Η σίγαση MiR-103a-3p Βελτιώνει την εναπόθεση οξαλικού ασβεστίου στο νεφρό αρουραίου ενεργοποιώντας τον άξονα UMOD/TRPV5

2.10. Βιοπληροφορική Ανάλυση και Δοκιμασία Λουσιφεράσης.

UMOD-στόχευση miRNA, miR-103a-3p, αναλύθηκε προβλέψιμα από τοΙστότοπος TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_71/)και στη συνέχεια επικυρώθηκε μέσω ανάλυσης λουσιφεράσης. Έλεγχος pGL3-φορείς (E1741) αγοράστηκαν από την Promega (ΗΠΑ) στηνκατασκευάστε τον άγριο τύπο UMOD (UMOD-WT, 5′-AGCCACUCUUUAAAUGCUGCU-3′) και τον μεταλλαγμένο τύποτου UMOD (UMOD-MUT, 5′-AGCCUGUGUCUUUAAAUGAUCCU-3′). Τα κύτταρα NRK-52Ε συνεπιμολύνθηκαν μεmiR-103a-3p mimic και UMOD-WT ή miR-103a-3pmimic και UMOD-MUT με τη βοήθεια της Lipofectamine2000. Η ίδια διαδικασία έγινε και στο μιμικόελέγχου (pRL-TK vectors, VT1568, YouBio, China). Μετάότι, προσδιορίσαμε τη δραστηριότητα της λουσιφεράσης σε κύτταρα χρησιμοποιώντας τοDual-Luciferase Reporter Assay Kit (E1910, Promega, Η.Π.Α.).2.11. Μοντέλο Υπεροξαλουρίας In Vivo.Για τοin vivoμελέτη, δημιουργήσαμε το μοντέλο υπεροξαλουρίας αρουραίωνμε προσθήκη 1% αιθυλενογλυκόλης (EG) (324558, Sigma-Aldrich,ΗΠΑ) στο πόσιμο νερό. Το πείραμα σε ζώα ήτανεγκεκριμένο από την Επιτροπή Εργαστηριακών Ζώων του ΘεΤρίτο ΑFFILiated Hospital of Xinxiang Medical University(IHRM20200510). Συνολικά 40 άνδρες Sprague Dawley (SD)αρουραίοι (ηλικίας 8 εβδομάδων, 180–210 g) αγοράστηκε από τον ποταμό CharlesΕργαστήρια (Πεκίνο, Κίνα) χρησιμοποιήθηκαν στοin vivoμελέτη. ΟλοιΟι αρουραίοι χωρίστηκαν σε 4 ομάδες ελέγχου, EG, EG + αντίλογοmir, και EG + antagonir-NC, με δέκα αρουραίους σε κάθε ομάδα.Κατά τη διάρκεια της στέγασης, στην ομάδα ελέγχου, χορηγήθηκαν μόνο οι αρουραίοιμε νερό βρύσης? στην ομάδα EG, οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε θεραπείαμε 1% EG; στην ομάδα EG + ανταγομίρη, οι αρουραίοι ήτανυποβλήθηκε σε θεραπεία με 1% EG και ενδοφλέβια ένεση με miR-103a-3p antagomir; και στην ομάδα EG + antagomir-NC,οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 1% EG και ενέθηκαν ενδοφλεβίωςμε miR-103a-3p antagomir-NC. Μετά από 4 εβδομάδες, όλοι οι αρουραίοιήταν ιεράΦιπου οφείλεται σε εξάρθρωση του τραχήλου υπό αναισθησία(νατριούχος πεντοβαρβιτάλη, 40 mg/kg, P-010, Merck, ΗΠΑ) καιιστοί νεφρών συλλέχθηκαν για ιστολογική μελέτη. ΟΤα ανταγομίρια miR-103a-3p που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτό το πείραμα ήτανλαμβάνεται από τη Ribobio (Guangzhou, Κίνα).

ΝΕΑ ΦΥΤΙΚΗ ΣΥΝΘΕΣΗ ΓΙΑΝΕΦΡΙΚΟΙ ΙΣΤΟΙ

2.12. Χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης (ΗΕ).

