Η επιλογή ενός βοτανικού συστατικού περιποίησης του δέρματος θα πρέπει να περιλαμβάνει περισσότερα από την εύρεση μιας ελκυστικής ιστορίας φυτών. Για μια επωνυμία περιποίησης δέρματος, κατασκευαστή με σύμβαση ή διανομέα συστατικών, οι πιο χρήσιμες ερωτήσεις είναι:

Ποιες ενώσεις υπάρχουν στο εκχύλισμα;

Πόσο σταθερά μπορεί ο κατασκευαστής να ελέγχει τις συγκεντρώσεις τους;

Ποια πειράματα υποστηρίζουν την προτεινόμενη εφαρμογή;

Ισχύουν τα στοιχεία για το πραγματικό συστατικό που αγοράζεται;

Τι πρόσθετες δοκιμές χρειάζονται πριν από την κυκλοφορία ενός τελικού προϊόντος;

Το τεχνικό έγγραφο που εξετάζεται σε αυτό το άρθρο εστιάζει σεβερμπασκοσίδη που προέρχεται από το Cistancheκαι τις προτεινόμενες εφαρμογές του στην παραγωγή λιπιδίων του δέρματος, την ενυδάτωση και την έρευνα που σχετίζεται με τους φραγμούς.

Περιγράφει τόσο μια διαδικασία καθαρισμού όσο και εργαστηριακά πειράματα που συγκρίνουν τον καθαρισμένο βερμπασκοσίδη με πολλά εκχυλίσματα Cistanche και άλλα συστατικά.

 

 

16% εκχύλισμα βερμπασκοσίδης κιστανσέ

Το κεντρικό εμπορικό μάθημα είναι απλό: ένα γενικό εκχύλισμα Cistanche και μια εξαιρετικά καθαρισμένη ένωση που προέρχεται από Cistanche δεν πρέπει να αντιμετωπίζονται ως εναλλάξιμα συστατικά.

Αποδεικτικό σημείωμα:Τα ευρήματα της έρευνας παρακάτω αναφέρονται στο κείμενο του κινεζικού διπλώματος ευρεσιτεχνίας που παρέχεται για μετάφραση. Το παρεχόμενο υλικό δεν περιλαμβάνει τα πρωτότυπα στοιχεία, πλήρη αριθμητικά σύνολα δεδομένων, λεπτομέρειες δημοσίευσης διπλωμάτων ευρεσιτεχνίας ή κλινικές μελέτες σε ανθρώπους. Ως εκ τούτου, θα πρέπει να εκλαμβάνεται ως τεχνική αποκάλυψη, όχι ως ανεξάρτητη επιβεβαίωση της αποτελεσματικότητας του τελικού προϊόντος ή ως έγκριση από τους κανονισμούς.

 

1. Τι είναι η βερμπασκοσίδη;

Η βερμπασκοσίδη είναι επίσης γνωστή ωςακτεοσίδη. Αυτά είναι ονόματα για την ίδια χημική ουσία, αντί για δύο διαφορετικά δραστικά συστατικά. Το μητρώο ουσιών του FDA παραθέτει και τα δύο ονόματα με την ίδια ταυτότητα ουσίας. (precision.fda.gov)

 

 

Στην παρεχόμενη αποκάλυψη, ο βερμπασκοσίδης περιγράφεται ως ένας φαινυλαιθανοειδής γλυκοσίδης που λαμβάνεται από τους ξηρούς σαρκώδεις μίσχους του είδους Cistanche. Οι κύριες βοτανικές πηγές που αναφέρονται είναι:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Cistanche salsa

Το έγγραφο διερευνά τη βερμπασκοσίδη ως πιθανή βοτανική δραστική για τοπικά σκευάσματα, με ιδιαίτερη προσοχή στον μεταβολισμό των λιπιδίων, την παραγωγή υαλουρονικού οξέος, τις πρωτεΐνες σφιχτής σύνδεσης και τη μετανάστευση κυττάρων.

Γιατί το όνομα έχει σημασία κατά την αγορά συστατικών

Όταν συγκρίνετε προσφορές προμηθευτών, ζητήστε επιβεβαίωση:

Το βοτανικό είδος και μέρος του φυτού.

Είτε το υλικό είναι ολόκληρο εκχύλισμα, τυποποιημένο εκχύλισμα ή καθαρισμένη ένωση.

Η μετρούμενη περιεκτικότητα σε βερμπασκοσίδη.

Χρησιμοποιείται η αναλυτική μέθοδος και το πρότυπο αναφοράς.

Εάν το αναφερόμενο ποσοστό αντιπροσωπεύει μια ανάλυση κατά μάζα ή ένα ποσοστό χρωματογραφικής περιοχής.

Μια αναφορά για το "εκχύλισμα Cistanche" από μόνη της δεν παρέχει αρκετές πληροφορίες για να προσδιοριστεί εάν αντιστοιχεί στο υλικό που αξιολογήθηκε σε ένα συγκεκριμένο πείραμα.

2. Γιατί η αποκάλυψη επικεντρώνεται στο φράγμα του δέρματος;

Το έγγραφο παρουσιάζει μια ερευνητική ιδέα πολλαπλών σημείων και όχι έναν απλό ισχυρισμό για την ενυδάτωση της επιφάνειας.

Η προτεινόμενη ακολουθία του είναι:

Ανανέωση επιδερμικών κυττάρων → ισχυρότερες συνδέσεις κυττάρου με κύτταρο → υποστήριξη λιπιδίων → παραγωγή υαλουρονικού οξέος → δραστηριότητα που σχετίζεται με την επισκευή

Για να διερευνήσουν αυτή την ιδέα, οι ερευνητές χρησιμοποίησαν κύτταρα HaCaT. Το HaCaT είναι μια απαθανατισμένη κυτταρική σειρά ανθρώπινων κερατινοκυττάρων που καθιερώθηκε ως εργαστηριακό μοντέλο για τη μελέτη της επιδερμικής βιολογίας και της κερατινοποίησης. Δεν είναι ένας τύπος κυττάρων που ονομάζεται φυσικά "HaCaT" στο δέρμα ενός ατόμου. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

Για τους αγοραστές συστατικών, αυτή η διάκριση έχει σημασία:Τα αποτελέσματα σε καλλιεργημένα κύτταρα αποτελούν σημείο εκκίνησης της έρευνας και όχι υποκατάστατο για τη δοκιμή ενός τελικού προϊόντος στο ανθρώπινο δέρμα.

Τα κύρια καταληκτικά σημεία που αναφέρθηκαν

Περιοχή έρευνας	Οι μετρήσεις περιγράφονται στο παρεχόμενο έγγραφο	Πρακτική ερμηνεία
Απόκριση κυττάρων	ανάλυση CCK-8	Ένα τελικό σημείο διαλογής. πρόσθετες μέθοδοι θα ενίσχυαν έναν ισχυρισμό διάδοσης
Δραστηριότητα που σχετίζεται με τα λιπίδια	Δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων; Έκφραση ACC, FASN και N-SMase	Υποστηρίζει περαιτέρω διερεύνηση του μεταβολισμού των λιπιδίων, αλλά δεν ποσοτικοποιεί άμεσα το πλήρες λιπιδικό προφίλ δερματικού φραγμού
Υαλουρονικό οξύ	περιεχόμενο HA; Έκφραση HAS2, HAS3 και CD44	Υποστηρίζει περαιτέρω διερεύνηση των οδών που σχετίζονται με το HA
Συνδέσεις κυψέλης σε κυψέλη	Επίπεδα Claudin-1 και occludin	Μετρά επιλεγμένες πρωτεΐνες σφιχτής σύνδεσης αντί για πλήρη λειτουργία φραγμού
Δραστηριότητα που σχετίζεται με επισκευές	Δοκιμασία κυτταρικής γρατσουνιάς	Ένα in vitro τελικό σημείο κλεισίματος κενού, όχι κλινική δοκιμή επούλωσης πληγών
Κατακράτηση υγρασίας	Διατήρηση μάζας σκευάσματος σε γυάλινες πλάκες	Μια εργαστηριακή δοκιμή σε επίπεδο σύνθεσης, όχι μια μελέτη ενυδάτωσης στο δέρμα

Αυτές οι ερμηνείες προκύπτουν από τις πειραματικές μεθόδους που περιγράφονται στο παρεχόμενο κείμενο.

 

3. Τι κάνει αυτή την έρευνα χρήσιμη για επιχειρήσεις περιποίησης δέρματος;

Η αποκάλυψη συγκρίνει πολλά υλικά αντί να υποθέσει ότι κάθε συστατικό που προέρχεται από το Cistanche παράγει την ίδια απόκριση.

Τα υλικά που δοκιμάστηκαν περιλαμβάνουν:

Εκχύλισμα πολυσακχαρίτη Cistanche.

Αρκετά εκχυλίσματα που περιέχουν φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδια.

Ένα ολικό εκχύλισμα φαινυλαιθανοειδούς γλυκοζίτη.

Εχινακοσίδη.

Καθαρισμένη βερμπασκοσίδη.

Σύμφωνα με το παρεχόμενο έγγραφο, η καθαρισμένη βερμπασκοσίδη έδειξε δραστηριότητα σε αρκετά από τα μετρούμενα τελικά σημεία. Ορισμένα μικτά εκχυλίσματα έδειξαν δραστικότητα σε ορισμένες δοκιμασίες αλλά όχι σε άλλες.

Το πακέτο αγορών

Αγοράστε την προδιαγραφή που ταιριάζει με τον αναπτυξιακό σας στόχο - όχι μόνο το όνομα της εγκατάστασης.

Για παράδειγμα:

Εάν το έργο σας βασίζεται στα πειράματα καθαρισμένης βερμπασκοσίδης, ζητήστε δεδομένα για το καθαρισμένο υλικό.

Εάν η σύνθεσή σας χρησιμοποιεί ένα τυποποιημένο πλήρες εκχύλισμα, ζητήστε δοκιμή σε αυτό το εκχύλισμα.

Εάν ένας προμηθευτής αναφέρει έρευνα για μια άλλη διαδικασία εκχύλισης, ρωτήστε εάν η δοκιμασμένη σύνθεση είναι συγκρίσιμη με το προσφερόμενο υλικό.

Τα στοιχεία για μια κατηγορία συστατικών δεν πρέπει να μεταφέρονται αυτόματα σε άλλη.

4. Πώς παρασκευάζεται η βερμπασκοσίδη στη γνωστοποίηση;

Η διαδικασία που περιγράφεται έχει τέσσερα κύρια στάδια:

Βοτανική προετοιμασία:Προεπεξεργαστείτε και κονιοποιήστε τα αποξηραμένα σαρκώδη στελέχη Cistanche.

Εξαγωγή:Χρησιμοποιήστε 50%-80% υδατική αιθανόλη.

Πλουτισμός:Διαχωρίστε τα κλάσματα χρησιμοποιώντας μια AB-8 μακροπορώδη ρητίνη προσρόφησης.

Κάθαρση:Χρησιμοποιήστε χρωματογραφία πυριτικής πηκτής, ακολουθούμενη από συμπύκνωση και ξήρανση με κατάψυξη.

Η δηλωμένη τελική καθαρότητα είναιτουλάχιστον 98%, αν και το παρεχόμενο κείμενο δεν περιλαμβάνει την αναλυτική επικύρωση ή τα δεδομένα παρτίδας που απαιτούνται για την ανεξάρτητη επιβεβαίωση αυτής της προδιαγραφής.

Ένα κρίσιμο ερώτημα για την παραγωγή: Υπολειμματικοί διαλύτες

Το αποκαλυπτόμενο βήμα χρωματογραφίας χρησιμοποιείχλωροφόρμιο και μεθανόλη.

Για ένα έργο εμπορικής προμήθειας, ζητήστε από τον κατασκευαστή την πραγματική λίστα διαλυτών παραγωγής, τους ελέγχους αφαίρεσης διαλυτών και τα αποτελέσματα υπολειμματικών διαλυτών για συγκεκριμένες παρτίδες. Το ICH Q3C παρέχει ένα φαρμακευτικό πλαίσιο για την αξιολόγηση των κινδύνων υπολειπόμενου διαλύτη. δεν θα πρέπει να αντιπροσωπεύεται ως καθολικό πρότυπο αποδοχής καλλυντικών. (ema.europa.eu)

Μην υποθέσετε ότι "προέλευση από φυτό" σημαίνει "φτιαγμένο μόνο με νερό και αιθανόλη".

 

5. Τι δείχνει στην πραγματικότητα το τεστ κατακράτησης υγρασίας;

Το παρεχόμενο έγγραφο περιγράφει μια σύγκριση μεταξύ:

Ένας ορός που περιέχει2% βερμπασκοσίδη.

Ένας ορός που περιέχει2% εχινακοσίδη.

Ένας ορός θετικού ελέγχου που περιέχει5% γλυκερίνη.

Τα δείγματα τοποθετήθηκαν στο25 βαθμοί και 50% σχετική υγρασία, και η μάζα τους μετρήθηκε με την πάροδο του χρόνου.

Η αποκάλυψη αναφέρει ότι το δείγμα που περιείχε βερμπασκοσίδη διατήρησε περισσότερη μάζα υπό αυτές τις συνθήκες.

Αυτή είναι μια δυνητικά χρήσιμη παρατήρηση διαλογής σκευασμάτων. Ωστόσο, η περιγραφόμενη μέθοδος δεν καθορίζει:

Ανώτερη ενυδάτωση στο ανθρώπινο δέρμα.

