Το Metabolomics Combined with BMP-2/Smad Signaling Pathway Analysis διευκρινίζει τις βελτιωτικές επιδράσεις των συνολικών φλαβονοειδών του Epimedii Folium—Συμπλήρωμα διατροφής οστών στην μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση

Περίληψη

Η μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση (PMOP) προκαλείται από ανεπάρκεια οιστρογόνων. Η ανεπαρκής ποσότητα οιστρογόνων οδηγεί σε οστική απορρόφηση που υπερβαίνει τον σχηματισμό οστών, προκαλώντας έτσι μειωμένη οστική μάζα. Μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι τα συνολικά φλαβονοειδή εκχυλίζονται απόEpimedii Folium(TFE) μπορεί να βελτιώσει την οστεοπόρωση, ενώ ένα θρεπτικό συστατικό των οστών που αποτελείται από θειική χονδροϊτίνη (CS) σε συνδυασμό με υδροχλωρική γλυκοζαμίνη (GLcN) ασκεί θεραπευτικά αποτελέσματα σε ασθένειες που σχετίζονται με τον μεταβολισμό των οστών. Δεδομένου ότι η οστεοπόρωση χαρακτηρίζεται θεμελιωδώς από μεταβολικές διαταραχές, ο συνδυασμός του εκχυλίσματος TFE με ένα συμπλήρωμα διατροφής οστών (TG) μπορεί να ασκήσει συνεργιστικά ρυθμιστικά αποτελέσματα πολλαπλών στόχων, προσφέροντας έτσι μια νέα προσέγγιση για την πρόληψη και τον έλεγχο της PMOP.

Αυτή η μελέτη διερεύνησε συστηματικά τα βελτιωτικά αποτελέσματα και τους μηχανισμούς της TG στο PMOP μέσω πειραμάτων in vivo και in vitro σε συνδυασμό με τεχνολογία μεταβολομικής. In vivo, ένα μοντέλο αρουραίου με ωοθηκεκτομή (OVX) καθιερώθηκε με αμφοτερόπλευρη ωοθηκεκτομή. Οι φαρμακοδυναμικές επιδράσεις της TG στο PMOP επαληθεύτηκαν με βάση την ιστοπαθολογική χρώση των οστών, την οστική πυκνότητα και τους φυσιολογικούς δείκτες. Επιπλέον, χρησιμοποιήθηκε τεχνολογία μεταβολομικής για τον ποσοτικό προσδιορισμό των μεταβολιτών των ούρων για τη διερεύνηση πιθανών βιοδεικτών PMOP που ρυθμίζονται από την TG και τα σχετικά μεταβολικά δίκτυα. In vitro, τα κύτταρα MC3T3-E1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με TFE και TG για τον έλεγχο ασφαλών δόσεων. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε οστεογονική επαγωγή και μελετήθηκαν οι επιδράσεις και οι μηχανισμοί της TG στην οστεογονική διαφοροποίηση μέσω χρώσης αλκαλικής φωσφατάσης (ALP), χρώσης Alizarin Red S (ARS) και ανάλυσης Western blot.

Τα φαρμακοδυναμικά αποτελέσματα έδειξαν ότι η TG μείωσε τη δημιουργία οστεοκλαστών και αποκατέστησε σημαντικά την οστική πυκνότητα και τα επίπεδα φυσιολογικών δεικτών. Τα αποτελέσματα της Metabolomics έδειξαν ότι η TG ανακούφισε την οστική απώλεια κυρίως παρεμβαίνοντας σε πολλαπλές μεταβολικές οδούς, συμπεριλαμβανομένου του μεταβολισμού νικοτινικών και νικοτιναμιδίων, μεταβολισμού ιστιδίνης, μεταβολισμού πυριμιδίνης, μεταβολισμού τρυπτοφάνης, μεταβολισμού αλανίνης/ασπαρτικού/γλουταμινικού, μεταβολισμού πουρινών, μεταβολισμού βιταμίνης Β6 και άλλων. Πειράματα in vitro επιβεβαίωσαν ότι η TG προήγαγε τον πολλαπλασιασμό των οστεοβλαστών και την οστεογονική διαφοροποίηση μέσω της οδού σηματοδότησης πρωτεΐνης μορφογενετικής πρωτεΐνης-2 (BMP-2)/Sma- και Mad-σχετιζόμενης με την πρωτεΐνη (Smad). Συνοπτικά, το TG μπορεί να βελτιώσει αποτελεσματικά το PMOP μέσω μιας συνεργιστικής επίδρασης πολλαπλών στόχων. Αυτή η μελέτη παρέχει μια πειραματική βάση και θεωρητική υποστήριξη για την κλινική εφαρμογή της TG.

Λέξεις κλειδιά:ολικά φλαβονοειδή απόEpimedii Folium; συμπλήρωμα διατροφής οστών? μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση; μεταβολομική; BMP-2/Διαδρομή σηματοδότησης Smad

 

A New Herb Cistanche Bone Συμπλήρωμα Διατροφής

 

 

 

1. Εισαγωγή

Η οστεοπόρωση (OP) είναι μια συστηματική μεταβολική ασθένεια των οστών που χαρακτηρίζεται από μειωμένη οστική μάζα και οστική πυκνότητα (BMD), καταστροφή της μικροαρχιτεκτονικής των οστών και αυξημένη ευθραυστότητα των οστών. Η μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση (PMOP) είναι ο πιο κοινός τύπος και σχετίζεται με μειωμένη έκκριση οιστρογόνων. Τα μειωμένα οιστρογόνα προκαλούν την οστική απορρόφηση να υπερβαίνει τον σχηματισμό οστών, με αποτέλεσμα τη διαταραχή της ομοιόστασης των οστών [1].

Μια μελέτη για τον επιπολασμό της οστεοπόρωσης στην Κίνα που περιελάμβανε 20.416 συμμετέχοντες διαπίστωσε ότι μεταξύ ατόμων ηλικίας 40 ετών και άνω, ο επιπολασμός της ΟΠ ήταν 5,0% στους άνδρες και 20,6% στις γυναίκες [2]. Μια αξιολόγηση του επιπολασμού της ΟΠ μεταξύ των ενηλίκων των ΗΠΑ ηλικίας μεγαλύτερης ή ίσης των 50 ετών βρήκε ποσοστά επιπολασμού 16% στους άνδρες και 29,9% στις γυναίκες [3], υποδηλώνοντας υψηλότερο επιπολασμό στις γυναίκες. Κλινικά, τα φάρμακα που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία της PMOP περιλαμβάνουν κυρίως ανάλογα παραθυρεοειδούς ορμόνης, διφωσφονικά, οιστρογόνα, καλσιτονίνη και αναστολείς RANKL. Ωστόσο, αυτά τα φάρμακα μπορεί να προκαλέσουν ανεπιθύμητες ενέργειες όπως αίσθημα παλμών, οστεονέκρωση της γνάθου και καρδιαγγειακές παθήσεις, καθιστώντας τα ακατάλληλα για μακροχρόνια χρήση [4]. Λόγω της αξιοσημείωτης επιβάρυνσης με παρενέργειες των συμβατικών φαρμάκων, ο εντοπισμός επιλογών παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (TCM) με λιγότερες ανεπιθύμητες ενέργειες και καταλληλότητα για μακροπρόθεσμη διαχείριση έχει καταστεί επείγον. Το TCM έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό για τη βελτίωση του OP και έχει λάβει ευρεία προσοχή σε εγχώριο και διεθνές επίπεδο. Μελέτες επιβεβαιώνουν ότι πολλά κινέζικα βότανα όπως π.χEpimedii FoliumκαιRhizoma Drynariaeέχουν σημαντικές επιπτώσεις στη βελτίωση του ΕΠ [5].

