Οι πολυσακχαρίτες Cistanche Deserticola εξασθενούν τη διαβητική νεφροπάθεια σε ποντίκια επηρεάζοντας την εντερική χλωρίδα και αναστέλλοντας τον οδηγό σηματοδότησης του υποδοχέα 4/πυρηνικού παράγοντα-κΒ ⅱ

2.5 Επίδραση των CDPs στην παθολογία του παχέος εντέρου σε ποντίκια C57BL/6J

Cistanche Deserticola Εκχύλισμα σκόνη από πρώτες ύλες υψηλής ποιότητας

Κάντε κλικ για να λάβετε περισσότερες λεπτομέρειες

Όπως φαίνεται στο σχήμα 2, η χρώση Η & Ε αποκάλυψε ότι η δομή ιστού του παχέος εντέρου των φυσιολογικών ποντικών ήταν φυσιολογική, οι κρυπτογραφήσεις ήταν τακτοποιημένα και σφιχτά διατεταγμένα, ο αριθμός ήταν μεγάλος και τα επιθηλιακά κύτταρα δεν είχαν προφανή εκφυλισμό και απόρριψη. Αντίθετα, τα ποντίκια DN έδειξαν προφανή απόρριψη επιθηλιακών κυττάρων του παχέος εντέρου, διείσδυση φλεγμονωδών κυττάρων, βλάβη στα κρυπτά κύτταρα, εξαφάνιση της εντερικής αδενικής δομής και αυξημένη διαπερατότητα. Μετά από 4 εβδομάδες παρέμβασης CDPS, οι παραπάνω παθολογικές συνθήκες ανακτήθηκαν σε διαφορετικούς βαθμούς.

Τα αποτελέσματα της χρώσης AB-PAS έδειξαν ότι σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ο αριθμός των αδιάσπαστων κυττάρων κυματοειδών στο κόλον των ποντικών ομάδας μοντέλων μειώθηκε σημαντικά και η έκκριση της πρωτεΐνης όξινης βλέννας αυξήθηκε σημαντικά. Ο αριθμός των ακανόνιστων κυττάρων κυματοειδών στο κόλον της ομάδας ελέγχου ήταν ο μεγαλύτερος. Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η έκκριση της πρωτεΐνης της όξινης βλέννας της παχέος εντέρου στην ομάδα CDPS-Η μειώθηκε.

Εικόνα 2 Επίδραση των CDP σε ιστοπαθολογικές αλλαγές σε ποντίκια DN όπως εξετάστηκαν από τη χρώση H & E και AB-PAS

2.6 Επίδραση των CDPs στην εντερική χλωρίδα των ποντικών C57BL/6J

Οι επιδράσεις των CDP σε βιοχημικούς δείκτες και παθολογικά αποτελέσματα των ποντικών DN αναλύθηκαν διεξοδικά και τα περιεχόμενα του παχέος εντέρου των ποντικών στην ομάδα CDPS-H με την καλύτερη συνολική αποτελεσματικότητα επιλέχθηκαν για την έρευνα εντέρου.

2.6.1 Παραλλαγή αλληλουχίας αμπλικόνων (ASV) Διάγραμμα VENN όπως φαίνεται στο σχήμα 3, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, τη σχετική αφθονία των εντερικών ειδών χλωρίδας στα μοντέλα ομάδας ποντικών μειώθηκε και η σχετική αφθονία βελτιώθηκε μετά τη θεραπεία με CDPS.

Καπετάνιος

2.6.2 Ανάλυση διαφορετικότητας άλφα όπως φαίνεται στον Πίνακα 6, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, μειώθηκε ο δείκτης CHAO1 της εντερικής χλωρίδας των ποντικών ομάδας μοντέλων. Μετά την παρέμβαση CDPS, ο δείκτης CHAO1 αυξήθηκε, αλλά δεν υπήρχε στατιστική σημασία, υποδεικνύοντας ότι τα CDPs μπορεί να αλλάξουν τη δομή της εντερικής χλωρίδας αυξάνοντας τον συνολικό αριθμό των ειδών. Ο δείκτης κάλυψης είναι κοντά στο 1, υποδεικνύοντας ότι τα αποτελέσματα της αλληλουχίας μπορούν βασικά να αντικατοπτρίζουν την πραγματική κατάσταση του δείγματος. Δεν υπήρξε στατιστικά σημαντική διαφορά στους δείκτες Shannon, Simpson, Coverage και Pielou _ e μεταξύ των ομάδων, υποδεικνύοντας ότι ο πλούτος και η ποικιλομορφία των περιβαλλοντικών κοινοτήτων σε κάθε ομάδα ήταν καλές και η κάλυψη της αποικίας ήταν συνεπής και ομοιόμορφα.

Εικ. 3 Διάγραμμα Venn της διανομής ASV

Πίνακας 6 Δείκτες αλφα-διαχωρισμού των εντερικών μικροβίων σε ποντίκια στις ομάδες ελέγχου, μοντέλου και CDPS (n=6)

2.6.3 Ανάλυση βήτα ποικιλομορφίας

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, μέσω της ανάλυσης βήτα ποικιλομορφίας, η ανάλυση κύριων συστατικών (PCA) μπορεί να διακρίνει τρεις ομάδες δειγμάτων σε τρισδιάστατο χώρο, υποδεικνύοντας ότι υπάρχουν σημαντικές διαφορές στην εντερική χλωρίδα αυτών των τριών ομάδων δειγμάτων. Η ομάδα μοντέλου και η ομάδα ελέγχου διαχωρίζονται κατά μήκος του άξονα PC2 και η ομάδα CDPS-H είναι μεταξύ της ομάδας μοντέλου και της ομάδας ελέγχου, κοντά στην ομάδα ελέγχου.

