Αντιοξειδωτικό και αντι-γήρανση του δέρματος Δυνατότητα επιλεγμένων φυτών της Ταϊλάνδης: In vitro αξιολόγηση και πρόβλεψη στόχου σε πυριτία Μέρος 1

Αφηρημένη: Το δέρμα είναι το μεγαλύτερο όργανο που εκτελεί ποικίλες βασικές λειτουργίες του σώματος. Η βλάβη της δομής και των λειτουργιών του δέρματος κατά τη διαδικασία της γήρανσης μπορεί να επηρεάσει σοβαρά την υγεία και την ευημερία μας. Εκτεταμένα στοιχεία υποδηλώνουν ότι τα δραστικά είδη οξυγόνου παίζουν θεμελιώδη ρόλο στη γήρανση του δέρματος μέσω της ενεργοποίησης των σχετικών αποικοδομητικών ενζύμων. Εδώ, τα 16 είδη φαρμακευτικών φυτών της Ταϊλάνδης εξετάστηκαν για τις πιθανές ιδιότητες κατά της γήρανσης του δέρματος. Όλα τα εκχυλίσματα διερευνήθηκαν για περιεκτικότητα σε ολικά φαινολικά και φλαβονοειδή, αντιοξειδωτική, αντι-ελαστάση και αντιτυροσινάση, καθώς και για την ικανότητα δέσμευσης των ενώσεων με τα ένζυμα-στόχους με μοριακή σύνδεση. Μεταξύ όλων των φυτών που εξετάστηκαν, τα φύλλα των A. occidentale και G. zeylanicum εμφάνισαν ισχυρά αντιοξειδωτικά και αναστολή έναντι της ελαστάσης και της τυροσινάσης. Άλλα πιθανά φυτά περιλαμβάνουν το φύλλο S. alata και τον καρπό του A. catechu, με σχετικά υψηλή δράση κατά της ελαστάσης και της τυροσινάσης, αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα είναι επίσης συνεπή με μελέτες σύνδεσης ενώσεων που προέρχονται από αυτά τα φυτά. Οι ανασταλτικές δράσεις βρέθηκαν να συσχετίζονται πιο θετικά με τα φαινολικά παρά με τα φλαβονοειδή. Συνολικά, τα ευρήματά μας αποκαλύπτουν ότι ορισμένα φυτά της Ταϊλάνδης, μαζί με υποψήφιες ενώσεις ως φυσικές πηγές αντιοξειδωτικών και ισχυρών αναστολέων ελαστάσης και τυροσινάσης, θα μπορούσαν να αναπτυχθούν ως πολλά υποσχόμενοι και αποτελεσματικοί παράγοντες για τη θεραπεία της γήρανσης του δέρματος.