Ολικά φλαβονοειδή τουEpimedii Folium(TFE) είναι τα κύρια δραστικά συστατικά, συμπεριλαμβανομένης της ικαριίνης, της επιμεδίνης Α και της επιμεδίνης Β. Οι αντιοστεοπορωτικές επιδράσεις τουEpimedii Foliumέχουν αναφερθεί σε πολλές μελέτες. Για παράδειγμα, η ικαριίνη ενισχύει την οστεογονική διαφοροποίηση των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων του μυελού των οστών (BMSCs) [6]. Το εκχύλισμα TFE μπορεί επίσης να βελτιώσει την οστική απώλεια αυξάνοντας τον καφέ λιπώδη ιστό και μειώνοντας τον λευκό λιπώδη ιστό στον μυελό των οστών [7].

 

Συμπλήρωμα Διατροφής Οστών από Cistanche

 

Η θειική χονδροϊτίνη (CS) είναι μια θειωμένη γλυκοζαμινογλυκάνη και ένας γραμμικός πολυσακχαρίτης που αποτελείται από επαναλαμβανόμενες μονάδες δισακχαρίτη που περιέχουν ουρονικό οξύ και Ν-ακετυλοεξοζαμίνη [8]. Η υδροχλωρική γλυκοζαμίνη (GLcN) είναι ένας αμινομονοσακχαρίτης που συντίθεται από τη γλυκόζη στους ανθρώπινους ιστούς. Βρίσκεται κυρίως στον χόνδρο και στον αρθρικό συνδετικό ιστό και είναι σημαντικό συστατικό του αρθρικού χόνδρου και της εξωκυτταρικής μήτρας. Και τα δύο χρησιμοποιούνται συνήθως ως συμπληρώματα διατροφής. ZHENG HX et al. [9] ανέφερε ότι το CS μπορεί να μειώσει τις φλεγμονώδεις κυτοκίνες του ορού και να αναστείλει το οξειδωτικό στρες. Μπορεί επίσης να μειώσει την έκφραση των οστεοκλαστών ρυθμίζοντας το OPG/RANKL, υποδηλώνοντας αντιφλεγμονώδεις και αντιοξειδωτικές δράσεις και αναστολή της διαφοροποίησης των οστεοκλαστών. Στις Ηνωμένες Πολιτείες, το CS συχνά συνδυάζεται με το GLcN σε συμπληρώματα διατροφής και χρησιμοποιείται κυρίως για τη μείωση της απώλειας συστατικών της μήτρας στην οστεοαρθρίτιδα [10]. Επιπλέον, επειδή το CS μπορεί να προκαλέσει διαφοροποίηση των κυττάρων, έχει χρησιμοποιηθεί στη χονδρογένεση και στα οστεογονικά κατασκευάσματα [11-12].

Πολλαπλές μελέτες υποδεικνύουν ότι το εκχύλισμα TFE, το CS και το GLcN έχουν ορισμένα θεραπευτικά αποτελέσματα σε ασθένειες που σχετίζονται με τον μεταβολισμό των οστών. Ωστόσο, παραμένει ασαφές εάν ένα συνδυασμένο εκχύλισμα TFE-συμπλήρωμα θρεπτικών οστών (TG) παράγει συνεργιστικά οφέλη στη βελτίωση της OP και των μηχανισμών του.

 

Συμπλήρωμα Διατροφής Οστών από Cistanche
 

 

Κατάστημα Cistanche σε όλο τον κόσμο

Υποστήριξη της Wecistanche-Για περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με τη συνεργασία
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

2. Υλικά και Μέθοδοι

2.1 Ζώα

Σαράντα θηλυκά ποντίκια Sprague-Dawley (180–220 g) ηλικίας 8 εβδομάδων αγοράστηκαν από την Changchun Yisi Experimental Animal Co., Ltd. (Αρ. άδειας ζώου SCXK (Ji)-2020-0001). Τα ζώα στεγάστηκαν σε εργαστήριο SPF στους 23±223 \\pm 223±2 βαθμούς και 50% υγρασία, με ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό, κάτω από κύκλο φωτός 12 ωρών/12 ωρών σκότους. Τα πειράματα σε ζώα επανεξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ευημερίας και Δεοντολογίας των Πειραματικών Ζώων του Γεωργικού Πανεπιστημίου Jilin (Αριθμός Αποδοχής. 20240717001).

2.2 Φάρμακα και Αντιδραστήρια

Κορεάτικο Epimedii FoliumΤο ακατέργαστο βότανο αγοράστηκε από την κομητεία Tonghua Senyu Chinese Medicinal Materials Co., Ltd. (επαρχία Jilin). Το Icariin (Αριθ. παρτίδας T11A11B111118) αγοράστηκε από τη Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd. Το GLcN (Αρ. παρτίδας M-AT-1904020) αγοράστηκε από την Zhejiang Jinke Pharmaceutical Co., Ltd. CS (Αριθ. παρτίδας HS19042 Co., Ltd. Πρόσθετα αντιδραστήρια περιελάμβαναν ενέσιμη πενικιλλίνη, δισκία βαλερικής οιστραδιόλης, τριβρωμοαιθανόλη, κιτ ELISA για PINP και CTX-I, κιτ ανάλυσης υδροξυπρολίνης, φωσφόρου και ασβεστίου, κιτ χρώσης ALP, -MEM μέσο penicill, Tryptoin-Blocking, tryps ρυθμιστικό διάλυμα ταχείας μεταφοράς, ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης, μεμβράνες PVDF, IgG κατσίκας αντι-κουνελιού HRP, αντίσωμα anti-GAPDH, δείκτης πρωτεΐνης προχρωματισμένος, ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIPA, κιτ ECL, κιτ προετοιμασίας γέλης PAGE, ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης πρωτεΐνης, κιτ CCK-8, ορός εμβρύου βοοειδούς S -, σογλυκεροβικό οξύ -, σογλυκεροβικό οξύ, αλιφοζαρίνη δεξαμεθαζόνη, PBS και πρωτογενή αντισώματα για RUNX2, BMP-2, Smad1, ALP, OSX και p-Smad1/5.(Όλοι οι αριθμοί παρτίδας και οι προμηθευτές αναφέρονται στο αρχικό κείμενο.)

2.3 Όργανα

Χρησιμοποιήθηκε συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (ThermoFisher, ΗΠΑ), ανεστραμμένο μικροσκόπιο (Motic Group), ντουλάπι βιοασφάλειας (ThermoFisher, ΗΠΑ), θερμοκοιτίδα CO2_22​ (ThermoFisher, ΗΠΑ) και ψηφιακό μεταλλικό λουτρό θέρμανσης δύο καναλιών (Changchun Kelebo Biotechnology Co., Ltd.).

2.4 Εξαγωγή TFE

Το TFE εξήχθη χρησιμοποιώντας τη μέθοδο που αναφέρθηκε από τους Zhang Dongxue et al. [13]. Η ληφθείσα λυοφιλοποιημένη σκόνη μετρήθηκε με φασματοφωτομετρία UV-Vis στα 270 nm. Χρησιμοποιώντας την ικαριίνη ως πρότυπο, η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή του εκχυλίσματος TFE προσδιορίστηκε ότι είναι 79,0%.

2.5 Πειραματικός Σχεδιασμός Ζώων

Οι αρουραίοι τυχαιοποιήθηκαν σε πέντε ομάδες: κανονική (ψευδή), μοντέλο (OVX), βαλερική οιστραδιόλη (EV), εκχύλισμα TFE (Τ) και TG. Η εικονική ομάδα υποβλήθηκε μόνο σε αφαίρεση μικρής ποσότητας κοιλιακού λίπους και μαλακών ιστών. όλες οι άλλες ομάδες υποβλήθηκαν σε αμφοτερόπλευρη ωοθηκεκτομή. Τα φάρμακα παρασκευάστηκαν ως εναιωρήματα σε 0,5% νατριούχο καρβοξυμεθυλοκυτταρίνη και χορηγήθηκαν με καθετήρα από το στόμα. Οι ομάδες Sham και OVX έλαβαν φυσιολογικό ορό με καθετήρα. Η ομάδα Τ έλαβε TFE στα 490 mg·kg-1^{-1}-1. Η ομάδα EV έλαβε 0,1 mg·kg-1^{-1}-1. Η ομάδα TG έλαβε CS 124 mg·kg−1^{-1}−1, GLcN 155 mg·kg−1^{-1}−1 και TFE 490 mg·kg−1^{-1}−1. Οι δόσεις μετατράπηκαν από τις συνιστώμενες δόσεις για τον άνθρωπο. Ο όγκος του κολοβώματος ήταν 2 mL·kg−1^{-1}−1·d−1^{-1}−1 για 8 διαδοχικές εβδομάδες. Η επιτυχής μοντελοποίηση επιβεβαιώθηκε όταν τα επίπεδα οιστραδιόλης ορού (Ε2) στην ομάδα OVX ήταν σημαντικά χαμηλότερα από εκείνα της ψευδούς ομάδας. Επειδή το CS+GLcN από μόνο του έδειξε μόνο μια ελαφρά βελτιωτική τάση στην BMD αρουραίου, δεν καθιερώθηκε μια ξεχωριστή ομάδα μόνο για θρεπτικά συστατικά των οστών.

