Κεφάλαιο 5 Μεταβολές της ενζυμικής δραστηριότητας κατά τη ζύμωση ενζύμων

Κεφάλαιο 5 Μεταβολές της ενζυμικής δραστηριότητας κατά τη ζύμωση ενζύμων

 

Πρωτεάση, λιπάση καιδισμουτάση υπεροξειδίου (SOD)είναι τα κύρια λειτουργικά ένζυμα τουΜικροβιακά ενζύμων Υγεία. Μεταξύ αυτών,πρωτεάσηςπαίζει ρόλο στοΠροώθηση της υδρόλυσης της πρωτεΐνης στα τρόφιμαστο ανθρώπινο σώμα. Επιπλέον, μπορεί επίσης να αποσυντεθεί μερικά κελιά που πεθαίνει, να αφαιρέσει βρωμιά στην επιφάνεια του δέρματος και τους πόρους και να παίξει ρόλο στην απολέπιση, έτσι χρησιμοποιείται ευρέως στα προϊόντα μπάνιου. Η λιπάση δρα στον δεσμό εστέρα μεταξύ λιπαρών οξέων και γλυκερόλης και το υπόστρωμα υδρόλυσης είναι γενικά φυσικά έλαια. Ως εκ τούτου, φαίνεται σε πολλά τρόφιμα απώλειας βάρους και προϊόντα υγείας. Πολλές γυναίκες ανησυχούν εξαιρετικά για το θέμα της απώλειας βάρους, γι 'αυτό τα ένζυμα έχουν γίνει γρήγορα δημοφιλή σε όλο τον κόσμο.Τα ένζυμα είναι πλούσια σε λιπάση, που σημαίνει ότι έχουν υψηλή ερευνητική αξία και προοπτικές εφαρμογής.ΧΛΟΟΤΑΠΗΤΑΣείναι ένα ειδικό μεταλλικό ένζυμο που καταλύει την αντίδραση απόρριψηςριζοσπάστες υπεροξειδίου, έτσιΑφαίρεση ριζών ανιόντων υπεροξειδίουστο σώμα. Πρόκειται για ένα προστατευτικό εμπόδιο για τους οργανισμούς, επομένως χρησιμοποιείται ευρέως στον ιατρικό τομέα.
Αυτό το κεφάλαιο παίρνει το ένζυμο της Apple ως παράδειγμα. Ξεκινώντας από το αρχικό στάδιο της ζύμωσης, τοΔραστηριότητες δισμουτάσης υπεροξειδίου, η αμυλάση, η λιπάση, η πρωτεάση και η κυτταρινάση στην πειραματική ομάδα και η ομάδα ελέγχου μετρήθηκαν κάθε 15 ημέρες για να αντικατοπτρίζουν συνολικά και συστηματικά την μεταβαλλόμενη τάση της ενζυμικής δραστικότητας κατά τη διάρκεια ολόκληρης της διαδικασίας ζύμωσης.

Νέα βότανα Cistanche

Κάντε κλικ για να λάβετε περισσότερες λεπτομέρειες

 

Υποστηρικτική υπηρεσία του WECistanche-ο μεγαλύτερος εξαγωγέας Cistanche στην Κίνα:
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

 

 

 

 

 