Ο γλυκοσίδης του cistanche μπορεί επίσης να αυξήσει τη δραστηριότητα του SOD στους ιστούς της καρδιάς και του ήπατος και να μειώσει σημαντικά την περιεκτικότητα σε λιποφουσκίνη και MDA σε κάθε ιστό, καθαρίζοντας αποτελεσματικά διάφορες δραστικές ρίζες οξυγόνου (OH-, H2O2, κ.λπ.) και προστατεύοντας από βλάβη του DNA που προκαλείται από ρίζες ΟΗ. Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες του Cistanche έχουν ισχυρή ικανότητα σάρωσης των ελεύθερων ριζών, υψηλότερη αναγωγική ικανότητα από τη βιταμίνη C, βελτιώνουν τη δραστηριότητα του SOD στο εναιώρημα σπέρματος, μειώνουν την περιεκτικότητα σε MDA και έχουν μια ορισμένη προστατευτική δράση στη λειτουργία της μεμβράνης του σπέρματος. Οι πολυσακχαρίτες Cistanche μπορούν να ενισχύσουν τη δραστηριότητα των SOD και GSH-Px σε ερυθροκύτταρα και πνευμονικούς ιστούς πειραματικά γηρασμένων ποντικών που προκαλούνται από D-γαλακτόζη, καθώς και να μειώσουν την περιεκτικότητα σε MDA και κολλαγόνο στους πνεύμονες και στο πλάσμα και να αυξήσουν την περιεκτικότητα σε ελαστίνη. ένα καλό αποτέλεσμα σάρωσης στο DPPH, παρατείνει το χρόνο της υποξίας σε γηρασμένα ποντίκια, βελτιώνει τη δραστηριότητα του SOD στον ορό και καθυστερεί τον φυσιολογικό εκφυλισμό του πνεύμονα σε πειραματικά γηρασμένα ποντίκια Με τον κυτταρικό μορφολογικό εκφυλισμό, τα πειράματα έχουν δείξει ότι το Cistanche έχει την καλή αντιοξειδωτική ικανότητα και έχει τη δυνατότητα να είναι φάρμακο για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών της γήρανσης του δέρματος. Ταυτόχρονα, η εχινακοσίδη στο Cistanche έχει σημαντική ικανότητα να καθαρίζει τις ελεύθερες ρίζες DPPH και έχει την ικανότητα να καθαρίζει δραστικά είδη οξυγόνου και να αποτρέπει την αποικοδόμηση του κολλαγόνου που προκαλείται από ελεύθερες ρίζες, και έχει επίσης μια καλή επίδραση επιδιόρθωσης στη βλάβη των ανιόντων από τις ελεύθερες ρίζες θυμίνης.

Κάντε κλικ στα προνόμια rou cong rong

【Για περισσότερες πληροφορίες:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Λέξεις-κλειδιά: φυτοϊατρική; αντι γήρανση; αντιοξειδωτικό; αντι-ελαστάση? αντι-τυροσινάση; προανθοκυανιδίνη; Areca catechu; Anacardium occidentale; Glochidion zeylanicum; Senna alata

1. Εισαγωγή

Το δέρμα είναι το μεγαλύτερο και πιο περίπλοκο όργανο στο ανθρώπινο σώμα. Το δέρμα χρησιμεύει ως φράγμα μεταξύ του σώματος και του εξωτερικού περιβάλλοντος και εξυπηρετεί ποικίλες λειτουργίες [1]. Έχει σημαντικό κοσμητικό ρόλο εκτός από την προστασία του οργανισμού από την απώλεια νερού και τη μικροβιακή μόλυνση [2]. Επιπλέον, λειτουργεί για να υποστηρίζει άλλα μέρη του σώματος, όπως το ανοσοποιητικό, το νευρικό και το ενδοκρινικό σύστημα [1]. Η όψη της νεότητας και της ομορφιάς μπορεί να έχει θετικό αντίκτυπο στην κοινωνική συμπεριφορά των ανθρώπων και στην ανθρώπινη ζωή [1,2]. Ως εκ τούτου, η βλάβη της δομής και των λειτουργιών του δέρματος που συμβαίνει καθώς γερνάμε μπορεί να έχει σοβαρό αντίκτυπο στην υγεία και την ευημερία μας [2,3]. Η λεπτότητα, η ξηρότητα, η έλλειψη ελαστικότητας, η τραχιά υφή, οι ρυτίδες και οι σκούρες χρωστικές είναι όλα κοινά χαρακτηριστικά του ηλικιωμένου δέρματος [4]. Πολλοί ερευνητές εργάζονται επί του παρόντος για τη δημιουργία πιθανών αντιγηραντικών φαρμάκων ή χημικών ουσιών, ιδιαίτερα εκείνων που προέρχονται από φυσικές πηγές για τη θεραπεία της γήρανσης του δέρματος.