Οι ιστοί νεφρών που είχαν στερεωθεί με φορμαλίνη ενσωματώθηκαν σε παραφίνη για την αξιολόγηση της εναπόθεσης CaOx. Τα δείγματα σε τομές αποκηρώθηκαν και ενυδατώθηκαν πριν από τη χρώση ΗΕ. Στη συνέχεια, χρησιμοποιήθηκε το κιτ χρώσης HE (C0105S, Beyotime, Κίνα) για την επεξεργασία των δειγμάτων καθοδηγούμενη από τις οδηγίες λειτουργίας. Μετά τη σφράγιση των ιστών, η περιοχή εναπόθεσης κρυστάλλου παρατηρήθηκε κάτω από ένα μικροσκόπιο πόλωσης (Axio Scope.A1, Precise Instrument, China) σε μεγέθυνση × 100 και προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας ImageJ (όραμα 1.8.0, Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας, ΗΠΑ).

Εικόνα 5: Συνέχεια.

Εικόνα 5: Η σίγηση miR-103a-3p ενεργοποίησε τον άξονα UMOD/TRPV5 για την εξασθένηση των κυττάρων NRK-52Ε από τραυματισμό που προκαλείται από οξαλικά. (α) Προσδιορίστηκε η επίδραση του αναστολέα miR-103a-3p στη βιωσιμότητα των κυττάρων σε κύτταρα NRK-52Ε που υποβλήθηκαν σε αγωγή με οξαλικό, TRPV5-υπερεκφραστικό πλασμίδιο και siUMOD με ανάλυση ΜΤΤ. (β) Η δοκιμασία προσκόλλησης κρυσταλλικών κυττάρων χρησιμοποιήθηκε για τον ποσοτικό προσδιορισμό της εναπόθεσης CaOx σε καθορισμένα κύτταρα (×200 μεγέθυνση, γραμμή κλίμακας=200 μm). (γ) Το κιτ Fluo-4 AM ανέλυσε τη μέτρηση περιεχομένου Ca2+ σε διαφορετικές ομάδες. ∗∗∗p < 0:001 έναντι οξαλικού; ###p < 0:001 έναντι οξαλικού + TRPV5 + siNC + IC; ∧∧p <0:01 και ∧∧∧p <0:001 έναντι οξαλικού + TRPV5 + siUMOD + IC. TRPV5: υποοικογένεια V μέλος 5 του καναλιού κατιόντων δυναμικού παροδικού υποδοχέα. UMOD: uromodulin; ΜΤΤ: βρωμιούχο μεθυλθειαζολυλ διφαινυλ-τετραζόλιο. NC: αρνητικός έλεγχος; siUMOD: μικρό παρεμβαλλόμενο RNA έναντι UMOD. I: αναστολέας; IC: έλεγχος αναστολέα.

2.13. Ανοσοϊστοχημεία (IHC).

Για να μελετήσουμε την κατανομή του TRPV5 στους νεφρικούς ιστούς, χρησιμοποιήσαμε το κιτ Super Plus™ High Sensitive and Rapid Immunohistochemical Kit (E-IR R221, Elabscience, China) για τη διεξαγωγή IHC. Εν ολίγοις, τομές νεφρού (4 μm) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα αποκέρωσης/ανάκτησης αντιγόνου για 30 λεπτά με θέρμανση και στη συνέχεια επωάστηκαν με ρυθμιστικό αποκλεισμού υπεροξειδάσης SP αντιδραστηρίου Β σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά. Μετά την πλύση PBS, οι τομές αντέδρασαν με αντίσωμα αντι-TRPV5 (ab137028, 1/100, Abcam, UK) στους 37 βαθμούς C για 2 ώρες, ακολουθούμενο από δευτερεύουσα επώαση αντισώματος. Μετά από αυτό, οι τομές απαιτήθηκαν για ανάπτυξη χρώματος στο διάλυμα εργασίας DAB και χρώση σε ρυθμιστικό διάλυμα αιματοξυλίνης. Μετά τη θεραπεία επαναμπουζάρισμα, οι εικόνες χρώσης καταγράφηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο (CX23, Olympus, Japan) σε μεγέθυνση ×100.