5.1 Υλικά και Μέθοδοι

5.1.1 Υλικά

(1) Πειραματικά υλικά

Πλύνετε φρέσκα μήλα με αποστειρωμένο νερό υπό αποστειρωμένες συνθήκες, στεγνώστε τα φυσικά σε ένα αποστειρωμένο τραπέζι λειτουργίας, ξεφλουδίστε τα και κόψτε τα για μεταγενέστερη χρήση. Προσθέστε λευκή ζάχαρη και μήλα σε ένα αποστειρωμένο γυάλινο βάζο σε αναλογία μάζας 1: 1. Ενεργοποιήστε τα βακτηρίδια που απαιτούνται για το πείραμα και εμβολιάστε τα στο ένζυμο σύμφωνα με το βέλτιστο σχήμα (αυτό το βήμα λειτουργίας παραλείπεται για την ομάδα ελέγχου), σφραγίστε το και τοποθετήστε το σε δροσερό και ξηρό μέρος. Μετά από 3 μήνες ζύμωσης θερμοκρασίας δωματίου, πάρτε ένα δείγμα για να αποκτήσετε ολόκληρο το υγρό ενζύμου που περιέχει τον πολτό και φιλτράρετε το. Πάρτε το υπερκείμενο ως πειραματικό δείγμα. Αφού το δείγμα φυγοκεντρείται στα 10, 000 rpm για 15 λεπτά σε φυγόκεντρο υψηλής ταχύτητας, χρησιμοποιείται για τη μέτρηση των σχετικών δεδομένων. Αξίζει να σημειωθεί ότι κατά τη διαδικασία κατασκευής ενζύμων, προκειμένου να αποφευχθεί η περιττή μόλυνση, όλες οι λειτουργίες μας πραγματοποιήθηκαν υπό αποστειρωμένες συνθήκες.

(2) Κύρια όργανα
Τα μέσα που απαιτούνται για το πείραμα είναι τα ίδια με το 3,1.1 (2).

 

5.1.2 Μέθοδοι

(1) Προσδιορισμός της δραστηριότητας δισμουτάσης υπεροξειδίου (SOD) [66]
Το διάλυμα Pyrogallol προθερμάνθηκε σε υδατόλουτρο σταθερής θερμοκρασίας 25 βαθμών για μια χρονική περίοδο. Σύμφωνα με τον Πίνακα 5.1, προστέθηκαν στον δοκιμαστικό σωλήνα μια κατάλληλη ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος, απεσταγμένου νερού και ο ίδιος όγκος υδροχλωρικού οξέος ή πυρογαλόλης διαλύματος. Το λουτρό σταθερής θερμοκρασίας ρυθμίστηκε σε 25 μοίρες για 2 0 min. Αφού το μικτό υγρό αναστατωμένος γρήγορα, εγχύθηκε αμέσως στην κυψελίδα. Η τιμή απορρόφησης Α0 του δείγματος μετρήθηκε κάθε 30 δευτερόλεπτα σε μήκος κύματος 325nm χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο.

TAB.5.1 Προσθέστε την ποσότητα του παρακείμενου αντιδραστηρίου φαινόλης βενζολίου για τον προσδιορισμό του ρυθμού αυτοξείδωσης

 

Η μέθοδος για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας SOD είναι βασικά η ίδια με την παραπάνω λειτουργία. Η μόνη διαφορά είναι ότι πριν από την προσθήκη του Pyrogallol, {0}}. Ταυτόχρονα, προστίθεται ο ίδιος όγκος αποσταγμένου νερού. Η μετρούμενη απορρόφηση είναι ASOD. Ο ρυθμός αναστολής και η δραστικότητα ενζύμου SOD υπολογίζονται σύμφωνα με τον Formula 5.1 και τον τύπο 5.2: ρυθμό αναστολής (%)=(△ a 0- △ aSOD)/△ a {{20} × 100 (5.1) ενζυμική δραστηριότητα (u/ml) =}}} { (5.2) Πού: V1 είναι ο συνολικός όγκος του διαλύματος, ML. Το V2 είναι ο όγκος του διαλύματος δείγματος ενζύμου, ML. △ a0 είναι ο ρυθμός αυτο-οξείδωσης της pyrogallol. △ Το ASOD είναι ο ρυθμός μεταβολής της τιμής απορρόφησης του δείγματος. n είναι ο πολλαπλός (2) προσδιορισμός της δραστικότητας αμυλάσης Αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε τη χρωματομετρική μέθοδο ιωδίου για τον προσδιορισμό της δραστικότητας της αμυλάσης. Τα συγκεκριμένα βήματα λειτουργίας αναφέρονται στη "Εθνική Διαδικασία Λειτουργίας Κλινικής Λειτουργίας" [67]. Χωρίζεται κυρίως στα ακόλουθα δύο σημεία:

 

