Χημικές ιδιότητες μιας μαννογλυκάνης από το Cistanche Deserticola

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

1. Υλικά

Χρησιμοποιήθηκαν στοματικές πάστες για άλογα από δύο διαφορετικούς κατασκευαστές που περιείχαν 10 mg/g (Α) ή 20 mg/g (Β) ιβερμεκτίνης, αντίστοιχα. Πραγματοποιήθηκε η ποσοτική ανάλυση για την ιβερμεκτίνη και η περιεκτικότητα ήταν 104,4–107,7 τοις εκατό της δηλωμένης συγκέντρωσης.

2. Δοκιμή διάλυσης

Η δοκιμή πραγματοποιήθηκε με Ph. Eur. συσκευή κουπιών (Pharma Test, Heinberg, Γερμανία), σε αναδεύσεις 75 rpm ή 50 rpm, στους 37 -0.5 C. Λαυρυλοθειικό νάτριο (BDH Chemicals, Poole, Αγγλία) 0,5 τοις εκατό (w /ν) υδατικό διάλυμα χρησιμοποιήθηκε ως μέσο διάλυσης (900 ml). Η πάστα (4 g του Α ή 2 g Β) τοποθετήθηκε στο δοχείο με μια σύριγγα με έναν σωληνίσκο (Α) ή ρίχνοντας το δείγμα στην επιφάνεια του μέσου διάλυσης (Β). Μετά τα χρονικά διαστήματα (15, 30, 45, 60 λεπτά και 2 ώρες), ένα δείγμα του μέσου διάλυσης αφαιρέθηκε (2 ml), διηθήθηκε μέσω ενός γυάλινου φίλτρου και αναλύθηκε.

3. Ανάλυση HPLC

Ο προσδιορισμός της ιβερμεκτίνης πραγματοποιήθηκε με μια τροποποιημένη μέθοδο HPLC όπως περιγράφεται στο Ph. Eur. Τα αναλυόμενα διαλύματα αραιώθηκαν με μεθανόλη (1:10). Το σύστημα HPLC αποτελούνταν από μια στήλη οκταδεκυλίου (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), έναν ολοκληρωτή D-12500 A, έναν ανιχνευτή UV-Vis L{{7} }, αντλία L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Γερμανία). Ένα μίγμα ακετονιτριλίου: μεθανόλης: νερού (64: 24: 16) χρησιμοποιήθηκε ως κινητή φάση με ρυθμό ροής 1,9 ml/min. Ο όγκος του δείγματος που εγχύθηκε ήταν 20 ml και η ανίχνευση πραγματοποιήθηκε στα 254 nm.

4. Μελέτες διαλυτότητας

Μια πρόσβαση της ουσίας ανακινήθηκε σε καλά κλεισμένες γυάλινες φιάλες με κατάλληλο διαλύτη (Πίνακας 1) για 20 ώρες στους 37 0.1 C. Τα εναιωρήματα διηθήθηκαν και το διήθημα, μετά από αραίωση σε μεθανόλη, αναλύθηκε με HPLC .

5. Σταθερότητα σε όξινο διάλυμα

Διαλύματα ιβερμεκτίνης σε HCl {{0}}.1 Μ αποθηκεύτηκαν σε καλά κλεισμένα γυάλινα φιαλίδια στους 20 C και 37 C. Τα χρωματογραφήματα των διαλυμάτων καταγράφηκαν στους t ¼ 0 και μετά από 1, 2 και 6 ώρες. Υπολογίστηκε η περιοχή της ιβερμεκτίνης (χρόνος κατακράτησης 10,5 λεπτά) και οι πρόσθετες κορυφές.

