλυκά) διατηρήθηκαν σε κύκλο σκοταδιού/φωτός 12- ωρών σε ένα δωμάτιο ελεγχόμενο από αέρα/υγρασία στους περίπου 22 βαθμούς και επιτρεπόταν η τροφή και νερό κατά βούληση στις εγκαταστάσεις φροντίδας ζώων και φυτών (APCF) στο HKUST. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ερευνητικής Πρακτικής (HKUST) (Αρ. έγκρισης πρωτοκόλλου ζώων αρ. 2013049, ημερομηνία έγκρισης: 25 Σεπτεμβρίου 2013, διάρκεια πειράματος: 3 χρόνια).

παράταση ζωής cistanche

2.4. Πρωτόκολλο θεραπείας

Για να εξεταστεί η επίδραση του HCF1 στην παχυσαρκία που προκαλείται από HFD, αρσενικά ή θηλυκά ποντίκια ICR χωρίστηκαν τυχαία σε οκτώ ομάδες, με 10-15 ποντίκια σε κάθε μία: (1) Κανονική δίαιτα (ND, 13 τοις εκατό ενέργεια που προέρχεται από λίπος) έλεγχος. (2) ND συν χαμηλή δόση HCF1 (HCF1 L) (σε ημερήσια δόση 1,5 mg/kg). (3) ND συν μεσαία δόση HCF1 (HCF1 M) (σε ημερήσια δόση 15 mg/kg). (4) ND συν υψηλή δόση HCF1 (HCF1 H) (σε ημερήσια δόση 45 mg/kg). (5) HFD (60 τοις εκατό ενέργεια που προέρχεται από λίπος· αγοράστηκε από την Research Diet Inc., αρ. προϊόντος D12492) έλεγχος· (6) HFD συν HCF1 L; (7) HFD συν HCF1 M; και (8) HFD συν HCF1 H. Ως διαφορές φύλου στην ανταπόκριση στις αλλαγές σωματικού βάρους που προκαλούνται από τη διατροφή και παρεμβάσεις μείωσης βάρους αναφέρθηκαν σε αρουραίους και ανθρώπους (Rodriguez & Palou, 2004; Rodriguez, Quevedo-Coli, Roca, & Palou, 2001), μας ενδιέφερε να διερευνήσουμε τις επιδράσεις του HCF1 τόσο σε αρσενικά όσο και σε θηλυκά ποντίκια. Οι δόσεις του HCF1 προήλθαν από τις αποτελεσματικές δόσεις του για την πρόκληση καρδιών αρουραίου αποσύνδεσης μιτοχονδρίων (Wong & Ko, 2013). Σε ομάδες συν-θεραπείας με HCF1, τα ποντίκια χορηγήθηκαν ενδογαστρικά με HCF1, 5 ημέρες την εβδομάδα για 8 εβδομάδες (δηλ. 40 δόσεις). Τα ποντίκια ελέγχου έλαβαν μόνο όχημα (ελαιόλαδο). Το σωματικό βάρος και η κατανάλωση τροφής των ποντικών παρακολουθούνταν εβδομαδιαία κατά τη διάρκεια του πειράματος. Οι αλλαγές στο σωματικό βάρος ποσοτικοποιήθηκαν με τον υπολογισμό της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) του γραφήματος που απεικονίζει το ποσοστό του αρχικού βάρους σώματος έναντι του χρόνου (εβδομάδα 1-8) και εκφράστηκε σε αυθαίρετες μονάδες. Δείγματα αίματος λήφθηκαν 24 ώρες μετά την τελευταία χορήγηση HCF1 από ποντίκια που είχαν νηστευτεί ολονύκτια, αναισθητοποιημένα με φαινοβαρβιτάλη με καρδιακή παρακέντηση. Τα ποντίκια στη συνέχεια θυσιάστηκαν με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας. Δείγματα γαστροκνήμιου μυός αφαιρέθηκαν για περαιτέρω βιοχημική ανάλυση. Τα επιθέματα λίπους (γοναδικό, οπισθοπεριτοναϊκό και μεσεντερικό λίπος) ανατέμθηκαν και ζυγίστηκαν. Η αναλογία ενός συγκεκριμένου βάρους επιθέματος λίπους προς το σωματικό βάρος υπολογίστηκε και εκφράστηκε ως δείκτης επιθέματος λίπους. Για να εξεταστεί η επίδραση της CT σε παχύσαρκα αρσενικά ποντίκια που τρέφονταν με HFD, τα αρσενικά ποντίκια χορηγήθηκαν ενδογαστρικά με CT (εναιωρημένη σε νερό) σε ημερήσια δόση 300 mg/kg.

