Είναι οι σάουνες ωφέλιμες ή επιβλαβείς για την αυτοσωμική κυρίαρχη πολυκυστική νόσο των νεφρών; Εξέταση με μοντέλο ποντικιού

Abstract Ιστορικό: 

Οι πρωτεΐνες θερμικού σοκ (Hsps), η έκφραση των οποίων προκαλείται από τη θερμική επεξεργασία, λειτουργούν στην προστασία των νεφρώνκαταστολή της απόπτωσηςκαιδιατήρηση της νεφρικής σωληναριακής βιωσιμότητας. Επιπλέον, πρόσφατα, έχει υποδειχθεί ότι η έκφραση του Hsps μπορεί να είναι ένας θεραπευτικός στόχος για αυτοσωμικόκυρίαρχοπολυκυστική νεφρική νόσο(ADPKD). Ερευνήσαμε την επίδραση της θεραπείας με ξηρή σάουνα σεADPKDποντίκια μοντέλα.

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΝΑ ΠΑΡΕΤΕ ΦΥΣΙΚΟ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΚΙΣΤΑΝΧΗΣ ΜΕ 25% ΕΧΙΝΑΚΟΣΙΔΗ ΚΑΙ 9% ΑΚΤΕΟΣΙΔΗ ΓΙΑ ΤΗ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΩΝ ΝΕΦΡΩΝ

Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:Wallence.Suen@Wecistanche.Com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Αγορά για περισσότερες λεπτομέρειες Λεπτομέρειες:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Μέθοδοι και αποτελέσματα:

Τα ποντίκια (αρσενικά ποντίκια DBA/2FG-pay) κατηγοριοποιήθηκαν σε τρεις ομάδες: μάρτυρες, TS: ποντίκια pcy που υποβλήθηκαν σε παρατεταμένη σάουνα με χορηγούμενο νερό που περιέχει 4% σακχαρόζη, SW: ποντίκια pcy στα οποία χορηγήθηκε νερό που περιείχε 4% σακχαρόζη. Η ομάδα TS υποβλήθηκε σε συνεδρίες σάουνας δύο φορές την εβδομάδα για τέσσερις εβδομάδες. Η ομάδα TS επιτεύχθηκε και διατηρήθηκε σε θερμοκρασίες του ορθού περίπου 39,0 βαθμών , έως ότου αφαιρέθηκαν προσεκτικά από τη συσκευή μακρινής υπέρυθρης ακτινοβολίας. Μετά από 4 εβδομάδες θεραπείας στη σάουνα, τα επίπεδα κρεατινίνης και αζώτου ουρίας αίματος (BUN) προσδιορίστηκαν με ενζυματική μέθοδο. Η πρωτεΐνη θερμικού σοκ (HSP) ή οι πρωτεΐνες που σχετίζονται με την ανάπτυξη και το μέγεθος των κυττάρων αναλύθηκαν με στύπωμα western. Η ομάδα TS εμφάνισε οριακά υψηλότερα επίπεδα κρεατινίνης και BUN από την ομάδα ελέγχου και SW, ωστόσο, οι διαφορές δεν ήταν σημαντικές. Ωστόσο, η διεύρυνση της κύστης στην ομάδα TS μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με αυτή της ομάδας ελέγχου. Η έκφραση HSP90 μειώθηκε ελαφρώς στις ομάδες TS και SW σε σχέση με την ομάδα ελέγχου (p < 0.01 ή p <0,001, έναντι ελέγχου), όπως και η έκφραση Erk. , η οποία συνδέεται με την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό κύστεων (p < 0,05, TS έναντι ελέγχου). Η έκφραση Hsp27 και το επίπεδο φωσφορυλίωσης στην ομάδα SW ήταν συγκρίσιμα με αυτά της ομάδας ελέγχου. Ωστόσο, η ομάδα TS είχε αυξημένα επίπεδα Hsp27 και φωσφορυλίωσης (NS). Η έκφραση της προκασπάσης-3 στην ομάδα TS ήταν οριακά χαμηλότερη από αυτή στην ομάδα ελέγχου. Ωστόσο, η δραστηριότητα της κασπάσης-3 σε όλες τις ομάδες δεν έδειξε διαφορές.

Συμπέρασμα: Τα ευρήματα αυτής της μελέτης έδειξαν ότι 4 εβδομάδες θεραπείας στη σάουνα θα μπορούσαν να προκαλέσουν παροδική αφυδάτωση και σχετική νεφρική δυσλειτουργία και οδήγησαν στον κίνδυνο διέγερσης της ανάπτυξης κύστεων με αυξημένη έκφραση Hsp27. Επιπλέον, καταλήξαμε στο συμπέρασμα ότι η πρόληψη της αφυδάτωσης και της ανάπτυξης κύστεων θα μπορούσε να κατασταλεί με τη λήψη κατάλληλης ποσότητας νερού αμέσως μετά τη θεραπεία στη σάουνα.

