Αντιγηραντική επίδραση του ολιγοσακχαρίτη Cistanche στην υποξεία γήρανση που προκαλείται από D-γαλακτόζη σε ποντίκια

Αφηρημένη:Cistancheολιγοσακχαρίτης(COS), ένα φυσικόπολυσακχαρίτηςμε καλόαντιοξειδωτικόκαι αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες, είναι το αποπολυμερισμένο προϊόν του κιστάνιου που διαθέτει διάφορα βιολογικάδραστηριότητες. Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει τηνπιθανή αντιγηραντική επίδραση του COSεπίτο γερασμένο μοντέλο ποντικιού που προκαλείται απόD-γαλακτόζη (D-gal) και εξερευνήστε τον υποκείμενο μηχανισμό.Στο πείραμα, 48 αρσενικά ποντίκια Kunming (ποντίκια KM) χωρίστηκαν τυχαία στα κανονικάομάδα, ομάδα μοντέλου, θετική ομάδα και ομάδες πολυσακχαριτών χαμηλής μέσης-υψηλής δόσης (300, 600,1200 mg/kg/ημέρα).

Κάντε κλικ εδώ για να λάβετε εκχύλισμα αντιγηραντικού Cistanche

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το COS, με ενδογαστρικό καθετήρα μετά από υποδόρια ένεσητουD-gal (250 mg/kg/ημέρα) στον λαιμό ποντικών διαδοχικά για οκτώ εβδομάδες, σταδιακά ανέκτησε τοσωματικό βάρος, η δραστηριότητα της καθημερινής ζωής και οι δείκτες οργάνων των ποντικών, καθώς και αποτελεσματικά βελτιώθηκανη ιστολογική επιδείνωση τουσυκώτι και νεφρόσε ποντίκια που προκαλούνται απόD-γαλ. Να είσαι συγκεκριμένος,Το COS προφανώς βελτίωσε τις δραστηριότητες των αντιοξειδωτικών ενζύμωνστοσυκώτι και νεφρό ποντικών KM, συμπεριλαμβανομένης της καταλάσης (CAT), της υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης (GSH-Px) καιυπεροξειδική δισμουτάση(ΣΟΔ), όπωςκαθώς καιμειωμένη μηλονοδιαλδεΰδηεπίπεδα (MDA) σε σύγκριση με αυτά σε ποντίκια της ομάδας μοντέλων.Επιπλέον, η COS όχι μόνο ανύψωσε τομειωμένα επίπεδαανοσοσφαιρίνη ορούG (IgG) και IgM που προκαλείται απόD-γαλαλλά επίσηςανέστειλε σημαντικά τηνD-Γαλλία προκάλεσε ανοδική ρύθμιση της αλανίνης ορούαμινοτρανσφεράση(ALT), ασπαρτική τρανσαμινάση (AST), αλκαλική φωσφατάση (ALP), ουρικό οξύ (UA)και κρεατινίνης (CREA) σε σύγκριση με αυτά των ποντικών στην ομάδα μοντέλου. Αυτά τα αποτελέσματααποδεικνύουν ότι το COS έχει έναεμφανής αντιγηραντική δράση σεD-Ποντίκια υποξείας γήρανσης που προκαλούνται από gal, ομηχανισμό του οποίου, σε κάποιο βαθμό, συνδέεται μεενισχύοντας την αντιοξειδωτική άμυνα,αναγωγικόςοξειδωτικό στρες, καιβελτίωση της ανοσοποιητικής λειτουργίαςγερασμένων ποντικών.

Λέξεις-κλειδιά:κιστανάκιολιγοσακχαρίτης; D-γαλακτόζη; υποξεία γήρανση?αντι γήρανση; αντιοξειδωτικό; ανοσοποιητική λειτουργία