2.14. Στατιστική ανάλυση.

Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές ξεχωριστά, με τα δεδομένα μέτρησης να περιγράφονται ως η μέση ± τυπική απόκλιση. Οι διαφορές που συγκρίθηκαν μεταξύ πολλαπλών ομάδων αναλύθηκαν με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης. Το GraphPad Prism 8.0 (GraphPad Software, USA) χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση δεδομένων και μια τιμή p < 0.05 έδειξε μια στατιστικά σημαντική διαφορά.

ΝΕΑ ΦΥΤΙΚΗ ΣΥΝΘΕΣΗ ΓΙΑΝΕΦΡΙΚΟΙ ΙΣΤΟΙ

3. Αποτελέσματα

3.1. Ανοδική ρύθμιση του TRPV5

Προστατευμένα κύτταρα NRK-52Ε απόΤραυματισμός που προκαλείται από οξαλικά. Με βάση τον κεντρικό ρόλο του TRPV5 στη ρύθμιση της μεταφοράς Ca2+ στονεφρικά σωληναριακά κύτταρα, πρώτα πραγματοποιήσαμε υπερέκφραση TRPV5 σε κύτταρα NRK-52Ε. Όπως αποδεικνύεται στο Σχήμα 1(α), μια σημαντική αύξηση στο επίπεδο mRNA του TRPV5 εντοπίστηκε με qRT-PCR (ρ < 0:001). Το στύπωμα Western έχει επίσης μετρήσει το υψηλό επίπεδο πρωτεΐνης TRPV5 σε επιμολυσμένα κύτταρα (Εικόνα 1(β), p < 0:001). Μετά την επεξεργασία με οξαλικό σε κύτταρα NRK-52Ε, διαπιστώσαμε ότι η έκφραση του TRPV5 ήταν μειωμένη σε σύγκριση με εκείνη της ομάδας ελέγχου, η οποία αντιστράφηκε με τη διαμόλυνση του πλασμιδίου υπερέκφρασης του TRPV (Εικόνα 1(γ), p < 0:001). Επιπλέον, η ανίχνευση κηλίδας Western παρουσίασε παρόμοια αποτελέσματα (Εικόνα 1(δ), ρ < 0:001). Η ακόλουθη ανάλυση MTT έδειξε ότι το οξαλικό παρίσταται και η βιωσιμότητα των κυττάρων, η οποία ανατράπηκε μερικώς μετάΥπερέκφραση TRPV5(Εικόνα 1(ε), p < 0:05). Η ανίχνευση της κρυσταλλικής πρόσφυσης έδειξε ότιΥπερέκφραση TRPV5ανέστειλε εντυπωσιακά την προσκόλληση του CaOx που επάγεται από το οξαλικό στα κύτταρα NRK-52Ε (Εικόνα 1(στ)).

.

Εικόνα 6: Η σίγηση miR-103a-3p μετριάζοντας την επαγόμενη από EG εναπόθεση CaOx στους ιστούς των νεφρών in vivo, ενεργοποιώντας τον άξονα UMOD/TRPV5. (α, β) Η εναπόθεση CaOx μετρήθηκε με χρώση Η&Ε σε νεφρικούς ιστούς αρουραίων που έλαβαν θεραπεία με EG ή EG και miR-103a-3p ανταγομίρη (×100 μεγέθυνση, γραμμή κλίμακας=200 μm). (γ) Το Western blot χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση των επιπέδων πρωτεΐνης του UMOD και του TRPV5 σε ιστούς νεφρών αρουραίων που έλαβαν θεραπεία με EG ή EG και miR{{10}}a-3p ανταγομίρη. -Η ακτίνη χρησίμευε ως εσωτερικός έλεγχος. (δ) Η ανάλυση IHC της έκφρασης του TRPV5 πραγματοποιήθηκε στους ιστούς διαφορετικών ομάδων (μεγέθυνση × 100, γραμμή κλίμακας=200 μm). ∗∗∗p < 0:001 έναντι ελέγχου; #p < 0:05, ###p < 0:001 έναντι EG + ανταγομίρη-NC. HE: αιματοξυλίνη και ηωσίνη EG, αιθυλενογλυκόλη. TRPV5: υποοικογένεια V μέλος 5 του καναλιού κατιόντων δυναμικού παροδικού υποδοχέα. UMOD: uromodulin; NC: αρνητικός έλεγχος; IHC: ανοσοϊστοχημεία

