Αντιαλλεργικές και αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις της Νεφερίνης στα κύτταρα RBL-2H3

Παρακαλώ επικοινώνησεoscar.xiao@wecistanche.comΓια περισσότερες πληροφορίες

Αφηρημένη:Τα μαστοκύτταρα παίζουν πολύ σημαντικό ρόλο στις δερματικές αλλεργίες και φλεγμονές, συμπεριλαμβανομένης της ατοπικής δερματίτιδας και της ψωρίασης. Στο παρελθόν, διαπιστώθηκε ότι η αναφορά έχει αντιφλεγμονώδη και αντιγηραντική δράση στο δέρμα, αλλά η επίδρασή της στα μαστοκύτταρα δεν έχει ακόμη μελετηθεί λεπτομερώς. Σε αυτήν τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μαστοκύτταρα (RBL-2H3 κύτταρα) και μοντέλα ποντικών για να μελετήσουμε τις αντιαλλεργικές και φλεγμονώδεις επιδράσεις αναφοράς. Πρώτον, διαπιστώσαμε ότι η αναφορά αναστέλλει την αποκοκκίωση των ιστιοκυττάρων και την έκφραση των κυτοκινών. Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι όταν τα μαστοκύτταρα διεγέρθηκαν από A23187/οξική 12-μυριστική-13-φορβόλη (PMA), η αύξηση του ενδοκυτταρικού ασβεστίου αναστέλλεται με αναφορά. Η φωσφορυλίωση της οδού MAPK/NF-KB μειώνεται επίσης με την προεπεξεργασία αναφοράς. Τα αποτελέσματα των in vivo μελετών δείχνουν ότι η αναφορά μπορεί να βελτιώσει την εμφάνιση της δερματίτιδας και της διήθησης των μαστοκυττάρων που προκαλείται από δινιτροχλωροβενζόλιο (DNCB). Επιπλέον, οι εκφράσεις των πρωτεϊνών φραγμού στο δέρμα αποκαθίστανται επίσης.κιστανάκιΤέλος, διαπιστώθηκε ότι η αναφορά μπορεί να μειώσει τη συμπεριφορά γρατσουνίσματος που προκαλείται από την ένωση 48/80. Συνολικά, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η αναφορά είναι ένα πολύ καλό αντιαλλεργικό και αντιφλεγμονώδες φυσικό προϊόν. Η επίδρασή του στα μαστοκύτταρα συμβάλλει στον φαρμακολογικό μηχανισμό του.