① Προετοιμασία διαλύματος
({{0}}. η λύση βράζει. Ζυγίστε με ακρίβεια 0,4g διαλυτού αμύλου, διαλύστε το σε 10ml απεσταγμένου νερού, ανακατέψτε ομοιόμορφα και προσαρμόζετε σε μια πάστα. Εισαγάγετε το διάλυμα αμύλου προσαρμοσμένο σε μια πάστα στο παραπάνω διάλυμα βρασμού και πλύνετε επανειλημμένα το ποτήρι μέχρις ότου το άμυλο μεταφερθεί πλήρως στο διάλυμα βρασμού νερού. Αφού ανακατεύετε ομοιόμορφα με γυάλινη ράβδο, δροσερό σε θερμοκρασία δωματίου, προσθέστε 5 ml διαλύματος φορμαλδεΰδης 37% και αραιώστε σε 1L με απεσταγμένο νερό. Η τιμή ρΗ του διαλύματος είναι 7,0 ± 0,1 και τοποθετείται στο ψυγείο για χρήση.
Λύση αποθέματος ιωδίου (0.
Το ποτήρι, αργά και ομοιόμορφα προσθέτει συμπυκνωμένο υδροχλωρικό οξύ 4,5ml, ανακατεύοντας συνεχώς κατά τη διάρκεια της διαδικασίας προσθήκης, αραιώνεται στην κλίμακα με απεσταγμένο νερό και ανακατεύουμε ομοιόμορφα. Βάλτε το στο ψυγείο για χρήση και αποθηκεύστε το σε ένα μπουκάλι καφέ αντιδραστηρίου.
Λύση εφαρμογής ιωδίου ({{0}}. 01mol/L): Πάρτε μια ορισμένη ποσότητα λύσης αποθέματος ιωδίου (0,1 mol/L), αραιώστε το 10 φορές με απεσταγμένο νερό, τοποθετήστε το στο ψυγείο για χρήση και αποθηκεύστε το μέχρι 1 μήνα.

② Βήματα πειραματικής λειτουργίας
Πάρτε το διάλυμα ενζύμου και αραιώστε το 10 φορές με φυσιολογικό αλατόνερο και λειτουργήστε σύμφωνα με τον Πίνακα 5.2. Ανακατέψτε καλά, το μήκος κύματος του φασματοφωτομέτρου είναι 660nm και η φωτεινή διαδρομή του χρωματομετρικού κυπέλλου είναι 10mm. Μηδέν με αποσταγμένο νερό και διαβάστε την απορρόφηση κάθε σωλήνα. Υπολογίστε τη δραστικότητα αμυλάσης με βάση τον βασικό τύπο υπολογισμού 5.3.

 

Καρτέλα.5.2 Βήματα λειτουργίας του προσδιορισμού της αμυλάσης

 

(3) Προσδιορισμός της δραστικότητας λιπάσης

Η μέθοδος προσδιορισμού πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το QB/T {0}} [68]. Ένα διάλυμα δοκιμής ενζύμου 2% παρασκευάστηκε με 0. Η δραστικότητα λιπάσης υπολογίστηκε με βάση τον όγκο υδροξειδίου του νατρίου που καταναλώνεται στο πείραμα. Ο κανόνας είναι: σε ρΗ 7,5 και θερμοκρασία περιβάλλοντος 40 βαθμών, 1 ml υγρού ενζυμικού διαλύματος υδρολύει λιπάση για 1 λεπτό για να παράγει 1 μmol λιπαρού οξέος, που είναι μία μονάδα δραστικότητας λιπάσης, εκφρασμένη ως U/ml. Στη συνέχεια, η δραστικότητα της λιπάσης υπολογίστηκε σύμφωνα με τη δραστηριότητα του Formula 5.4: ενζυμική (U/ml)=(Ba) × C/0,05 χ 50 × 1/15 × N=200/3 × (ba) × c × n (5.4) όπου: ο όγκος του όγκου του υδροξιδίου τυπικού διαλύματος διαλύματος, ML, Α είναι ο όγκος του τυπικού διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου που καταναλώνεται στην ομάδα κενού ελέγχου, ML. C είναι η συγκέντρωση του τυπικού διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου, mol/L. Το 0,05 είναι ο συντελεστής μετατροπής της συγκέντρωσης του τυπικού διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου. 50 είναι η περιεκτικότητα σε λιπαρά οξέα του διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου. 15 λεπτά είναι ο χρόνος αντίδρασης. n είναι η αραίωση πολλαπλών.