2.5. Παρασκευάσματα δειγμάτων

Δείγματα πλάσματος, ομογενοποιήματα σκελετικών μυών (κλάσμα χωρίς πυρήνα) και μιτοχόνδρια σκελετικών μυών ελήφθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως (Leong et al., 2013).

2.6. Βιοχημική ανάλυση

2.6.1. Περιεκτικότητα σε γλυκόζη και λιπίδια πλάσματος

Τα επίπεδα γλυκόζης στο πλάσμα μετρήθηκαν με κιτ προσδιορισμού γλυκόζης (εξοκινάσης) (Sigma, St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Η ποσότητα γλυκόζης εκτιμήθηκε με την προσθήκη ενός μίγματος αντίδρασης που περιέχει 1,5 mM NAD, 1,0 mM ATP, 1,0 μονάδα/mL εξοκινάσης και 1.0 μονάδα/ mL γλυκόζης-6-φωσφορικής αφυδρογονάσης. Οι αλλαγές απορρόφησης στα 340 nm παρακολουθήθηκαν φασματοφωτομετρικά από Victor V3 Multi-Label Counter (Perkin Elmer, Santa Clara, CA, USA).

Τα επίπεδα των τριγλυκεριδίων (TG), της ολικής χοληστερόλης (TC) και της λιποπρωτεΐνης-χοληστερόλης υψηλής πυκνότητας (HDL) στο πλάσμα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ανάλυσης: TG: LabAssayTM Triglyceride, TC: LabAssayTM Cholesterol; HDL-C: Κιτ δοκιμής HDL-χοληστερόλης Ε. Τα περιεχόμενα TG, TC και HDL αξιολογήθηκαν με την προσθήκη των αντιδραστηρίων χρωμογόνου που παρέχονται από τα αντίστοιχα κιτ δοκιμασίας. Οι αλλαγές απορρόφησης στα 600 nm παρακολουθήθηκαν (Siddiqua, Hamid, Ar-Rashid, Akther, & Choudhuri, 2010). Το επίπεδο λιποπρωτεΐνης-χοληστερόλης χαμηλής πυκνότητας (LDL) υπολογίστηκε με τον τύπο του Friedewald:

LDL= TC-( HDL συν TG/5)

2.6.2. Δραστηριότητα φωσφοφρουκτοκινάσης (PFK) στους σκελετικούς μυς

Η δραστικότητα PFK αξιολογήθηκε με ανάμιξη ενός μίγματος αντίδρασης που περιέχει 1 mM φρουκτόζη-6-φωσφορική, 1 mM ATP, 0.5 mM NADH, 2 mU/mL αλδολάση, 2 mU/mL ισομεράση τριοσοφωσφορικής, 2 mU /mL γλυκεροφωσφορική αφυδρογονάση στο ρυθμιστικό διάλυμα ανάλυσης (50 mM Tris-HCl, 5 mM MgCl2, 5 mM (NH4)2SO4, pH 7,4) με το κλάσμα χωρίς πυρήνα (50 ug πρωτεΐνη/mL) σκελετικών μυών σε τελικό όγκο 200 μL. Η οξείδωση του NADH στη συνέχεια μετρήθηκε παρακολουθώντας τις αλλαγές απορρόφησης στα 340 nm (Coelho, Costa, & Sola-Penna, 2007).

2.6.3. Δραστηριότητα κιτρικής συνθετάσης (CS).

Ένα μείγμα αντίδρασης για τη μέτρηση της δραστικότητας CS παρασκευάστηκε με ανάμειξη {{0}}.1 Μ ρυθμιστικού διαλύματος Tris (ρΗ 8.0), 0.058 mM ακετυλίου. -CoA, και 0,1 mM 5,5'-διθειοδις-(2-νιτροβενζοϊκό οξύ) (DTNB). Η αντίδραση ξεκίνησε με την προσθήκη οξαλοξικού (τελική συγκέντρωση: 0,5 mM). Η απορρόφηση στα 412 nm καταγραφόταν κάθε 30 δευτερόλεπτα στους 30 βαθμούς για 3 λεπτά (Carter, Rennie, Hamilton, & Tarnopolsky, 2001· Holloway, Bonen, & Spriet, 2009).

οφέλη για την υγεία του cistanche tubolosa

2.6.4. Δραστικότητα της υδροξυακυλο-συνένζυμου Α αφυδρογονάσης (-HAD).

Η δραστηριότητα -HAD μετρήθηκε με ανάμειξη του μίγματος της αντίδρασης που περιέχει 100 μM ακετοακετυλο-CoA και 100 μΜ -NADH σε ρυθμιστικό διάλυμα ανάλυσης (ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού καλίου 100 mM με 2 mM αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA), pH 7,3). Οι αλλαγές απορρόφησης στα 340 nm παρακολουθήθηκαν στους 30 βαθμούς για 2 λεπτά (Holloway et al., 2006).