Στις εβδομάδες 3, 6 και 8, οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν σε μεταβολικά κλουβιά με ελεύθερο νερό και 12 ώρες νηστεία και συλλέχθηκαν δείγματα ούρων 24 ωρών. Τα ούρα φυγοκεντρήθηκαν στους 4 βαθμούς, 3.500 r·min−1^{-1}−1 για 10 λεπτά. Τα υπερκείμενα αποθηκεύτηκαν στους -80 βαθμούς. Στο τέλος της εβδομάδας 8, τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία και συλλέχθηκε αίμα, φυγοκεντρήθηκε στους 4 βαθμούς, 4.000 r·min−1^{-1}−1 για 15 λεπτά για να ληφθεί ορός, και στη συνέχεια αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς.

2.6 Μέτρηση Φυσιολογικών δεικτών

Την εβδομάδα 8, συλλέχθηκαν ούρα και αίμα κοιλιακής αορτής. Τα κιτ ELISA χρησιμοποιήθηκαν για τη μέτρηση του δείκτη σχηματισμού οστού ορού PINP και του δείκτη οστικής απορρόφησης CTX-I. Η υδροξυπρολίνη ορού και ούρων (Hyp) μετρήθηκε με αλκαλική υδρόλυση. Το ασβέστιο ούρων (U-Ca) μετρήθηκε με τη μέθοδο της μικροπλάκας ΜΤΒ και ο φώσφορος των ούρων (UP) με τη μέθοδο φωσφομολυβδαινικού.

2.7 Πυκνότητα οστών και μικρο-CT

Μετά από 8 εβδομάδες, τα αριστερά μηριαία οστά συλλέχθηκαν, καθαρίστηκαν και σαρώθηκαν χρησιμοποιώντας μικρο-CT. Οι παράμετροι της δοκιδωτής αναλύθηκαν ποσοτικά, συμπεριλαμβανομένου του διαχωρισμού της δοκιδωτής (Tb.Sp), του πάχους της δοκιδωτής (Tb.Th), του αριθμού των δοκιδωτών (Tb.N), του κλάσματος όγκου οστού (BV/TV) και του δείκτη μοντέλου δομής (SMI).

2.8 Οστική Ιστοπαθολογία

Τα δεξιά μηριαία οστά στερεώθηκαν σε παραφορμαλδεΰδη 4%, απασβεστοποιήθηκαν, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν και χρωματίστηκαν με HE και TRAP. Οι θετικοί σε TRAP οστεοκλάστες εμφανίστηκαν σκούρο κόκκινο.

2.9 Μεταβολομική Ανάλυση

Τα ούρα (100 μL) αραιώθηκαν 10 φορές με απεσταγμένο νερό, στροβιλίστηκαν 30 δευτερόλεπτα, φυγοκεντρήθηκαν στους 4 βαθμούς, 15.000 r·min−1^{-1}-1 για 10 λεπτά και το υπερκείμενο χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση. Ίσοι όγκοι (100 μL) ούρων από κάθε αρουραίο συγκεντρώθηκαν για να παρασκευαστούν δείγματα ποιοτικού ελέγχου (QC).

Η χρωματογραφία πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας στήλη ACQUITY UPLC CSH C18 (2,1 mm × 150 mm, 1,7 μm) στους 40 βαθμούς. Η κινητή φάση Α ήταν ακετονιτρίλιο (0,1% μυρμηκικό οξύ) και η κινητή φάση Β ήταν νερό (0,1% μυρμηκικό οξύ). Ο ρυθμός ροής ήταν 0,20 mL·min-1^{-1}-1, ο όγκος ένεσης 5 μL. Διαβάθμιση: 0–4 λεπτά, 95% B; 4–5 λεπτά, 95%–65% Β; 5–13 λεπτά, 65%–25% Β; 13–14 λεπτά, 25%–0% Β; 14–18 λεπτά, 0%-95% Β.

Η φασματομετρία μάζας πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα όργανο Q Exactive Plus σε θετικούς και αρνητικούς τρόπους ιόντων με τάση ψεκασμού ±3,2 kV, αέριο περιβλήματος 2,0–8,0 psi, τριχοειδική θερμοκρασία 350 μοίρες και εύρος σάρωσης m/z 100–1.000.

2.10 Πολυμεταβλητή Στατιστική και Επεξεργασία Δεδομένων

Τα ακατέργαστα δεδομένα LC-MS υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία και κανονικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Compound Discoverer. Η μη εποπτευόμενη PCA χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση των διαφορών ομαδοποίησης και ομάδων. Το εποπτευόμενο OPLS-DA χρησιμοποιήθηκε για τη λήψη τιμών VIP. Ένα τεστ t εφαρμόστηκε σε κανονικοποιημένα δεδομένα. Οι μεταβολίτες με VIP > 1 και P < 0,05 θεωρήθηκαν δυνητικοί βιοδείκτες και προσδιορίστηκαν περαιτέρω.

2.11 Αναγνώριση βιοδεικτών και ανάλυση μονοπατιού

Ο ακριβής χρόνος κατακράτησης (Rt), m/z και μοριακό βάρος ελήφθησαν από χρωματογραφήματα TIC. Οι υποψήφιοι τύποι και η στοιχειακή σύνθεση προβλέφθηκαν χρησιμοποιώντας διαδικτυακές βάσεις δεδομένων Compound Discoverer (HMDB, KEGG). Ο εμπλουτισμός της διαδρομής πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το MetaboAnalyst.

2.12 Οστεοβλαστική καλλιέργεια και διαφοροποίηση

Οι οστεοβλάστες της γόνατος ποντικού MC3T3-E1 καλλιεργήθηκαν σε επωαστήρα CO2_22 37 μοιρών. Όταν συρρέουν 80%-90%, τα κύτταρα επιστρώθηκαν για οστεογονική επαγωγή. Το οστεογόνο πλήρες μέσο αποτελούνταν από -MEM συμπληρωμένο με 10 mmol·L−1^{-1}−1 -γλυκεροφωσφορικό, 50 μmol·L−1^{-1}−1 ασκορβικό οξύ και 100 nmol·L−1^{-1}−1 δεξαμεθαζόνη.

2.13 Δοκιμασία Κυτταροτοξικότητας

Η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε από το CCK-8. Κύτταρα MC3T3-E1 (5 χ 103^33 κύτταρα/φρεάτιο) σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων και επωάστηκαν όλη τη νύχτα. Στη συνέχεια, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με TFE (2-12 ug·mL-1^{-1}-1), CS (50-250 ug·mL-1^{-1}-1) ή GLcN (0,2-1,0 mmol·L-1^{-1}-1) για 24 ώρες. Η απορρόφηση στα 450 nm μετρήθηκε για τον υπολογισμό της βιωσιμότητας. Με βάση τα αποτελέσματα, επιλέχθηκαν οι βέλτιστες δόσεις και συνδυάστηκαν για να δοκιμαστεί η TG έναντι του ελέγχου.