(4) Προσδιορισμός της δραστηριότητας πρωτεάσης

Ανατρέξτε στο GB/T 23527-2009 [69] με ελαφρές τροποποιήσεις.
① Προετοιμασία τυπικής καμπύλης
Πάρτε 1ml τυποποιημένου διαλύματος τυροσίνης με διαφορετικές συγκεντρώσεις μάζας, οι οποίες είναι 0, 1 0, 20, 30, 40 και 50mg/L και προσθέστε 5 ml διαλύματος ανθρακικού νατρίου 0,4mol/L και 1 ml διαλύματος αντιδραστηρίου φυλλικού σε αυτό. Αντιδρά για 20 λεπτά σε θερμοκρασία 40 βαθμών. Αφού ολοκληρωθεί η αντίδραση, αφαιρέστε το διάλυμα αντίδρασης και μετρήστε την τιμή απορρόφησης του διαλύματος σε μήκος κύματος 680Nm χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο. Σχεδιάστε μια τυπική καμπύλη τυροσίνης με συγκέντρωση τυροσίνης ως οριζόντιο άξονα και τιμή απορρόφησης ως κάθετος άξονας.

Νέα βότανα Cistanche με ισχυρή αντιοξειδωτική ισχύ

② Προσδιορισμός της δραστηριότητας πρωτεάσης
Πειραματική ομάδα: Πάρτε 1 ml διαλύματος καζεΐνης με συγκέντρωση 10 g/L και ανακατέψτε ομοιόμορφα με 1 ml του διαλύματος δείγματος που πρόκειται να δοκιμαστεί και αντιδράστε για 10 λεπτά σε θερμοκρασία περιβάλλοντος 40 βαθμών. Φιλτράρετε και αποκτήστε το διήθημα μετά από να στέκεστε, πάρτε 1 ml του διήθου, 5 ml διαλύματος ανθρακικού νατρίου και 1 ml αντιδραστηρίου Folin, ανακατεύετε ομοιόμορφα και αντιδρούν για 20 λεπτά σε θερμοκρασία περιβάλλοντος 40 βαθμών. Χρησιμοποιήστε ένα φασματοφωτόμετρο για να μετρήσετε την τιμή απορρόφησης του διαλύματος σε μήκος κύματος 680nm.
Ομάδα ελέγχου κενού: Πάρτε 1ml του διαλύματος δείγματος που πρόκειται να δοκιμαστεί, προσθέστε τριχλωροξικό οξύ, αντιδράστε πλήρως για να απενεργοποιήσετε την πρωτεάση και άλλες μέθοδοι λειτουργίας είναι οι ίδιες με την πειραματική ομάδα.

Υπολογίστε τη δραστηριότητα πρωτεάσης σύμφωνα με τον Formula 5.5:
Δραστηριότητα πρωτεάσης (U/ml)=AK × 4/10 (5.5) Πού: Α είναι η απορρόφηση του ενζυμικού διαλύματος στην πειραματική ομάδα. K είναι η ποσότητα τυροσίνης όταν η απορρόφηση είναι ίση με 1. 4 είναι ο συνολικός όγκος του διαλύματος αντίδρασης, ML. 10 είναι ο χρόνος αντίδρασης, Min.

(5) Προσδιορισμός της δραστικότητας κυτταρινής [70]

Η δραστικότητα της κυτταρινάσης σε ένζυμα γενικά εκφράζεται από την ποσότητα γλυκόζης που απελευθερώνεται από ένα ορισμένο ποσό διαλύματος ενζύμου ανά μονάδα χρόνου. Η αρχή της χρήσης της μεθόδου χαρτιού φίλτρου για τη μέτρηση της δραστικότητας της κυτταρινής είναι ότι η κυτταρινάση μπορεί να αποσυντεθεί κυτταρίνη στο διηθητικό χαρτί για την παραγωγή δευτερογενών μεταβολιτών όπως η γλυκόζη και η γλυκόζη μπορεί να αντιδράσει με 3, {{1} δινιτροσαλικυλικό οξύ για να σχηματίσει ένα κίτρινο σύμπλεγμα. Το χρώμα αυτής της αντίδρασης είναι σχετικά φωτεινό, το οποίο μπορεί να καθορίσει την ποσότητα της γλυκόζης και άλλων παραγόμενων μειωμένων σακχάρων.