Λέξεις-κλειδιά:αναφορά; φυσικό προϊόν? Μαστοκύτταρο? δερματίτιδα? φαγούρα

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

1. Εισαγωγή

Πολλές μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι οι αλλεργικές ασθένειες είναι αποτέλεσμα όχι μόνο της έμφυτης ενεργοποίησης του ανοσοποιητικού αλλά και της προσαρμοστικής ενεργοποίησης. Μεταξύ αυτών, τα μαστοκύτταρα παίζουν πολύ σημαντικό ρόλο σε μια ποικιλία αλλεργικών ασθενειών όπως η αλλεργική ρινίτιδα, το άσθμα και η αλλεργική δερματίτιδα. Τα μαστοκύτταρα εκφράζουν υποδοχείς IgE (FceRI) στις κυτταρικές τους μεμβράνες και οι υποδοχείς FceRI έχουν υψηλή συγγένεια με τα αντισώματα IgE [1,2]. Όταν η ειδική για το αντιγόνο IgE συνδέεται με το FceRI, εμφανίζεται μια αλληλεπίδραση και εμφανίζεται μια αλλεργική αντίδραση. Η συσσώρευση του FceRI μπορεί να ενεργοποιήσει κινάσες τυροσίνης υποδοχέα, να ξεκινήσει αντιδράσεις κατάντη και να προωθήσει τη φωσφορυλίωση διαφόρων βασικών πρωτεϊνών (όπως η ενεργοποιημένη από μιτογόνο πρωτεϊνική κινάση, MAPKs), οδηγώντας τελικά στην εισροή ιόντων ασβεστίου (Ca2 plus ), που είναι βασικό συμβάν στην αποκοκκίωση των μαστοκυττάρων [3].cistanche ΑυστραλίαΤα ενεργοποιημένα μαστοκύτταρα αποκοκκώνονται και απελευθερώνουν χημικούς μεσολαβητές. Αυτοί οι χημικοί μεσολαβητές που χρησιμοποιούνται σε αλλεργικές αντιδράσεις μπορεί να προκαλέσουν φλεγμονή [4], επομένως η θεραπεία των αλλεργικών συμπτωμάτων περιλαμβάνει αναστολείς αποκοκκίωσης μαστοκυττάρων. Ως εκ τούτου, η αναστολή της αποκοκκίωσης των μαστοκυττάρων με τη μεσολάβηση IgE χρησιμοποιείται συχνά για τον εντοπισμό νέων ενώσεων για την πρόληψη και τη θεραπεία αλλεργικών ασθενειών. Έχει διαπιστωθεί ότι τα αντισώματα και τα αντιγόνα αντι-δινιτροφαινυλίου (DNP)IgE μπορούν να προκαλέσουν αντιδράσεις παθητικής υπερευαισθησίας του δέρματος (PCA) ως τυπικό in vivo μοντέλο άμεσης υπερευαισθησίας και ως ερευνητικό φάρμακο για την πιθανότητα αντιγονικών αλλεργιών [5,6 ]. Επιπλέον, η αποκοκκίωση των μαστοκυττάρων μπορεί επίσης να προκληθεί από μη ανοσοδιεγερτικά, όπως οι ενώσεις 48/80 και A23187. Το ιονοφόρο ασβεστίου A23187 είναι γνωστό από καιρό ότι διεγείρει την έκκριση μαστοκυττάρων με την απελευθέρωση προσχηματισμένων μεσολαβητών, όπως η ισταμίνη από τους κόκκους τους, που χρησιμεύει ως παράδειγμα [4]Η ένωση 48/80 είναι ένα μικτό πολυμερές π-μεθοξυ-Ν-μεθυλφαιναιθυλαμίνης διασταυρώνεται με φορμαλδεΰδη, η οποία χρησιμοποιείται ευρέως για ανεξάρτητη διέγερση ιστιοκυττάρων [7,8] Ως εκ τούτου, κατάλληλες ποσότητες της ένωσης 48/80 και A23187 έχουν χρησιμοποιηθεί συνήθως ως αντιδραστήρια για τη μελέτη του μηχανισμού των αλλεργικών αντιδράσεων. Σύμφωνα με στατιστικές αξιολογήσεις, περίπου 15-20 τοις εκατό του πληθυσμού πάσχει από ατοπική δερματίτιδα. Είτε πρόκειται για παιδιά είτε για ενήλικες που πάσχουν από αυτή τη νόσο, χωρίς την κατάλληλη θεραπεία, η ατοπική δερματίτιδα μπορεί να προκαλέσει ψυχολογική δυσφορία στους ασθενείς και να επιβαρύνει το οικογενειακό και κοινωνικό κόστος υγείας τους [9]. Δυστυχώς, δεν υπάρχει κατάλληλη μέθοδος θεραπείας για τη θεραπεία της αλλεργικής δερματίτιδας. Οι τρέχουσες θεραπευτικές επιλογές εξακολουθούν να αποφεύγουν τα αλλεργιογόνα που προκαλούν ασθένειες και η συνεχής χρήση στεροειδών είναι το χρυσό πρότυπο θεραπείας. Τα αναπόφευκτα αλλεργιογόνα και οι παρενέργειες των φαρμάκων έχουν ωθήσει την επείγουσα ανάπτυξη νέων θεραπευτικών φαρμάκων. Οι φυσικές ενώσεις που απομονώνονται από φαρμακευτικά βότανα και φυτά αποτελούν πιθανές πηγές θεραπευτικών παραγόντων για την πρόληψη και τη θεραπεία φλεγμονωδών ασθενειών και τη βελτίωση της ποιότητας ζωής των ασθενών με αλλεργικές διαταραχές.