Λέξεις-κλειδιά:αυτοσωμικό επικρατές πολυκυστικόΝεφρική Νόσος, σάουνα, πρόσληψη νερού, Hsp90, Hsp27

Εισαγωγή

Αυτοσωμικό επικρατέςπολυκυστική νεφρική νόσο(ADPKD) είναι μια γενετική διαταραχή που χαρακτηρίζεται από την ανάπτυξη πολυάριθμων κύστεων και στους δύο νεφρούς. Η ADPKD προκαλείται κυρίως από μεταλλάξεις σεπολυκυστική νεφρική νόσο1 (PKD1) και PKD2 γονίδια, τα οποία κωδικοποιούν την πολυκυστίνη 1 (PC1) και PC2, αντίστοιχα. Κατά τη διάρκεια της δεκαετίας πορείας της νόσου, οι ασθενείς αναπτύσσουν μεγάλες νεφρικές κύστεις γεμάτες με υγρό που επηρεάζουν τη λειτουργία των νεφρών. Επί του παρόντος, ο αριθμός των ασθενών με ADPKD στην Ιαπωνία εκτιμάται ότι είναι 31,000, που αντιπροσωπεύει περίπου το 3-5% όλων των ασθενών που υποβάλλονται σε αιμοκάθαρση). Περίπου το 50% των ασθενών με ADPKD αναπτύσσουν νεφρική νόσο τελικού σταδίου έως την ηλικία των 602 ετών). Το Tolvaptan, ένας ανταγωνιστής του υποδοχέα βαζοπρεσίνης 2 (V2), εγκρίθηκε ως ο πρώτος θεραπευτικός παράγοντας για την ADPKD και η κλινική του χρήση ξεκίνησε τον Μάιο του 2014 στην Ιαπωνία. Αν και είναι ένα αποτελεσματικό φάρμακο που μειώνει τον ρυθμό ανάπτυξης των κύστεων, προς το παρόν δεν υπάρχει θεραπεία για την ADPKD και δεν είναι δυνατό να σταματήσει ο σχηματισμός κύστεων στους νεφρούς.

Θερμική θεραπεία, συμπεριλαμβανομένωνλουτροθεραπεία(BT) καιθεραπεία spa(ST), έχει χρησιμοποιηθεί συχνά παγκοσμίως ως φυσιοθεραπεία ή εναλλακτική θεραπεία. Σε κλινικές συνθήκες, ο κύριος στόχος της θερμικής θεραπείας είναι η επίτευξη αποτελεσματικών θεραπευτικών αποτελεσμάτων χωρίς να βλάψει τους φυσιολογικούς ιστούς. Μια πρόσφατη συστηματική ανασκόπηση έδειξε ότι η BT και η ST παρέχουν σημαντική ανακούφιση από τον πόνο και βελτιωμένη ποιότητα ζωής σε χρόνιες παθήσεις του μυοσκελετικού συστήματος ή του συνδετικού ιστού). Η θερμική διέγερση προκαλεί πρωτεΐνες θερμικού σοκ (Hsps) που είναι απαραίτητες για την επιβίωση των κυττάρων μέσω της λειτουργίας τους ως πρωτεϊνικοί συνοδοί. Ο ρόλος του Hsps στην υγεία και τη νόσο των νεφρών είναι ποικίλος. Η επαγωγή Hsps μπορεί να είναι είτε ευεργετική είτε επιζήμια για το νεφρό, ανάλογα με το συγκεκριμένο Hsps, τον τύπο κυττάρου και το πλαίσιο). Στον νεφρικό ιστό, τα Hsps αποτελούν σημαντικό μέρος του ενδοκυτταρικού αμυντικού συστήματος, το οποίο ενεργοποιείται από διαφορετικούς τύπους κυτταρικού στρες. Τα διάφορα Hsps μέσα στο κύτταρο σταθεροποιούν τις κυτταρικές δομές και ενισχύουν την αντίσταση των κυττάρων στην απόπτωση και τη νέκρωση6), 7). Τα τελευταία χρόνια, έχει αναφερθεί ότι οι Hsps διαδραματίζουν επιζήμιο ρόλο στην ADPKD και ως εκ τούτου αποτελούν θεραπευτικούς στόχους8), 9). Ως εκ τούτου, στοχεύσαμε να διερευνήσουμε την επίδραση της σάουνας σε ζώα μοντέλου ADPKD, όταν επαναλαμβάνεται το θερμικό φορτίο που αυξάνει τη θερμοκρασία του ορθού κατά περίπου 2 βαθμούς και τη διατηρεί για περίπου 30 λεπτά.