Χαμηλότερη διαεπιδερμική απώλεια νερού.

Κλινική υπεροχή έναντι της γλυκερίνης.

Καλύτερη απόδοση σε κάθε σύνθεση.

Ότι η παρατηρούμενη διαφορά προέκυψε μόνο από τα ονομαζόμενα ενεργά, χωρίς μια πλήρως αποκαλυπτόμενη σύγκριση ταιριάσματος οχήματος.

Για μια μάρκα που σχεδιάζει έναν συγκριτικό ισχυρισμό, δοκιμάστε τα τελικά σκευάσματα χρησιμοποιώντας μια κατάλληλα σχεδιασμένη μελέτη.

 

6. Μια πρακτική λίστα ελέγχου προμήθειας συστατικών Cistanche

Χρησιμοποιήστε τις ακόλουθες ερωτήσεις όταν αξιολογείτε έναν προμηθευτή εκχυλίσματος Cistanche ή έναν κατασκευαστή καθαρισμένου βερμπασκοσίδη.

Ερώτηση αγοράς	Τεκμηρίωση προς αίτηση
Ποια είναι η βοτανική πηγή;	Αναγνώριση ειδών, δήλωση μερών φυτού και πληροφορίες ιχνηλασιμότητας
Τι ακριβώς παρέχεται;	Πλήρης σύνθεση, συμπεριλαμβανομένων φορέων, βοηθημάτων επεξεργασίας και εκδόχων όπου υπάρχουν
Πόση ποσότητα βερμπασκοσίδης υπάρχει;	Πιστοποιητικό ανάλυσης και μεθόδου προσδιορισμού ειδικής παρτίδας
Πώς επιβεβαιώνεται η ταυτότητα;	Χρωματογραφική αναγνώριση και αναφορά-τυποποιημένες πληροφορίες
Ποιοι διαλύτες χρησιμοποιούνται;	Πραγματική δήλωση διαλύτη παραγωγής και αποτελέσματα δοκιμής υπολειμματικού διαλύτη
Πόσο συνεπής είναι η παραγωγή;	Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα από πολλές παρτίδες
Είναι το υλικό κατάλληλο για την προβλεπόμενη χρήση;	Τεκμηρίωση για την προβλεπόμενη χρήση και κατάλληλος φάκελος ασφαλείας
Θα λειτουργήσει στον επιλεγμένο τύπο;	Δεδομένα διαλυτότητας, συμβατότητας, σταθερότητας και συσκευασίας-ανάπτυξης
Τι υποστηρίζει τους προτεινόμενους ισχυρισμούς;	Εκθέσεις μελέτης για τον ίδιο βαθμό συστατικών και, κατά προτίμηση, το τελικό σκεύασμα

 

Μην χρησιμοποιείτε το "Φυσικό" ως συμπέρασμα ασφαλείας

Το παρεχόμενο κείμενο διπλώματος ευρεσιτεχνίας κάνει μια ευνοϊκή δήλωση ασφάλειας με βάση τη βοτανική προέλευση του συστατικού. Αυτή η δήλωση απαιτεί προσόντα για εμπορική δημοσίευση.

Ο FDA εξηγεί ότι η πηγή ενός συστατικού δεν καθορίζει την ασφάλειά του: τα φυτικής προέλευσης υλικά μπορεί επίσης να περιέχουν τοξικές ή αλλεργιογόνες ουσίες. Η ασφάλεια πρέπει να αξιολογείται για τις προβλεπόμενες συνθήκες χρήσης. (fda.gov)

Για αυτόν τον λόγο, ζητήστε τεκμηρίωση ασφαλείας αντί να βασίζεστε σε "φυσικές", "φυτικές" ή "υψηλής καθαρότητας" ως αυτόνομες διαβεβαιώσεις.

 

7. Πώς πρέπει μια μάρκα να συζητά την έρευνα;

Κρατήστε τρία στρώματα χωριστά:

Τι ισχυρίζεται η αποκάλυψη.

Τι μέτρησαν τα αναφερόμενα πειράματα.

Αυτό που έχει αποδειχθεί ότι κάνει το τελικό προϊόν.

Για παράδειγμα, η "διερεύνηση σε κύτταρα HaCaT για δραστηριότητα που σχετίζεται με τα λιπίδια" είναι ουσιαστικά διαφορετική από την "κλινικά αποδεδειγμένη επιδιόρθωση του δερματικού φραγμού".

Ομοίως, οι αναφορές για τη θεραπεία του εκζέματος, τη διαχείριση της ατοπικής δερματίτιδας ή την επούλωση τραυμάτων δεν θα πρέπει να αντιγράφονται απευθείας σε αξιώσεις συνηθισμένων καλλυντικών προϊόντων. Στις Ηνωμένες Πολιτείες, οι ισχυρισμοί ότι θεραπεύουν ασθένειες ή επηρεάζουν τη δομή ή τη λειτουργία του σώματος μπορεί να προκαλέσουν τη ρύθμιση ενός προϊόντος ως φάρμακο. (fda.gov)

Ένα ερευνητικό άρθρο ή αναφορά σε δίπλωμα ευρεσιτεχνίας δεν αποτελεί, από μόνο του, άδεια για την υποβολή ισχυρισμού θεραπευτικού μάρκετινγκ.

8. Συνιστώμενη Διαδρομή Ανάπτυξης

Για μια επιχείρηση που εξετάζει τη βερμπασκοσίδη που προέρχεται από το Cistanche, μια χρήσιμη ακολουθία ανάπτυξης είναι:

Καθορίστε την προβλεπόμενη κατηγορία προϊόντων και την αγορά-στόχο.

Επιλέξτε την ποιότητα των συστατικών και τις αναλυτικές προδιαγραφές.

Ελέγξτε τη σύνθεση, τους ρύπους, τους υπολειμματικούς διαλύτες και την τεκμηρίωση ασφαλείας.

Αναπτύξτε ένα πρωτότυπο και αξιολογήστε τη συμβατότητα των συστατικών.

Αξιολογήστε τη σταθερότητα της σύνθεσης και της συσκευασίας.

Διεξαγωγή κατάλληλων μικροβιολογικών αξιολογήσεων και αξιολογήσεων ασφάλειας.

Δοκιμάστε το τελικό προϊόν έναντι των προβλεπόμενων αξιώσεων απόδοσης.

Ελέγξτε τον τελικό ιστότοπο, την ετικέτα και τη γλώσσα διαφήμισης πριν από την κυκλοφορία.

Το εύρος συγκέντρωσης στην αποκάλυψη0.01%–5.0%-θα πρέπει να αντιμετωπίζεται ως αποκαλυπτόμενο εύρος, όχι ως καθολικά επικυρωμένη σύσταση σύνθεσης.

 

Κατώτατη γραμμή για αγοραστές συστατικών

Η παρεχόμενη έρευνα καθιστά τη βερμπασκοσίδη που προέρχεται από το Cistanche υποψήφια για περαιτέρω ανάπτυξη περιποίησης δέρματος, ιδιαίτερα για έργα που εξερευνούν εργαστηριακά τελικά σημεία ενυδάτωσης και φραγμού.

 

Λίστα περιεχομένου ακτεοσίδης Cistanche

 

Κάντε κλικ για να επισκεφθείτε το διαφορετικό περιεχόμενο της λίστας εκχυλίσματος ακτεοσίδης κιστάνχης

 

 

 

Το πιο χρήσιμο μάθημά του δεν είναι απλώς ότι «το Cistanche κάνει καλό στο δέρμα». Είναι αυτόΗ μέθοδος εκχύλισης, η περιεκτικότητα σε ενεργή ένωση, η ταυτότητα συστατικού και η ποιότητα των αποδεικτικών στοιχείων επηρεάζουν το εάν ένα βοτανικό συστατικό είναι κατάλληλο για ένα συγκεκριμένο εμπορικό έργο.

Όταν πλησιάζετε έναν κατασκευαστή Cistanche, ξεκινήστε με ένα ακριβές αίτημα:

"Παρακαλούμε παρέχετε τη βοτανική ταυτότητα, τις προδιαγραφές βερμπασκοσίδης, την αναλυτική μέθοδο, τα αντιπροσωπευτικά πιστοποιητικά ανάλυσης, τα αποτελέσματα των υπολειμματικών διαλυτών, την τεκμηρίωση ασφαλείας και την καθοδήγηση της σύνθεσης για την κατηγορία συστατικών που προτείνεται για το έργο μας."

Αυτό το αίτημα δημιουργεί μια πολύ ισχυρότερη βάση για την ανάπτυξη προϊόντων από μια γενική έρευνα για σκόνη εκχυλίσματος βοτάνων.

 

(54) Τίτλος της εφεύρεσης

Μέθοδος παρασκευής βερμπασκοσίδης και μέθοδος εφαρμογής της για την προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος

(57) Περίληψη

Η εφεύρεση αναφέρεται σε μια μέθοδο παρασκευής βερμπασκοσίδης και μια μέθοδο εφαρμογής της για την προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος, που ανήκει στον τεχνικό τομέα της περιποίησης δέρματος και των τοπικών προϊόντων.

Η μέθοδος περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα:

Επιλέγοντας τους αποξηραμένους σαρκώδεις μίσχους των φυτών OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ήCistanche salsa; κονιοποίηση των μίσχων μετά από προεπεξεργασία. εκχύλισή τους υπό αναρροή με υδατικό διάλυμα αιθανόλης 50%-80% δύο έως τέσσερις φορές για μία έως τρεις ώρες κάθε φορά. Συνδυάζοντας τα εκχυλίσματα. και συμπυκνώνοντάς τα υπό μειωμένη πίεση μέχρι να μην παραμείνει οσμή αιθανόλης, λαμβάνοντας έτσι ένα συμπυκνωμένο διάλυμα.

Διέλευση του συμπυκνωμένου διαλύματος μέσω στήλης ρητίνης μακροπορώδους προσρόφησης AB-8. διαδοχική έκλουση με απιονισμένο νερό και υδατικό διάλυμα αιθανόλης 30%-50% για την απομάκρυνση των ακαθαρσιών. στη συνέχεια έκλουση των συστατικών-στόχων με υδατικό διάλυμα αιθανόλης 60%-90%. συλλογή του εκλούσματος και συμπύκνωση του υπό μειωμένη πίεση. καθαρισμός του με χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής χρησιμοποιώντας χλωροφόρμιο-μεθανόλη σε αναλογία όγκου που κυμαίνεται από 5:1 έως 2:1 ως μέσο έκλουσης. συλλογή των κλασμάτων-στόχων. και συμπύκνωση τους υπό μειωμένη πίεση, ακολουθούμενη από ξήρανση με ψύξη, για να ληφθεί καθαρισμένη βερμπασκοσίδη.

Τα ευεργετικά αποτελέσματα που αναφέρονται για την εφεύρεση είναι ότι η βερμπασκοσίδη προστατεύει το δέρμα και επιδεικνύει βελτιωμένη δράση περιποίησης όταν ενσωματώνεται σε προϊόντα.

 

Αξιώσεις

Αξίωση 1

Μια μέθοδος παρασκευής βερμπασκοσίδης, που χαρακτηρίζεται από τα ακόλουθα βήματα:

Επιλέγοντας τους αποξηραμένους σαρκώδεις μίσχους των φυτών OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ήCistanche salsa; κονιοποίηση τους μετά από προεπεξεργασία. εκχύλισή τους υπό αναρροή με υδατικό διάλυμα αιθανόλης 50%-80% δύο έως τέσσερις φορές για μία έως τρεις ώρες κάθε φορά. Συνδυάζοντας τα εκχυλίσματα. και συμπυκνώνοντάς τα υπό μειωμένη πίεση μέχρι να μην παραμείνει οσμή αιθανόλης, λαμβάνοντας έτσι ένα συμπυκνωμένο διάλυμα.

Διέλευση του συμπυκνωμένου διαλύματος μέσω στήλης ρητίνης μακροπορώδους προσρόφησης AB-8. διαδοχική έκλουση με απιονισμένο νερό και υδατικό διάλυμα αιθανόλης 30%-50% για την απομάκρυνση των ακαθαρσιών. στη συνέχεια έκλουση των συστατικών-στόχων με υδατικό διάλυμα αιθανόλης 60%-90%. συλλογή του εκλούσματος και συμπύκνωση του υπό μειωμένη πίεση. καθαρισμός του με χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής χρησιμοποιώντας χλωροφόρμιο-μεθανόλη σε αναλογία όγκου που κυμαίνεται από 5:1 έως 2:1 ως μέσο έκλουσης. συλλογή των κλασμάτων-στόχων. συμπύκνωση τους υπό μειωμένη πίεση. και λυοφιλοποίηση για να ληφθεί καθαρισμένη βερμπασκοσίδη με καθαρότητα τουλάχιστον 98%.

 

Αξίωση 2

2. Η μέθοδος παρασκευής βερμπασκοσίδης σύμφωνα με την αξίωση 1, όπου η αναλογία υλικού προς διαλύτη κατά την εκχύλιση με αναρροή κυμαίνεται από 1:10 έως 1:20, και η θερμοκρασία εκχύλισης κυμαίνεται από 60 βαθμούς έως 80 βαθμούς.