Γενικά, το ανθρώπινο δέρμα γερνά με δύο τρόπους: εσωτερικά (ως αποτέλεσμα της χρονολογικής γήρανσης) και εξωγενώς (ως αποτέλεσμα περιβαλλοντικών μεταβλητών που επηρεάζονται από περιβαλλοντικούς παράγοντες) [5]. Εκτεταμένα στοιχεία υποδηλώνουν ότι το οξειδωτικό στρες, μέσω του σχηματισμού αντιδραστικών ειδών οξυγόνου (ROS), παίζει θεμελιώδη ρόλο τόσο στην εγγενή όσο και στην εξωτερική γήρανση του δέρματος [6]. Το ROS προκαλεί οξειδωτική βλάβη στα κύτταρα του δέρματος καταστρέφοντας βασικά μακρομόρια όπως τα νουκλεϊκά οξέα, οι ενζυμικές πρωτεΐνες και τα λιπίδια της μεμβράνης, με αποτέλεσμα κυτταρική δυσλειτουργία και κυτταρικό θάνατο [7]. Το οξειδωτικό στρες συμβάλλει επίσης στην αποικοδόμηση της εξωκυτταρικής μήτρας (ECM) καταστέλλοντας τη σύνθεση των συστατικών της ECM (π.χ. ελαστίνη) και ενεργοποιώντας τα ένζυμα αποικοδόμησης της ECM (π.χ. ελαστάση), με αποτέλεσμα την απώλεια της ελαστικότητας του δέρματος [2,8,9]. Επιπλέον, το ROS μπορεί να προκαλέσει ακανόνιστα ή σκούρα χρώματα στο δέρμα προκαλώντας την παραγωγή μιας μελανοκυτταροτρόπου ορμόνης (-MSH) στα κερατινοκύτταρα, ενεργοποιώντας έτσι την ενεργοποίηση του ενζύμου τυροσινάση και προάγοντας τη σύνθεση μελανίνης στα μελανοκύτταρα [10,11]. Ως εκ τούτου, η σάρωση των ROS και η αναστολή των δραστηριοτήτων ελαστάσης και τυροσινάσης θα μπορούσαν να είναι χρήσιμα στη θεραπεία ή ακόμη και στην πρόληψη της γήρανσης του δέρματος.

Τα φυσικά προϊόντα έχουν επί του παρόντος μεγάλο ενδιαφέρον ως πιθανά εναλλακτικά φάρμακα για τη θεραπεία αρκετών ασθενειών καθώς και για τη γήρανση και τις φθορές που σχετίζονται με την ηλικία [8,12,13]. Τα τροπικά φυτά θα μπορούσαν να είναι ενδιαφέροντα για τη διερεύνηση των δυνατοτήτων τους στις θεραπείες γήρανσης του δέρματος. Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, αρκετά φυτά των Άνδεων και των Ιμαλαΐων έχουν θεωρηθεί ως πηγές ενώσεων με πιθανή χρήση ως αντιγηραντικά συστατικά [14,15]. Η Ταϊλάνδη είναι ένα γνωστό μέρος για την καλλιέργεια μιας μεγάλης ποικιλίας τροπικών φυτών, πολλά από τα οποία δεν έχουν μελετηθεί εκτενώς. Ο στόχος αυτής της έρευνας ήταν να βρει πιθανές φυσικές πηγές για την ανάπτυξη νέων θεραπειών κατά της γήρανσης του δέρματος. Τα εκχυλίσματα 16 ειδών φαρμακευτικών φυτών της Ταϊλάνδης μελετήθηκαν in vitro για τις ιδιότητές τους που σχετίζονται με την αντιγήρανση του δέρματος, συμπεριλαμβανομένης της ολικής περιεκτικότητας σε φαινολικά και φλαβονοειδή, τον καθαρισμό των ελεύθερων ριζών, τις δράσεις κατά της ελαστάσης και της τυροσινάσης. Πραγματοποιήσαμε επίσης περαιτέρω ανάλυση συσχέτισης και μια προσέγγιση μοριακής σύνδεσης in silico για να αποκαλύψουμε τις πολλά υποσχόμενες φυτοχημικές ενώσεις στα τρία πιο αποτελεσματικά φυτά με ισχυρή αναστολή έναντι του ενζύμου ελαστάσης ή τυροσινάσης.