3.2. Επαγωγή οξαλικού

Υπορυθμισμένη έκφραση UMOD που συσχετίστηκε θετικά με τον εμπλουτισμό του TRPV5 στην επιφάνεια του κυττάρου. Η έκφραση mRNA του UMOD βρέθηκε ότι ρυθμίζεται προς τα κάτω σε κύτταρα NRK-52Ε που προκαλούνται από οξαλικό (Εικόνα 2(α), p < 0:001), έτσι όπως το επίπεδο πρωτεΐνης του (Εικόνα 2(β), p < 0:01). Τα αποτελέσματα της CoIP επαλήθευσαν ότι το UMOD συν-ανοσοκατακρημνίστηκε σημαντικά από το TRPV5 με αντισημαία, και αντιστρόφως, το TRPV5 κατακρημνίστηκε συν-ανοσοκαταβυθίστηκε από το αντι-UMOD (Εικόνα 2(γ)). Στη συνέχεια, ρυθμίσαμε την έκφραση UMOD σε κύτταρα NRK{15}}Ε, η οποία επαληθεύτηκε με qRT-PCR και στύπωμα Western. Η αξιοσημείωτη αύξηση της έκφρασης UMOD που προσδιορίστηκε σε mRNA (Σχήμα 2(d), p <0:001) και σε επίπεδα πρωτεΐνης (Εικόνα 2(e), p <0:001) σήμανε την επιτυχή επιμόλυνση. Επιπλέον, τα αποτελέσματα της δοκιμασίας βιοτινυλίωσης κυτταρικής επιφάνειας αποκάλυψαν ότι το TRPV5 ήταν σε αφθονία στην επιφάνεια των κυττάρων NRK- 52Ε συνεπιμολυνθέντων με υπερέκφραση UMOD και TRPV5, σε σύγκριση με τον αρνητικό μάρτυρά του (Εικόνα 3(α)).

3.3. UMOD

Ρύθμισε τον προστατευτικό ρόλο του TRPV5 σε κύτταρα που προκαλούνται από οξαλικά. (Εικόνα 3(α)). Για να ξεδιαλύνουμε την αλληλεπίδραση του UMOD και του TRPV5 σε κύτταρα NRK-52Ε που προκαλούνται από οξαλικά, πραγματοποιήσαμε επιμόλυνση siUMOD. Η QRT PCR προσδιόρισε ότι το UMOD mRNA εκφράζεται σε χαμηλό επίπεδο σε κύτταρα επιμολυσμένα με siUMOD (Εικόνα 3(β), p < 0:001) και ένα παρόμοιο αποτέλεσμα σε Το επίπεδο πρωτεΐνης του μετρήθηκε με στύπωμα Western (Εικόνα 3(c), ρ < 0:001). Στη συνέχεια, οι αναλύσεις MTT και προσκόλλησης κρυστάλλων έδειξαν ότι το siUMOD αντιστάθμισε σημαντικά την προαγωγική επίδραση του TRPV5 στη βιωσιμότητα των κυττάρων (Εικόνα 3(d), p <0:01) και την ανασταλτική επίδραση του TRPV5 στην προσκόλληση CaOx (Εικόνα 3(ε)) σε κύτταρα NRK{19}}Ε που προκαλούνται από οξαλικό. Επιπλέον, μετρήσαμε την περιεκτικότητα σε Ca2+ μετά από αποκλίνουσες επιμολύνσεις. Όπως τα αποτελέσματα που περιγράφονται στο Σχήμα 3(στ), το TRPV5 περιόρισε σημαντικά την επαγόμενη από οξαλικά μείωση στην ενδοκυτταρική συγκέντρωση Ca2+ των κυττάρων NRK-52E, η οποία αποκαταστάθηκε μερικώς με την προσθήκη Simon (p < 0: 001).