 

Αξίωση 3

2. Η μέθοδος παρασκευής βερμπασκοσίδης σύμφωνα με την αξίωση 1, όπου η αναλογία διαμέτρου προς ύψος της στήλης μακροπορώδους ρητίνης προσρόφησης AB-8 κυμαίνεται από 1:8 έως 1:15 και ο ρυθμός ροής έκλουσης κυμαίνεται από 1 έως 3 BV/h.

 

Αξίωση 4

2. Η μέθοδος παρασκευής βερμπασκοσίδης σύμφωνα με την αξίωση 1, όπου οι συνθήκες λυοφιλίωσης περιλαμβάνουν θερμοκρασία που κυμαίνεται από -40 βαθμούς έως -50 βαθμούς, πίεση κενού που κυμαίνεται από 10 έως 30 Pa και χρόνο στεγνώματος που κυμαίνεται από 12 έως 24 ώρες.

 

Αξίωση 5

5. Μέθοδος εφαρμογής βερμπασκοσίδης για την προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος, χρησιμοποιώντας βερμπασκοσίδη που παρασκευάζεται σύμφωνα με οποιαδήποτε από τις Αξιώσεις 1-4, που χαρακτηρίζεται από το ότι η μέθοδος εφαρμογής περιλαμβάνει:

Προσθήκη βερμπασκοσίδης σε βάση τοπικού προϊόντος σε προκαθορισμένο κλάσμα μάζας και ομοιόμορφη ανάδευση για να παραχθεί ένα τελικό προϊόν. Εφαρμογή του τελικού προϊόντος στην επιφάνεια του δέρματος μία ή δύο φορές την ημέρα. Επιτρέποντας τη βερμπασκοσίδη να διεισδύσει και να δράσει στα επιδερμικά κύτταρα HaCaT για να ρυθμίσει προς τα πάνω τη γονιδιακή και πρωτεϊνική έκφραση των ACC, FASN και N-SMase και να αυξήσει τη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων. και συνέχιση της χρήσης για μία έως τέσσερις εβδομάδες για την ενίσχυση της σύνθεσης των λιπιδίων του δέρματος.

Η βερμπασκοσίδη προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HaCaT, την επούλωση τραυμάτων, την έκφραση πρωτεΐνης με σφιχτή σύνδεση και την παραγωγή λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος, παρέχοντας έτσι λειτουργίες επιδιόρθωσης φραγμού πολλαπλών στόχων.

Χρησιμοποιείται σε όλη την αλυσίδα συντήρησης του δερματικού φραγμού που περιλαμβάνει την ανανέωση των επιδερμικών κυττάρων, τις ενισχυμένες μεσοκυτταρικές συνδέσεις, την αναπλήρωση της λιπιδικής μήτρας και τη σύνθεση του υαλουρονικού οξέος ως φυσικού ενυδατικού παράγοντα.

 

Αξίωση 6

6. Η μέθοδος εφαρμογής σύμφωνα με την αξίωση 5, όπου το κλάσμα μάζας του βερμπασκοσίδη στο τοπικό προϊόν κυμαίνεται από 0,01% έως 5,0%.

 

Αξίωση 7

6. Η μέθοδος εφαρμογής σύμφωνα με την αξίωση 5, όπου 0,1–0,5 g του τελικού προϊόντος χρησιμοποιούνται ανά εφαρμογή, ακολουθούμενο από απαλό μασάζ για ένα έως τρία λεπτά για την προώθηση της απορρόφησης.

 

Αξίωση 8

6. Η μέθοδος εφαρμογής σύμφωνα με την αξίωση 5, όπου το τοπικό προϊόν είναι ένας ιατρικός επίδεσμος, ένα προϊόν επανόρθωσης μετά τη διαδικασία, ένα προϊόν συμπληρωματικής θεραπείας για ατοπική δερματίτιδα, ένα προϊόν περιποίησης δέρματος που προορίζεται ειδικά για ευαίσθητο δέρμα ή ένα προϊόν εντατικής ενυδάτωσης και επανόρθωσης.

 

Αξίωση 9

6. Η μέθοδος εφαρμογής σύμφωνα με την αξίωση 5, όπου έκδοχα μπορούν επιπροσθέτως να ενσωματωθούν κατά την εφαρμογή βερμπασκοσίδης.

 

Αξίωση 10

10. Η μέθοδος εφαρμογής σύμφωνα με την αξίωση 9, όπου το έκδοχο επιλέγεται από ένα υγραντικό, έναν γαλακτωματοποιητή, ένα συντηρητικό, ένα άρωμα ή έναν καταπραϋντικό παράγοντα και η δοσολογική μορφή της σύνθεσης που περιέχει το έκδοχο επιλέγεται από μια λοσιόν, μια κρέμα, ένα πήκτωμα, έναν ορό ή ένα διάλυμα μάσκας φύλλου.

 

Μέθοδος παρασκευής βερμπασκοσίδης και μέθοδος εφαρμογής της για την προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος

 

Τεχνικό Πεδίο

[0001]Η εφεύρεση ανήκει στον τεχνικό τομέα της περιποίησης του δέρματος και των τοπικών προϊόντων. Συγκεκριμένα, αφορά μια μέθοδο παρασκευής βερμπασκοσίδης και μια μέθοδο εφαρμογής της για την προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος.

Πιο συγκεκριμένα, αφορά μια μέθοδο παρασκευής βερμπασκοσίδης που προορίζεται να ασκήσει αποτελέσματα σε όλη την πλήρη αλληλουχία επιδιόρθωσης του δερματικού φραγμού ανανέωσης επιδερμικών κυττάρων → ενισχυμένες μεσοκυτταρικές σφιχτές συνδέσεις → αναπλήρωση λιπιδικής μήτρας → σύνθεση υαλουρονικού οξέος → επούλωση πληγών, για χρήση στην προστασία του δέρματος.

 

Τέχνη φόντου

[0002]Η ανανέωση των επιδερμικών κυττάρων, οι ενισχυμένες μεσοκυτταρικές σφιχτές ενώσεις, η αναπλήρωση της μήτρας των λιπιδίων, η σύνθεση υαλουρονικού οξέος και η επούλωση τραυμάτων διαδραματίζουν απαραίτητο ρόλο στη διατήρηση της ομοιόστασης του δερματικού φραγμού.

Η ανανέωση των επιδερμικών κυττάρων είναι το θεμέλιο της κατασκευής φραγμού. Επιταχύνοντας τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των βασικών κερατινοκυττάρων, διασφαλίζει ότι επαρκής αριθμός κυττάρων κινείται προς τα πάνω με τακτικό τρόπο, παρέχοντας επαρκές κυτταρικό υλικό για σχηματισμό φραγμού.

Οι διακυτταρικές δομές σύνδεσης, συμπεριλαμβανομένων των σφιχτών συνδέσεων και των δεσμοσωμάτων, αγκυρώνουν τα νεοσχηματισμένα κύτταρα μεταξύ τους για να δημιουργήσουν ένα πυκνό, συνεχές φυσικό φράγμα που αντιστέκεται αποτελεσματικά στην είσοδο εξωτερικών ερεθιστικών παραγόντων.

Η λιπιδική μήτρα που γεμίζει τα κενά μεταξύ των κυττάρων σχηματίζει μια οργανωμένη φυλλοειδή δομή και είναι το κύριο μέσο σφράγισης των μονοπατιών μέσω των οποίων χάνεται νερό.

Το υαλουρονικό οξύ που συντίθεται στην επιδερμίδα και το χόριο σχηματίζει ένα ισχυρό δίκτυο συγκράτησης του νερού, παρέχει υγρασία στην κεράτινη στιβάδα και διατηρεί την κυτταρική ομοιόσταση. Μπορεί επίσης να παρέχει ένα κατάλληλο υγρό περιβάλλον για αυτές τις φυσιολογικές διεργασίες και να μεταδίδει κυτταρικά σήματα.

Η επούλωση των πληγών εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από αυτές τις τέσσερις διαδικασίες. Πρώτον, το υαλουρονικό οξύ παρέχει μια προσωρινή μήτρα και λειτουργίες σηματοδότησης. Στη συνέχεια απαιτείται ανανέωση των επιδερμικών κυττάρων για την κάλυψη του τραύματος. Τα νεοσχηματισμένα κύτταρα πρέπει να αποκαταστήσουν σφιχτές συνδέσεις και να αναπληρώσουν τη λιπιδική μήτρα για να ολοκληρωθεί η αποκατάσταση της λειτουργίας φραγμού.

Αυτές οι πέντε διαδικασίες ξεκινούν διαδοχικά κατά την επούλωση του τραύματος. Οι αλληλένδετες, συντονισμένες ενέργειές τους - από την κυτταρική ανανέωση και τη δομική ενίσχυση έως το γέμισμα της μήτρας και την αποθήκευση νερού - οδηγούν συλλογικά σε έναν πλήρως σταθεροποιημένο φραγμό του δέρματος.

Παρέχουν όχι μόνο τη φυσική δύναμη που απαιτείται για την αντίσταση σε εξωτερικούς ερεθιστικούς παράγοντες, αλλά και την ικανότητα συγκράτησης της υγρασίας που απαιτείται για την πρόληψη της εσωτερικής απώλειας νερού, επιτρέποντας στο δέρμα να διατηρεί μακροπρόθεσμα την υγεία σε μια κατάσταση δυναμικής ισορροπίας.

Αντίστοιχα, η πολυδιάστατη, συστηματική ανακατασκευή είναι πιο θεμελιώδης από την απλή βελτίωση της επιφανειακής υγρασίας. Μπορεί να βελτιώσει την αντοχή του δέρματος και τη διατήρηση της υγρασίας στην πηγή τους, υποστηρίζοντας μια πιο ανθεκτική και σταθερή κατάσταση υγείας.

[0003]Η ίδια η παραγωγή λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος από το δέρμα είναι θεμελιώδης για τη διατήρηση της υγείας του δέρματος, την αντίσταση στον ερεθισμό του περιβάλλοντος και τη διατήρηση μιας νεανικής κατάστασης.

Μέσω της κατακράτησης της υγρασίας και της άμυνας έναντι μικροοργανισμών και ρύπων, αυτές οι ουσίες συμβάλλουν στη διασφάλιση της φυσιολογικής φυσιολογικής λειτουργίας του δέρματος.

Σε σύγκριση με τα εξωτερικά συμπληρώματα και μόνο, η προώθηση της παραγωγής λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος από το δέρμα περιγράφεται ως μια πιο θεμελιώδης και ανθεκτική στρατηγική που ενισχύει άμεσα την «ικανότητα αυτοεπισκευής» και την «αντίσταση» του.

Για δερματικές παθήσεις όπως η ατοπική δερματίτιδα και το έκζεμα, η ενίσχυση της παραγωγής λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος περιγράφεται ως έχει κεντρική προληπτική και θεραπευτική σημασία.

Η πηγή εξηγεί ότι αυτές οι καταστάσεις συχνά περιλαμβάνουν γενετικά ελαττώματα που αποδυναμώνουν τη δομή του δέρματος, επιτρέποντας στα αλλεργιογόνα και τα ερεθιστικά να διεισδύσουν πιο εύκολα και να πυροδοτήσουν έναν επίμονο ανοσοφλεγμονώδη κύκλο.

Επομένως, ο εντοπισμός δραστικών συστατικών που ενεργοποιούν βασικά ένζυμα λιπιδικής σύνθεσης, όπως το FASN και το ACC, ή που επάγουν άμεσα την παραγωγή υαλουρονικού οξέος μπορεί προληπτικά να διατηρήσει και να επιδιορθώσει την παραγωγή κυτταρικών λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος.

Σύμφωνα με την αποκάλυψη, αυτή η στρατηγική μπορεί να ανακουφίσει την ξηρότητα, τον κνησμό και τα φλεγμονώδη επεισόδια, ενώ μειώνει τα εξωτερικά ερεθίσματα στην πηγή τους, μειώνει τη συχνότητα και τη σοβαρότητα της υποτροπής και βοηθά στη μετατόπιση της διαχείρισης της νόσου από την παθητική θεραπεία στην ενεργητική πρόληψη.

 

[0004]Η βερμπασκοσίδη είναι ένας φαινυλαιθανοειδής γλυκοσίδης και ένα από τα κύρια συστατικά των φυτών Orobanchaceae:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisΝεύμα; και

Cistanche salsa(CA Mey.) Beck.

 

Έρευνες έχουν δείξει ότι η βερμπασκοσίδη είναι ένα ισχυρό αντιοξειδωτικό και έχει φαρμακολογικές δράσεις όπως αντιφλεγμονώδη, νευροπροστατευτική, ηπατοπροστατευτική και αντιγηραντική δράση.

Κατά τη διάρκεια της εξέτασης για προστατευτικούς παράγοντες του δέρματος από πολλά φυτά, οι εφευρέτες ανακάλυψαν ότι η βερμπασκοσίδη όχι μόνο προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HaCaT και την έκφραση της πρωτεΐνης σφιχτού συνδέσμου, αλλά επίσης ρυθμίζει τη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων, ενισχύοντας έτσι τη σύνθεση λιπιδίων του δέρματος.

Ενεργοποιεί επίσης μονοπάτια που εμπλέκονται στην παραγωγή υαλουρονικού οξέος και στη συνέχεια προάγει την επούλωση των πληγών.