Εικ. 4 Βήτα ποικιλία εντερικής χλωρίδας σε ποντίκια στις ομάδες ελέγχου, μοντέλου και CDPS (n=6)

2.6.4 Επιδράσεις των CDPs στην εντερική χλωρίδα των ποντικών C57BL/6J

2.6.4.1 επίπεδο φυλών

Όπως φαίνεται στο σχήμα 5, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, η σχετική αφθονία των σταθεροποιημένων στην ομάδα του μοντέλου αυξήθηκε σημαντικά, η σχετική αφθονία των βακτηροειδώτα και της verrucomicrobia μειώθηκε σημαντικά και ο λόγος σχετικής αφθονίας (B/F) των βακτηροειδών σε σταθεροποιήσεις μειώθηκε. Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλων, τα CDPs αύξησαν σημαντικά τη σχετική αφθονία των βακτηριωτικών και της verrucomicrobia, μείωσαν τη σχετική αφθονία των firmicutes και αύξησαν την τιμή B/F, η οποία ήταν πιο κοντά στην τιμή B/F της ομάδας ελέγχου.

Εικ. 5 bar chart της σχετικής αφθονίας της εντερικής χλωρίδας στο επίπεδο του φυλλικού (n=6)

2.6.4.2 Επίπεδο γένους

Το ιστόγραμμα της σύνθεσης αφθονίας των ειδών στα επίπεδα των 30 κορυφαίων γωνιών (Σχήμα 6) δείχνει ότι υπάρχουν διαφορές στην εντερική χλωρίδα των ποντικών στην ομάδα μοντέλων και στην ομάδα CDPS-H. Υπάρχουν 16 διαφορετικά βακτηριακά γένη μεταξύ της ομάδας μοντέλου και της ομάδας ελέγχου. Υπάρχουν 8 διαφορετικά βακτηριακά γένη μεταξύ της ομάδας CDPS-H και της ομάδας μοντέλου. 5 βακτηριακά γένη στην επικαλυπτόμενη περιοχή μπορεί να είναι τα βακτηριακά γένη που τα CDPs μπορούν να βελτιώσουν τη διαβητική νεφροπάθεια (Εικόνα 7). Όπως φαίνεται από τον Πίνακα 7, στο επίπεδο του γένους στην εντερική χλωρίδα του ποντικιού, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, η σχετική αφθονία του αλλοβλάου στην ομάδα μοντέλων και RF39 μειώθηκε σημαντικά και η σχετική αφθονία της Roseburia, της ομάδας Ruminococcus _ torques {10}}<0.05) was increased. ; Compared with the Model group, the relative abundance of Roseburia, Romboutsia, Ruminococcus_torques_group and RF39 (P＜0.05) decreased in the CDPs-H group; the relative abundance of Allobaculum increased (P＜0.05).

Εικ. 6 bar chart της σχετικής αφθονίας της εντερικής χλωρίδας στο επίπεδο του γένους (n=6)

Εικ. 7 Venn Διάγραμμα της εντερικής χλωρίδας στο επίπεδο του γένους (n=6)

Πίνακας 7 Επιδράσεις των CDP στη σχετική αφθονία των μικροβιακών γένη του εντέρου μεταξύ των ομάδων ελέγχου, μοντέλου και CDPS (n=6)

2.6.4.3 Επίδραση των CDPs στην έκφραση του Colonic Zo -1 και του occludin

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 8 και στον Πίνακα 8, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, τα σχετικά επίπεδα έκφρασης των πρωτεϊνών zo -1 και ωκκλουτίνης στον ιστό του παχέος εντέρου στην ομάδα μοντέλων μειώθηκαν σημαντικά (p <{3}} 01). Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η παρέμβαση CDPS σε κάθε δόση θα μπορούσε τα σχετικά επίπεδα έκφρασης των ZO -1 και πρωτεΐνες αποκλεισίνης στον ιστό του παχέος εντέρου.<0.01).

Εικόνα 8 Έκφραση του zo -1 και της occludin σε ιστό του παχέος εντέρου από κάθε ομάδα (n=3)

Πίνακας 8 Σχετικά επίπεδα έκφρασης zo -1 και occludin στον ιστό του παχέος εντέρου από κάθε ομάδα (n=3)

Πρώτες ύλες Cistanche

2.7 Επίδραση των CDP σε νεφρική έκφραση πρωτεΐνης σηματοδότησης TLR4/NF-κΒ.

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 9 και στον Πίνακα 9, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, η σχετική έκφραση της πρωτεΐνης TLR4 στον ιστό των ποντικών στην ομάδα μοντέλων και οι αναλογίες των Ρ-ΝΡ-κΒΡ65/ΝΡ-κΒ Ρ65 και ΡΙ κΒα/Ι κΒα αυξήθηκαν σημαντικά. Υψηλή (σ<0.01); compared with the Model group, the relative expression of TLR4 protein and p-NF-κBp65/NF-κB p65 and p-I κBα/I κBα in the kidney tissue of mice in the CDPs-M and CDPs-H groups The ratios were significantly reduced (P＜0.01, P＜0.05).

Εικόνα 9 Ανάλυση στυπώματος Western της πρωτεϊνικής έκφρασης που σχετίζεται με την οδό σηματοδότησης TLR4/ NF-κΒ σε ιστό νεφρού από ποντίκια από κάθε ομάδα (n=3)

Πίνακας 9 Σχετικά επίπεδα έκφρασης των πρωτεϊνών που σχετίζονται με την οδό σηματοδότησης TLR4/NF-κΒ σε ιστό νεφρού ποντικών από κάθε ομάδα (n=3)