1. Εισαγωγή

Η γήρανση, γνωστή και ως γήρανση, είναι ένας περίπλοκος και μη αναστρέψιμος εκφυλισμός που εμφανίζεταιόχι μόνο στους ιστούς του σώματος, αλλά και στις φυσιολογικές λειτουργίες των οργάνων του σώματος, όπως το φτωχό ανοσοποιητικόαπαντήσεις, απώλεια μνήμης και ούτω καθεξής. Πολυάριθμες μελέτες έχουν ανακαλύψει ότι η γήρανση συνδέεται στενάμεδιάφορες χρόνιες παθήσεις, όπωςυπέρταση, Διαβήτης,αθηροσκλήρωση, Η ασθένεια Αλτσχάϊμερ, Νόσος Πάρκινσον, καιπολλαπλούς καρκίνους [1–3]. Μετά την είσοδο στον 21ο αιώνα, με την τάση του παγκόσμιουτη γήρανση και τη βελτίωση του βιοτικού επιπέδου σε όλο τον κόσμο, προβλήματα υγείας που προκαλούνται από τη γήρανσηκαι οι ασθένειες που σχετίζονται με τη γήρανση γίνονται όλο και πιο εμφανείς. Επομένως, πώς να διατηρήσετε τουγεία των ηλικιωμένων και η καθυστέρηση της εμφάνισης της γήρανσης και των ασθενειών που σχετίζονται με τη γήρανση έχει ήδη γίνειένα κοινό θέμα μεταξύ των ανθρώπων σήμερα, ειδικά μεταξύ των νέων, καθώς και ένα hotspot έρευνας γιαΕπιστήμονες [2,3]. Στις θεωρητικές υποθέσεις της γήρανσης, προτάθηκε αρχικά η θεωρία της γήρανσης των ελεύθερων ριζώναπό τον Denham Harman στη δεκαετία του 1950, έχει προβληματιστεί ευρέως [4]. Είναι ευρέως αποδεκτό ότι τα περισσότερασημαντικός καθοριστικός παράγοντας της γήρανσης είναι η οξειδωτική βλάβη που προκαλείται από την υπερπαραγωγή αντιδραστικού οξυγόνουείδη (ROS). Ο σχηματισμός περίσσειας ROS οδηγεί άμεσα σε οξειδωτικό στρες και προφλεγμονώδηαποκρίσεις, οι οποίες στη συνέχεια προκαλούν ανισορροπία οξειδοαναγωγής, οδηγώντας τελικά σε οξείδωση πρωτεϊνών, λιπιδίωνυπεροξείδωση και βλάβη των μιτοχονδρίων και του DNA, η οποία μπορεί να αναστείλει με ακρίβεια τις φυσιολογικές λειτουργίες των κυττάρων,και ακόμη και να προκαλέσει απόπτωση [5,6].

Εν τω μεταξύ, το ROS αναμένεται να διαδραματίσει επιπλέον ρόλο στη γήρανσηβλάπτει άμεσα ή έμμεσα το ενδογενές αντιοξειδωτικό σύστημα, συμπεριλαμβανομένων των υπεροξειδίων δισμουτάσης(SOD), καταλάση (CAT) και υπεροξειδάση γλουταθειόνης (GSH-Px) [7]. Επιπλέον, όλο και περισσότερα στοιχείαέχει αποδείξει ότι η γήρανση είναι ένα αναπόφευκτο βιολογικό φαινόμενο που προκαλείται από την πτώση του σώματοςανοσοποιητική λειτουργία και μελέτες έχουν επίσης δείξει ότι υπάρχει θετική σχέση μεταξύ της γήρανσης καιανοσολογική δυσλειτουργία, η οποία οδηγεί σε μείωση της ικανότητας του σώματος να αντιστέκεται σε εξωτερικά παθογόνα,αυξάνοντας έτσι την πιθανότητα ασθενειών που σχετίζονται με τη γήρανση [8–10]. Με βάση την ανάλυση αυτώνμηχανισμούς γήρανσης, οι παράγοντες με αντιοξειδωτικές και/ή ανοσοτροποποιητικές λειτουργίες μπορεί να είναιπροληπτική ή πιθανή θεραπευτική αξία σε ασθένειες που σχετίζονται με τη γήρανση.

