Βιοδείκτες της νεφρικής νόσου στα άλογα: μια ανασκόπηση της τρέχουσας βιβλιογραφίας Ⅱ

3. Αποτελέσματα

3.1. Αποτελέσματα Αναζήτησης Λογοτεχνίας

Μέσω της αναζήτησης Pubmed, εντοπίστηκαν 18 μελέτες που θα συμπεριληφθούν σε αυτήν τη συστηματική ανασκόπηση (Εικόνα1). 

Σχήμα 1. Διάγραμμα ροής της βιβλιογραφικής αναζήτησης για μελέτες σε βιοδείκτες σε άλογαΝεφρική Νόσος. SDMA-συμμετρική διμεθυλαργινίνη; NGAL-λιποκαλίνη που σχετίζεται με ουδετεροφιλική ζελατινάση. Οι αναζητήσεις ήταν πάντα σε συνδυασμό με τη λέξη αναζήτησης άλογο ή άλογο.

Οι βιοδείκτες που προσδιορίστηκαν μέσω της αναζήτησης της βιβλιογραφίας περιλαμβάνουν συμμετρική διμεθυλαργινίνη (SDMA, 9 μελέτες), λιποκαλίνη που σχετίζεται με ουδετερόφιλα ζελατινάση (NGAL, 5 μελέτες), κυστατίνη C (3 μελέτες), ποδοκίνη (1 μελέτη), MMP (1 μελέτη), N- ακετυλο-βήτα-D-γλυκοζαμινιδάση (NAG, 1 μελέτη).

3.2. Τρέχουσα γνώση και επίπεδο αποδεικτικών στοιχείων

3.2.1. Δείκτες νεφρικής λειτουργίας (Εκτίμηση GFR) Συμμετρική διμεθυλαργινίνη (SDMA)

Στους ανθρώπους και στα μικρά ζώα, το SDMA αναγνωρίζεται ως ένας χρήσιμος, αν και πολύ συζητημένος, βιοδείκτης για τη νεφρική λειτουργία. Έχει βρεθεί ότι έχει καλές συσχετίσεις με το GFR και την κρεατινίνη και με αυξήσεις στη συγκέντρωση που παρατηρήθηκαν νωρίτερα από την κρεατινίνη [12].

Εννέα μελέτες στο σύνολο αναφέρουν το SDMA σε άλογα (Πίνακας 2). Αρκετά από αυτά περιλαμβάνουν δεδομένα για την αναλυτική επικύρωση του τεστ που χρησιμοποιήθηκε [13-16]. Όλες οι χρησιμοποιούμενες δοκιμασίες έχουν υποβληθεί σε αναλυτική επικύρωση (φάση Ι της διαδικασίας επικύρωσης). Στις διάφορες μελέτες, χρησιμοποιήθηκαν διαφορετικές δοκιμασίες, μεταξύ των οποίων αναπτύχθηκε μια εμπορικά διαθέσιμη δοκιμασία από την IDEXX και είναι διαθέσιμη για κλινική χρήση. Η κατάψυξη δεν έχει αρνητικό αντίκτυπο στην ανάλυση SDMA [17].

Αρκετές από αυτές τις μελέτες περιλαμβάνουν δεδομένα επικάλυψης επιδόσεων (φάση II). Αυτά έδειξαν διαφορετικές συγκεντρώσεις SDMA στον ορό μεταξύ (1) υγιών αλόγων έναντι αλόγων με AKI [18,19], (2) αλόγων με διαφορετικά επίπεδα αφυδάτωσης [19] και (3) αλόγων αντοχής πριν έναντι μετά τον αγώνα, με μετά -Οι συγκεντρώσεις SDMA αγώνα είναι υψηλότερες με μεγαλύτερη αγωνιστική απόσταση [13]. Δεν υπήρχε διαφορά στις συγκεντρώσεις SDMA στον ορό μεταξύ υγιών αλόγων έναντι αλόγων με καρδιακή νόσο [14], ή μεταξύ επιζώντων και μη επιζώντων με διαφορετικούς βαθμούς αφυδάτωσης (βρέθηκαν χαμηλότερες συγκεντρώσεις SDMA σε επιζώντες από ό,τι σε μη επιζώντες, ωστόσο, αυτό δεν ήταν στατιστικά διαφορετικά) [19]. Οι συγκεντρώσεις SDMA έχουν αναφερθεί μόνο σε πολύ λίγες περιπτώσεις AKI ιπποειδών (37 περιπτώσεις χωρισμένες σε 4 μελέτες) [15,16,18,19], και μέχρι στιγμής σε καμία επιβεβαιωμένη περίπτωση ΧΝΝ σε ιππείς. Μια μελέτη δεν εντόπισε διαφορετικές συγκεντρώσεις SDMA μεταξύ υγιών αλόγων και αλόγων που διατρέχουν κίνδυνο για AKI (και επομένως πιθανή πρώιμη AKI), ενώ ορισμένοι παραδοσιακοί δείκτες (αναλογία πρωτεΐνης ούρων και πρωτεΐνης ούρων προς κρεατινίνη (UP/UC) και αναλογία GGT/κρεατινίνης ούρων) διέφερε [18]. Δύο άλλες μελέτες ανέφεραν 2 και 7 περιπτώσεις με αυξημένο SDMA αλλά φυσιολογική κρεατινίνη. αυτές οι περιπτώσεις ερμηνεύτηκαν ως πιθανές ακόμη μη επιβεβαιωμένες υποκλινικές περιπτώσεις AKI ή ΧΝΝ [15,19]. Ως εκ τούτου, όπως και στα μικρά ζώα, υπάρχει η πιθανότητα η SDMA να είναι ευεργετική για την ανίχνευση πρώιμων περιπτώσεων AKI ιπποειδών όταν η κρεατινίνη εξακολουθεί να βρίσκεται εντός του εύρους αναφοράς, ωστόσο επί του παρόντος δεν υπάρχουν στοιχεία. Σε γάτες και σκύλους, το SDMA αυξάνεται ως απόκριση σε μια μείωση κατά 40% του GFR [12]. Προς το παρόν δεν είναι γνωστό για τα άλογα πόση απώλεια λειτουργίας απαιτείται πριν αυξηθεί το SDMA και εάν είναι προγενέστερος δείκτης για το AKI από την κρεατινίνη.

