Οι πολυσακχαρίτες Cistanche αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του προστάτη και προκαλούν απόπτωση μέσω της δημιουργίας ROS και της καταστολής των αντιοξειδωτικών γονιδίων
Jun 10, 2025
Περίληψη:
Σκοπός:Για τη διερεύνηση των επιπτώσεων και των υποκείμενων μηχανισμών τουΠολυσακχαρίτες Cistancheσχετικά με τον πολλαπλασιασμό και την απόπτωση τουκαρκινικά κύτταρα του προστάτη.
Μέθοδοι:
Τα κύτταρα DU145 του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη υποβλήθηκαν σε αγωγή με χαμηλές, μεσαίες και υψηλές συγκεντρώσειςΠολυσακχαρίτες Cistanche(20, 40 και 80 mg/mL, αντίστοιχα). Ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τοΔοκιμασία ΜΤΤ, και η απόπτωση αξιολογήθηκε απόκυτταρομετρία ροής. Ενδοκυττάριοςαντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS)Τα επίπεδα μετρήθηκαν μέσω κυτταρομετρίας ροής, ενώγλουταθειόνη (GSH)τα επίπεδα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώνταςELISA. Τα επίπεδα έκφρασης mRNA και πρωτεΐνης τουΚαταλυτική υπομονάδα λιγάσης γλουταμικού-κυστεΐνης (GCLC), Υπομονάδα τροποποίησης λιγάσης γλουταμικού-κυστεΐνης (GCLM), καιαναγωγάση θειορεδοξίνης 1 (TXNRD1)αναλύθηκαν απόRT-PCRκαιWestern blot, αντίστοιχα.
Αποτελέσματα:
Η μισή-μέγιστη ανασταλτική συγκέντρωση (IC50) τουΠολυσακχαρίτες Cistancheστα κύτταρα DU145 ήταν 40,35 mg/mL, επομένως επιλέχθηκαν 40 mg/mL ως η μέση δόση για τα επόμενα πειράματα. Οι χαμηλές, μεσαίες και υψηλές δόσεις ορίστηκαν ως 50%, 100% και 200% του IC50, αντίστοιχα.
Όλες οι ομάδες θεραπείας εμφάνισαν σημαντικά αυξημένα ποσοστά απόπτωσης σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Οομάδα Cistanche υψηλής δόσηςπαρουσίασε τη μεγαλύτερη αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και τον υψηλότερο ρυθμό απόπτωσης, ακολουθούμενη από τις ομάδες μέσης και χαμηλής δόσης (P< 0,01). Τα επίπεδα ROS ήταν σημαντικά αυξημένα και τα επίπεδα GSH μειώθηκαν σημαντικά σε όλουςΟμάδες που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Cistancheέναντι του ελέγχου. Συγκεκριμένα, τοομάδα υψηλής δόσηςείχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα ROS και χαμηλότερα επίπεδα GSH από τις ομάδες μεσαίας και χαμηλής δόσης (P< 0,05); η ομάδα μεσαίας δόσης παρουσίασε παρόμοιες διαφορές σε σύγκριση με την ομάδα χαμηλής δόσης (P< 0,05).
Επίπεδα έκφρασης τουGCLC, GCLM, καιTXNRD1(τόσο το mRNA όσο και η πρωτεΐνη) υπορυθμίστηκαν σημαντικά σε όλες τις ομάδες που έλαβαν Cistanche σε σύγκριση με τον έλεγχο (P< 0,05). Οομάδα υψηλής δόσηςέδειξε την πιο σημαντική καταστολή αυτών των γονιδίων και πρωτεϊνών που σχετίζονται με αντιοξειδωτικά, ακολουθούμενη από τις ομάδες μεσαίας και χαμηλής δόσης (P< 0,05).
Σύναψη:
Πολυσακχαρίτες Cistancheαναστέλλουν την έκφραση αντιοξειδωτικών παραγόντωνGCLC, GCLM, καιTXNRD1, μειώνοντας έτσιΣύνθεση GSH, προωθώνταςΣυσσώρευση ROS, και τελικά προκαλώνταςαπόπτωση στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότιCistancheμπορεί να χρησιμεύσει ως αφυσικός θεραπευτικός παράγονταςγια τον καρκίνο του προστάτη μέσωμηχανισμοί που προκαλούνται από το οξειδωτικό στρες.