βιβλιογραφικές αναφορές

Οδηγίες FDA για τη βιομηχανία: SUPAC-SS μη στείρες ημιστερεές δοσολογικές μορφές. Αλλαγές κλιμάκωσης και μετα-έγκρισης: χημεία, κατασκευή και έλεγχοι. δοκιμή απελευθέρωσης in vitro και τεκμηρίωση βιοϊσοδυναμίας in vivo. Μάιος 1997. Κατευθυντήριες γραμμές FIP για τη δοκιμή διάλυσης στερεών προϊόντων από το στόμα (1997) Dissolute. Τεχνολ. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Κατευθυντήριες γραμμές FIP/AAPS για δοκιμή διάλυσης/in vitro απελευθέρωσης νέων/ειδικών δοσολογικών μορφών, AAPS PharmSciTech, 4 (1) άρθρο 7 Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, Σχολείο Φαρμακευτικών Επιστημών, Κέντρο Επιστημών Υγείας του Πανεπιστημίου του Πεκίνου, Πεκίνο, Κίνα

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Λήψη 13 Φεβρουαρίου 2004, αποδεκτή στις 4 Απριλίου 2004, Καθ. Δρ. , Haidian District, Beijing 100083, China Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Μια νέα μαννογλυκάνη απόCistanche deserticolaαπό την Κίνα χαρακτηρίζεται. Η ένωση είναι υπεύθυνη για μια ήπια διέγερση του πολλαπλασιασμού των Τ και Β λεμφοκυττάρων που προκαλείται από μιτογόνο.

Cistanche deserticolaΤο YC Ma είναι ένα ολοπαράσιτο που αναπτύσσεται στις ρίζες του δικοτυλήδονου φυτού Haloxylon ammodendron Bunge το οποίο είναι ευρέως διαδεδομένο στα βορειοδυτικά της Κίνας. Καθώς είναι ένα σημαντικό τονωτικό στην ανατολική ιατρική, έχουν αξιωθεί πολλά δραστικά συστατικά και φαρμακολογικές δραστηριότητες (Karasawa et al. 1986· Yoshizawa et al. 1990). Αυτές οι ιδιότητες μπορεί να σχετίζονται με ορισμένα από τα πολυσακχαριτικά συστατικά τουCistancheπου δεν έχουν ακόμη ερευνηθεί. Μιτογόνοι πηκτικοί πολυσακχαρίτες και ουδέτεροι πολυσακχαρίτες έχουν απομονωθεί και χαρακτηριστεί απόCistanche deserticolaαπό τη Μογγολία (Radna et al. 1996· Anna et al. 1997· Bozena et al. 1999). Εδώ αναφέρουμε τις χημικές ιδιότητες μιας νέας μαννογλυκάνης απόCistanche deserticolaαπό την Κίνα, η οποία είναι υπεύθυνη για την ήπια διέγερση του πολλαπλασιασμού των Τ και Β λεμφοκυττάρων που προκαλείται από μιτογόνο. Μετά τα στελέχη τουCistanche deserticolaΤο YC Ma εκχυλίστηκε με 95 τοις εκατό αιθανόλη, χρησιμοποιήθηκε κρύο απεσταγμένο νερό για την εκχύλιση του υπολείμματος. Το εκχύλισμα κρύου νερού καταβυθίστηκε με EtOH, η πρωτεΐνη απομακρύνθηκε και υποβλήθηκε σε διαπίδυση, λαμβάνοντας τον ακατέργαστο πολυσακχαρίτη CCDP. Ο ακατέργαστος