Μεταβολές στην αντιοξειδωτική δραστικότητα κατά τη ζύμωση ενζύμων

Κεφάλαιο 4 Μεταβολές στην αντιοξειδωτική δραστικότητα κατά τη ζύμωση ενζύμων

Τα φρούτα είναι πλούσια σε θρεπτικά συστατικά και έρχονται σε πολλές ποικιλίες. Η παραγωγή ουσιών κατά τη διάρκεια της ζύμωσης είναι πολύπλοκη και ποικίλη και υπάρχουν πολλές μελέτες για τουςαντιοξειδωτική δραστηριότητα. Οι άνθρωποι πάντα εξερευνούν και ανακαλύπτουν, αναζητώντας τρόφιμα που είναι επωφελείςανθρώπινη υγεία, έτσι τα ένζυμα έχουν γίνει ένα καυτό θέμα τα τελευταία χρόνια. Η παραδοσιακή διαδικασία παραγωγής ενζύμων είναι η απόκτηση ενζύμων με φυσική ζύμωση φρούτων και λαχανικών. Με βάση την προηγούμενη έρευνα, αυτό το άρθρο προσθέτει 4 ευεργετικά βακτήρια ζύμωσης. Αυτά τα βακτηρίδια υπάρχουν επίσης στο ένζυμο. Μετά την πρόσθετη προσθήκη βακτηρίων, αλλάζει ο αριθμός και ο τύπος των μικροοργανισμών στη διαδικασία ζύμωσης. Τι αποτέλεσμα θα έχει αυτή η αλλαγή στην αντιοξειδωτική της δραστηριότητα; Στο προηγούμενο κεφάλαιο, πήραμε τα μήλα ως παράδειγμα για μια λεπτομερή εξήγηση. Η σύγκριση της αντιοξειδωτικής δραστικότητας της πειραματικής ομάδας και της ομάδας ελέγχου σε διαφορετικές συγκεντρώσεις ενζύμου έδειξε ότι η αντιοξειδωτική δραστικότητα του ενζύμου στην πειραματική ομάδα ήταν μεγαλύτερη από αυτή της ομάδας ελέγχου. Η ένταση της αντιοξειδωτικής δραστικότητας αντικατοπτρίζει επίσης την αξιοπιστία του ενζύμου με κάποιο τρόπο.

Νέα βότανα Cistanche με ισχυρή αντιοξειδωτική ισχύ

 

Υποστηρικτική υπηρεσία του WECistanche-ο μεγαλύτερος εξαγωγέας Cistanche στην Κίνα:
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

Αυτό το κεφάλαιο προσθέτει κοινά αχλάδια και εσπεριδοειδή στο αρχικό πείραμα και παρακολουθεί και ανιχνεύει τις αλλαγές στα δικά τουςαντιοξειδωτική δραστηριότηταΚατά τη διάρκεια της ζύμωσης. Με βάση τη μείωση του κόστους, μέσω πειραμάτων, ελπίζουμε να αντικατοπτρίζουμε περισσότερο τη βιολογική δραστηριότητα των ενζύμων μετά την προσθήκη βακτηρίων και να παράσχουμε μια ορισμένη θεωρητική βάση και υποστήριξη δεδομένων για την παραγωγή μικροβιακών ενζύμων ΒΤεχνητής εμβολιασμού στελεχών.

 

 

 

4.1 Υλικά και Μέθοδοι

4.1.1 Υλικά

(1) Πειραματικά υλικά

Πλύνετε τα φρέσκα μήλα, τα αχλάδια και τα εσπεριδοειδή με αποστειρωμένο νερό υπό αποστειρωμένες συνθήκες, στεγνώστε τα φυσικά σε ένα αποστειρωμένο τραπέζι λειτουργίας, ξεφλουδίστε τα και τα κόψτε για μεταγενέστερη χρήση. Προσθέστε λευκή ζάχαρη και φρούτα σε ένα αποστειρωμένο γυάλινο βάζο σε αναλογία μάζας 1: 1. Ενεργοποιήστε τα βακτηρίδια που απαιτούνται για το πείραμα και εμβολιάστε τα στο ένζυμο σύμφωνα με το βέλτιστο σχήμα (αυτό το βήμα λειτουργίας παραλείπεται για την ομάδα ελέγχου), σφραγίστε το και τοποθετήστε το σε δροσερό και ξηρό μέρος. Πάρτε δείγματα σε διαφορετικές χρονικές περιόδους ζύμωσης σε θερμοκρασία δωματίου για να αποκτήσετε όλο το ενζυμικό υγρό που περιέχει πολτό φρούτων και φιλτράρετε το. Πάρτε το υπερκείμενο ως πειραματικό δείγμα και χρησιμοποιήστε το για να μετρήσετε τα σχετικά δεδομένα μετά από φυγοκεντρητή σε 10, 000 RPM σε φυγοκεντρητή υψηλής ταχύτητας για 15 λεπτά. Αξίζει να σημειωθεί ότι κατά τη διαδικασία κατασκευής ενζύμων, προκειμένου να αποφευχθεί η περιττή μόλυνση, όλες οι λειτουργίες μας διεξάγονται υπό αποστειρωμένες συνθήκες.