Δεν υπάρχουν μελέτες σε άλογα που να αναφέρουν τις βέλτιστες τιμές αποκοπής του SDMA και την ευαισθησία και ειδικότητά του ως διαγνωστικό εργαλείο για ΑΚΙ ή ΧΝΝ σε άλογα. Αυτό σημαίνει ότι δεν υπάρχουν προς το παρόν δεδομένα σχετικά με την κλινική απόδοση (φάση III) αυτού του βιοδείκτη ως διαγνωστικού εργαλείου. Καθώς οι υπολογισμοί ευαισθησίας και ειδικότητας βασίζονται σε σύγκριση μεταξύ της δοκιμασμένης μεθόδου έναντι μιας τυπικής μεθόδου αναφοράς, θα πρέπει να αναγνωριστεί ότι δεν είναι διαθέσιμη μια άμεσα διαθέσιμη και αξιόπιστη τυπική μέθοδος αναφοράς.

Επιπλέον, καμία μελέτη δεν διερευνά βελτιώσεις στη διαχείριση ασθενών κατά τη χρήση SDMA (φάση IV).

Τα εύρη αναφοράς έχουν καθοριστεί σε μελέτες με αξιοπρεπές μέγεθος δείγματος. Αυτό έγινε για ενήλικα και πουλάρια με πουλάρια που είχαν σημαντικά υψηλότερες φυσιολογικές τιμές από τα ενήλικα. Εύρος αναφοράς για ενήλικες έχουν αναφερθεί σε δύο διαφορετικές μονάδες:<14 microgram/dL [15,17,20], or <19 microgr/dL [18], or 0.3–0.8 micromol/L [13,14,16]. Overall, there is a low influence of extrarenal factors on SDMA in adults, with no differences between sex [15–17,21], age in adults [15–17], body weight [15,16], or body condition score [15]. Small breed differences have been noted but did not affect the cutoff values [15]. Donkeys have similar reference values as horses [17]. Foals have significantly higher values [16,20,21], ranging up to 100 microgr/dL at birth (with an upper limit of the assay of 100 microgr/dL) [20] or up to 168 microgr/dL for the first 36H [21]. SDMA concentrations decrease in the first month of life to <24 microgr/dL [20], but 2 to 6-month-old foals have been reported to still have higher SDMA concentrations than adults (1.5 ± 0.4 micromol/L) [16]. Similar to SDMA in other species, factors that impact GFR also influence SDMA [12]. This has been confirmed by elevated SDMA in dehydrated horses [19] and in exercising endurance horses [13].

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΝΑ ΛΑΒΕΤΕ ΦΥΤΙΚΟ ΣΥΝΘΕΣΗ CISTANCHE ΓΙΑ ΘΕΡΑΠΕΙΑ ΝΕΦΡΩΝ ΝΟΣΩΝ

Συμπερασματικά, τα τρέχοντα ελλείποντα στοιχεία για την κλινική εφαρμογή του SDMA για την ανίχνευση νεφρικής νόσου σε άλογα απεικονίζονται από το γεγονός ότι υπάρχουν επί του παρόντος μόνο λίγες μελέτες και περιορισμένα δεδομένα σχετικά με τη νεφρική νόσο διαθέσιμα στη βιβλιογραφία, χωρίς βέλτιστα σημεία αποκοπής και ευαισθησίες /διαθέσιμες ειδικότητες για νεφρική νόσο. Επιπλέον, η κύρια ανησυχία είναι η έλλειψη στοιχείων για την SDMA να ανιχνεύει με ακρίβεια και ακρίβεια άλογα με AKI νωρίτερα από την κρεατινίνη. Με βάση τη διαθέσιμη βιβλιογραφία, οι συγγραφείς πιστεύουν ότι το SDMA μπορεί να έχει κάποιες δυνατότητες ως βιοδείκτης για νεφρική νόσο στα άλογα (συμπεριλαμβανομένης της πιθανής ανίχνευσης νεφρικής νόσου νωρίτερα από την κρεατινίνη). Ωστόσο, σε αυτό το στάδιο, οι διαθέσιμες επιστημονικές πληροφορίες είναι περιορισμένες για την υποστήριξη του SDMA που χρησιμοποιείται ως τυπικός βιοδείκτης για όλες τις νεφρικές παθήσεις των ιπποειδών. Ωστόσο, δεδομένου ότι οι δοκιμές SDMA είναι εμπορικά διαθέσιμες για κλινική χρήση και είναι διαθέσιμες καθιερωμένες τιμές αναφοράς, σε επιλεγμένες περιπτώσεις υποψίας πρώιμης ή μη αζωτειμικής νεφρικής νόσου και με συνετή ερμηνεία, μπορούν να ληφθούν υπόψη μετρήσεις SDMA.

Κυστατίνη C

Στην ανθρώπινη ιατρική, η κυστατίνη C είναι ένας καλά διερευνημένος βιοδείκτης των νεφρών που συσχετίζεται καλύτερα με το GFR σε σύγκριση με την κρεατινίνη ορού [22]. Ως εκ τούτου, η κυστατίνη C μπορεί να προσφέρει πλεονεκτήματα στη διάγνωση της νεφρικής νόσου σε καταστάσεις όπου η κρεατινίνη αποτυγχάνει [22]. Ωστόσο, μια πρόσφατη μελέτη σε σκύλους συνέκρινε το SDMA, την κρεατινίνη και την Κυστατίνη C με το GFR που εκτιμήθηκε με σπινθηρογράφημα και διαπίστωσε ότι η κυστατίνη C ήταν κατώτερη τόσο από το SDMA όσο και από την κρεατινίνη στην εκτίμηση του GFR [23].

