Σύγκριση διαφορών περιεχομένου οκτώ χημικών συστατικών σε ωμά και επεξεργασμένα με κρασί προϊόντα δύο ειδών Cistanche Deserticola με βάση το UPLC Ⅱ
Jun 16, 2025
2. Μέθοδοι και αποτελέσματα
2.1 Χρωματογραφικές Συνθήκες
Η ανάλυση UPLC πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας αΣτήλη Waters ACQUITY UPLC™ BEH C18 (100 mm × 2,1 mm, μέγεθος σωματιδίων 1,7 μm). Η κινητή φάση αποτελούνταν απόμεθανόλη (Α)καιΥδατικό διάλυμα μυρμηκικού οξέος 0,1% (Β)με την ακόλουθη βαθμιδωτή έκλουση:
0–4 λεπτά: 10% → 26% Α
4–18 λεπτά: 26% → 40% Α
18–20 λεπτά: 40% → 50% Α
Ρυθμός ροής:0,3 mL/min
Όγκος ένεσης:3 μL
Θερμοκρασία στήλης:35°C
Μήκος κύματος ανίχνευσης:330 nm
2.2 Προετοιμασία Διαλύσεων
2.2.1 Μικτό διάλυμα αναφοράς
Ζυγίστε με ακρίβεια τις ακόλουθες τυπικές ενώσεις:σιστανοζίτη F, εχινακοσίδη, σιστανοζίτη Α, βερμπασκοσίδη, τουμπουλοσίδη Α, ισοβερβασκοσίδη, 2'-ακετυλοβερβασκοζίτης, καιτουμπουλοσίδη Β. Διαλύστε σε μεθανόλη 50% για να παρασκευαστεί ένα μείγμα αναφοράς με τις ακόλουθες συγκεντρώσεις (μg·mL-1):
Cistanoside F: 32,7
Εχινακοσίδη: 102,4
Κιστανοσίδη Α: 50,2
Βερμπασκοσίδη: 80,6
Tubuloside A: 25,6
Ισοβερβασκοσίδη: 86.3
2'-Ακετυλοβερβασκοσίδη: 77,3
Tubuloside B: 60,8
2.2.2 Δείγμα διαλύματος
Ακατέργαστες φέτες Cistancheπαρασκευάστηκαν με μαλάκωμα του βοτάνου, κοπή σε φέτες και ξήρανση.
Cistanche στον ατμό με κρασίπαρασκευάστηκε με εμποτισμό ακατέργαστων φετών σε κρασί ρυζιού 30%, βράζοντας το μείγμα στον ατμό για 12 ώρες, ψύξη και ξήρανση ξανά.
Περίπου0.2 gξηρής σκόνης (διερχόμενη από κόσκινο 65 mesh) ζυγίστηκε σε κεχριμπαρένια ογκομετρική φιάλη των 50 mL, εκχυλίστηκε με 25 mL μεθανόλης 50%, υποβλήθηκε σε υπερήχους για 40 λεπτά (250 W, 35 kHz) και επαναφέρθηκε στο βάρος. Το διάλυμα διηθήθηκε μέσω αΜεμβράνη 0,22 μmκαι το διήθημα χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση.
Σημείωση: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Ακατέργαστες φέτες Cistanche deserticola. RG. Ακατέργαστες φέτες Cistanche tubulosa. WH. Cistanche deserticola στιφάδο με κρασί. WG. Cistanche tubulosa βρασμένο με κρασί. Τα σχήματα 4 έως 7 είναι τα ίδια.
Εικόνα 1 Εικόνες από φαρμακευτικά υλικά Cistanche deserticola και Cistanche tubulosa, ακατέργαστες φέτες και βρασμένα με κρασί
ένα διάσημο κρασί από cistanche που πωλείται στην Κίνα
Υποστήριξη της Wecistanche-Επικοινωνήστε μαζί μας για να λάβετε ένα δείγμα ή λεπτομέρειες χονδρικής
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
2.3 Ποσοτική Ανάλυση 8 Κύριων Ενώσεων σε Ακατέργαστη και Επεξεργασμένη με Οίνο Cistanche
2.3.1 Καταλληλότητα συστήματος
Κάτω από τις χρωματογραφικές συνθήκες που περιγράφονται, ο θεωρητικός αριθμός πινακίδας γιαεχινακοσίδη exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Τα χρωματογραφήματα του μικτού προτύπου, του ακατέργαστου Cistanche της ερήμου και των επεξεργασμένων με κρασί δειγμάτων φαίνονται στο Σχήμα 2.