Αυτές οι δράσεις περιλαμβάνουν την πλήρη ακολουθία συντήρησης και επιδιόρθωσης του δερματικού φραγμού της ανανέωσης των επιδερμικών κυττάρων → βελτιωμένες διακυτταρικές συνδέσεις → αναπλήρωση λιπιδικής μήτρας → σύνθεση υαλουρονικού οξέος → επούλωση πληγών.

Η βερμπασκοσίδη μπορεί επομένως να χρησιμοποιηθεί ως παράγοντας προστασίας και ενυδάτωσης του δέρματος πολλαπλών στόχων σε λειτουργικά προϊόντα περιποίησης και τοπικής χρήσης.

Παραδείγματα περιλαμβάνουν ιατρικούς επιδέσμους και προϊόντα επισκευής μετά τη διαδικασία. συμπληρωματικά προϊόντα για ατοπική δερματίτιδα ή έκζεμα. προϊόντα περιποίησης δέρματος που προορίζονται ειδικά για ευαίσθητο δέρμα ή ροδόχρου ακμή. και προϊόντα εντατικής ενυδάτωσης και επανόρθωσης για καθημερινή χρήση.

 

Περίληψη της εφεύρεσης

[0005]Η εφεύρεση παρέχει μια μέθοδο για την παρασκευή βερμπασκοσίδης και μια μέθοδο εφαρμογής της για την προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος.

Η μέθοδος παρασκευής αφορά τη βερμπασκοσίδη που προορίζεται να υποστηρίξει την πλήρη αλληλουχία επιδιόρθωσης του δερματικού φραγμού της ανανέωσης των επιδερμικών κυττάρων → ενισχυμένες διακυτταρικές συνδέσεις → αναπλήρωση λιπιδικής μήτρας → σύνθεση υαλουρονικού οξέος → επούλωση πληγών.

Αντιμετωπίζει το τεχνικό πρόβλημα της παροχής ενός νέου βασικού ενεργού συστατικού με αποτελέσματα πολλαπλών στόχων για προϊόντα περιποίησης δέρματος ή τοπικά προϊόντα.

Η βερμπασκοσίδη περιγράφεται ότι έχει το πλεονέκτημα ότι δρα σε ολόκληρη την αλυσίδα επιδιόρθωσης του δερματικού φραγμού, με αποτελέσματα ανώτερα από τα υπάρχοντα συστατικά περιποίησης δέρματος ενός στόχου, όπως συστατικά που προάγουν μόνο τη σύνθεση υαλουρονικού οξέος, προάγουν μόνο τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ή παρέχουν μόνο ενυδάτωση.

[0006]Για την επίτευξη των προαναφερθέντων στόχων, η εφεύρεση υιοθετεί την ακόλουθη τεχνική λύση.

[0007]Μια μέθοδος για την παρασκευή βερμπασκοσίδης περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα.

[0008]Επιλέξτε τους αποξηραμένους σαρκώδεις μίσχους των φυτών OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ήCistanche salsa.

Μετά τη λεύκανση, την ξήρανση και την κονιοποίηση, εκχυλίστε το υλικό υπό αναρροή με υδατικό διάλυμα αιθανόλης 50%-80% δύο έως τέσσερις φορές για μία έως τρεις ώρες κάθε φορά.

Συνδυάστε τα εκχυλίσματα και συμπυκνώστε τα κάτω από ελαττωμένη πίεση μέχρι να μην παραμείνει οσμή αιθανόλης, λαμβάνοντας έτσι ένα συμπυκνωμένο διάλυμα.

[0009]Περάστε το συμπυκνωμένο διάλυμα μέσα από μια στήλη μακροπορώδους ρητίνης προσρόφησης AB-8.

Εκλούστε διαδοχικά με απιονισμένο νερό και ένα υδατικό διάλυμα αιθανόλης 30%–50% για την απομάκρυνση των ακαθαρσιών, ακολουθούμενο από ένα υδατικό διάλυμα αιθανόλης 60%–90% για την έκλουση των συστατικών-στόχων.

Συλλέξτε το έκλουσμα και συμπυκνώστε το υπό μειωμένη πίεση.

Καθαρίστε το συμπύκνωμα με χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής χρησιμοποιώντας χλωροφόρμιο-μεθανόλη σε αναλογία όγκου που κυμαίνεται από 5:1 έως 2:1 ως διαλύτη έκλουσης.

Συλλέξτε τα στοχευόμενα κλάσματα, συμπυκνώστε τα υπό μειωμένη πίεση και στεγνώστε τα με κατάψυξη για να λάβετε καθαρό βερμπασκοσίδη με καθαρότητα τουλάχιστον 98%.

[0010]Προαιρετικά, η αναλογία υλικού προς διαλύτη κατά την εκχύλιση με αναρροή κυμαίνεται από 1:10 έως 1:20, εκφρασμένη σε g/mL, και η θερμοκρασία εκχύλισης κυμαίνεται από 60 βαθμούς έως 80 βαθμούς.

Σημείωση του μεταφραστή: Η πηγή αναφέρει επιπλέον ότι αυτή η αναλογία σημαίνει "1 g πρώτης ύλης προστίθεται σε 1 mL διαλύτη." Αυτή η δήλωση δεν συνάδει με το καθορισμένο εύρος 1:10–1:20, το οποίο αντιστοιχεί σε 10–20 mL διαλύτη ανά γραμμάριο πρώτης ύλης.

[0011]Προαιρετικά, ο λόγος διαμέτρου προς ύψος της στήλης μακροπορώδους ρητίνης προσρόφησης AB-8 κυμαίνεται από 1:8 έως 1:15, όπου ο λόγος είναι η διάμετρος της στήλης, d, προς το ύψος της στήλης, h. Ο ρυθμός ροής έκλουσης κυμαίνεται από 1 έως 3 BV/h.

[0012]Προαιρετικά, οι συνθήκες λυοφιλοποίησης περιλαμβάνουν θερμοκρασία που κυμαίνεται από -40 βαθμούς έως -50 βαθμούς, πίεση κενού που κυμαίνεται από 10 έως 30 Pa και χρόνο στεγνώματος που κυμαίνεται από 12 έως 24 ώρες.

[0013]Μια μέθοδος εφαρμογής βερμπασκοσίδης για την προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος παρέχεται ως εξής.

[0014]Προσθέστε βερμπασκοσίδη σε βάση τοπικού προϊόντος σε προκαθορισμένο κλάσμα μάζας και ανακατέψτε ομοιόμορφα για να παραχθεί ένα τελικό προϊόν.

Εφαρμόστε το τελικό προϊόν στην επιφάνεια του δέρματος μία ή δύο φορές την ημέρα.

Μέσω της διείσδυσης, η βερμπασκοσίδη δρα στα επιδερμικά κύτταρα HaCaT για την προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και την ενίσχυση των στενών συνδέσεων.

Ταυτόχρονα, ρυθμίζει προς τα πάνω τη γονιδιακή και πρωτεϊνική έκφραση των ACC, FASN και N-SMase, αυξάνει τη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων, ρυθμίζει προς τα πάνω τα HAS2, HAS3 και CD44 και αυξάνει την περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ.

Συνεχίστε τη χρήση για μία έως τέσσερις εβδομάδες για να επιτύχετε συνολική βελτίωση του δερματικού φραγμού.

[0015]Προαιρετικά, το κλάσμα μάζας του βερμπασκοσίδη στο τοπικό προϊόν κυμαίνεται από 0,01% έως 5,0%.

[0016]Προαιρετικά, χρησιμοποιήστε 0,1–0,5 g του τελικού προϊόντος ανά εφαρμογή και κάντε απαλό μασάζ για ένα έως τρία λεπτά μετά την εφαρμογή για να προωθήσετε την απορρόφηση.

[0017]Προαιρετικά, το τοπικό προϊόν είναι ένας ιατρικός επίδεσμος, ένα προϊόν επανόρθωσης μετά τη διαδικασία, ένα προϊόν συμπληρωματικής θεραπείας για την ατοπική δερματίτιδα, ένα προϊόν περιποίησης δέρματος που προορίζεται ειδικά για ευαίσθητο δέρμα ή ένα προϊόν εντατικής ενυδάτωσης και επανόρθωσης.

[0018]Προαιρετικά, μπορούν επίσης να προστεθούν έκδοχα κατά την εφαρμογή της βερμπασκοσίδης.

[0019]Περαιτέρω, το έκδοχο επιλέγεται από ένα υγραντικό, έναν γαλακτωματοποιητή, ένα συντηρητικό, ένα άρωμα ή έναν καταπραϋντικό παράγοντα.

Η δοσολογική μορφή της σύνθεσης που περιέχει έκδοχο επιλέγεται από μια λοσιόν, μια κρέμα, ένα τζελ, έναν ορό ή ένα διάλυμα φύλλου-μάσκας.

 

Ευεργετικά αποτελέσματα της εφεύρεσης

[0020]Τα ευεργετικά αποτελέσματα της εφεύρεσης είναι τα ακόλουθα.

[0021]Η εφεύρεση καταδεικνύει ότι η βερμπασκοσίδη έχει βασικές δραστηριότητες στην προαγωγή της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος και υαλουρονικού οξέος.

Μπορεί επίσης να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του δέρματος, να ενισχύσει τις στενές διακυτταρικές συνδέσεις και να επιταχύνει την επούλωση των πληγών, σχηματίζοντας έναν μηχανισμό κλειστού βρόχου «προώθησης του πολλαπλασιασμού των κυττάρων → σταθεροποίησης των μεσοκυττάριων συνδέσεων → ενίσχυσης της παραγωγής λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος → επιτάχυνσης της επιδιόρθωσης και επούλωσης».

Σε σύγκριση με την προηγούμενη τεχνική, η εφεύρεση περιγράφεται ότι έχει τα ακόλουθα πλεονεκτήματα.

[0022]Η βερμπασκοσίδη είναι ένα φυσικό ενεργό συστατικό φυτικής προέλευσης με υψηλό επίπεδο ασφάλειας και σαφώς καθορισμένη φαρμακολογική δράση, αποφεύγοντας πιθανούς κινδύνους ερεθισμού του δέρματος που σχετίζονται με χημικά συντιθέμενα συστατικά.

Συντακτικό προσόν: Αυτός είναι ο ισχυρισμός ασφάλειας της πηγής, όχι ένα συμπέρασμα που προκύπτει απλώς από βοτανική προέλευση.

[0023]Η αποτελεσματικότητα παρασκευής και η απόδοση της βερμπασκοσίδης βελτιώνονται.

[0024]Η βερμπασκοσίδη δρα σε μια ολοκληρωμένη γκάμα στόχων, ρυθμίζοντας ταυτόχρονα πολλές βασικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, της έκφρασης πρωτεΐνης με σφιχτή σύνδεση, της σύνθεσης λιπιδίων, της παραγωγής υαλουρονικού οξέος και της επούλωσης τραυμάτων.

Ως εκ τούτου, βελτιώνει τη λειτουργία του δερματικού φραγμού με ολοκληρωμένο τρόπο, με αποτελέσματα που περιγράφονται ως ανώτερα από εκείνα των συστατικών ενός στόχου.

[0025]Οι εφαρμογές του είναι ευρείες, συμπεριλαμβανομένης της ιατρικής αποκατάστασης, της συμπληρωματικής θεραπείας δερματικών παθήσεων, της φροντίδας του ευαίσθητου δέρματος και της καθημερινής ενυδάτωσης και αποκατάστασης, καλύπτοντας τις ανάγκες υγείας του δέρματος διαφορετικών πληθυσμών.

 

Σύντομη περιγραφή των σχεδίων

[0026]Για να εξηγηθούν με μεγαλύτερη σαφήνεια οι τεχνικές λύσεις των πραγματοποιήσεων της εφεύρεσης ή της προηγούμενης τεχνικής, τα σχέδια που απαιτούνται για την περιγραφή των υλοποιήσεων ή της προηγούμενης τεχνικής παρουσιάζονται εν συντομία παρακάτω.

Τα σχέδια που περιγράφονται παρακάτω αντιπροσωπεύουν μόνο ορισμένες ενσωματώσεις της εφεύρεσης. Ένα άτομο με συνήθη δεξιότητα στην τέχνη μπορεί να αντλήσει άλλα σχέδια από αυτά χωρίς δημιουργική προσπάθεια.

[0027]Το Σχήμα 1 είναι ένα σχηματικό διάγραμμα ροής της μεθόδου παρασκευής της εφεύρεσης.

[0028]Το Σχήμα 2 παρουσιάζει δεδομένα βιωσιμότητας κυττάρων HaCaT.

[0029]Το Σχήμα 3 παρουσιάζει δεδομένα δραστηριότητας συνθετάσης λιπαρών οξέων.

[0030]Το Σχήμα 4 παρουσιάζει δεδομένα περιεκτικότητας σε υαλουρονικό οξύ.

[0031]Το Σχήμα 5 παρουσιάζει δεδομένα βιωσιμότητας κυττάρων HaCaT για την εφεύρεση.

[0032]Το Σχήμα 6 παρουσιάζει δεδομένα δραστικότητας συνθετάσης λιπαρών οξέων για την εφεύρεση.

[0033]Το Σχήμα 7 παρουσιάζει την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με τη σύνθεση λιπαρών οξέων.

[0034]Το Σχήμα 8 παρουσιάζει την έκφραση πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη σύνθεση λιπαρών οξέων.

[0035]Το Σχήμα 9 παρουσιάζει αποτελέσματα στυπώματος Western που σχετίζονται με τη σύνθεση λιπαρών οξέων.