Kecentlv. πολυάριθμες φυσικές ενώσεις έχουν ανακαλυφθεί και έχουν προσελκύσει σημαντικό ενδιαφέρον ως πιθανές υποψήφιες για την ανάπτυξη νέων θεραπειών κατά της γήρανσης (6,7,9]. Κατά συνέπεια, έχει δοθεί μεγάλη προσοχή στα φυσικά προϊόντα λόγω του φιλικού προφίλ ασφάλειας και δυνητικά ωφέλιμου βιολογικές δραστηριότητες, επομένως, η αναζήτηση φυσικών συστατικών με αντιοξειδωτικές, ανοσοτροποποιητικές και αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες για την πρόληψη ή/και τη θεραπεία αυτής της υποξείας γήρανσης έχει γίνει ένα νέο καυτό σημείο. Ολιγοσακχαρίτης cistanche (COS), που αποτελείται από τα{{6} } B-14-συνδεδεμένες μονάδες D-γλυκοζαμίνης, είναι το αποπολυμερισμένο προϊόν του cistanche (όπως φαίνεται στο Σχήμα 1) [11). Μελέτες έχουν δείξει ότι το COS είναι βιοσυμβατό, μη τοξικό και απορροφήσιμο, καθώς και ότι έχει μια ποικιλία βιολογικών επιδράσεων, συμπεριλαμβανομένων αντιβακτηριακών, νευροπροστατευτικών, αντιδιαβητικών, κατά των όγκων και αντι-υπογλυκαιμικών ιδιοτήτων, που του παρέχουν δυνατότητες σε φαρμακευτικές εφαρμογές (11-13Επιπλέον, υπάρχουν επίσης στοιχεία που δείχνουν ότι το COS μπορεί να ενισχύσει την αντιοξειδωτική δράση, να διατηρήσει μια ευνοϊκή ισορροπία οξειδοαναγωγής και να διαθέτει αντιφλεγμονώδη ικανότητα προσαρμόζοντας τις σχετικές οδούς σηματοδότησης (14.151. Η πρόσφατη μελέτη μας έδειξε ότι η Η φωτογήρανση που προκαλείται από την υπεριώδη ακτινοβολία στο άτριχο δέρμα ποντικού βελτιώνεται σημαντικά με την τοπική θεραπεία με COS (16Επιπλέον, έχει αναφερθεί ότι το COS μπορεί να μετριάσει τη βλάβη του αμφιβληστροειδούς που προκαλείται από το οξειδωτικό στρες σε αρουραίους, να προστατεύσει τα ποντίκια από πρόκληση LPS, να αποτρέψει τον τραυματισμό I/R του αμφιβληστροειδούς αρουραίους και επιταχύνουν την ανάπτυξη των απογαλακτισμένων χοίρων κυρίως διατηρώντας τις δραστηριότητες των αντιοξειδωτικών ενζύμων και αναστέλλοντας την ενεργοποίηση του NF-KB (17-20). Επιπλέον, είναι ευρέως αποδεκτό ότι, με χαμηλό μοριακό βάρος και χαμηλό ιξώδες, το COS έχει μεγάλη επηρεάζει την απορρόφηση του ανθρώπινου εντερικού σωλήνα και μπορεί να εισέλθει γρήγορα στην κυκλοφορία του αίματος. Εν τω μεταξύ, συμβάλλει επίσης στην παραγωγή συστηματικής βιολογικής επίδρασης στον οργανισμό και ενισχύει τις φαρμακολογικές επιδράσεις στον οργανισμό (17181.

Φιγούρα 1.Χημική δομήτης ΚΩΣ.

Με βάση τις προηγούμενες μελέτες σχετικά με τις βιολογικές δραστηριότητες του COS, είναι λογικό να πιστεύουμε ότι αυτός ο ολιγοσακχαρίτης μπορεί να έχει σημαντικές δυνατότητες να χρησιμοποιηθεί στον τομέα της αντιγήρανσης, ωστόσο, υπάρχει περιορισμένη γνώση σχετικά με τις προστατευτικές επιδράσεις αυτού του φυσικού πολυσακχαρίτη με χαμηλή μοριακό βάρος έναντι υποξείας γήρανσης in vivo που προκαλείται από D-γαλακτόζη (D-gal). Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη στόχευε στη διερεύνηση της αντιγηραντικής δράσης του COS με ενδογαστρικό καθετήρα σε ποντίκια υποξείας γήρανσης που προκαλούνται από D-gal κυρίως μέσω μέτρησης των παραμέτρων οξειδωτικού στρες, καθώς και αξιολόγησης της μακροσκοπικής και ιστοπαθολογικής κατάστασης των ποντικών και/ή τους κύρια όργανα για να παρέχουν μια πρωτοποριακή φαρμακολογική βάση για την αντιγηραντική δράση του COS