(2) Κύρια όργανα

Τα μέσα που απαιτούνται για το πείραμα είναι τα ίδια με το 3,1.1 (2).

 

4.1.2 Μέθοδοι

(1) Μεταβολές της συνολικής περιεκτικότητας σε φαινόλη κατά τη διάρκεια της ζύμωσης

Προστέθηκε 450 μΐ διαλύματος δείγματος με απεσταγμένο νερό για να γίνει ο τόμος 46mL και στη συνέχεια προστέθηκε 1 ml αντιδραστηρίου φαινο-φαινόλης. Ανακατέψτε καλά και αντιδράστε για 3 λεπτά. Στη συνέχεια προστέθηκε 3ml 20% NACO3. Το μίγμα αναταράχθηκε σε ένα λουτρό σταθερής θερμοκρασίας σε 25 μοίρες για 2Η. Το απεσταγμένο νερό χρησιμοποιήθηκε ως κενός έλεγχος. Η απορρόφηση Α μετρήθηκε στα 760nm με φασματοφωτόμετρο. Διεξήχθησαν τρία αντίγραφα για κάθε θεραπεία. Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινόλη υπολογίστηκε σύμφωνα με την τυπική εξίσωση καμπύλης.

(2) Αλλαγές στη μείωση της ισχύος κατά τη διάρκεια της ζύμωσης

Προσθέστε 45 0 μΙ δείγματος σε 2,5 ml φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος με συγκέντρωση 0. (w/v) Με συγκέντρωση μάζας 10%, φυγοκεντρητή στις 3000 σ.α.λ. για 10 λεπτά, αφαιρέστε και αμέσως τραβήξτε 2,5ml υπερκείμενου σε ογκομετρική φιάλη, προσθέστε 2,5ml απεσταγμένου νερού και 0,5ml χλωριούχου χλωριούχου σιδήρου (β/ο) με συγκέντρωση μάζας 0,1%. Χρησιμοποιήστε αποσταγμένο νερό ως κενό έλεγχο και μετρήστε την απορρόφηση Α σε μήκος κύματος 700nm με φασματοφωτόμετρο. Εκτελέστε 3 επαναλήψεις για κάθε θεραπεία. Η αντοχή της μείωσης της ισχύος προσδιορίζεται με βάση την τιμή απορρόφησης.

 

(3) Μεταβολές στην ικανότητα καθαρισμού ριζών ανιόντων υπεροξειδίου κατά τη διάρκεια της ζύμωσης
Τοποθετήστε 4,5 ml 0 {{1 0}} 5 mol/l ρΗ 8,2 ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl σε ένα λουτρό σταθερής θερμοκρασίας και ρυθμίστε τη θερμοκρασία σε 25 μοίρες. Μετά από 20 λεπτά, προσθέστε 1 mL διαλύματος δείγματος ενζύμου και 0,4 ml διαλύματος πυρογαλόλης με γραμμομοριακή συγκέντρωση 25 mmol/L. Ανακατέψτε καλά και τοποθετήστε σε υδατόλουτρο 25 μοιρών για 5 λεπτά. Προσθέστε 1,0 ml 8 mol/L HCl για να τερματίσετε την αντίδραση. Χρησιμοποιήστε το buffer Tris-HCL ως αναφορά και χρησιμοποιήστε ένα φασματοφωτόμετρο για να μετρήσετε την απορρόφηση Α στα 299 nm για να υπολογίσετε το ποσοστό καθαρισμού. Η ομάδα κενού ελέγχου χρησιμοποιεί 1 ml διαλύτη αντί του δείγματος. Ο ρυθμός ανιόντων ανιόντων υπεροξειδίου υπολογίζεται σύμφωνα με τη φόρμουλα 4.1: ρίζα ανιόντων υπεροξειδίου (%)=(a 1- a2)/a1 × 100 (4.1) Το Α2 είναι η απορρόφηση του διαλύματος δείγματος ενζύμου της πειραματικής ομάδας.