[0036]Το Σχήμα 10 παρουσιάζει δεδομένα περιεκτικότητας σε υαλουρονικό οξύ.

[0037]Το Σχήμα 11 παρουσιάζει την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με τη σύνθεση υαλουρονικού οξέος.

[0038]Το Σχήμα 12 παρουσιάζει την έκφραση πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη σύνθεση υαλουρονικού οξέος.

[0039]Το Σχήμα 13 παρουσιάζει αποτελέσματα στυπώματος Western που σχετίζονται με υαλουρονικό οξύ.

[0040]Το Σχήμα 14 παρουσιάζει επίπεδα έκφρασης claudin-1.

[0041]Το Σχήμα 15 παρουσιάζει τα επίπεδα έκφρασης οκλουδίνης.

[0042]Το Σχήμα 16 παρουσιάζει τους ρυθμούς κλεισίματος πληγών.

[0043]Το Σχήμα 17 παρουσιάζει εικόνες από τη δοκιμασία γρατσουνίσματος κυττάρου.

[0044]Το Σχήμα 18 παρουσιάζει μια αξιολόγηση της απόδοσης ενυδάτωσης διαφορετικών δειγμάτων.

 

Λεπτομερής Περιγραφή των Ενσωματώσεων

[0045]Οι πραγματοποιήσεις της εφαρμογής περιγράφονται λεπτομερώς παρακάτω με αναφορά στα συνημμένα σχέδια.

Παράδειγμα 1: Παρασκευή καθαρισμένου βερμπασκοσίδη

[0046]Παράδειγμα 1.

[0047]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, αυτό το παράδειγμα παρέχει μια μέθοδο παρασκευής βερμπασκοσίδης, συντομογραφίας Ver, που περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα.

[0048]Επιλέξτε τα αποξηραμένα σαρκώδη στελέχη τουCistanche deserticolaήCistanche tubulosa, και τα δύο ανήκουν στην οικογένεια Orobanchaceae.

Κόψτε το υλικό, ζεματίστε το σε βραστό νερό για 10-25 λεπτά και στεγνώστε το στο φούρνο στους 40 βαθμούς -60 βαθμούς, αυξάνοντας την περιεκτικότητα σε βερμπασκοσίδη περισσότερο από τέσσερις φορές.

 

 

Σημείωμα:* έναντι κενής ομάδας ελέγχου, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Μετά την κονιοποίηση, εκχυλίστε το υλικό υπό αναρροή με υδατικό διάλυμα αιθανόλης 50%-80% δύο έως τέσσερις φορές για μία έως τρεις ώρες κάθε φορά.

Συνδυάστε τα εκχυλίσματα και συμπυκνώστε τα κάτω από ελαττωμένη πίεση μέχρι να μην παραμείνει οσμή αιθανόλης, λαμβάνοντας έτσι ένα συμπυκνωμένο διάλυμα.

 

[0049]Περάστε το συμπυκνωμένο διάλυμα μέσα από μια στήλη μακροπορώδους ρητίνης προσρόφησης AB-8.

Εκλούστε διαδοχικά με απιονισμένο νερό και ένα υδατικό διάλυμα αιθανόλης 30%–50% για την απομάκρυνση των ακαθαρσιών, ακολουθούμενο από ένα υδατικό διάλυμα αιθανόλης 60%–90% για την έκλουση των συστατικών-στόχων.

Συλλέξτε το έκλουσμα και συμπυκνώστε το υπό μειωμένη πίεση.

Καθαρίστε το με χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής χρησιμοποιώντας χλωροφόρμιο-μεθανόλη σε αναλογία όγκου που κυμαίνεται από 5:1 έως 2:1 ως μέσο έκλουσης.

Συλλέξτε τα στοχευόμενα κλάσματα, συμπυκνώστε τα υπό μειωμένη πίεση και στεγνώστε τα με κατάψυξη για να λάβετε καθαρό βερμπασκοσίδη με καθαρότητα τουλάχιστον 98%.

[0050]Συγκεκριμένα, η αναλογία υλικού προς διαλύτη κατά την εκχύλιση με αναρροή κυμαίνεται από 1:10 έως 1:20 και η θερμοκρασία εκχύλισης κυμαίνεται από 60 βαθμούς έως 80 βαθμούς.

[0051]Ο λόγος διαμέτρου προς ύψος της στήλης μακροπορώδους ρητίνης προσρόφησης AB-8 κυμαίνεται από 1:8 έως 1:15 και ο ρυθμός ροής έκλουσης κυμαίνεται από 1 έως 3 BV/h.

[0052]Οι συνθήκες λυοφιλοποίησης περιλαμβάνουν μια θερμοκρασία που κυμαίνεται από -40 βαθμούς έως -50 βαθμούς, μια πίεση κενού που κυμαίνεται από 10 έως 30 Pa και ένα χρόνο στεγνώματος που κυμαίνεται από 12 έως 24 ώρες.

 

Πίνακας 2. Περίληψη βιοδραστικότητας διαφορετικών δειγμάτων

Δείκτης	Κενός έλεγχος	Θετικός έλεγχος	CTE	Ech	Ver
Κυτταρική βιωσιμότητα (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
Δραστηριότητα FAS (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
Περιεκτικότητα HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Έκφραση Claudin-1 (pg/mL)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Έκφραση οκλουδίνης (pg/mL)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
Ποσοστό επούλωσης τραυμάτων 24 ωρών (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
Ποσοστό επούλωσης πληγών 48 ωρών (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Σημείωμα:* έναντι κενής ομάδας ελέγχου, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Παράδειγμα 2: Παρασκευή Εκχυλίσματος Πολυσακχαρίτη Cistanche

[0053]Παράδειγμα 2.

[0054]Εκχυλίστε το Cistanche δύο φορές υπό θερμαινόμενη αναρροή με 20πλάσιες και 15πλάσιες ποσότητες νερού για τρεις ώρες και δύο ώρες, αντίστοιχα.

Διηθήστε, συνδυάστε τα διηθήματα και συμπυκνώστε στους 80 βαθμούς -90 βαθμούς.

Προσθέστε 215 mL αιθανόλης 95% για να επιτύχετε τελική συγκέντρωση αιθανόλης 80% και αφήστε όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς.

Συλλέξτε το ίζημα είτε με διήθηση, συγκρατώντας το κέικ του φίλτρου, είτε με φυγοκέντρηση στις 4.000 rpm για 10 λεπτά.

Πλένουμε το ίζημα τρεις φορές με απόλυτη αιθανόλη και το στεγνώνουμε στους 50 βαθμούς για να ληφθεί ένα εκχύλισμα πολυσακχαρίτη Cistanche, που ονομάζεται POL.

 

Παράδειγμα 3: Παρασκευή Εκχυλίσματος Φαινυλαιθανοειδούς Γλυκοζίτη

[0055]Παράδειγμα 3.

[0056]Εκχυλίστε το Cistanche δύο φορές υπό θερμαινόμενη αναρροή με 20πλάσιες και 15πλάσιες ποσότητες νερού για τρεις ώρες και δύο ώρες, αντίστοιχα.

Διηθήστε, συνδυάστε τα διηθήματα και συμπυκνώστε στους 80 βαθμούς -90 βαθμούς.

Προσθέστε 215 mL αιθανόλης 95% για να επιτύχετε τελική συγκέντρωση αιθανόλης 80% και αφήστε όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς.

Συλλέξτε το διήθημα με διήθηση ή το υπερκείμενο με φυγοκέντρηση στις 4.000 rpm για 10 λεπτά.

Συμπυκνώστε και στεγνώστε το για να λάβετε ένα εκχύλισμα γλυκοζίτη φαινυλαιθανοειδούς Cistanche, που ονομάζεται POLS.

Η δοκιμή έδειξε περιεκτικότητα σε εχινακοσίδη 21,8% και περιεκτικότητα βερμπασκοσίδης 1,2%.

 

Παράδειγμα 4: Παρασκευή εκχυλίσματος RE1

[0057]Παράδειγμα 4.

[0058]ΜουλιάζωCistanche deserticolaσε εξαπλάσια ποσότητα αιθανόλης 52% σε θερμοκρασία δωματίου για 10 ημέρες.

Φιλτράρετε και κρατήστε το φυτικό υπόλειμμα.

Μετά την ξήρανση, εκχυλίστε το υπόλειμμα μία φορά υπό αναρροή με εξαπλάσια ποσότητα αιθανόλης 95% για δύο ώρες.

Διηθήστε, συνδυάστε τα διηθήματα, συμπυκνώστε στους 60 βαθμούς και ξηράνετε για να λάβετε ένα εκχύλισμα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων Cistanche και των παραγώγων τους, που ονομάζονται RE1.

Το εκχύλισμα περιέχει συστατικά όπως εχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη, ισοβερβασκοσίδη και 2'-ακετυλοβερβασκοσίδη.

 

Παράδειγμα 5: Παρασκευή εκχυλίσματος RE2

[0059]Παράδειγμα 5.

[0060]ΕκχύλισμαCistanche tubulosaδύο φορές με αιθανόλη 75% για μία ώρα κάθε φορά.

Φιλτράρετε και κρατήστε το υπόλειμμα.

Μετά την ξήρανση, εκχυλίστε το υπόλειμμα μία φορά υπό αναρροή με εξαπλάσια ποσότητα αιθανόλης 95% για δύο ώρες.

Διηθήστε, συνδυάστε τα διηθήματα, συμπυκνώστε στους 60 βαθμούς και ξηράνετε για να λάβετε ένα εκχύλισμα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων Cistanche και των παραγώγων τους, που ονομάζονται RE2.

Το εκχύλισμα περιέχει συστατικά όπως εχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη, ισοβερβασκοσίδη και 2'-ακετυλοβερβασκοσίδη.

 

Παράδειγμα 6: Παρασκευή ενός ολικού εκχυλίσματος γλυκοζίτη φαινυλαιθανοειδούς

[0061]Παράδειγμα 6.

[0062]Κόψτε το Cistanche και εκχυλίστε δύο φορές με διάλυμα αιθανόλης 75% για 1,5 ώρα κάθε φορά.

Συνδυάστε τα εκχυλίσματα, συμπυκνώστε και στεγνώστε για να λάβετε ένα εκχύλισμα φαινυλαιθανοειδούς γλυκοσίδης Cistanche, που ονομάζεται CTE.

Η δοκιμή έδειξε περιεκτικότητα σε εχινακοσίδη 22,6% και περιεκτικότητα βερμπασκοσίδης 4,5%.

 

Παράδειγμα 7: Μέθοδος Εφαρμογής

[0063]Παράδειγμα 7.

[0064]Με βάση το Παράδειγμα 1, αυτό το παράδειγμα παρέχει μια μέθοδο εφαρμογής μέσω της οποίας η βερμπασκοσίδη ασκεί αποτελέσματα σε ολόκληρη την πλήρη αλληλουχία αποκατάστασης του δερματικού φραγμού της ανανέωσης των επιδερμικών κυττάρων → ενισχυμένες διακυτταρικές συνδέσεις → αναπλήρωση λιπιδίου-μήτρας → σύνθεση υαλουρονικού οξέος → επούλωση πληγών.

Η συγκεκριμένη μέθοδος εφαρμογής είναι η εξής.

[0065]Προσθέστε βερμπασκοσίδη σε βάση τοπικού προϊόντος σε προκαθορισμένο κλάσμα μάζας και ανακατέψτε ομοιόμορφα για να παραχθεί ένα τελικό προϊόν.

Εφαρμόστε το τελικό προϊόν στην επιφάνεια του δέρματος μία ή δύο φορές την ημέρα.

Μέσω της διείσδυσης, η βερμπασκοσίδη δρα στα επιδερμικά κύτταρα HaCaT για την προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και την ενίσχυση των στενών συνδέσεων.

Ταυτόχρονα, ρυθμίζει προς τα πάνω τη γονιδιακή και πρωτεϊνική έκφραση των ACC, FASN και N-SMase, αυξάνει τη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων, ρυθμίζει προς τα πάνω τα HAS2, HAS3 και CD44 και αυξάνει την περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ.

Συνεχίστε τη χρήση για μία έως τέσσερις εβδομάδες για να επιτύχετε συνολική βελτίωση του δερματικού φραγμού.

[0066]Συγκεκριμένα, το κλάσμα μάζας της βερμπασκοσίδης στο τοπικό προϊόν κυμαίνεται από 0,01% έως 5,0%.

[0067]Χρησιμοποιήστε 0,1–0,5 g του τελικού προϊόντος ανά εφαρμογή και κάντε απαλό μασάζ για ένα έως τρία λεπτά μετά την εφαρμογή για να προωθήσετε την απορρόφηση.

[0068]Το τοπικό προϊόν είναι ένας ιατρικός επίδεσμος, ένα προϊόν επανόρθωσης μετά τη διαδικασία, ένα προϊόν συμπληρωματικής θεραπείας για την ατοπική δερματίτιδα, ένα προϊόν περιποίησης δέρματος που προορίζεται ειδικά για ευαίσθητο δέρμα ή ένα προϊόν εντατικής ενυδάτωσης και επανόρθωσης.

[0069]Έκδοχα μπορούν επίσης να προστεθούν κατά την εφαρμογή της βερμπασκοσίδης.