2. Αποτελέσματα

2.1. Αποδόσεις εξόρυξης

Ο Πίνακας 1 δείχνει την επιστημονική ονομασία, τα μέρη που χρησιμοποιήθηκαν, την πηγή, τη μέθοδο/διαλύτη εκχύλισης και την ποσοστιαία απόδοση των φυτών της Ταϊλάνδης που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Οι ποσοστιαίες αποδόσεις των εκχυλισμάτων κυμαίνονταν από 2,0 τοις εκατό έως 36,3 τοις εκατό (Πίνακας 1). Το C. calendar είχε την υψηλότερη απόδοση εκχύλισης (36,3 τοις εκατό ), ακολουθούμενο από το M. caldera (18,2 τοις εκατό ) και το A. occidentale (16,0 τοις εκατό ), ενώ το H. undatus είχε τη χαμηλότερη απόδοση (2.{{{{{ 13}} τοις εκατό ).

2.2. Ολική περιεκτικότητα σε φαινολικά φυτά της Ταϊλάνδης

Τα φυτικά εκχυλίσματα έδειξαν μια ποικιλία ολικής περιεκτικότητας σε φαινολικά που κυμαίνεται από 14,06 ± 1,55 έως 320,14 ± 7,95 mg ισοδυνάμου γαλλικού οξέος (GAE) ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους (Πίνακας 2). Το G. zeylanicum (320,14 ± 7,95 mg GAE ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους) είχε την υψηλότερη περιεκτικότητα σε φαινολικά σε όλα τα εκχυλίσματα, ακολουθούμενο από το A. catechu (295,79 ± 11,97 mg GAE ανά g εκχύλισμα ξηρού βάρους) και το M. caldera (210,99 ± 10,4 mg). GAE ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους), αντίστοιχα. Το χαμηλότερο επίπεδο βρέθηκε στο C. calendars σε 14,06 ± 1,55 mg GAE ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους.

2.3. Ολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή φυτών της Ταϊλάνδης

Η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή των φυτικών εκχυλισμάτων διέφερε μεταξύ των φυτικών ειδών, κυμαινόμενη από 2,61 ± 0,42 έως 84,48 ± 18,32 mg ισοδύναμου κερσετίνης (QE) ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους (Πίνακας 2). Από όλα τα εκχυλίσματα, η υψηλότερη περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή βρέθηκε στο M. caldera (84,48 ± 18,32 mg QE ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους), ακολουθούμενο από το G. zeylanicum (52,54 ± 7,25 mg QE ανά g εκχύλισμα ξηρού βάρους) και το P. dulce (28.01 ± 4,39 mg QE ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους), αντίστοιχα. Από την άλλη πλευρά, το χαμηλότερο επίπεδο βρέθηκε στο E. Americana σε 2,61 ± 0,42 mg QE ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους.