Αναγνώριση κορυφής:
Cistanoside F
Εχινακοσίδη
Κιστανοσίδη Α
Βερμπασκοσίδη
Tubuloside A
Ισοβερβασκοσίδη
2'-Ακετυλοβερβασκοσίδη
Tubuloside B
cistanche deserticola
cistanche tubulosa
2.3.2 Γραμμικότητα και Όρια ανίχνευσης
Καθιερώθηκαν τυπικές καμπύλες βαθμονόμησης χρησιμοποιώντας σειριακές αραιώσεις του μίγματος αναφοράς σε συγκεντρώσεις 0,1 έως 5,0 mL. Οι καμπύλες βαθμονόμησης δημιουργήθηκαν με γραφική παράστασησυγκέντρωση (X)έναντιπεριοχή κορυφής (Y). Τα όρια ανίχνευσης (LOD, S/N=3) και τα όρια ποσοτικοποίησης (LOQ, S/N=10) προσδιορίστηκαν και επιβεβαίωσαν την καλή γραμμικότητα στα εύρη που δοκιμάστηκαν.
2.3.3 Ακρίβεια
Έδειξαν έξι επαναλαμβανόμενες ενέσεις του μικτού διαλύματος αναφοράςσχετικές τυπικές αποκλίσεις (RSD)των περιοχών κορυφής που κυμαίνονται από0,48% έως 2,14%, υποδεικνύοντας εξαιρετική ακρίβεια οργάνων.
2.3.4 Σταθερότητα
Δείγματα λύσεων τουακατέργαστη σκόνη Cistanche (Αριθμός παρτίδας. 160901)αναλύθηκαν στις 0, 2, 4, 8, 12 και 24 ώρες. Τα RSD των περιοχών αιχμής και για τις 8 ενώσεις κυμαίνονταν από0,71% έως 1,93%, επιβεβαιώνονταςσταθερότητα διαλύματος εντός 24 ωρών.
Πίνακας 1. Δείγμα Πληροφορίες Υλικών Cistanche
| Πηγή Είδος | Δείγμα ταυτότητας | Προέλευση | Αριθμός παρτίδας |
|---|---|---|---|
| Cistanche deserticola | H1 | Εσωτερική Μογγολία | 160901 |
| H2 | Σιντζιάνγκ | 1712301 | |
| H3 | Σιντζιάνγκ | 1712305 | |
| H4 | Σιντζιάνγκ | 1712306 | |
| H5 | Σιντζιάνγκ | 1712307 | |
| H6 | Εσωτερική Μογγολία | 1712308 | |
| H7 | Σιντζιάνγκ | 180710 | |
| H8 | Σιντζιάνγκ | 180710 | |
| H9 | Σιντζιάνγκ | 180710 | |
| H10 | Σιντζιάνγκ | 180711 | |
| Cistanche tubulosa | G1 | Σιντζιάνγκ | 151201 |
| G2 | Σιντζιάνγκ | 170301 | |
| G3 | Σιντζιάνγκ | 1709001 | |
| G4 | Σιντζιάνγκ | 170601 | |
| G5 | Σιντζιάνγκ | 1712302 | |
| G6 | Σιντζιάνγκ | 1712303 | |
| G7 | Σιντζιάνγκ | 1712304 | |
| G8 | Σιντζιάνγκ | 180710 | |
| G9 | Σιντζιάνγκ | 180710 | |
| G10 | Σιντζιάνγκ | 180712 |
| Εχινακοσίδη |
| Κιστανοσίδη Α |
| Βερμπασκοσίδη |
2.3.5 Επαναληψιμότητα
Έξι ανεξάρτητα παρασκευασμένα αντίγραφα της ίδιας παρτίδας Cistanche έδειξαν καλή επαναληψιμότητα. Το μέσο περιεχόμενο (mg·g-1) και τα RSD ήταν τα εξής:
| Χημική ένωση | Μέσος όρος Περιεχόμενο (mg/g) | RSD (%) |
|---|---|---|
| Cistanoside F | 0.24 | 1.24% |
| Εχινακοσίδη | 4.49 | 0.25% |
| Κιστανοσίδη Α | 0.56 | 1.93% |
| Βερμπασκοσίδη | 2.52 | 1.40% |
| Tubuloside A | 0.59 | 1.15% |
| Ισοβερβασκοσίδη | 1.49 | 0.71% |
| 2'-Ακετυλοβερβασκοσίδη | 1.23 | 1.94% |
| Tubuloside B | 0.86 | 1.02% |
2.3.6 Δοκιμή ανάκτησης
Η ανάκτηση δοκιμάστηκε με αιχμήέξι αντίγραφα σκόνης Cistanche (0,1 g)με γνωστές συγκεντρώσεις των 8 ενώσεων αναφοράς. Οι μέσες ανακτήσεις κυμαίνονταν από95,56% σε 102,71%, με RSD ανάμεσα1,44% και 2,97%, υποδεικνύονταςεξαιρετική αξιοπιστία εξαγωγής και ποσοτικοποίησης.