Το Cistanche μπορεί να αντιγηρανθεί

Η αναφορά προέρχεται από τον πυρήνα του λωτού (το έμβρυο του σπόρου) του φυτού Nelumbo nucifera και είναι ένα κύριο αλκαλοειδές διβενζυλισοκινολίνης. Υπάρχουν ενδείξεις ότι η αναφορά έχει ένα ευρύ φάσμα φαρμακολογικών ιδιοτήτων, όπως αντικαρκινικές, αντιοξειδωτικές, αντιφλεγμονώδεις και νευροπροστατευτικές επιδράσεις, σε πολλές ασθένειες [10-15].οφέλη από το cistancheΟι Khan et al. διαπιστώθηκε ότι η αναφορά παράγει αποτελέσματα κατά της φωτογήρανσης αναστέλλοντας την αύξηση που προκαλείται από την υπεριώδη ακτινοβολία στα επίπεδα ROS και μηλονοδιαλδεΰδης (MDA) σε ανθρώπινα κερατινοκύτταρα και ινοβλάστες[16,17]Πρόσφατα, διαπιστώσαμε ότι η αναφορά έχει τη δυνατότητα ως εναλλακτικό φάρμακο για τη θεραπεία της ατοπικής δερματίτιδα ή άλλες φλεγμονώδεις ασθένειες που σχετίζονται με το δέρμα[18]. Ωστόσο, παραμένει αβέβαιο εάν η αναφορά παίζει ένα αντιδερματικό αλλεργικό αποτέλεσμα στα μαστοκύτταρα. Σε αυτή τη μελέτη, στοχεύσαμε να διερευνήσουμε τα αποτελέσματα της αναφοράς σε αλλεργικές ασθένειες που προκαλούνται από μαστοκύτταρα, χρησιμοποιώντας ανθρώπινες σειρές μαστοκυττάρων (RBL-2H3 κύτταρα) και μια ένωση 48/{80-και αναφυλαξία που προκαλείται από DNCB μοντέλο ποντικών.

La referencia proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. Υπάρχουν αποδεικτικά στοιχεία για την αναφορά σε μια ενίσχυση γκάμα των προπιεδάδων farmacológicas, como efectos αντικαρκινικά, αντιοξειδωτικά, αντιφλεγμονώδη και νευροπροστατευτικά, en muchas enfermedades [10-15]. Beneficios de la cistanche Khan et al. encontró que la referencia produce efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16,17] Recientemente, descubrimos δυνητικός συνεννόηση με εναλλαγή de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la referencia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. En este estudio, nuestro objetivo fue investigar los efectos de referenca en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando líneas de mastocitos humanos (células RBL-2H3) y un modelo de ratones induce por mastocitos .

2. Αποτελέσματα

2.1. Δοκιμή κυτταροτοξικότητας νεφερίνης σε μαστοκύτταρα αρουραίου (RBL-2H3)

Δεδομένου ότι η βασεόφιλη λευχαιμία αρουραίου (RBL)-2Η3 κύτταρα, ένα ανάλογο ιστιοκυττάρων που απελευθερώνει ισταμίνη, είναι κατάλληλα κύτταρα για την εξέταση των επιπτώσεων της φλεγμονής που προκαλείται από μαστοκύτταρα [19], χρησιμοποιήσαμε αυτά τα κύτταρα για να διερευνήσουμε την αντιαλλεργική αποτελέσματα αναφοράς. Αρχικά, δοκιμάσαμε εάν η αναφορά μπορεί να προκαλέσει κυτταροτοξικότητα στα μαστοκύτταρα. Όταν τα κύτταρα υποβάλλονται σε προεπεξεργασία με αναφορά από 1 έως 30 μΜ για 24 ώρες, η κυτταρική βιωσιμότητα των κυττάρων δεν θα επηρεαστεί από την επεξεργασία αναφοράς (Εικόνα 1).

2.2. Η Νεφερίνη Μειώνει την Αποκοκκίωση του RBL-2H3 που διεγείρεται από διαφορετικούς ενεργοποιητές