Εκχύλισμα Cistanche με υψηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες
Υποστήριξη της Wecistanche-Επικοινωνήστε μαζί μας για να λάβετε μια τιμή χονδρικής
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Ιστορικό και Μέθοδοι
Καρκίνος του προστάτηαντιπροσωπεύει περίπου7,1% όλων των κακοηθειών στους άνδρες, με τη μέγιστη επίπτωση να εμφανίζεται μετά την ηλικία των 60 ετών. Καθώς ο πληθυσμός της Κίνας συνεχίζει να γερνάει, η επίπτωση αυτής της ασθένειας αναμένεται να αυξηθεί περαιτέρω [1]. Μελέτες δείχνουν ότι ο υψηλός επιπολασμός του καρκίνου του προστάτη στους ηλικιωμένους άνδρες μπορεί να σχετίζεται μεεκφυλιστικές αλλαγές στον προστάτη, γενετική προδιάθεση, διατροφικές συνήθειες, καιπαράγοντες του τρόπου ζωής [2].
Χειρουργική εκτομήπαραμένει βασικός άξονας στη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη, με στόχο την αφαίρεση του μεγαλύτερου μέρους της μάζας του όγκου. Ωστόσο, σχετίζεται με σημαντικές επιπλοκές, όπως π.χακράτεια ούρων, σεξουαλική δυσλειτουργίακαι το πιο επικριτικό,υποτροπή του όγκου και μετάσταση, οι οποίες είναι κύριες αιτίες κακής πρόγνωσης [3].
Τα τελευταία χρόνια,Παραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική (TCM)έχει κερδίσει αυξανόμενη προσοχή για το ρόλο του στη θεραπεία του καρκίνου. Το TCM μπορεί να βοηθήσειενίσχυση της ανοσίας, εξουδετερώσει τις παρενέργειες χημειοθεραπείας/ακτινοθεραπείας, καιενισχύουν την αποτοξίνωση. Κάποια φαρμακευτικά βότανα παρουσιάζουν επίσηςάμεσες αντικαρκινικές ιδιότητες, συμπεριλαμβανομένης της αναστολής της ανάπτυξης του όγκου καιπρόκληση απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα [4].
Μεταξύ αυτών,Cistanche (Cistanche deserticola)είναι ένα παραδοσιακό τονωτικό βότανο γνωστό για τοανοσοτροποποιητικό, αντιοξειδωτικό, καιαντικαρκινικά αποτελέσματα. Τα κύρια βιοδραστικά συστατικά του είναιπολυσακχαρίτεςκαιφαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες. Αυτή η μελέτη διερευνά τις επιπτώσεις και τον υποκείμενο μηχανισμό τουΠολυσακχαρίτες Cistancheεπίπολλαπλασιασμός και απόπτωση των κυττάρων DU145 του καρκίνου του προστάτη.
1. Υλικά και Μέθοδοι
1.1 Κύρια υλικά και αντιδραστήρια
DU145 ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα προστάτηελήφθησαν από την Tongpai Biotech (Σαγκάη, Κίνα).
Πολυσακχαρίτες Cistanche(Αριθμός παρτίδας: 0287181) αγοράστηκαν από την Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Κίνα).
Εμβρυϊκός βόειος ορός, πενικιλίνη/στρεπτομυκίνη, καιDMEMπαρασχέθηκαν από τη Zeta Life (ΗΠΑ).
Δοκιμασία ΜΤΤ, Κιτ απόπτωσης Annexin V/PI, Ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIPA, Κιτ ποσοτικοποίησης πρωτεΐνης BCAελήφθησαν από την Elabscience (Σαγκάη, Κίνα).
Κιτ ανίχνευσης αντιδραστικών ειδών οξυγόνου (ROS).καιΚιτ ELISA GSHαγοράστηκαν από το BioLab (Σαγκάη, Κίνα).
Αντιδραστήριο Trizol, κιτ αντίστροφης μεταγραφής, καιΚιτ PCRπροέρχονται από τη NeuroSym (Hangzhou, Κίνα).
Αντισώματα κατάGCLC, GCLM, TXNRD1, -ακτίνη, και τα αντίστοιχα δευτερεύοντα αντισώματα αγοράστηκαν από την UnivBio (Σαγκάη, Κίνα).