Σημείωση: Α. Μικτή αναφορά. B. Raw Cistanche deserticola; Γ. Βρασμένο Cistanche deserticola σε κρασί. 1. Cistancheside F; 2. Εχινακοσίδη; 3. Cistancheside A; 4. Βερμπασκοσίδη; 5. Tubuloside A; 6. Ισοβερβασκοσίδη; 7. 2΄-ακετυλοβερβασκοσίδη; 8. Tubuloside B.
2.3.7 Ποσοτικοποίηση των ενεργών ενώσεων σε ακατέργαστο σε σύγκριση με επεξεργασμένο σε κρασί Cistanche
Κάθε δείγμα εξετάστηκε εις διπλούν. Οι 8 ενώσεις στόχοι προσδιορίστηκαν ποσοτικά σε10 παρτίδες Cistanche deserticola(ωμό και επεξεργασμένο κρασί) και10 παρτίδες Cistanche tubulosa. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στον Πίνακα 3, προσφέροντας πληροφορίες για:
Διαφορές σύνθεσης ανάλογα με το είδος
Αλλαγές στο φυτοχημικό περιεχόμενο μετά την επεξεργασία του κρασιού
Αναλυτικό δακτυλικό αποτύπωμα για έλεγχο ποιότητας Cistanche
Πίνακας 2. Καμπύλες βαθμονόμησης, συντελεστές συσχέτισης (r), γραμμικές περιοχές, LOD και LOQ για οκτώ ενώσεις
| Χημική ένωση | Εξίσωση βαθμονόμησης | r | Γραμμικό εύρος (μg·mL-1) | LOD (μg·mL-1) | LOQ (μg·mL-1) |
|---|---|---|---|---|---|
| Cistanoside F | Y=4.89 × 10⁹X + 3.31 × 10³ | 0.9999 | 0,327–32,700 | 0.0521 | 0.1300 |
| Εχινακοσίδη | Y=3.88 × 10⁹X + 1.71 × 104 | 0.9999 | 1.024–102.400 | 0.0422 | 0.1339 |
| Κιστανοσίδη Α | Y=5.08 × 10⁹X + 3.45 × 10³ | 0.9999 | 0,502–50,600 | 0.1006 | 0.4035 |
| Βερμπασκοσίδη | Y=3.88 × 10⁹X + 3.43 × 10³ | 0.9999 | 0,806–80,600 | 0.0732 | 0.1871 |
| Tubuloside A | Y=4.42 × 10⁹X + 1.07 × 10³ | 0.9999 | 0,256–25,600 | 0.0865 | 0.2876 |
| Ισοβερβασκοσίδη | Y=4.81 × 10⁹X + 5.29 × 10³ | 0.9999 | 0,863–86.300 | 0.0242 | 0.0734 |
| 2'-Ακετυλοβερβασκοσίδη | Y=5.30 × 10⁹X + 2.99 × 10³ | 0.9999 | 0,773–77,300 | 0.0317 | 0.1024 |
| Tubuloside B | Y=5.17 × 10⁹X + 3.39 × 10³ | 0.9999 | 0,608–60,800 | 0.1794 | 0.3876 |
2.4 Συγκριτική Ανάλυση της Χημικής Σύνθεσης μεταξύ των ειδών Cistanche
Για τη διερεύνηση τωνφυτοχημικές διαφορέςμεταξύCistanche deserticolaκαιCistanche tubulosa, οι συγκεντρώσεις των οκτώ κλειδιώνφαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδεςαπό10 παρτίδες δειγμάτων ακατέργαστων και επεξεργασμένων με κρασίκάθε είδους οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώνταςοικόπεδα κουτιών (Εικόνα 3). Η στατιστική ανάλυση αποκάλυψε ότι, εκτός από2'-ακετυλοβερβασκοζίτηςκαιτουμπουλοσίδη Β, έδειξαν οι περισσότερες άλλες ενώσειςσημαντικές διαφορές (P <0,05)μεταξύ των δύο ειδών τόσο σε ακατέργαστη όσο και σε επεξεργασμένη μορφή.