3.4. miR-103a-3σελ

Στοχευμένο UMOD και μεσολαβεί στη ρύθμιση του άξονα UMOD/TRPV5 σε κύτταρα που προκαλούνται από οξαλικά. Με τη βοήθεια του ιστότοπου TargetScan, το αποτέλεσμα της γονιδιακής πρόβλεψης έδειξε ότι το miR-103a-3p μπορεί να περιέχει θέσεις δέσμευσης για UMOD (Εικόνα 4(α)). Στη συνέχεια, ο προσδιορισμός λουσιφεράσης ανίχνευσε την κατασταλμένη δραστηριότητα λουσιφεράσης στα κύτταρα που είχαν συνεπιμολυνθεί με μίμηση miR-103a-3p και UMOD WT (Εικόνα 4(β), p < 0:{{21 }}01). Για να κατανοήσουμε τη ρυθμιστική επίδραση του miR{{{0}}a-3p στο UMOD, εφαρμόσαμε την αναστολή miR- 103a-3p στο NRK{{14} }Ε κύτταρα, με ανίχνευση qRT-PCR που επιβεβαιώνει ότι η έκφραση του miR-103a{-3p υπορυθμίστηκε έντονα μετά τη διαμόλυνση του αναστολέα miR- 103a-3p ( Εικόνα 4(c), p < 0:001). Είναι ενδιαφέρον ότι η έκφραση mRNA του UMOD αποδείχθηκε ότι είναι αυξημένη μετά από αναστολή miR{-103a-3p, η οποία ανατράπηκε εμφανώς με την προσθήκη σίγησης UMOD (Εικόνα 4(δ), p <0:01 ). Με την ανίχνευση του στυπώματος Western, η μεταβολή της έκφρασης της πρωτεΐνης UMOD βρέθηκε να είναι η ίδια με αυτές που εμφανίζονται στην έκφραση mRNA UMOD (Εικόνα 4(e), ρ < 0:01). Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε πειράματα διάσωσης σχετικά με τις λειτουργίες των κυττάρων. Όπως αποδεικνύεται, ο ρυθμιστικός ρόλος του άξονα UMOD/TRPV5 στη βιωσιμότητα των κυττάρων (Εικόνα 5(a), p <0:001), την προσκόλληση CaOx (Εικόνα 5(β)) και τη συγκέντρωση ενδοκυτταρικού Ca2+ (Εικόνα 5(c), p <0:01) αντιστράφηκε εντυπωσιακά από τον αναστολέα miR- 103a-3p.

3.5. miR-103a-3σελ

Σίγαση μετριασμένης εναπόθεσης CaOx που προκαλείται από EG σε ιστούς νεφρών In Vivo με ενεργοποίηση του άξονα UMOD/TRPV5. Για να ενισχύσουμε περαιτέρω τα ευρήματά μας in vitro, κατασκευάσαμε το μοντέλο υπεροξαλουρίας αρουραίων για τη μελέτη in vivo. Όπως απεικονίζεται στα Σχήματα 6(α) και 6(β), παρατηρήθηκε σημαντική εναπόθεση κρυστάλλων CaOx στους ιστούς των νεφρών της ομάδας EG σε σύγκριση με αυτήν στην ομάδα ελέγχου και αυτή η τάση αντιστράφηκε με miR-103a{{ 5}}p Santiagomir (p < 0:001). Στη συνέχεια, τα αποτελέσματα του Western blot έδειξαν ότι το EG μείωσε έντονα τα επίπεδα πρωτεΐνης UMOD και TRPV5, τα οποία αποκαταστάθηκαν σημαντικά από miR-103a- 3p ανταγομίρη (Εικόνα 6(c), p <0:05 ). Με την IHC, παρατηρήσαμε ότι η έκφραση του TRPV5 ρυθμίστηκε προς τα κάτω στην ομάδα EG σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου και ρυθμίστηκε προς τα πάνω στην ομάδα EG + ανταγομίρη σε σύγκριση με την ομάδα EG + ανταγομίρη-NC (Εικόνα 6(δ)).