II Υλικά και Μέθοδοι

1. Μοντέλο ποντικού αυτοσωματικής επικρατούσας πολυκυστικής νόσου των νεφρών (ADPKD) Όλες οι διαδικασίες σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες για τη φροντίδα και τη χρήση των πειραματόζωων που εγκρίθηκαν από το Πανεπιστήμιο Επιστημών Υγείας του Kumamoto (Αρ. 18-07). Αρσενικά ποντίκια DBA/2FG-pcy (pcy)10), 11) (ηλικίας 8 εβδομάδων, n=12) (Kyudo, Kumamoto, Ιαπωνία) με αρχικό σωματικό βάρος 20,9±0,7 g χρησιμοποιήθηκαν ως Μοντέλο ποντικών ADPKD σε αυτό το πείραμα. Αρσενικά ποντίκια DBA (8 εβδομάδες, n=3) χρησιμοποιήθηκαν ως αναφορά για το μοντέλο ποντικιού ADPKD. Το Σχήμα 1 δείχνει την εμφάνιση και τον αποκομμένο νεφρό ως τυπικά παραδείγματα ποντικών pcy (Εικ. 1Α, Β). Όλα τα ζώα στεγάστηκαν υπό ελεγχόμενη υγρασία και θερμοκρασία με κύκλο φωτός/σκότους 12:{17}} ωρών και τους δόθηκε ελεύθερη πρόσβαση σε τυπική τροφή ποντικιού και νερό βρύσης.

Εννέα ποντίκια pcy (ηλικίας 8 εβδομάδων) χωρίστηκαν τυχαία στις ακόλουθες τρεις ομάδες - ομάδα ελέγχου: ποντίκια pcy ως έλεγχος (n=3), ομάδα TS: ποντίκια pcy που εκτέθηκαν σε επαναλαμβανόμενη συστηματική θερμική διέγερση (n {{3} }); και ομάδα SW: pcy ποντίκια στα οποία χορηγήθηκε νερό που περιείχε 4% σακχαρόζη (n=3). Τα ποντίκια στην ομάδα TS έλαβαν νερό που περιείχε 4% σακχαρόζη όλη τη νύχτα, μετά από συστηματική θερμική διέγερση για την πρόληψη της αφυδάτωσης. Σε μια προηγούμενη μελέτη, είχαμε βρει ότι η απώλεια σωματικού βάρους ήταν περίπου 3-4% μετά από συστηματική θερμική διέγερση12). Όταν δόθηκε 4% νερό σακχαρόζης σε ποντίκια pcy, η ποσότητα του νερού που καταναλώθηκε αυξήθηκε σημαντικά από 5,6 ± 0,6 mL σε 7,4 ± 0},7 mL (p < 0.001 , Εικ. 1C). Η κατά τη διάρκεια της νύχτας πρόσληψη νερού σακχαρόζης 4% ήταν πράγματι υψηλή πρόσληψη υγρών ισοδύναμη με 14 ± 7% του σωματικού βάρους. Η ομάδα SW κατανάλωσε νερό κατά τη διάρκεια της νύχτας με την ίδια συχνότητα με την ομάδα TS.

2. Συστημική θερμική διέγερση (σάουνα)

Η ένταση της θερμότητας της σάουνας καθορίστηκε σε προηγούμενη μελέτη13). Ωστόσο, η θερμοκρασία του ορθού ορισμένων από τα ποντίκια pcy ξεπέρασε τους 42 βαθμούς λόγω του μικρού σωματικού τους όγκου σε σύγκριση με αυτούς των κανονικών ποντικών DBA και των ποντικών 129X1/SvJ. Ως εκ τούτου, επιχειρήθηκε αύξηση της θερμοκρασίας του ορθού κατά 1 βαθμό, αλλά λόγω του περιορισμού του ελέγχου του συστήματος ξηρής σάουνας μακρινής υπέρυθρης ακτινοβολίας (που παρέχεται από το Πανεπιστήμιο Kagoshima), η θερμοκρασία του ορθού ορίστηκε να αυξηθεί στους 39 βαθμούς περίπου. Δεν βρέθηκαν αναφορές σχετικά με τη συχνότητα σάουνας για ADPKD. Ως εκ τούτου, εγκρίθηκε η ελάχιστη αποτελεσματική συχνότητα της σάουνας (δύο φορές/εβδομάδα) που καθορίστηκε σε μια μελέτη σχετικά με τη σχέση μεταξύ κολύμβησης στη σάουνα και καρδιαγγειακών παθήσεων και άλλων αιτιών θνησιμότητας από τους Laukkanen et al.14). Συγκεκριμένα, τα ποντίκια έλαβαν θεραπεία σάουνας στους 43 βαθμούς για δέκα λεπτά και στη συνέχεια στους 37 βαθμούς για 35 λεπτά για να ανυψωθεί η θερμοκρασία του ορθού από 37,1 ± 0,1 βαθμό σε 39,3 ± 0} μοίρες χρησιμοποιώντας το Σύστημα ξηρής σάουνας με υπέρυθρες ακτίνες. Οι θερμοκρασίες του ορθού των ποντικών διατηρήθηκαν περίπου στους 39,0 βαθμούς μέχρι να αφαιρεθούν από τη συσκευή σάουνας. Η ομάδα TS εκτέθηκε στη σάουνα για τέσσερις εβδομάδες, δύο φορές την εβδομάδα.