Υπάρχουν μόνο 3 δημοσιεύσεις που αναφέρουν μετρήσεις κυστατίνης C σε άλογα (Πίνακας 3). Όσον αφορά την επικύρωση της δοκιμασίας (φάση I), μια δημοσίευση χρησιμοποιεί ανοσοπροσδιορισμό ανθρώπινου λατέξ, αλλά πρέπει να καταλήξει στο συμπέρασμα ότι η δοκιμή δεν λειτουργεί για δείγματα ιπποειδών [24]. Οι υπόλοιπες δύο εκδόσεις, και οι δύο χρησιμοποιούν ένα κιτ ELISA που διατίθεται στο εμπόριο (MyBioSource, San Diego, CA, USA, αριθμός καταλόγου MBS022947) [25,26]. Αυτό το κιτ είναι επικυρωμένο από τον κατασκευαστή για χρήση με δείγματα ορού και ούρων αλογίσιας προέλευσης, αλλά δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα για αυτήν την επικύρωση στη βιβλιογραφία. Επί του παρόντος δεν υπάρχουν εμπορικά εργαστήρια που να προσφέρουν τεστ κυστατίνης C για κλινικούς σκοπούς.

Δύο μελέτες ανέφεραν αλληλεπικαλυπτόμενα δεδομένα απόδοσης (φάση II). Οι συγκεντρώσεις κυστατίνης C στα ούρα και στον ορό αναφέρθηκαν ότι ήταν υψηλότερες σε άλογα με AKI έναντι υγιών αλόγων χωρίς AKI [25]. Τα άλογα που διαπιστώθηκε ότι διατρέχουν κίνδυνο για AKI (με κολικούς αλλά χωρίς ενδοτοξιναιμία, σήψη ή σύνδρομο συστηματικής φλεγμονώδους απόκρισης και με απουσία αζωθαιμίας) αποδείχθηκε ότι είχαν αυξημένες συγκεντρώσεις κυστατίνης C στον ορό και στα ούρα [25]. Αυτό υποδηλώνει ότι η κυστατίνη C έχει τη δυνατότητα να ανιχνεύσει πρώιμα AKI πριν αυξηθούν οι συγκεντρώσεις κρεατινίνης ορού. Σε άλλη μελέτη, οι συγκεντρώσεις κυστατίνης C στον ορό ήταν σημαντικά υψηλότερες σε άλογα που είχαν μολυνθεί με Theileria equi. Αυτή η σημαντική αύξηση στην κυστατίνη C σημειώθηκε απουσία κλινικά σχετικής αζωθαιμίας και συσχετίστηκε με το επίπεδο παρασιταιμίας [26].

Siwinska et al. αναφέρθηκαν σχετικά με την κλινική απόδοση της κυστατίνης C με τον προσδιορισμό των βέλτιστων τιμών αποκοπής και της ευαισθησίας και ειδικότητάς τους για τη διάγνωση της ΑΚΙ (Φάση ΙΙΙ) [25]. Η βέλτιστη τιμή αποκοπής για την κυστατίνη C ορού ήταν 0.53 mg/L με ευαισθησία και ειδικότητα 0.64 και 0.85; για την κυστατίνη C των ούρων ήταν 0.20 mg/L με ευαισθησία και ειδικότητα 0.82 και 0,85 [25]. Οι συγκεντρώσεις κυστατίνης C ορού στα προαναφερθέντα μολυσμένα άλογα Theileria equi που αναφέρθηκαν από τους Ahmadpour et al. [26] ήταν σαφώς υψηλότερες από αυτήν την προσδιορισμένη βέλτιστη περικοπή τιμής για τον προσδιορισμό του AKI που ορίστηκε από τους Siwinska et al. [25]. Αυτή η παρατήρηση υποστηρίζει επίσης την ιδέα ότι η κυστατίνη C είναι ικανή να ανιχνεύσει πρώιμο AKI απουσία αζωθαιμίας. Η κυστατίνη C του ορού ήταν πιο αποτελεσματική στον αποκλεισμό του AKI (έτσι για τον εντοπισμό υγιών αλόγων) παρά στην επιβεβαίωση του AKI, ενώ η κυστατίνη C των ούρων ήταν εξίσου αποτελεσματική στον αποκλεισμό ή τον αποκλεισμό [25].

Επί του παρόντος δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα για τη Φάση IV για την κυστατίνη C σε άλογα.

Οι τιμές των συγκεντρώσεων της κυστατίνης C ορού από υγιή άλογα έχουν αναφερθεί ότι είναι {{0}}.13–0.71 mg/L [25] και 0.11 ± {{ 10}},07 ng/mL [26] και συγκεντρώσεις στα ούρα 0,06–0,50 mg/L [25]. Ωστόσο, αυτές οι τιμές βασίζονται σε σχετικά μικρούς αριθμούς αλόγων και επί του παρόντος, δεν έχει πραγματοποιηθεί καμία μελέτη για τον καθορισμό των κατάλληλων περιοχών αναφοράς. Επιπλέον, δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα για τα πουλάρια.

Καμία μελέτη δεν έχει μελετήσει πώς η κυστατίνη C επηρεάζεται από εξωνεφρικούς παράγοντες σε άλογα, αλλά η κυστατίνη C αναφέρεται σε μελέτες σε ανθρώπους ότι δεν εξαρτάται από αυτούς [22].

Συμπερασματικά, τα τρέχοντα στοιχεία που λείπουν για την κλινική εφαρμογή της κυστατίνης C για την ανίχνευση νεφρικής νόσου σε άλογα είναι: η απουσία δεδομένων επικύρωσης της δοκιμασίας, η απουσία εύρους αναφοράς, η περιορισμένη γνώση των εξωνεφρικών επιδράσεων στις συγκεντρώσεις της κυστατίνης C, μόνο λίγες μελέτες για την AKI και όχι μελέτες για τη ΧΝΝ που είναι διαθέσιμες στη βιβλιογραφία. Με βάση τη διαθέσιμη βιβλιογραφία, οι συγγραφείς πιστεύουν ότι η κυστατίνη C θα μπορούσε να έχει δυναμικό ως βιοδείκτη για νεφρική νόσο (συμπεριλαμβανομένης της πρώιμης ανίχνευσης νεφρικής νόσου σε σύγκριση με την κρεατινίνη) και θα πρέπει να συμπεριληφθεί σε μελλοντικές μελέτες. Ωστόσο, σε αυτό το στάδιο, οι διαθέσιμες επιστημονικές πληροφορίες είναι πολύ σπάνιες για να υποστηρίξουν την κλινική χρήση αυτού του βιοδείκτη. Επιπλέον, δεν υπάρχουν επί του παρόντος διαθέσιμα τεστ για κλινικούς σκοπούς, γεγονός που περιορίζει περαιτέρω τις δυνατότητές του για κλινική χρήση σε αυτό το σημείο.