4. Συζήτηση

Στο πλαίσιο των ολοένα και πιο διαφορετικών χειρουργικών θεραπειών κατά των λίθων στα νεφρά, αυτό που πρέπει να υπογραμμιστεί έγκειται σε εξέχουσες μεθόδους για την πρόληψη της εμφάνισης και της επανεμφάνισής τους [27]. Το πιο κοινό συστατικό των λίθων στα νεφρά είναι οι κρύσταλλοι CaOx. Πολλοί παράγοντες επηρεάζουν την ανάπτυξη λίθων στα νεφρά που περιέχουν Ca{1}, με την υπερασβεστιουρία να είναι μακράν ο κύριος αναγνωρισμένος παράγοντας κινδύνου [28]. Οι Tsuruoka et al. έδειξε ότι μέσω των νεφρικών σωληναρίων, η μειωμένη επαναρρόφηση του Ca{3}} είναι καθοριστική για την πρόκληση υπερασβεστιουρίας και ότι η ενεργός επαναρρόφηση του ασβεστίου θα μπορούσε να ρυθμιστεί από διάφορους παράγοντες [29]. Αργότερα, οι Worcester et al. πρότεινε ότι τα μεταγευματικά επίπεδα Ca{5}} στα ούρα ήταν πολύ υψηλότερα σε ασθενείς με υπερασβεστιουρία σε σύγκριση με τους ελέγχους, ακόμη και όταν η έκκριση της παραθυρεοειδούς ορμόνης στο αίμα και το νεφρικό φορτίο ήταν στο ίδιο επίπεδο [30]. Συλλογικά, σημειώνεται ότι η εξασθενημένη νεφρική σωληναριακή επαναρρόφηση μπορεί να είναι ο κύριος λόγος για την υπερασβεστιουρία. Επομένως, αυτή η μελέτη διερεύνησε τον υποκείμενο μοριακό μηχανισμό που ρυθμίζει τα επίπεδα Ca2+ στα ούρα από την προοπτική της επαναπορρόφησης Ca2+, για να προωθήσει σημαντικά κανάλια για την πρόληψη και τη θεραπεία των λίθων στα νεφρά.

Το TRPV5 δρα ως νεφρικό σωληναριακό επιθηλιακό κανάλι Ca2+ που μεσολαβεί στη μεταφορά και την επαναρρόφηση του Ca2+ στους νεφρούς [31]. Οι Jang et al. επεσήμανε ότι η έκφραση της πρωτεΐνης TRPV5 ήταν εμφανώς μειωμένη στους νεφρικούς ιστούς των ουρικών αρουραίων υπερασβεστιαιμίας, αλλά αποκαταστάθηκε με τη χορήγηση υδροχλωροθειαζίδης, υποδεικνύοντας ότι ο μηχανισμός της θεραπείας με υδροχλωροθειαζίδη για την υπερασβεστιουρία μπορεί να επιτευχθεί μέσω της προς τα πάνω ρύθμισης της έκφρασης της πρωτεΐνης TRPV5 στους νεφρικούς ιστούς [32]. Μελέτες έχουν επικυρώσει ότι η υψηλή οξαλουρία επάγει την παραγωγή αντιδραστικών ειδών οξυγόνου (ROS), βλάπτει τα επιθηλιακά κύτταρα των νεφρικών σωληναριών και μεταβάλλει τη δομή της φωσφατιδυλοσερίνης στην κυτταρική μεμβράνη, οδηγώντας στην προσκόλληση του CaOx στην επιφάνεια των νεφρικών σωληναριακών επιθηλιακών κυττάρων [33]. Στην προηγούμενη έρευνα, ανακαλύψαμε ότι το εντυπωσιακά μειωμένο TRPV5 εμφανίστηκε μετά την πρόκληση βλάβης των κυττάρων NRK-52Ε από οξαλικό, η τάση του οποίου αντιστράφηκε μετά τη διαμόλυνση της υπερέκφρασης του TRPV5. Επιπλέον, η ανοδική ρύθμιση του TRPV5 ενίσχυσε τη βιωσιμότητα των κυττάρων και ανέστειλε την προσκόλληση CaOx στα κύτταρα NRK{12}}Ε που προκαλούνται από όξα όψιμα, υποδεικνύοντας ότι το TRPV5 δημιουργεί ένα κρίσιμο προληπτικό αποτέλεσμα στον σχηματισμό λίθων CaOx που προκαλείται από οξαλικά άλατα στους νεφρούς.