2.4. Δραστηριότητα καθαρισμού ριζών DPPH των φυτών της Ταϊλάνδης

Ο προσδιορισμός DPPH βασίζεται στην ικανότητα δωρεάς υδρογόνου της ένωσης να καθαρίζει τις σταθερές ρίζες DPPH [16]. Οι αντιοξειδωτικές ικανότητες των φυτικών εκχυλισμάτων εκφράστηκαν ως η εκατοστιαία δράση δέσμευσης ριζών DPPH, τα mg αντιοξειδωτικής ικανότητας ισοδύναμης βιταμίνης C (VCEAC) ανά g ξηρού βάρους εκχυλίσματος και η μισή-μέγιστη ανασταλτική συγκέντρωση (IC50) (Πίνακας 3). Σε 0,1 mg/mL εκχυλισμάτων, τα ποσοστά δραστικότητας σάρωσης DPPH κυμαίνονταν από 6,40 έως 93,18 τοις εκατό. Τέσσερα φυτικά εκχυλίσματα: G. zeylanicum (93,18 τοις εκατό), M. caldera (90,61 τοις εκατό), A. occidentale (89,01 τοις εκατό) και A. catechu (88,12 τοις εκατό), εμφάνισαν δραστηριότητα δέσμευσης DPPH μεγαλύτερη από 80 τοις εκατό. Αντίθετα, το C. ternatea έδειξε τη χαμηλότερη δραστηριότητα καθαρισμού στο 6,40 τοις εκατό. Αυτή η σειρά κατάταξης ήταν η ίδια όταν συγκρίθηκε με βάση τις σχετικές τιμές VCEAC. Ωστόσο, σύμφωνα με τις τιμές IC50, η αντιοξειδωτική ικανότητα των τεσσάρων κορυφαίων φυτικών εκχυλισμάτων άλλαξε με την ακόλουθη σειρά: G. zeylanicum > A. catechu > A. occidentale > M. caldera. Τα ληφθέντα αποτελέσματα της δοκιμασίας DPPH δείχνουν ότι το G. zeylanicum εμφάνισε το ισχυρότερο αντιοξειδωτικό δυναμικό με το υψηλότερο ποσοστό δράσης καθαρισμού και τη χαμηλότερη τιμή IC50.

2.5. ABTS Radical Scavenging Activity of Thai Plants

Ο προσδιορισμός ABTS βασίζεται στην ικανότητα της ένωσης να μεταφέρει άτομα υδρογόνου για την εξουδετέρωση ενός σταθερού κατιόντος ρίζας ABTS. Οι αντιοξειδωτικές ικανότητες των φυτικών εκχυλισμάτων εκφράστηκαν ως η εκατοστιαία δράση δέσμευσης ριζών ABTS, τα mg VCEAC ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους και η IC50 (Πίνακας 4). Στα 0,1 mg/mL εκχυλισμάτων, τα ποσοστά της δραστικότητας σάρωσης ABTS κυμαίνονταν από 13,93 τοις εκατό έως 99,37 τοις εκατό. Οκτώ φυτικά εκχυλίσματα: G. zeylanicum (99,37 τοις εκατό ), A. catechu (99,31 τοις εκατό ), A. occidentale (99,23 τοις εκατό ), M. caldera (98,88 τοις εκατό ), E. Americana (95,62 τοις εκατό ), Z. officinale (94,07 τοις εκατό ), P. dulce (83,99 τοις εκατό) και H. undatus (82,16 τοις εκατό) εμφάνισαν τη δραστηριότητα δέσμευσης ABTS μεγαλύτερη από 80 τοις εκατό. Αντίθετα, τα ημερολόγια C. έδειξαν τη χαμηλότερη δραστηριότητα καθαρισμού στο 13,93 τοις εκατό. Η αντιοξειδωτική ικανότητα των τεσσάρων κορυφαίων φυτικών εκχυλισμάτων, σύμφωνα με το VCEAC, και οι τιμές IC50 βρέθηκαν με παρόμοια σειρά κατάταξης ως εξής: G. zeylanicum > A. catechu > A. occidentale > M. caldera. Αξιοσημείωτα, τα αποτελέσματα της δοκιμασίας ABTS έδειξαν επίσης ότι το εκχύλισμα με την ισχυρότερη αντιοξειδωτική δράση ήταν το φύλλο G. zeylanicum, όπως αντιπροσωπεύεται από το υψηλότερο ποσοστό δραστικότητας καθαρισμού και τη χαμηλότερη τιμή IC50.