2. Αποτελέσματα

2.1. Καθημερινή Παρατήρηση Συμπεριφοράς

Κατά τη διάρκεια της περιόδου των οκτώ εβδομάδων του πειράματός μας, η καθημερινή εμφάνιση και οι δραστηριότητες συμπεριφοράς των ποντικών παρατηρήθηκαν και καταγράφηκαν εβδομαδιαία, γεγονός που έδειξε ότι δεν υπήρχαν παθολογικές αλλαγές όπως έμετος και αντι-τάισμα σε κάθε ομάδα. Τα ποντίκια της κανονικής ομάδας δεν ήταν μόνο σε καλή ψυχική κατάσταση, αλλά και ζωηρά, δραστήρια και ευκίνητα, καθώς και υγιεινή διατροφή. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, εκτός από την κανονική ομάδα, τα ποντίκια σε άλλες ομάδες εμφάνισαν απώλεια βάρους στο αρχικό στάδιο μετά την ένεση D-gal, και στη συνέχεια ανάκτησαν σταδιακά το βάρος. Μετά την πέμπτη εβδομάδα της έγχυσης D-gal, τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλων εμφάνισαν εμφανή συμπτώματα γήρανσης, όπως αργή κίνηση, σταδιακή μειωμένη πρόσληψη τροφής, καθυστέρηση στην απόκριση, ατονία, καθώς και μαραμένη και άτονη γούνα, υποδεικνύοντας ότι το μοντέλο γήρανσης που προκλήθηκε από υποδόρια ένεση D-gal καθιερώθηκε με επιτυχία. Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, αυτά τα παραπάνω χαρακτηριστικά γήρανσης των ποντικών σε ομάδες βιταμίνης Ε (VE) και στις οποίες χορηγήθηκε φάρμακο υποχώρησαν σε διαφορετικούς βαθμούς. Ειδικά στην ομάδα θεραπείας με COS-H, τα χαρακτηριστικά γήρανσης των ποντικών παραπάνω μετριάστηκαν σημαντικά σε σύγκριση με ποντίκια της ομάδας μοντέλου. Αν και υπήρχε ελαφρώς άτονη γούνα και μια αργή αντίδραση για τα ποντίκια σε ομάδες χαμηλής και μεσαίας δόσης COS, το φαινόμενο της γήρανσης ήταν προφανώς μετριασμένο σε σύγκριση με αυτό στην ομάδα μοντέλου.

2.2. Επίδραση του COS στην Ανοσολογική Λειτουργία

Δεδομένου ότι ο σπλήνας και ο θύμος είναι εξέχοντα ανοσολογικά όργανα, οι δείκτες τους μπορεί να αντικατοπτρίζουν την ισχύ της ανοσοποιητικής κατάστασης ή τη βελτίωση της λειτουργίας του ανοσοποιητικού (101. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1 μετά από θεραπεία οκτώ εβδομάδων με D-gal, σπλήνα και θύμο αδένα Οι δείκτες των ποντικών της ομάδας μοντέλου ήταν αισθητά χαμηλότεροι από εκείνους της κανονικής ομάδας, υποδεικνύοντας ότι το ανοσοποιητικό σύστημα του ποντικού ανεστάλη από τη χορήγηση D-gal για 56 διαδοχικές ημέρες. Η θεραπεία με gal ρυθμίστηκε σταδιακά σε κάποιο βαθμό μετά τη χορήγηση COS. Επιπλέον, τα αποτελέσματά μας (όπως αποκαλύπτεται στον Πίνακα 1) αποκάλυψαν επίσης ότι τα επίπεδα ορού ανοσοσφαιρίνης G (gG) και lgM μειώθηκαν εμφανώς σε ποντικούς της ομάδας μοντέλου σε σύγκριση με

