Περίληψη

Σκοπός:Να διερευνήσει τον μοριακό μηχανισμό με τον οποίο τοΦόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistancheασκεί νεφρική προστατευτική δράση σε ποντίκια με διαβητική νεφρική νόσο (DKD) ρυθμίζοντας την οδό σηματοδότησης της κυκλικής μονοφωσφορικής αδενοσίνης (cAMP).

Μέθοδοι:Τριάντα αρσενικά ποντίκια db/db χωρίς ειδικά παθογόνα (SPF) τράφηκαν προσαρμοστικά για 3 εβδομάδες. Ποντικοί με τυχαία επίπεδα γλυκόζης στο αίμα της φλέβας της ουράς μεγαλύτερα από ή ίσα με 11,1 mmol·L-1 και αναλογία μικρολευκωματίνης/κρεατινίνης ούρων μεγαλύτερη από ή ίση με 30 mg·g-1 θεωρήθηκαν επιτυχώς μοντελοποιημένα. Τα μοντελοποιημένα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες (n=6 ανά ομάδα): ομάδα μοντέλου, ομάδες τύπου Bushen Kaixuan Tongluo χαμηλής, μέσης και υψηλής δόσης (7, 14 και 28 g·kg-1·d-1) και μια ομάδα ιρβεσαρτάνης (20 mg·kg). Ως τυφλή ομάδα χρησιμοποιήθηκαν έξι db/m ποντικοί.

Η θεραπεία διήρκεσε για 12 εβδομάδες μέσω ενδογαστρικής χορήγησης. Οι γενικές καταστάσεις, το σωματικό βάρος και οι δείκτες νεφρικής λειτουργίας παρακολουθήθηκαν. Μετά την παρέμβαση, μετρήθηκε η γλυκόζη αίματος νηστείας (FBG). Χρησιμοποιήθηκε ένας αυτόματος βιοχημικός αναλυτής για την αξιολόγηση της κρεατινίνης ορού (SCr), του αζώτου της ουρίας του αίματος (BUN), της μικρολευκωματίνης των ούρων (uALB), της αναλογίας λευκωματίνης-κρεατινίνης (ACR), της ασπαρτικής αμινοτρανσφεράσης (AST), της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALT), της ολικής χοληστερόλης (TC), των πρωτεϊνικών ορών (TGPLE), των τριγλυκεριδίων (TGPLE) (GSP) και ινσουλίνη (INS).

Η ιστοπαθολογία νεφρικού ιστού αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας χρώση HE, PAS και τρίχρωμο Masson. Η ανοσοϊστοχημεία (IHC) ανίχνευσε εκφράσεις πρωτεϊνικής κινάσης Α (PKA) και πρωτεΐνης δέσμευσης στοιχείων απόκρισης cAMP (CREB). Το Western blot ανέλυσε τα επίπεδα PKA, φωσφορυλιωμένης PKA (ρ-ΡΚΑ), CREB, φωσφορυλιωμένης CREB (ρ-CREB) και Bcl-2. Χρησιμοποιήθηκε PCR πραγματικού χρόνου για την αξιολόγηση των εκφράσεων mRNA των PKA, CREB και Bcl-2.

Αποτελέσματα:Σε σύγκριση με την κενή ομάδα, η ομάδα μοντέλου εμφάνισε λήθαργο, μειωμένη δραστηριότητα και σημαντικά αυξημένο σωματικό βάρος (Ρ<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Σε σύγκριση με την ομάδα του μοντέλου, οι ομάδες που έλαβαν φόρμουλα εμφάνισαν βελτιωμένη γενική κατάσταση και πτωτική τάση στο σωματικό βάρος. Οι BUN, uALB, ACR, TC, GSP και INS μειώθηκαν σημαντικά (Σ<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Η ιστοπαθολογική ανάλυση αποκάλυψε ότι η ομάδα μοντέλων εμφάνισε κλασικά χαρακτηριστικά DKD, όπως πάχυνση της σπειραματικής βασικής μεμβράνης, διόγκωση μεσαγγείου θεμέλιας ουσίας και εναπόθεση κολλαγόνου στο διάμεσο σωληνάριο. Αυτές οι παθολογικές αλλαγές ανακουφίστηκαν σε όλες τις ομάδες θεραπείας.