2.6.5. Δραστικότητα παλμιτοϋλοτρανσφεράσης καρνιτίνης (CPT).

Η αξιολόγηση της δραστικότητας της CPT βασίστηκε στην καταλυόμενη από CPT παραγωγή CoA-SH από παλμιτυλ-CoA. Η αντίδραση ξεκίνησε με την προσθήκη L-καρνιτίνης (τελική συγκέντρωση 6 μΜ) στο μείγμα αντίδρασης (16 mM Tris, 2,5 mM EDTA, 2 mM DTNB και 50 μΜ παλμιτοϋλ-CoA, ρΗ 8,0). Η απορρόφηση στα 412 nm παρακολουθήθηκε στους 30 βαθμούς για 180 δευτερόλεπτα. Ο χιλιοστομοριακός συντελεστής απόσβεσης 13,6 mM−1 cm−1 για το 5'-θειο-2-νιτροβενζοϊκό (τελικό προϊόν) χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση της ενζυμικής δραστηριότητας. Μία μονάδα δραστικότητας CPT ορίζεται ως η ποσότητα του ενζύμου που καταλύει την απελευθέρωση 1 nmol CoA-SH σε 1 λεπτό (Karlic, Lohninger, Koeck, & Lohninger, 2002).

2.6.6. Μιτοχονδριακή αναπνοή

Οι ρυθμοί αναπνοής στα μιτοχόνδρια που απομονώθηκαν από τους σκελετικούς μύες ποντικού προσδιορίστηκαν όπως περιγράφεται από τους Wong και Ko (2013). Εν συντομία, η μιτοχονδριακή αναπνοή μετρήθηκε πολογραφικά με ένα ηλεκτρόδιο τύπου Clark (Hansatech Instruments, Norfolk) στους 30 βαθμούς . Μιτοχονδριακό κλάσμα (1 mg πρωτεΐνης/mL) επωάστηκε στο ρυθμιστικό αναπνοής (30 mM KCl, 6 mM MgCl2, 75 mM σακχαρόζη, 1 mM EDTA, 20 mM KH2PO4, ρΗ 7,0). Προστέθηκε διάλυμα υποστρώματος που περιείχε 15 mM πυροσταφυλικό νάτριο και 5 mM μηλικό νάτριο. Μετά την εξισορρόπηση, η αναπνοή κατάστασης 3 ξεκίνησε με την προσθήκη ADP (τελική συγκέντρωση 0,6 mM). Όταν όλη η προστιθέμενη ADP χρησιμοποιήθηκε για την παραγωγή ATP, προστέθηκε ολιγομυκίνη για να προκαλέσει την αναπνοή της κατάστασης 4. Η αναλογία αναπνευστικού ελέγχου (RCR) υπολογίστηκε με τον υπολογισμό της αναλογίας των ρυθμών αναπνοής της κατάστασης 3 προς την κατάσταση 4 (Jiang et al., 2009).

2.6.7. Έκφραση UCP3

Το επίπεδο UCP3 υπολογίστηκε με ανάλυση στυπώματος Western χρησιμοποιώντας αντίσωμα αντι-UCP3 (Ε-18) μετά από ανάλυση SDS-PAGE του μιτοχονδριακού κλάσματος, χρησιμοποιώντας διαχωριστική γέλη ακρυλαμιδίου 10 τοις εκατό. Μιτοχονδριακά κλάσματα που απομονώθηκαν από σκελετικό μυ ποντικού (100 g) φορτώθηκαν και η οξειδάση του κυτοχρώματος c (COX) χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης για αναφορά. Οι χρωματισμένες με ανοσολογικές ζώνες πρωτεΐνης αναλύθηκαν με πυκνομετρία (Quantiscan, Biosoft, Cam bridge, GB, UK) και οι ποσότητες (αυθαίρετες μονάδες) της UCP3 κανονικοποιήθηκαν με αναφορά στο επίπεδο COX (αυθαίρετες μονάδες) στο δείγμα.

2.7. Δοκιμασία πρωτεΐνης

Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης Bio-Rad. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε από μια καμπύλη βαθμονόμησης χρησιμοποιώντας αλβουμίνη ορού βοοειδών (BSA) ως πρότυπο.