3.2.2. Δείκτες δομικής βλάβης: Σπειραματική βλάβη Podocin

Η Podocin είναι μια διαμεμβρανική πρωτεΐνη σηματοδότησης που υπάρχει αποκλειστικά στα ποδοκύτταρα (υψηλά εξειδικευμένα σπειραματικά επιθηλιακά κύτταρα) και απελευθερώνεται στα ούρα μετά από βλάβη των ποδοκυττάρων [27]. Αναφορές σε ανθρώπους και ζώα υποδεικνύουν ότι η έγκαιρη αναγνώριση της αυξημένης απέκκρισης των ποδοκυττάρων στα ούρα μπορεί να διευκολύνει τη διάγνωση της νεφρικής νόσου [28,29]. Επιπλέον, η ποδοκυτταρουρία συσχετίζεται με την ανάπτυξη σπειραματοπάθειας [30,31]. Υπάρχει μόνο 1 μελέτη που αναφέρει μετρήσεις ποδοκίνης σε άλογα (Πίνακας 4). Όσον αφορά την επικύρωση της δοκιμής (φάση I), στη διαθέσιμη δημοσίευση ανιχνεύθηκε η ποδοκίνη στα ούρα χρησιμοποιώντας μια επικυρωμένη ποιοτική μέθοδο - υγρή χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας σε λειτουργία παρακολούθησης πολλαπλών αντιδράσεων (LC-MS-MRM) και ποσοτικά χρησιμοποιώντας ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) [27]. Για την ποσοτική δοκιμή, οι συγγραφείς χρησιμοποίησαν ένα εμπορικά διαθέσιμο κιτ ELISA για συγκεκριμένο είδος (MyBioSource, San Diego, CA, USA, αριθμός καταλόγου MBS023791). Αυτό το κιτ είναι, σύμφωνα με τον κατασκευαστή, αποδεκτό για χρήση με δείγματα ούρων αλογίσιας προέλευσης, αλλά δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα σχετικά με αυτήν την επικύρωση στη βιβλιογραφία. Η μέθοδος LC-MS-MRM ήταν πιο πιθανό να δώσει θετικά αποτελέσματα από την ELISA [27]. Δεν υπάρχουν εμπορικά εργαστήρια που να προσφέρουν τεστ ποδοκίνης για κλινικούς σκοπούς. Η ίδια μελέτη ανέφερε δεδομένα επικάλυψης επιδόσεων (φάση II) σε 71 ενήλικα θερμόαιμα άλογα. Όσον αφορά τα ποιοτικά δεδομένα (παρουσία ή απουσία), η ποδοκίνη ήταν παρούσα στα ούρα όλων των αλόγων με AKI και των μισών αλόγων σε κίνδυνο για AKI (με κολικούς αλλά χωρίς σύνδρομο ενδοτοξιναιμίας, σήψης ή συστηματικής φλεγμονώδους απόκρισης και με απουσία της αζωταιμίας) [27]. Ωστόσο, η παρουσία της ποδοκίνης ανιχνεύθηκε επίσης σε λίγα υγιή άλογα, παρόμοια όπως και στους ανθρώπους [30]. Επομένως, παρόλο που η παρουσία της ποδοκίνης στα ούρα στα άλογα είναι ένας πιθανός δείκτης σπειραματικής βλάβης σε υποκλινική και κλινική νεφρική νόσο, η πιθανότητα φυσιολογικής ποδοκυτουρίας καθιστά την ποιοτική αξιολόγηση της ποδοκίνης κλινικά δύσκολη στη χρήση. Όσον αφορά τα ποσοτικά αποτελέσματα, η συγκέντρωση της ποδοκίνης στα ούρα ήταν υψηλότερη σε άλογα με AKI έναντι υγιών αλόγων [27]. Τα άλογα που διατρέχουν κίνδυνο για AKI είχαν αυξημένες συγκεντρώσεις ποδοκίνης, αλλά λιγότερες από τα άλογα με AKI [27]. Αυτό υποδηλώνει ότι οι ποσοτικές αξιολογήσεις της ποδοκίνης έχουν τη δυνατότητα να επιβεβαιώσουν τη σπειραματική βλάβη και, επιπλέον, να την ανιχνεύσουν πριν αυξηθούν οι συγκεντρώσεις κρεατινίνης ορού. Η ίδια μελέτη ανέφερε την κλινική απόδοση της ποσοτικής ELISA της ποδοκίνης στα ούρα για τη διάγνωση της ΑΚΙ (Φάση III). Η βέλτιστη τιμή αποκοπής ήταν 0,81 ng/mL με ευαισθησία και ειδικότητα 0,73 και 0,78 [27]. Η ELISA της ποδοκίνης αποδείχθηκε πιο αποτελεσματική για τον αποκλεισμό του AKI παρά για την επιβεβαίωση του AKI [27].