Τα κύτταρα RBL-2Η3 χρησιμοποιούνται συνήθως για in vitro μελέτες αποκοκκίωσης [20-22]Τόνωση των κυττάρων RBL-2Η3 με αντιδινιτροφαινόλη (DNP) IgE και συζευγμένη με DNP λευκωματίνη ορού ανθρώπου (HSA) προκαλεί αποκοκκίωση. Επιπλέον, τα μαστοκύτταρα είναι γνωστό ότι αποκοκκώνονται σε απόκριση σε συνθετικές ενώσεις, όπως η ένωση 48/80 και το ιονοφόρο ασβέστιο Α23187, και αυτές οι ενώσεις έχουν χρησιμοποιηθεί ως βολικά αντιδραστήρια για άμεσες μελέτες των μηχανισμών in vitro αλλεργικών αποκρίσεων [23, 24]. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το κυτταρόπλασμα του RBL-2H3 που δεν ενεργοποιήθηκε από τον ενεργοποιητή περιείχε περιορισμένους εκκριτικούς κόκκους.cistanche χοληστερόληΗ θεραπεία αναφοράς (10μM) από μόνη της δεν επηρέασε τη δραστηριότητα του RBL-2H3 (Εικόνα 2Α, Β). Ωστόσο, η προσθήκη διαφορετικών ενεργοποιητών, συμπεριλαμβανομένης της ένωσης 48/80, A23187, και αντι-DNP/IgE συν DNP/HSA, γέμισε σαφώς το κυτταρόπλασμα με εκκριτικούς κόκκους. Κάτω από το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, μπορεί να φανεί ότι υπάρχει μεγάλος αριθμός εκκριτικών κόκκων στο κυτταρόπλασμα, και ορισμένοι εκκριτικοί κόκκοι συγχωνεύονται ακόμη και με την κυτταρική μεμβράνη, οδηγώντας σε αποκοκκίωση (Εικόνα 2C-E). Μετά από προκατεργασία με αναφορά 10 μΜ, οι εκκριτικοί κόκκοι στο κυτταρόπλασμα μειώθηκαν σημαντικά (Εικόνα 2F-H). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η αναφορά μπορεί να αναστείλει αποτελεσματικά την ενεργοποίηση και την αποκοκκίωση του RBL-2H3 που διεγείρεται από τον ενεργοποιητή.

2.3. Η Νεφερίνη Αναστέλλει το PMA/A23187-Επαγόμενη ενδοκυτταρική αύξηση ασβεστίου στο RBL-2H3

Τα ιόντα ασβεστίου παίζουν το ρόλο του δευτερεύοντος αγγελιοφόρου στη διαδικασία της κυτταρικής ενεργοποίησης. Το A23187 είναι ο πιο αποτελεσματικός τρόπος για την αύξηση της διείσδυσης των ιόντων ασβεστίου μέσω των κυτταρικών μεμβρανών και την τόνωση της ενεργοποίησης των μαστοκυττάρων. Η οξική μυριστική φορβόλη (PMA) μπορεί να ενεργοποιήσει την πρωτεϊνική κινάση Cand και να αυξήσει τα ενδοκυτταρικά ιόντα ασβεστίου για να ενισχύσει την επίδραση του A23187. Η αύξηση των ιόντων ασβεστίου στα μαστοκύτταρα έχει επίσης θεωρηθεί σημαντικός παράγοντας για την επαγωγή της ενεργοποίησης των μαστοκυττάρων, έτσι ώστε να επηρεάζει την αποκοκκίωση των μαστοκυττάρων και να απελευθερώνει περισσότερες φλεγμονώδεις κυτοκίνες και χημειοκίνες.παρενέργειες cistanche deserticola,Επομένως, αυτή η μελέτη προσπάθησε να διερευνήσει εάν η αναφορά μπορεί να αναστείλει τη συγκέντρωση ιόντων ασβεστίου στο RBL-2H3 όταν αναστέλλει τη φλεγμονή. Η πειραματική ομάδα χωρίστηκε σε με ή χωρίς προκατεργασία αναφοράς για 20 λεπτά και προστέθηκαν 1 mM CaClz και PMA/A23187 για να διεγείρουν και να ενεργοποιήσουν το RBL-2H3. Τα πειραματικά αποτελέσματα έδειξαν ότι η θεραπεία του RBL-2H3 με διαφορετικές συγκεντρώσεις αναφοράς από μόνη της δεν επηρέασε την αύξηση της συγκέντρωσης των ενδοκυτταρικών ιόντων ασβεστίου. Στην ομάδα εισροής Ca2t που προκαλείται από PMA/A23187-, η ενδοκυτταρική συγκέντρωση ιόντων ασβεστίου αυξήθηκε σημαντικά. Τα κύτταρα RBL{11}}Η3 υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία για 20 λεπτά με αναφορά (3 μΜ και 10 μΜ) και η συγκέντρωση ιόντων ασβεστίου μειώθηκε σημαντικά (Εικόνα 3).