2.14 Χρώση ALP

Κύτταρα MC3T3-E1 (1 χ 104^44 κύτταρα/φρεάτιο) σπάρθηκαν σε πλάκες 12 φρεατίων και χωρίστηκαν σε τυφλά (χωρίς επαγωγή), μάρτυρες (οστεογονική επαγωγή), Τ (οστεογονική επαγωγή + TFE) και TG (οστεογονική επαγωγή + TG). Τα μέσα άλλαζαν κάθε δεύτερη μέρα. Μετά από 7 ημέρες, πραγματοποιήθηκε χρώση ALP σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ.

2.15 Χρώση ARS

Χρησιμοποιώντας την ίδια ομαδοποίηση και θεραπεία με τη χρώση ALP, τα κύτταρα προκλήθηκαν για 14 ημέρες. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη, χρωματίστηκαν με 0,1% Alizarin Red (ρΗ 7,2) για 30 λεπτά, πλύθηκαν και παρατηρήθηκαν υπό μικροσκόπιο.

2.16 Western Blot

Για να εξεταστεί εάν το TG επηρεάζει την οστεογονική διαφοροποίηση μέσω της σηματοδότησης BMP-2/Smad, τα κύτταρα MC3T3-E1 (5 × 105^55 κύτταρα/φρεάτιο) σπάρθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων με την ίδια ομαδοποίηση όπως παραπάνω. Τα κύτταρα λύθηκαν με RIPA συν αναστολείς πρωτεάσης και φωσφατάσης. Μετά τον ποσοτικό προσδιορισμό BCA, οι πρωτεΐνες μετουσιώθηκαν, διαχωρίστηκαν κατά 10% SDS-PAGE, μεταφέρθηκαν σε PVDF, μπλοκαρίστηκαν, επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα (GAPDH, p-Smad1/5, Smad1, BMP-2, RUNX2, OSX, ALP), ακολουθούμενες από δευτερογενή απεικόνιση αντισωμάτων HRP, ανάπτυξη εικόνας και ECLJ

2.17 Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SD. Για στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε το SPSS. Μετά από έλεγχο κανονικότητας, πραγματοποιήθηκε ANOVA μονής κατεύθυνσης. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές στο P < 0,05.

 

Συμπλήρωμα Διατροφής Οστών από Cistanche
 

3. Αποτελέσματα

3.1 Βιοχημικοί δείκτες ορού

Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, σε σύγκριση με την εικονική ομάδα, τα επίπεδα Ε2 στην ομάδα OVX μειώθηκαν σημαντικά, υποδεικνύοντας επιτυχή δημιουργία μοντέλου. Η PINP ορού στην ομάδα OVX μειώθηκε σημαντικά, υποδεικνύοντας μειωμένο σχηματισμό οστού στην PMOP. Σε σύγκριση με το OVX, το PINP στις ομάδες T και TG αυξήθηκε σημαντικά, υποδεικνύοντας ότι τόσο η T όσο και η TG αύξησαν τους δείκτες σχηματισμού οστού, με καλύτερη ανάκτηση στην TG. Σε σύγκριση με το εικονικό, το CTX-I στο OVX αυξήθηκε σημαντικά, υποδεικνύοντας ενισχυμένη οστική απορρόφηση μετά από ωοθηκεκτομή. Σε σύγκριση με το OVX, η CTX-I σε T και TG μειώθηκε σημαντικά, με πιο έντονη μείωση της TG. Η υδροξυπρολίνη ορού (S-Hyp) αυξήθηκε σημαντικά σε OVX έναντι ψευδούς, υποδηλώνοντας αυξημένη αποικοδόμηση κολλαγόνου. σε σύγκριση με το OVX, το S-Hyp μειώθηκε σε T και TG, με σημαντική μείωση στην TG, υποδηλώνοντας καλύτερη αναστολή της αποδόμησης του κολλαγόνου.

3.2 Βιοχημικοί δείκτες ούρων

Σε σύγκριση με το εικονικό, το UP αυξήθηκε σημαντικά στο OVX. σε σύγκριση με το OVX, το UP μειώθηκε πιο αξιοσημείωτα στο TG. Το U-Ca αυξήθηκε σημαντικά σε OVX έναντι ψευδούς. σε σύγκριση με το OVX, το U-Ca μειώθηκε σημαντικά τόσο στο T όσο και στο TG, με μεγαλύτερη μείωση του TG. Το Hyp στα ούρα (U-Hyp) αυξήθηκε σημαντικά σε OVX έναντι εικονικής. σε σύγκριση με το OVX, το U-Hyp μειώθηκε σημαντικά σε κάθε ομάδα θεραπείας, με μεγαλύτερη μείωση της TG από ότι στην T (Πίνακας 2).

3.3 Ιστοπαθολογία των οστών

Η χρώση HE έδειξε ότι η δοκιδωτή συνέχεια ήταν καλή στην εικονική, με λιγότερα λιποκύτταρα στην κοιλότητα του μυελού. Σε σύγκριση με το εικονικό, το OVX έδειξε φτωχότερη δοκιδωτή συνέχεια και αξιοσημείωτα αυξημένα λιποκύτταρα. Σε σύγκριση με το OVX, η δοκιδωτή συνέχεια που ανακτήθηκε σε T και TG και ο αριθμός των λιποκυττάρων μειώθηκε. Το TG έδειξε πιο εμφανή ανάκαμψη (Εικόνα 1Α). Η χρώση TRAP έδειξε ότι οι αριθμοί των οστεοκλαστών ήταν σημαντικά αυξημένοι σε OVX έναντι εικονικής. σε σύγκριση με το OVX, οι οστεοκλάστες μειώθηκαν σε T και TG, με σημαντική μείωση στην TG (Εικόνα 1Β).

3.4 Παράμετροι Οστικής Πυκνότητας και Micro-CT

Η μικρο-CT έδειξε σημαντικά μειωμένη οστική μάζα στο OVX σε σύγκριση με την εικονική. Σε σύγκριση με το OVX, η ανάκτηση οστικής μάζας στο TG ήταν πιο σημαντική από ό,τι στο T, με σαφή αύξηση της δοκιδιακής πυκνότητας (Εικόνα 1C). Η ποσοτική ανάλυση έδειξε ότι το BV/TV, το Tb.Th και το Tb.N μειώθηκαν σημαντικά στο OVX έναντι του εικονικού. Σε σύγκριση με το OVX, αυτοί οι δείκτες αυξήθηκαν σημαντικά μετά το TG (καλύτερο από το T). Το Tb.Sp και το SMI αυξήθηκαν σημαντικά στο OVX έναντι του εικονικού. σε σύγκριση με το OVX, το TG μείωσε αυτούς τους δείκτες πιο σημαντικά από το T (Πίνακας 3).

3.5 PCA

Υπό τον τρόπο θετικών και αρνητικών ιόντων, η PCA των προφίλ μεταβολίτη ούρων στις εβδομάδες 3, 6 και 8 έδειξε σαφή διαχωρισμό μεταξύ των ομάδων ψευδούς, OVX και TG, υποδεικνύοντας διακριτά μεταβολικά προφίλ πριν/μετά τη μοντελοποίηση και πριν/μετά τη θεραπεία TG (βλ. συμπληρωματικό υλικό που αναφέρεται στο αρχικό πλαίσιο δημοσίευσης).

3.6 Έλεγχος πιθανών βιοδεικτών

Το OPLS-DA έδειξε πιο έντονο διαχωρισμό ομάδων για εβδομάδες και στους δύο τρόπους λειτουργίας ιόντων. Τα διαγράμματα ηφαιστείων και οι δοκιμές 200 μεταθέσεων υποστήριξαν την αξιοπιστία του μοντέλου (R2Y και Q2 κοντά στο 1, Q2 τομή < 0), υποδηλώνοντας ότι δεν υπάρχει υπερβολική προσαρμογή.