2.8. Στατιστική ανάλυση

Όλα τα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου (SEM), εκτός εάν ορίζεται διαφορετικά. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (μονόδρομη ANOVA) και η διαφορά μεταξύ των ομάδων ανιχνεύθηκε με δοκιμή εύρους Tukey όταν p <>

Cistanche herba

3. Αποτελέσματα

3.1. Επιδράσεις του HCF1 στο σωματικό βάρος σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD

Η διατροφή με δίαιτα ND προκάλεσε ελαφρά αύξηση στο σωματικό βάρος (κατά 13 τοις εκατό και 10 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια κατά τη διάρκεια του πειράματος 8-της εβδομάδας (Εικ. 1α). Η HFD επιτάχυνε την αύξηση του σωματικού βάρους, με την έκταση της διέγερσης να είναι 269 τοις εκατό και 320 τοις εκατό, αντίστοιχα, σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια, σε σύγκριση με τα αντίστοιχα ζώα ND (Εικ. 1α). Οι αλλαγές στο σωματικό βάρος κατά τη διάρκεια του πειράματος 8-της εβδομάδας ποσοτικοποιήθηκαν και εκφράστηκαν σε αυθαίρετες μονάδες. Η θεραπεία με HCF1 κατέστειλε πλήρως την αύξηση του σωματικού βάρους σε αρσενικά ποντίκια που τρέφονταν με ND (Εικ. 1β). Η θεραπεία με HCF1 κατέστειλε επίσης δοσοεξαρτώμενα την αύξηση σωματικού βάρους σε ποντικούς που τρέφονταν με HFD, με τον βαθμό αναστολής να είναι 100 τοις εκατό και 61 τοις εκατό, αντίστοιχα, στα 45 mg/kg τόσο σε αρσενικά όσο και σε θηλυκά ποντίκια (Εικ. 1β). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική αλλαγή στην κατανάλωση τροφής κατά τη σίτιση με HFD και/ή τις συνθεραπείες με HCF1 σε σύγκριση με τα ποντίκια που ταΐστηκαν με ND χωρίς θεραπεία (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Εικ. 1 – Επιδράσεις του HCF1 στις αλλαγές του σωματικού βάρους σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD. Το σωματικό βάρος παρακολουθούνταν εβδομαδιαία κατά τη διάρκεια του 8-εβδομαδιαίου πειράματος. (α) Η χρονική πορεία των αλλαγών του σωματικού βάρους αναλύθηκε με ANOVA μικτού σχεδιασμού και η διαφορά μεταξύ των ομάδων ανιχνεύθηκε με τη δοκιμή εύρους Tukey. Τα δεδομένα εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με το αντίστοιχο αρχικό βάρος σώματος. (β) Οι αλλαγές στο σωματικό βάρος ποσοτικοποιήθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με τον έλεγχο ND [τιμή AUC ελέγχου (αυθαίρετη μονάδα): αρσενικό=777.6 ± 10.4; θηλυκό {{10}}.0 ± 8,0]. Οι τιμές που δίνονται είναι οι μέσοι όροι ± SEM, με n=15. * Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο της ΝΔ. # Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο HFD (p <>

3.2. Επιδράσεις του HCF1 στους δείκτες λίπους σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD

Εξετάστηκαν επίσης οι επιδράσεις του HCF1 στη συσσώρευση λίπους. Η HFD προκάλεσε σημαντικές αυξήσεις στους δείκτες του υποδόριου και του σπλαχνικού λίπους σε αρσενικά (κατά 346 τοις εκατό και 325 τοις εκατό, αντίστοιχα) και θηλυκά (κατά 248 τοις εκατό και 257 τοις εκατό, αντίστοιχα) ποντίκια (Εικ. 2). Ενώ η θεραπεία με HCF1 δεν είχε καμία επίδραση στο υποδόριο και στο σπλαχνικό λίπος σε ποντίκια που τρέφονταν με ND, η ικανότητα του HCF1 να αναστέλλει την επαγόμενη από την HFD αύξηση σωματικού βάρους συσχετίστηκε με τη μείωση της μάζας σωματικού λίπους, όπως υποδεικνύεται από μειώσεις και στα δύο υποδόριο και σπλαχνικό λίπος σε αρσενικά που τρέφονται με HFD (κατά 42 τοις εκατό και 49 τοις εκατό, αντίστοιχα, στα 45 mg/kg) και στο σπλαχνικό λίπος σε θηλυκά ποντίκια που τρέφονται με HFD (κατά 53 τοις εκατό, στα 45 mg/kg) (Εικ. 2) .