1.2 Δοκιμασία Κυτταρικής Καλλιέργειας και Πολλαπλασιασμού
Κύτταρα DU145 καλλιεργήθηκαν σεDMEM συμπληρωμένο με 10% FBS και 1% πενικιλλίνη/στρεπτομυκίνησε επωαστήρα CO2. Για τοΔοκιμασία ΜΤΤ, κύτταρα DU145 λογαριθμικής φάσης σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία μεΔιαλύματα πολυσακχαρίτη Cistancheσε συγκεντρώσεις του10, 20, 40 και 80 mg/mL. Η ομάδα ελέγχου έλαβε μόνο μέσο DMEM.
Μετά από 24 ώρες θεραπείας,20 µL 5 mg/mL MTTπροστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκε για 4 ώρες. Το υπερκείμενο αφαιρέθηκε και150 μL DMSOπροστέθηκε. Μετά από ανάδευση για 10 λεπτά, μετρήθηκε η απορρόφηση σε490 nmχρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών. ΟIC50υπολογίστηκε, και20, 40 και 80 mg/mLεπιλέχθηκαν ωςχαμηλές, μεσαίες και υψηλές δόσειςγια τα επόμενα πειράματα. Ορυθμός αναστολής του πολλαπλασιασμού των κυττάρωνυπολογίστηκε ως εξής:
Ποσοστό αναστολής (%)=(OD_control - OD_treated) / OD_control × 100
1.3 Δοκιμασία απόπτωσης
Τα κύτταρα DU145 λογαριθμικής φάσης υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις τουΠολυσακχαρίτες Cistancheσύμφωνα με ομαδοποιήσεις. Μετά τη στερέωση και τη χρώση,Αννεξίνη V-FITCκαιΠΙχρησιμοποιήθηκαν για την επισήμανση αποπτωτικών κυττάρων.Κυτταρομετρία ροήςδιεξήχθη για την ανίχνευση σημάτων φθορισμού και καταγράφηκε το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων.
1.4 Ανίχνευση ενδοκυτταρικών επιπέδων ROS και GSH
Τα επίπεδα ROS μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας αΑνιχνευτής φθορισμού ROSκαι κυτταρομετρία ροής. Τα επίπεδα GSH ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώνταςELISA. Παρασκευάστηκε μια τυπική καμπύλη χρησιμοποιώντας γνωστές συγκεντρώσεις προτύπων GSH και μετρήθηκε η απορρόφηση για τον υπολογισμό των συγκεντρώσεων GSH στα δείγματα.
1,5 RT-PCR για mRNA Έκφραση GCLC, GCLM, TXNRD1
Ολικό RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώνταςΤριζόλκαι συντέθηκε cDNA. Η PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ειδικών εκκινητών:
GCLC:
Εμπρός: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'
Αντίστροφη: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'
GCLM:
Εμπρός: 5'-CCGATGACGCCATAAAACGTCCGTAGC-3'
Αντίστροφη: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'
TXNRD1:
Εμπρός: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'
Αντίστροφη: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'
-ακτίνη (εσωτερικός έλεγχος):
Εμπρός: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'
Αντίστροφη: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'
Συνθήκες ενίσχυσης: 95 μοίρες για 60 δευτερόλεπτα, ακολουθούμενοι από 30 κύκλους 95 μοιρών για 30 δευτερόλεπτα, 60 μοιρών για 30 δευτερόλεπτα και 72 μοιρών για 60 δευτερόλεπτα. Τα προϊόντα PCR αναλύθηκαν μεηλεκτροφόρηση γέληςκαι η σχετική γονιδιακή έκφραση κανονικοποιήθηκε σε-ακτίνη.
1.6 Western Blotting για έκφραση πρωτεΐνης
Η ολική πρωτεΐνη εκχυλίστηκε χρησιμοποιώνταςκαι η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε απόΔοκιμασία BCA. Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν μεSDS-PAGE, μεταφέρθηκε σεΜεμβράνες PVDF, μπλοκαρίστηκε και επωάστηκε όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς με πρωτογενή αντισώματα κατάGCLC, GCLM, TXNRD1, και-ακτίνη. Μετά την επώαση μεΔευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με HRP, οι μπάντες οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώνταςχημειοφωταύγειακαι ποσοτικοποιήθηκε απόΛογισμικό ImageJ.
1.7 Στατιστική Ανάλυση
Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώνταςSPSS 25.0. Μονόδρομος ANOVA καιΔοκιμές LSD-tχρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό της στατιστικής σημαντικότητας.