2.3. Επίδραση του COS στη λειτουργία του ήπατος και των νεφρών

Η επίδραση του COS στην ηπατική λειτουργία σεDΤα ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με gal αξιολογήθηκαν με μέτρηση του ορούεπίπεδα αμινοτρανσφεράσης αλανίνης (ALT), ασπαρτικής τρανσαμινάσης (AST) και αλκαλικής φωσφατάσης(ALP). Όπως φαίνεται στον Πίνακα2, μετά από θεραπεία μεD-gal για οκτώ εβδομάδες, ποντίκια στην ομάδα μοντέλων που εκτέθηκαναξιοσημείωτες αυξήσεις στα επίπεδα των ALT, AST και ALP στον ορό σε σύγκριση με φυσιολογικά ποντίκια(όλαp < 0.05). However, these D-Η gal προκάλεσε ασυνήθιστα υψηλά επίπεδα ALT, AST και ALP σε ποντίκιαο ορός μειώθηκε σταδιακά σε κάποιο βαθμό στις ομάδες που έλαβαν VE και COS σε σύγκριση μεποντίκια της ομάδας μοντέλου, ειδικά για την ομάδα COS-H, και αυτά τα επίπεδα ήταν σημαντικά χαμηλότερα από αυτάστην ομάδα μοντέλων (όλαp < 0.05). Εν τω μεταξύ, η επίδραση του COS στη λειτουργία των νεφρών σεDΤα ποντίκια με ένεση gal αξιολογήθηκαν απόμέτρηση των επιπέδων κρεατινίνης (CREA) και ουρικού οξέος (UA) στον ορό τους και τα αποτελέσματα είναιεκτίθενται επίσης στον Πίνακα2, το οποίο αποκαλύπτει ότι τα επίπεδα ορού CREA και UA για την ομάδα μοντέλωντα ποντίκια είναι σημαντικά υψηλότερα από τα ποντίκια της κανονικής ομάδας (όλαp < 0.05). Nevertheless, for the VE and Ομάδες που χορηγούνται από COS, αυτές οι δυσμενείς αυξήσεις των επιπέδων CREA και UA ορού γίνονται σταδιακάαποκαταστάθηκε σε βαθμό χαμηλότερο από εκείνους της ομάδας μοντέλων (ειδικά στην ομάδα COS-H).

2.4. Επίδραση του COS σεD-Ιστοχημικές βλάβες του ήπατος και των νεφρών που προκαλούνται από το Gal

Όπως φαίνεται στο Σχήμα3, η φυσιολογική ιστολογική δομή του ηπατικού ιστού είναι σαφώς ορατή στο φυσιολογικόομάδα ποντικών, συμπεριλαμβανομένων των απανταχού πολυγωνικών ηπατοκυττάρων, ηπατικού μυελού με ακτινική εμβέλεια γύρω από ένα κεντρικόφλέβα και ελαφρά διπυρήνωση των ηπατοκυττάρων. Μετά από οκτώ εβδομάδες συνεχέςΕνέσεις D-gal, το συκώτιο ιστός αποκάλυψε αυξημένο αριθμό διπυρήνων ηπατοκυττάρων, ακατάστατα διατεταγμένο ηπατικό λώρο,εκτεταμένη ηπατοκυτταρική διήθηση και μια σειρά από φλεγμονώδεις κυτταρικές διηθήσεις. Παρ 'όλα αυτά,για την ομάδα που έλαβε θεραπεία με COS-H, τακτοποιημένος ηπατικός λώρος, λιγότερες φλεγμονώδεις διηθήσεις καιΗ διπυρήνωση των ηπατοκυττάρων παρατηρήθηκε σε ιστούς ήπατος ποντικών, ενώ τα ηπατοκύτταρα με μπαλόνια ήτανμειώθηκε με δοσοεξαρτώμενο τρόπο, υποδεικνύοντας ότι το COS θα μπορούσε να βελτιωθείD-ηπατική βλάβη που προκαλείται από το γαλόνιοσε κάποιο βαθμό

Εικόνα 3. Ιστοπαθολογική εμφάνιση του ήπατος (χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης (ΗΕ) 400x). Διπυρήνωση του ηπατοκυττάρου (μαύρο βέλος), του ηπατικού λώρου διατεταγμένο ακατάστατα (κίτρινο βέλος) και του μπαλονιού ηπατοκυττάρου (κόκκινο βέλος).