CISTANCHE ΓΙΑ ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΟ ΟΞΑΛΙΚΟ ΑΣΒΕΣΤΙΟ

Ως κύριο κανάλι για την επαναρρόφηση Ca{0}}, η δραστηριότητα και η έκφραση του TRPV5 θα μπορούσαν να ρυθμιστούν από πολλούς παράγοντες [34]. Για παράδειγμα, μια πρόσφατη μελέτη επιβεβαίωσε ότι το UMOD αποτρέπει τον σχηματισμό λίθων στα νεφρά διεγείροντας την επαναρρόφηση Ca2+ μέσω του TRPV5 [35]. Επιπλέον, σημειώθηκε ότι το 87,5% των ποντικών με νοκ-άουτ UMOD σχημάτισαν πέτρες οξαλικού ασβεστίου και φωσφορικού ασβεστίου στο CNT, τον νεφρικό μυελό και τα θηλώματα σε ηλικία 15 μηνών. Όλα αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι το UMOD θα μπορούσε να αλληλεπιδράσει με το TRPV5 στο σχηματισμό λίθων στα νεφρά, κάτι που δεν έχει ακόμη επιβεβαιωθεί. Ωστόσο, η μελέτη μας εντόπισε για πρώτη φορά την ύπαρξη της αλληλεπίδρασης που το UMOD ρύθμιζε θετικά την έκφραση του TRPV5 που λειτουργεί σε τραυματισμένα κύτταρα NRK{11}}Ε ενισχύοντας τη βιωσιμότητα των κυττάρων, μειώνοντας την προσκόλληση CaOx και ενισχύοντας την επαναρρόφηση του Ca{{12} }.

Τα miRNA εμπλέκονται στην ανάπτυξη και την εξέλιξη των νεφρικών παθήσεων μέσω της στοχευμένης ρύθμισης των mRNAs. Το miR-21 βρέθηκε ότι συμβάλλει σε τραυματισμό των νεφρικών σωληναριακών κυττάρων που προκαλείται από οξαλικά ρυθμίζοντας προς τα πάνω το PPARA [36]. Επιπλέον, οι Jiang et al. ανέφερε ότι η αναστολή του miR-155-5p για την αύξηση της έκφρασης του MGP θα μπορούσε να μετριάσει αισθητά τον τραυματισμό του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από οξαλικά άλατα στους νεφρούς [37]. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν αφιερωθεί στην εξακρίβωση του μηχανισμού ρύθμισης του miRNA στο UMOD που επηρεάζει το σχηματισμό πέτρας στα νεφρά. Για να αποκτήσει περαιτέρω πληροφορίες σχετικά με την παθογένεση αυτής της ασθένειας, αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε ανάλυση βιοπληροφορικής και ανάλυση λουσιφεράσης για να βρει το miRNA, miR-103a-3p, που δυνητικά ρυθμίζει το UMOD. Σε έρευνα για νεφρική νόσο, ο κύκλος miR-103a-3p έχει επιβεβαιωθεί ότι έχει βαθιά επίδραση στη νεφρική φλεγμονή και την ίνωση [38]. Peters et al. πρότεινε επίσης ότι το miR-103a{-3p θα μπορούσε να θεωρηθεί ως ένας πιθανός βιοδείκτης στη χρόνια νεφρική νόσο [39]. Στη μελέτη μας, είναι ενδιαφέρον ότι επαληθεύσαμε τον μοριακό μηχανισμό του miR{-103a-3p σε πέτρες στα νεφρά που η σίγηση miR{- 103a-3p θα μπορούσε να ανακουφίσει τον τραυματισμό που προκαλείται από οξαλικά Κυψέλες NRK{19}}Ε ενεργοποιώντας τον άξονα UMOD/TRPV5. Επιπλέον, αποδείξαμε αυτόν τον ρυθμιστικό μηχανισμό ακόμη πιο έντονα μέσω πειραμάτων in vivo σε μοντέλα αρουραίων που προκαλούνται από EG. Ωστόσο, υπάρχει έλλειψη προσοχής σε αυτή τη μελέτη, καθώς περιλαμβάνει έναν μόνο τύπο κυττάρου και έναν σχετικά μικρό αριθμό μεταβλητών μελέτης στα πειράματα in vitro.