Τα αποτελέσματα IHC έδειξαν σημαντικά μειωμένες εκφράσεις p-PKA και p-CREB στην ομάδα μοντέλου (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Το Western blot έδειξε ότι τα επίπεδα p-PKA/PKA, p-CREB/CREB και Bcl-2 μειώθηκαν σημαντικά στην ομάδα μοντέλου (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

Η PCR σε πραγματικό χρόνο επιβεβαίωσε την καθοδική ρύθμιση του PKA, CREB και Bcl-2 mRNA στην ομάδα μοντέλου (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Συμπεράσματα:ΟΦόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistancheβελτιώνει τη λειτουργία του ήπατος και των νεφρών, διορθώνει τις διαταραχές του μεταβολισμού των λιπιδίων και της γλυκόζης σε ποντίκια db/db. Η νεφρική προστατευτική του δράση σχετίζεται με τη ρύθμιση προς τα πάνω τουΔιαδρομή σηματοδότησης cAMP/PKA/CREB, που μειώνει τη νεφρική ίνωση και το οξειδωτικό στρες, προστατεύοντας έτσι τη νεφρική λειτουργία.

 

 

 

 

Φόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistanche γιαβελτίωση της λειτουργίας του ήπατος και των νεφρών

Κάντε κλικ στην εικόνα για περισσότερες λεπτομέρειες

Λέξεις-κλειδιά

Διαβητική νεφρική νόσο (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formula;
Cistanche;
Διαδρομή σηματοδότησης cAMP.
Παραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική (TCM)

 

Θεραπεία με βάση το Cistanche

 

Φόντο

Η διαβητική νεφρική νόσος (DKD), μια από τις πιο σοβαρές μικροαγγειακές επιπλοκές του διαβήτη, είναι η κύρια αιτία νεφρικής νόσου τελικού σταδίου (ESRD) παγκοσμίως. Ο αυξανόμενος επιπολασμός του αποτελεί σημαντική πρόκληση για τα δημόσια συστήματα υγείας. Τα χαρακτηριστικά της DKD περιλαμβάνουν προοδευτική επέκταση σπειραματικής μεσαγγειακής μήτρας, σωληναρισιακή διάμεση ίνωση και επίμονη πρωτεϊνουρία. Η παθογένεση περιλαμβάνει πολύπλοκες αλληλεπιδράσεις μεταξύ των διαταραχών του μεταβολισμού της γλυκόζης και των λιπιδίων, το οξειδωτικό στρες και την ανώμαλη ενεργοποίηση διαφόρων οδών σηματοδότησης.

Οι τρέχουσες θεραπείες πρώτης γραμμής περιλαμβάνουν κυρίως αναστολείς του συστήματος ρενίνης-αγγειοτενσίνης (RAS), οι οποίοι βοηθούν στη μείωση της σπειραματικής υπέρτασης και καθυστερούν την πρώιμη πρωτεϊνουρία. Ωστόσο, είναι λιγότερο αποτελεσματικά σε ασθενείς με εγκατεστημένη σωληναρισιακή διάμεση ίνωση, με το 30-40% να εξελίσσεται σε ESRD.

Ως εκ τούτου, η διερεύνηση νέων μηχανισμών DKD και η εύρεση αποτελεσματικών, ασφαλών θεραπευτικών στόχων είναι επείγοντος κλινικού και επιστημονικού ενδιαφέροντος. Η παραδοσιακή ιατρική προσφέρει ρύθμιση πολλαπλών στόχων με λιγότερες παρενέργειες, καθιστώντας την πιο κατάλληλη για μακροχρόνια χρήση σε χρόνια νεφρική νόσο. ΟΦόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistancheείναι ένα εμπειρικά επικυρωμένο μείγμα βοτάνων για DKD, που έχει δείξει σε προηγούμενες κλινικές δοκιμές για τη βελτίωση των συμπτωμάτων και την καθυστέρηση της εξέλιξης της νόσου.