2.6. Δραστηριότητα κατά της ελαστάσης των φυτών της Ταϊλάνδης

Η ανασταλτική δράση ελαστάσης των φυτικών εκχυλισμάτων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία αναστολής ελαστάσης με Ν-ηλεκτρυλο-τριαλανυλο-παρανιτροανιλίδιο (SANA) ως υπόστρωμα. Η γαλλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG) (0.1 mg/mL), η οποία χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος, έδειξε ένα επίπεδο αναστολής 45,27 τοις εκατό. Οι ανασταλτικές δραστηριότητες ελαστάσης των εκχυλισμάτων παρουσιάζονται στον Πίνακα 5 (βλ. επίσης Πίνακα S1). Στα 0,5 mg/mL εκχυλισμάτων, τα ποσοστά αναστολής της ελαστάσης κυμαίνονταν από 1,33 τοις εκατό έως 88,31 τοις εκατό. Το A. catechu είχε την υψηλότερη ανασταλτική δράση ελαστάσης σε 88,31 τοις εκατό, ακολουθούμενο από το G. zeylanicum (87,43 τοις εκατό), το A. occidentale (84,78 τοις εκατό) και το S. alata (73,95 τοις εκατό), ενώ ο φλοιός S. asper είχε τη χαμηλότερη ανασταλτική ελαστάση επίδραση στο 1,33 τοις εκατό. Λόγω της υψηλής απορρόφησης του υποβάθρου, ορισμένα φυτικά εκχυλίσματα χωρίς ανιχνεύσιμη δραστηριότητα επαναπροσδιορίστηκαν σε 0,1 mg/mL. Βρέθηκε ότι το M. caldera, το P. nigrum, το Z. cassumunar και το S. asper φύλλο, εκτός από το Z. officinale, παρουσίασαν χαμηλές έως μέτριες ανασταλτικές δραστηριότητες που κυμαίνονταν από 3,46 τοις εκατό έως 35,74 τοις εκατό. Ωστόσο, τα αποτελέσματα των C. calendar, C. asiatica, C. ternatea, E. americana και H. undatus δεν παρατηρήθηκαν ακόμη και σε υψηλότερες συγκεντρώσεις.

2.7. Δραστηριότητα κατά της τυροσινάσης των φυτών της Ταϊλάνδης

Η ανασταλτική δράση της τυροσινάσης των φυτικών εκχυλισμάτων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ντοπαχρώμης με 3,4-διυδροξυ-L-φαινυλαλανίνη (L-DOPA) ως υπόστρωμα. Κοτζικό οξύ (ΚΑ) (0.02 mg/mL), ένας θετικός έλεγχος, έδειξε ένα επίπεδο αναστολής 68,35 τοις εκατό. Η ανασταλτική δράση της τυροσινάσης των εκχυλισμάτων παρουσιάζεται στον Πίνακα 6 (βλ. επίσης Πίνακα S2). Σε 1 mg/mL εκχυλισμάτων, τα ποσοστά αναστολής της τυροσινάσης κυμαίνονταν από 4,80 τοις εκατό έως 91,51 τοις εκατό. Το G. zeylanicum είχε το υψηλότερο ανασταλτικό αποτέλεσμα τυροσινάσης με 91,51 τοις εκατό, ακολουθούμενο από το A. occidentale (81,01 τοις εκατό), το M. caldera (76,12 τοις εκατό) και το A. catechu (75,38 τοις εκατό), ενώ το P. nigrum είχε τη χαμηλότερη ανασταλτική επίδραση της τυροσινάσης στο 4,80 τοις εκατό. Δύο φυτικά εκχυλίσματα χωρίς ανιχνεύσιμη δραστικότητα λόγω υψηλής απορρόφησης υποβάθρου επαναπροσδιορίστηκαν σε 0,1 mg/mL, και οι δραστικότητες βρέθηκαν σε 3,98 τοις εκατό (Ζ. cassumunar) και 21,28 τοις εκατό (Ζ. officinale). Ωστόσο, το P. dulce δεν έδειξε κανένα αποτέλεσμα, ακόμη και σε αυξημένη συγκέντρωση.