πολυσακχαρίτης κλασματώθηκε σε μια στήλη DEAE και μια στήλη Sephadex G-150 για να δώσει έναν πολυσακχαρίτη χωρίς πρωτεΐνη (CDP-6), ο οποίος περιείχε γλυκόζη (89,2 τοις εκατό) και μαννόζη (1{{{58} },4 τοις εκατό ), και εκ των οποίων ο μέσος όρος κ. εκτιμήθηκε σε 6.8 -104. Ο πολυσακχαρίτης CDP-6 έδειξε [a 20 D 42 (c 1, H2O). Οι απόλυτες διαμορφώσεις των σακχάρων προσδιορίστηκαν με GC των TMS (– )-2-βουτυλογλυκοσιδίων. Το CDP-6 μεθυλιώθηκε (Needs et al. 1993), υδρολύθηκε, μετατράπηκε στις οξικές αλδιτόλη και αναλύθηκε με GC και GC-MS (Πίνακας). Αυτό το αποτέλεσμα μαζί με τα δεδομένα μοριακής αναλογίας από την ανάλυση μεθυλίωσης υποδηλώνουν ότι το CDP-6 έχει κυρίως 1,6-συνδεδεμένο Glcp και κορμό 1,6- συνδεδεμένο σε μικρότερο βαθμό διακλαδισμένο στο O{{ 24}} της μαννόζης. Η ανάλυση μεθυλίωσης δύο πολυμερών (CDP-6-1, CDP{-6-2) από μερική υδρόλυση επιβεβαίωσε ότι το CDP-6 έχει μια ραχοκοκαλιά που αποτελείται από 1,6-συνδεδεμένα κατάλοιπα γλυκοζυλίου και 1,6-συνδεδεμένα υπολείμματα μαννοσυλίου, τα οποία υποκαθίστανται στο Ο-3 της μαννόζης από κλάδους που αποτελούνται από το τερματικό, 1,6- συνδεδεμένα υπολείμματα γλυκοζυλίου και 1,3,{{38} }συνδεμένα υπολείμματα μαννοσυλίου. Σύμφωνα με τις μοριακές αναλογίες και τη βιβλιογραφία (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), το φάσμα 13C NMR του CDP-6 έδειξε σήματα λόγω ανωμερών ανθράκων του a-d-Glcp (C{{45 }} σε 98,4 ppm), bd-Map (C-1 σε 104,3–104,9 ppm) και ad-Map (C-1 σε 100},0 ppm). Το φάσμα 1H NMR του CDP{-6-2 στο D2O έδειξε σήματα πρωτονίων που αντιστοιχούν στο ad-Glcp (H-1 στα 4,94–4,95 ppm) και στο a-d-Map (H-1 στο 4,96–5,00 ppm). Το φάσμα 13C NMR του CDP-6-2 στο D2O έδειξε σήματα πρωτονίων που αντιστοιχούσαν στο aD-Glcp (C-1 στα 98,6 ppm) και στο ad-Map (C-1 στα 98,4 ppm). Οι μαννογλυκάνες αναφέρεται ότι έχουν 1,{90}}συνδεδεμένη γλυκοπυραννάνη και 1,4-συνδεδεμένη ραχοκοκαλιά μαννοπυραννάνης (Radjabi Nassab et al. 1984· Tanabe et al. 2000). Το CDP-6 έχει ορισμένα διαφορετικά δομικά χαρακτηριστικά λόγω του a-1,6-συνδεδεμένου Glcp και του b-1,6-συνδεδεμένου κορμού του χάρτη και αντικαθίσταται από κλάδους μαννογλυκάνης (Σύκο.). Προκειμένου να διερευνηθεί η χρήση τουCistanche deserticolaστη λαϊκή ιατρική, αξιολογήθηκε η επίδραση του CDP-6 στα συστήματα Τ και Β κυττάρων. Βρέθηκε ότι διεγείρει ήπια τον επαγόμενο από μιτογόνο πολλαπλασιασμό των Τ και Β λεμφοκυττάρων.