Ωστόσο, ο μοριακός του μηχανισμός, ιδιαίτερα η αλληλεπίδρασή του με βασικές οδούς σηματοδότησης, παραμένει ελάχιστα κατανοητός. Τα στοιχεία υποδηλώνουν τηνcAMP/PKA/CREBμπορεί να μετριάσει τη νεφρική ίνωση, αλλά οι σχετικές μελέτες είναι περιορισμένες. Αυτή η μελέτη εστιάζει σε αυτό το μονοπάτι για να αποσαφηνίσει πώς αυτόΦόρμουλα με βάση το Cistancheβελτιώνει το DKD.

 

Υλικά και Μέθοδοι

1. Ζώα

30 αρσενικά ποντίκια db/db (ηλικίας 7 εβδομάδων, βαθμού SPF, σωματικό βάρος: 37,58±0,62 g)

6 ποντίκια db/m αντιστοίχισης ηλικίας (σωματικό βάρος: 24,38±0,35 g)

Πωλητής: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Άδεια: SCXK (Su) 2020-0009 και SYXK (Jing) 2020-0033

Έγκριση δεοντολογίας: BUCM2024041506-2090

2. Φυτική Σύνθεση

Η φόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo περιλαμβάνει (σε ​​γραμμάρια):
Cistanche(αντικαθιστά τον ακατέργαστο Astragalus) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa off, 20, 20,20 Euryale ferox (τηγανητό) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bintata 30, Dioscorea opposita 20.

Όλα τα βότανα επικυρώθηκαν από εξουσιοδοτημένο φαρμακοποιό και παρασκευάστηκαν με αφέψημα νερού, ανήχθησαν υπό κενό και ξηράνθηκαν με ψεκασμό για να σχηματίσουν σκόνη. Η τελική συγκέντρωση ήταν 1,43 g·mL-1 ακατέργαστων βοτάνων.

3. Αντιδραστήρια και όργανα

(Δείτε το αρχικό κείμενο για λεπτομερείς καταχωρήσεις.)

 

Πειραματικός Σχεδιασμός

Αξιολόγηση Μοντέλου

Μετά από 3 εβδομάδες προσαρμοστικής σίτισης, ποντίκια με τυχαία γλυκόζη αίματος μεγαλύτερη ή ίση με 11,1 mmol·L-1 και ACR μεγαλύτερη ή ίση με 30 mg·g-1 θεωρήθηκαν επιτυχημένα μοντέλα DKD.

Ομαδοποίηση και Δοσολογία

Κενή ομάδα (db/m): νερό

Ομάδα μοντέλων: νερό

Χαμηλή δόση: 7 g·kg-1·d-1

Μέση δόση: 14 g·kg-1·d-1

Υψηλή δόση: 28 g·kg-1·d-1

Ομάδα ιρβεσαρτάνης: 20 mg·kg-1·d-1

Διάρκεια: 12 εβδομάδες με δωρεάν σίτιση και πόση.

---

Συλλογή και ανάλυση δειγμάτων

Ούρο:Συλλέγεται για 24 ώρες, φυγοκεντρείται και αποθηκεύεται στους -20 βαθμούς

Αίμα:Συλλέγεται μέσω τροχιακής εξαγωγής, φυγοκεντρείται και αποθηκεύεται στους -80 βαθμούς

Νεφρά:Διαιρείται για παθολογία (σταθεροποιημένη με φορμαλίνη), πρωτεΐνη (υγρό άζωτο) και γονιδιακή έκφραση (κατεψυγμένη)

---

Μέθοδοι Ανίχνευσης

Βιοχημική ανάλυση:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP και uALB

Ιστοπαθολογία:HE, PAS, Masson χρώση

IHC:Έκφραση πρωτεΐνης p-PKA και p-CREB

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -ακτίνη

PCR σε πραγματικό χρόνο:Έκφραση mRNA των PKA, CREB και Bcl-2

---

Πίνακας 1. Αλληλουχίες εκκινητών

Γονίδιο	Εμπρός Primer (5′–3′)	Reverse Primer (5′–3′)	Μήκος (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95