CISTANCHE ΓΙΑ ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΟ ΟΞΑΛΙΚΟ ΑΣΒΕΣΤΙΟ

5. Συμπεράσματα

Συνολικά, η τρέχουσα μελέτη μας αποκάλυψε ότι η σίγαση miR-103a-3 βελτιώνει την εναπόθεση CaOx στο νεφρό του αρουραίου ενεργοποιώντας τον άξονα UMOD/TRPV5, ο οποίος θέτει μια νέα θεωρητική βάση για στρατηγικές πρόληψης, διάγνωσης και θεραπείας προς τις πέτρες στα νεφρά από την άποψη της επαναρρόφησης Ca2+.

Διαθεσιμότητα δεδομένων Τα αναλυμένα σύνολα δεδομένων που δημιουργήθηκαν κατά τη διάρκεια της μελέτης είναι διαθέσιμα από τον αντίστοιχο συγγραφέα κατόπιν εύλογου αιτήματος.

Σύγκρουση συμφερόντων Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων σχετικά με τη δημοσίευση της παρούσας εργασίας.

Αναφορές

[1] RE Hautmann and M. Straub, "Urinary calculi. Metabolism and diagnostik", Urologe Α, τομ. 45, αρ. 4, σελ. 181–184, 2006. [2] Z. Kirkali, R. Rasooly, RA Star, and GP Rodgers, "Urinary stone disease: progress, status, and need," Urology, vol. 86, όχι. 4, σελ. 651–653, 2015.

[3] AL Rodgers, "Race, ethnicity and urolithiasis: a kritik review," Urolithiasis, τομ. 41, αρ. 2, σελ. 99–103, 2013.

[4] K. Sakhaee, «Recent advances in the pathophysiology of nephrolithiasis», Kidney International, τομ. 75, αρ. 6, σελ. 585–595, 2009.

[5] T. Knoll, AB Schubert, D. Fahlenkamp, ​​DB Leusmann, G. Wendt-Nordahl και G. Schubert, "Ουρολιθίαση μέσα στους αιώνες: δεδομένα για περισσότερες από 200,000 αναλύσεις ουροποιητικών λίθων." The Journal of Urology, τομ. 185, αρ. 4, σελ. 1304–1311, 2011. [6] T. Mitchell, P. Kumar, T. Reddy, et al., "Διαιτητικό οξαλικό και σχηματισμός πέτρας νεφρού", American Journal of Physiology. Νεφρική Φυσιολογία, τόμ. 316, αρ. 3, σελ. F409–f413, 2019. [7] SR Khan, MS Pearle, WG Robertson, et al., "Kidney stones," Nature Reviews. Disease Primers, τομ. 2, αρ. 1, σελ. 16008, 2016.

[8] CY Pak, HJ Heller, MS Pearle, CV Odvina, JR Poindexter και RD Peterson, «Πρόληψη σχηματισμού λίθων και απώλειας οστού στην απορροφητική υπερασβεστιουρία με συνδυασμένες διαιτητικές και φαρμακολογικές παρεμβάσεις», The Journal of Urology, τομ. 169, αρ. 2, σελ. 465–469, 2003.

[9] GC Curhan, WC Willett, EL Knight και MJ Stampfer, "Διαιτικοί παράγοντες και ο κίνδυνος εμφάνισης νεφρικών λίθων σε νεαρές γυναίκες: μελέτη υγείας νοσοκόμων II," Archives of Internal Medicine, τομ. 164, αρ. 8, σελ. 885–891, 2004.

[10] MC Nirumand, M. Hajialyani, R. Rahimi, et al., "Διαιτητικά φυτά για την πρόληψη και διαχείριση των λίθων στα νεφρά: προκλινικά και κλινικά στοιχεία και μοριακόι μηχανισμοί", International Journal of Molecular Sciences, τομ. 19, αρ. 3, σελ. 765, 2018.