 

(4) Μεταβολές στην ικανότητα καθαρισμού ριζών υδροξυλίου κατά τη διάρκεια της ζύμωσης

 

Προσθέστε νερό σε 45 0 μΙ διάλυμα δείγματος σε 2 ml, στη συνέχεια προσθέστε το σε 1,4 ml υπεροξειδίου του υδρογόνου με μοριακή συγκέντρωση μάζας 6mmol/L, στη συνέχεια προσθέστε 0,6 ml σαλικυλικού νατρίου με μοριακή συγκέντρωση μάζας 20mmol/L και 2ml θειικού σιδήρου με μάζα μάζας 1,5 mmmol/L, και θερμοκρασία θερμοκρασίας σε 30 μάζα για τη συγκέντρωση μάζας μάζας 1,5 mmmol/L, 1Η. Μηδέν με απεσταγμένο νερό και μετρήστε την απορρόφηση Α σε μήκος κύματος 562nm με φασματοφωτόμετρο. Διεξήχθησαν τρία αντίγραφα για κάθε θεραπεία. Ο ρυθμός καθαρισμού ριζών υδροξυλίου υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο 4.2: ρυθμός καθαρισμού ριζών υδροξυλίου (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.2) όπου: a1 είναι η μέση απορρόφηση του κενού. Το A2 είναι η μέση απορρόφηση του διαλύματος δείγματος.

 

(5) Μεταβολές στην ικανότητα καθαρισμού ελεύθερων ριζών DPPH κατά τη διάρκεια της ζύμωσης
Μεταφέρετε με ακρίβεια 2 ml διαλύματος δείγματος ενζύμου σε 1 0 ογκομετρική φιάλη ML, στη συνέχεια προσθέστε 2 ml 80% υδατικό διάλυμα αιθανόλης DPPH στην ογκομετρική φιάλη, με μοριακή συγκέντρωση μάζας 2 × 10-4 mol/L. Ανακατέψτε καλά και αφήστε να σταθεί σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Πάρτε το διάλυμα αιθανόλης 80% ως αναφορά και μετρήστε την απορρόφηση του δείγματος σε μήκος κύματος 517 nm, το οποίο καταγράφεται ως Α1. Ανακατέψτε 2 ml διαλύματος DPPH και 2 ml διαλύματος αιθανόλης 80% και μετρήστε την απορρόφησή τους στο ίδιο μήκος κύματος, το οποίο καταγράφεται ως Α0. Ανακατέψτε 2 ml διαλύματος ενζύμου και 2 ml διαλύματος αιθανόλης 80% και μετρήστε την απορρόφησή τους στο ίδιο μήκος κύματος, το οποίο καταγράφεται ως Α2. Διεξήχθησαν τρία αντίγραφα για κάθε θεραπεία. Υπολογίστε το ποσοστό καθαρισμού ελεύθερων ριζών DPPH σύμφωνα με τον Formula 4.3:
Ο ρυθμός καθαρισμού ελεύθερων ριζών DPPH (%) {0}} [1- (A 1- a2)/a 0] × 100 (4.3) όπου: a1 είναι η μέση απορρόφηση 2 ml DPPH 80% διαλύματος με αιθανόλη και 2 mL Solution. Το Α2 είναι η απορρόφηση του διαλύματος ενζύμου 2 mL και 2 mL μεικτού διαλύματος αιθανόλης 80%. Το A0 είναι η απορρόφηση του διαλύματος 2 mL DPPH και 2 ml διαλύματος αιθανόλης 80% αιθανόλης.

(6) Μεταβολές στην ικανότητα καθαρισμού ελεύθερων ριζών ABTS κατά τη διάρκεια της ζύμωσης
Το διάλυμα δείγματος 8 μΐ συμπληρώθηκε σε 10 μΐ με φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (5 mmol/L ρΗ 7,4) και στη συνέχεια αναμίχθηκε ομοιόμορφα με 10 mL θειικού καλίου και αναμεμειγμένο διάλυμα ABTS για να αντιδράσει σε θερμοκρασία αντίδρασης 30 βαθμών και σε χρόνο αντίδρασης 5 λεπτών. Μηδέν το διάλυμα με αποσταγμένο νερό και μετρήστε την απορρόφηση Α σε μήκος κύματος 734 nm χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο. Διεξήχθησαν τρία αντίγραφα για κάθε θεραπεία. Το ποσοστό καθαρισμού ελεύθερων ριζών ABTS υπολογίστηκε σύμφωνα με τον Formula 4.4:
Ο ρυθμός καθαρισμού των ελεύθερων ριζών ABTS (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.4) όπου: a1 είναι η απορρόφηση της ομάδας ελέγχου κενών. Το A2 είναι η απορρόφηση της πειραματικής ομάδας δείγματος.