Εικ. 2 – Επιδράσεις του HCF1 στους δείκτες λίπους σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD. Η μάζα του υποδόριου λίπους και του σπλαχνικού λίπους μετρήθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με τον έλεγχο ND. Οι τιμές που δίνονται είναι οι μέσοι όροι ± SEM, με n=15. * Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο της ΝΔ. # Σημαντικά διαφορετικό από το στοιχείο ελέγχου HFD (p <>

3.3. Επιδράσεις του HCF1 στα περιεχόμενα γλυκόζης και λιπιδίων πλάσματος σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD

Η θεραπεία με HCF1 δεν άλλαξε τα περιεχόμενα γλυκόζης και λιπιδίων πλάσματος σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια που τρέφονταν με ND (Εικ. 3). Η σίτιση με HFD προκάλεσε σημαντική αύξηση στο επίπεδο γλυκόζης στο πλάσμα (κατά 39 τοις εκατό και 29 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια σε σύγκριση με τον αντίστοιχο μάρτυρα ND (Εικ. 3α). Το HCF1H ανέστρεψε την επαγόμενη από την HFD αύξηση στο επίπεδο γλυκόζης στο πλάσμα (κατά 41 και 64 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια (Εικ. 3α). Η HFD αύξησε επίσης σημαντικά τα επίπεδα TG στο πλάσμα (κατά 38 και 53 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια, σε σύγκριση με τον αντίστοιχο έλεγχο ND (Εικ. 3β). Τα HCF1 L και HCF1 M ανέστειλαν σημαντικά την επαγόμενη από HFD αύξηση των επιπέδων TG στο πλάσμα σε αρσενικά που τρέφονταν με HFD (κατά 135 και 192, αντίστοιχα) και θηλυκά (κατά 103 και 146 τοις εκατό, αντίστοιχα) ποντίκια (Εικ. 3β). Το HCF1H προκάλεσε σημαντική αύξηση στο επίπεδο TG στο πλάσμα (κατά 21 τοις εκατό) σε θηλυκά ποντίκια που τρέφονταν με HFD σε σύγκριση με τον μάρτυρα HFD που δεν υποβλήθηκε σε θεραπεία (Εικ. 3b). Εκτός από την TG πλάσματος, σημαντικές αυξήσεις στα επίπεδα TC στο πλάσμα παρατηρήθηκαν επίσης μετά τη σίτιση με HFD, με την έκταση των αυξήσεων να είναι 73 τοις εκατό και 100 τοις εκατό, αντίστοιχα, σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια (Εικ. 3γ). Οι αυξήσεις στο επίπεδο TC στο πλάσμα συσχετίστηκαν με σημαντική μείωση της αναλογίας HDL/LDL πλάσματος τόσο σε αρσενικά (κατά 29 τοις εκατό) όσο και σε θηλυκά (κατά 49 τοις εκατό) ποντίκια που τρέφονταν με HFD (Εικ. 3δ). Τα HCF1 M και HCF1 H μείωσαν την επαγόμενη από HFD αύξηση στο επίπεδο TC στο πλάσμα σε αρσενικά ποντίκια που τρέφονταν με HFD, με ταυτόχρονη αύξηση της αναλογίας HDL/LDL στο πλάσμα (κατά 255 τοις εκατό και 212 τοις εκατό, αντίστοιχα), σε σύγκριση με την HFD που δεν υποβλήθηκε σε θεραπεία έλεγχος (Εικ. 3γ και 3δ). Τα HCF1 L και HCF1 M κατέστειλαν την επαγόμενη από HFD αύξηση στο επίπεδο TC στο πλάσμα (κατά 22 τοις εκατό και 32 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε θηλυκά ποντίκια, χωρίς να παρατηρείται καμία αλλαγή στην αναλογία HDL/LDL πλάσματος (Εικ. 3γ και 3δ).

Εικ. 3 – Επιδράσεις του HCF1 στα περιεχόμενα γλυκόζης και λιπιδίων πλάσματος σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD. Τα επίπεδα γλυκόζης πλάσματος, TG και TC μετρήθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με τον έλεγχο ND [επίπεδο γλυκόζης πλάσματος ελέγχου (mg/dL): αρσενικό=91.1 ± 3.3, θηλυκό=86.0 ± 2.3; έλεγχος επιπέδου TG στο πλάσμα (mg/dL): αρσενικό=52.0 ± 1,7, θηλυκό=95,8 ± 4,1; έλεγχος επιπέδου TC στο πλάσμα (mg/dL): αρσενικό {{2{0}}.8 ± 4.3, θηλυκό=118.6 ± 5.4]. Οι τιμές που δίνονται είναι οι μέσοι όροι ± SEM, με n=15. * Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο της ΝΔ. # Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο HFD (p <>

3.4. Επιδράσεις του HCF1 στα περιεχόμενα ηπατικών λιπιδίων σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD

Η θεραπεία με HCF1 δεν άλλαξε τα επίπεδα ηπατικής TG και TC σε ποντικούς που τρέφονταν με ND (Εικ. 4). Η κατανάλωση HFD αύξησε σημαντικά τα επίπεδα ηπατικής TG (κατά 108 τοις εκατό και 135 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια, σε σύγκριση με τον αντίστοιχο έλεγχο ND (Εικ. 4α). Το HCF1 H, από τη μία πλευρά, κατέστειλε την επαγόμενη από HFD αύξηση στο επίπεδο ηπατικής TG (κατά 54 τοις εκατό) σε αρσενικά ποντίκια, σε σύγκριση με τον μάρτυρα HFD που δεν υποβλήθηκε σε θεραπεία (Εικ. 4a). Από την άλλη πλευρά, το HCF1 H αύξησε περαιτέρω το επίπεδο ηπατικής TG (κατά 14 τοις εκατό) σε θηλυκά ποντίκια που τρέφονταν με HFD, σε σύγκριση με τον αντίστοιχο μάρτυρα HFD χωρίς θεραπεία (Εικ. 4α). Η HFD προκάλεσε επίσης σημαντικές αυξήσεις στα επίπεδα ηπατικής TC (κατά 48 τοις εκατό και 26 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια (Εικ. 4β). Ενώ τα HCF1 L και HCF1 H κατέστειλαν σημαντικά την επαγόμενη από HFD αύξηση (κατά 42 και 44 τοις εκατό, αντίστοιχα) στα επίπεδα ηπατικής TC σε αρσενικά ποντίκια που τρέφονταν με HFD, μόνο το HCF1 H μπορούσε να έχει παρόμοια επίδραση σε θηλυκά ποντίκια που τρέφονταν με HFD. ο βαθμός αναστολής είναι 62 τοις εκατό (Εικ. 4β).

Εικ. 4 – Επιδράσεις του HCF1 στα περιεχόμενα ηπατικών λιπιδίων σε ποντικούς που τρέφονται με ND και HFD. Τα επίπεδα ηπατικής TG και TC μετρήθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με τον έλεγχο ND [επίπεδο ελέγχου ηπατικής TG (g/mg πρωτεΐνης): αρσενικό=31.7 ± 1.6, θηλυκό=38.5 ± 1.7; έλεγχος ηπατικού επιπέδου TC (g/mg πρωτεΐνης): αρσενικό=12.8 ± 0.4, γυναίκα=17.9 ± 1,2]. Οι τιμές που δίνονται είναι οι μέσοι όροι ± SEM, με n {{20}}. * Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο της ΝΔ. # Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο HFD (p <>

3.5. Επιδράσεις του HCF1 στις δραστηριότητες μεταβολικών ενζύμων σε σκελετικούς μυς που απομονώθηκαν από ποντίκια που τρέφονταν με ND και HFD

Η θεραπεία με HCF1 διέγειρε τη δραστηριότητα PFK στους σκελετικούς μυς είτε αρσενικών είτε θηλυκών ποντικών που τρέφονταν με ND, με την επίδραση στα αρσενικά ποντίκια να είναι πιο εμφανής (55 τοις εκατό έναντι 20 τοις εκατό αύξηση στα 45 mg/kg) (Εικ. 5α). Η κατανάλωση HFD προκάλεσε σημαντικές καταστολές στη δραστηριότητα PFK (κατά 16 τοις εκατό και 17 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια (Εικ. 5α). Το HCF1 H ανέστρεψε τις επαγόμενες από HFD καταστολές της δραστηριότητας PFK (κατά 153 τοις εκατό και 100 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια που τρέφονταν με HFD (Εικ. 5α). Τόσο η θεραπεία HFD όσο και η αγωγή με HCF1 δεν παρήγαγαν ανιχνεύσιμα αποτελέσματα στη δραστηριότητα CS σε σκελετικούς μυς αρσενικών ή θηλυκών ποντικών σε σύγκριση με τον αντίστοιχο μάρτυρα ND χωρίς θεραπεία (Εικ. 5β). Ο HCF1 δεν παρήγαγε καμία επίδραση στη δραστηριότητα -HAD του σκελετικού μυός αρσενικών ή θηλυκών ποντικών που τρέφονταν με ND (Εικ. 5γ). Η σίτιση με HFD διεγείρει τη δραστηριότητα -HAD (κατά 47 και 21 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια σε σύγκριση με τον έλεγχο ND που δεν υποβλήθηκε σε αγωγή (Εικ. 5γ). Το HCF1, σε όλες τις δοκιμασμένες δόσεις, ανέστειλε σημαντικά την επαγόμενη από HFD διέγερση στη δραστηριότητα -HAD σε αρσενικά ποντίκια, με τον βαθμό αναστολής να είναι 62 τοις εκατό, σε σύγκριση με τον μάρτυρα HFD που δεν υποβλήθηκε σε αγωγή (Εικ. 5γ). Η θεραπεία με HCF1 δεν προκάλεσε σημαντικές αλλαγές στη δραστηριότητα -HAD σε θηλυκά ποντίκια που τρέφονταν με ND και HFD (Εικ. 5γ). Ενώ το HCF1 H προκάλεσε σημαντική μείωση στη δραστηριότητα CPT (κατά 16 τοις εκατό ) του σκελετικού μυός σε αρσενικά ποντίκια που τρέφονταν με ND (Εικ. 5δ), τα HCF1 L και HCF1 M αύξησαν σημαντικά τη δραστηριότητα CPT κατά 24 τοις εκατό και 22 τοις εκατό σε τροφοδοτούμενα με ND θηλυκά ποντίκια σε σύγκριση με τον έλεγχο ND (Εικ. 5δ). Η σίτιση με HFD αύξησε επίσης τη δραστηριότητα CPT (κατά 13 τοις εκατό και 18 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά και θηλυκά ποντίκια. Το HCF1 ανέστρεψε την επαγόμενη από το HFD αύξηση στη δραστηριότητα της CPT, με τον βαθμό καταστολής να είναι 72 τοις εκατό σε αρσενικά ποντίκια (σε όλες τις δοκιμασμένες δόσεις) και 100 τοις εκατό σε θηλυκά ποντίκια (HCF1 L) (Εικ. 5δ).