Περαιτέρω, το έκδοχο επιλέγεται από ένα υγραντικό, έναν γαλακτωματοποιητή, ένα συντηρητικό, ένα άρωμα ή έναν καταπραϋντικό παράγοντα.

Η δοσολογική μορφή της σύνθεσης που περιέχει έκδοχο επιλέγεται από μια λοσιόν, μια κρέμα, ένα τζελ, έναν ορό ή ένα διάλυμα φύλλου-μάσκας.

 

Παράδειγμα 8: Πειραματικά Υλικά και Εξοπλισμός

[0070]Παράδειγμα 8.

[0071]Με βάση τα Παραδείγματα 1 και 7, τα πειραματικά υλικά που χρησιμοποιούνται στην εφεύρεση είναι τα ακόλουθα.

[0072]Τα πειραματικά κύτταρα απαθανατίστηκαν ανθρώπινα επιδερμικά κύτταρα HaCaT που αγοράστηκαν από τη Shanghai Yaji Biotechnology.

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε DMEM υψηλής γλυκόζης συμπληρωμένο με 10% βόειο εμβρυϊκό ορό και 1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη στους 37 βαθμούς σε ατμόσφαιρα που περιέχει 5% διοξείδιο του άνθρακα σε κορεσμένη υγρασία.

[0073]Τα πειραματικά υλικά ήταν:

Echinacoside, συντομογραφία Ech, από τα Εθνικά Ινστιτούτα Ελέγχου Τροφίμων και Φαρμάκων, Κίνα.

Εμβρυϊκός ορός βοοειδών, FBS, από την EXCELL.

DMEM υψηλής γλυκόζης από την Gibco.

0,25% τρυψίνη–EDTA από την Gibco.

Αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικά άλατα από την Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology.

CCK-8 Κιτ προσδιορισμού πολλαπλασιασμού/κυτταροτοξικότητας κυττάρων από την TransGen Biotech.

Human Occludin, OCLN, κιτ ELISA από το Wuhan CUSABIO.

Human Claudin-1, CLDN1, κιτ ELISA από το Wuhan CUSABIO.

Fatty Acid Synthase, FAS, Activity Assay Kit από τη Solarbio.

Κιτ ELISA ανθρώπινου υαλουρονικού οξέος από το Wuhan CUSABIO.

Ανασυνδυασμένη ανθρώπινη πρωτεΐνη EGF, χωρίς φορέα, από την R&D Systems.

DEPC από την Amresco.

M5 HiClear DL2000 DNA Marker από τη Mei5 Biotechnology.

Αντιδραστήριο TRIZol από την Ambion.

5X All-in-One RT MasterMix από την abm.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Low ROX από την abm.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, από την TransGen Biotech.

Ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIPA από την Boster.

Αναστολέας πρωτεάσης από το Boster.

Goat Anti-Rabbit IgG H&L, HRP, από την Abcam.

Goat Anti-Mouse IgG H&L, HRP, από την Abcam.

Προβαφτισμένος δείκτης πρωτεΐνης από τη Solarbio.

-Μερκαπτοαιθανόλη από την Amresco.

Μεμβράνη μεταφοράς PVDF, 0,45 μm, από την Millipore.

Γλυκίνη από τη Sangon Biotech.

Γλυκερόλη από τη Sangon Biotech.

SuperSignal West Pico PLUS από την Thermo Fisher.

Βήτα-Ακτίνη Loading Control Antibody, Mouse Monoclonal, από τη Sino Biological.

ACC1 αντίσωμα από Συγγένεια.

FASN αντίσωμα από τη συγγένεια.

Αντίσωμα SMPD2 από Συγγένεια.

Hyaluronan Synthase 2 Antibody, HAS2, από το Affinity.

HAS3 αντίσωμα από το Affinity.

CD44 Antibody from Affinity.

[0074]Ο πειραματικός εξοπλισμός περιελάμβανε:

SmartCell HF-90 θερμοκοιτίδα καλλιέργειας διοξειδίου του άνθρακα, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

Θάλαμος βιολογικής ασφάλειας HF1200LC από τον ίδιο κατασκευαστή.

DK-80 φυγόκεντρος πάγκου χαμηλής ταχύτητας, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Φυγόκεντρος ψύξης υψηλής ταχύτητας Heraeus Multifuge X1R, Thermo Fisher Scientific.

Φασματοφωτόμετρο μικροπλάκας xMark, Bio-Rad.

GL-88B μίκτης vortex, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Σύστημα απεικόνισης gel Model 2500, Shanghai Tianneng.

Όργανο MyCycler Thermal Cycler PCR, Bio-Rad.

7500 Fast Real-Time PCR όργανο, ABI.

Σύστημα απεικόνισης χημειοφωταύγειας Chemiscope 3000, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Συσκευή μεταφοράς πρωτεΐνης Mini-PROTEAN Tetra system, Bio-Rad.

Συσκευή ηλεκτροφόρησης DYCZ-24DN, Beijing Liuyi.

Σημείωση του μεταφραστή: Οι παραπάνω περιγραφές κατασκευαστών και οργάνων ακολουθούν την παρεχόμενη πηγή. τα στοιχεία του καταλόγου δεν επαληθεύτηκαν ανεξάρτητα.

 

 

 

Παράδειγμα 9: Πειραματικές Μέθοδοι

[0075]Παράδειγμα 9.

[0076]Με βάση τα Παραδείγματα 1-8, οι πειραματικές μέθοδοι που χρησιμοποιήθηκαν στην εφεύρεση ήταν οι εξής.

CCK-8 Δοκιμασία για τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό

[0077]Παρασκευάστε ένα εναιώρημα μονοκυττάρου κυττάρων HaCaT σε πλήρες μέσο καλλιέργειας σε πυκνότητα 5×1045 \\ φορές 10^45×104 κύτταρα/mL.

Σπάρτε τα κύτταρα σε μια πλάκα 96 φρεατίων στα 100 μL ανά φρεάτιο.

Αφού αφήσετε τα κύτταρα να προσκολληθούν για 24 ώρες στους 37 βαθμούς κάτω από 5% διοξείδιο του άνθρακα, απορρίψτε το μέσο καλλιέργειας και χορηγήστε τις διαφορετικές ουσίες δοκιμής. Συμπεριλάβετε μια κενή ομάδα ελέγχου, με n=5n=5n=5.

Μετά από 48 ώρες επεξεργασίας, απορρίψτε το μέσο και προσθέστε 100 μL πρόσφατα παρασκευασμένου διαλύματος 10% CCK-8 σε κάθε φρεάτιο.

Συνεχίστε την επώαση στον επωαστήρα κυτταροκαλλιέργειας για μία ώρα και στη συνέχεια μετρήστε την οπτική πυκνότητα στα 450 nm χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών.

Δοκιμασία δραστηριότητας συνθετάσης λιπαρών οξέων

[0078]Παρασκευάστε ένα εναιώρημα μονοκυττάρου κυττάρων HaCaT σε πλήρες μέσο καλλιέργειας σε πυκνότητα 5×1045 \\ φορές 10^45×104 κύτταρα/mL και σπάρτε τα κύτταρα σε φιάλες καλλιέργειας.

Αφού αφήσετε τα κύτταρα να προσκολληθούν για 24 ώρες στους 37 βαθμούς κάτω από 5% διοξείδιο του άνθρακα, απορρίψτε το μέσο καλλιέργειας και χορηγήστε τις διαφορετικές ουσίες δοκιμής.

Συμπεριλάβετε μια κενή ομάδα ελέγχου και μια ομάδα θετικού ελέγχου που έλαβε θεραπεία με ανασυνδυασμένο ανθρώπινο επιδερμικό αυξητικό παράγοντα, rhEGF, στα 20 ng/mL, με n=3n=3n=3.

Μετά από 48 ώρες θεραπείας, συλλέξτε τα κύτταρα και μετρήστε τη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ανάλυσης.

Δοκιμασία Περιεκτικότητας Υαλουρονικού Οξέος

[0079]Παρασκευάστε ένα εναιώρημα μονοκυττάρου κυττάρων HaCaT σε πλήρες μέσο καλλιέργειας σε πυκνότητα 5×1045 \\ φορές 10^45×104 κύτταρα/mL και σπάρτε τα κύτταρα σε φιάλες καλλιέργειας.

Αφού αφήσετε τα κύτταρα να προσκολληθούν για 24 ώρες στους 37 βαθμούς κάτω από 5% διοξείδιο του άνθρακα, απορρίψτε το μέσο καλλιέργειας και χορηγήστε τις διαφορετικές ουσίες δοκιμής.

Συμπεριλάβετε μια κενή ομάδα ελέγχου και μια ομάδα θετικού ελέγχου που έλαβε θεραπεία με rhEGF στα 20 ng/mL, με n=3n=3n=3.

Μετά από 48 ώρες θεραπείας, συλλέξτε τα υπερκείμενα κυτταροκαλλιέργειας και μετρήστε την περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ανάλυσης.

Ποσοτική Αντίστροφη Μεταγραφή PCR

[0080]Παρασκευάστε ένα εναιώρημα μονοκυττάρου κυττάρων HaCaT σε πλήρες μέσο καλλιέργειας σε πυκνότητα 5×1045 \\ φορές 10^45×104 κύτταρα/mL και σπάρτε τα κύτταρα σε τρυβλία έξι φρεατίων.

Αφού αφήσετε τα κύτταρα να προσκολληθούν για 24 ώρες στους 37 βαθμούς κάτω από 5% διοξείδιο του άνθρακα, απορρίψτε το μέσο καλλιέργειας και χορηγήστε τις διαφορετικές ουσίες δοκιμής.

Συμπεριλάβετε μια κενή ομάδα ελέγχου και μια ομάδα θετικού ελέγχου που έλαβε θεραπεία με rhEGF στα 20 ng/mL, με n=3n=3n=3.

Μετά από 48 ώρες επεξεργασίας, απορρίψτε το υπερκείμενο και προσθέστε 1 mL TRIzol σε κάθε φρεάτιο για να αποκολληθούν και να λυθούν τα κύτταρα, διασφαλίζοντας ότι το αντιδραστήριο καλύπτει την κυτταρική στοιβάδα.

Ανακινήστε επανειλημμένα το δοχείο καλλιέργειας μέχρι να απελευθερωθούν τα κύτταρα και μεταφέρετε το υλικό σε σωλήνα μικροφυγοκέντρησης 1,5 mL.

Εξάγετε το ολικό RNA και χρησιμοποιήστε qRT-PCR για να προσδιορίσετε την έκφραση των ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 και CD44.

Western Blotting

[0081]Παρασκευάστε ένα εναιώρημα μονοκυττάρου κυττάρων HaCaT σε πλήρες μέσο καλλιέργειας σε πυκνότητα 5×1045 \\ φορές 10^45×104 κύτταρα/mL και σπάρτε τα κύτταρα σε φιάλες καλλιέργειας.

Αφού αφήσετε τα κύτταρα να προσκολληθούν για 24 ώρες στους 37 βαθμούς κάτω από 5% διοξείδιο του άνθρακα, απορρίψτε το μέσο καλλιέργειας και χορηγήστε τις διαφορετικές ουσίες δοκιμής.

Συμπεριλάβετε μια κενή ομάδα ελέγχου και μια ομάδα θετικού ελέγχου που έλαβε θεραπεία με rhEGF στα 20 ng/mL, με n=3n=3n=3.

Μετά από 48 ώρες θεραπείας, συλλέξτε τα κύτταρα.

Εκχυλίστε τη συνολική πρωτεΐνη και χρησιμοποιήστε στύπωμα Western για να προσδιορίσετε την έκφραση των ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 και CD44.

Εκτίμηση της έκφρασης πρωτεΐνης σφιχτού συνδέσμου

[0082]Παρασκευάστε ένα εναιώρημα μονοκυττάρου κυττάρων HaCaT σε πλήρες μέσο καλλιέργειας σε πυκνότητα 5×1045 \\ φορές 10^45×104 κύτταρα/mL και σπάρτε τα κύτταρα σε φιάλες καλλιέργειας.

Αφού αφήσετε τα κύτταρα να προσκολληθούν για 24 ώρες στους 37 βαθμούς κάτω από 5% διοξείδιο του άνθρακα, απορρίψτε το μέσο καλλιέργειας και χορηγήστε τις διαφορετικές ουσίες δοκιμής.

Συμπεριλάβετε μια κενή ομάδα ελέγχου, με n=3n ​​= 3n=3.

Μετά από 48 ώρες θεραπείας, συλλέξτε τα κυτταρολύματα και μετρήστε την οκλουδίνη και την κλαουδίνη-1 χρησιμοποιώντας ELISA σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ.

Δοκιμασία γρατσουνιών κυττάρων

[0083]Παρασκευάστε ένα εναιώρημα ενός κυττάρου κυττάρων HaCaT σε πλήρες μέσο καλλιέργειας σε πυκνότητα 5×1055 \\ φορές 10^55×105 κύτταρα/mL.

Σπόροι 500 μL ανά φρεάτιο σε ένα πιάτο 24 φρεατίων.

Μετά την προσκόλληση των κυττάρων, χορηγήστε τις θεραπείες, διαιρώντας τα κύτταρα σε μια κενή ομάδα ελέγχου, μια ομάδα θετικού ελέγχου που υποβλήθηκε σε θεραπεία με εμβρυϊκό βόειο ορό και σε ομάδες δοκιμαστικής ουσίας.

Θεραπεία για 48 ώρες.