Η συγκέντρωση της ουρικής ποδοκίνης σε υγιή άλογα ήταν 0,19 έως 1,2 ng/mL [27]. Λόγω ενός σχετικά μικρού αριθμού αλόγων που εξετάστηκαν, δεν έχουν καθοριστεί κατάλληλα εύρη αναφοράς για τη συγκέντρωση της ποδοκίνης. Επιπλέον, δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα για τα πουλάρια. Η διαθέσιμη μελέτη δεν αξιολόγησε την επίδραση μη νεφρικών παραγόντων στα επίπεδα της ποδοκίνης σε άλογα. Επίσης, δεν υπάρχουν δεδομένα για την επίδραση αυτών των παραγόντων στον άνθρωπο. Συμπερασματικά, τα τρέχοντα στοιχεία που λείπουν για την κλινική εφαρμογή της ουρικής ποδοκίνης για την ανίχνευση νεφρικής νόσου σε άλογα είναι: η απουσία δεδομένων επικύρωσης της δοκιμασίας, η απουσία εύρους αναφοράς, η απουσία δεδομένων στα πουλάρια, η απουσία γνώσης των εξωνεφρικών επιδράσεων στις συγκεντρώσεις της ποδοκίνης, μόνο 1 μελέτη με περιορισμένα διαθέσιμα δεδομένα στη βιβλιογραφία, χωρίς δεδομένα για ΧΝΝ. Με βάση τη διαθέσιμη βιβλιογραφία, οι συγγραφείς πιστεύουν ότι η ποδοκίνη έχει δυνατότητα ως βιοδείκτη για νεφρική νόσο (συμπεριλαμβανομένης της πρώιμης ανίχνευσης νεφρικής νόσου σε σύγκριση με την κρεατινίνη). Ωστόσο, σε αυτό το στάδιο, οι διαθέσιμες επιστημονικές πληροφορίες είναι πολύ σπάνιες για να υποστηρίξουν την έναρξη κλινικής χρήσης αυτού του βιοδείκτη. Επιπλέον, δεν υπάρχουν επί του παρόντος διαθέσιμα εμπορικά τεστ, γεγονός που περιορίζει περαιτέρω τη χρήση του σε αυτό το σημείο.

3.2.3. Δείκτες δομικής βλάβης: Σωληναριακή βλάβη Λιποκαλίνη που σχετίζεται με ουδετεροφιλική ζελατινάση (NGAL)

Η NGAL είναι μια μικρή πρωτεΐνη λιποκαλίνης που συντίθεται από ενεργοποιημένα ουδετερόφιλα και διάφορα επιθηλιακά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των σωληναριακών κυττάρων του νεφρού. Η αύξηση των συγκεντρώσεων στο πλάσμα και στα ούρα εμφανίζεται ήδη 2 ώρες μετά τη δράση της προσβολής [32] και σχετίζεται με τον βαθμό της νεφρικής βλάβης. Το NGAL έχει αποδειχθεί σε ανθρώπους και μικρά ζώα ότι βοηθά στην έγκαιρη ανίχνευση ασθενών που διατρέχουν κίνδυνο ή με νεφρική νόσο [33-35].

Υπάρχουν δύο δοκιμές που αναφέρονται στη βιβλιογραφία για τα άλογα (Πίνακας 5). Η ELISA χοίρου BioPorto (Bioporto, Κοπεγχάγη, Δανία, κιτ 044) έχει επικυρωθεί για μετρήσεις NGAL σε ορό ιπποειδών. Από όλα τα διαφορετικά είδη NGAL ELISA που διατίθενται στο εμπόριο από την BioPorto, μόνο ο χοίρος αναγνωρίζει ένα σήμα NGAL ιπποειδούς. Το Equine NGAL μπορεί αξιόπιστα να ποσοτικοποιηθεί με τη χρήση της ειδικής δοκιμής για χοίρους και δημοσιεύονται δεδομένα επικύρωσης [36]. Μετά την επικύρωση των δειγμάτων ορού, αυτή η εμπορικά διαθέσιμη ELISA χοίρων έχει επίσης χρησιμοποιηθεί με επιτυχία για τη μέτρηση της NGAL στο αρθρικό υγρό [37] και στο περιτοναϊκό υγρό [38]. Η BioPorto ELISA χρησιμοποιήθηκε για όλες τις δημοσιεύσεις εκτός από μία [25]. Αυτή η τελευταία δημοσίευση χρησιμοποιεί ένα άλλο εμπορικά διαθέσιμο τεστ NGAL ELISA που κατασκευάζεται από την MyBioSource (Σαν Ντιέγκο, Καλιφόρνια, ΗΠΑ). Αυτή η ELISA έχει υποστηριχθεί ότι έχει επικυρωθεί από τον κατασκευαστή για χρήση με δείγματα ορού και ούρων αλογίσιας προέλευσης [25], ωστόσο, δεν υπάρχουν διαθέσιμες λεπτομέρειες στη βιβλιογραφία. Οι συγγραφείς αναφέρουν παρόμοιες τιμές σε σύγκριση με άλλες μελέτες που περιλαμβάνουν υγιή άλογα και άλογα με νεφρική νόσο [36,38], ενισχύοντας τα δεδομένα τους. Ως εκ τούτου, η επικύρωση της αναλυτικής δοκιμασίας (Φάση Ι) ολοκληρώθηκε για το BioPorto NGAL ELISA, αφήνοντας όμως ορισμένα κενά για τη δοκιμή MyBioSource. Ως δευτερεύουσα σημείωση, αυτές οι δοκιμές είναι διαθέσιμες μόνο ως κιτ ELISA με τα οποία πρέπει να εκτελεστεί μεγάλος αριθμός δειγμάτων ταυτόχρονα, καθιστώντας τη δοκιμή μη εφαρμόσιμη σε κλινικό σενάριο [37]. Επί του παρόντος, δεν υπάρχουν εμπορικά εργαστήρια που να προσφέρουν NGAL. Το ανθρώπινο NGAL έχει βρεθεί ότι είναι πολύ σταθερό και η παρατεταμένη αποθήκευση ή οι επαναλαμβανόμενοι κύκλοι κατάψυξης-απόψυξης έχουν ελάχιστες επιπτώσεις στις μετρούμενες συγκεντρώσεις [37]. Δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα σχετικά με αυτό σε δείγματα από άλογα.