2.4. Η Νεφερίνη μείωσε την έκφραση του mRNA των προφλεγμονωδών κυτοκινών σε PMA/A23187 που διεγείρονται από RBL-2H3

Η ανοσολογική απόκριση του δέρματος θα αυξήσει τον αριθμό των μαστοκυττάρων στο σώμα και τα ιστιοκύτταρα θα παράγουν στη συνέχεια προφλεγμονώδεις κυτοκίνες και θα επιταχύνουν την πρόοδο της νόσου. Οι προφλεγμονώδεις κυτοκίνες, ιδιαίτερα οι TNF-a, IL-6, IL-1 και IL-8, όχι μόνο προκαλούν φλεγμονή αλλά προκαλούν επίσης διήθηση λευκοκυττάρων, σχηματισμό κοκκιωμάτων και ίνωση ιστού. Το PMA/A23187 δρα στα μαστοκύτταρα και τα διεγείρει να παράγουν IL-16, IL-6, TSLP και TNF-, προκαλώντας φλεγμονή που σχετίζεται με την αλλεργία. Επομένως, κάναμε προεπεξεργασία RBL-2H3 με αναφορά για 20 λεπτά και διεγέρσαμε με PMA/A23187 για 6 ώρες για να εντοπίσουμε εάν η αναφορά μπορεί να ρυθμίσει προς τα κάτω την έκφραση mRNA της IL-1 , IL{{ 19}}, TSLP και TNF-a. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι στην ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία μόνο με αναφορά, η έκφραση του mRNA της κυτοκίνης δεν επηρεάστηκε και η έκφραση του mRNA στην ομάδα που προκάλεσε φλεγμονή από το PMA/A23187 αυξήθηκε σημαντικά. Στην ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με αναφορά, παρατηρήθηκε ότι τα επίπεδα έκφρασης mRNA των IL-1, IL-6, TSLP και TNF-a καταστέλλονταν σημαντικά (Εικόνα 4).

2.5. Η Νεφερίνη Αναστέλλει το PMA/A23187-Επαγόμενη φωσφορυλίωση της οδού MAPK στο RBL-2H3

Προηγούμενες μελέτες έχουν επισημάνει ότι τα μαστοκύτταρα πρέπει να απελευθερώνουν ενδοκυτταρικά ιόντα ασβεστίου για να ενεργοποιήσουν τη MAPK. Επιπλέον, η οδός σηματοδότησης MAPK ρυθμίζει την έκφραση των μονοκυττάρων, των Τ λεμφοκυττάρων, των Β λεμφοκυττάρων, των κυτοκινών και των χημειοκινών και επάγει την αυτοανοσία. Αυτός ο μηχανισμός είναι παρόμοιος με την οδό ενεργοποίησης του PMA/A23187. Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε εάν η αναφορά μπορεί να συμμετάσχει στη ρύθμιση των μονοπατιών MAPK. Αντιμετωπίσαμε διαφορετικές συγκεντρώσεις αναφοράς (1,3 και 10 uM) στο RBL-2H3 για 20 λεπτά και στη συνέχεια διεγέρσαμε με PMA/A23187 για 30 λεπτά για να προκαλέσουμε φλεγμονή. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι όταν το RBL-2H3 υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις αναφοράς μόνο, η ενεργοποίηση των πρωτεϊνών p38, JNK και ERK δεν επηρεάστηκε. Στην ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία μόνο με PMA/A23187, βρήκαμε ότι οι πρωτεΐνες p38, JNK και ERK ενεργοποιήθηκαν και έχουν σημαντική φωσφορυλίωση. Στην ομάδα που υποβλήθηκε σε προεπεξεργασία με αναφορά, παρατηρήθηκε ότι για υψηλότερες συγκεντρώσεις αναφοράς, η φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών ρ38, JNK και ERK μειώθηκε σημαντικά (Εικόνα 5Α-Γ).