Ειδικά:
Σεακατέργαστο Cistanche, το περιεχόμενο τουκιστανοσίδη F, εχινακοσίδη, ισοβερβασκοσίδη, τουμπουλοσίδη Α και βερμπασκοσίδηήτανσημαντικά χαμηλότερασεC. deserticolaσε σύγκριση μεC. tubulosa(Ρ < 0,05).
Οδείγματα επεξεργασμένα με κρασίαντικατοπτρίζει παρόμοιες τάσεις.
Ιδιαίτερα,σιστανοζίτη Αβρέθηκε στουψηλότερα επίπεδα σεC. deserticolaκαι ήτανμη ανιχνεύσιμοςσεC. tubulosa, υποδηλώνοντας ότι μπορεί να χρησιμεύσει ως απιθανή ένωση δείκτηγια τη διαφοροποίηση των ειδών.
PLS-DA Chemometric Analysis of Cistanche Species
A Μερική ανάλυση διάκρισης ελάχιστων τετραγώνων (PLS-DA)διεξήχθη χρησιμοποιώντας τα δεδομένα συγκέντρωσης των οκτώ ενώσεων. Το προκύπτονδιαγράμματα βαθμολογίας (Εικόνα 4Α)έδειξε ότι τα ακατέργαστα και επεξεργασμένα δείγματα και από τα δύο είδη το έκανανδεν ομαδοποιούνται σε σαφώς διαχωρισμένες ομάδες.
Ωστόσο,τυχαίες δοκιμές μετάθεσης (Εικόνα 4Β)αποκάλυψε ότι το μοντέλο ήτανόχι υπερβολικά τοποθετημένο, ως οι αληθινές αξίες τουR²Y και Q²ήταν υψηλότερα από εκείνα των μεταθεμένων μοντέλων. Το σχετικάχαμηλές τιμές Q²προτείνωπεριορισμένη προβλεψιμότητα, πιθανότατα λόγωμεταβλητότητα εντός της ομάδαςκαιεπικαλυπτόμενες σειρές ενώσεωνμεταξύ ακατέργαστων και επεξεργασμένων μορφών.
Περαιτέρω μοντελοποίηση PLS-DA και ανάλυση VIP
Κατασκευάστηκαν ξεχωριστά μοντέλα PLS-DA για ακατέργαστα και επεξεργασμένα με κρασί δείγματα και των δύο ειδών προς διερεύνησηχημικές διαφορές ανά είδος. Παρατηρήθηκαν τα εξής:
Διαγράμματα βαθμολογίας (Εικόνες 5Α και 5Γ)έδειξεδιακριτή ομαδοποίησημεταξύC. deserticolaκαιC. tubulosaτόσο σε ακατέργαστη όσο και σε επεξεργασμένη μορφή.
Επικύρωση μοντέλου (Εικόνες 5Β και 5Δ)επιβεβαίωσε καλή προγνωστική ισχύ χωρίς υπερβολική προσαρμογή.
Μεταβλητή σημασία σε γραφήματα προβολής (VIP) (Εικόνες 6Α και 6Β)Προσδιόρισε βασικές ενώσεις που συμβάλλουν στη διάκριση των ειδών:
Γιαακατέργαστα δείγματα: Κιστανοσίδη Α, σιστανοζίτη F, εχινακοσίδη, καιβερμπασκοσίδηήταν πιο ενημερωτικές.
Γιαδείγματα επεξεργασμένα με κρασί: Κιστανοσίδη Ακαιτουμπουλοσίδη Βέπαιξε κυρίαρχους ρόλους.