Εικ. 5 – Επιδράσεις του HCF1 στις δραστηριότητες μεταβολικών ενζύμων σε σκελετικούς μυς που απομονώθηκαν από ποντίκια που τρέφονταν με ND και τρέφονται με HFD. Οι δραστηριότητες PFK, CS, -HAD και CPT σκελετικών μυών μετρήθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με τον έλεγχο ND [δραστηριότητα PFK ελέγχου (mU/mg πρωτεΐνη): αρσενικό=19.5 ± 1.1, θηλυκό=14.1 ± 0.7 ; έλεγχος δραστηριότητας CS (mU/mg πρωτεΐνης): αρσενικό=30.6 ± 1.3, θηλυκό=36.8 ± 3.6; Δραστηριότητα ελέγχου -HAD (mU/mg πρωτεΐνη): αρσενικό=13.5 ± 0.6, θηλυκό=16.8 ± 0.6; έλεγχος της δραστηριότητας CPT (mU/mg πρωτεΐνης): αρσενικό {{30}}.0 ± 0.3, θηλυκό=3.0 ± { {39}}.1]. Οι τιμές που δίνονται είναι οι μέσοι όροι ± SEM, με n=15. * Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο της ΝΔ. # Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο HFD (p <>

3.6. Επιδράσεις του HCF1 στο μιτοχονδριακό RCR σε σκελετικό μυ ποντικού

Η HFD δεν παρήγαγε ανιχνεύσιμη επίδραση στο μιτοχονδριακό RCR σε σκελετικό μυ ποντικού (Εικ. 6). Μιτοχονδριακή αποσύνδεση που προκαλείται από τη θεραπεία με HCF1 σε σκελετικό μυ ποντικού, όπως αποδεικνύεται από σημαντικές μειώσεις στο μιτοχονδριακό RCR τόσο σε ND-τρέφονται (61-69 τοις εκατό στους άνδρες, 66 τοις εκατό σε γυναίκες) όσο και σε HFD (73-78 τοις εκατό στους άνδρες, 67 –70 τοις εκατό σε θηλυκά) ποντίκια, σε σύγκριση με τα αντίστοιχα ζώα που δεν υποβλήθηκαν σε θεραπεία (Εικ. 6).

Εικ. 6 – Επιδράσεις του HCF1 στο μιτοχονδριακό RCR σε σκελετικούς μυς αρσενικών και θηλυκών ποντικών που τρέφονται με ND και HFD. Το μιτοχονδριακό RCR μετρήθηκε όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με τον έλεγχο ND. Οι τιμές που δίνονται είναι οι μέσοι όροι ± SEM, με n=15. * Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο της ΝΔ. # Σημαντικά διαφορετικό από το στοιχείο ελέγχου HFD (p <>

3.7. Επιδράσεις του HCF1 στην έκφραση UCP3 σε μιτοχόνδρια που απομονώθηκαν από σκελετικούς μυς ποντικού

Οι επιδράσεις του HCF1 στην έκφραση του UCP3 εξετάστηκαν επίσης για να διερευνηθεί η πιθανή εμπλοκή της μιτοχονδριακής αποσύνδεσης στην απώλεια βάρους που προκαλείται από HCF1-. Μια 2-εβδομαδιαία θεραπεία με HCF1 H αύξησε σημαντικά το επίπεδο UCP3 στα μιτοχόνδρια που απομονώθηκαν από σκελετικό μυ ποντικού σε αρσενικά ποντίκια, με την έκταση της διέγερσης να είναι 67 τοις εκατό σε σύγκριση με τον μάρτυρα χωρίς θεραπεία (Εικ. 7).