2.6. Η Νεφερίνη Αναστέλλει το PMA/A23187-Επαγόμενη φωσφορυλίωση της οδού NF-B στο RBL-2H3

Η έκφραση των προφλεγμονωδών κυτοκινών εξαρτάται από την ενεργοποίηση του μεταγραφικού παράγοντα NF-kB στα μαστοκύτταρα. Όταν η πρωτεΐνη ΙΚΒ φωσφορυλιώθηκε και αποικοδομήθηκε, ο NF-kB απελευθερώθηκε και μετανάστευσε στον πυρήνα, δεσμεύοντας με τα αντίστοιχα στοιχεία που αποκρίνονται στο DNA και προάγοντας τη μεταγραφή των προφλεγμονωδών μεσολαβητών. Παρήχθησαν πολλές κυτοκίνες και χημειοκίνες, οι οποίες ρυθμίζουν την ανοσοαπόκριση, τη διαφοροποίηση και τη φλεγμονή. Επομένως, διερευνήσαμε εάν η προεπεξεργασία με αναφορά επηρεάζει τη φωσφορυλίωση της πρωτεΐνης που προκαλείται από το PMA/A23187. Αντιμετωπίσαμε διαφορετικές συγκεντρώσεις αναφοράς (1,3 και 10 μΜ) στο RBL-2H3. Μετά από 20 λεπτά, το PMA/A23187 διέγειρε το RBL-2H3 για 1 ώρα ή 2 ώρες για να προκαλέσει φλεγμονή. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η επεξεργασία του RBL-2H3 μόνο με διαφορετικές συγκεντρώσεις αναφοράς δεν επηρέασε τη φωσφορυλίωση του IKBa και του NF-KB. Όταν χρησιμοποιήθηκε το PMA/A23187 για διέγερση, παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση στη φωσφορυλίωση του IkBo και του NF-KB. Στην ομάδα που υποβλήθηκε σε προκατεργασία με αναφορά, βρέθηκε ότι η φωσφορυλίωση του IkBa (Εικόνα 6Α) και του NF-KB (Εικόνα 6Β) μειώθηκε σημαντικά.

2.7. Επίδραση της Νεφερίνης στην ατοπική δερματίτιδα που προκαλείται από 2,4-δινιτροχλωροβενζόλιο(DNCB)

Ένα ζωικό μοντέλο για την έρευνα ασθενειών, το DNCB είναι ένα αντιπροσωπευτικό ερεθιστικό που προκαλεί ατοπική δερματίτιδα[25]. Το πείραμά μας χρησιμοποιεί 1 τοις εκατό δινιτροχλωροβενζόλιο (DNCB) διαλυμένο σε 75 τοις εκατό αλκοόλη για να προκαλέσει το πρώτο στάδιο της απόκρισης ευαισθητοποίησης. Αναφορά (3mg/kg και 10 mg/kg) και δεξαμεθαζόνη (Dexa,{{10}}.2 mg/kg) διαλυμένα σε DMSO χορηγήθηκαν ενδοπεριτοναϊκά την πέμπτη ημέρα για δέκα ημέρες . Την 8η, 1η και 14η ημέρα, εφαρμόστηκε 0,5 τοις εκατό DNCB ως το δεύτερο στάδιο πρόκλησης φλεγμονής. Τα ποντίκια χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες - ομάδα ελέγχου, ομάδα DNCB, ομάδα υπό θεραπεία με αναφορά και ομάδα υπό θεραπεία με δεξαμεθαζόνη - και στη συνέχεια, μετά τη σύγκριση μεταξύ των ομάδων, οι διαφορές σημειώθηκαν. Παρατηρήσαμε ότι το DNCB προκάλεσε μια αντίδραση ατοπικής φλεγμονής του δέρματος στο δέρμα ποντικών. Μετά την εφαρμογή του DNCB, διαπιστώθηκε ότι το δέρμα των ποντικών αύξησε την ερυθρότητα και την απολέπιση. Όλα αυτά οφείλονται σε μη φυσιολογικό πολλαπλασιασμό κερατινοκυττάρων, διήθηση και συσσώρευση ανοσοκυττάρων. Η ομάδα που έλαβε αγωγή με αναφορά 3 mg/kg και δεξαμεθαζόνη 0,2 mg/kg για τέσσερις ημέρες είχε ανακουφίσει την ερυθρότητα. Συνεχίσαμε να παρατηρούμε την κατάσταση του ραχιαίου δέρματος των ποντικών μέχρι την ημέρα 15. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, η ομάδα DNCB είχε σοβαρά ερυθρές και πρησμένες δερματικές παθήσεις και υπήρχαν τρίχωμα και πληγές που φαινόταν να προκαλούνται από κνησμό και πόνο . Μπορούμε να βρούμε μια τάση φθίνουσας κλίμακας μετά από θεραπείες αναφοράς και δεξαμεθαζόνη (Εικόνα 7Α). Η χρώση μπλε τολουιδίνης χρησιμοποιήθηκε για την παρατήρηση του αριθμού των συσσωματωμένων ιστιοκυττάρων. Τα μαστοκύτταρα εμφανίστηκαν μωβ όταν παρατηρήθηκαν στο μικροσκόπιο. Μπορεί να αποδειχθεί ποσοτικά ότι πολλά μαστοκύτταρα διείσδυσαν και συσσωρεύτηκαν στο χόριο στην πειραματική ομάδα DNCB, σημαντικά αυξημένα σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Στην ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με αναφορά και δεξαμεθαζόνη, η διήθηση, η συσσωμάτωση και ο αριθμός των μαστοκυττάρων μειώθηκαν (Εικόνα 7Β, Γ).