2.5 Επίδραση της επεξεργασίας κρασιού στη φυτοχημεία του Cistanche
Λόγω της σημαντικής διακύμανσης της περιεκτικότητας σε ένωση μεταξύ των παρτίδων,ζευγαρωμένες συγκρίσειςκατασκευάστηκαν μεταξύ ακατέργαστων και οινοκατεργασμένων δειγμάτων τουίδια παρτίδα. Τα αποτελέσματα, οπτικοποιημένα χρησιμοποιώνταςοικόπεδα βιολιού (Εικόνα 7), αποκάλυψε τα εξής:
ΣεC. deserticola, επίπεδα των2'-ακετυλοβερβασκοζίτης, κιστανοζίτης Α, κιστανοσίδης F, εχινακοσίδης, τουμπουλοσίδης Α και βερμπασκοσίδης μειώθηκε σημαντικάμετα-επεξεργασία (P < 0,05), ενώτουμπουλοσίδη Β αυξήθηκε.
ΣεC. tubulosa, επίπεδα των2'-ακετυλοβερβασκοζίτης, εχινακοσίδης και βερμπασκοσίδηςεπίσηςμειώθηκε, ενώισοβερβασκοσίδης και τουμπουλοσίδης Β αυξήθηκεσημαντικά (P <0,05).
Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η επεξεργασία του κρασιού μπορεί να οδηγήσει σευδρόλυση, ισομερισμός, ήχημικός μετασχηματισμόςενεργών συστατικών.
3. Συζήτηση
Σύμφωνα με τοΈκδοση 2020 της Κινεζικής Φαρμακοποιίας, Cistanche deserticolaπρέπει να περιέχει όχι λιγότερο από0.3%του συνδυασμένου περιεχομένου τουεχινακοσίδη και βερμπασκοσίδη, ενώCistanche tubulosaπρέπει να περιέχει όχι λιγότερο από1.5%από αυτές τις δύο ενώσεις. Σε αυτή τη μελέτη, όλα τα ακατέργαστα και επεξεργασμένα δείγματα - εκτός από μία παρτίδα (180710) - πληρούσαν αυτά τα πρότυπα.
Παράμεταβλητότητα από παρτίδα σε παρτίδασε κάθε είδος (ορισμένες ενώσεις διέφεραν έως και 10 φορές, όπως η τουμπουλοσίδη Α και η ισοβερβασκοσίδη), παρατηρήθηκαν σταθερά στατιστικά σημαντικές διαφορές στην περιεκτικότητα σε ένωση μεταξύ των δύο ειδών. Αυτό το επιβεβαιώνειΗ προέλευση του είδους είναι ένας σημαντικός παράγονταςπου επηρεάζουν τη φυτοχημική σύνθεση.
Εξάλλου,σιστανοζίτη Αήτανανιχνεύεται μόνο σεC. deserticolaκαι απουσιάζει σεC. tubulosa, καθιστώντας το απολύτιμος δείκτης για την πιστοποίηση ειδών, ειδικά σε φαρμακογνωστικές ρυθμίσεις ή ρυθμίσεις ποιοτικού ελέγχου.
🔬 Επίδραση της Επεξεργασίας Οίνου στη Χημική Σύνθεση
Μετά την επεξεργασία του κρασιού, και τα δύο είδη παρουσίασαν σταθερή τάση:
Μειωμένα επίπεδατου:
Κιστανοσίδη F, εχινακοσίδη, κιστανοσίδη Α, βερμπασκοσίδη, τουμπουλοσίδη Α και 2'-ακετυλοβερβασκοσίδη
Αυξημένα επίπεδατου:
Tubuloside B και isoverbascoside
Αυτές οι τάσεις μπορεί να προκύψουν απόχημική υδρόλυση, υποβιβασμός, ήδομική αναδιάταξηκατά τη διαδικασία του ατμού. Είναι ενδιαφέρον ότι τοΤο μέγεθος και η κατεύθυνση των αλλαγών διέφεραν μεταξύ των παρτίδων, πιθανότατα λόγω διαφορών σε:
Αρχικές συγκεντρώσεις ένωσης
Μορφολογία βοτάνων (μέγεθος, πάχος)
Ευαισθησία στις συνθήκες επεξεργασίας
Αυτό υπογραμμίζει τη σημασία τουτυποποίηση των παραμέτρων επεξεργασίαςκαι διεύθυνσηαξιολογήσεις ποιότητας για συγκεκριμένες παρτίδεςκατά την προετοιμασία με βότανα.