3. Αναλυτική διαδικασία

Λήφθηκαν φυσιολογικά δεδομένα από όλα τα ποντίκια στο τέλος της περιόδου μελέτης τεσσάρων εβδομάδων. Συλλέχθηκαν δείγματα ούρων διάρκειας είκοσι τεσσάρων ωρών σε μεταβολικούς κλωβούς και προσδιορίστηκε η πρόσληψη υγρών. Συλλέχθηκαν δείγματα αίματος από την κάτω κοίλη φλέβα και τα επίπεδα κρεατινίνης πλάσματος και αζώτου ουρίας αίματος (BUN) μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας έναν αυτόματο αναλυτή Hitachi 7180 Biochemistry (Hitachi High-Technologies Corporation, Τόκιο, Ιαπωνία), με Aqua-auto Kainos CRE -Κιτ δοκιμής II ή κιτ δοκιμών UN-II (Kainos, Τόκιο, Ιαπωνία) με την ενζυματική μέθοδο.

4. Ιστολογικές μελέτες

Οι νεφροί σταθεροποιήθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικής παραφορμαλδεΰδης 4% και ενσωματώθηκαν σε παραφίνη. Τα δείγματα νεφρών τεμαχίστηκαν σε διαστήματα 2-μm και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (H&E) και οι κύστεις των σωληναρίων ποσοτικοποιήθηκαν σε 2 τομές/ποντικό (δεξιός νεφρός) χρησιμοποιώντας ImageJ (Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας, Bethesda, Maryland, ΗΠΑ). Οι περιοχές με ρήξεις ιστού και φυσαλίδες που εντοπίστηκαν σε μεγαλύτερη μεγέθυνση (× 40) εξαιρέθηκαν από την ανάλυση, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως15).

5. Western blotting

Ηλεκτροφόρηση γέλης δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και στύπωμα πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας τυπικές διαδικασίες. Δείγματα που περιείχαν 15 μg πρωτεΐνης υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE. Χρησιμοποιήθηκαν αντισώματα που αναπτύχθηκαν ενάντια στις ακόλουθες πρωτεΐνες: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, Santa Cruz Biotechnology), phosphoHsp27 (1:1,000, #2401S, Cell Signaling Technology), total-Akt (1:1,000, #9272, Cell Signaling Technology), phospho-Akt (1:1,000, #9275, Cell Signaling Technology), Erk1/2 (1:1,000, #9102, Cell Signaling Technology), phospho-Erk1/2 (1:1,000, #9101, Cell Signaling Technology), mTOR (1:1,{ {39}}, #2972, Cell Signaling Technology), phospho-mTOR (1:1,000, #2971, Cell Signaling Technology), caspase 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, UK) , σχισμένη κασπάση-3 (1:1,000, #9661, τεχνολογία σηματοδότησης κυψελών) και -ακτίνη (1:1,000, sc-130656, Σάντα Κρουζ Βιοτεχνολογία). Οι κηλίδες ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας το σύστημα ανίχνευσης κηλίδας western ECL Prime (GE Healthcare, UK) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δεδομένα έδειξαν σχετική ποσοτικοποίηση έναντι της -ακτίνης, η οποία χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος.

6. Στατιστική ανάλυση

Για στατιστική ανάλυση, τα δεδομένα μεταξύ των ομάδων TS και SW συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Mann-Whitney U. Οι ομάδες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας μια μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) που ακολουθήθηκε από τη δοκιμή Tukey για τον εντοπισμό διαφορών. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές στο p < 0.05. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD) ή μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου (SEM). Το GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε για στατιστική ανάλυση.