Πειραματικός

1. Γενικές διαδικασίες

Η οπτική περιστροφή μετρήθηκε με ένα αυτόματο πολόμετρο W22-1S. Τα φάσματα IR προσδιορίστηκαν σε φασματόμετρο Perkin-Elmer 599B. Η ανάλυση GC πραγματοποιήθηκε σε όργανο Agilent HP6890N, εξοπλισμένο με ανιχνευτή FID. Το GC-MS πραγματοποιήθηκε σε ένα όργανο Finnigan Trace GC-MS. Η ομοιογένεια και ο κ. CDP-6 υπολογίστηκαν από την καμπύλη βαθμονόμησης του όγκου έκλουσης των τυπικών δεξτρανών, η οποία πραγματοποιήθηκε σε

μια συσκευή σειράς Agilent 1100 με στήλη Shodex KS-805. Τα φάσματα 1 H NMR και 13C NMR καταγράφηκαν με ένα όργανο INOVA-500. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη αναλύθηκε με τη μέθοδο του Bradford (Andre et al. 1975). Οι μονοσακχαρίτες αναλύθηκαν ως προς την οξική αλδιτόλη τους αφού είχαν υδρολυθεί (2 Μ TFA, 2 ώρες, 110 C), αναγωγή και οξικό. Τα υδρολύματα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας TLC σε πλάκα πυριτικής πηκτής που περιείχε 5 τοις εκατό δισόξινο φωσφορικό νάτριο σε BuOH-EtOAc-ισοπροπυλική αλκοόλη-HOAC--H2Οπυριδίνη (3,5: 10: 6: 3,5 : 3 : 3) και τα σάκχαρα ανιχνεύθηκαν με ψεκασμό ή με σακχαρόλη -H2SO4. Οι προκύπτουσες οξικές αλδιτόλη αναλύθηκαν με GLC χρησιμοποιώντας τριχοειδή στήλη ΗΡ-5 (30 m 0,32 mm). Το CDP-6 μεθυλιώθηκε με τη μέθοδο Ciucanu, ακολουθούμενη από υδρόλυση, και αναλύθηκε ως μερικώς μεθυλιωμένη οξική αλδιτόλη με GC-MS. Μετά από μερική υδρόλυση, τα προϊόντα υποβλήθηκαν σε διαπίδυση και διαχωρίστηκαν, λαμβάνοντας δύο πολυμερή, CDP-6-1 και CDP-6-2.

2. Φυτικό υλικό

Το φυτό συλλέχθηκε από την επαρχία Εσωτερικής Μογγολίας στην Κίνα τον Αύγουστο του 2001 και αναγνωρίστηκε από τον Hu-Biao Chen, Τμήμα Φυσικής Ιατρικής, Σχολή Φαρμακευτικών Επιστημών, Κέντρο Επιστημών Υγείας του Πανεπιστημίου του Πεκίνου. Ένα δείγμα κουπονιού [E-1-(9)] αυτού του φυτού κατατέθηκε στη Σχολή Φαρμακευτικών Επιστημών του Πανεπιστημίου του Πεκίνου. 3. Εκχύλιση, απομόνωση και καθαρισμός πολυσακχαρίτη CDP-6 Το στέλεχος τουCistanche deserticolaYC Ma (1500 g) εκχυλίστηκε με 95 τοις εκατό αιθανόλη (6 L) υπό αναρροή. Το ξηρό αδιάλυτο σε αιθανόλη υπόλειμμα εμποτίστηκε τρεις φορές με κρύο απεσταγμένο νερό ανά 12 ώρες. Το εκχύλισμα ψυχρού νερού διηθήθηκε και το διήθημα φυγοκεντρήθηκε. Μετά από καθίζηση με τέσσερις όγκους EtOH (ανάδευση και παραμονή για 24 ώρες στους 4 C), ελήφθη το προϊόν ιζήματος (35,5 g). Η πρωτεΐνη στο ίζημα απομακρύνθηκε με τη μέθοδο του Savage. Μετά από διάλυση σε απεσταγμένο νερό, το υπόλειμμα (25,5 g) υποβλήθηκε σε διαπίδυση και λυοφιλίστηκε (απόδοση: 10,6 g). Ο ακατέργαστος πολυσακχαρίτης (8 g) διαλύθηκε σε απεσταγμένο νερό (100 mL, 8 τοις εκατό w/v) και διαχωρίστηκε χρησιμοποιώντας στήλη DEAE (70 5 cm, η βαθμίδα 0-2 M NaCl, ανά 1,5 L). Ελήφθη ένα κλάσμα εκλούσματος με νερό (600 mg). Ένα δείγμα (250 mg) καθαρίστηκε με χρωματογραφία διείσδυσης γέλης στήλης σε στήλες Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL ανά κλάσμα). Κλάσματα CDP-6 (1500-1600 mL) συνενώθηκαν, υποβλήθηκαν σε διαπίδυση και λυοφιλοποιήθηκαν. Μετά την αφαλάτωση από Sephadex G-25 (60 1 cm). Ελήφθη CDP-6 (110 mg) και προσδιορίστηκε ως μία μοναδική κορυφή με HPSGC.

Αναγνώριση:Ο συγγραφέας ευχαριστεί τον Δρ Baomei Shao και τον καθηγητή Xiaoming Gao, Σχολή Βασικών Ιατρικών Επιστημών, Κέντρο Επιστημών Υγείας του Πανεπιστημίου του Πεκίνου, για τη μέτρηση της ανοσοτροποποιητικής δραστηριότητας του CDP-6.