Όσον αφορά την απόδοση επικάλυψης (Φάση ΙΙ), υπάρχουν 2 μελέτες που αναφέρουν νεφρική νόσο. Σε σύγκριση με υγιή άλογα, αυτές οι μελέτες καταδεικνύουν αύξηση της NGAL ορού σε άλογα με αδιαφοροποίητη αζωθαιμία [36] ή στις συγκεντρώσεις NGAL στον ορό και στα ούρα σε άλογα με AKI [25]. Τα άλογα που διαπιστώθηκε ότι διατρέχουν κίνδυνο για AKI (με κολικούς αλλά χωρίς ενδοτοξιναιμία, σήψη ή σύνδρομο συστηματικής φλεγμονώδους απόκρισης και με απουσία αζωθαιμίας) αποδείχθηκε ότι είχαν αυξημένες συγκεντρώσεις NGAL στον ορό και στα ούρα [25]. Αυτό υποδηλώνει ότι το NGAL έχει τη δυνατότητα να ανιχνεύσει AKI νωρίς πριν αυξηθούν οι συγκεντρώσεις κρεατινίνης ορού. Μελέτες σε ανθρώπους έχουν δείξει ότι το NGAL μπορεί να ανιχνεύσει το AKI 1-2 ημέρες νωρίτερα από τις παραδοσιακές μεθόδους, αλλά μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ως βιοδείκτης για ΧΝΝ [39]. Οι άλλες μελέτες δεν αναφέρουν τη νεφρική νόσο, αλλά επικεντρώνονται στην άποψη ότι η NGAL δρα επίσης ως πρωτεΐνη οξείας φάσης και αυξάνεται με τη φλεγμονή. Αυτό έχει αποδειχθεί σε καταστάσεις φλεγμονής και λοίμωξης του αρθρικού αρθρικού ιπποειδούς [37] και φλεγμονής που σχετίζεται με τον κολικό του ίππου [38]. Στους ανθρώπους, το NGAL έχει επίσης προταθεί ως βιοδείκτης για μη νεφρικές παθήσεις όπως βακτηριακές λοιμώξεις, φλεγμονώδη νόσο του εντέρου, άσθμα και καρκίνο του εγκεφάλου και του μαστού [39].

Μόνο μία μελέτη ιπποειδών αναφέρει την κλινική απόδοση με τον προσδιορισμό των βέλτιστων τιμών αποκοπής και την ευαισθησία και ειδικότητά τους για τη διάγνωση της ΑΚΙ (Φάση ΙΙΙ) [25]. Η βέλτιστη τιμή αποκοπής για το NGAL ορού ήταν 95,2 ng/mL με ευαισθησία 0,54 και ειδικότητα 0,93. για το NGAL ούρων ήταν 33,1 ng/mL με ευαισθησία 0,64 και ειδικότητα 0,71 [25]. Το NGAL ήταν πιο αποτελεσματικό στην αναγνώριση αλόγων χωρίς AKI παρά στην επιβεβαίωση του AKI και δεν συσχετίστηκε με τις συγκεντρώσεις κρεατινίνης ορού [25]. Η υπόθεση αυτών των συγγραφέων ήταν ότι η έλλειψη συσχέτισης με την κρεατινίνη ορού θα μπορούσε να σχετίζεται με τη διαφορά στην παθοφυσιολογία των δεικτών (η κρεατινίνη είναι λειτουργικός δείκτης ενώ η NGAL είναι δείκτης δομικής βλάβης) ή με το γεγονός ότι η NGAL αυξάνεται επίσης ως απόκριση σε φλεγμονή [25]. Το γεγονός ότι το NGAL αυξάνεται επίσης μετά από φλεγμονή, όπως και σε άλλα είδη [34], καθιστά την κλινική χρήση του ως βιοδείκτη για νεφρική νόσο πιο δύσκολη, ειδικά επειδή πολλές περιπτώσεις με AKI έχουν επίσης συστηματική φλεγμονή. Ταυτόχρονα αυτό το καθιστά έναν ενδιαφέροντα βιοδείκτη για φλεγμονή, απουσία νεφρικής νόσου ή υποψίας νεφρικής νόσου. Ως αποτέλεσμα, έχει προταθεί ότι έχει τη δυνατότητα να είναι ένα γενικό εργαλείο ελέγχου υγείας για τα άλογα, ανιχνεύοντας φλεγμονή και πρώιμη νεφρική νόσο [40].

Επί του παρόντος δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα για τη Φάση IV για το NGAL σε άλογα. Οι ανώτερες τιμές αναφοράς των συγκεντρώσεων NGAL στον ορό από υγιή άλογα έχουν αναφερθεί ότι κυμαίνονται μεταξύ 41,9 microg/L [38] έως 103,6 microg/L [36]. Οι δύο μελέτες με τις υψηλότερες τιμές (95,20 και 103,6 microg/L) δεν απέκλεισαν ενεργά τη φλεγμονή στις υγιείς ομάδες αλόγων τους [25,36], η οποία έγινε για τις μελέτες με τις χαμηλότερες συγκεντρώσεις NGAL στον ορό (41,9 και 47,7 microg/ Λ) [38,40]. Εκτός από αυτές τις μελέτες που αναφέρουν συγκεντρώσεις NGAL στον ορό μικρών αριθμών υγιών αλόγων, καμία μελέτη δεν έχει ακόμη αναπτύξει πραγματικά τιμές αναφοράς.

Καμία μελέτη δεν έχει διερευνήσει εάν εξωνεφρικοί παράγοντες όπως η ηλικία, το φύλο, η φυλή, το σωματικό βάρος ή η βαθμολογία της κατάστασης του σώματος επηρεάζουν τις συγκεντρώσεις NGAL. Υπάρχει, ωστόσο, μια μελέτη σε υγιή άλογα κούρσας καθαρόαιμου τύπου που δείχνει ότι μια σύντομη έντονη άσκηση δεν έχει καμία επίδραση στις συγκεντρώσεις NGAL στον ορό [40]. Αυτό δεν μπορεί να επεκταθεί σε όλους τους τύπους άσκησης και θα μπορούσε ενδεχομένως να είναι διαφορετικό για έντονες ασκήσεις μεγαλύτερης διάρκειας, όπως η αντοχή. Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, η φλεγμονή επηρεάζει τις συγκεντρώσεις NGAL [37,38]. Σε άλλα είδη, έχει χρησιμοποιηθεί η αναλογία ούρων NGAL/κρεατινίνης (UNCR) [41]. Δεν υπάρχουν προς το παρόν διαθέσιμα δεδομένα για αυτή την αναλογία σε άλογα.