3.7 Αναγνώριση βιοδεικτών και ανάλυση μονοπατιού

Χρησιμοποιώντας VIP > 1 και P < 0,05, εξετάστηκαν πιθανοί βιοδείκτες. Με βάση τα m/z, MS/MS, Rt και το μοριακό βάρος και την αναφορά HMDB/KEGG, προσδιορίστηκαν 46 πιθανοί βιοδείκτες. Ο εμπλουτισμός KEGG οδήγησε κυρίως στο μεταβολισμό νικοτινικών και νικοτιναμιδίου, μεταβολισμό ιστιδίνης, μεταβολισμό πυριμιδίνης, μεταβολισμό τρυπτοφάνης, μεταβολισμό D-αμινοξέων, μεταβολισμό αλανίνης/ασπαρτικού/γλουταμινικού, μεταβολισμό πουρίνης και μεταβολισμού βιταμίνης Β6 (Εικόνα 2). Η ιεραρχική ομαδοποίηση έδειξε δυναμικές αλλαγές στις εβδομάδες 3, 6 και 8 μετά την παρέμβαση TG (βλ. συμπληρωματικό υλικό που αναφέρεται στο αρχικό πλαίσιο της δημοσίευσης).

3.8 Δοκιμασία Κυτταροτοξικότητας

Μετά από θεραπεία 24 ωρών, 6 ug·mL-1^{-1}-1 TFE αύξησαν τη βιωσιμότητα των κυττάρων. υψηλότερες δόσεις ανέστειλαν τη βιωσιμότητα. Το GLcN στα 0,4 mmol·L-1^{-1}-1 αύξησε σημαντικά τη βιωσιμότητα. Το CS στα 150 ug·mL-1^{-1}-1 αύξησε τη βιωσιμότητα (Πίνακας 4). Έτσι, επιλέχθηκαν 6 ug·mL−1^{-1}−1 TFE, 0,4 mmol·L−1^{-1}−1 GLcN και 150 ug·mL−1^{-1}−1 CS. Η συνδυασμένη δόση έδειξε βιωσιμότητα ελέγχου 1,00 ± 0,11 και βιωσιμότητα TG 1,22 ± 0,03, υποδεικνύοντας ότι η επιλεγμένη δόση TG ήταν ασφαλής και μη κυτταροτοξική.

3.9 Επιδράσεις στην Οστεογονική Διαφοροποίηση και την Έκφραση Πρωτεϊνών

Η ALP είναι ένας πρώιμος δείκτης οστεογονικής διαφοροποίησης. Υπό οστεογονική επαγωγή, το TG έδειξε πιο σκούρα χρώση ALP από το T, υποδεικνύοντας καλύτερη προώθηση της έκφρασης ALP (Εικόνα 3Α). Η χρώση ARS έδειξε ότι τόσο το T όσο και το TG προήγαγαν τον σχηματισμό μεταλλοποιημένου οζιδίου σε σύγκριση με τον έλεγχο, με πιο έντονο αποτέλεσμα στο TG (Εικόνα 3Β). Το στύπωμα Western έδειξε αυξημένη έκφραση οστεογονικών δεικτών υπό επαγωγή. Σε σύγκριση με το τυφλό, ο έλεγχος έδειξε επιτυχή οστεογονική διαφοροποίηση. Μετά τη θεραπεία, η TG αύξησε πιο έντονα την έκφραση πρωτεΐνης BMP-2, p-Smad1/5, RUNX2, OSX και ALP (Εικόνα 3C, Πίνακας 5).

 

4. Συζήτηση

Η μετεμμηνοπαυσιακή ωοθηκική ανεπάρκεια μειώνει τα επίπεδα οιστρογόνων και διαταράσσει τον μεταβολισμό των οστών, ενισχύοντας τη διαφοροποίηση των οστεοκλαστών ενώ μειώνει τη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών, προκαλώντας τελικά απώλεια οστικής μάζας [14-15]. Με βάση προηγούμενες έρευνες [13], υποτέθηκε η υπόθεση ότι ο συνδυασμός TFE με ένα συμπλήρωμα διατροφής για τα οστά μπορεί να ασκήσει συνεργιστικά αποτελέσματα στη βελτίωση της PMOP. Επομένως, αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε ένα μοντέλο αρουραίου OVX και ένα μοντέλο διαφοροποίησης οστεοβλαστών για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας και του μηχανισμού της TG.

Το PINP (σχηματισμός οστού) και το CTX-I (απορρόφηση οστού) βελτιώθηκαν τόσο από το T όσο και από το TG, με το TG να δείχνει πιο σημαντικά αποτελέσματα. Η υδροξυπρολίνη (Hyp), ένα κύριο συστατικό κολλαγόνου, αυξάνεται στον ορό και τα ούρα στην ΟΠ [16-17]. Σε αυτή τη μελέτη, το OVX αύξησε την Hyp τόσο στον ορό όσο και στα ούρα. Η θεραπεία μείωσε αυτά τα επίπεδα, με το TG να τα μειώνει πιο σημαντικά από το T. Η αυξημένη οστική απορρόφηση στο OVX αυξάνει επίσης την απώλεια ασβεστίου και φωσφόρου, αυξάνοντας το ασβέστιο και τον φώσφορο στα ούρα, σύμφωνα με τους DESAI S et al. [18]. Η θεραπεία μείωσε το U-Ca και το UP, με μεγαλύτερες μειώσεις στο TG. Η ανεπάρκεια οιστρογόνων μεταβάλλει τη δομή της δοκιδωτής, αναστέλλει την οστεογένεση του BMSC, προάγει τη λιπογένεση και αυξάνει τη δραστηριότητα των οστεοκλαστών [19]. Το TG βελτίωσε τη δοκιδωτή συνδεσιμότητα, μείωσε τα λιποκύτταρα του μυελού και μείωσε τον αριθμό των οστεοκλαστών πιο αποτελεσματικά από το T. Η Micro-CT επιβεβαίωσε ότι η TG αύξησε την BMD και βελτίωσε τη μικροαρχιτεκτονική της δοκιδωτής (BV/TV, Tb.Th, Tb.N) ενώ μείωσε τα Tb.Sp και SMI.

Επειδή το OP είναι μια μεταβολική νόσος, η μεταβολομική χρησιμοποιήθηκε για τη διερεύνηση μεταβολικών δικτύων που ρυθμίζονται από TG. Οι ρυθμιζόμενες οδοί του TG περιελάμβαναν κυρίως μεταβολισμό αμινοξέων, νουκλεοτιδίων και βιταμινών. Η τρυπτοφάνη σχετίζεται με την BMD και τα μειωμένα επίπεδα μπορεί να σηματοδοτούν την OP [20]. Σε αυτή τη μελέτη, η τρυπτοφάνη μειώθηκε στο OVX και αποκαταστάθηκε σημαντικά μετά από 8 εβδομάδες θεραπείας με TG, υποδηλώνοντας ότι η TG μπορεί να ανακουφίσει την οστική απώλεια ρυθμίζοντας τον μεταβολισμό της τρυπτοφάνης. Η κρεατινίνη, που συνδέεται με τον μεταβολισμό αργινίνης/κρεατίνης, έχει συσχετιστεί με την ΟΠ [21-22]. Εδώ, η κρεατινίνη ήταν υψηλότερη στο OVX την εβδομάδα 8 και η TG τη μείωσε σημαντικά, υποδηλώνοντας ότι η ρύθμιση του μεταβολισμού της αργινίνης μπορεί να συμβάλει στη βελτίωση της PMOP. Ο μεταβολισμός της γλουταθειόνης συμμετέχει στο PMOP [23]. Το L-γλουταμινικό μπορεί να δημιουργηθεί από το μεταβολισμό της γλουταθειόνης (GSH). Η GSH έχει αντιοξειδωτικές λειτουργίες και υποστηρίζει την αναδόμηση των οστών [24]. Στο PMOP, το οξειδωτικό στρες αυξάνεται, η αντιοξειδωτική ικανότητα μειώνεται και η δραστηριότητα των οστεοκλαστών υπερβαίνει τη δραστηριότητα των οστεοβλαστών, μειώνοντας τον σχηματισμό οστών [15]. Σε αυτή τη μελέτη, το L-γλουταμινικό ήταν υψηλότερο στο OVX την εβδομάδα 8 και το TG μείωσε το L-γλουταμινικό, υποδηλώνοντας ότι η TG μπορεί να μειώσει τη μετατροπή της GSH σε L-γλουταμινική και επομένως να υποστηρίξει τα επίπεδα GSH και να εξουδετερώσει τις μεταβολικές ανωμαλίες που σχετίζονται με την ανεπάρκεια οιστρογόνων.