2.8. Neferine Βελτιώνει την έκφραση mRNA των μορίων που σχετίζονται με το φραγμό μετά τη θεραπεία του DNCB

Η σχετιζόμενη με το δέρμα φλεγμονή που προκαλείται από AD μπορεί να προκαλέσει ανώμαλη λειτουργία του δερματικού φραγμού. Εάν ο δερματικός φραγμός είναι ελαττωματικός, είναι ευκολότερο για τα αντιγόνα ή τα ερεθιστικά να διεισδύσουν στην επιδερμίδα και να εισέλθουν στο σώμα για να προκαλέσουν αντιδράσεις που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό. Ταυτόχρονα, η παραγωγή πρωτεϊνών διαφοροποίησης, συμπεριλαμβανομένης της φιλαγκρίνης, της λορικρίνης και της ινβολουκρίνης, θα κατασταλεί. Επομένως, η αποκατάσταση του κατεστραμμένου δερματικού φραγμού είναι πολύ σημαντική για την πρόληψη και τη θεραπεία της AD [26]. Στη μελέτη μας, χρησιμοποιήσαμε αναφορές για να παρέμβουμε στο ζωικό μοντέλο της ατοπικής δερματίτιδας που προκαλείται από DNCB. Μετά τη θυσία ποντικών, ο ραχιαίος ιστός του δέρματος γειώθηκε για ανάλυση RI-qPCR για να αξιολογηθεί εάν η αναφορά μπορεί να βελτιώσει τη μείωση της έκφρασης του mRNA στη φιλαγκρίνη, τη λορικρίνη και την ινβολουκρίνη μετά τη θεραπεία με DNCB. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η πειραματική ομάδα DNCB είχε σημαντικά μειωμένη έκφραση mRNA της φιλαγκρίνης, της λορικρίνης και της ινβολουκρίνης σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Η έκφραση mRNA της φιλαγκρίνης, της λορικρίνης και της ινβολουκρίνης αυξήθηκε σημαντικά στην ομάδα που έλαβε θεραπεία με αναφορά και δεξαμεθαζόνη σε σύγκριση με την ομάδα DNCB (Εικόνα 8).

Περαιτέρω αποδείξαμε ότι η αναφορά έχει αντιαλλεργικό αποτέλεσμα γρατσουνίσματος. Χρησιμοποιήσαμε έναν παράγοντα αποκοκκίωσης μαστοκυττάρων, την ένωση 48/80, για να προκαλέσουμε συμπεριφορά απόξεσης σε ποντικούς BALB/c. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 9, βρήκαμε ότι η επεξεργασία αναφοράς ανέστειλε τη συμπεριφορά γρατσουνίσματος που προκαλείται από την ένωση 48/80 (50 ug/θέση). Η επαναλαμβανόμενη χορήγηση χαμηλότερων και υψηλότερων δόσεων αναφοράς (3 και 10 mg/kg) για 5 διαδοχικές ημέρες μείωσε σημαντικά τον αριθμό των γρατζουνιών που προκαλούνται από την ένωση 48/80.