Υπάρχουν αρκετές μελέτες για το NGAL σε άλογα που έχουν παρουσιαστεί σε συνέδρια και έχουν δημοσιευτεί ως πρακτικά συνεδρίων σε εσωτερικά επιστημονικά περιοδικά. Επειδή αυτά δεν είναι δεδομένα που έχουν αξιολογηθεί από ομοτίμους και δεν προέκυψαν στην αναζήτηση Pubmed όπως περιγράφεται λεπτομερώς στην ενότητα Υλικά και Μέθοδοι, αυτά τα δεδομένα δεν έχουν συμπεριληφθεί στην παραπάνω αξιολόγηση. Ωστόσο, για να δώσουμε στον αναγνώστη μια σύντομη επισκόπηση της συνεχιζόμενης έρευνας για το NGAL σε άλογα, μια σύντομη λίστα δημοσιευμένων πρακτικών συνεδρίου παρέχεται παρακάτω για τα θέματα που διερευνήθηκαν:

- NGAL σε νεογνικά πουλάρια, ως διαγνωστικό εργαλείο που συμβάλλει στον εντοπισμό διαφορετικών αιτιών αζωθαιμίας (περίληψη ECEIM 2020) [42].

- NGAL σε ενήλικα άλογα, επικαλύπτει την απόδοση νεφρική έναντι φλεγμονής (περίληψη ECEIM 2018) [43].

- NGAL σε ενήλικα άλογα, μετά από επαγωγή ενδοτοξιναιμίας (περίληψη ECEIM 2018) [43].

- NGAL σε ενήλικα άλογα, ως εργαλείο για τον εντοπισμό μετεγχειρητικών επιπλοκών μετά από ευνουχισμό (περίληψη ECEIM 2018) [43].

- NGAL σε ενήλικα άλογα, σε βρογχοκυψελιδικό υγρό (περίληψη ECEIM 2020) [44].

Συμπερασματικά, τα τρέχοντα στοιχεία που λείπουν για την κλινική εφαρμογή του NGAL για την ανίχνευση νεφρικής νόσου σε άλογα είναι: απουσία καθιερωμένων περιοχών αναφοράς, περιορισμένη γνώση των εξωνεφρικών επιδράσεων στις συγκεντρώσεις NGAL, μόνο λίγες μελέτες και περιορισμένα δεδομένα για τη νεφρική νόσο διαθέσιμα στη βιβλιογραφία. Με βάση τη διαθέσιμη βιβλιογραφία και λαμβάνοντας υπόψη ότι πρόκειται για δομικό δείκτη, οι συγγραφείς πιστεύουν ότι το NGAL έχει δυνατότητα ως πρόσθετος βιοδείκτης για νεφρική νόσο (συμπεριλαμβανομένης της δυνατότητάς του να ανιχνεύει AKI νωρίτερα από την κρεατινίνη), αλλά και ως δείκτης φλεγμονής. Ωστόσο, σε αυτό το στάδιο, οι διαθέσιμες επιστημονικές πληροφορίες εξακολουθούν να είναι περιορισμένες για την υποστήριξη της κλινικής χρήσης αυτού του βιοδείκτη. Επιπλέον, δεν διατίθενται επί του παρόντος εμπορικές δοκιμές για κλινικούς σκοπούς, γεγονός που περιορίζει περαιτέρω τις δυνατότητές του για κλινική χρήση σε αυτό το σημείο.

Μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας 2 και 9 (MMP-2 και MMP-9)

Οι μεταλλοπρωτεϊνάσες (MMPs) είναι γνωστές για την ικανότητά τους να αποικοδομούν τις εξωκυτταρικές πρωτεΐνες μήτρας. Έχει αποδειχθεί σε μελέτες σε ανθρώπους και σε εργαστηριακά ζώα ότι αυξάνουν τον ορό σε σχέση με την ενδοτοξιναιμία και στα ούρα σε σχέση με τη νεφρική βλάβη. Το τελευταίο έχει προταθεί ότι είναι νωρίτερα αύξηση από την κρεατινίνη [24,45-48]. Υπάρχει μόνο μία μελέτη που περιγράφει τα MMPs ως βιοδείκτες των νεφρών σε άλογα [24] (Πίνακας 4). Σε αυτή τη δημοσίευση από την Arosalo, δεν περιγράφονται δεδομένα επικύρωσης ανάλυσης (φάση Ι). Ο συγγραφέας αναφέρεται σε μια προηγούμενη μέθοδο μέτρησης των MMPs [49], ωστόσο, αυτή δεν είναι μια συγκεκριμένη μέθοδος για τα άλογα, αμφισβητώντας την εγκυρότητα των αποτελεσμάτων αυτής της μελέτης. Επί του παρόντος δεν υπάρχει εμπορικό εργαστήριο που να προσφέρει μετρήσεις MMP για κλινική χρήση.

Οι Arosalo et al. [24] αναφέρουν μια μελέτη επικάλυψης επιδόσεων που συγκρίνει άλογα με κολικούς που υποβάλλονται σε διερευνητική λαπαροτομία (με φυσιολογικές συγκεντρώσεις κρεατινίνης ορού) με υγιή άλογα που γίνονται δεκτά για ευνουχισμό. Τα άλογα με κολικούς είχαν σημαντικά υψηλότερες σύνθετες και προ-ΜΜΡ-9 δραστηριότητες ούρων MMP-9 και υψηλότερη δραστηριότητα MMP-2 στο πλάσμα από τα υγιή άλογα [24]. Αυτοί οι συγγραφείς προτείνουν ότι η αύξηση της δραστηριότητας της MMP-2 του πλάσματος σχετίζεται με την ενδοτοξιναιμία και ότι η αύξηση στις σύνθετες και προ-ΜΜΡ-9 δραστηριότητες των ούρων είναι ενδεικτική της AKI [24]. Ως εκ τούτου, η δραστηριότητα MMP των ούρων μπορεί επίσης σε άλογα να θεωρηθεί ως πρώιμος δείκτης της ΑΚΙ με τη δυνατότητα εντοπισμού περιπτώσεων ΑΚΙ πριν αυξηθούν οι συγκεντρώσεις κρεατινίνης ορού. Δεν υπάρχουν δεδομένα κλινικής απόδοσης (φάση III), δεδομένα χρησιμότητας (φάση IV), εύρη αναφοράς ή πληροφορίες για εξωνεφρικούς παράγοντες διαθέσιμα στη βιβλιογραφία σχετικά με τα MMP ως βιοδείκτες νεφρών σε άλογα.