Μετά τη θεραπεία, δημιουργήστε απαλά μια ευθεία γρατσουνιά χρησιμοποιώντας ένα άκρο πιπέτας.

Αντικαταστήστε το μέσο με μέσο χωρίς ορό σε όλες τις ομάδες εκτός από την ομάδα θετικού μάρτυρα.

Φωτογραφίστε τις γρατσουνισμένες περιοχές στις 0, 24 και 48 ώρες.

Χρησιμοποιήστε το ImageJ για να υπολογίσετε την περιοχή γρατσουνιάς και να αξιολογήσετε την ικανότητα μετανάστευσης κυψελών.

 

Παράδειγμα 10: Αξιολόγηση κατακράτησης υγρασίας

[0084]Παράδειγμα 10.

[0085]Χρησιμοποιήθηκε μια in vitro βαρυμετρική μέθοδος για την αξιολόγηση της ενυδατικής απόδοσης ορών που περιέχουν Ver, Ech ή γλυκερίνη.

Ζυγίστε τις καθορισμένες ποσότητες του προεπεξεργασμένου δείγματος 1, που περιέχει 2% Ver; Δείγμα 2, που περιέχει 2% Ech; και ο θετικός μάρτυρας, που περιέχει 5% γλυκερίνη.

Αποθηκεύστε τα δείγματα σε θάλαμο σταθερής θερμοκρασίας, σταθερής υγρασίας στους 25 βαθμούς και σχετική υγρασία 50%.

Ζυγίστε τα δείγματα σε διαφορετικά χρονικά σημεία και σχεδιάστε καμπύλες διατήρησης υγρασίας.

[0086]Ο ρυθμός συγκράτησης υγρασίας υπολογίζεται ως εξής:

Ποσοστό κατακράτησης υγρασίας (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Ποσοστό κατακράτησης υγρασίας (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\%Ποσοστό κατακράτησης υγρασίας (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100%

[0087]Οπου:

[0088]M0M_0M0​ είναι η μάζα της άδειας πλάκας, σε γραμμάρια.

[0089]M1M_1M1​ είναι η μάζα της γυάλινης πλάκας μετά την προσθήκη του δείγματος, σε γραμμάρια.

[0090]M2M_2M2​ είναι η μάζα μετά την αποθήκευση σε ξηραντήρα για αρκετές ώρες, σε γραμμάρια.

Σημείωση του μεταφραστή: Η παράγραφος [0085] περιγράφει την αποθήκευση σε θάλαμο ελεγχόμενης θερμοκρασίας, ελεγχόμενης υγρασίας, ενώ το [0090] αναφέρεται σε ξηραντήρα. Και οι δύο περιγραφές διατηρούνται από την πηγή.

 

Πειραματικά Αποτελέσματα

[0091]Τα πειραματικά αποτελέσματα αυτού του παραδείγματος είναι τα ακόλουθα.

Επιδράσεις στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HaCaT

[0092]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, διαφορετικά εκχυλίσματα Cistanche είχαν διαφορετικά αποτελέσματα στη βιωσιμότητα των κυττάρων HaCaT.

Τα Ver και POL αύξησαν σημαντικά τη βιωσιμότητα των κυττάρων, με το P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Επιδράσεις στη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων

[0093]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, τα μεσοκυττάρια λιπίδια στην κεράτινη στιβάδα είναι το βασικό συστατικό "κονίαμα" της δομής "τουβλιού και κονιάματος" του δέρματος.

Τα κεραμίδια, η χοληστερόλη και τα ελεύθερα λιπαρά οξέα σχηματίζουν μια πυκνή δομή διπλής στιβάδας σε συγκεκριμένες αναλογίες.

Η διατήρηση της φυσιολογικής σύνθεσης λιπιδίων μπορεί να ενισχύσει αυτή τη δομή, να αποτρέψει την απώλεια νερού, να αντισταθεί σε εξωτερικές βλάβες, να διατηρήσει την ισορροπία του μικροβιώματος του δέρματος και να προωθήσει την αυτο-επισκευή.

Μπορεί έτσι να αντιμετωπίσει την ξηρότητα, την ευαισθησία και τη μειωμένη ικανότητα άμυνας του δέρματος στην πηγή τους.

[0094]Η συνθετάση λιπαρών οξέων περιγράφεται ως ένζυμο που περιορίζει τον ρυθμό του πυρήνα και ως κεντρική μηχανή παροχής που ρυθμίζει τη σύνθεση λιπιδίων του δέρματος.

Η κύρια λειτουργία του είναι να καταλύει τη σύνθεση του παλμιτικού οξέος, C16:0, από ακετυλο-CoA και μηλονυλο-CoA. Το παλμιτικό οξύ περιγράφεται ως το κύριο ενδογενές μακράς αλυσίδας κορεσμένο λιπαρό οξύ στο δέρμα.

Το παλμιτικό οξύ έχει δύο λειτουργίες.

Πρώτον, ως θεμελιώδες δομικό δομικό στοιχείο, χρησιμοποιείται άμεσα στη σύνθεση λιπιδίων φραγμού στιβάδας-κεράτινης στιβάδας, συμπεριλαμβανομένων των κεραμιδίων και των ελεύθερων λιπαρών οξέων, παρέχοντας την υλική βάση για το σχηματισμό φυλλωτού διπλού στρώματος.

Δεύτερον, ως σημαντικός πρόδρομος και σηματοδοτικό μόριο, μπορεί να υποστεί περαιτέρω επεξεργασία από κατάντη ελονγκάσες, όπως το ELOVL1, σε λιπαρά οξέα πολύ μακράς αλυσίδας. Αυτά τα διακριτικά λιπαρά οξέα απαιτούνται για την ακεραιότητα του φραγμού.

Κατά συνέπεια, η δραστηριότητα της συνθετάσης των λιπαρών οξέων καθορίζει άμεσα την παροχή πρώτων υλών που είναι διαθέσιμες για την παραγωγή λιπιδίων φραγμού από το δέρμα.

Η ανοδική ρύθμιση της λειτουργίας του είναι ένα αρχικό και κρίσιμο βήμα για την προώθηση της σύνθεσης των επιδερμικών λιπιδίων και ως εκ τούτου την επιδιόρθωση και την ενίσχυση του φυσικού δερματικού φραγμού, υποστηρίζοντας τελικά τη διατήρηση της υγρασίας και την άμυνα.

[0095]Τα δεδομένα έδειξαν ότι ο θετικός μάρτυρας rhEGF και Ver αύξησαν σημαντικά τη δραστηριότητα συνθάσης λιπαρών οξέων, με το P<0.05P < 0.05P<0.05.

Τα POL, POLS, RE1 και RE2 δεν αύξησαν τη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Σημείωση του μεταφραστή: Η πηγή περιλαμβάνει πρώτα το RE2 μεταξύ των υλικών που δεν αύξησαν τη δραστηριότητα, στη συνέχεια αναφέρει μια μη σημαντική αύξηση για το RE2. Αυτή η ασυνέπεια διατηρείται.

 

Επιδράσεις στην περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ

[0096]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, το υαλουρονικό οξύ είναι ένας φυσικώς απαντώμενος πολυσακχαρίτης στο δέρμα με ισχυρή ικανότητα δέσμευσης νερού, που περιγράφεται στην πηγή ότι υπάρχει κυρίως στο χόριο και την κεράτινη στοιβάδα.

Η αύξηση της περιεκτικότητας σε υαλουρονικό οξύ μπορεί να διατηρήσει την υγρασία σε βαθύτερα επίπεδα, να διατηρήσει υγιή δερματική δομή, να προσφέρει αντιοξειδωτικά και αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα, να προάγει την επούλωση και την επισκευή των πληγών και να βελτιώσει τη λειτουργία της κεράτινης στιβάδας.

Αυτά τα αποτελέσματα περιγράφονται ότι παράγουν ενυδάτωση, πληρότητα και ανθεκτικότητα από μέσα.

[0097]Τα δεδομένα έδειξαν ότι ο θετικός έλεγχος rhEGF, Ver, και RE2 αύξησε σημαντικά την περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ, με P<0.05P < 0.05P<0.05.

Τα POL, POLS και RE1 δεν αύξησαν την περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ.

 

Σύγκριση κατηγοριών εκχυλίσματος και καθαρισμένου βερβασκοσίδη

[0098]Το Cistanche περιέχει κυρίως φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες και πολυσακχαρίτες.

Οι δραστηριότητες του εκχυλίσματος πολυσακχαρίτη, POL; εκχυλίσματα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων, POLS, RE1 και RE2. και η βερμπασκοσίδη, Ver, συγκρίθηκαν επομένως.

Τα αποτελέσματα στα Σχήματα 2-4 υποδεικνύουν ότι τα εκχυλίσματα φαινυλαιθανοειδούς γλυκοζίτη Cistanche που παρασκευάστηκαν με διαφορετικές μεθόδους και η μεμονωμένη ένωση παρουσίασαν διαφορετικές δραστηριότητες στην προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων HaCaT, στην αύξηση της δραστηριότητας συνθάσης λιπαρών οξέων και στην αύξηση της περιεκτικότητας σε υαλουρονικό οξύ.

Μόνο ο Ver παρουσίασε δραστηριότητα και στους τρεις τομείς, όπως συνοψίζεται στον Πίνακα 1.

[0099]–[0101] Αυτοί οι αριθμοί παραγράφων και τα περιεχόμενα του Πίνακα 1 δεν υπήρχαν στην παρεχόμενη πηγή. Δεν είναι δυνατή η μετάφραση ή η ανακατασκευή του υλικού που λείπει.

Πίνακας 1. Περίληψη της βιοδραστικότητας διαφορετικών δειγμάτων

Δείκτης	Κενός έλεγχος	Θετικός έλεγχος	ΠΟΛ	POLS	RE1	RE2	Ver
Κυτταρική βιωσιμότητα (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
Δραστηριότητα FAS (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
Περιεκτικότητα HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

Περαιτέρω σύγκριση των CTE, Echinacoside και Verbascoside

[0102]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, οι κύριοι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες στο Cistanche περιλαμβάνουν τον εχινακοσίδη και τον βερμπασκοσίδη.

Τα αποτελέσματα του εκχυλίσματος ολικού φαινυλαιθανοειδούς γλυκοσιδίου Cistanche, CTE, που περιέχει 22,6% εχινακοσίδη και 4,5% βερμπασκοσίδη. εχινακοσίδη, Ech; και η βερμπασκοσίδη, Ver, στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HaCaT συγκρίθηκαν επομένως περαιτέρω.

[0103]Τα δεδομένα έδειξαν ότι τα CTE, Ech και Ver προήγαγαν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HaCaT.

Το CTE και το Ver παρήγαγαν τα ισχυρότερα αποτελέσματα, υποδηλώνοντας προστατευτικά αποτελέσματα στα κύτταρα του δέρματος.

Περαιτέρω επιδράσεις στη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων

[0104]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6, οι επιδράσεις στη δραστηριότητα συνθάσης λιπαρού οξέος ήταν ως εξής.

[0105]Τα δεδομένα έδειξαν ότι ο θετικός έλεγχος rhEGF, Ech και Ver αύξησαν σημαντικά τη δραστηριότητα συνθάσης λιπαρών οξέων, με P<0.05P < 0.05P<0.05.

Το CTE δεν αύξησε τη δραστηριότητα συνθετάσης λιπαρών οξέων.

 

Έκφραση γονιδίων και πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη σύνθεση λιπαρών οξέων

[0106]Τα σχήματα 7-9 δείχνουν τα αποτελέσματα στην έκφραση γονιδίων και πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη σύνθεση λιπαρών οξέων.

[0107]Το ACC και το FASN περιγράφονται ως το περιοριστικό του ρυθμού ένζυμο και ο πυρήνας του αναβολισμού των λιπιδίων.

Μαζί, καταλύουν τη δημιουργία λιπαρών οξέων μακράς αλυσίδας, συμπεριλαμβανομένου του παλμιτικού οξέος, παρέχοντας απαραίτητες πρώτες ύλες για τη σύνθεση βασικών λιπιδίων φραγμού, όπως τα κεραμίδια.

Η N-SMase είναι ένας βασικός εκκινητής της διάσπασης των λιπιδίων και της σηματοδότησης στρες με διπλό ρόλο.

Ενεργοποιείται κατά τη διάρκεια τραυματισμού και υδρολύει τη σφιγγομυελίνη για να δημιουργήσει κεραμίδια σηματοδότησης, προκαλώντας φλεγμονή και απόπτωση και καταστέλλοντας τη φυσιολογική σύνθεση λιπιδίων.

Στα φυσιολογικά κύτταρα, ωστόσο, έχει ρυθμιστικό ρόλο στο μεταβολισμό των λιπιδίων.

[0108]Όπως φαίνεται στα Σχήματα 7-9, τα αποτελέσματα qPCR και Western blot έδειξαν ότι το Ver, όπως και ο rhEGF, ρύθμισε σημαντικά τη γονιδιακή και πρωτεϊνική έκφραση των ACC, FASN και N-SMase, με Ρ<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι το Ver ρυθμίζει προς τα πάνω το ACC και το FASN για τη ρύθμιση της σύνθεσης κυτταρικών λιπιδίων για την κατασκευή της μεμβράνης, την αποθήκευση ενέργειας ή την έκκριση.

Ταυτόχρονα, η ανοδική ρύθμιση της N-SMase μπορεί να ενεργοποιήσει τον μεταβολικό κύκλο των σφιγγολιπιδίων.