 

①3, 5- dinitrosalicylic acid colorimetric παράγοντα
Ζυγίστε με ακρίβεια 1 0 G του 3, 5- dinitrosalicylic acid με ένα σημείο τήξης του 168-169 βαθμός, διαλύστε το με απεσταγμένο νερό, προσθέστε 20g υδροξειδίου του νατρίου και 200g του νατρίου καλίου, συνεχίστε τη θέρμανση μέχρι να διαλυθεί το στερεό και 0,5g άνυδρου θειικού νατρίου, ανακατεύουμε συνεχώς κατά τη διάρκεια της διαδικασίας προσθήκης μέχρι να διαλυθεί πλήρως, να σταματήσει τη θέρμανση μετά την ανάμειξη ομοιόμορφα, να δροσερό σε θερμοκρασία δωματίου, να μεταφέρει όλα σε μια ογκομετρική φιάλη 1000ml, να αραιώνεται στο σημάδι με απεσταγμένο νερό, τοποθετήστε σε θερμοκρασία δωματίου για μία εβδομάδα, φίλτρο, αποκτήστε το υπερφυσικό και αποθηκεύστε σε ένα καφέ μπουκάλι.②enzymatic υδρόλυση
Ακριβώς πιπέτα {{0}}, 0. Μετά από 5 λεπτά σταθερής θερμοκρασίας λουτρό νερού σε 40 μοίρες, προσθέστε 6 τεμάχια χαρτιού διηθητικού χαρτιού χρωματογραφίας με έκταση 1 × 1cm2 αντίστοιχα και αρχίστε αμέσως το χρονοδιάγραμμα για να γίνει ο χρόνος αντίδρασης ακριβής σε 60 λεπτά. Μεταφέρετε αμέσως στο λουτρό βρασμού για αντίδραση για 10 λεπτά και η κυτταρινάση χάνει τη δραστηριότητά της.

 

 

③ Έγχρωμη αντίδραση
Πάρτε το διάλυμα δείγματος ενζύμου, προσθέστε 3ml 3, 5- dinitrosalicylic acid χρωματομετρικό παράγοντα που παρασκευάζεται σε ①, θερμότητα σε βραστό υδατόλου
④ Σχέδιο τυπικής καμπύλης γλυκόζης
Προετοιμάστε ένα πρότυπο διάλυμα γλυκόζης με συγκέντρωση 1mg/ml με ακρίβεια και χρησιμοποιήστε απεσταγμένο νερό για να φτιάξετε την τυπική λύση γλυκόζης με όγκο 0, 0. 3ml 3, 5- χρωματομετρικό παράγοντα δινιτροσαλικυλικού οξέος που παρασκευάζεται σε ① για να εκτελέσει αντίδραση ανάπτυξης χρώματος. Σχεδιάστε την τυπική καμπύλη με συγκέντρωση γλυκόζης ως οριζόντιος άξονας και απορρόφηση ως κάθετος άξονας.
Υπολογισμός
Χρησιμοποιήστε την τιμή απορρόφησης A μετά την ανάπτυξη χρώματος με διάλυμα ενζύμου και στη συνέχεια υπολογίστε την ποσότητα απελευθέρωσης γλυκόζης M σύμφωνα με την τυπική καμπύλη γλυκόζης και υπολογίστε σύμφωνα με τον Formula 5.6:
Δραστηριότητα κυτταρίνης (u/ ml)=m/ (t · m) (5.6) Πού: m είναι το ποσό απελευθέρωσης γλυκόζης, UG; t είναι ο ενζυματικός χρόνος υδρόλυσης, min. M είναι το περιεχόμενο των ενζύμων στην αντίδραση, UG/ml.