Συμπερασματικά, τα τρέχοντα στοιχεία που λείπουν για την κλινική εφαρμογή του MMP-9 για την ανίχνευση νεφρικής νόσου σε άλογα είναι: η απουσία δεδομένων επικύρωσης της ανάλυσης, η απουσία εύρους αναφοράς, η περιορισμένη γνώση των εξωνεφρικών επιδράσεων, μόνο 1 μελέτη για πιθανή πρώιμη AKI αλλά δεν υπάρχουν επιβεβαιωμένα περιστατικά ΑΚΙ διαθέσιμα στη βιβλιογραφία. Οι συγγραφείς πιστεύουν ότι η επί του παρόντος διαθέσιμη βιβλιογραφία για το MMP-9 δεν επιτρέπει να γίνουν δηλώσεις σχετικά με τις δυνατότητές του ως βιοδείκτη για νεφρική νόσο. Σε αυτό το στάδιο, δεν υπάρχουν διαθέσιμες επιστημονικές πληροφορίες που να υποστηρίζουν την κλινική χρήση αυτού του βιοδείκτη. Επιπλέον, επί του παρόντος δεν διατίθενται εμπορικές δοκιμές για κλινικούς σκοπούς

Ν-ακετυλο-βήτα-D-γλυκοζαμινιδάση (NAG)

Το NAG είναι μια μεγάλη λυσοσωμική πρωτεΐνη των εγγύς σωληναρίων και δεν επαναρροφάται ούτε φιλτράρεται στα σπειράματα λόγω του μεγέθους της [50]. Ως εκ τούτου, η μέτρηση του NAG στα ούρα έχει υποτεθεί ότι είναι χρήσιμη για την ανίχνευση νεφρικής νόσου. Επειδή τα εγγύς σωληνάρια αποτελούν βασικό μέρος της παθολογίας της ΑΚΙ και των κύκλων οξείας επί χρόνιας νόσου που συμβαίνουν συχνά κατά τη διάρκεια της ΧΝΝ, το NAG είναι θεωρητικά κατάλληλο ως βιοδείκτης της νεφρικής νόσου.

Το NAG έχει αξιολογηθεί σε μια μελέτη σε άλογα, όπου εξετάστηκε μια φωτομετρική ανάλυση σε ούρα ιπποειδών χρησιμοποιώντας βιοχημικό αναλυτή [50] (Πίνακας 4). Τα αποτελέσματα της Φάσης 1 είναι διαθέσιμα από τη μελέτη σε 7 μη αζωτεμικούς και 7 αζωτεμικούς ίππους. Ο συντελεστής διακύμανσης εντός του τρεξίματος για το NAG ούρων/Κρεατινίνη ούρων ήταν 20% ενώ ο συντελεστής διακύμανσης εντός του τρεξίματος ήταν 3,2% με υψηλή γραμμικότητα κατά τις σειριακές αραιώσεις. Οι συγκεντρώσεις NAG έχουν αναφερθεί ότι επηρεάζονται από το pH των ούρων, με τα αλκαλικά ούρα να οδηγούν σε πτώση των συγκεντρώσεων. αυτό μπορεί να εφαρμοστεί στην ερμηνεία σε ασθενείς με ιπποειδή, δεδομένης της αλκαλικότητας των ούρων των ιπποειδών [50]. Ωστόσο, απαιτείται περαιτέρω εργασία για να εξακριβωθεί η επίδραση αυτού σε διαφορετικούς προσδιορισμούς [51].

Παρά το μικρό μέγεθος του δείγματος, οι συγκεντρώσεις NAG είναι σημαντικά υψηλότερες στα αζωτεμικά άλογα σε σύγκριση με τα μη αζωτεματικά άλογα [50]. Ωστόσο, ο αριθμός των αλόγων που εγγράφηκαν στη μελέτη είναι ανεπαρκής για την αξιολόγηση της απόδοσης στην υγεία και την ασθένεια (φάση II). Δεν υπάρχουν δεδομένα κλινικής απόδοσης (φάση III), δεδομένα χρησιμότητας (φάση IV) ή εύρη αναφοράς για άλογα διαθέσιμα στη βιβλιογραφία. Λόγω του περιορισμένου αριθμού αλόγων στη μελέτη, δεν είναι δυνατό να καθοριστούν εύρη αναφοράς ή διαγνωστική ακρίβεια. Συμπερασματικά, λόγω έλλειψης στοιχείων, δεν υπάρχει υποστήριξη για την κλινική χρήση του NAG ως βιοδείκτη της νεφρικής νόσου σε άλογα. Το NAG θα πρέπει να περιλαμβάνεται σε μελλοντικές μελέτες για το AKI και τη ΧΝΝ σε άλογα καθώς μπορεί να έχει δυναμικό. Καθώς το NAG μπορεί να εκτελεστεί σε εμπορικό αναλυτή, θα μπορούσε εύκολα να συμπεριληφθεί σε μελέτες διαλογής στο μέλλον. Στον Πίνακα 6 δίνεται μια επισκόπηση των μοριακών και φυσιολογικών πληροφοριών όλων των βιοδεικτών που συζητήθηκαν παραπάνω.

Υποστήριξη της Wecistanche-Ο μεγαλύτερος εξαγωγέας κιστάνι στην Κίνα:

Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Αγορά για περισσότερες λεπτομέρειες Λεπτομέρειες:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΝΑ ΠΑΡΕΤΕ ΦΥΣΙΚΟ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΚΙΣΤΑΝΧΗΣ ΜΕ 25% ΕΧΙΝΑΚΟΣΙΔΗ ΚΑΙ 9% ΑΚΤΕΟΣΙΔΗ ΓΙΑ ΛΟΙΜΩΞΗ ΤΩΝ ΝΕΦΡΩΝ