2.8. Ανάλυση συσχέτισης

Λαμβάνοντας υπόψη αρκετές προηγούμενες αναφορές πιθανής ανασταλτικής δράσης ελαστάσης και τυροσινάσης φυτικών εκχυλισμάτων [8,16,17], ήταν πιθανό ότι τα εκχυλίσματα διαθέτουν υψηλό αντιοξειδωτικό δυναμικό και τείνουν να έχουν ισχυρή ανασταλτική δράση ελαστάσης και τυροσινάσης. Έτσι, για να επαληθεύσουμε αυτές τις σχέσεις σε αυτή τη μελέτη, πραγματοποιήσαμε περαιτέρω ανάλυση συσχέτισης Pearson για να διερευνήσουμε τη σχέση μεταξύ των ανασταλτικών δράσεων και των δύο ενζύμων και του επιπέδου των αντιοξειδωτικών περιεχομένων καθώς και των αντιοξειδωτικών ικανοτήτων μεταξύ των εκχυλισμάτων που χρησιμοποιήθηκαν. Η ισχύς της συσχέτισης κατανέμεται με τον συντελεστή συσχέτισης (r-value) ως εξής: r=0.91{{10}} έως 1.000 υποδεικνύουν μια πολύ ισχυρή συσχέτιση, r=0.710 έως 0.900 υποδηλώνουν υψηλή συσχέτιση, r=0.410 έως 0,700 υποδηλώνουν μέτρια συσχέτιση, r=0.210 έως Το 0,400 υποδηλώνει μικρή συσχέτιση και το r=0.000 έως το 0,200 υποδηλώνει μια μικρή συσχέτιση [18]. Η αναστολή ελαστάσης είχε υψηλή θετική συσχέτιση με τη συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικό περιεχόμενο, τις δραστηριότητες καθαρισμού ριζών DPPH και ABTS, όπως φαίνεται στα Σχήματα 1a,c και d, αντίστοιχα. Παρομοίως, η αναστολή της τυροσινάσης έδειξε πολύ ισχυρή θετική συσχέτιση με το συνολικό περιεχόμενο φαινολών και τη δραστικότητα σάρωσης ριζών ABTS (Εικόνα 2α, δ), ενώ έδειξε υψηλή θετική συσχέτιση με τη δραστηριότητα σάρωσης ριζών DPPH (Εικόνα 2γ). Ωστόσο, η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή συσχετίστηκε μετρίως θετικά με την αναστολή της ελαστάσης και της τυροσινάσης (Εικόνες 1b και 2b). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι φαινολικές ενώσεις και η αντιοξειδωτική δράση μπορεί να έχουν σημαντική συμβολή στην αναστολή των ενζύμων ελαστάσης και τυροσινάσης.