Εικ. 7 – Επιδράσεις του HCF1 στην έκφραση UCP3 σε μιτοχόνδρια που απομονώθηκαν από σκελετικούς μυς ποντικού. Αρσενικά ποντίκια χορηγήθηκαν ενδογαστρικά με HCF1 H για 14 διαδοχικές ημέρες. Τα μιτοχόνδρια απομονώθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι και η έκφραση UCP3 μετρήθηκε με ανάλυση στυπώματος Western. Τα δεδομένα ποσοτικοποιήθηκαν και εκφράστηκαν σε ποσοστό ελέγχου σε σχέση με τον μη επεξεργασμένο μάρτυρα. Οι τιμές που δίνονται είναι οι μέσοι όροι ± SEM, με n=4. * Σημαντικά διαφορετικό από τον μάρτυρα χωρίς θεραπεία.

3.8. Σύγκριση μεταξύ HCF1 και CT σχετικά με τις επιδράσεις τους σε ποντίκια που τρέφονται με ND και HFD

Για να κατανοηθεί καλύτερα ο μηχανισμός στον οποίο βασίζεται το αποτέλεσμα μείωσης βάρους που παρέχεται από το HCF1, μελετήθηκαν επίσης οι επιδράσεις του CT, ενός παράγοντα δέσμευσης χολικών οξέων, σε αρσενικά ποντίκια που τρέφονται με ND και με HFD. Τόσο η CT όσο και η HCF1 ανέστειλαν πλήρως την επαγόμενη από την ND αύξηση βάρους κατά τη διάρκεια της 8-εβδομαδιαίας πορείας του πειράματος. Και οι δύο θεραπείες παρήγαγαν επίσης κατασταλτικά αποτελέσματα στην επαγόμενη από HFD αύξηση του σωματικού βάρους, του δείκτη σπλαχνικού λίπους, της γλυκόζης πλάσματος/TG/TC καθώς και στο επίπεδο ηπατικής TG/TC, με την επίδραση της CT να είναι πιο εμφανής (Πίνακας 1). Σε αντίθεση με το HCF1, το οποίο αύξησε την αναλογία HDL/LDL πλάσματος μόνο σε ποντίκια που τρέφονταν με HFD, η CT αύξησε σημαντικά την αναλογία HDL/LDL πλάσματος τόσο σε ποντίκια που τρέφονταν με ND όσο και σε ποντίκια που τρέφονταν με HFD (κατά 58 τοις εκατό και 17 τοις εκατό, αντίστοιχα), σε σύγκριση με τον αντίστοιχο μη επεξεργασμένο μάρτυρα ND (Πίνακας 1). Επιπλέον, ενώ το HCF1 αύξησε τη δραστηριότητα PFK στους σκελετικούς μυς τόσο των αρσενικών ποντικών που τρέφονταν με ND (54 τοις εκατό) όσο και των ποντικών που τρέφονταν με HFD (14 τοις εκατό) σε σύγκριση με τον μάρτυρα ND που δεν υποβλήθηκε σε θεραπεία, η CT δεν παρήγαγε ανιχνεύσιμο αποτέλεσμα σε ποντίκια που τρέφονταν με ND και θα μπορούσε μόνο να αποκαταστήσει την επαγόμενη από HFD μείωση της δραστηριότητας PFK στην τιμή ελέγχου των ποντικών που τρέφονταν με ND (Πίνακας 1). Και οι δύο θεραπείες CT και HCF1 ανέστρεψαν τις επαγόμενες από HFD αυξήσεις στις δραστηριότητες -HAD (κατά 61 τοις εκατό και 60 τοις εκατό, αντίστοιχα) και CPT (κατά 122 τοις εκατό και 72 τοις εκατό, αντίστοιχα) σε αρσενικά ποντίκια (Πίνακας 1). Ενώ το HCF1 προκάλεσε μιτοχονδριακή αποσύνδεση, όπως αποδεικνύεται από σημαντικές μειώσεις στην τιμή του μιτοχονδριακού RCR σε αρσενικά ποντίκια που τρέφονταν με ND και HFD, η CT δεν παρήγαγε ανιχνεύσιμη επίδραση στην αποσύνδεση των μιτοχονδρίων (Πίνακας 1).

Για περισσότερες πληροφορίες, κάντε κλικ εδώ για να λάβετε το Μέρος II

Από: «Το Cistanches Herba μειώνει την αύξηση βάρους σε παχύσαρκα ποντίκια που προκαλούνται από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά, πιθανώς μέσω μιτοχονδριακής αποσύνδεσης» απόΟι Hoi Shan Wong et al.

---journal of functional foods 10 (2014) 292–304