Τα κεραμίδια που παράγονται δεν είναι μόνο σήματα πίεσης. Υπό κανονικές φυσιολογικές συνθήκες, είναι επίσης σημαντικοί πρόδρομοι για τη σύνθεση άλλων πολύπλοκων σφιγγολιπιδίων, όπως τα γλυκοσφιγγολιπίδια, ή για τη δυναμική αναδιαμόρφωση της μεμβράνης.

Έτσι, η συντονισμένη ανοδική ρύθμιση αυτών των τριών γονιδίων και πρωτεϊνών ενισχύει τη συνολική κυτταρική αναβολική δραστηριότητα και την ικανότητα αναδιαμόρφωσης της μεμβράνης.

 

Περαιτέρω επιδράσεις στην περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ

[0109]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 10, τα δεδομένα έδειξαν ότι τα rhEGF, CTE, Ech και Ver όλα αύξησαν σημαντικά την περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ, με P<0.05P < 0.05P<0.05.

Η σειρά επίδρασης ήταν CTE, ακολουθούμενη από την Ver, ακολουθούμενη από την Ech.

 

Έκφραση γονιδίων και πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη σύνθεση υαλουρονικού οξέος

[0110]Όπως φαίνεται στα Σχήματα 11–13, τα HAS2, HAS3 και CD44 σχηματίζουν έναν βρόχο ανατροφοδότησης «σύνθεσης-αίσθησης-απόκρισης» στο μεταβολισμό του υαλουρονικού οξέος στα κύτταρα HaCaT.

Τα HAS2 και HAS3 είναι τα ένζυμα του πυρήνα της καταλυτικής σύνθεσης.

Το HAS2 παράγει κυρίως υαλουρονικό οξύ υψηλού μοριακού βάρους και σχετίζεται με τη διατήρηση της ομοιόστασης του δέρματος και την αντιφλεγμονώδη δράση.

Το HAS3 τείνει να παράγει υαλουρονικό οξύ χαμηλότερου μοριακού βάρους και συμμετέχει πιο άμεσα σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη μετανάστευση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

Το CD44 είναι ο κύριος υποδοχέας της κυτταρικής επιφάνειας για το υαλουρονικό οξύ.

Όχι μόνο μεσολαβεί στην ενδοκυτταρική και εξωκυτταρική μετάδοση σήματος που περιλαμβάνει υαλουρονικό οξύ, αλλά επίσης ρυθμίζει δυναμικά το υαλουρονικό οξύ μέσω της ενδοκυττάρωσης και της ανακύκλωσης και, με τη σειρά του, ρυθμίζει την έκφραση και τη δραστηριότητα των HAS2 και HAS3.

[0111]Όπως φαίνεται στα Σχήματα 11-13, τα αποτελέσματα qPCR και Western blot έδειξαν ότι το Ver, όπως και ο rhEGF, ρύθμισε σημαντικά τη γονιδιακή και πρωτεϊνική έκφραση των HAS2, HAS3 και CD44, με Ρ<0.05P < 0.05P<0.05.

Τα ρυθμιστικά αποτελέσματα του Ver στην έκφραση των γονιδίων HAS2, HAS3 και CD44 ήταν μεγαλύτερα από εκείνα του rhEGF.

Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η Ver ρυθμίζει τα HAS2, HAS3 και CD44 για τον έλεγχο της πλήρους διαδικασίας «σύνθεσης-συναρμολόγησης-μετάδοσης σήματος» του υαλουρονικού οξέος, συμβάλλοντας στην επιδερμική ενυδάτωση, επιδιόρθωση και λειτουργία φραγμού.

Επιδράσεις στην έκφραση πρωτεΐνης σφιχτού συνδέσμου

[0112]Η διατήρηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος και υαλουρονικού οξέος περιγράφεται ως παροχή θεμελιώδους, συνεργιστικής υποστήριξης και σταθεροποίησης των πρωτεϊνών με σφιχτή σύνδεση μεταξύ των κυττάρων HaCaT.

Τα επαρκή λιπίδια επιτρέπουν στα κερατινοκύτταρα να σχηματίσουν πλήρεις, οργανωμένες ενδοκυτταρικές λιπιδικές διπλές στοιβάδες.

Αυτές οι δομές περιγράφονται όχι μόνο ως το φυσικό πλαίσιο του φραγμού αλλά και ως ένα σταθερό, υδρόφοβο δομικό περιβάλλον για τη συναρμολόγηση και την αγκύρωση της πρωτεΐνης με σφιχτή σύνδεση.

Ταυτόχρονα, η ευνοϊκή κατάσταση ενυδάτωσης που διατηρεί το υαλουρονικό οξύ βοηθά στη διασφάλιση του φυσιολογικού μεταβολισμού και της σηματοδότησης των κερατινοκυττάρων.

Μέσω μονοπατιών που περιλαμβάνουν υποδοχείς όπως το CD44, το υαλουρονικό οξύ ρυθμίζει επίσης έμμεσα την έκφραση και την κατανομή της πρωτεΐνης σφιχτής σύνδεσης.

Μαζί, τα λιπίδια και το υαλουρονικό οξύ παρέχουν τις φυσικές και βιοχημικές βάσεις που απαιτούνται για το σχηματισμό και τη συντήρηση σφιχτών συνδέσμων από τις αντίστοιχες προοπτικές της δομικής σταθερότητας και της μικροπεριβαλλοντικής ομοιόστασης.

Ενισχύουν έτσι τις φυσικές διακυτταρικές συνδέσεις και τη συνολική ακεραιότητα του φραγμού.

[0113]Τα προηγούμενα αποτελέσματα έδειξαν ότι το Ver επέδειξε την ισχυρότερη δράση στην προώθηση της παραγωγής λιπιδίων του δέρματος και υαλουρονικού οξέος.

Περαιτέρω διερεύνηση των επιπτώσεών της στις μεσοκυττάριες στενές συνδέσεις έδειξε ότι τα CTE, Ech και Ver προώθησαν όλα σημαντικά την έκφραση της πρωτεΐνης κλειστής σύνδεσης claudin-1, με P<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 15, μόνο τα Ech και Ver προήγαγαν σημαντικά την έκφραση οκλουδίνης.

Το αποτέλεσμα του Ver ήταν σημαντικά μεγαλύτερο από αυτό του Ech, με το P<0.05P < 0.05P<0.05.

Αυτό ήταν σύμφωνο με την ισχυρότερη δραστηριότητα που αποδίδεται στο Ver στην προώθηση της παραγωγής λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος του δέρματος.

 

Επιδράσεις στην επούλωση τραυμάτων

[0114]Όπως φαίνεται στα Σχήματα 16-17, το HAS3 συμμετέχει άμεσα σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη μετανάστευση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

Το CD44 μεταδίδει πληροφορίες από το υαλουρονικό οξύ στα κύτταρα και τελικά ρυθμίζει τη μετανάστευση, τον πολλαπλασιασμό και την ενυδάτωση των κυττάρων, παίζοντας κεντρικό ρόλο στην επούλωση των πληγών, την ενυδάτωση του δέρματος και την ομοιόσταση φραγμού.

Τα προηγούμενα πειράματα έδειξαν ότι η βερμπασκοσίδη προήγαγε σημαντικά την έκφραση των HAS3 και CD44.

Επομένως, η ικανότητά του να προάγει την επούλωση των πληγών διερευνήθηκε περαιτέρω.

[0115]Όπως φαίνεται στα Σχήματα 16-17, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το CTE, το Ech και το Ver προώθησαν όλα την επούλωση του τραύματος.

Ωστόσο, μόνο το Ver έδειξε σημαντική προαγωγική δράση στις 24 ώρες.

Επέδειξε την ισχυρότερη δράση προαγωγής της επούλωσης πληγών, σε συμφωνία με τη σημαντική προαγωγή του γονιδίου HAS3 και της έκφρασης πρωτεΐνης.

Προσόντα σύνταξης: Η πειραματική μέθοδος που παρέχεται για αυτό το αποτέλεσμα είναι μια δοκιμασία γρατσουνίσματος κυττάρων. Η "επούλωση πληγών" είναι η ορολογία που χρησιμοποιείται στην πηγή και δεν πρέπει να ερμηνεύεται εδώ ως αποδεδειγμένο κλινικό αποτέλεσμα.

 

Απόδοση διατήρησης υγρασίας των σκευασμάτων

[0116]Όπως φαίνεται στο Σχήμα 18, η ικανότητα διατήρησης υγρασίας δείγματος αξιολογήθηκε από τις τάσεις στις καμπύλες διατήρησης υγρασίας για την αξιολόγηση της απόδοσης ενυδάτωσης για το δέρμα.

Τα δεδομένα έδειξαν ότι η καμπύλη διατήρησης υγρασίας του Δείγματος 1 ήταν πάνω από αυτή του Δείγματος 2 και του θετικού μάρτυρα.

Υπό συνθήκες 25 βαθμών και σχετικής υγρασίας 50%, το Δείγμα 1 είχε καλύτερη ενυδατική απόδοση από το Δείγμα 2 και τον έλεγχο γλυκερίνης 5%, υποδεικνύοντας την ισχυρότερη ενυδατική απόδοση.

Το δείγμα 1 περιείχε Ver, και το δείγμα 2 περιείχε Ech.

Σύμφωνα με την πηγή, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι, όταν ενσωματώνεται σε προϊόντα, το Ver έχει καλύτερη ομοιογένεια και ενυδατική δράση από το Ech, όπως συνοψίζεται στον Πίνακα 2.

[0117]Πίνακας 2. Περίληψη των Δραστηριοτήτων Διαφορετικών Δειγμάτων.

Τα περιεχόμενα του πίνακα δεν συμπεριλήφθηκαν στην παρεχόμενη πηγή.

[0118]Σημείωση: [Το σύμβολο σημασίας δεν αναπαράχθηκε στο παρεχόμενο κείμενο.] Σε σύγκριση με την κενή ομάδα ελέγχου, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Συνολική ερμηνεία που παρουσιάζεται στη γνωστοποίηση

[0119]Τα προηγούμενα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η βερμπασκοσίδη επιδεικνύει εξαιρετική ενυδατική δράση ενεργοποιώντας με ακρίβεια έναν πλήρη μηχανισμό επιδιόρθωσης φραγμού δέρματος κλειστού βρόχου.

Πρώτα δρα στη βασική στιβάδα για να επιταχύνει σημαντικά την ανανέωση των επιδερμικών κυττάρων και την ομαλή διαφοροποίηση, παρέχοντας επαρκή κυτταρικά δομικά στοιχεία για την κατασκευή φραγμού.

Στη συνέχεια προάγει την ενίσχυση των σφιχτών συνδέσμων και των δεσμοσωμικών δομών μεταξύ των κερατινοκυττάρων, ενισχύοντας τη φυσική αγκύρωση μεταξύ των κυττάρων και αυξάνοντας την πυκνότητα φραγμού και τη μηχανική αντοχή.

Ταυτόχρονα, ενεργοποιεί αποτελεσματικά βασικά ένζυμα του μεταβολισμού των λιπιδίων και αναπληρώνει τη μεσοκυττάρια λιπιδική μήτρα, γεμίζοντας τους χώρους «κονιάματος» ανάμεσα στα «τούβλα» για να αποτρέψει την απώλεια νερού.

Τέλος, ρυθμίζοντας προς τα πάνω την έκφραση της συνθάσης του υαλουρονικού οξέος, αυξάνει ταυτόχρονα την περιεκτικότητα σε υαλουρονικό οξύ στο χόριο και την επιδερμίδα, δεσμεύοντας και διατηρώντας σημαντικές ποσότητες νερού.

Αυτό σχηματίζει έναν πλήρη λειτουργικό βρόχο που περιλαμβάνει ανανέωση στην πηγή, δομική ενίσχυση, αναπλήρωση μήτρας και αποθήκευση νερού.

Μπορεί έτσι να επιτύχει μια ακολουθία κλειστού βρόχου "προώθησης του κυτταρικού πολλαπλασιασμού → ενίσχυσης των φυσικών μεσοκυττάριων συνδέσεων → προώθησης της παραγωγής λιπιδίων και υαλουρονικού οξέος → προώθησης της επούλωσης πληγών".

Η πηγή καταλήγει στο συμπέρασμα ότι παράγει καλύτερα αποτελέσματα εφαρμογής από την εχινακοσίδη από το Cistanche και τη συνήθως χρησιμοποιούμενη υγροσκοπική γλυκερίνη και μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως προστατευτικός παράγοντας για το δέρμα σε λειτουργικά προϊόντα περιποίησης και τοπικής χρήσης.

[0120]Οι προηγούμενες περιγραφές είναι μόνο συγκεκριμένες ενσωματώσεις της εφεύρεσης.

Το πεδίο προστασίας της εφεύρεσης δεν περιορίζεται σε αυτές τις πραγματοποιήσεις.

Οποιεσδήποτε αλλαγές ή υποκαταστάσεις που θα μπορούσε εύκολα να συλλάβει ένας έμπειρος στην τέχνη εντός του τεχνικού πεδίου που αποκαλύπτεται στην εφεύρεση θα εμπίπτουν στο πλαίσιο προστασίας της εφεύρεσης.

Συνεπώς, το εύρος προστασίας της εφεύρεσης θα προσδιορίζεται από τις αξιώσεις.