Οι διαταραχές του μεταβολισμού πουρίνης στην ΟΠ μπορεί να οδηγήσουν σε συσσώρευση ουρικού οξέος [25-27]. Τα Metabolomics έδειξε ότι η TG μείωσε τα επίπεδα ουρικού οξέος στις εβδομάδες 3, 6 και 8 σε σύγκριση με το OVX, υποδηλώνοντας καταστολή της σύνθεσης πουρίνης και της συσσώρευσης ουρικού οξέος. LIU DF et al. [28] ανέφερε ότι οι παρεμβάσεις μπορούν να αυξήσουν την αδενοσίνη για την ανακούφιση των διαταραχών του μεταβολισμού των πουρινών. Σε αυτή τη μελέτη, η TG αύξησε σημαντικά την αδενοσίνη μετά από 8 εβδομάδες, υποδηλώνοντας μια συμβολή στην οστεογονική διαφοροποίηση και την ανάκτηση των οστών.

Οι βιταμίνες (D, σύμπλεγμα Β, Κ) παίζουν σημαντικό ρόλο στον μεταβολισμό των οστών [29-31]. Η νιασίνη και το νικοτιναμίδιο είναι μορφές βιταμίνης Β3 [32]. Η νιασίνη συμβάλλει στη σύνθεση του συνενζύμου NAD/NADP, με αντιφλεγμονώδη και αντιοξειδωτική δράση [33]. Το νικοτιναμίδιο μπορεί επίσης να προάγει την παραγωγή NAD. Το NAD υποστηρίζει τη λειτουργία των μιτοχονδρίων, μειώνει τη βλάβη των ROS και βοηθά στη διατήρηση της ομοιόστασης των οστών. Στην ΟΠ, η μειωμένη NAD μπορεί να εμποδίσει την οστεογονική διαφοροποίηση και ανοργανοποίηση [34]. Σε αυτή τη μελέτη, η νιασίνη και το νικοτιναμίδιο ήταν υψηλότερα στο OVX στις εβδομάδες 3, 6 και 8 (το υψηλότερο την εβδομάδα 8). Οι συγγραφείς συμπέραναν ότι η σύνθεση NAD μπορεί να διαταραχθεί σε ασθένειες, οδηγώντας σε συσσώρευση νιασίνης/νικοτιναμίδης και χαμηλής NAD, ενώ η TG μείωσε τα επίπεδα νιασίνης/νικοτιναμίδης, αντανακλώντας πιθανώς την κατανάλωση για τη σύνθεση NAD. Η πυριδοξαμίνη (PM) είναι μέρος της βιταμίνης Β6 [35]. Η βιταμίνη Β6 υποστηρίζει τη χονδρογονική διαφοροποίηση [36] και η ανεπάρκεια Β6 μπορεί να αποδυναμώσει τη διασύνδεση του κολλαγόνου και την αντοχή των οστών [37]. Ο μεταβολισμός της βιταμίνης Β6 έχει συνδεθεί με την εξέλιξη της PMOP [38]. Σε αυτή τη μελέτη, το PM ήταν χαμηλότερο στο OVX την εβδομάδα 8, ενώ το TG αύξησε το PM, υποδηλώνοντας πιθανό ρόλο στην υποστήριξη του κολλαγόνου και της αντοχής των οστών.

Κατά τη διάρκεια της αναδιαμόρφωσης των οστών, οι οστεοβλάστες μεσολαβούν στον σχηματισμό οστού. Η χρώση ALP και ARS αντανακλούν την πρώιμη οστεογένεση και την όψιμη ανοργανοποίηση, αντίστοιχα, και συνήθως αυξάνονται υπό οστεογονική επαγωγή [39-40]. Εδώ, το TG ενίσχυσε τη δραστηριότητα της ALP και τα ανοργανοποιημένα οζίδια πιο αποτελεσματικά από το TFE μόνο. Οι BMPs είναι μέλη της υπεροικογένειας TGF- και παίζουν βασικό ρόλο στην οστεογονική διαφοροποίηση. Το BMP-2 δεσμεύει τους υποδοχείς, ενεργοποιεί το Smad1/5/8 (με το Smad4) και προάγει μεταγραφικούς παράγοντες όπως το RUNX2 και το κατάντη OSX, προάγοντας τελικά την οστεογονική πρωτεϊνική σύνθεση, την εναπόθεση εξωκυτταρικής μήτρας και την ανοργανοποίηση [41]. Προηγούμενη έρευνα ανέφερε ότι η TFE προάγει την οστεογένεση BMSC μέσω της οδού BMP-2/RUNX2/OSX [42]. Αυτή η μελέτη επικεντρώθηκε στη σηματοδότηση BMP-2/Smad και διαπίστωσε ότι η TG αυξάνει σημαντικά την έκφραση BMP-2, p-Smad1/5, RUNX2, OSX και ALP σε σύγκριση με το TFE μόνο, υποστηρίζοντας ένα ισχυρότερο προ-οστεογονικό αποτέλεσμα μέσω του BMP-2/Smad.

Συνοπτικά, in vivo και in vitro αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η TG βελτιώνει αποτελεσματικά τις μεταβολικές ανωμαλίες των οστών που προκαλούνται από το OVX. Οι μηχανισμοί μπορεί να περιλαμβάνουν ρύθμιση του μεταβολισμού αμινοξέων, νουκλεοτιδίων και βιταμινών και ενεργοποίηση της σηματοδότησης BMP-2/Smad για την προώθηση της οστεογένεσης. Αυτή η μελέτη παρέχει θεωρητική υποστήριξη για την TG στην πρόληψη και θεραπεία PMOP.

 

5. Προοπτική βιομηχανίας: Τάσεις βοτανικών συστατικών για την υγεία των οστών μετά την εμμηνόπαυση-από την έρευνα προσανατολισμένη στον μηχανισμό έως την τυποποιημένη παραγωγή

Εστίαση SEO: φυτικό εκχύλισμα για την μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση, βοτανικά συστατικά για την υγεία των οστών, οστεογένεση BMP-2/Μονοπάτι Smad, Εκχύλισμα Epimedium flavonoids (icariin)., ανάπτυξη βοτανικού προϊόντος καθοδηγούμενη από τη μεταβολομική.

5.1 Γιατί το περιεχόμενο «Εκχύλισμα βοτάνων για μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση» που καθοδηγείται από μηχανισμούς έχει σημασία στο B2B

Για την κατασκευή επωνυμιών, εισαγωγέων και παρασκευαστώνυγεία των γυναικώνκαιυγεία των οστώνχαρτοφυλάκια, η αγορά ανταμείβει όλο και περισσότερο τις βοτανικές έννοιες που μπορούν να εξηγηθούνξεκάθαρη επιστημονική λογική-για παράδειγμα:

μεταβολική διαμόρφωση πολλαπλών οδών (υποστηριζόμενη από μεταβολισμό) και

σηματοδοτικά μονοπάτια που σχετίζονται με την οστεογένεση όπωςBMP-2/Smad.

Μελέτες όπως αυτή που μεταφράστηκε παραπάνω είναι πολύτιμες επειδή συνδέονταισύνθεση (TFE + CS/GLcN) → φαινοτυπικά αποτελέσματα (BMD, μείωση οστεοκλαστών, δείκτες micro-CT) → μοριακά/βιοχημικά στοιχεία (BMP-2/Smad, PINP/CTX-I) → μεταβολικά δίκτυα (μονοπάτια βιταμίνης Β, μεταβολισμός αμινοξέων και πουρινών).