Επιπλέον, ιστοπαθολογικές αναλύσεις νεφρικού ιστού ποντικών που έλαβαν D-gal αποκάλυψαν ότι το σπειράμα παρουσίασε εμφανή ατροφία ή ακόμη και εξαφανίστηκε, ενώ η κοιλότητα διευρύνθηκε με μπαλόνι και πτώση επιθηλιακών κυττάρων σε νεφρικά εγγύς σπειροειδή σωληνάρια, καθώς και εκτεταμένο νεφρικό οίδημα θα μπορούσε να συμβεί σε σύγκριση με την κανονική ομάδα (όπως αποκαλύπτεται στο Σχήμα 4). Σημειωτέον, το COS και το VEtreatment εξασθένησαν σημαντικά αυτές τις ανθυγιεινές παθολογικές αλλαγές του νεφρικού ιστού που προκαλούνται από το D-gal, εκδηλώνοντας δράση προστασίας των νεφρών ενώ το νεφρικό οίδημα και η διευρυμένη με μπαλόνι κοιλότητα ελέγχονταν σε μεγάλο βαθμό για την ομάδα COS-H. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το COS ανακούφισε με επιτυχία αυτές τις παθολογικές βλάβες που προκλήθηκαν από το gal στους ιστούς του ήπατος και των νεφρών των ποντικών Kunming (ποντίκια KM)

Εικόνα 4. Ιστοπαθολογική εμφάνιση του νεφρού (χρώση HE 400 x). Ατροφία (κίτρινο βέλος), μια σταγόνα επιθηλιακών κυττάρων σε νεφρικά εγγύς σπειροειδή σωληνάρια (μαύρο βέλος) και κοιλότητα διευρυμένη με μπαλόνι (κόκκινο βέλος).

2.5. Επίδραση του COS στους Αντιοξειδωτικούς Δείκτες Ήπατος και Νεφρού

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι τα αντιοξειδωτικά ένζυμα μπορούν να προστατεύσουν το συκώτι και τα νεφρά από την υποξεία γήρανση που προκαλείται από το D-gal με τη σάρωση των ROS. Ως εκ τούτου, οι δραστηριότητες των SOD, CAT και GSH-Pxas καθώς και η περιεκτικότητα σε μηλονδιαλδεΰδη (MDA), διερευνήθηκαν στην παρούσα μελέτη μας (5-7) Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, μετά από υποδόρια ένεση D-gal για οκτώ εβδομάδες, οι δραστηριότητες αυτών των τριών βασικών αντιοξειδωτικών ενζύμων μειώθηκαν απότομα σε σύγκριση με εκείνες στους ιστούς του ήπατος και των νεφρών ποντικών φυσιολογικής ομάδας, ενώ το αντίθετο ίσχυε για το επίπεδο MDA (όλα p < 0.{11 }}5). Ωστόσο, όταν τα ποντίκια χορηγήθηκαν με COS, οι μειωμένες δραστηριότητες αυτών των ενζύμων προκάλεσαν τη σταδιακή αύξηση του bD-gal σε βαθμό μεγαλύτερο από εκείνους των ποντικών της ομάδας μοντέλου και το επίπεδο MDA μειώθηκε από το COS με τρόπο δοσοεξαρτώμενο ( ειδικά στην ομάδα COS-H, p < 0,05 έναντι της ομάδας μοντέλου). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η θεραπεία με COS θα μπορούσε να βελτιώσει σημαντικά τις δραστηριότητες SOD, CAT και GSH-Px και να μειώσει το επίπεδο MDA στο ήπαρ και τους νεφρούς ποντικών που έλαβαν D-gal.

Εικόνα 5. Επίδραση του COS στις δραστηριότητες των SOD, GSH-Px και CAT, καθώς και στα επίπεδα MDA του ήπατος (Α) και του νεφρού (Β) ποντικών που προκαλούνται από το D-gal. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν σημαίνει 土 SD (n=8). # p < 0.05 σε σύγκριση με την κανονική ομάδα·* p <0,05 σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλων. Κανονική: κανονική ομάδα ελέγχου. Ομάδα αγωγής με ModelD-gal. VE: Ομάδα θεραπείας D-gal συν VE. COS-L: D-gal συν COS (300 mg/kg/ημέρα ομάδα θεραπείας· COS-M: D-gal συν COS (600 mg/kg) ομάδα θεραπείας· COS-H: D-gal συν COS1200 mg/kg) ομάδα θεραπείας.