2.9. Molecular Docking

Στη συνέχεια αξιολογήσαμε τις ικανότητες των φυτοχημικών ενώσεων στα τρία πιο αποτελεσματικά φυτά με ισχυρή αναστολή έναντι των ενζύμων ελαστάσης ή τυροσινάσης. Η μοριακή σύνδεση χρησιμοποιείται γενικά για την πρόβλεψη της συγγένειας δέσμευσης των ενώσεων με πρωτεϊνικούς υποδοχείς ή ένζυμα σε σύγκριση με γνωστούς αναστολείς. Σύμφωνα με τα αποτελέσματά μας από δοκιμασίες διαλογής in vitro, βρήκαμε ότι το A. occidentale ήταν ο πιο ισχυρός αναστολέας ελαστάσης, ακολουθούμενο από το G. zeylanicum και το S. alata, με σειρά κατάταξης των τιμών IC50. Έτσι, επιλέξαμε φυτοχημικές ενώσεις που προέρχονται από αυτά τα τρία φυτά για να αξιολογήσουμε την ικανότητά τους να αναστέλλουν την ελαστάση. Τα αποτελέσματα των αλληλεπιδράσεων μεταξύ ελαστάσης (3HGP) και ενώσεων παρουσιάζονται στον Πίνακα S4 ως ενέργεια δέσμευσης, σταθερά αναστολής, αριθμός δεσμών υδρογόνου, αλληλεπίδραση αμινοξέων και μήκος δεσμού. Η ενέργεια δέσμευσης μεταξύ 3HGP και ενώσεων δείχνει βαθμολογίες που κυμαίνονται από -2,26 έως -11,95 kcal/mol (Πίνακας S4). Το EGCG, ένας θετικός έλεγχος, έδειξε την ενέργεια δέσμευσης στα -9,69 kcal/mol. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα σύνδεσης, πέντε ενώσεις έδειξαν χαμηλότερη ενέργεια δέσμευσης από τον θετικό έλεγχο. Το τετραμερές της προανθοκυανιδίνης εμφάνισε τη χαμηλότερη ενέργεια δέσμευσης (−11,95 kcal/mol), η οποία έδειξε ότι έχει την καλύτερη συγγένεια σε σύγκριση με άλλες ενώσεις στην αναστολή της ελαστάσης, ακολουθούμενη από την αμεντοφλαβόνη, τη ρουτίνη, την αγαθισφλαβόνη και την καμπφερόλη {{13}O-gentiobioside , με τις δεσμευτικές ενέργειες στα −11,81, −10,12, −9,92 και −9,73, αντίστοιχα.

Επιπλέον, η σειρά κατάταξης των τιμών IC50 για εκχυλίσματα φυτών με αναστολή τυροσινάσης ήταν πολύ παρόμοια με την αναστολή ελαστάσης. Βρήκαμε ότι το G. zeylanicum είχε την υψηλότερη ανασταλτική δράση, ακολουθούμενο από το A. catechu και το A. occidentale. Ως εκ τούτου, οι ενώσεις που προέρχονται από αυτά τα τρία φυτά επιλέχθηκαν για να διερευνηθεί η ικανότητά τους να αναστέλλουν την τυροσινάση. Τα αποτελέσματα των αλληλεπιδράσεων μεταξύ τυροσινάσης (2Y9X) και ενώσεων παρουσιάζονται στον Πίνακα S5 ως ενέργεια δέσμευσης, σταθερά αναστολής, αριθμός δεσμών υδρογόνου, αλληλεπίδραση αμινοξέων και μήκος δεσμού. Η ενέργεια δέσμευσης μεταξύ 2Y9X και ενώσεων έδειξε βαθμολογίες που κυμαίνονται από -4,56 έως -10,42 kcal/mol (Πίνακας S5). Το KA, ένας πολύ γνωστός αναστολέας της τυροσινάσης, έδειξε την ενέργεια δέσμευσης στα -4,59 kcal/mol. Με βάση τα αποτελέσματα σύνδεσης, το ο-κουμαρικό οξύ (−10,42 kcal/mol) και το τετραμερές της προανθοκυανιδίνης (−10,42 kcal/mol) παρουσίασαν τη χαμηλότερη ενέργεια δέσμευσης έναντι της ελαστάσης σε σύγκριση με άλλες ενώσεις, ακολουθούμενα από το καφεϊκό οξύ, το φερουλικό οξύ και το φερουλικό οξύ και areca ταννίνη A1 με τις ενέργειες δέσμευσης στα −10,10, −10.00 και −9,94, αντίστοιχα. Τα σχήματα 3 και 4 αντιπροσωπεύουν τα δισδιάστατα διαγράμματα των αλληλεπιδράσεων συνδέτη-πρωτεΐνης για την ελαστάση και την τυροσινάση, για τον θετικό έλεγχο, και πέντε ενώσεις με τη χαμηλότερη ενέργεια δέσμευσης.

【Για περισσότερες πληροφορίες:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】