5.2 Προμήθεια βοτανικών συστατικών: η τυποποίηση, η ιχνηλασιμότητα και η κλιμακούμενη εξαγωγή είναι οι πραγματικοί παράγοντες διαφοροποίησης

Στην προμήθεια B2B, το "βότανο" δεν είναι μια ενιαία προδιαγραφή - είναι μια αλυσίδα εφοδιασμού. Για τις εταιρείες τελικών προϊόντων, τα βασικά ερωτήματα είναι:

Μπορεί το συστατικό να είναιτυποποιημένη(π.χ. ενώσεις δεικτών, δακτυλικά αποτυπώματα);

Υπάρχουνσυστήματα ποιότηταςκαιελέγχους παραγωγήςγια την υποστήριξη της μακροπρόθεσμης προσφοράς;

Μπορεί ο προμηθευτής να παρέχειπακέτα τεκμηρίωσηςγια ρυθμιστικούς ελέγχους και ελέγχους πελατών;

5.3 Όπου ταιριάζει το Cistanche (τάση + ικανότητα παραγωγής, όχι υποκατάστατη αξίωση)

Παράλληλα με καθιερωμένα βοτανικά για την υγεία των οστών (π.χ.Epimediumφλαβονοειδή),Cistancheέχει κερδίσει την προσοχή στον ευρύτερο TCM και τον λειτουργικό βοτανικό χώρο λόγω της μακράς ιστορίας χρήσης του σε τονωτικές συνθέσεις και της αυξανόμενης προτίμησης της βιομηχανίας γιαεκχυλίσματα ενός βοτάνουκαιτυποποιημένα ενεργάπου μπορούν να ενσωματωθούν σε σύγχρονες μορφές συμπληρωμάτων.

Για τους αγοραστές που αξιολογούν βοτανικούς εταίρους, ένα προφίλ προμηθευτή προσανατολισμένο στην κατασκευή καθίσταται σημαντικό που καλύπτει:

κάθετα ολοκληρωμένη προμήθεια,

ικανότητα εξόρυξης και επεξεργασίας,

και διαφάνεια εταιρικού ιστορικού.

Σχετικά με την κατασκευαστική μας ικανότητα (πηγή αναφοράς):το προφίλ της εταιρείας και το ιστορικό του εργοστασίου μπορούν να αναθεωρηθούν στην επίσημη σελίδα "Σχετικά με εμάς" του ιστότοπου προμηθευτή. ([xjcistanche.com])

Σημείωση συμμόρφωσης για ιστολόγια B2B:Εάν η τοποθέτηση του προϊόντος σας στοχεύει στην "μεταεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση", βεβαιωθείτε ότι η γλώσσα σας που βλέπει προς τα έξω παραμένειδομή/λειτουργίαήδιατροφική υποστήριξη– προσανατολισμένη (ανάλογα με την αγορά σας) και αποφύγετε ισχυρισμούς για θεραπεία ασθενειών, εκτός εάν υποστηρίζεται και επιτρέπεται από τοπικούς κανονισμούς.

Μάθετε περισσότερα (σελίδες αναφοράς προμηθευτή):

Επισκόπηση εταιρείας / εργοστασιακό ιστορικό: ([xjcistanche.com])

Κόμβος σχετικού βοτανικού περιεχομένου (συνταγές TCM και αφήγηση με συστατικά):(ο παρεχόμενος σύνδεσμος αναφοράς μπορεί να εισαχθεί μόλις επιβεβαιώσετε ότι η διαδρομή του τελικού URL είναι σωστή)

 

Αναφορές

[1] LI J, CHEN X, LU LY, et al. Η σχέση μεταξύ του λιπώδους ιστού του μυελού των οστών και του μεταβολισμού των οστών στην μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση.Cytokine Growth Factor Rev, 2020, 52: 88.
[2] WANG LH, YU W, YIN XJ, et al. Επιπολασμός της οστεοπόρωσης και του κατάγματος στην Κίνα: η μελέτη επικράτησης της οστεοπόρωσης στην Κίνα.JAMA Netw Open, 2021, 4(8): e2121106.
[3] WRIGHT NC, SAAG KG, DAWSON-HUGHES B, et al. Ο αντίκτυπος των νέων διαγνωστικών κριτηρίων της Εθνικής Συμμαχίας για την Υγεία των Οστών (NBHA) στον επιπολασμό της οστεοπόρωσης στις ΗΠΑ.Osteoporos Int, 2017, 28(4): 1225.
[4] LIANG B, BURLEY G, LIN S, et al. Παθογένεση και θεραπεία της οστεοπόρωσης: υπάρχουσες και αναδυόμενες οδοί.Cell ΜοΙ Biol Lett, 2022, 27(1): 72.
[5] LEI SS, HUANG XW, LI LZ, et al. Εξερεύνηση του μηχανισμού τουEpimedii Folium–Rhizoma drynariaeΤο ζεύγος βοτάνων προώθησε την επούλωση οστικών ελαττωμάτων μέσω δικτυακής φαρμακολογίας και πειραματικών μελετών.J Ethnopharmacol, 2024, 319(3): 117329.
[6] LIU W, XIANG SY, WU YC, et al. Το Icariin προάγει την οστεογονική διαφοροποίηση των BMSC μέσω της οδού mTOR/αυτοφαγίας για τη βελτίωση της οστεοπόρωσης που σχετίζεται με την κετογονική δίαιτα.J Orthop Surg Res, 2024, 19(1): 127.
[7] CHEN L, MA R, LUO P, et al. Επιδράσεις των ολικών φλαβονοειδών του επιμέδιου στον λιπώδη ιστό του μυελού των οστών σε αρουραίους με ωοθηκεκτομή.Μπροστινή Ενδοκρινόλη (Λωζάνη), 2022, 13: 900816.
[8] LIU TS, YU H, WANG S, et al. Η θειική χονδροϊτίνη ανακουφίζει την οστεοπόρωση που προκαλείται από ανεπάρκεια ασβεστίου ρυθμίζοντας το μεταβολισμό των λιπιδίων.Nutr Metab (Λονδίνο), 2023, 20(1): 6.
[9] ZHENG HX, CHEN DJ, ZU YX, et al. Η θειική χονδροϊτίνη προλαμβάνει τη διαβητική οστεοπόρωση που προκαλείται από STZ μέσω της μείωσης της γλυκόζης στο αίμα, του αντιοξειδωτικού στρες, της αντιφλεγμονής και της ρύθμισης της έκφρασης του OPG/RANKL.Int J Mol Sci, 2020, 21(15): 5303.
[10] STELLAVATO A, RESTAINO OF, VASSALLO V, et al. Θειική χονδροϊτίνη στα συμπληρώματα διατροφής των ΗΠΑ σε σύγκριση με προϊόντα φαρμακευτικής ποιότητας: αναλυτικό δακτυλικό αποτύπωμα και πιθανή αντιφλεγμονώδης επίδραση σε ανθρώπινα οστεοαρθριτικά χονδροκύτταρα και αρθρικά κύτταρα.Φαρμακευτική, 2021, 13(5): 737.
[11] SODHI H, PANITCH A. Γλυκοζαμινογλυκάνες στη μηχανική ιστών: ανασκόπηση.Βιομόρια, 2020, 11(1): 29.
[12] QI SS, SHAO ML, SUN Z, et al. Η θειική χονδροϊτίνη ανακουφίζει τη διαβητική οστεοπόρωση και επιδιορθώνει τη μικροδομή των οστών μέσω της αντιοξείδωσης, της αντιφλεγμονής και της ρύθμισης του μεταβολισμού των οστών.Μπροστινή Ενδοκρινόλη (Λωζάνη), 2021, 12: 759843.
[13] 张冬雪,曲帅,王明月,等．淫羊藿总黄酮联合骨营养剂抗骨质疏松作用探讨．中国骨质疏松杂志, 2023, 29(12): 1797.
[14] LI S, LIANG P, CHEN J, et al. Η δενδροβίνη προάγει τον σχηματισμό οστών μέσω της κανονικής οδού σηματοδότησης Wnt/-κατενίνης και αποτρέπει την μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση.Front Pharmacol, 2025, 16: 1616070.
[15] ZHAO HY, YU F, WU W. Νέες προοπτικές για την μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση: μηχανισμοί και πιθανές θεραπευτικές στρατηγικές των sirtuins και του οξειδωτικού στρες.Αντιοξειδωτικά (Βασιλεία), 2025, 14(5): 605.
[16] RAI AD, SHERPA ML, SINGH A, et al. Δοκιμασία αλκαλικής φωσφατάσης οστών και υδροξυπρολίνης ούρων σε προ και μετεμμηνοπαυσιακές γυναίκες στην πολιτεία Sikkim και η συσχέτισή της με την οστική πυκνότητα.J Midlife Health, 2021, 12(4): 304.
[17] 叶丽娟．恒古骨伤愈合剂治疗骨质疏松症的药效学研究．昆明:云南中医药大学,2024．
[18] DESAI S, BABARIA P, NAKARANI M, et al. Αντιοστεοπορωτική δράση τουHemidesmus indicusLinn. σε αρουραίους με ωοθηκεκτομή.J Ethnopharmacol, 2017, 199: 1.
[19] LI J, LU LY, LIU L, et al. Ο μοναδικός ρόλος του λιπώδους ιστού του μυελού των οστών στην απώλεια οστού που προκαλείται από ωοθηκεκτομή σε ποντίκια.Ενδοκρινική, 2024, 83(1): 77.
[20] LIU XY, ZHANG SS, LU XM, et al. Μεταβονομική μελέτη για την αντι-οστεοπόρωση δράση τουRhizoma Drynariaeκαι ο μηχανισμός δράσης του χρησιμοποιώντας UPLC–MS/MS.J Ethnopharmacol, 2012, 139(1): 311.
[21] EISENHAUER A, MÜLLER M, HEUSER A, et al. Αναλογίες ισοτόπων ασβεστίου σε αίμα και ούρα: ένας νέος βιοδείκτης για τη διάγνωση της οστεοπόρωσης.Bone Rep, 2019, 10: 100200.
[22] MEI ZD, DONG X, QIAN Y, et al. Συσχέτιση μεταξύ του μεταβολισμού και της οστικής πυκνότητας σε έναν κινεζικό πληθυσμό.EBioMedicine, 2020, 62: 103111.
[23] MA YS, HOU ZJ, LI Y, et al. Αποκάλυψη των φαρμακολογικών μηχανισμών της ελευθεροσίδης Ε κατά της μετεμμηνοπαυσιακής οστεοπόρωσης μέσω της μεταβολομικής που βασίζεται στο UPLC-Q/TOF-MS.Front Pharmacol, 2020, 11: 1316.
[24] XU HC, NOZAKI K, YU ZN, et al. Επιφανειακή λειτουργικότητα εμφυτευμάτων τιτανίου με σύζευγμα γλουταθειόνης ελεγχόμενης αποδέσμευσης για αντιοξειδωτική και οστεογένεση.J Mater Res Technol, 2025, 34: 2872.
[25] LI X, WANG YF, GAO MT, et al. Σχέσεις που καθοδηγούνται από το μεταβολισμό μεταξύ των νεφρών, του μυελού των οστών και των οστών αρουραίων με μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση.Οστό, 2022, 156: 116306.
[26] YANG KD, WANG XC, ZHANG C, et al. Η μετφορμίνη βελτιώνει τον στοχευόμενο στο HPRT1 μεταβολισμό των πουρινών και επιδιορθώνει την αυτοφαγική ροή που προκαλείται από το NR4A1 διαμορφώνοντας την νουκλεοκυτταροπλασματική μετατόπιση του FoxO1 για τη θεραπεία της μετεμμηνοπαυσιακής οστεοπόρωσης.Cell Death Dis, 2024, 15(11): 795.
[27] SAVIO LEB, LEITE-AGUIAR R, ALVES VS, et al. Πουρινεργική σηματοδότηση στη διαμόρφωση της οξειδοαναγωγικής βιολογίας.Redox Biol, 2021, 47: 102137.
[28] LIU DF, MA LY, ZHENG JH, et al. Το ισοψοραλένιο βελτιώνει την οστεοπόρωση που προκαλείται από γλυκοκορτικοστεροειδή ρυθμίζοντας το μεταβολισμό των πουρινών και προάγοντας τη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών που προκαλείται από το μονοπάτι cGMP/PKG.Curr Drug Metab, 2024, 25(4): 288.
[29] BELLONE F, CINQUEGRANI M, NICOTERA R, et al. Ο ρόλος της βιταμίνης Κ στη χρόνια νεφρική νόσο: εστίαση στην υγεία των οστών και του καρδιαγγειακού συστήματος.Int J Mol Sci, 2022, 23(9): 5282.
[30] ΜΟΣΧΩΝΗΣ Γ, HEUVEL EG VAN DEN, ΜΑΥΡΟΓΙΑΝΝΗ Γ, κ.ά. Επίδραση της κατανάλωσης τυριού τύπου γκούντα εμπλουτισμένου με βιταμίνη D σε βιοχημικούς δείκτες μεταβολισμού των οστών σε μετεμμηνοπαυσιακές γυναίκες στην Ελλάδα.Θρεπτικά συστατικά, 2021, 13(9): 2985.
[31] DAI ZL, KOH W P. Β-βιταμίνες και υγεία των οστών-ανασκόπηση των τρεχόντων στοιχείων.Θρεπτικά συστατικά, 2015, 7(5): 3322.
[32] ZWICKENPFLUG W, HORNUNG F, HOLLAUS A, et al. Βιοσύνθεση βιταμίνης Β3 και NAD+^++: επώαση κυττάρων HepG2 με το αλκαλοειδές μυοσμίνη.J Sci Food Agric, 2024, 104(11): 6844.
[33] CHEN LJ, XING XK, ZHANG PF, et al. Ομοιοστατική ρύθμιση των NAD(H) και NADP(H) στα κύτταρα.Genes Dis, 2024, 11(5): 101146.
[34] YOON H, PARK SG, KIM HJ, et al. Η νικοτιναμίδη ενισχύει τη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών μέσω της ενεργοποίησης του μιτοχονδριακού αντιοξειδωτικού αμυντικού συστήματος.Εχρ ΜοΙ Med, 2023, 55(7): 1531.
[35] DIAS P, SIATKA T, VOPRŠALOVÁ M, et al. Βιολογικές ιδιότητες βιταμινών του συμπλέγματος Β, μέρος 2-βιταμίνες Β(6) και Β(7) (βιοτίνη, βιταμίνη Η).Nutr Res Rev, 2025, 38(2): 791.
[36] DEIANA M, MALERBA G, CARBONARE LD, et al. Η σωματική δραστηριότητα αποτρέπει την αποικοδόμηση του χόνδρου: μια μελέτη μεταβολομικής επισημαίνει με ακρίβεια τη συμμετοχή της βιταμίνης Β6.Κύτταρα, 2019, 8(11): 1374.
[37] WELAN R. Επίδραση της βιταμίνης Β6 στο κάταγμα οστεοπόρωσης.J Bone Metab, 2023, 30(2): 141.
[38] YANG F, DONG X, MA FX, et al. Τα επεμβατικά αποτελέσματα του αφεψήματος tubson-2 σε αρουραίους με ωοθηκεκτομή όπως προσδιορίζονται από έναν συνδυασμό φαρμακολογίας δικτύου και μεταβολομικής.Front Pharmacol, 2020, 11: 581991.
[39] CUI YB, YANG ZJ, YU GS, et al. Το Naringin προάγει τη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών και βελτιώνει την οστεοπόρωση σε ποντίκια με ωοθηκεκτομή.Sci Rep, 2025, 15(1): 12651.
[40] 陈泽彬,罗兰兰,石心怡,等．杜仲汤含药血清通过 L-VGCC促进成骨细胞增殖和分化的机制研究．中国中药杂志, 2025, 50(12): 3335.
[41] YAN CP, WANG XK, JIANG K, et al. -η εκδυστερόνη ενίσχυσαν την οστική αναγέννηση μέσω της οδού σηματοδότησης BMP-2/SMAD/RUNX2/Osterix.Front Cell Dev Biol, 2022, 10: 883228.
[42] 梁广胜,陈伟才,殷嫦嫦,等．淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞成BMP-2/Runx2/OSX 通路的影响.中国中西医结合杂志, 2016, 36(5): 614.